COLORACIONES MICROBIÓLOGICAS
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COLORACIONES MICROBIÓLOGICAS
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COLORANTE• Los colorantes, son sustancias que pueden tener un
origen natural o artificial y que se usan para potenciar el color.
¿DIFERENCIA ENTRE TINCION Y COLORACION?
Coloración: Ocurre a nivel de la superficie.
Tinción: Ocurre nivel molecular o celular
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CLASIFICACION DE LOS COLORANTES
Según su origen
Natural
artificial
Según sus propiedades
quimicas
Colorantes acidos
Colorantes básicos
Colorantes neutros
Colorantes
indiferentes
orcenina
Azul de metileno, safranina
Eosina
Azul de metileno
Eosinato de azul de
metileno
Colorante sudan
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MECANISMO DE COLORACIONESSIMPLE
• Tamaño, arreglo y forma
• Un solo tintese divide:• DIRECTATiñe bacteria
Ejemplos: • tinción azul de
metileno• Azul de lactofenol
• INDIRECTAtiñe el fondo pero no
a la Bacteria
Ejemplos: tinción negativa
ESPECÍFICA•Para identificar
estructuras: Ejemplos: Tinción
de flagelos, espiroquetascápsulas y esporas.
DIFERENCIAL•Separar y clasificar
los microorganismos observados de acuerdo a sus Características
•Más de un tinteEjemplos:
Tinción Gram y Ácido
Resistente
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Coloración simple• Tiñe las células de los
microorganismos proporcionando información sobre MORFOLOGÍA, definida por el tamaño, forma, agrupación USANDO UNICO COLORANTE como safranina, azul de metileno, cristal violeta y carbolfuesina,etc
• Se le puede añadir un mordiente.
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Coloración simple
El reactivo que se usa, que preferentemente es de tipo básico y contiene
un cromógeno (compuesto que da color
al tinte) con carga positiva, ya que la pared celular de las bacterias posee componentes con
carga negativa que atraen y enlazan el
cromógeno.
Todas las células absorberán el colorante y quedarán teñidas del mismo color.
C.S DIRECTA
EJEMPLOS :COLORACION CO AZUL DE METILENO, AZUL DE LACTOFENOL,SAFRANINA ,CRISTAL VIOLETA
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Procedimiento en el laboratorio
1.-Frotis: hacer un extendido a partir de un cultivo bacteriano en un portaobjetos.
2.-Fijar la preparación exponiendo el portaobjetos rápidamente a la llama del mechero evitando un excesivo calentamiento.
3.-Cubra el extendido con una pequeña cantidad de azul de metileno y déjelo actuar por un minuto.
4.-Lave con agua hasta eliminar el exceso de colorante.
5.-Seque la preparación al aire o al mechero.
6.-Examine las preparaciones teñidas al microscopio, con el lente de inmersión.
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COLORACION DE AZUL DE LACTOFENOL
Útil para la identificación de estructuras y esporas de hongos
Colorante acido que tiñe que tiñe el citoplasma y la quitina presente en las celulas fungicas.
1.-Hacer una extendido a partir de un cultivo en un portaobjetos.2.-Cubra la muestra con azul de lactofenol.3.-cubrir con cubreobjetos.4.-observar.
Procedimiento en el laboratorio
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COLORACION DE AZUL DE LACTOFENOL
Fotomicrografía dehongos filamentososcon el método deazul algodón de lactofenol.Exserohilumsp. (izquierda); Mucorspp. (derecha)(aumento 40x).Imagen en color en:www.medigraphic.com/rid
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C. SIMPLE INDIRECTA
Las células se dejan sin teñir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el
perfil de las células.
COLORACION NEGATIVA
Permite observar las bacterias con color translucido sobre un campo
oscuro, utilizando LA TINTA CHINA.
Limitado por la presencia de un fondo oscuro que no permitirá la
correcta identificación y detallada de los componente de dichas células.
Manifiesta la presencia del hongo cryptococcuc
neoformans, causante de la MENINGITIS
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COLORACIÓN NEGATIVA• PROCEDIMIENTO EN
LABORATORIO
1.-Hacer un extendido a partir de un cultivo bacteriano en un portaobjetos
2.- Cubra el extendido con tinta china
3.-Cubrir con portaobjetos
4.-Observar
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COLORACIÓN DIFERENCIAL
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COLORACIÓN DIFERENCIAL
El colorante utilizado pone de manifiesto
diferencias entre células bacterianas o entre
partes de una misma célula. Estas técnicas
utilizan mas de un colorante o bien ciertos
reactivos complementarios para la tinción.
Ejemplos: Tinción de Gram, Tinción de Ziehl-
Neelsen.
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TINCIÓN DE GRAMEsta tinción diferencial depende de la estructura de la pared celular de las bacterias.
Las bacterias Gram negativas tienen una membrana externa de la que carecen las bacterias Gram positivas.
La técnica consiste en una tinción primaria, una decoloración y una tinción de contraste.
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MÉTODO DE TINCIÓN:
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Tinción de ZIEHL-NEELSEN (Ácido Alcohol Resistentes)
Esta tinción permite diferenciar micobacterias, bacterias con ácidos micólicos en su pared celular pertenecientes a los géneros Mycobacterium y Nocardia.
Manifiesta la capacidad de resistir a
la decoloración gracias al alto
contenido de lípidos complejos (ácidos
micólicos) y ceras que poseen algunos
microorganismos en su pared celular.
Mycobacterium tuberculosis
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Tinciones especiales
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• las tinciones especiales incrementan el contraste en las células microbianas y revelan estructuras particulares, entre las que se incluyen endosporas, los flagelos y las cápsulas.
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TINCIÓN DE ESPORAS MÉTODO WIRTZ-CONKLIN
• ESPORAS:
• La espora bacteriana es un cuerpo refringente oval formado dentro de la célula . Esta puede estar ubicada en el centro o en un extremo. La espora puede tener diámetro mayor que la bacteria vegetativa y ser deformante de ella.
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PROCEDIMIENTO:
• Preparar un frotis.
• Cubrir con verde malaquita y calentar hasta el desprendimiento de vapores por 5 minutos.
• Lavar con agua corriente.
• Colorear con safranina por 1 minuto.
• Lavar y secar.
• Observar.
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TINCIÓN DE CÁPSULAS
• La cápsula bacteriana o glucocálix es una capa que se forma en la parte externa de la pared de la mayoría de las bacterias.
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TINCIÓN DE CÁPSULAS POR EL MÉTODO DE HISS
• Preparar un frotis.
• 2.- Cubrir fucsina básica y calentar hasta el desprendimiento de vapores por 30 segundos.
• 3.- Lavar con solución acuosa de sulfato de cobre al 20%.
• 4.- Lavar con agua corriente y secar.
• 5.- Observar.
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TINCIÓN DE ESPIROQUETAS
• bacterias Gram negativas largas, delgadas, helicoidales y móviles.
• Treponema, Borrelia y Leptospira
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TINCIÓN DE ESPIROQUETAS CON EL MÉTODO DE VAGO
• Con el palito mondadientes obtener una muestra de sarro dentario y realizar un frotis en capa fina extendiendo en sentido espiral de adentro hacia fuera.
• Fijar el frotis al calor suave
• Cubrir con Mercuro cromo durante 3 minutos
• Lavar con agua corriente
• Cubrir el frotis con Violeta de genciana por 3 minutos
• Lavar con agua corriente
• Secar y observar al microscopio con objetivo de inmersión.
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TINCIÓN DE FLAGELOS
• Flagelo:
• Es un orgánulo filiforme.
• Provee de movimiento a las células.
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• Los flagelos son estructuras demasiado finas para poder ser visibles en el microscopio de luz.
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MÉTODO DE GRAY• Preparar una suspensión de la bacteria
en agua estéril.
• Sobre el portaobjetos flameado y frio colocar 5 gotas de suspensión.
• Dejar secar al aire, no calentar.
• Cubrir con el mordiente durante 10 min.
• Lavar con agua, tratando de no arrastrar la preparación.
• Cubrir con solución de carbol-fucsina durante 5 a 10 min.
• Lavar con agua y dejar secar al aire.
• Observar al microscopio con objetivo de inmersión.
• Los flagelos se observaran de color rojo.