UNIVERSIDAD NORBERT WIENER FACULTAD DE ODONTOLOGIA CURSO:MICROBIOLOGIA INFORME DE LABORATORIO 8

SECCION :INTEGRANTES: DEIA CONTRERAS SOSA DALILA CRUZ NAVARO

DOCENTE: Fecha:

Lic.ELIZABHET CUADROS PAREJA13 O2 12

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2012

ndice

indeceMarco terico 3 Competencias .. 4 Materiales 11 Equipos procedemiento Resultado .. Cuestionario . Conclucion

Referncias bibliogrficas ....

Microbiota oral, Microbiologa de la placa dental

Marco tericoEn la cavidad oral se encuentran grmenes anaerobios de la boca, entre ellos tenemos a Porphyromonas gingivalis, P.endodontalis y P. catoniae que tiene como hbitat natural la cavidad oral y excepcionalmente producen procesos patolgicos fuera de ella; son bacterias asacarolticas (no metabolizan los hidratos de carbono por EMP ni pentosas). Estas emplean compuestos nitrogenados como fuente energtica, son bacilos gram negativos. El Gnero Prevotella son moderadamente sacarolticas y son resistentes a la vancomicina, son bacilos gram negativos, entre ellas tenemos: P. melaninognica, P. intermedia (P. gingivalis), P. nigrecens producen con mas frecuencia enfermedades periodontales y P . denticola. Gnero Bacteroides entre ellos tenemos a B. capillosus y B. forsythus de inters oral. Gnero Fusobacterium son bacterias pleomrficas en forma de huso, las especies de la cavidad oral: F. alocis, F. sulci, se aislan del surco gingival sano y F. periodonticum y F. nucletum en zonas del surco con enfermedades periodontales. Gnero Veionella es un coco gram negativo se detecta en la placa dental, saliva, superficie de mucosas. Otros Bacilos gram positivos: Gnero Atopobium, Eubacterium, Pseudoramibacter, Bifidobacterium. Otros cocos gram positivos: Peptococcus y Peptoestreptococcus. Clostridium son bacilos gram positivos esporulados desarrollan bien en medios a base de carne. Espirilos de la boca, llamados treponemas orales son un conjunto de treponemas anaerobios estrictos, muy exigentes nutricionalmente.

Entre ellas tenemos: T. denticola, T. skoliodontum, T. socranskii, T. pectinovorum y T. vincentii. Otros que se conocen menos son: T. medium, T. maltophilum y T. amylovorum; otras de situacin taxonmica incierta son: T. oralis y T. macrodentium.

CompetenciasIdentificar a los microorganismos formadores de placa dental utilizando coloraciones, medios de cultivo, valora su importancia en la prevencin de enfermedades de la cavidad bucal.

Materiales y equipos Papel absorbente estril Solucin fisiolgica estril Mondadientes estriles Lminas portaobjeto Escalpelo estril Medios de cultivo Coloracin Gram Coloracin de Vago Guantes, mascarilla, gorro Microscopio Aceite de inmersin

Procedimiento1. Toma de la primera muestra: Realizar un raspado en condiciones aspticas de la placa dental y depositarlo inmediatamente en los medios de cultivo con la ayuda de un isopo.

2. Dispersar el inculo con ayuda del asa de siembra en aro (No olvidar esterilizar primero el asa de siembra y dejar enfriar), siguiendo la tcnica dispersin agotamiento en los medios de cultivo selectivos para anaerobios y Agar Sangre, Manitol Salado, Agar Sabouraud Glucosado, caldo Thioglicolato de Sodio, agar Mac Conkey.

3. La segunda muestra servir para realizar el examen microscpico. Placa dental

4. Realizar un extendido de la muestra en una lmina portaobjeto y colorearlo con las tcnicas de Gram y Vag.

Tcnica de Gram:

1. Colocar sobre el extendido de la muestra violeta de genciana 2 minutos

2. Lavar con agua 3. Agregar lugol 2 minutos

4. Lavar con agua 5. Colocar decolorante por 10 segundos

6. Lavar con agua 7. Colorear con safranina

8. Lavar con agua 9. Secar y agregar aceite de inmersin

10.

Observar a 40X gran positivos

Se obseva streptococus

Mutam ,oralis mitis, ralivarus. Se obseva los vacilos

Antinomyces +++ con estructuras alargadas

t.oralis.espiroqueta ++++ leucucito

Tcnica de Vag:1. Colocar sobre el extendido de la muestra mercurio cromo 2 minutos

2. Lavar con agua 3. Agregar violeta de Genciana 2 minutos

4. Lavar con agua 5. Secar y agregar aceite de inmersin

6. Observar a 40X Falta El observado

Resultados1. Observe la presencia de colonias pequeas puntiformes, translcidas en los medios de agar, sangre correspondientes al Gnero Streptococcus. 2. Observe La presencia de desarrollo bacteriano en los dems mdios. 3. Streptococcus mutans con la coloracin Gram se observa de color prpura gram positivo y es un coco. 4. Actinomyces presenta estructuras fusiformes gram positivos +++. 5. Lactobacillus presenta bacilos rectos delgados gram positivos +. 6. Los treponemas orales presentan La forma de espiroquetas++++, observados con la coloracin de Vag.

CONCLUCION

Registre los datos obtenidos en las siguientes tablas:MUESTRAS Placa dental Secrecin farngea GRAM VAGO

MEDIOS DE CULTIVO Agar Sangre Manitol salado Mac Conkey Agar Sabouraud Caldo thioglicolato

OBSERVACIN MICROSCOPICA

OBSERVACIN MACROSCOPICA

CUESTIONARIO1. mencione los principales patgenos productores de la placa dental.

2. cite ud. dos patgenos de la cavidad oral

FUENTES DE INFORMACIN1. Brooks,G. Microbiologa y Parasitologa. 23 ava ed. Mxico: El Manual Moderno; 2005. 2. Koneman, Allen y col. Diagnstico Microbiolgico. 6ta ed. Arqentina : Mdica Panamericana; 2008 3. Liebana U. Jos. Microbiologa. 2da ed.Madrid: Mc Graw Hill ; 2002. 4. Negroni Marta.Microbiologa Estomatolgica. 1ra ed. Argentina: Panamericana ; 2005 . 5. Peters, Thomas y col. Diagnstico microbiolgico: texto y atlas color. 5ta ed. Argentina: Mdica Panamericana; 2004.

MICROBIOLOGA DE LA CARIESMarco terico

Lo primero es recordar que el paciente no debe estar con tratamiento antimicrobiano, como mnimo 72 horas previo. Habr que minimizar la contaminacin por microorganismos comensales y para ello practicar una buena asepsia local. Utilizar buches con antisptico y agua destilada estril, se facilitar el arrastre mecnico de la microbiota indgena con el auxilio de gasa estril. En caso de grmenes anaerobios debe transcurrir 15 minutos como mximo entre la toma de muestra y el centro de procesamiento. El contaje en saliva de Streptococcus y Lactobacillus indica la presencia infecciosa. Nivel de Streptococcus del grupo mutans (3,000 UFC/mL para fisuras y 43,000 UFC/mL para superficies libres) y Lactobacillus en saliva (mayor a 10,000 UFC/mL caries activa).

COMPETENCIASIdentifica a Streptococcus y Lactobacillus , realiza el recuento para la determinacin de caries dental, utilizando cultivos y tcnicas de diagnstico , valora la higiene bucal como medida preventiva de la produccin de caries.

MATERIALES Y EQUIPOS Caldo tripticasa de soya Medios selectivos para Streptococcus Medio selectivo para Lactobacillus Calculadora Propipetas Tubos de ensayo

Gradillas

Frascos estriles

Pipetas 1mL

placa petri para el cultivo

mascarrilla

PROCEDIMIENTO1. Recolectar aproximadamente 10 mL de saliva en un frasco estril, recuerde que el paciente no debe haber ingerido antibiticos por lo menos 72 horas antes.

2. Realizar un extendido de la muestra en una lmina portaobjeto y colorearlo con la tcnica de Gram, Ziehl Neelsen, Giemsa. 3. Practicaremos el recuento en saliva de Streptococcus mutans y Lactobacillus, para ello realizar diluciones al dcimo de la saliva recolectada en Caldo Tripticasa de Soya con ayuda de una pipeta de 10 ml. . Depositar inculos de 0.1 ml en las placas correspondientes a las diluciones 1/100,000, 1/1000 y 1/10 respectivam

5 tuvos cloruro de sodio 4.5ml

agregar salva o.5ml

Sacar o.1ml para depositar en la 2, de la 2 tambien se saca 0.1ml para haci sucecibamente hasta terminar al tuvo 5 Separar el tubo 1 tubo 3,tubo 5.para agregar agar tripticasa de soya

4. Extender con esptula de driglasky, dejar en reposo 10 minutos.

5. Colocar la placa petri en forma normal.

6. Incubarlo a 37C por 24 horas

7.Leer las clonias y enumerarlas

8.Realizar el recuento siguiendo la formula: UFC / mL de saliva = Nro de colonias x factor de dilucin x factor de inculo

9.Anotar los recuentos de cada placa dental

Uf.c/ml. Saliva =35 x10 x 10 =35 x10 =35,000,000

RESULTADOS:1. Streptococcus mutans por la tcnica de gram se observa como cocos gram positivos en cadena, con Giemsa de observan de color violeta y con Ziehl Neelsen son cocos azules. 2. Registrar el resultado del recuento de cada placa y proceder a sacar el promedio. 3. Expresar UFC/mL de saliva. 4. Comparar con los datos tericos recomendados: El contaje en saliva de Streptococcus y Lactobacillus indica la presencia infecciosa. Nivel de Streptococcus del grupo mutans (3,000

UFC/mL para fisuras y 43,000 UFC/mL para superficies libres) y Lactobacillus en saliva (mayor a 10,000 UFC/mL caries activa). Placas Nro 1 Nro 2 Nro 3 Recuento bacteriano

CUESTIONARIO1. Mencione los microorganismos aislados de la cavidad oral.

2. Mencione el recuento de Streptococcus y Lactobacillus encontrados en las muestras problemas.

3. Qu microorganismos son los productores de caries dental?

CONCLUCION

recomendacion

FUENTES DE INFORMACIN1. Brooks,G. Microbiologa y Parasitologa. 23 ava ed. Mxico: El Manual Moderno; 2005. 2. Koneman, Allen y col. Diagnstico Microbiolgico. 6ta ed. Argentina: Mdica Panamericana;

2008 3. Liebana U. Jos. Microbiologa. 2da ed.Madrid: Mc Graw Hill ; 2002. 4. Negroni Marta.Microbiologa Estomatolgica. 1ra ed. Argentina :Panamericana ; 2005 . 5. Peters, Thomas y col. Diagnstico microbiolgico: texto y atlas color. 5ta ed. Argentina: Mdica Panamericana; 2004.