Post on 23-Feb-2016
description
אבחון מולקולרי טרום השרשתי בהמופיליה
פרופ' אלון פרס
המכון הגנטיהמרכז הרפואי ע”ש חיים שיבא,
תל-השומר
אצל נשאית למחלה גנטית כמו המופיליה מבקשת להביא ילד לעולם
25%הסיכון לילד חולה בהמופיליה הוא
האפשרויות העומדות בפני בני הזוג
לוותר על הורות• לאמץ ילד בריא• לקחת את הסיכון ולקוות ללידת ילד בריא•אבחנה פרה-נטלית והפסקת הריון נגוע •
אבחנה פרה-נטלית והפסקת הריון נגוע
השיטה המקובלת ביותר על רוב הזוגות •
בארץ10-12 ביצוע דגימת סיסי שליה בשבוע •15-18 או ביצוע דיקור מי שפיר בשבוע • הפסקת הריון כשבועיים לאחר הפעולה•
אבחנה פרה-נטלית והפסקת הריון נגוע
הפסקת הריון אסורה ע”פ אמונה או דת• פעולה אבחנתית חודרנית בעלת סיכון לאם ולעובר• הפסקת הריון כרוכה בסיכונים רפואיים •
נטל נפשי גדול •
חסרונות
Pre-implantation Genetic Diagnosis
בדיקה של העובר לפני ההשרשה ברחם
הפריית מבחנה
גרויי השחלות •
שאיבת ביציות•
הפריה של הביציות ע"י זרע מהבעל •
)במבחנה(
370אינקובציה ב •
התפתחות העוברים•
I V F
Preimplantation Genetic Diagnosis
נשתמש בשיטות הפריה חוץ-גופית כדי לייצר •
עוברים
נדגום תא אחד מכל עובר בעזרת מיקרומניפולציה•
נשתמש בתא הבודד לצורך מבחן גנטי•
נחזיר לרחם האם אך ורק עוברים בריאים•
נבטיח בדרך זו לידת ילדים בריאים•
!!!!!! הריון טבעי עם אבחון ט.ל. עדיף
פחות סבל לאשה•
סיכויי הצלחה טובים יותר•
עלות כספית נמוכה יותר•
גנטיקה כלליגוף האדם מורכב מתאים התכונות הגנטיות שמרכיבות כל תא ותא נמצאות•
DNA ב ארוז בתוך התאים בצורה של כרומוזומיםDNAה-• כרומוזומים46בכל תא ותא בגוף יש • זוגות של כרומוזומים אוטוזומים וזוג כרומוזומי מין22•
( X ו Y)
הגנום האנושי מולקולות 4 אבני יסוד, 4 מורכב מ DNAה
A T G Cשמיוצגות ע"י האותיות בשנים האחרונות פוענח הקוד הגנטי• הגנום האנושי רוצף במלואו• אותיות3,000,000,000מכיל כ • גנים25,000מקדד כ •
הצטבר ידע רב על מחלות גנטיות
DNAשרשרת ה
CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTGGAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC
G-Banding
המופיליה - הגןX הגן יושב על כרומוזום • אותיות )נוקלאוטידים(7000 מכיל כ • נחשב לגן גדול יחסית• תוארו בו מספר גדול של שינויים הגורמים•
להמופיליה )חסרים, שינויים של אות
אחת,
היפוך, ועוד(
Type of mutations in hemophilia A
Micromanipulation
PGD משימות טכניות
שעות24 - 36 - מהירות•
מבחן קליני - דיוק•
כיול מערכת לכל מקרה - הכנה מוקדמת•
שיתוף פעולה•
עבודה עם תא בודד•
PGD
מולקולרי
ציטוגנטי
ציטוגנטי PGDחסרונות להמופיליה
רק בנות
אין יכולת להבדיל בין נשאיות
ללא נשאיות
Molecular PGD
אבחון מתא בודד
הבעיה הראשית: הכמות הקטנה
מאד
של חומר שעומדת לרשותנו
Polymerase Reaction ChainPCR))
תהליך שפותח באמצע שנות השבעים • פי מיליוני DNA מאפשר להגביר מקטעים של •
פעמים,
עד כדי יכולת לראות את המקטע בעין מתא בודד עדDNA מאפשר להגביר מקטעים של •
לרמה המאפשרת אבחנה גנטית
DNAתכונות-
בעלות מבנה משלים DNAשרשראות
נדבקות זו לזו
DNA( 950 עמיד בטמפרטורות גבוהות)
נפרדות זו DNAבחימום שרשראות ה
מזו
Template
Polymerase Chain Reaction
CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTGGAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC
Polymerase Chain Reaction
CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTG
GAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC
95 °CDenaturation
Polymerase Chain Reaction
CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTG
GAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC
55 °C
Annealing of Primers
CATGACGAC
CTGGTTTAA
Polymerase Chain Reaction
CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTG
GAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC
72 °C
Progression
CATGACGAC
CTGGTTTAA
Polymerase Chain Reaction
CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTG
GAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC
72 °C
Progression
CATGACGAC
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTG
CCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
Polymerase Reaction Chain )PCR(
DNA
פריימרים
אבני בניין )נוקלאוטידים(
(Tac Polymeraseאנזים )
Template
Polymerase Chain Reaction
CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTGGAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC
Polymerase Chain Reaction
CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTG
GAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC
95 °CDenaturation
Polymerase Chain Reaction
CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTG
GAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC
55 °C
Annealing of Primers
CATGACGAC
CTGGTTTAA
Polymerase Chain Reaction
CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTG
GAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC
72 °C
Progression
CATGACGAC
CTGGTTTAA
Polymerase Chain Reaction
CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTG
GAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC
72 °C
CATGACGAC
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTG
CCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
TACTAACGTG
GAGCAGA
CATGACGAC
CATGACGACCTGGTTTAA
CTGGTTTAA
Progression
Polymerase Chain Reaction
CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTG
GAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC
72 °C
Progression
CATGACGAC
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTG
CCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
Polymerase Chain Reaction
CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTG
GAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC
95 °CDenaturation
CATGACGAC
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTG
CCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
TACTAACGTG
GAGCAGA
Polymerase Chain Reaction
CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTG
GAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC
CATGACGAC
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTG
CCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
TACTAACGTG
GAGCAGA
CATGACGAC
CATGACGACCTGGTTTAA
CTGGTTTAA
55 °CAnnealing of Primers
Polymerase Chain Reaction
CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTG
GAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC
72 °C
CATGACGAC
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTG
CCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
TACTAACGTG
GAGCAGA
CATGACGAC
CATGACGAC
CTGGTTTAA
CTGGTTTAA
Progression
CGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTG
CGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTG
GAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
GACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
Polymerase Chain Reaction
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA
PCRעל הגל
מולקולרי לעומת PGDיתרונות ציטוגנטי
יכולת להביא בנים בריאים עדיפות לבנות בריאות )לא נשאיות(• אין הבדל משמעותי בסיכויי ההצלחה• אין הבדל משמעותי במחיר•
PGD קשיים טכניים
זיהום
שני קשיים טכניים מהווים את עיקר הנטל על המעבדה המולקולרית המבצעת אבחנה בתא
בודד
PGD :מולקולרי לחולי המופיליה משתתפים
פרופ' אורי מרטינוביץ, המכון, רימה דרדיק דר'
להמופיליה
פרופ' אלון פרס דר' ברוך פלדמן, דר' קרן דותן,
המכון הגנטי
פרופ' יהושוע דור, דר' יעקב לברון, היחידה
להפריה
חוץ גופית, אגף נשים ויולדות
המרכז הרפואי ע"ש שיבא, תל השומר
חלוקה מיוטית
H
HH
אישהגבר
עובר עובר עובר עובר
אבא
אמא + בת נשאית
בן חולה