Lab micro 4

FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA YCIENCIAS DEL MAR

FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO

CÓDIGO

MATERIA Microbiología FMAR03749

NOMBRE David Quiñonez Acosta

PARALELO 1

TEMA DE LA PRÁCTICA

Diluciones seriadas en moluscos.

OBJETIVOS GENERALES: Practicar el método de diluciones seriada aprendido en la práctica anterior.

Identificación de las bacterias específicamente pseudomonas, presentes en la concha comprada en

un mercado.

INTRODUCCIÓN:Anadara Tuberculosa: Conchas grandes, equivalva, de forma oblicuamente ovaladas, relativamente

gruesas. El margen dorsal es angulado. Tienen valvas que muestran entre 33 a 37 costillas. Cara interna es

de color blanco con tono rosado, cubierto por un periostraco piloso que va desde café oscuro hasta negro.

(Kiara Matias, 2015)

Hábitat: Viven en sustratos suaves y fangosos, arcillosos o limo-arcillosos y asociados a las raíces del

mangle. Enterrados en el fango entre las raíces de mangle a profundidades de 10 a 30 cm.

Alimentación: Por medio de la filtración de materia orgánica.

Ciclo de vida: La madurez sexual se alcanza en individuos entre 23.2 y 26.2 mm longitud total.

Reproducción: habito sedentario, tasa de crecimiento lento, fecundación externa con larva planctónica de

vida corta, que luego se fija a un sustrato o conchas adultas y desoves durante todo el año. La alta

concentración de salinidad favorece el proceso de reproducción. Son organismos dioicos.

Fig1. - Anadara tuberculosa

POFCM0102-1 Hoja 1 de 6



Diluciones seriadas:

Técnica que consiste en obtener una suspensión de la mezcla de microorganismos y hacer diluciones

seriadas que se vierten en una placa Petri hasta conseguir colonias aisladas. (Valera, 2015)

Ci = N x D x 10 Ci = Concentración inicial (unidades: número de células / ml)

N = nº de colonias

D = dilución

Pseudomonas:

Pseudomonas es un género de bacilos rectos o ligeramente curvados, móviles gracias a los flagelos polares

que poseen, oxidasa positiva, aeróbios estrictos. Algunas especies sintetizan una capa polisacárida que

facilita la adhesión celular y la formación de biopelículas aumentando así su patogenicidad. No forman

esporas. (Q, 2015)

Las especies más importantes son:

- Pseudomonas aeruginosa

- Pseudomonas fluorescens

- Pseudomonas stutzeri

- Pseudomonas putida


Fig2.- Ilustración del método de diluciones seriadas que usaremos en la práctica.



EQUIPOS Y MATERIALES:3 tubos de ensayo.3 Placas Petri.BalanzaGradillaMuestra conchasAgua destilada.Mechero de alcohol.Micropipeta.Puntas.Agar CetrimideBastón de vidrio.Fiola.Papel Toalla.Alcohol.Mortero.Bisturí

PROCEDIMIENTO:Preparación de la muestra madre1.- Limpiar el área de trabajo, con un papel toalla húmeda con alcohol.2.- Pesar 14g de sal, agregarla y disolverla en el envase que contiene 90ml de agua destilada, la cual será nuestro medio de cultivo.3.-Proceder a cortar la concha y pesar 1g.4.- Triturarla en un mortero, es recomendable echarle el jugo que tiene la concha.5.-Con la pipeta agregar 10ml de agua destilada en el mortero que contiene la concha triturada, mezclar bien.6.-Ubicar esos 10ml de agua con concha en el envase que contiene los 90ml de agua con sal.

Diluciones seriadas1.-El envase que contiene los 90ml de agua con sal y el agua con concha, es la muestra madre.2.-Tenemos 3 tubos de ensayos cada uno con 9ml de agua destilada.3.-Ubicar 1ml de muestra madre con la pipeta en el primer tubo de ensayo tubo de ensayo (10º), homogenizarlo.4.-Del primer tubo de ensayo (10º), coger con la micropipeta 1ml de muestra y ubicarlo en el segundo tubo de ensayo (10-1), homogenizarlo.5.-Del segundo tubo de ensayo (10-1), coger con la micropipeta 1ml de muestra y ubicarlo en el tercer tubo de ensayo (10-2).

Siembra de los tubos que contienen las diluciones1.-Se tiene preparado el agar Cetrimide, este se encontró solidificado, por lo que es necesario procederlo a calentar para se derrita.2.-Ubicar cierta cantidad de agar Cetrimide en 3 cajas Petri, recordar que esto se debe hacerlo de forma rápida y cerca del mechero esterilizado.3.-Esperar alrededor de 5 minutos hasta que se solidifique.




4.-Procedemos a rotular nuestra placa, siempre hacerlo en la parte inferior de la misma, (10 -1, 10-2, 10-3)5.-Ubicar unas gotas de la muestra de agua que se encuentran en los tubos diluidos.6.-Con el bastón de vidrio esparcir la muestra homogéneamente 7.-Y por último ubicar la placa dentro de la incubadora de manera invertida. 8.-Ir a ver el resultado de crecimiento luego de dos días.

Cálculo de las diluciones

1M∗ml1ml+9ml

=1M∗ml10ml

=0.1M

0.1M∗ml1ml+9ml

=0.1M∗ml10ml

=0.01M

RESULTADOS: Al ir a revisar las muestras, luego de 24h de hacer la siembra no se encontró presencias de pseudomonas por lo que se puede decir que las conchas están en buen estado y apto para consumo humano.

Observaciones:Obsérvese que la 1era dilución que se hace ya no es la muestra madre, porque solo se extrajo 1gr de toda la concha, así que ya está en menor concentración en presencia de bacterias por lo que se tendrá que hacer una regla de tres para tener el valor real de presencia de pseudomonas en este caso.Al momento de macerar el 1gr de concha triturarla bien para que no se tapone la pipeta.

Conclusión:Se puede hacer diluciones seriadas de cualquier organismo con una pequeña muestra macerándola hasta que quede bien fina e incorporarla a los tubos por medio de la pipeta.Las pseudomonas son bacilos rectos o curvados que no forman esporas y son gram negativos.

Anexo:




Fig3.- Extracción de 1gr de muestra

Fig4.- Dilución de la muestra y preparación del medio de cultivo




Fig5.- Resultados sin presencia de pseudomonas


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