Sequenciamento do dna - Cederj
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Sequenciamento do DNA
Tutor Presencial Bruno Ribeiro
São Gonçalo 2016
Definição
Processo que determina a sequência (ordem) de bases da molécula de DNA, utilizando nucleotídeos artificialmente alterados (SADAVA et al., 2009).
ClustalX, 2016
Reação de sequenciamento
• Colocar em um tubo de PCR:
DNA
Fonte:frr.wikipedia.org/wiki/DNA
Primers DNA polimerase
Fonte:www.labbulletin.com
dNTP
ddNTP
Desoxirribonucleosídeos trifosfato
Didesoxirribonucleosídeos trifosfato
Procedimento
• DNA desnaturado (tubo teste)
http://docplayer.com.br/6745095-Estrutura-e-funcao-de-acidos-nucleicos.html
Procedimento
• DNA-polimerase síntese da fita complementar
Procedimento
• Inserir os dNTP (dATP, dGTP, dCTP e dTTP)• Pequenas quantidades de ddNTP (Marcado
com uma fluorescente)
Ivone et al., 2014
Importância do ddNTP
Eletroforese capilar
• Desnaturação das fitas de DNA
Fonte: www.genomic.com.br/index.jsp?conteudo=17
Referência
Ivone U. S. Leong, Jonathan R. Skinner and Donald R. Love. Application of Massively Parallel Sequencing in the Clinical Diagnostic Testing of Inherited Cardiac Conditions. Revista Medical Sciencs, v. 2, n.2, p. 98-126, 2014.
SADAVA, David; HELLER, H. Craig; ORIANS, Gordon H., PURVES, William K. & HILLIS, David M. Vida: a ciência da Biologia. Volume I, 8ª Edição, 2009.