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Diagnostic microbiologique

encéphalite à tique et ehrlichioses

CHUV 2013 Reto Lienhard FAMH, Collaborateur CNRT

Tiques (CH)

Borrelia MEVE - FSME Francisella Ehrlichia Anaplasma Rickettsia Babesia Bartonella

10-35% 0-3% 0.1 % 6.4 % 1.5 % 10% 1.9 %

Lommano E. et al Appl. Environ. Microbiol. 2012

Wicky et al Eur.J.Clin. Microb. Inf. Dis 2000

Patients (CH)

Borrelia burgdorferi sl

MEVE - FSME

Francisella tularensis Neoehrlichia mikurensis

FSME – MEVE – TBE

(Flavivirus)

Zones à MEVE fréquente et à risque

MEVE - cinétique

Holzmann H / Vaccine (2003)

FSME -Diagnostic

Diagnostic sérologique exclusivement

Infection aiguë si les IgM sont positifs (6-8 sem.)

Intervalle de 7-10 jours avant d’exclure FSME

Sérum suffisant pour un diagnostic

Test ELISA (pas Fixation Complément !)

Sensibilité > 95% très bonne au stade neurologique

Spécificité >95% selon présence d'autres IgM

Absence d’UI

FSME –Coffrets disponibles (2012)

Fabricant Sensibilité (notice)

Spécificité (notice)

utilisé

FSME IgG

Sekisui/Virotech >99.8% 95.60% +++

Virion/serion 97-98.9% 90.3-98.3% ++

Siemens 96.80% 99.50% ++

Progen Biotechnik 95% 98% 0

NovaTec Immunodiagnostica >98% >98% 0

FSME IgM

Sekisui/Virotech >99.8% 99.80% +++

Virion/Serion 97->99% >99% ++

Siemens 98.80% 99.90% ++

Progen Biotechnik 99% 99% +

NovaTec Immunodiagnostica 80% 95% 0

Sens. 95-99%

Spéc. 90-98%

LR+ = 10-100

LR- = 0.01- 0.06

FSME – phase aiguë

FSME IgM : négatif FSME IgG : négatif En cas d’état grippal ou fièvre après piqûre de tique et en

tout début de symptômes

Contrôle sérologique après quelques jours (3-7j) suffit pour la séroconversion.

PCR dans le sérum peut être positive à ce stade En tout début de signe neurologique un contrôle à 1-3 j. En cas de probabilité pré-test faible : Stop.


FSME IgM : positif FSME IgG : négatif Tout début de symptômes neurologiques

Contrôle sérologique après quelques jours (<5j) pour preuve de l’infection par la séroconversion en IgG (Preuve sérologique)

PCR dans le sérum négative En cas de probabilité pré-test très élevée : Stop.


FSME IgM : positif FSME IgG : positif Tout début de symptômes neurologiques

>90 % des résultats Probabilité pré-test élevée = MEVE

Vaccination récente ? Immunoglobulines ? Infection possible avant administration de doses complètes PCR dans le sérum ou LCR inutile Test de neutralisation ?


FSME IgM : négatif FSME IgG : positif Tout début de symptômes neurologiques

Rare !! Vaccination récente ? Immunoglobulines ? Contrôle sérologique à 10j pour apparition retardée des IgM Test avidité ? Prod.intrathécale ?

FSME – les pièges

Réactions croisées avec autres flaviviridés

Retour de voyage - zones à risque ? Pensez au virus

West Nile, Dengue, encéphalite japonaise, Fièvre

jaune

IgM croisés = autres origine ou persistance des IgM

( plusieurs mois post infection ou vaccination)

= Diagnostic différentiel nécessaire

FSME – les pièges

LCR: Réponse humorale 50% puis 100% à J10

Production intrathécale pas utile au diagnostic

RT-PCR permet identification au stade virémique,

sérologies les jours suivant.

Vaccination ?! = Diagnostic difficile - Tests

complémentaires: contrôle à 10j, Prod.intrathécale

Colora

« Ehrlichioses »

« Ehrlichioses humaines »

JS Dumler, Villars 2013 modifié de Dumler et al Int J Syst Evol Microbiol 2001

Anaplasmose humaine

Anaplasmose granulocytaire humaine (HGA)

Anaplasma phagocytophilum

Vecteur =Ixodes spp

Nord – Est USA (1000 cas en 2012)

env 65 cas décrits en Europe, aussi en Asie orientale

intracellulaire des neutrophiles

incidence = 0,5 à 7 /106

risque augmente avec l âge et chez le sexe masculin

mortalité 0.5 %

Ehrlichioses humaines

Ehrlichiose monocytaire humaine (HME)

Ehrlichia chaffeensis

Amblyomma americanum

USA Sud centre et S-E (),

Absente en Europe mais cas en Amer. Sud, Asie

intracellulaire des monocytes, macrophages

1000 cas/an 2007-2012. Incidence = 1- 4 /106

risque augmente avec âge et sexe masculin

mortalité 1.9 %

Ehrlichioses humaines rares

Ehrlichia ewingii

Amblyomma

8 cas aux USA,

absente en Europe

Ehrlichia canis (USA)

Ehrlichia muris (USA - Russie)

Ehrlichia ruminantium (Venezuela)

Ehrlichiose humaine émergente

Candidatus Neoehrlichia mikurensis Ixodes

6 cas Europe

Cas en Chine mais non décrite ailleurs

Distributions

E.muris Neoehrlichia mikurensis

E.chaffeensis

HME

Anaplasma phagocytophilum HGE

E.ewingii

E.canis

Modifié de www.uptomed.ir

Aspects cliniques

Anaplasma Ehlichia Neoerhlichia Lyme

fièvre ++++ +++ +++ (0)

céphalée +++ ++ ++ ++

myalgie ++ ++ + ++

arthralgie ++ ++ +++ ++

A. neurologique 0 + +

A. respiratoire + + + 0

nausée + ++ + (0)

rash 0 0 + EM

thrombocytopénie +++ +++ 0

ASAT/ALAT +++ +++ 0

leucopénie ++ ++ (+)


En tout début de la phase aiguë de la maladie.

Observation minutieuse des frottis sanguins (Giemsa)

Chercher la présence d'inclusions (morulae) dans les

neutrophiles ou monocytes.

Différenciation possible au type mais pas à l'espèce

Giemsa Anaplasma A.phagocytophilum HGA: morula

E.chaffeensis HME : morula

Giemsa Anaplasma E.ewingii HGE : morula

Diagnostic direct

des anaplasmoses humaines

Cet examen doit être complété par une PCR sur le

sang complet pour l'identification de la bactérie

intracellulaire.

PCRrt spécifique gène msp2 A.phagocytophilum

PCR multiplex Anaplasmataceae/rickettsiales

PCR et séquençage de l’amplicon (GroEL, arn16S)

Culture de cellules pas disponible en CH

Diagnostic indirect

Sérologie IF A.phagocytophilum

Lame Anaplasma phagocytophilum en culture de

cellule

Sérum en phase aiguë et 2-4 semaines après

IFI en IgG sensibilité >95% à 30jours

IgM possible mais peu sensible, pas utile

Preuve par mise en évidence de la séroconversion IgG

HGA IF IgG nég

Colora


Colora

HGA IF IgG nég

Colora

Donneur et piqure de tiques à T0 (289) + suspicion de borréliose

Sérologie A.phagocytophilum

Etudes 23 patients avec culture positive USA (JCM2000).

Délai de séroconversion = 0 à 36 jours

95% obtiennent un titre <1/640

Titre maximal = 1/2'500

Pic obtenu après 7 j à 4 mois

Pour 90% titre maximal à < 30 jours

Séropositivité chez 50% des patients après 11 mois

Cas de transmission par transfusion 2007 (Canada)

Sérologie A.phagocytophilum

Littérature.

1985 séroprévalence à 13 %Neuchâtel (Brouqui et al

Lancet)

1997 1er cas en Europe

Actuellement env. 65 cas décrits

Séroprévalences

zone endémique (USA) 15 à 36 %

moyenne en Europe 6% (max.21%)


E.chaffeensis

Frottis sanguin (difficile et peu sensible !)

Sérologie par IF en IgG sur 2 sérums, titre

seuil 32 ou 64 à définir,

Actuellement pas disponible en Suisse

(ADMed en 2014 ?)

Confirmation nécessaire par PCR ou sérologie

dans un centre de Référence

Suisse 2010 -Hôpital Universitaire et Microbiologie de

Zurich


Neoehrlichia mikurensis

PCR du sang et moelle

Amorces et sondes spécifiques

arn 16S et séquençage

Suivi du traitement par PCR

Sérologie absente

Fièvre d’origine inattendue Dr M.Gallachi (SSMTP 08)

Femme 67 ans secrétaire

3 semaines de fièvre, frissons, anémie, hépatopathie

thrombocytopénie, leucopénie

Voyage en Europe

et 2,5 mois New-York

Piqûre de tique

Coloration Giemsa

Fièvre d’origine inattendue

Laboratoire.

forme en anneau intra-érythrocytaire (1%) et test

rapide malaria négatif

PCR malaria négative

Babesia microti

Séroprévalence NE 1,5 % - Europe 2 - 8 %

Cas clinique Babesia divergens chez splénectomisés

1er cas publié en 2007 par Hildebrandt et al (2004 ?)

Tiques CH – B.divergens, B.venatorum

MTT: Message Transmis via Tiques

Patient présentant un état fébrile après piqûre de

tiques peut présenter plusieurs pathogènes.

MEVE


Neoehrlichia mikurensis

Babésiose

Ehrlichiose X

F.tularensis

Mais avant tout

….

Ne pas oublier de se protéger

des piqûres de tiques

Merci pour votre attention

Suivis peptide-C6

Babésioses

Babésioses humaines

Babesia

B.microti, B.divergens,

+ souches WA1, MO1 et EU1

En Europe rares cas, B.divergens chez patients

splénectomisés

Aux USA endémie locale B.microti tout patient

EF, frissons, myalgies, fatigue, hépatosplénomégalie

intracellulaire erythrocyte

mortalité peut être très élevée

Cas asymptomatiques

Diagnostic direct des babésioses

Phase aiguë de la maladie.

Observation des frottis sanguins colorés au Giemsa

Observation de gouttes épaisses

Présence de piroplasmes dans les érythrocytes

Ressemble aux Plasmodium

Mesure de la parasitémie

Frottis sang Giemsa

Goutte épaisse

Coloration Giemsa

Forme en tétrade

Coloration Giemsa

Formes extracellulaires

Coloration Giemsa

Forme vacuolée (B.microti)

Goutte épaisse

Diagnostic direct des babésioses

Culture de cellules en laboratoire spécialisé

Différenciation au genre selon expérience

Différenciation définitive seulement par PCR au genre

ou espèce

Diagnostic indirect des babésioses

Phase aiguë et convalescente de la maladie.

Indiquée si parasitémie faible

Différenciation avec plasmodium

Diagnostic rétrospectif après traitement

Diagnostic indirect des babésioses

IF avec B.microti mais réactions croisées faibles ou

inexistantes ! IF sur les autres souches utiles si nég.

Titre à 1/1024 en 2 - 6 semaines

Diminution en 6 mois (1/125), persistance possible

Séroprévalence NE 1,5 % - Europe 2 - 8 %

Etude NE piqûres de tiques

(D.Hügli pour une thèse chez Dr Lise Gern, Unine)

2003-05

tique amenée chez médecin

questionnaire

sérologie faite à la piqûre de tique et 2 mois plus tard

Analyse des 2ème sérums

Reprise du sérum de contrôle en cas de positivité

Piqûres de tiques - Etude NE

474 personnes participantes

15 Erythèmes migrants

14 sérologies faite

0 confirmée positive en WB

2 séroconversions

Piqûres de tiques - Etude NE

100 sérums dépistés (2005)

dont 3 érythèmes migrants

16% sérologies positives

9% dépistages confirmées (WB)

3% de séroconversions

1 seul érythème migrant

2 asymptomatiques

Piqûres de tiques - Risques

100 sérums dépistés pour la Lyme(2005)

avec 3 érythèmes migrants

16% sérologies positives

9% dépistages confirmées (WB)

3% de séroconversions

1 seul EM avec séroconversion

2 EM séronégatives

Sur 474 personnes 14 EM avec sérologie

0 confirmé en WB

2 séroconversions

Sérums de l’étude piqûre de tique, Thèse de D.Hügli, Unine + diplômes TAB, ECLM

Suivi IgG anti-VlsE

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

sym

tom

e 1 3 5 7 9 11 13 15 17 20 22 24 26 52

NEU1 NEU2 ACA1 ACA2

Suivis des IgG anti-VlsE


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