Universidad de CaraboboFacultad de Odontología

Departamento de Ciencias MorfofuncionalesHistología General y Bucodentaria

TÉCNICAS HISTOLÓGICAS Y

MICROSCOPIO2013

PROFESOR: LUIS ENRIQUE PACHECO

www.histologiadidactica.blogspot.com

@profesorpacheco

Profesor Luis Pacheco

TEXTOS RECOMENDADOS

INDICADOR DE LOGRO UNIDAD I

DESCRIBE LAS CARACTERÍSTICAS MICROSCÓPICAS,

ULTRAESTRUCTURALES Y LAS TÉCNICAS PARA EL PROCESAMIENTO,

OBSERVACIÓN Y DIAGNÓSTICO HISTOLÓGICO DE LAS CÉLULAS Y

TEJIDOS BÁSICOS.

TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

MÉTODOS 1-Examen inmediato o in vivo:

a) Observación de células en el organismo vivo.

b) Observación de células que se

mantienen vivas luego de ser obtenidas del organismo

2- Examen mediato o post-morten:

Requiere de la muerte celular y supone seguir una serie de pasos, la Técnica histológica

TÉCNICAS HISTOLÓGICAS SON LOS DIFERENTES PROCEDIMIENTOS,

QUE SE USAN PARA MANTENER, EN LO

POSIBLE, EL ASPECTO DE LAS

ESTRUCTURAS HISTOLÓGICAS DEL

ORGANISMO VIVO. TRANSFORMÁNDOLAS

EN DELGADOS CORTES COLOREADOS

QUE PUEDAN POSTERIORMENTE SER

OBSERVADOS AL MICROSCOPIO

PROCEDIMIENTOS:

FIJACIÓN DESHIDRATACIÓN ACLARAMIENTO INFILTRACIÓN E INCLUSIÓN SECCIÓN O CORTE COLORACIÓN MONTAJE

FIJACIÓN En este Procedimiento se introduce el tejido en sustancias

que retardan las alteraciones y conservan su configuración normal.

FORMALDEHIDO AL 10%.

DESHIDRATACIÓN

CONSISTE EN INTRODUCIR EL TEJIDO FIJADO EN FRASCOS DE

ALCOHOL ABSOLUTO A CONCENTRACIONES ASCENDENTES

Y TIEMPOS DETERMINADOS.

70% 80% 95% 100% 100% 100%

30´ 45´ 45´ 60´ 60´ 60´ 5Horas

ACLARAMIENTO O DIAFANIZACIÓN

ESTE PASO SUSTITUYE EL ALCOHOL POR EL XILOL (VUELVE

TRANSPARENTE AL TEJIDO), QUE ES UN LÍQUIDO MISCIBLE

CON LA PARAFINA

XILOL XILOL

45´ 45´

ES LA FORMACIÓN DEL BLOQUE DE PARAFINA Y TEJIDO QUE RECIBE EL NOMBRE DE TACO

INFILTRACIÓN E INCLUSIÓN

SECCIÓN O CORTE Consiste en cortar el tejido en secciones lo

suficientemente delgadas para permitir el paso de la luz, el corte se realiza con un micrótomo.

SECCIÓN O CORTE

Para eliminar PLIEGUES O ARRUGAS del tejido…

EL CORTE ES LLEVADO A UN RECIPIENTE QUE ES EL

BAÑO DE FLOTACIÓN (40º C)

MONTAJE Y TINCIÓN

Los cortes se colocan sobre un portaobjetos y luego se tiñen mediante coloraciones hidrosolubles

Para ADHERIR el corte a la lámina…

SE COLOCA EN UNA LAMINA PORTA OBJETO Y SE

LLEVA A LA ESTUFA DURANTE 15 a 20´ A 80ºC

MONTAJE Y TINCIÓNExtraer parafina Hidratar Colorear

2 tubos

15´

100% 100% 100% 70% 70%

70% 100% 100%

5´ 5´ 5´ 5´

5 Veces in/out

UNA VEZ COLOREADA LA LAMINA, SE USA MARTEX

(RESINA ACRILÍCA DILUIDA EN XILOL)

SE COLOCA UN CUBREOBJETO Y EL TEJIDO QUEDA LISTO PARA OBSERVARLO AL

MICROSCOPIO

MARTEX

COLORACION CON HEMATOXILINA Y EOSINA

La hematoxilina es un colorante básico que tiñe de color azuloso a los componentes ácidos de la célula.

La eosina es un colorante acido que tiñe de color rosado a los componentes básicos de la célula.

OTRAS TÉCNICAS DE TINCIÓN

Tricrómico de Masson Orceína Resorcina Colorante de Wright Tinciones Argenticas Hematoxilina Férrica Acido Periódico de Shiff Colorante Giemsa

COLORACIONES:

Tricrómico de Masson OrceínaResorcina

Hematoxilina férrica Hematoxilina eosina

COLORACIONES:

Sales de Plata

TricrómicoHematoxilina Eosina

COLORACIONES:

Ovario De Gata Hematoxilina -Eosina

Ganglio Raquídeo Plata

Hígado Carmín de Best

COLORACIONES:

Raíz de cebolla

Hematoxilina Ferrica

Riñón

Hematoxilina-Eosina

MICROSCOPIO

MICROSCOPIO

Un microscopio es un dispositivo encargado de hacer visibles objetos muy pequeños. 

Es el instrumento mas importante en la histología , debido al tamaño de las estructuras analizadas.

Se clasifica según el tipo de fuente luminosa que utilice.

MICRO- (PEQUEÑO) / SCOPIO (OBSERVAR): INSTRUMENTO QUE PERMITE OBSERVAR OBJETOS QUE SON DEMASIADO PEQUEÑOS PARA SER VISTOS A SIMPLE VISTA.

MICROSCOPIO

Óptico• Óptico simple• Óptico compuesto

Electrónico• Electrónico de transmisión • Electrónico de barrido

Ultramicroscopio.Microscopio de contraste de fase. Microscopio de interferencia.Microscopio confocal.Microscopio de polarización.Microscopio de fuerza atómica.

MICROSCOPIO ÓPTICO Consiste en una

fuente luminosa, un condensador que enfoca los rayos de luz sobre la muestra, una platina en la cual se coloca la muestra, un objetivo y un ocular .

COMPONENTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

Sistema óptico

Sistema de iluminación

Sistema mecánico

SISTEMA ÓPTICO Y DE ILUMINACIÓN

Ocular

Objetivos

Fuente de luzCondensador

Es cilindro hueco metálico, provisto de una lente o un sistema de lentes convergentes, cuya finalidad es aumentar la imagen real e invertida enviada por el objetivo.

OCULAR

OBJETIVO

Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta 4X, 10X,40X,100X.

CONDENSADOR Y DIAFRAGMAEl condensador concentra el haz de luz sobre la preparación y el diafragma limita el haz de rayos que atraviesa el sistema de lentes eliminando los rayos mas desviados.

Base

ColumnaPlatina

Cabezal

Brazo

SISTEMA MECÁNICO

Sistema Mecánico

Revolver

Platina

Tornillo Macrométrico

Tornillo Micrométrico

Sistema Mecánico

Tornillo Macrométrico

Tornillo Micrométrico

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN

Usa un Haz de electrones. para producir la imagen, esto permite obtener una mayor amplificación y resolución. La imagen puede plasmarse en una película y producir micrografías en blanco y negro.

PODER DE RESOLUCIÓN

Capacidad de un lente o sistema óptico del microscopio de separar claramente dos puntos que se encuentran muy próximos. la resolución esta limitada por la longitud de onda de la luz ,la apertura numérica del objetivo y el grosor del espécimen observado.

Microscopio Óptico Microscopio electrónico

Utiliza un haz de luz. Utiliza un haz de electrones.

Utiliza lentes de cristal. Utiliza lentes electromagnéticas.

La imagen se observa de forma directa. La imagen se registra en una placa fotográfica

Proporciona aumentos de hasta 1000 X Proporciona aumentos de hasta 200000 X

Posee un poder de resolución de aproximadamente 0.2 micras

Posee una resolución de aproximadamente 0.2 nanómetros

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO

Proporciona una imagen tridimensional del espécimen.

El haz de electrones no atraviesa el objeto, por lo que no es necesario utilizar cortes ultra finos.

La imagen Obtenida es observada en una Pantalla de TV

Diferencia entre las imágenes observadas

M.O M.E.T M.E.B

DIFERENCIAS ENTRE M.O, M.E.T Y M.E.B

MICROSCOPIO ÓPTICO

•LAS LENTES ÓPTICAS ENFOCAN UN HAZ DE FOTONES

•BUENA AMPLIFICACIÓN Y RESOLUCIÓN

•PARA OBSERVAR LOS TEJIDOS SE USAN COLORANTES HIDROSOLUBLES

•REQUIERE DE CORTES DELGADOS

•LA IMAGEN QUE SE OBSERVA ES BIDIMENSIONAL

•LA IMAGEN SE PROYECTA EN EL OJO A TRAVÉS DE LOS LENTES Y SE VISUALIZA SEGÚN LOS COLORANTES UTILIZADOS

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN

•LOS ELECTROMAGNETOS ENFOCAN UN RAYO DE ELECTRONES

•MAYOR AMPLIFICACIÓN Y RESOLUCIÓN QUE EL M.O

•PARA OBSERVAR LOS TEJIDOS SE USAN TÉCNICAS DE PRECIPITADOS DE METALES PESADOS

•REQUIERE DE CORTES EXTREMADAMENTE DELGADOS

•LA IMAGEN QUE SE OBSERVA ES BIDIMENSIONAL

•LA IMAGEN SE PROYECTA EN UNA PANTALLA Y POR MEDIO DE UNA VENTANA DE OBSERVACIÓN SE VE LA IMAGEN EN BLANCO Y NEGRO

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO

•LOS ELECTROMAGNETOS ENFOCAN UN RAYO DE ELECTRONES

•MAYOR AMPLIFICACIÓN Y RESOLUCIÓN QUE EL M.O PERO MENOR QUE EL M.E.T

• SE DEPOSITA EN LA SUPERFICIE DEL ESPÉCIMEN A OBSERVAR UNA CAPA DELGADA DE UN METAL PESADO

•NO REQUIERE DE CORTES DELGADOS

•LA IMAGEN QUE SE OBSERVA ES TRIDIMENSIONAL

• LA IMAGEN SE REPRESENTA FOTOGRAFIÁNDOLA O DIGITALIZÁNDOLA EN UNA COMPUTADORA Y SE OBSERVA A TRAVÉS DE UNA PANTALLA DE TV.

Microscopio electrónico

Macroscópico Microscopio óptico

CONCLUSIÓN Conocer la estructura , organización y

funcionamiento de células, tejidos, órganos, nos permitirá comprender en un fúturo, el origen de los cuadros patológicos de nuestros pacientes, los que se iniciaran con alteraciones a nivel celular.