Genome Medicine -...

Post on 27-Jul-2020

4 views 0 download

Transcript of Genome Medicine -...

This Provisional PDF corresponds to the article as it appeared upon acceptance. Copyedited andfully formatted PDF and full text (HTML) versions will be made available soon.

The membrane-spanning 4-domains, subfamily A (MS4A) gene cluster contains

a common variant associated with Alzheimer's Disease

Genome Medicine 2011, 3:33 doi:10.1186/gm249

Carmen Antunez (mcarmen.antunez@carm.es)Merce Boada (mbr@fundacioace.com)

Antonio Gonzalez-Perez (agonzalez@neocodex.es)Javier Gayan (jgayan@neocodex.es)

Reposo Ramirez-Lorca (rrl@neocodex.es)Juan Marin (juan.marin5@carm.es)

Isabel Hernandez (ihernandez@fundacioace.com)Concha Moreno-Rey (cmoreno@neocodex.es)Francisco Jesus Moron (fran@neocodex.es)

Jesus Lopez-Arrieta (jlopezar.hulp@salud.madrid.org)Ana Mauleon (amauleon@fundacioace.com)

Maitee Rosende-Roca (mrosende@fundacioace.com)Fuensanta Noguera-Perea (mariaf.noguera@carm.es)

Agustina Legaz-Garcia (agustina.legaz@carm.es)Laura Vivancos-Moreau (laura.vivancos@carm.es)

Juan Velasco (jvelasco@neocodex.es)Jose Miguel Carrasco (jmcarrasco@neocodex.es)Montserrat Alegret (malegret@fundacioace.com)

Martirio Antequera-Torres (mariam.antequera@carm.es)Salvadora Manzanares (salvi.manzanares@gmail.com)

Alejandro Romo (aromo@neocodex.es)Irene Blanca (iblanca@neocodex.es)

Susana Ruiz (sruiz@fundacioace.com)Anna Espinosa (aespinosa@fundacioace.com)

Sandra Castano (scllorente@gmail.com)Blanca Garcia (blagarto@hotmail.com)

Begona Martinez-Herrada (begona.martinez@carm.es)Georgina Vinyes (gvinyas@fundacioace.com)

Asuncion Lafuente (alafuente@fundacioace.com)James T Becker (BeckerJT@upmc.edu)

Jose Jorge Galan (jjgalan@neocodex.es)Manuel Serrano-Rios (mserrano.hcsc@salud.madrid.org)

Alzheimer's Disease Neuroimaging Initiative (adni) (aruiz@neocodex.es)Enrique Vazquez (evt@neocodex.es)

Lluis Tarraga (ltarraga@fundacioace.com)Maria Eugenia Saez (mesaez@neocodex.es)

Oscar L Lopez (lopezOL@upmc.edu)Luis Miguel Real (lmreal@neocodex.es)

Agustin Ruiz (aruiz@neocodex.es)

Genome Medicine

© 2011 Antunez et al. ; licensee BioMed Central Ltd.This is an open access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0),

which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.

ISSN 1756-994X

Article type Research

Submission date 23 April 2011

Acceptance date 31 May 2011

Publication date 31 May 2011

Article URL http://genomemedicine.com/content/3/5/33

This peer-reviewed article was published immediately upon acceptance. It can be downloaded,printed and distributed freely for any purposes (see copyright notice below).

Articles in Genome Medicine are listed in PubMed and archived at PubMed Central.

For information about publishing your research in Genome Medicine go to

http://genomemedicine.com/info/instructions/

Genome Medicine

© 2011 Antunez et al. ; licensee BioMed Central Ltd.This is an open access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0),

which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.

��

���� �������� ��� ��������� ��������� �� ������� ���� �������� ������ � ���������������������������������� ��!������

������ ��� ������ ������ ����������� ����� �� ��� ����� ��� !�"���� ��#� ��� $�%�&�� $��'�� �(���� �� !)�����'��� *&�+��� ,����� ��� ���-�� ������$�# �� .����&��� !�&�&� ���/ �� !�&�&� (/%� �������0�� �� ��)��/����������$�&����$������.)�&����1�2)������������2)&����(�2� �����'����(�)���3�"���&������)���!)��3���&�� ��!�&����2)��������&�� �����&��������2�����������������4)����5����&���6��"�������� ����&�����7�����$��� ��*��������� ��6)&���$)� �����8&%��&����6�������&��9��������������'������2�9������'� �,�������������2���3�#�&��� &)��/� (�:)������ !���&� 5� ���;��<�� !�&�� !��2�� ���� �� � ��)��� 6������$'�&=�� � -�����>&� ?�&��&��1�)�����2�2�*������"���8��4)��3� 4)� ��(�)'&�5����2�������'��8)2����6�� ��@&����(�(/%� <��()�&���2)���$��� ����2)&�'�$)� A�

�B�?�������C����C�"��&��#�,�&%�����3��2�����������D���������B�������������2�����)������&E����F��F�8����������6%���

�B�� -���)��.�)�������"��B�!)�������&���)����2���7��)�������)�������F�FF��6%����

�B������#��������:�.)����/��8B�*&���)�������G����1�)��������&�%������&���������������4)�&����6������������������� ��<F=F�H��6%���

�B�,�&%�����C�"��&������3�����I,�+�����*&���)�����$��������C�"��&�����)�J���������������B�K3,*$�C�L������������+���������������������6E1�F=�HF������#��������3����&��6%���

B�?�%��������:�6��)��)����������&��1������D��"��B��-����&�?��M���6�"������&E���FH���6%���

0B������#�C����C�"��&��#�,�&%�����(���� �����+��������&�����&���������0������������=F�0��6%���

<B�� -�����I&�?�&��&��$�&����-������B�?�%������&��:�1�)����2#���&#�-����#�����&#�-���2#B�C�"��&��#��:�����&+)�2-�6�-�����:�����������FF�(��-��%�6�����������&+)�2-������� ����� �0��CB6B�

=B�?��+���&�$�&����-�(�+������#�������������$�&����-�.�)�������C�"��&��#�,�&%�������'����6�������&��8�N��=F�F����������6%���

������+)�����4)���#�

A�����&%�����O���)� P������DB�&�

��

��������

"�#������

*���������������:#��"���������&&������������ -�����>&�?�&��&��K?L�M�����)�������2�����

M�����&&��������&�)�#�K�Q6L����-��6%��&-�%�%)�����B��

$�������

Q��2���#%������=����"��)��&�)&�2��-��::#�����D�1&%�*�� FR��-�%B���&��%����:���<�&%�������

?� %�����&� ��� =F�� ������&� M��-� );�M� ��2���"�� &���)&� :���� �-�� 6%��&-� 2������

%�%)������M�������)�������)���������&�)�#B�5�������&���-��%�M����:��-��&�)�#��M�����+����

�)����&)��&�M��-��-�&���:�:�)����-���%)+�����Q6�����&��&�+#��%%�#�2����������4)����#��������

:�����&������-��&������%)���������-��&�M-��-�M�����-�����# ���M��-���2��+���������Q6B�

� ��%�������� &��%��� M��-� ��FF� &%������� ?� %�����&� ��� ��F�� ������&� M�&� 2���#%��� ���

��:�����)���Q6�:���2&B��

%�������

��������#&�&��:��)�������������%�������%������������&��&�����M���)&������:�������"���

2�����M���� &�2�:����� �&&�������� �:� ?�M��-����+����&%��2� �������&� &)+:����#� �

K����L� 2��� ��)&���� K�&� 0�HHF�� �S�B�F8����� ���&� ������ K@$LSFB==�� �B�BH TUFB= �FBH�V��

S�F��=����&�&�����������������&LB��

&���������

@)�� ��&)��&�)���&����� �-�� ��%��������:� ����������� �::���&� ���+��2��Q6�����&��&� ���

�&������2�����������:������%��D���&��&�&B�

��

'�������O� �Q6�� 61��� �&&�������� &�)���&�� � -�����>&� ?�&��&��� �����)���� �%��������2#��

�)��2�����&

��

"�#������

� -�����>&���&��&��K?L��&��-����&���������)����2������"��%��-���2#��::�����2�-)��&B�

5-�� %��"������ �:� ?� �&� ��%���#� 2��M�2� �)�� ��� �� ����)�)&� �����&�� �� ��:�� �D%�����#� ��

��"���%��� ��)����&U�VB� ?� �&� ��&������� �� ���%��D� �)����2������"�� ��&������ M-��-�

�����&���%��2��&&�"���)����� ��&&� �� �-��+����� ��)&�2�����"�&����2���2���"��%-���#%���

M-��-���&�M��-��-������-��:��-��%�����B���

��-�)2-�?�������2#��&�%����#�)���&������2������:�����&�&�������%��#���%�"������������?B�*�

:������-����2��&�������2��)���%���:)���%���������)�����&��������������������-�"��

+��� ��&���+��� :��� �������� ?U���VB� � �����&&��#� ��&)::������ ������ ������� ����

����� ���&���%�� �&� ����&�� )�"��&���#� �&&�������� M��-� ���������� ?U VB� � � *� &%���� �:�

��&����-� �::���&� �� ?� 2�����&�� )���� "��#� ������#�� �� ��-��� 2������ ��&;� :������ -�&� +���

��&�&����#� �&&�������� ��� ?� %-���#%�B� ,�M�"���� ������ ��"���&� �� 2����� M����

�&&�������� &�)�#� K�Q6L� ���-�4)�&� -�"�� %��������� �-�� �&������� �:� :�)�� )�����"��&����

������Q6� &�2�:����� K%W D8�=L� 2������ ���;��&� �&&�������� ��� ?� M-��-� ���� �������� ����

� ������� �������������2��&U0�=VB�1����-�����&)�������"���:����2������&�)���&�-�&�+���

��&�&����#�"���������:���?���-����-���-�&������B�

��

$�������

���������������������

*� ������ ��� �����:#� �M�?� �&&�������� 61�&��M����&�2��� �� �M� ��&����������Q6� �� �-��

6%��&-� %�%)�����B� Q�� 2���#%��� ���=� ���"��)��&� )&�2� ::#�����D� 1&%� *� � FR� �-�%� �&�

%��"��)&�#� ��&���+��UHVB� � � &��%��� �:� ��<� &%������� ?� %�����&� ���2�&��� �&� %�&&�+��� ���

%��+�+���?� ������������M��-�1*1�?6�?$?���������U�FV�+#��)����2�&�&���� �-��3��2�����

���D����C�"��&��#�,�&%��������)�����K6%��L����=F��������&�M��-�);�M���2���"��&���)&�

:���� �-�� 6%��&-� 2������ %�%)������ M���� ���)���� �� �)�� ������� &�)�#B� ���� K6?L� �2�� ���

����)������ M���� <HB�� K0B=L� #���&� �� ��&�&� ��� �BF� K=BHL� �� ������&B� 5-�� �����&%���2�

)�+���KTL��:�:������&��%��&�M������=�K<�B TL�������=�K� B�TL���&%����"��#B�����K6?L��2��

���?����2�&�&�����&�&�M�&�<0B��K0BHL�#���&B�*:��������&���M�&��+������:�������-�+�����

����B� *$�� �%%��"��� :��� �-�&� ��&����-� M�&� �+������ :���� �-�� ��2����� ���&��#� �:� ,����-�

K���)����� )�/���� ��� �)����L� ��� ��:���&� ��� �-�� Q����� �������� &&�������>&�

?�����������:�,��&�;�B�

5�� �����&���-��%�M����:��)��&�)�#�����������&�����2�������::���&��M�����+�����)����&)��&�

M��-� �-�&���:� :�)����-���%)+�����Q6U�����V� ��Q6�����&��&� �� �-�����#&�&� ���)��O� �L� �-��

� -�����I&� ?�&��&�� 1�)�����2�2� *������"�� K?1*L� ��2��)����� &�)�#� M-��-� �&� ������ ���

�����:#�2�+�����;��&��:�?�+#�)&�2�*��)����0�FX)���%���:��������D��&�"��1�)�����2�2�

���-�4)�&B���������:��=<�����#�?���&�&������H�������#�������&�M�����������#������:�������+��

���)�������-�&�&�)�#U� VB�?1*�?����)&������-��%��%��������:��-�&���������M�����+������:����

�-��� -�����I&�?�&��&��1�)�����2�2�*������"��K?1*L�����+�&�U�0V�B�5-��?1*�M�&���)�-���

���FF��+#��-��1�������*&���)�����2�2�K1*L���-��1�������*&���)����:������������*��2�2�

�������2�����2� K1*�*�L�� �-��.�������?�)2�����&������� K.?L��%��"����%-������)������

���%���&� ��� ��%��:��� ��2�� ����&�� �&� �� Y0F��������� �#���� %)+����%��"���� %�����&-�%B�

5-��%�����#�2�����:�?1*�-�&�+��������&��M-��-���&��������2�������&��������2�2�K�$*L��

%�&����� ���&&��� ����2��%-#� K�85L�� ��� ��-��� +����2����� ���;��&� ���� �������� ��� �-��

%��2��&&��� �:� ����� ��2���"�� ��%������� K��*L� ��� ����#� � -�����I&� ��&��&�� K?LB�

?������������:�&�&���"�����&%���:������;��&��:�"��#�����#�?�%��2��&&����&���������������

��&����-��&�����������&������"���%��M���������&������������-�����::����"��&&���&�M����

�&� ��&&�� �-�� ����� ��� ��&�� �:� �������� �����&B� 5-�� �����%��� *"�&��2����� �:� �-�&� �������"�� �&�

���-����QB�Q�������?��3������������������C�"��&��#��:�����:�������6��.����&��B�?1*�

�&��-����&)����:��::���&��:���#����� �"�&��2����&�:������+�������2���:���������� �&���)���&�

���%��"�������%������&�����&)+7���&�-�"��+�������)�����:�����"��� F�&���&�����&&��-��CB6B�

��������B�5-���������2�����:�?1*�M�&��������)���=FF���)��&���2�&� ����HF�����%������%������

�-�� ��&����-� �� �%%��D������#� �FF� ��2���"��#� ������ ������ ���"��)��&� ��� +�� :����M��� :��� ��

#���&�� �FF� %��%���M��-���*� ��� +�� :����M��� :����� #���&� ��� �FF� %��%���M��-� ����#� ?� ��� +��

:����M���:�����#���&BZ�.���)%����������:���������"�&���?1*>&�M�+%�2�U�0V�B�+L���?�&�)�#�

M-��-����)��&�=F����&�&������2��-��1*1�?6�?$?����?6��*3����������:���%��+�+���?����

<<0��������&)+7���&�M��-�)��:����#�-�&���#��:����������-���M����2���#%���)&�2�::#�����D�

FFR�����-�%����#�&���U�����<VB��L�5-��1�������*&���)����:�2�2�K1*L����������&����)��

:���(����@&���� -�����>&�?�&��&��6�)�#B�?����:�����-�&�&�)�#����2����#����)������H= ���&�&�

��� ��F H� ������&� 2���#%���M��-� *��)���� ,)��� 0�FX)��� %���:���� U��VB� ,�M�"��� )&�2�

:����#� ����&�%��"�����M���D��)�������� �������� ������&� ���;�%����#���� ��&��%��� :����#B��

������ �:� ��F<<� ��&�&� ��� =<0� )�������� ������&�M���� ���2�+��� :��� �)�� &�)�#B� �L� 5�81��Q6�

&�)�#� ���)���� 0��� (@?� ��&�&� ��� �F�� ������&� :���� �� �)��%��-���2����� ��-���� ��� �H<�

(@?� ��&�&� ��� ���� ������&� :���� �� �������� ��-���� ���� 2���#%��� M��-� ::������D� FFR�

����-�%����#�&���U��VB�

22��2�����������"����+���:����,�����������U<V����,)������BU�=V�M������&��)&����&�[��&�����\�

��%��������&�)���&B�"����+��������:����,������������ ���)�����������@$��&������&����%�"��)�&�

:����-��<�����%�&�2��&�:�����-����&�)�#��:���H�����&�&����<�=�=�������&B�����%��-�&�"����&��

�:� �������� @$� �&������&� ��� %�"��)�&� :��� � ��FF�� 61�&� M�&� �+������ :���� ,)� ��� ��B�

&)%%�������#���������B�5-�&������������&%���������-���Q6���&���+������-������)&���%��

�-������)��&���F�����&�&�������=0�������&B�

.����#�����%��������&��%���M��-����FF�&%�������?�%�����&����2�&����&�%�&&�+������%��+�+���

?� ������������M��-�1*1�?6�?$?����������+#��)����2�&�&����.)����/��8� �����������

K6%��L� ���,�&%����� �������+����� K������L�� ���2�M��-����F�� 2������ %�%)������ ������&�

M�&�)&��B�����K6?L��2���������)���������-�&�&��%���M����=�BF�K<B<L�#���&�����&�&���� �B<�

K��B�L���������&B�5-�������&%���2�)�+���KTL��:�:������&��%��&�M������ H�K<�BFTL�����

�� �F�K0<B�TL���&%����"��#B�����K6?L��2�����?����2�&�&�M�&�<<BH�K<B0L�#���&B�

������ ��!�"��#��$#��%��&�����"���'��

Q�� %��:������ �� �D��&�"�� 4)����#� ������� �� �-�� :�"�� ����&��&� M��-� ���"��)��� 2���#%�&�

���)���� �� �-�� ���#&�&� K�)������ ?1*�� ��?�� 1*�� 5�81L� )&�2� ::#�����D� ����#%�2�

��&����&�:�M����������;U�HVB�.����)��2���#%���&��%��&����#����"��)��&�M��-���&��%��������

������+�"��H�T�M��������������������M��-��-����#�&���$�+)&��(�����������M��-��������+�&�

0�

K�$(��L���&�������2����-������M��-���:�)���%��������&��M-��-� ��%��"�&����������&� ����&��

&��%��&B�6��:���%������&�D�M�&����%����� ��� &�D��&&�2���+#��-����&����]�2���#%�&�����

��&���%����&� M���� ��&��"��� ��� &��%��&� ����"��B� .��� ���� ����&��&�� �-�� %��2���� ���%-�����

$�%��&������� �:� $������&-�%&� K�$$LU�FV� M�&� )&��� ��� �-��;� &��%��� ��������&&� ��� ���

��������%��������&��%�����D)%&���)%�������&���������������&B�61�&�M����&�����������-�"��

�������������+�"��H T�K�����-���&�����������������+����2��)%��M��-�����-�����&��L�������

������������:��4)��#��+�"���T�K�2��������-���&�����������������+����2��)%��M��-�����-�

����&��LB� 61�&� �-��� ��"������ 2��&&�#� :���� ,���#�Q��+��2� �4)���+��)�� K%�"��)�W�F��L� ��

�������&��%��&�M������&������"��B�Q����&������"���61�&�M��-���&�2�:�����#���::����������

�:���&&�2�&&�K%�"��)�W D�F��L�+��M�����&������������&��%��&�M��-�����-�����&��B�

5�� �&)��� ���� 61�&� ����&&� ���� ����&��&�M���� �#%��� �������2� ��� �-�� &����?1� &������ ���-�

����&���M�&� ������ ��� )&�2�,�%��%�%-�&���� ����� �&� �-�� ��:������ &��B�Q�����2������-�

&�)�#�M��-��-��,�%��%��8C�&��%��&�������%�����2���#%������&B�61������&�M����:��%%���K�:�

�#%��� �� �%%�&���� &����L� ��� ����"��� K�:� &����� ��)��� ��� +�� )��)+����#� �&&�2��L� �&�

���&&��#B�Q����&������"���61�&��-���M����&�2�:�����#��&&��������M��-�[&�)�#�&���)&\B�5-���

�&��M�� ��+����� ������� ���"��)��&� :���� ���-� &�)�#� �&� ��&�&� ���,�%��%� �8C� ���"��)��&� �&�

������&���������"���61�&�M��-�%�"��)�&�&��������-���F�0�������&��:����&&�������B�

�$!�(!�����#��#������%��&�����"�!�'��

�����%������%���&����#&�&�M�&����������)��M��-�8*�816@.5�U������V�����"��)����%�%)������

����D�)��� M��-�� ���-� %�%)������� ��� ��� �����:#� ���"��)��&� �&� �)�����&B� Q�� ��� �-��

6�$5���%��2����M��-���:�)���%��������&���D��)��2��-����&����]����;��&B�5������� ��

�-�� �::���� �:� (?� �� �-�� ���#&�&��M�� ��&�� ��&�� �D��)�������;��&� �� -�2-� (?� KM��-� �-�� ���%�

%���M�&�� �%���� �� ���;L� ��� ��2���2�� (?� ��2��&� ��%������ %��"��)&�#� ��� ��������� �� �)��

%�%)�����B� *��"��)��&� �����:�����&��)�����&�K0�&���������"�����&������������2�����:��-��

��%� ���%����%��� ���%���&L�M���� ����"��� :�������� &)+&�4)��� ���#&�&B� ������#&�&�M�&�

�)� M��-�� ���-� ����&���� ��� ��&�� ��2��-��� M��-� ��-��� ,�%��%� �)��%��� ��� M����M����

%�%)�����&��������������"��)��&��:���::�������-������&B�

��� ���!#��

6������::�����%���:���&�M����)&������-��:�"���Q6����# ����M����%)����2���#%�&�)&�2�

,�%��%�%-�&�����8C�:�)���&�KS0FL��&���:������%����)&�2��M����::��������-�����2��&O�

���;� U�HV�������-U��VB�������M���� ��%)������M�&����������)��M��-�%��;�����2���#%��

<�

����&�M��-�-�2-�4)����#�&����&�M����)&��� ��&)+&�4)����&&�����������#&�&B���&���&&��������

��&)��&�M������&����%)����M��-����-��BF�������:�����-����&�&���#��:���%)����2���#%�&B�

:���������-�&��4)����#�����������%��%������#�&��%&���-���)�����&�)�#�;�%����F�����H�61�&�:���

��H� ��&�&� ��� <0H� ������&^� �-�� ?1*� ����&��� ;�%�� ��<H��=H�� 61�&� :��� �0�� ��&�&� ��� �H��

������&^� �-����?�����&��� ;�%�� ����0� <<� 61�&� :��� <=�� ��&�&� ���<<�� ������&^� �-��1*�

����&���;�%����<�=�00��61�&�:���H=<���&�&����=F��������&B^�����-��5�81�����&�����������

����<� 0=�61�&� ��< <���&�&�����0=�������&B�� �������:�0H0�<F<�61�&�M���������� �������

�Q6�&�)���&�M-����&���FH=��= ������H ��<H<�61�&�M�������������������&��:�)������M��

&�)���&���&%����"��#B�

����!(��!#��)��#�"�!�)�

5-���6����)&����%��#���%-�&���&� 0�HHF�M�&�2���#%��������FF���&�&�������F��������&�

:�����-��6%��&-�%�%)�������)&�2�$�����������$���)%�������.�)���&�����$�&�����8��2#�

5��&:���K.$85LB�������&����%��+�&���%��#���:����-�&��2���#%�2�%�������&�����&)����� ���

����������� :�������5�+���6�B�5-��%�������&�M����%��:������ �� �-��(�2-��#�����_��=F�6#&����

�&��)����K$��-��?��2�&���&LB�����:�#����$��������&�M����%��:����������:����"��)����:��F�

`��)&�2��F�2��:�2������?1��FB �`���:����-���%��:�������%�������FB�F�`�����-����������

%��+��������`(��:�(��=F�����#%�2���&����K ]��$��-��?��2�&���&�������#LB�Q��)&�����

�����������)������&��%��:�H a��:��� �����:����M���+#�� ��#���&��:�H a��:����F�&���� a��:����F�

&�������<�a��:����F�&��B������2��)�"�&�M����H b��:��������&�K���%�2�������B��a�E&L��0�a��:���

�F�&�K���%�2�������:��a�E&L���Fb��:����F�&�K���%�2�������:��a�E&L�����0=b��:���F�&K���%�2�

������:�FB� a�E&LB�*��-����&��&��%��:����-������2��)�"���������)�)&�:�)������������2�&����M�&�

%��:������+#��-��&#&������������4)�&�������2�&����%���a�B������2�%��;&����2���#%������&�

M�����+������+#�)&�2��-��(�2-��#����_�=F�&�:�M����K$��-�LB� *������������:����2���#%�&�

&�������� ��$� ��%����&� M���� +�������������#� &�4)����� )&�2� &������� ��%�����#�

�������%-���&�&����-�4)�&B�

���#(!��!#������"�!��

C��7)&����&�2������)&���������K���:L��&&�����������#&�&�M��-�����-����%�����&��%�������

�:��-�����+����&��%����M�&����������)��)&�2����;B�Q�����+���������:�����-�&��:�"���Q6�

����&��&�)&�2���������#&�&�����������;�&������2���#��-�&�����;��&����������������&��:�)��

�:� �-�&�� &�)���&� K��FH=��= � 61�&LB� 5-�� ��&�� %����&�2� ��� ��&�&���� ��&)��&� :���� �-�&��

&�2������)&����#&�&�M�������%���������-���22��2������&������&��"����+���:����,������������

=�

U<V���,)� ��� ��U�=VB� .����#� �� ��%�������� &��%��� �:� ���FF� ��&�&� ������F�� ������&� :���� �-��

6%��&-�%�%)������M�&�)&������"���������&� 0�HHFB���-�)2-��-��������&)��&��:��-��&�)�#�����

)��7)&�����&������&����%�"��)�&�:�����-������������&����)���"���������2�&������2��&&��������&�

M������&��)&��������7)&���&������&�:����-�����+����6%��&-�&��%��&�K�)������Q6�����-��

$�%����L�+#��2���&�D������@8�8c�&���)&�)&�2�(�2�&�����%���������;B��:������������#&�&����

.���&�� %���� :������;��� �&� 0�HHF� ���)��2� �-�� :�"�� ���2���� �Q6�� %�)&� �-�� �M�� [�� &�����\�

��%����������-��:������%������M�&�����M��-�6������FBF�K�����2��6�������5]L������������B�

H�

%���������!���������

5-����������#&�&��:��-��:�"���Q6�K�)������?1*����?��1*�����5�81L����)������������

�:���FFH���&�&������FF0�������&B���������:�0H0�<F<�61�&�M������������������Q6�M-����&�

��FH=��= �61�&�M�������������������&��:�)��&�)���&B�.�2)�����&-�M&�����-�����%����M��-�

�-����&)��&��:��-�&��Q6���������#&�&B�Q�������:����&�"�����&�2��&����&���:��-���:�)����

%��"��)&�#���%������?������ K��������� :�������5�+���6�LB�5-����#��Q6�&�2�:�������&)��� K%S�

�B<�D�F�� L������&%���������&�F�F��<�����-����&�����H�������;�����������<=;+�)%&������

:���� �-�� ����� ���)&B� @�-��� &)22�&��"�� &�2��&� M���� �������� �� �-����&���� �� K�&< 0� �=�

��������� ;+���M&������:�����-���������)&L���-����&�������K�&< 0� �=�����&����<�=�L��

����)���%��� ��2��&�M��-�� �-����&���� ��B� *� :����� ���2� �-�� ��%� �FF����;��&�� � �M����

�������� �� �-�B� ��� K��������� :���� ��� .�2)��� 6�LB� �-�B� ��� �����&� &�"����� ���%�����

&)22�&��"�� �&&�������� &�2��&� ���)��2� �-�� *��� ���)&� K%��;� �&&�������� ��� �&�F=�=�� ��

%S�BF�8� L�������� 2��� :����#� ��)&���� K%��;� �&&�������� ��� �&<0�0����� %S B�=8�0L�� ����

K�&� F��=��%S�B<H8�0L����M&���������� ��K�&�H�� =��%S�B F8��L�������M&������%)����"��

2����$1���F�=�F �K�&<H� F���%S<B�<8� LB�

Q���-������)�������[��&�����\���%���������:��)����&)��&�)&�2��22��2����������:����,������

��� ��� KM-��-� ���)��&� �-�� ��%� <��� &�2��&� :���� �-���� &�)�#�� ��#� �:� �-��� ��&�� �������� ��

�-����&���� ��L� ��� ,)� ��� ��� K�� ���%��-�&�"�� ��;� �:� � ��FF�� 61�&� 2���#%��� �� �-����

�Q6LU<���=VB���-�)2-���������+#��-��)�+����:�61�&��"����+���:�����-�&��&�)���&���-���M�

��������#&�&� #������� 4)���� �����&��2� ��&)��&� M��-� �� ������ �:� �<����;��&� �+�"�� �-�� �Q6�

&�2�:��������"���K���������:�������5�+���6�LB�6�"�����&�2��&�+���2������;�M�?�����O������

M��-� ��2-�� 61�&������ �� K�-���� 61�6�� �-����&�� &�2�:����� +��2� �& �0=���� %S�BH08�HL��� ��

K�& 0H�����%S�B��8�=L���������K�&<���<���%S�B��8�HLB���&����%�������M��:�)��:�)��61�&�

�-���+���2��������2������-����&������4������%��"��)&�#���%�������&��Q6�&�2�:�����:���

?B�5-���M�%��;�:���?��&���������M��-���-���������)&��������-����&��&�2�:�����61�&�M�&�

�&� 0�HHF�K@$O�FB=<^�%S��BF�8��FLB��

6����M��-�"��%��"��)&�#�%)+��&-�����%��������&�)���&��:�������� ������� ���������&�2��&�

�� �-��6%��&-�%�%)�����U=����V��M���������� ��� ��%���������#� �&� 0�HHF� �����FF���&�&����

���F��������&� :�����-��6%��&-�%�%)�����B� *�%������#�� �-����&)����:� �-�&��M� ���%�����

��%�����M�&�:)��#���&�&����#�����2���&�2�:�����@$��:�FBHF�KH T�*OFB=��FBH=^�%SBF�LB�?��������

��&)��&� :��� �-�� ���2���� 6%��&-� �Q6� ����&���� 6%��&-� ��%����� &��%���� ��� �-�� ���+����

6%��&-�����&��� ������&���+��� ����������� :���� �� 5�+��� 6�B�Q�� :���������)���"������� ��2�&����

�F�

��2��&&��������� :��� �-�� ���+���� 6%��&-� &��%��� �� M-��-� M�� ��7)&���� :��� �2��� &�D� ���

����B�5-����7)&����@$��&�������M�&�"���)���#�)�-�2���K@$�FB=<^�H T�*O�FB<���BF�^�%SFB��L�

&)22�&��2��-����-���+&��"����::�����&�����:�)�����+#��2���&�D�����@8����)��&����&B�

.����#�����+��2��-�&��M���%�������� ����:������������#&�&���2��-���M��-��-��:�"�����2����

�Q6���� �-�� �M��[�� &�����\� ��%�������&�#����&���@$��:�FB==� KH T�*�FB= �FBH�^�%S�B�8���L�

M-��-��D����&��-������%�����-��&-����:�����&��2��)���%������%���&�&�K�B�B��%W 8�=LB���������:�

�F��=�� ��&�&� ��� ������� ������&� ���� ���)���� �� �-�&� ���+���� ���#&�&B� 5-����2��)����:�

�::�����&���&�&��������&&�&�)���&��M��-���������&������&�+��M���FB<�����FBH��K6���.�2)����LB���

@)�� ��&)��&�%���� ��� �-���D�&������:� ���M�?� ���)&� ��������M��-������� ��)&���� ��� ��4��B�

�����������#���)��2��-�����:��2��:��-�&���)&���%���M�����%������������&�-�"������2���

����-�2�&�����������)&��&���2����2��������)&�����"��"�������?U� ���0VB���������#���-��

61�����;��&���&���+������-���-����&�)���&�������::������+)���-�#�������#��=��=<��+%��%���B�

,�M�"�����)��&�2����&����&�������&�H�=H���K��%������+#�1�7������B���F��LU�<V�M-��-��&���#�H�;+�

���������������&� 0�HHFB��*��#���&���%��;����;��&��+&��"������-�&��&�)���&���������������

�-��&����-�%���#%���+���;����-�"������������::����&� ��������������M-��-�&���2�#�&)22�&��

�-����-�#���������;�2��-��&����:)�������"�����B��

*�� �&� ��%������ ��� ������ �-��� �-���� �D�&�&� &��%��2� �"����%%�2� +��M��� �-�&�� &�)���&B�

1���-���&&����� ���&���-����:)�������&��&��������� ���)��&�)�#�K���%��&�2�<=FH� ���"��)��&��

��TL� ��� ��� �"����%� M��-� %��"��)&� %)+��&-��� M��;&B� *�%������#�� ��������#&�&� )&�2� ��#�

�-�&�� ���"����%%�2� &��%��&� ��&�� �������� �� &�2�:����� �&&�������� ��� �-������� ��2���

@$SF�=H<� KH T�*� F�=�=�� F�H0�^� %SFBFF�=LB� 5-���:����� �)�� &�)�#� ��)��� +�� ��&������� ��

���%����� ��%�������� �:� �-�� �"��"����� �:� �-�� ������ 2��� ��)&���� �� ?B� 5-��

���)������ �:� �-���� ���%����� &�)���&� ����-�2� �-�� &���� ����)&��� +#� ��%��#�2�

��::����� 61�� %���:���&�� ��%)������ ���-��&� ��� ����&��&� )���&����&� �-�� &���2�-� ���

��&�&���#� �:� �-�&� �M�?� ���)&�� ��� ���&�� �� 8)��%��� %�%)�����&B� � .)��-��� &�)���&�M���� +��

���&&��#���������+��������&��"��"�������?�������2#�����-�����-���2��)%&B�

5-�������:����#����)��&�������&���0�%�����2)�&B�8��-�2���-�&�+���%��+�+�#�2��������+#�

�� ���&����� ��&����� �:� �����-����&����� �)%�������&� �)��2� "����+����� �"��)���B��

C:���)����#���-�&�2���:����#��&�%����#��-�������� ������-�)2-�������������)��#�-�&�������#�

+��� &-�M� :��� &�"����� ���+��&� �-�&� ��)&����� ���)��2� ����� K�?�FL�� ����� ���

������U�=VB��,�M�"�����-��:)�������-)��&��:���#���-������+��&������&��+&�)������

���

�������2�������"��"������:������:����#����+��&��&�����-�������%����%�����&�����

���)����&&)�&��&�&)&%�����U�=VB�

5-���&� 0�HHF����;�����%&�+��M�����������������������+��&��:��-����)&���B�,�M�"����

M���������������������� (?�-�%���#%��+���;� &%��2��0�;+� �-��� ���%��&�&� �-�������+��&��:�

�-�� :����#� K������ ����+��� �����L� ��� �-�� ��%� :�)�� ������Q6� &�2�:����� ���;��&�

K��������� :���� ��� 5�+��� 6�L� B�Q��-� �-�� �"����+��� ����� ��� �&� ��::��)��� ��� ��������� �-�� %����&��

���������:� �-�� :)�������"�������&&��������M��-�?������"��M-��-�2�����)���+�� �-��+�&��

��������� :��� ?� ������2#B� .)��-�������� ��� ��#� +�� �-�� ��&�� �-��� �� :)������� �#�,(#�!�)�

"������M��-���-����)&������2-��+��������2��+#���&���2)��������-��:)������:���-������+��&�

�:� �-�� ��)&���� &��)�����)&�#B� $��&�4)���2� ��� :)������� &�)���&� �:� ����������)�����&�

��)���-��%���&��"���-�&�4)�&���B��

5-����&�������������2���M��-���-�����������+���;�������������&���%�������-���+��&����

�-��.����2����:����)�2��+)��&��%&���B�������&���&���&%�&�+���:����������2��-�������2���

��&%�&�� +#� +���2� �:� �����2�� ��� ����%����+�)�� *28� �-��� ����&� ��� ����� ����"����� ��� �-��

�����&�� �:� ��������&� K&)�-� �&� -�&�����LB� 5-�&� &�2��� ��&����� �&� ��&%�&�+��� :��� �-��

���:�&�����&� �:� �����2#U�HVB� *������ %��#���%-�&�&� M��-�� �-�� ����� 2��� -�"�� +���

�&&�������� M��-� &)&��%��+����#� ��� �&%������������� �&�-��U�FV�� ��� &���� �%��������2�����

&�)���&�&)22�&������;�+��M����&�-������?�U��V. ���&�4)���#����-#%��-���������;�+��M���

����� ��� ?�M�)��� ���� �M� �"������ �� :�"��� �:� �-�� ?� �)���:��������#� -#%��-�&�&��

&)22�&��2��������:����-�����)��&#&�������-��%��-�2��&�&��:�?B�5-����&���:�2��&�M��-��

�-�� ��������� +���;� ���� %����#� �-�������� ��� ��� ��� �&� ��� ��&#� ��� ��������� �� %��)&�+���

-#%��-�&�&�:����-���#��B��

���

&����������

*� &)����#�� M�� ��%���� �� �M� 2������ ���)&� �&&��������M��-� ?B� @)��M��;� )���&����&� �-��

��%��������:��-�����+�������:��M��Q6������M��-��D�&��2�����&��&� ����������� �����:#�

�"��� &�2��&� �-��� ��� ��#� ����2�� �-��)2-� ��������#&�&B� Q�� ���� ��:����� �-��� �-��

�����&�2�&��%���&� ���:��Q6���-��2��M�2�)�+����:�%)+����#��"����+����Q6�����&��&���-��

-�2-������;��� ��&��#� ��� �-�� ��"���%�����:� �"��� &�����2��&� :����Q6������ ���#&�&�M����

-��%� �&������ �"��� 2������ &�2��&� �������� ��� ?� �� �-�� :)�)��� ��� ��2-�� �����+)��� ���

������&�2��-����&&�2�%������:�-�����+����#����)����2������"����&�����&B�

���

������������

�8O� � -������ ������ 8�)�������^� ?O� � -�����>&� ?�&��&�^� ?1*O� � -�����I&� ?�&��&��

1�)�����2�2� *������"�^��@8O�%���%�%������8�2��^���O��#���������)�&����������2��^�

�*1�O�����2�2� ���2��������2��^��%O�+�&��%���^��$(��O���#�&���$�+)&��(�����������M��-�

�������+�&���&�������2����-�^��8C�,�%��%O�C��-���&����&�M��-����&��#�:�������-������

M�&���� 8)��%�^� �-�O� �-����&���^� �*O� ��:������ *���"��^� �(CO� ��)&����� 2��^� �$�O�

���%������ ���%���� K�+E�+L� ����%���� �� 2��^� ?:O� ?�2���� �:� .������^� .�O� ��&����

:������� �:� ���)�2��+)��&^� .?O� 5-�� .���� ��� ?�)2� ����&������^� .$85O� .�)���&�����

$�&�����8��2#�5��&:��^����O��$����&&��������+���2�%�������� 2��^���?O��)����

6���� �����+�����"�� 6�)�#� :��� ����#%���-���#%�� &&�������&� �� � -�����I&� ��&��&�� ���

(�2��)����� :����M�)%� �:� ����#%���-���#%�� &&�������&� �� � -�����I&� ��&��&�� ���

1�)�����2�2� ���%���� �:� ����#%���-���#%��&&�������&� �� � -�����I&� ��&��&�^��$$O�

���%-����� $�%��&������� �:� $������&-�%&^� �Q6O� ������Q���� &&�������� 6�)�#^� *��O�

-���2��+��� 2����� �� 2��^� *$�O� *&���)������ $�"��M� �����^� R+O� R���+�&�^� (?O� (�;�2��

?�&�4)���+��)�^� (@?O� (���� @&��� � -�����>&� ?�&��&�^� �+O� ��2�+�&�^� ��*O� ����� ��2���"��

��%������^� �?O� �������� ?�����^� �$*O� ��2����� ��&����� ���2�2^� �$1O� ��&&�2���

��+�)������ ����^� �6�O� ���+����&%��2� �������&�� &)+:����#� ^� �6��O� ���+����

&%��2� �������&�� &)+:����#������+��� �� 2��^��6��O����+����&%��2� �������&��

&)+:����#������+�����2��^��6��O����+����&%��2��������&��&)+:����#������+���

�� 2��^��6���O����+����&%��2� �������&�� &)+:����#� �� ���+��� ��� 2��^��6��8O�

���+����&%��2� �������&�� &)+:����#� �� ���+��� �8� 2��^� 1*O� 1������� *&���)��� ��

2�2^� 1*�*�O� 1������� *&���)��� �:� ����������� *��2�2� ��� ����2�����2^� 1*1�?6�?$?O�

1������� *&���)��� �:� 1�)����2����� ��� ����)�����"�� ?�&�����&� ��� 6���;�� ��� �-��

� -�����I&� ?�&��&�� ��� $������� ?�&�����&� &&�������^� @$O� @��&� �����^� ��O� �����%���

���%���^� ��$O� ���#����&�� �-��� $������^� �85O� ��&����� ���&&��� ����2��%-#^� �*�(�O�

�-�&%-����#���&�����+���2�����-����&&��+�#�%������2��^��681�O����&�������2��^��681�O�

���&����� �� 2��^� 6?O� 6������� ?�"�����^� 6��O� &����^� 61�&O� 6�2��� 1)���������

���#���%-�&�&^� 5�81O� 5��&�������� ������&� $�&����-� *&���)��B

���

&�� ��������������

6�����)�-��&������������%���2������&�&O�$$�(��.!���!3��!����(�$�������!������$��$���*���

!!����86�� 83�� ��� $� ���� ��%��#��&� �� 1������D� 6(B� (�$�� 83� ��� $� ���� &-���-�����&� ��

1������D�6(B�5-��������2��)�-��&����������-����-�#�-�"�������%���2������&�&B�

��

� �

������� �������������

�-������-�������� ����������+�&��������+�;���&��)����O��������!���*,����$��!(�������$�$��.1����(����(3���������5��6���6$��8��6����������,���3��(��!5���@((���6�$��(5��83��$���(�$��$B�

����������&����-��"��&���K6%��&-�&����&LO��������*,��!���@((��!5�B�

?1����2�����d����������#&�&O�$$�(��.!���!3��!����!!����86��(�$��$B�

����:�������&��6����&���������#&�&�d�*5�&)%%���O������!���$$(�����$��$���*���!!����86��$B�

Q�����&O������!���!5��d�$�M��-������+)���&��:������)�-��&B��

���7������&�2�d�.)��2O��������(5��83��(�$��$B�

���7�����"��&��O��������$B�

����)�-��&����������%%��"����-��:������)&���%�B�

��#������������

Q��M�)��� ��;����� �-�;�%�����&����������&�M-��%������%����� �� �-�&�%��7���B�5-�&�M��;�-�&�

+��� :)���� +#� �-�� .)����/� � -���)�� K�)����L�� �-�� ���&������ ��� 8�)����/� #� �������

K��+��������8&%�9�L�����%�����/�5����/2����������)�'�����2�����*?8�K��&�7��'�����

*�"���/�� !)��� ��� ���)�'�LB� 5-�� ?��+���&� $�&����-� (�+������#�� ����������� $�&����-�

.�)�����B�C�"��&��#�,�&%�������'����6�������&�-�&�+���&)%%������+#��*�8$����?��+���&�#�

8:��������&�����+/����&�&������&�K�*�8$?8�L^��*�8$?8���&���*6�***����7���B�Q����&������

���+���� ��� 5�81� �"�&��2����&� M-�� %��"����� �� :���� ����&&� ��� 2���#%�� ����� ��� ��-���

��&����-��&� "��� �������� �����%�&������&� � U��VB� 5-�� 2���#%��� ��� �&&�������� %-���#%��� �����

)&��� �� �-�� &�)�#�� [�)����6���� �����+�����"�� 6�)�#� :��� ����#%���-���#%�� &&�������&� ��

� -�����>&� ?�&��&�� K��?L\� M���� %��"����� +#� �-�� ���D�6���-R����� $d?� (������B� 5-��

����&��&� )&��� :��� ���#&�&� ��&���+��� �� �-�&� ��)&���%�� M���� �+������ :���� �+���� U��V�

�-��)2-� �+���� ����&&��� )�+��� %-&FFF��HB"�B%�B� .)��2� &)%%���� :��� �-�� [�������

��&����)�� :��� (���� @&��� � -�����>&� ?�&��&�\� M�&� %��"����� �-��)2-� �-�� ?�"�&��� �:�

1�)��&������� 1*B� 5-�� ������� ��&����)�� :��� (���� @&��� � -�����>&� ?�&��&�� ���)��&� ��

2�����M�����&&��������&�)�#�:)�����&�%�����:��-��?�"�&����:�1�)��&�������1*B�&&�&�����

M��-� %-���#%�� -����� ����� ��� 2���#%�� �����2�� �&� M���� �&� M��-� 2������ &�)�#�

������������M�&� %��"����� +#� ������� ��&����)�� :��� (���� @&��� � -�����>&� ?�&��&�B� 5-��

�0�

����&��&� )&��� :��� ���#&�&� ��&���+��� �� �-�&� ��)&���%�� M���� �+������ :���� �+���� U��V�

�-��)2-��+��������&&���)�+���%-&FFF�0=B"�B%�B�.)��-��������������:�������������������

&-���2�:���1�)�����2�2�*������"��K?1*L�K1�������*&���)��&��:�,����-������CF���F��HF�LB�

?1*��&�:)����+#��-��1�������*&���)�����2�2���-��1�������*&���)����:������������*��2�2�

��� ����2�����2�� ��� �-��)2-� 2����)&� �����+)���&� :���� �-�� :����M�2O� ++�����

&���e����� ��� ��#��� 6�-���2� �-����� ��� ���&�����#��&� 64)�++�� 8�&��� ���+��� ��������

?�"���%����� 8��� ���%�������� ������-�� �8� ,����-������ ���D�6���-R����� *�2�����&��

!�-&�����!�-&���8���(���#������B�����%�����*�B������;������B��*�B��1�"����&�����:� ���

*��� .B� ,�::���(�� $��-��� 6�-���2����)2-�� 6#����� *�B�� �&� M���� �&� ��%��:��� %�����&� �-��

� -�����I&� &&�������� ���� -�����I&�?�)2�?�&��"��#� .�)�������M��-� %������%����� :����

�-��CB6B�.�������?�)2�����&������B����"����&�����������+)���&����?1*�����:�����������+#�

�-�� .�)������ :��� �-�� 1������� *&���)��&� �:� ,����-U��VB� 5-�� 2������ ��2�� ����� �&� �-��

1���-�������:�����*&���)���:���$�&����-����8�)�����������-��&�)�#��&������������+#��-��

� -�����I&�?�&��&�����%�����"��6�)�#�����-��C�"��&��#��:�����:������6��?��2�B�?1*����������

��&&��������+#��-��(�+������#�:���1�)���*��2�2�����-��C�"��&��#��:�����:������(�&�2���&B�

5-�&���&����-�M�&���&��&)%%������+#�1*,�2���&���F��F�F��H��RF���F�F ��������-��?���

.�)�����B� 5-�� �"�&��2����&�M��-��?1*� �����+)���� ��� �-����&�2���� ��%�����������:�

?1*���E���%��"����������+)���������%������%���� �����#&�&����M����2��:� �-�&� ��%���B�?1*�

�"�&��2����&����)���K���%�������&��2��"����+��������������:����0��.����6�LB�

!��������

�Q6������ :����6%��&-�%�����&� �&��"����+��� :���4)���:������&����-��&��:���� *$���%%��"���+#�

�-�� ���)����� )�/���� ��� ��� $�2�/� ����)����� K6%��LB� $�4)�&�� ��� ?�B� ��������� �

���2���K������B��)� P����B�&LB�

�<�

�%���������

�B� ,�)M�!!��?)#�;����&��O�!���������������������(�)���� ���������� �����������*������!#���FF���+,-.0 �00�B�

�B� ������ �� �-�������,����� ���� �)���� ��� ���M� !�� ���M:���� .�� .����� (�� ��)::��� (��,�#�&���*�"�2�1��!���&�(�������BO�/����������������������������������������� ��������� �������������������������������0��������*���� $���HH���+�1.<F��<F0B�

�B� 6-����2���$��$�2��"�8*��(��2�f��$�2��"��8��(�"�&4)�����*;��������-��,��(�����(�����,�����R��5&)���5������(��.����!.����)���������&������6��+��6��$������*�����&&��(��1���(���-)��;�"�*��������?������;�&���6�&��)��������&;#�$!��Q�&���Q��?��6��"��,��,���&�!(�����;���;�3�������5� ��$8��$�&�&�?�������BO�&��������������������������� �������� �� ���������� ������� ���������0�� ������*� ��� $�� �HH ��+2-.< ��<0FB�

�B� (�"#�(�-��� 8�� Q�&��� Q�� ����;�7� ��� $����� ?��� @&-���� !�� �����2���� Q,�� f)� �8��!������?��6�-�����6?��Q�2�R�������BO�&�����������������������������3�����������������0��������������*��(!��(���HH ��,41.H<��H<<B�

B� �������8,��6�)���&����6������������Q!��6�-���-���?8����&;��������6������Q��$�&�&�?��,���&�!(��������;�3�����O�5����������� ��� � ������6��� �������������������#�������������0���������������������������*��(!��(���HH���,43.H���H��B�

0B� (��+���� !��� ,���-� 6�� 8"�� ��� ���%��� ?�� 6���2��&� R�� ,���)�� ��� ���+����&� @��e����;��?���)�������!��5�"���������(����)��(�������&�R������������&4)����.��.��"���1�����+��2��������)� ��� 82��+��2-&� 6�� ?�� ?�#� ��� ������ *�� .���;� �� ,���&����� 6������������8��,���@����������+������(�������?):�)������ !�����������(�"��������5���"��� �3����&�����������BO�5������������������������� ������������������&78���&%3������������������������0��������*������������FFH���3.�FH���FHHB�

<B� ,������ ?�� +��-��� $�� ,����2M���-� ��� 6��&� $�� �����&-� �� ,��&-�����(�� ��-M�� !6����&;"��� 3�� ?�M ���� R�� Q������&� �� !��&� 1�� 5-���&� ��� 6������� �� ���2�� $��(�"�&����6����M����!�������&�����()%����R�����#�����$)+�& ����?�����������(�M�������(#�-������2��R�����M�R6����&&������������2�?�����)��&&����5����6��,����&������� ��BO� 5���������� ��������� ������ ���������� ������ �� &78� �� 9:&�7$������������������������0��������*������������FFH���3.�F==��FH�B�

=B� 6�&-����� 6�� .�� %�����;� (�� *;������� ?�6��:��� (�� �)��&�� 3�� ������ ��� ��&� !���6���-� 3�� ����&&4)����� ���� (��+���� !��� ,������ ?�� 6�-��7"��&� 8��� $����� �(����� $��?�+�����6��(�2&����-�Q5��!�B��!�&&�&������;��� �36��?����2)�&�!.��,����2M���-����&%��)�� 5�� ,����� � *�� ���&��� �� R)����� (,�� R�)�&����� �!�� ?��;&�� ?Q�� 5 �)���� ���+��-���$���)� ����?)�f��$������ !*�� ��� ��BO�5�������������������������� �����������������������������������*�-�����F�F��+;+.�=����=�FB�

HB� ��#�� !������� !!���� ��� ����� ���6�� ��8�������� �(�������5��e�+������$�"��������6����&���$����� �(�����$�������.!��$�#��!(��������$�#����3���&���!�������&���!����������8��@�-������@�-����?���)������ ����$���������&�)���$��$����&���2����6)&������� ��� �!(��3� 4)� �8��$����(���$)� ���6������$��&��O�5�����������������������/ ���� � �����*��������#�!(���F�F��33.��0B�

�FB� ��R-�� ��� ?���-��� ?�� .��&���� ��� R�� ��� $�� ������ ?�� 6������ 8�O� &�������������� ��� ���������0�� ������.� �� ���� ��� ���� ):)&!/��!%!�� <��#� 5��� � ����������� ��������!� ���������=�������=���/����������#�>����������������0��!�����*��� $#�#)"��H=���+�.H�H�H��B�

��B� $����� 8���Q�+&���� !���#��&� !�� ,���#� !�� ?)�;��#� 5�� e�&��� 3(�� !�&-�%)��� R?������&�� !3��,)�(����?��,)��������!������2�?Q������R?�� (��2�Q6��,��+����$,������-�5��$�-����R���e-���6��(�)2�?����#���(�������M��(��R�����������&������?�����"��� �� ,�M���� ���� $�"��� $�� $�2��&� !�� ,)���� �(�� ���4)�&�� 6�� �����&�� $���

�=�

��D������8�������BO�5�",������������������������0�����#����9?6�� �������������*��� $#���FF<��-�.<���<�FB�

��B� (��,��Q�����6��(��(��6��!����(��C%��#)�$��6)�-�(��,�&:����?������&��$�������#�!?��������������������1��?���&���$��?-�����?��8-������.������,,��.��� ����(����)�-����6������2����1���) ���?��,������6��,����2M���-����,&�)2��f��!�-&��!��R���#�??�� R���� $�� R����& � �� R�2� R6�� (�"�&���� 6�� (�#�82��&-� *�� ����-�M&� ���� ��� ��BO�&���������������������� ������ ��������������������������������������������������������*��$(.��� $#���FF=��4-.� � �B�

��B� Q�7&���8�����;��� �1?���-���f��$��-&����!,��.�+���R����-�2�$��(���!,�������5?�������� ?�� ?�� ����&���� $�� ������ ��� .����M�����-����� ��� 6M���� $�� .���)�� 5�����#�)D� $O� 5�����<���� ���������� ��� >������ 7���?���� ���������0�� !������%� ������� ":)3� �� &78� �� )������� &85"9,� �� :�������� ����� �9?6*� � #���������F����2.��FF��F=B�

��B� �)������6���Q������Q��5-���(!�������&��$���!��;��$��!�2)&��Q��5��7��M&;��!X��5�2��Q�� ���;���� (O� <��� ������ � ����� �������� �� ���������0�� ������.� �������������0��!������)���������� :�������� ��!):�*���/.�!��$��0�������FF ��3. �00B�

� B� �)������6���Q������Q��5-���(!�������&��$���!��;����!�2)&��Q��5��7��M&;��!X��5�2��Q�����;����(O��������������0���������������������������*��� $#!��)!�)���!��������FF ��3-.=0H�=<<��D��D��B�

�0B� �!):����� ���UMMMB���B)���B��)g?1*V��<B� .���%%���1��$�����Q�����6����+&��$�������������) ���?��R����& ���(�#�82��&-�*��

Q������&� !�� 1��-��&� 5�� Q-���-��� ��� ����-�M&� ��O� ������������������ ����������������� ��� �9?6� � ������ ������ ���� ����� ������� �������� ��� ��� �����������0��������*��� $#!��)���FFH����.<���<�=B�

�=B� ,)�]�����;���2�8��(�)�f���,����6��.�)�����,��R�� �8��?��-��������!�-�6��3��8����M�2-���� 6����&� ,O�$���������� ���� 5�����<���� ���������� /����� :��������� $���� ���@�����������":)3�7��������������������7���?�������������0��!�����*�� #�������F����4.��00�0B�

�HB� �)������6��1��������5�������M�R��5-���&�(��.�����������������?���������!��6;������������;;����*��?��#��!��6-�����O�97:)'.�������������������������������������� � �������������#��������*����-�* ���������FF<��A3. H� < B�

�FB� +���&�&� �$�� �-��#� 66�� ���;&��Q@�� ������ ($O�5%%.� �� ����� �� ��������� ������������ �������*��!#!�1#$���!(���FF���32.<���<��B�

��B� ������&��1�� ������ (�� $���-� ?O�9� ������ ���������� �� ���������*�� #���������FF0��,.��HFB�

��B� ������ (�� ������&�� 1!�� ���2�� $��� Q��+����� �8�� 6-����;� 1�� $���-� ?O� 9���� ����� ����������� ��������� ���� ������������ �����������������������������*������������FF0��+A.HF��HFHB�

��B� (�� f��Q������ �!�� ?�2� !�� 6�-���� ��� +���&�&� �$O�$&=.� ����� ��B����� �� ����� ����� ��� �������� � ���� ��� �� ���������� ����� ��*� ������ ��!���!#�� �F�F��+�.=�0�=��B�

��B� $����� �(����� $�� ������ ��� 6�� � �8�� ,����� � *�� ��)���� �� $�&����$���� ��������� �(�2������)������ ����$����(���(�%� ��������!����#��!���)� ������ ��� ����� ���5����2��(��$)� �O�5�",���������������������������#�������������0�����������/ �����9?6����������*�-�� �$�*����.��)!�)��FFH��3+.������HB�

� B� ,����2M���-����,������?��6��&�$�������&-���(��+����!��������&4)���������+��-���$��,��&-���� �(�� ��-M�� !6�� ��&;"��� 3�� ?�M ���� R�� !��&� 1�� 6������� �� 5-���&� ���$��-���&� �� *"��"� ?�� Q����M&�� ��� �-�%��� !�� (�"�&���� 6�� ��M���� !�� �����&�� ���()%����R�����#�����$)+�& ����?�����������(�M�������(#�-������M�R6����&&�����

�H�

�������2�?�������BO�&��������������"&�2��$/��4�C$/���6��69=�3��&!++���&!,�9���������������������������0��������*������������F�����+.��H��� B�

�0B� 1�7����!)��������-����Q��Q�2�(6��3������7���1���)��&�!�������&��!���)D+�)��!?��!��"�;�����������R��(��&��8��������5?�����"���.�����::�$��:����1$��?��!�2����(��8"�&�?��6�-������!�������&4)���������8���;��5����1��f�);��6�����)�-�2�����R�)M��!6��1�M��#����R���������,���#�!��,)��������!���#��&�!��������������?�������.f������M���5�������BO�&�������������$/���C$/��46��&!,�9��&!++���69=�3������������������������������������0��������*������������F�����+.��0����B�

�<B� 1�7����!)��������-����Q��Q�2�(6��3������7���1���)��&�!�������&��!���)D+�)��!?��!��"�;�����������R��(��&��8��������5?�����"���.�����::�$��:����1$��?��!�2����(��8"�&�?��6�-������!�������&4)���������8���;��5����1��f�);��6�����)�-�2�����R�)M��!6��1�M��#����R���������,���#�!��,)��������!���#��&�!��������������?�������.f������M���5�������BO�&�������������$/���C$/��46��&!,�9��&!++���69=�3������������������������������������0��������*������������F��B�

�=B� e)������!����)�!���-���&�6!����&&�����6�&���Q��?��&�!�O�9������������������������$/������$6$324������������*�� #�������F�F��-.�H�0HB�

�HB� R���Q!�� 6)2��� �Q�� .)��#� 56�� $�&;�� R��� ���2��� 5,�� e�-���� ��� ,�)&&���� ?O� ������������������������8&/&*����#��������FF���3,.HH0��FF0B�

�FB� R���6,������!6��,����M�#�!Q��(���!5��6)-��,��1�-��?,�����;�,6O��� ������ ��������$/��,� ���3;1��D�&�� ������� ��������������� ���������������� �������������6����� ���� �>�� ����%3����� ��� ��������� ����� � ����� ��������� ��� � ����������������*���!���2������$)"��FF0��+4.=<<�==�B�

��B� 8��;&&��CR����� ����?��;����Q��.����2�����(�������&��1(O��������������������������������#�����������*�0��������$!��$��#)��0!�#$���FF=��,-.��=�� 0B�

��B� &�������"���� ����������U-��%OEEMMMB�������B��2EV���B� ��5�9�U-��%OEEMMMB�+�B��B�-B2�"E2�%V���B� >���������������)�����:������������=�����UMMMB:�-B��2V�

��

�F�

>�������7������

>������3*� �$���� �������������������������5<�/��$�������!):��5��!���):������56)��� �������� � ����� ��� +�;;1� ����� �� +�;;4� �������B� � ������ �:� 0H0�<F<� 61�&� M������������������Q6�M-����&���FH=��= �61�&�M�������������������&��:�)��&�)���&B��

>������,*�$��������� ��>������ ������� ��3-4,11;�� �� ������?����%���� �?%�������1-E������������������������� ����������������� ������������������������B������$�>�� ������������������ �������������*� �5-�� :�2)���&-�M&��-�������;�+�����&�&���#��:� �-��@$�����&&�&�)���&B�

���������������

��������������3�

5����O� 5�+��� 6�B� ������&� ��� %��+�&� ��%��#��� :��� $��������� ��������� �:� �6�� ��)&�����&� 0�HHF����;���

?�&���%���O������)����*:��������:����&� 0�HHF�2���#%�2B��

��������������,��

5����O�5�+���6�B�5�%��FF���&)��&����-����������#&�&����)��2� ���������Q6�

?�&���%���O���&����&)��&��+���������)��&�)�#B�

5�+��� ��2��&O��,$O�-����&���^��O�������^��O�������^�1O1)�+����:� &�)���&� �� �-�������

���#&�&������+)��2�����-���"�������&��������:��-�����;��^��O%�"��)��:����:�D����::���&������^�

�K$LO%�"��)�� :���� ������ �::���&������^� @$O�������@��&� $����� �&������� :���� :�D��� �::���&�

�����^�@$K$LO�������@��&�$������&�������:�����������::���&������^��XO%�"��)�� :���

���-���I&�X�&����&���^�*O*��-�����2����#����DB��

��������������+�

5����O�5�+���6�B��Q6�%�)&��22��2����������:����,�����������B����,)������B�

?�&���%���O��Q6�&�2�:��������;��&��+�������:����!���!�!(#���%�������&B�

5�+��� ��2��&O��,$O�-����&���^��O�������^��O�������^�1O1)�+����:� &�)���&� �� �-�������

���#&�&������+)��2�����-���"�������&��������:��-�����;��^��O%�"��)��:����:�D����::���&������^�

�K$����LO%�"��)�� :���� ������ �::���&������^� @$O������� @��&� $����� �&������� :���� :�D���

�::���&������^�@$K$����LO�������@��&�$������&�������:�����������::���&������^�� XO%�

"��)��:������-���I&�X�&����&���^�*O*��-�����2����#����DB��

���

����������������

5����O�5�+���6�B�������&� 0�HHF��.������#%����&���+)������::�����&������&�����&�2�:���������-��6%��&-�&����&B�

?�&���%���O��5�+�����&���+�2��-����&)��&��:��������)&������2������-��6%��&-���%)�����B��

��������������-�

5����O�.�2)���6�B���-�����%����M��-���&)��&�:�����-����������#&�&��:��-�� ���������Q6�:������;��&����-����&������B�

?�&���%���O�������Q6���&)��&��+������:����-����&������B�

��������������4�

5����O�.����6�B�� -�����>&�?�&��&��1�)�����2�2��������"��K?1*L�����"���"�&��2����&B�

?�&���%���O�.)�����&���:�?1*�����"�&��2����&�K��%-�+����������LB�

Fig

ure

1

NO

TE

: Wei

ghts

are

from

ran

dom

effe

cts

anal

ysis

Ove

rall

(I−

squa

red

= 0

.0%

, p =

0.7

54)

Har

old

(US

A)

Mur

cia

(Spa

in)

Hu

(US

A/C

anad

a)

Har

old

(Ger

man

y)

Gen

AD

A (

Can

ada)

Har

old

(UK

/Irel

and)

TG

EN

(U

SA

/Net

herla

nds)

NIA

(U

SA

)

Rep

lica

(Spa

in)

AD

NI (

US

A)

IDStu

dy

0.88

(0.

85, 0

.91)

0.87

(0.

79, 0

.97)

0.88

(0.

73, 1

.06)

0.90

(0.

78, 1

.04)

0.84

(0.

72, 0

.98)

0.89

(0.

77, 1

.03)

0.91

(0.

84, 0

.98)

0.74

(0.

63, 0

.88)

0.87

(0.

76, 1

.00)

0.90

(0.

83, 0

.98)

0.81

(0.

60, 1

.09)

Rat

io (

95%

CI)

Odd

s

100.

00

13.7

1

4.10

6.88

5.94

6.94

27.0

6

5.22

7.90

20.6

8

1.57

Wei

ght

%

1156

319

1034

555

782

2227

757

987

2200

164

case

s

2188

769

1186

824

773

4836

468

802

2301

194

cont

rols

0.39

0.40

0.39

0.38

0.37

0.39

0.37

0.37

0.41

0.36

MA

F_c

ases

0.42

0.43

0.41

0.43

0.40

0.41

0.44

0.40

0.44

0.41

MA

F_c

ontr

ols

0.88

(0.

85, 0

.91)

0.87

(0.

79, 0

.97)

0.88

(0.

73, 1

.06)

0.90

(0.

78, 1

.04)

0.84

(0.

72, 0

.98)

0.89

(0.

77, 1

.03)

0.91

(0.

84, 0

.98)

0.74

(0.

63, 0

.88)

0.87

(0.

76, 1

.00)

0.90

(0.

83, 0

.98)

0.81

(0.

60, 1

.09)

Rat

io (

95%

CI)

Odd

s

100.

00

13.7

1

4.10

6.88

5.94

6.94

27.0

6

5.22

7.90

20.6

8

1.57

Wei

ght

%

p=4.

40E

−11

*

1.5

.75

11.

25*

The

tota

l num

ber

of c

ases

and

con

trol

s ar

e 10

,181

and

14,

341

Fig

ure

2

Additional files provided with this submission:

Additional file 1: Additional file 1.doc, 27Khttp://genomemedicine.com/imedia/1412785082555351/supp1.docAdditional file 2: Additional file 2.xls, 55Khttp://genomemedicine.com/imedia/2057619586555355/supp2.xlsAdditional file 3: AF3.eps, 246Khttp://genomemedicine.com/imedia/2812112615553808/supp3.epsAdditional file 4: AF4.xls, 23Khttp://genomemedicine.com/imedia/2129478125553809/supp4.xlsAdditional file 5: AF5.doc, 30Khttp://genomemedicine.com/imedia/1825467996555380/supp5.docAdditional file 6: Additional file 6.doc, 41Khttp://genomemedicine.com/imedia/2064822234555356/supp6.docAdditional file 7: Additional file 7.doc, 24Khttp://genomemedicine.com/imedia/6427276945553560/supp7.doc