אבחון מולקולרי טרום השרשתי בהמופיליה

אבחון מולקולרי טרום השרשתי בהמופיליה

פרופ' אלון פרס

המכון הגנטיהמרכז הרפואי ע”ש חיים שיבא,

תל-השומר

אצל נשאית למחלה גנטית כמו המופיליה מבקשת להביא ילד לעולם

25%הסיכון לילד חולה בהמופיליה הוא

האפשרויות העומדות בפני בני הזוג

לוותר על הורות• לאמץ ילד בריא• לקחת את הסיכון ולקוות ללידת ילד בריא•אבחנה פרה-נטלית והפסקת הריון נגוע •

אבחנה פרה-נטלית והפסקת הריון נגוע

השיטה המקובלת ביותר על רוב הזוגות •

בארץ10-12 ביצוע דגימת סיסי שליה בשבוע •15-18 או ביצוע דיקור מי שפיר בשבוע • הפסקת הריון כשבועיים לאחר הפעולה•

אבחנה פרה-נטלית והפסקת הריון נגוע

הפסקת הריון אסורה ע”פ אמונה או דת• פעולה אבחנתית חודרנית בעלת סיכון לאם ולעובר• הפסקת הריון כרוכה בסיכונים רפואיים •

נטל נפשי גדול •

חסרונות

Pre-implantation Genetic Diagnosis

בדיקה של העובר לפני ההשרשה ברחם

הפריית מבחנה

גרויי השחלות •

שאיבת ביציות•

הפריה של הביציות ע"י זרע מהבעל •

)במבחנה(

370אינקובציה ב •

התפתחות העוברים•

Preimplantation Genetic Diagnosis

נשתמש בשיטות הפריה חוץ-גופית כדי לייצר •

עוברים

נדגום תא אחד מכל עובר בעזרת מיקרומניפולציה•

נשתמש בתא הבודד לצורך מבחן גנטי•

נחזיר לרחם האם אך ורק עוברים בריאים•

נבטיח בדרך זו לידת ילדים בריאים•

!!!!!! הריון טבעי עם אבחון ט.ל. עדיף

פחות סבל לאשה•

סיכויי הצלחה טובים יותר•

עלות כספית נמוכה יותר•

גנטיקה כלליגוף האדם מורכב מתאים התכונות הגנטיות שמרכיבות כל תא ותא נמצאות•

DNA ב ארוז בתוך התאים בצורה של כרומוזומיםDNAה-• כרומוזומים46בכל תא ותא בגוף יש • זוגות של כרומוזומים אוטוזומים וזוג כרומוזומי מין22•

( X ו Y)

הגנום האנושי מולקולות 4 אבני יסוד, 4 מורכב מ DNAה

A T G Cשמיוצגות ע"י האותיות בשנים האחרונות פוענח הקוד הגנטי• הגנום האנושי רוצף במלואו• אותיות3,000,000,000מכיל כ • גנים25,000מקדד כ •

הצטבר ידע רב על מחלות גנטיות

DNAשרשרת ה

CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTGGAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC

G-Banding

המופיליה - הגןX הגן יושב על כרומוזום • אותיות )נוקלאוטידים(7000 מכיל כ • נחשב לגן גדול יחסית• תוארו בו מספר גדול של שינויים הגורמים•

להמופיליה )חסרים, שינויים של אות

אחת,

היפוך, ועוד(

Type of mutations in hemophilia A

Micromanipulation

PGD משימות טכניות

שעות24 - 36 - מהירות•

מבחן קליני - דיוק•

כיול מערכת לכל מקרה - הכנה מוקדמת•

שיתוף פעולה•

עבודה עם תא בודד•

PGD

מולקולרי

ציטוגנטי

ציטוגנטי PGDחסרונות להמופיליה

רק בנות

אין יכולת להבדיל בין נשאיות

ללא נשאיות

Molecular PGD

אבחון מתא בודד

הבעיה הראשית: הכמות הקטנה

מאד

של חומר שעומדת לרשותנו

Polymerase Reaction ChainPCR))

תהליך שפותח באמצע שנות השבעים • פי מיליוני DNA מאפשר להגביר מקטעים של •

פעמים,

עד כדי יכולת לראות את המקטע בעין מתא בודד עדDNA מאפשר להגביר מקטעים של •

לרמה המאפשרת אבחנה גנטית

DNAתכונות-

בעלות מבנה משלים DNAשרשראות

נדבקות זו לזו

DNA( 950 עמיד בטמפרטורות גבוהות)

נפרדות זו DNAבחימום שרשראות ה

מזו

Template

Polymerase Chain Reaction



CTCGTCTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTG

GAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGACATGACGACATGATTGCAC

95 °CDenaturation




55 °C

Annealing of Primers

CATGACGAC

CTGGTTTAA




72 °C

Progression

CATGACGAC

CTGGTTTAA




72 °C

Progression

CATGACGAC

CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTG

CCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA

Polymerase Reaction Chain )PCR(

DNA

פריימרים

אבני בניין )נוקלאוטידים(

(Tac Polymeraseאנזים )

Template






95 °CDenaturation




55 °C

Annealing of Primers

CATGACGAC

CTGGTTTAA




72 °C

Progression

CATGACGAC

CTGGTTTAA




72 °C

CATGACGAC



TACTAACGTG

GAGCAGA

CATGACGAC

CATGACGACCTGGTTTAA

CTGGTTTAA

Progression




72 °C

Progression

CATGACGAC






95 °CDenaturation

CATGACGAC



TACTAACGTG

GAGCAGA




CATGACGAC



TACTAACGTG

GAGCAGA

CATGACGAC

CATGACGACCTGGTTTAA

CTGGTTTAA

55 °CAnnealing of Primers




72 °C

CATGACGAC



TACTAACGTG

GAGCAGA

CATGACGAC

CATGACGAC

CTGGTTTAA

CTGGTTTAA

Progression

CGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGTACTAACGTG

CGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTG

GAGCAGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA

GACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA


CTGGTTTAACGTGAGTCTATGCTTTTGCTGTACTGCTGCATGACGACGACCAAATTGCACTCAGATACGAAACGA


























PCRעל הגל

מולקולרי לעומת PGDיתרונות ציטוגנטי

יכולת להביא בנים בריאים עדיפות לבנות בריאות )לא נשאיות(• אין הבדל משמעותי בסיכויי ההצלחה• אין הבדל משמעותי במחיר•

PGD קשיים טכניים

זיהום

שני קשיים טכניים מהווים את עיקר הנטל על המעבדה המולקולרית המבצעת אבחנה בתא

בודד

PGD :מולקולרי לחולי המופיליה משתתפים

פרופ' אורי מרטינוביץ, המכון, רימה דרדיק דר'

להמופיליה

פרופ' אלון פרס דר' ברוך פלדמן, דר' קרן דותן,

המכון הגנטי

פרופ' יהושוע דור, דר' יעקב לברון, היחידה

להפריה

חוץ גופית, אגף נשים ויולדות

המרכז הרפואי ע"ש שיבא, תל השומר

חלוקה מיוטית

H

HH

אישהגבר

עובר עובר עובר עובר

אבא

אמא + בת נשאית

בן חולה

אבחון מולקולרי טרום השרשתי בהמופיליה

Documents

Transcript of אבחון מולקולרי טרום השרשתי בהמופיליה