Ensaios realizados · Among the plants tested Carica papaya and Cocos ... a través de la...
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Universidade Federal do Rio Grande do Sul
PPG em Ciências Farmacêuticas
Faculdade de Farmácia
Porto Alegre, RS
Brasil
Laboratório de Farmacognosia
Gilsane Lino von Poser
Ensaios realizados
Atividade acaricidaAtividade inseticida Atividade antibacterianaAtividade antifúngica Atividade antiprotozoária
Amostras: -LCCV (amostra fornecida por Dra. Morsyleide de Freitas
Rosa - EMBRAPA-Ceará- Brasil
-Tara (amostra fornecida por Dra. Patricia Basic (TANAGRO-Peru)
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Atividade AcaricidaBoophilus microplus
Teste de imersão de larvasAmostras:Extratos aquosos de Tara e LCCV
Concentrações: 5%, 2,5%, 1,25%
Tara: mortalidade na concentração de 5%LCCV: não foi observada mortalidade das larvas
Obs: os experimentos serão repetidos com ácaros de diferente procedência
Atividade inseticidaPiolhos de bovinos e equinosBovicola bovis e Bovicula equi
Teste de imersão de adultosAmostras:Extrato aquosos de Tara e LCCV
Concentrações: 5%, 2,5%, 1,25%
Tara e LCCV: não foi observada mortalidade dos insetos
Obs: os experimentos serão realizados com piolhos de humanos (uso tradicional de TARA no Peru)
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Atividade antibacteriana
Teste de difusão em ágar
Amostras:Extratos aquosos de Tara e LCCV
Concentrações: 1%, 0,5%, 0,25%
Microrganismos: Escherichia coliStaphylococcus aureus
Obs: serão realizados outros testes e também outras bactérias
LCCV: Escherichia coli
P
B
LCCV: Staphylococcus aureus
1%
0,25%
B= branco, P= cloranfenicol
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Tara: E. coli Tara: S. aureus
1%
0,5%
0,25%
Amostra Extrato alcoólico bruto de Tara
MicrorganismosCandida albicans, C. tropicalis, Saccharomyces cerevisiae, Cryptococcus neoformans,
Aspergillus flavus, A. fumigatus, A. niger, Trichophyton rubrum, T. mentagrophytes e Microsporum gypseum
Teste para avaliar a atividade antifungica
MIC determinada usando o teste de microdiluição em caldo
(National Committee for Clinical Laboratory Standards para leveduras e para fungosfilamentosos)
A amostra não inibiu o crescimento dos microrganismosem nenhuma das concentrações testadas
Atividade antifúngica
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Atividade antiprotozoária
Teste de inibiçao de trofozoitos de Trichomonasvaginalis e Trichomonas foetus
Amostra:Extratos aquosos de LCCV
Concentrações: 5%, 2,5%, 1,25%
Obs: contaminação do meio de cultivo. Provavelmente pela presença de açúcar
Calzada,F.; Yépez-Mulia, L.; Tapia-Contreras, A.Effect of Mexican medicinal plant used to treat trichomoniasis onTrichomonas vaginalis trophozoitesJournal of Ethnopharmacology, v. 113, p. 248-251, 2007.
AbstractCrude methanolic extracts from 22 Mexican medicinal plants were screened for antitrichomonal activity against Trichomonas vaginalis, which is the etiological agent oftrichomoniasis. Among the plants tested Carica papaya and Cocos nucifera showed the bestantitrichomonal activity with IC50 values of 5.6 and 5.8g/ml, respectively. The extracts ofBocconia frutescens, Geranium mexicanum, and Lygodium venustum showed moderateactivity with IC50 values ranging from 30.9 to 60.9 g/ml. All the other plant extracts wereinactive (IC50 > 100g/ml). All extracts tested were less active than metronidazole (IC50 0.037g/ml), an antiprotozoal drug used as positive control. The results of the antiprotozoalscreening support the popular uses of five of the plants tested for the treatment of some urogenital tract disorders in Mexican traditional medicine. However, seeds of Carica papayaand aerial parts of Bocconia frutescens should be used in herbal medicine with care to avoidtoxicity.
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Remoção de açúcares de LCCV
A presença de açúcares na amostra tem sido prejudicial a realização de determinados ensaios biológicos por favorecer o desenvolvimentode fungos e bactérias
Objetivo do ensaio: eliminar açucares sem reduzir o teor de compostos fenólicos
Método:Fermentação com Saccharomyces cerevisiaeem diferentes tempos (8h, 24h e 48h)
-Doseamento de aúcares (método de Somogyi – Nelson)
-Doseamento de compostos fenólicos (Folin-Ciocalteau)
-Liofilizaçao do extrato resultante para posterior avaliação biológica
99,9890,01140,07648h
99,9830,01650,11024h
99,9510,0490,32412h
02,651,060h
Redução teor (%)
Conc(mg%)
Conc(mg/mL)
00,5
11,5
22,5
3
0h 12h 24h 48h
Tempo de fermentação
Con
. A
çúca
r (g
%)
020406080
100120
0h 12h 24h 48h
Tempo de fermentação
Red
ção
dos
açúc
ares
(%
)
DeterminaDetermina çção do teor de aão do teor de a çúçú cares redutores em LCCVcares redutores em LCCV
Método de Somogyi – Nelson
7
aa a
b
05
10152025303540
0h 12h 24h 48h
Tempo de fermentação
EQ
DeterminaDetermina çção do teor de compostos fenão do teor de compostos fen óólicoslicos(expressos em equivalente de (expressos em equivalente de quercetinaquercetina ))
00,5
11,5
22,5
33,5
4
0h 12h 24h 48h
Tempo de fermentação
Teo
r fe
nólic
o (g
% d
e qu
erce
tina)
Sem tratamento= 3,13g%
Após 48 h= 1,53g%
Gretel Villanueva Ramos
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Trabajo experimental realizado en plantas que contienen taninosTrabajo experimental realizado en plantas que contienen taninos
Departamento de Farmacia de la Universidad Marta Abreu de las Villas
Estudios de los taninos presentes en las plantas
Capraria biflora, L y Boldoa purpurascens, Cav
Métodos de extracción de taninos
Se aplicaron varios métodos de extracción de taninos para ambas plantas, lo cual permitió, a través de la evaluación de las fracciones obtenidas por medio de cromatografía en capa delgada, espectrofotometría UV/VIS y rendimiento del proceso extractivo de las diferentes fracciones, establecer el método idóneo para la extracción de estos a partir de las hojas de Capraria biflora, L y Boldoapurpurascens, Cav. .
Estudios cromatográficos
Se realizaron estudios cromatográficos a los crudos de taninos para
determinar la naturaleza de estos metabolitos presentes en
Boldoa purpurascens Cav.
En el desarrollo cromatográfico aplicado a ambas plantas se encontró
como fase móvil adecuada para eluir los taninos la mezcla
tolueno-acetona-ácido fórmico (3:6:1),
pues aquí aparecen manchas mejor resueltas y con Rf similares
a lo informado en la literatura para los taninos.
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Por otra parte la fase móvil acetona-agua- ácido fórmico (9:0.5:0.5)
resultó ser también una buena fase móvil para eluir los taninos en Capraria
biflora donde aparecen manchas con Rf de 0.33, 0.48, 0.69 y Boldoa
purpurascens donde aparecen Rf de 0.32, 0.86, 0.58 similares a lo reportado
en la literatura para los taninos.
ReveladorEn todos los casos el revelador que mejores resultados ofreció fue la vainillina
al 1% con ácido sulfúrico que produjo un revelado color rojo vino tal cual
informa la literatura para este tipo de metabolito.
Del análisis de los resultados cromatográficos se puede
sugerir la presencia de taninos condensados para
Capraria biflora,
mientras que para
Boldoa purpurascens
los taninos hidrolizables preferentemente.
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Se realizó un análisis mediante la espectrofotometría UV/VIS a las
fracciones enriquecidas en taninos, lo cual contribuye a la selección del
método de extracción más adecuado para arrastrar los taninos presentes
en ambas especies.
Se evidenció que para las fracciones etanólicas se registraron máximos
De absorción a 266 nm para Boldoa purpurascens y 330 nm para
Capraria biflora.
Para esta misma especie se evidenció la presencia de estos compuestos
en la fracción acetona-agua (7:3) con su máximo de absorción en 265 nm
y para la fracción acuosa de Capraria Biflora a 265 nm. Los resultados
anteriores sugieren la presencia de este tipo de compuestos en ambas
plantas según los datos informados en la literatura.
Se evalúo de forma colateral la reacción colorimétrica con el
reactivo de Folin-Denis en el intervalo de 500-800nm para
las fracciones acetona-agua (7:3), etanólica y acuosa para
ambas especies, obteniendo máximos de absorción a
longitudes de onda de 646nm, 745nm, 663nm, 694nm,
745nm, 763nm lo cual no se correspondió con lo establecido
en la literatura consultada para los taninos donde de informa
un valor cercano a los 725nm.
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Del análisis de los resultados por espectrofotometría UV/VIS se
pudo sugerir la presencia de taninos hidrolizables para las hojas de
las plantas Capraria biflora y Boldoa purpurascens al aparecer picos
cercanos a 260 nm, reportados en la literatura para este tipo de
taninos.
Para el caso de Capraria biflora se sugiere además la presencia de
taninos condensados al aparecer en el espectro picos cercanos a 336
nm, reportados para los mismos.
Espectroscopia IR
Los resultados obtenidos en el IR indican la posible presencia de grupos
hidroxilos alcohólicos asociados, preferentemente secundarios y primarios
de acuerdo al ancho de la banda la cual sugiere una posible asociación
por puentes de hidrógeno intermoleculares; además, el hecho de que exista
una banda OH indica la presencia de un grupo C-O el cual puede ser asignado
a la señal que se registra en 1103.42 cm-1.
En el espectro aparece también una banda en 2925 cm-1 la cual puede ser
asignada a vibraciones de valencia de Csp3-H y que indica la presencia de una
porción saturada en la molécula.
Esto se complementa con la banda que aparece en 1380 cm-1 y que es
característica de CH3.
Estudios Espectroscópicos
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Espectrometría de masa
Después de analizar los valores de m/z+, resalta el valor de 112.894 como pico base destacándose además los valores de 326.815 y 340.833. Para el pico 340.8 se calculan las siguientes pérdidas de masa: M-(18), M-(20), M-(28), M-(132) y M-(12).
Teniendo en cuenta el valor del pico, las pérdidas de masa y lo reportado en la cartoteca del equipo se sugiere como posible estructura la del ácido digálico con uno de sus OH metilados.
Esto está de acuerdo con los resultados obtenidos en el espectro IR donde se suponía la presencia de un compuesto polisustituido, con un resto insaturado lo que se comprueba por la aparición de la banda del CH3.
Para el pico 326.8 se reportan las siguientes pérdidas de masa: M-(18), M-(168), M-(10). [La M-(18) representa una molécula de agua].
De acuerdo a los resultados obtenidos se sugieren como posibles taninos presentes en la planta los derivados del ácido gálico y digálico.
-Se validó una técnica analítica para cuantificar los taninos totales presentes en los extractos de las plantas evaluadas en base al ácido tánico, por espectrofotometría UV-VIS indirecta.
En el análisis cuantitativo se determinó que la planta presenta un 0.5% de taninos del total de componentes de la planta y en la fracción aislada se estima un 0.15% de esos metabolitos.
AplicacionesAtendiendo a las amplias aplicaciones farmacéuticas de los taninos, los
mismos pudieran estar asociados a las actividades terapéuticas anti-
inflamatoria, antidiarreico y diurética de estas plantas.
Adicionalmente se realizó un estudio de hemólisis a las fracciones de
taninos obtenidas a partir de Boldoa purpurascens, Cav, con vistas a ser
empleados como adyuvantes en vacunas antivirales.
El estudio resultó ser novedoso, por cuanto solamente las saponinas son
las, sustancias empleadas con estos fines, lo cual encarece el producto.
Posibles trabajos a continuarPurificación y caracterización de los taninos presentes en los crudos.
Evaluación farmacológica de los compuestos aislados