Bacteriology Lab 1

به نام خدا

By: Dr. A. Mohammadi

Department of Biology,

Faculty of science,

University of Alzahra

آزمایشگاه چهارمسودوموناس

2

ایباکتری های گرم منفی روده کالیاشریشیا

کلبسیالشیگال

پروتئوسسالمونال

Dr A.Mohammadi

گرمباکتریهایازمهمی(جنس)سرده،((Pseudomonas:انگلیسیبهسودومونا•.هستندگاماپروتئوباکترهارده،پروتئوباکتریاشاخهبهمتعلقمنفی

،شکلمیله‌ایاغلبسردهاینگونه‌های.دارندزیادیتنوعهوازیارگانیسمهایاین•ونه‌هایگمتابولیسم.هستندمثبتاکسیدازومثبتکاتاالزدار،تاژکاسپور،بدون

وستندهخاکزیاغلبباکتریهااین.ندارندتخمیریوحالتبودهتنفسیسودوموناس.نماینداستفادهوانرژیکربنمنبعبعنوانآلیترکیب150ازقادرند

جهو.دارندفلورسانسخاصیتآئروژینوزاسودوموناسمانندسودوموناهاازمهمیگروه•درکهاستپیگمانهاییتولیدسودوموناس‌ها،سایرازفلورسنتسودوموناس‌هایتمایزخاصیتآهنکمبودشرایطدربویژه(نانومتر254)فرابنفشکوتاهموجطولنوربرابر

وروفورسیدآبدرمحلولوفلورسنتخاصیتباپیگمان‌هایاینبه.دارندفلورسانس.می‌شودگفتهسودوباکتینیاپیووردینسودوموناس‌هامورددراختصاصا

Dr A.Mohammadi3

سودوموناس-1

دردارندغذاییموادبرداشتدرکهباالییتواناییبهتوجهباهاسودوموناسجنس•.شوندمییافتمحیطهاازبسیاری

دارایومتحرکاکثرا،هوازی،خمیدهیامستقیممنفیگرمهایباسیلهاسودوموناس•malleiمالئیسودوموناسجزبههستندباکتریقطبیدویاقطبییکدرفالژلچنداستحرکتبدونکه

باشندیماکسیدازآنزیمدارایامانیستندقندهاتخمیربهقادرجنساینهایباکتری•.شوندمیجداهاآنتروباکتریاسهخانوادهازهاتستاینوسیلهبهکه

خیصتشاستبیمارستانیاغلبوطلبفرصتعفونتیکآئروژینوزاسودوموناس•ینا.می‌دهدرویآزمایشگاهیتشخیصوسازیجداباآئروژینوزاسودوموناسعفونتایناساییشن.می‌کندرشدآزمایشگاهیکشتمحیطهایبیشتررویخوبیبهباکتری،(مثبتیدازاکسواکنشیک)الکتوزتخمیردرناتوانیگرم،مورفولوژیپایهبرباکتری

.می‌شودشناساییسانتیگراددرجه42دمایدررشدتواناییو(انگورمزهبا)میوهبویدوموناسسوکلنی‌هایفوریتشخیصدرنیزفرابنفشنورزیرفلوئورسانسویژگی

بهریباکتاین.می‌کندکمکزخم‌هادرآنوجودتشخیصدروبودهکارسازآئروژینوزا.استمقاومبیوتیکهاآنتیازبسیاری

Dr A.Mohammadi4

سودوموناس-1

:سودوموناسجنسمهمهایگونه•،آئروژینوزاسودوموناس•،سپاسیاسودوموناس•،مالتوفیلیاسودوموناس•.مالئیسودوموناس•گروهدرفلورسنسسودوموناسو،پوتیداسودوموناس،آئروژینوزاسودوموناس•

دارندقرارفلورسنتهایسودوموناسدوموناسسوگروهدرسپاسیاسودوموناسومالتوفیلیاسودوموناسومالئیسودوموناس•

دارندقرارفلورسنتغیرهایدرشغذاییآگاروخوندارآگارمثلمعمولیهایمحیطدرسادگیبهباکتریهااین•

قابلشگاهیآزمایکشتهایمحیطتمامدرتقریباوباشندمیبتاهمولیزدارایومیکنند.هستندجداسازیوپرورش

Dr A.Mohammadi5

سودوموناس-1

آگارایهمحیطرویبرمیکروسکوپتوسطمستقیمبررسیازپسرانظرموردنمونه•.دهیدکشتEMBیاکانکیمکوخوندار

.آوردمیدوجوبهمنفیالکتوزدرشتهایکلنیکانکیمکمحیطرویبرباکتریاین•باکتریاین.کنیدمنتقلTSIیاآگارآیرونکلیگرمحیطرویبرراحاصلهکلنیسپس

.نمایدمیفلزیجالیایجادمحیطدواینرویبرباکتریایندرVPوردمتیل،اندولهایتستومثبتباکتریایندرسیتراتتست•

.باشدنمیقندهاتخمیربهقادروکندمیذوبراژالتینواستمنفی

Dr A.Mohammadi6

یتشخیص آزمایشگاه

Isolation Of Enterobacteriaceae

To isolate Enterobacteriaceae and Pseudomonas, specimens from the

infected site are plated out on any one of a large number of selective

and differential media such as EMB agar, Endo agar, Deoxycholate agar,

MacConkey agar, Hektoen Enteric agar, and XLD agar.

Xylose Lysine Deoxycholate agar is selective for gram-negative

bacteria XLD agar contains: sodium desoxycholate ,sugars lactose and

sucrose, the amino acid L-lysine, sodium thiosulfate, ferric ammonium

citrate and the pH indicator phenol red.

sodium desoxycholate, which inhibits the growth of gram positive

bacteria but permits the growth of gram-negatives.

7Dr A.Mohammadi

If the gram-negative bacterium ferments lactose and/or sucrose, acid endproducts will be produced and cause the colonies and the phenol red in theagar around the colonies to turn yellow. If lactose and sucrose are notfermented but the amino acid lysine is decarboxylated, ammonia, an alkalineend product will cause the phenol red in the agar around the colonies to turn adeeper red. Sometimes the sugars are fermented producing acid end productsand lysine is broken down producing alkaline end products in this case some ofthe colonies and part of the agar turns yellow and some of the colonies andpart of the agar turns a deeper red.

If hydrogen sulfide is produced from thiosulfate reduction, part or the entirecolony will appear black.

Typical reactions for some of the Enterobacteriaceae and Pseudomonas are:

Escherichia coli: flat yellow colonies; some strains may be inhibited.

Enterobacter and Klebsiella: mucoid yellow colonies.

Proteus: red to yellow colonies; may have black centers.

Salmonella: usually red colonies with black centers.

Shigella and Pseudomonas: red colonies without black centers.8Dr A.Mohammadi

Isolation Of Pseudomonas

Pseudosel agar is selective for Pseudomonas aeruginosa and alsostimulates P. aeruginosa to produce its characteristic pigment aswell as fluorescent products. Pseudomonas aeruginosa will typicallyproduce a green to blue water-soluble pigment on this agar and willalso fluoresce when the plate is placed under a short wavelengthultraviolet light.

Pseudosel agar contains cetrimide which inhibits most bacteria otherthan Pseudomonas aeruginosa. It also contains potassium sulfate andmagnesium chloride which stimulate P. aeruginosa to produce thepyocyanin (a blue , non fluorescent pigment soluble in water andchloroform)

Pseudosel agar can be used to stimulate the production of pigmentand fluorescent products.

9Dr A.Mohammadi

Pigment production on Pseudosel agar Pseudomonas aeruginosa produces a green to blue, water soluble pigment

called pyocyanin.

Fluorescence under ultraviolet light on Pseudosel agar It produces a product called fluorescein that will fluoresce under short

wavelength (254nm) ultraviolet light.

Odor

Most of the Enterobacteriaceae have a rather foul smell; Pseudomonasaeruginosa produces a characteristic fruity or grape juice-like aroma dueto production of an aromatic compound called aminoacetophenone.

Fermentation of glucose.

All of the Enterobacteriaceae ferment the sugar glucose; Pseudomonasaeruginosa and other no fermentative gram negative rods will not.

Dr A.Mohammadi 10

Pigment production on Pseudosel agarFluorescence under ultraviolet light on Pseudosel agar

Dr A.Mohammadi 11

کار عملی

اکسیدازسیتوکرومتنفسیآنزیمدارایباکتری‌هایشناساییبرایتستاینCمی‌رودبکار.

داردقرارمثبتاکسیدازنایسریااحتمالیشناساییتست،اینفراوانکاربردهایمیاندر.

واستافیلوکوکوسگونه‌هایهمانندانتروباکتریاسه‌هاجداسازیدرهمچنینتستاینیبریوناسه،وسودوموناس،مثلباکتری‌هاییاز(هستندمنفیاکسیدازهمهکه)استرپتوکوکوس

.استمفید(‌اندمثبتاکسیدازهمهکه)پاستورالوکمپیلوباکترآئروموناس،

اجباری‌های‌هوازیبیااکسیدازندسیتوکرومآنزیمفاقدکهارگانیسم‌هاییشناساییدراینکهضمن.داردکاربرد

13

تست اکسیداز-1

Dr A.Mohammadi

اکسیدازسیتوکرومتنفسیآنزیمدارایباکتری‌هایشناساییبرایتستاینCمی‌رودبکار.

داردقرارمثبتاکسیدازنایسریااحتمالیشناساییتست،اینفراوانکاربردهایمیاندر.

واستافیلوکوکوسگونه‌هایهمانندانتروباکتریاسه‌هاجداسازیدرهمچنینتستاینیبریوناسه،وسودوموناس،مثلباکتری‌هاییاز(هستندمنفیاکسیدازهمهکه)استرپتوکوکوس

.استمفید(‌اندمثبتاکسیدازهمهکه)پاستورالوکمپیلوباکترآئروموناس،

اجباری‌های‌هوازیبیااکسیدازندسیتوکرومآنزیمفاقدکهارگانیسم‌هاییشناساییدراینکهضمن.داردکاربرد

Dr A.Mohammadi

14

تست اکسیداز-1

محیطبهمستقیما‌(...ولئودمکوگوردونمعرف،کواکسمعرف)احیاءکنندهعاملاکسیداز،تستدر.می‌شودافزودهدهاحیاءکننعاملبهآغشتهکاغذیکبهباکتریاییکلنییکیاباکتریاییجامدکشت

نشان‌دهندههککردمشاهدهرارنگتغییرمی‌توانثانیهازکسریدرشود،اکسیداحیاءکنندهعاملاگرمنفیدهندهنشانشده،مشخصزماندررنگتغییرعدمامااست؛Cاکسیدازسیتوکرومآنزیمحضور.می‌باشدآنزیمایننبودوتستبودن

می‌باشندتأخیریمثبتاکسیدازیاومتغیراکسیدازمیکروارگانیسم‌هاازبعضی.

سیتوکرومترکیببودنمتفاوتبهمیکروارگانیسم‌هااکسیدازواکنشدرتنوعC،سیتوکرومدرتنوع.استمرتبطانتقالیزنجیرهترکیبدرتنوعواکسیداز

Dr A.Mohammadi

15

تست اکسیداز-1

Dr A.Mohammadi

Oxidase test

Dr A.Mohammadi

16

Dr A.Mohammadi

17

Dr A.Mohammadi

Dr A.Mohammadi

18

Dr A.Mohammadi

19

Dr A.Mohammadi

Dr A.Mohammadi

20

Dr A.Mohammadi

Dr A.Mohammadi

21

Dr A.Mohammadi

شوداستفاده(ساعت24ازبیشتر)کهنهکشتازنباید.زرفریدرساخته‌شدهمحلولاینکهمگرشودتهیهروزانهوتازهبه‌صورتبایداکسیداز%1محلول

.کندارغوانیراآنرنگوگذارداثرمعرفرویمی‌تواندهوادرموجوداکسیژن.گرددنگهداریکمکبا.نگه‌داریدخودازدوروایستادهطوربهراآنمی‌کنید،استفادهمعرف‌هاآمپولازاگر

.شودخردآمپولداخلشیشهتادهیدفشارراآنشستونشانهانگشت‌هایسیداکرامعرفاستممکنهوااکسیژنکهچرااستمنفیواکنشنشانهثانیه10ازپسشدنارغوانی

.کندهدمی‌دکاذبمثبتنتیجهزیراشوداستفادهکانکیمکمثلرنگیکشتمحیط‌هایازنباید.مثبتنترلک.گیردصورتمی‌شود،انجامتستاینکهزمانهروجدیدسریهربرایبایدکیفیکنترل:

Pseudomonas aeruginosaمنفیکنترلو:E. coli.استفادهنیکرومایاستیلمثلفلزیلوپازنبایداکسیدازدیسکیاصافیکاغذرویباکتریانتقالبرای

نتیجهاستممکنکهمی‌شود،ایجادآنرویبرآهناکسیدکمیمقدارلوپ،سوزاندناثربرزیراشود،.دهدکاذبمثبت

نماییدخودداریچشموپوستبامعرفتماسازتحریک،ایجاددلیلبه.

22

نکات

Dr A.MohammadiDr A.Mohammadi

زیرصورتبهکلیاشرشیاوسودوموناسباکتریازخالصکشتبارااکسیدازازمون:دهیدانجام

-2دهیدقرارصافیکاغذیکرویرااکسیدازمعرفازقطره3تا.

-(نباشدکرومونیکل)پالتینیکشتسوزنیاسواب،ایشیشهمیلهیکازاستفادهبادهیدقرارصافیکاغذرویراکلنیازمقداری

-درمثبتواکنشعنوانبهراثانیه10مدتدرتیرهابیبهمایلارغوانیرنگظهوربگیریدنظر

انجامبهنیاز،کنندمیایجادبنفشرنگثانیه60-10مدتدرکههاییباکتری.باشندینمانتروباکتریاسهخانوادهبهمتعلقاحتماالزیرا،دارندبیشتریهایتست

23

کار عملی

Dr A.MohammadiDr A.Mohammadi

اسیمپتنیتراتوپپتونگوشت،عصارهازغیراختصاصیمحیطیکبراثنیتراتمحیط(KNO3).است

شودجمع‌آوریتولیدیگازهرگونهتامی‌شوددادهقراربراثهردروارونهدرهاملولهیک.نمی‌شودیافتمحیطایندررنگیمعرفهیچافتراقی،محیط‌هایازبسیاریبرخالف.

شودمیانجامدرهاملولهدرگازحضوربرایچشمیبررسی:دنیتریفیکاسیونوجودبررسی‌طریقازیشناسای)نباشدتخمیرکنندهموردنظرباکتریوبودهگازدارایلولهایناگر.(شکل)

.استشدهانجامدنیتریفیکاسیونوکاملتست،،(تخمیرتست

کهچرانیستنندهتعیین‌کنیترات،احیایتستدرتخمیرکنندهباکترییکتوسطشدهتولیدگاز.نیستمشخصگازمنشأ

Dr A.Mohammadi

24احیای نیترات-2

Dr A.Mohammadi

25

دهدیدنیتریفیکاسیونخصوصدرشاهدیاگرو(Aمعرف)سولفانیلیکاسیدمعرفدونشود،نیتراتاحیایبررسیبرای(Bمعرف)آمیننفتیل

درتنیتری.می‌شودافزودهمحیطبهنیتریت،به(HNO2)نیتروزاسیدآبیمحیطدروجود،صورتهافزودمعرف‌هایبانیتروزاسید.می‌کندایجاددرمحلولرنگقرمزمادهیکودادهواکنششده.می‌کندتولیدآباحیاءاتنیتراحتماالنشود،ایجادرنگیتغییراگر

مثل)دارننیتروژترکیباتدیگربهاینکهیانشدهاینکهدلیلبه.است‌شدهاحیاء(مولکولینیتروژنچشمیصورتبهحالتدواینمیانتشخیصکمکدیگریتستازبایستیمی‌باشدغیرممکن

.شودگرفته

Dr A.Mohammadi

26

Dr A.Mohammadi

27هراتبراثبهرویفلزپودرازکمیمقدارافزودنهباستممکنهمچنانکه)موجودنیتراتگونه

احیاءنیتریتبه(باشدموجودKNO3صورت.شودنکردهاحیاءرانیتراتیون‌هایباکتری‌هااگر

دررویافزودنهنگامدرنیتراتلذاوباشندیتریتنبهرویتوسطبالفاصلهباشد،موجودمحیطوروزنیتاسیدواکنشبهتوجهباوشدهتبدیل

در.شدخواهدظاهرمحیطدرقرمزرنگمعرف‌ها،عدمازحاکیقرمزرنگظهورمواردی،چنینبودنیمنفومیکروارگانیسمتوسطنیتراتاحیایییرتغهیچرویافزودنبااگرامامی‌باشد؛تستاحیایآزمایشنتیجه‌ینشود،مشاهدهرنگی.می‌باشدمثبتنیترات

،NH3بهنیتراتاحیایدلیلبهمواقعیچنیندرNO،N2Oیچهنیتروژنیترکیباتدیگریاو

.نداردوجودمحیطدرنیتراتی

Dr A.Mohammadi

28

درجنآعددسهبرراتاریخوخودتاننامآزمایش،موردباکترییانمونهنام.کنیدآمادهبراثنیتراتحاویلولهسه.کنیدگذاریبرچسبکنترلراچهارملوله.کنید

کنیدنتلقیحراکنترللوله.کنیدتلقیحکلیاشرشیاوسودوموناسآزمونموردباکتری‌هایبارابراثلولهدو.

دمایدررالوله‌هاتمامºC2±35،کنیدگذاریگرمخانهساعت48الی24مدتبه.

بررسیرانتایجیر،تفسجدولکمکبا.کنیدثبتراآمدهدستبهنتایج.کنیدبررسیگازتولیدنظرازرالوله‌هاازیکهر.کنید

معرف‌هایاز(میلی‌لیتر5/0حدود)قطره8حباب،وجودعدمصورتدرAوBبهرالوله‌ها.کنیداضافهلوله‌هابهرا.دهیدقرارثابتمکانیدردقیقه10مدتبهرالوله‌هاآنگاه.شودمخلوطمحیطباخوبیبهمعرف‌هاتادهیدتکانآرامی

.بگذاریدکناررادرآمده‌اندقرمزرنگبهکهمثبتتستلوله‌های.کنیدثبتراخودمشاهدات

اپلیکاتور.استنیازکمیمقدارفقط)کنیداضافهرویپودرکمیمقدارنشدهدیدهآن‌هادررنگتغییرکهلوله‌هاییدرازپسراگ.(کنیدمنتقلموردنظرلوله‌هایدرونبهراآنبهشدهمتصلکممقادیروبردهفرورویپودردرونراچوبیبهرنگییرتغاگرامااستمثبتنیتراتاحیایبرایآزمایشینتیجهنشود،مشاهدهرنگیتغییرهیچ‌گونهدقیقه10

.استمنفیآزمایشینتیجهشود،مشاهدهقرمزیاصورتی

کنیدثبتنیزرامرحلهایننتایج.

Dr A.Mohammadi

29

کار عملی

TSIمحیط-3

واناییتاساسبرباکتری هاجداسازیبرایکهمی باشدغنیمحیطیکآگارآیرونشوگرتریپلمحیط.استشدهطراحیسولفوراحیانیزوساکاروزوالکتوزگلوکز،تخمیر

ونکربمنابععنوانبهحیوانیپروتئین هایحاویکشتمحیطاینکربوهیدرات،سهاینبرعالوه.اشدمی بشدهاکسیدسولفورمنابععنوانبهتیوسولفاتسدیموفروسسولفاتونیتروژن

اتسولفشکلبهآهنوردفنلترتیببهمحیطایندرهیدروژنسولفیدوpHتغییراندیکاتورهای.می باشندفروس

هلولانتهایدرزیادعمقهمراهبهکمضخامتباشیب دارآگارصورتبهمحیطایندرموجودآگار.می کندفراهمرابی هوازیوهوازیباکتری هایبرایرشدشرایطکهاست

بهراآنسطحسپسوعمقیصورتبهابتداکهاستصورتاینبهمحیطایندرباکتریتلقیح24تا18کربوهیدرات،تخمیرمنظوربهگذاریگرمخانهزمان.دهندمیکشتمارپیچخطیصورت.می باشدساعت48ازبیشترهیدروژنسولفیدواکنش هایبرایوساعت Agar

Dr A.Mohammadi

30

Dr A.Mohammadi

31

عالمتتفسیرنتیجه

A/Aمقعوشیب‌دارسطحدراسیدتجمعهمراهبهالکتوزوگلوکزتخمیرKIA--زردعمق/زردسطح

TSIA--زردعمق/زردسطحشیب‌دارحسطدراسیدتجمعهمراهبهساکاروزیا/والکتوزوگلوکزتخمیر

A/Aعمقو

زردعمق/قرمزسطحسطحدر)هوازیشرایطدرپروتئین‌ها.اسیدتولیدهمراهبهگلوکزتخمیر

K/A.می‌شوندتجزیه(reversion)قلیاییمحصوالتتولیدبا(شیب‌دار

قرمزعمق/قرمزسطح

با‌هوازیبیوهوازیشرایطدرپپتون.استنگرفتهصورتتخمیریهیچانوادهخازنظرموردباکتری.می‌شوندتجزیهقلیاییمحصوالتتولید

.نیستانتروباکتریاسهK/K

تغییربدونعمق/قرمزسطح

تولیدباهوازیشرایطدرپپتون.استنگرفتهصورتتخمیریهیچخانوادهازنظرموردباکتری.می‌شوندتجزیهقلیاییمحصوالت

.نیستانتروباکتریاسهK/NC

دونبعمق/تغییربدونشیب‌دارسطحتغییر

NC/NC.یستنانتروباکتریاسهخانوادهاز.می‌باشدآهستهرشددارایباکتری

آگاردرسیاهرسوب

درسیاهوبرسالکتوز،یاگلوکزتخمیرازاسیدی،شرایطدر).سولفوراحیاونامشخصسیاهرسوببه‌واسطهزردرنگاگرحتیمی‌شودایجادعمق.باشدمبهم

H2S

گازتولیدگارآشدنبلندیاآگاردرشکافایجاد

Dr A.Mohammadi

32

کشت سطحی و عمقی سودوموناس و اشرشیا

33کار عملی

Dr A.Mohammadi

روده‌ایهای¬نپاتوژوکلی‌فرمارگانیسم‌هایتشخیصبرایافتراقیوانتخابیمحیطیکآگارکانکیمک.است

استفادهتریاسهانتروباکخانوادهاعضایافتراقوجداسازیبرایالکتوزتخمیرقابلیتبهتوجهبامحیطایناز.می‌شود

ویولهکریستالبدونآگارکانگیمک:داردمختلفیانواعمحیطاین(CS)درمثبتگرمکوکسی‌هایکهیگرددرکه(پروتئوس)سوارمینگباکتری‌هایکنترلبرایCSدارایآگارکانگیمکومی‌کنندرشدآن

.می‌کنندایجادتداخلنتایج

افیلوکوک‌هااستوانتروکوک‌هابه‌ویژهمثبتگرمباکتری‌هایرشدازمانعویولهکریستالوصفراویامالح.می‌شوند

معرفعنوانبهردنوترالpH(8/6زیر)اسیدیمحیطدروبی‌رنگ(8/6باالی)قلیاییمحیطدر.می‌شوداستفادهافتراقیخصوصیاتدادننشانجهتویژگیاینازکهاستقرمزرنگ

Dr A.Mohammadi

34

MACمحیط کشت -4

Dr A.Mohammadi

35

کشت خطی متراکم سودوموناس و اشرشیا در پلیت1

36کار عملی

Dr A.Mohammadi

شودمتمایزساپیدرمیاستافیلوکوکوسازمی‌توانداستمثبتژالتینازکهاورئوساستافیلوکوکوس.خانواده،ایناعضایاکثردرحالی‌کههستندانتروباکتریاسهمثبتاعضایپروتئوسوسراشیاگونه‌هایهمچنینوجنسایناعضایدیگروسرئوسباسیلوسآنتراسیس،باسیلوس.می‌باشندمنفیژالتیناز

.هستندمثبتژالتینازپرفرنژنس،کلستریدیوموتتانیکلستریدیوم

ژالتینازشود،لقیحتعمقیصورتبهمثبتژالتینازباکترییکتوسطغذاییژالتینمحیطیککههنگامی.می‌شودمحیطشدنمایعموجبشدهترشح

حالاینبا.می‌کندکفایتمحیطشدنمایعمشاهدهبرایگرمخانه‌گذاریروزه7دورهیکمعموالروز7زاپسکهلوله‌هاییتمام.می‌پذیردصورتکندیبهباکتری‌هاازبرخیدرژالتینازیفعالیت.شوندگرمخانه‌گذاریدیگرروز7برایمجددابایستیهستند،منفیهمچنان

Dr A.Mohammadi

37

ینهیدرولیز ژالت-5

Gelatin liquefaction test

ینژالتمحیطجزئیاشکاالتازیکیºCدمایدرآنشدنذوبغذایی،

لوله‌هایباهمراهبنابراین؛است28درزنیکنترلنمونهبایستیتستºCدمای تاشودگرمخانه‌گذاری25هبمحیطشدنمایعکهشودتأیید.استنبودهگرمادلیل

Dr A.Mohammadi

38

Gelatin liquefaction testNutrient Gelatin

Dr A.Mohammadi

39

کشت سودوموناس و اشرشیابا انس

گرفتهاربککلستریدومجنساعضایافتراقمنظوربهابتدادرمیلکلیتموسمحیطه‌یخانوادلیتموس،احیادرروده‌ایباکتری‌هایتواناییاساسبرمحیطاین.شد¬می

بهمچنینهمحیطاین.می‌کندمتمایزمنفیگرمباسیل‌هایسایرازراانتروباکتریاسه.داردکاربرداسیدالکتیکباکتری‌هایدارینگهوکشتمنظور

انعقادوس،لیتماحیاالکتوز،تخمیر:می‌دهدرخمیلکلیتموسمحیطدرپایهواکنشچهارمی‌دهداننشرانتایجازتنوعیهمباواکنش‌هااینترکیب.کازئینهیدرولیزوکازئین

.می‌گیرندقراراستفادهموردهمازباکتری‌هاافتراقمنظوربهآن‌هاازکدامهرکه

Dr A.Mohammadi

40میلکلیتموس-6

Dr A.Mohammadi

41

Dr A.Mohammadi

42

Dr A.Mohammadi

43

عالمتتفسیرنتیجه

Aواکنش‌اسیدیرنگ‌صورتی

بخشردسفیدرنگشود،احیالیتموساگر)جامدوصورتیرنگحرکتبدونلخته؛(شدخواهدمشاهدهپایین‌تر

ACلخته‌ی‌اسید

Gگازشکاف‌در‌لخته

Sتخمیر‌طوفانیلخته‌شکسته‌و‌از‌هم‌جدا‌شده

Rاحیا‌لیتموس(بخش‌پایین‌تر‌محیط)رنگ‌سفید‌

Cدلمهباالدرستریخاکتاشفافمایعنیست؛صورتیکهجامدنیمهمحیط

Dهضموضوح‌محیط؛‌از‌دست‌دادن‌بدنه

Kواکنش‌قلیاییمحیط‌آبی‌یا‌نوار‌آبی‌در‌باال

NCهیچ‌کدام‌از‌واکنش‌های‌فوقبدون‌تغییر

.شوندظاهرترکیباتانواعدریکدیگربااستممکننتایجاین:تذکر

1)روزاریختوخودتاننامباکتری‌ها،نامبارالولهدو.کنیدتهیهمیلکلیتموسمحیطحاویلولهسه.کنیدنام‌گذاریکنترلعنوانبههملولهیکوکردهنام‌گذاریآزمایش

2)باکتری‌هایبارالولهدوKlebsiella pneumoniaeلوله‌یدر.کنیدتلقیحسودوموناسو.نشودانجامتلقیحیهیچکنترل

3)دمایدرهوازی،شرایطدرلوله‌هاتمام˚C 2 ± .شوندگذاریگرمخانهروز14-7مدتبه35

دومآزمایشگاه:

1)بارالوله‌هاتمامهکباشیدمطمئن.کنیدبررسیلختهتشکیلوگازتولیدرنگ،تغییرنظرازرالوله‌ها.کنیدمراجعهزیرجدولبهخودنتایجتفسیربرایوکرده‌ایدمقایسهکنترل

2)کنیدثبتنتایجدفتردرشدهآمادهجدولدرراخودنتایج.

میلک،لیتموسمحیطآمادهسازیهنگام•:نکتهpHتغییراتتااستضروری6/8±0/2نهاییpHشدهتلقیحشتکمحیط.باشدتشخیصقابللیتموسرنگتغییرطریقازباکتریاییمتابولیسمازحاصل..باشدارغوانی-آبییارنگکمبنفشرنگبهبایستی

Dr A.Mohammadi

44

کار عملی

آگارسودوموناسمحیطدرخطیکشت.

Dr A.Mohammadi

45

کشت در سودوموناس آگار-7

مراحل:در) OFکشتمحیطحاویآزمایشیلولهدو1 baseکشتراباکتری

بییطمحتامیکنیماضافهپارافینهامحیطازیکیرویسپسمیدهیم.شودهوازی

Dr A.Mohammadi

46

8-OF (Oxidative Fermentative)

:منبع

Dr A.Mohammadi 47

،3-1جلد،شناسیمیکروبآزمایشگاههایمهارت•:نگارش

(س)الزهرادانشگاهعلمیهیئتعضو-محمدیعلیدکتر•بهشتیشهیددانشگاه–میرشفیعیحمیدهدکتر•