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CHANGES DURING HIBERNATION IN DIFFERENT PHOSPHOLIPID AND FREE AND ESTERIFED CHOLESTEROL SERUM LEVELS IN BLACK BEARS(Cambios durante la hibernacin de diferentes fosfolipidos, niveles sricos de colesterol libre y esterificado en el oso negro)

Nombres: Profesor: Carlos Lovazzano BravoINTEGRANTES:

Alfredo SilvaBeln HernndezKaren EstevesMarco Palmahiptesis

Cules son los cambios metablicos en la utilizacin de los Acidos grasos Poliinsaturados(PUFAS) durante la hibernacin del Oso negro Americano(Ursus Americanus)?

Objetivo generalIdentificar los cambios de los diferentes fosfolipidos y niveles sricos ,durante la hibernacin, comparando con el estado activo del oso negro.

Hibernacin v/s LetargoHibernacin

Estado de Hipotermia reguladaOrganismos Homeotermospoca invernal

Letargo

Estado Hipotermia provocadaOrganismos Poiquilotermospoca variable

Tabla comparativa entre mamferosORGANISMOTEMPERATURARITMO CARDIACORESPIRACINOSO AMERICANO 36-30C 55-14 Lat/min Cada 20seg MARMOTA36 - 7C220 a 30 puls/min250 a 12 resp/ min

MURCIELGO 0-10CERIZO DE TIERRA36 a 5grados180 a 8 latidos por minuto, 40 a 50 veces por minuto a solo 3 o 4. LIRN35C se rebaja hasta 1C Muy disminuidoCada 50 minutos

Lirn

MarmotaErizo de tierra

GRASASFUENTE DE ENERGAFUENTE DE AHORROLos experimentos de laboratorio han revelado que se requiere una dieta que contiene altos niveles de cidos grasos poliinsaturados (PUFA) tales como cido linoleico para la hibernacin (G. Florant, L. Hester, S. Ameenuddin, D. Rintou.1993). Mayor poblacin mitocondrial Contienen el gen que codifica a la proteina TERMOGENINA La liplisis de la grasa parda es inducida por fro

Grasa Parda

ESTRS OXIDATIVODRECIENTE ACTIVIDAD Ca2+ / Mg2+-ATPase Na+ / K+-ATPase

Adaptacin de supervivencia de la presin metablicaMateriales y mtodosANIMALES Inicialmente: 4 osas(7-12 aos)

Alimentacin 2000g 2000g 2000g 2000g(Comida para Perro)

Tiempo Agosto Diciembre

Reduccin de raciones: 1000g - 500g - 250g

Tiempo 01/12 10/12 20/12

La alimentacin se termin el 30 de diciembre y no la reanudaron hasta el 1 de Abril.EXTRACCIN DE LPIDOS SRICOSExtraccin del suero de los osos (MTODO FOLCH)Secado de fase Orgnica bajo una atmsfera de nitrgeno.La pelcula lipdica se disolvi en 150L de cloroformo.Separacin de muestra lipidicas en 60 placas de gel de slice(CROMATOGRAFA DE CAPA FINA)

El colesterol libre y esterificado se separ usando el sistema de disolvente Petrleo ter/Solvente ter/cido actico en una porcin de 90:10:1(V/V)

Separacin de fosfolpidos mediante Disolvente de cloroformo/metanol/amoniaco (65:25:4 v/v ) Visualizacin de lpidos en placas mediante la cmara de Yodo saturada. Identificacin de los diferentes fosfolipidos, colesterol libre y esterificado, mediante el marcado y patrones estndar.

ESTIMACIN DE COLESTEROL LIBRE Y ESTERIFICADOEn tubos de ensayose separ el colesterol libre y colesterol esterificado se extrajo de las placas de TLC y se mezcla con 2 ml de cloroformo. Despus de 10 min, las muestrasse agitaron y se centrifugan por 10 min El disolvente orgnico de cada muestra fue transferido cuidadosamente a otro tubo de ensayo. Este procedimiento se repiti dos veces, y el disolvente orgnico de los treslpidos se combinaron, y se secaron en atmsfera de nitrgeno. El colesterol se midi por el mtodo de Zlatkis.

resultadosEFECTO DE LA HIBERNACIN EN COLESTEROL TOTAL, LIBRE YESTERIFICADO EN EL SUERO DE LOS OSOS NEGRO

CAMBIOS EN LOS FOSFOLPIDOS DEL SUERO Y SUS FRACCIONES DURANTE LA HIBERNACIN DE LOS OSOS FosfolpidosEstado activo (g / ml de suero)

Hibernacin (g / ml de suero)

Fosfolipidos totales.1991.0106.02699.040.0*PE (Fosfatidiletanolamina)35.0 9.420.8 9.5*

PS + PI (fosfatidilserina+ fosfatidil-dylinositol) 157.2 23.6248.636.7*SPG (esfingomielina)283.7 15.3400.522.7*

PC (fosfatidilcolina)1532.0 84.91993.097.0*

Composicin de fosfolpidos en el suero de los osos negros en estado activo y estado de hibernacin. discusinDurante la hibernacin se present un aumento en los niveles de colesterol libres y esterificados [1] [2]

Debido a que la concentracion de lipoproteinas en sangre se ve disminuido en periodo de hibernacion, la concentracion de colesterol libre y esterificado aumenta, puesto que este es incapaz de viajar solo en el plasma sanguineo.

Se observ que la PC(fosfatidilcolina), PS + PI(fosfatidilserina+ fosfatidil-dylinositol) y SPG(esfingomielina) se incrementaron ,mientras que PE (Fosfatidiletanolamina) ,es disminuido durante la hibernacin, en comparacin con el estado activo en oso [3] Por ejemplo:

- La esfingomielina (SPG),es un fosfolipido encontrado en la vaina de mielina de las neuronas ,por ende la actividad neuronal del oso no se encuentra disminuido. -La PC(fosfatidilcolina), es un componente fundamental de la bilis porque tiene un gran poder emulsionante, es decir, acta como un detergente con las grasas. -Mientras que la concentracin de PE (Fosfatidiletanolamina) ,disminuye ya que su principal funcin es formar parte del plegamiento de las protenas,ya que durante la hibernacin el oso no utiliza las proteinas .

conclusinbibliografas[1] D.A. Ahlquist, R.A. Nelson, D.L. Steiger, J.D. Jones, R.B. Ellefson, Glycerol metabolism in the hibernating black bear, J. Comp. Physiol.155B (1984) 7579

[2] R.A. Nelson, H.W. Wahner, J.D. Jones, R.D. Ellefson, P.E. Zollman, Metabolism of bears before, during, and after sleep, Am. J. Physiol 224 (1973) 491496.

[3] L. Demisch, D.L. Heinz, H. Gerbaldo, R. Kirsten, Increased concentrations of phosphatidylinositol (PI) and decreased esterication of carachidonic acid into phospholipids in platelets from patients with schizoaffective disorders or atypic phasic psychoses, Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids 46 (1992) 4752.

FIN