8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177
1/16
9.5 Analisis Kuantitatif dari Ekstrak dan Produk Herbal
Dengan perkembangan teknologi analisis modern dan peningkatan kesadarah akan
kesehatan manusia, banyak negara mendesak agar kontrol kualitas (!" men#adi
lebih ketat untuk produk $ produk herbal% kebutuhan akan analisis kuantitatif
khsusunya men#adi meningkat. &yatanya, analisis kuantitatif diaplikasikan untukherba dengan banyak alasan' untuk membandingkan kandungan senyaa utama
atau bioaktif pada suatu spesies yang tumbuh pada daerah yang berbeda atau
dikumpulkan pada aktu yang berbeda% untuk mengukur kontaminasi dari
pestisida, logam berat, dan bahan kimia toksik lainnya pada herba dan pelarut
organik pada ekstrak untuk penilaian keamanan% untuk mem)alidasi metode
ekstraksi atau prosedur pemrosesan% dan untuk mengontrol kualitas produk.
8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177
2/16
8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177
3/16
*ambar 9.+ ingerprint K- ekstrak Angelica pubescens f. biserrata dansubstitute/penggantinya. (A" K- dilihat di 01 2+5 nm% (3" K- dilihat di 01 45 nm%
(!" K- setelah disemprotkan dengan reagen anisaldehida asam sulfat (167".
8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177
4/16
*ambar 9.8 Analisis ngerprint HP-! dari ekstrak Angelica pubescens f. biserrata
dan beberapa substitutnya dengan menggunakan detektor DAD. :, Angelica
pubescens f. biserrata. 4. Angelica dahurica% 2. Angelica apaensis% . Heracleummoellendori% 5. Heracleum candicans% +. Aralia cordata.
Kun;i untuk menganalisa se;ara kuantitatif kadar bahan kimia dalam herba atau
ekstrak herbal adalah untuk menetapkan suatu sistem e)aluasi yang sesuai,
termasuk pemilihan senyaa karakteristik/khas yang akan dikuantikasi, penetapan
suatu metode preparasi sampel yang ;o;ok, dan suatu pendekatan kuantitatif yang
akurat dan tepat, serta eliminasi gangguan dari senyaa $ senyaa lain terhadap
senyaa khas yang akan dikuantikasi. 0ntuk analisis kuantikasi senyaa dalam
ekstrak herbal yang kompleks, pastikan sensti)itas dan reprodusibilitas dari
pendeteksian, dan #uga resolusi dari pun;ak analit, harus ;ukup baik. HP-!
8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177
5/16
*ambar 9.> 7pektra 01 dari senyaa sesuai
dengan pun;ak HP-! di gambar 9.8"
Kur)a standar harus dibuat untuk semua metode analisis kuantitatif untuk
memastikan hasil analisis berada dalam suatu garis lurus dari kur)a. 6dealnya,
tanpa memerhatikan metode analisa yang akan digunakan, lima hingga tu#uh
larutan dengan konsentrasi senyaa standar yang berbeda harus digunakan untuk
membuat kur)a kalibrasi saat akan menetapkan suatu analisis kuantitatif.
7ementara itu, salah satu larutan standar dengan konsentrasi berada dalam garis
8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177
6/16
linear dari kur)a kalibrasi diin#eksikan se;ara berulang tu#uh hingga 7embilan kali
untuk menge)aluasi reprodusibilitas dari sistem analisa. -arutan sampel harus
disiapkan dimana konsentrasi dari senyaa yang akan dikuantikasi harus masuk
dalam #a#aran garis linear dari kur)a kalibrasi.
7aat mengembangkan suatu metode analisis baru, sangatlah pentung untukmenge)aluasi akurasi, presisi, linearitas, spesitas, batas deteksi (-imit of
dete;tion/ -?D", dan batas kuantitas (-imit of uantitation/-?" dari metode dan
untuk membandingkan dengan metode dengan metode alternati)e yang tersedia.
7tatistika harus digunakan dalam analisis hasil.
Denisi yang terkait dengan analisis kuantitatif (misalnya akurasi, presisi, eror, rata<
rata, dan standar de)iasi", prinsip, dan metode analisis kuantitatif harus dikenal
dengan baik oleh analis yang melakukan analisis kuantikasi. 3anyak
literature/buku tersedia sebagai referensi, seperti Analytical Chemistry in a
GMPEnvironment — A Practice Guide.
7elain itu pada senyaa $ senyaa dalam herba, kontaminasi dari pestisida, logamberat dan mikroorganisme dalam ekstrak dan produk herbal #uga harus dianalisa
se;ara kuantitatif.
9.5.: Preparasi 7ampel
7uatu analisis kuantitatif yang sukses bergantung pada banyak hal, dimulai dari
proses pengumpulan sampel, transportasi, dan penyimpanan bahan hingga
preparasi sampel, lalu metode analisa. =etode preparasi sampel yang biasa
digunakan untuk bahan herbal mentah men;akupi imersi/pen;elupan pelarut,
partisi pelarut, ektraksi re@uks, ekstraksi ultrasoni;, dan 7E. Detail dari metode $
metode ini dan prinsipnya telah diperkenalkan pada !hapter 2 dari buku ini.
ika sampel herbal untuk u#i berupa ekstrak atau produk, maka sampel tersebut
harus terlarut sempurna dalam pelarut yang sesuai tanpa ada partikel yang tak
terlarut. !artridge (pola" fase padat berukuran ke;il (7PE/small siBe solid phase"
biasanya digunakan pada preparasi sampel dengan tu#uan untuk pemisahan.
Pemilihan metode preparasi sampel utamanya berdasarkan pada kelarutan dan
kestabilan dari senyaa target yang akan dianalisa. 7enyaa target tersebut harus
diekstraksi se;ara maksimal tanpa mengubah strukturnya dan menghindari
senyaa lainnya untuk meminimalkan gangguan senyaa tak diinginkan tersebut
pada saat pendeteksian senyaa target. Keamanan, biaya, dan aktu #uga
merupakan faktor yang patut dipertimbangkan. Hal $ hal ini merupakan hal yangpenting agar memberikan suatu analisis kuantitatif yang terper;aya dan akurat.
9.5.4 =etode Analisis Kuantitatif
=etode analisis kuantitatif yang sesuai dan biasa digunakan untuk ekstrak dan
produk herbal adalah metode kromatogra dan spektroskopi, men;akupi metode
standar internal, metode standar eksternal, metode kur)a kalibrasi, metode
8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177
7/16
adisi/penambahan standar dan metode normalisasi. Di sini hanya diberikan
informasi singkat untuk beberapa metode yang biasanya digunakan% perkenalan
info yang mendetail tentang tiap metode tersedia pada banyak buku, artikel di
#urnal $ #urnal, dan eb sites.
:. =etode standar internal=etode ini adalah metode terbaik untuk kuantikasi senyaa di dalam suatu
ekstrak herbal kompleks. Pada metode ini, suatu substansi yang sesuai harus
dipilih sebagai suatu substansi standar internal dan penambahan substansi
standar se;ara kuantitatif ke dalam sampel u#i. Perhitungan kadar senyaa
ini berdasarkan rasio area pun;ak dari senyaa yang akan dianalisa dan
substansi standarnya. =etode ini khususnya berguna hanya pada saat
beberapa kadar senyaa harus dianalisa kuantitatif. =etode standar internal
merupakan metode yang ideal untuk kuantikasi dari senyaa
khas/karakteristik atau bioaktif dalam ekstrak herbal.7tandar internal yang terpilih harus memenuhi syaratberikut' standar
tersebut tidak boleh berupa senyaa yang ada di dalam sampel% pun;akkur)anya harus tampak dekat atau antara pun;ak dari substansi yang diu#i
tetapi dengan pemisahan yang sempurna% penambahan #umlah standar ke
dalam sampel tidak boleh berbeda #auh dari senyaa yang diu#i.Aplikasi dari standar internal dapat menghindari kesalahan/eror yang
diakibatkan oleh ketidakstabilan instrument, in#eksi yang tidak akurat, dan
faktor $ faktor lainnya. 0ntuk menghindari hilangnya senyaa u#i selama
prosedur pra
8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177
8/16
7edikit perbedaan )olume in#eksi dapat mengakibatkan perbedaan yang
signikan pada hasil dari metode ini. =erupakan hal yang lebih baik untuk
mengin#eksi sampel melalui suatu ;in;in kuantitatif saat metode standar
eksternal digunakan. Penggunaan sampler
8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177
9/16
bukannya ke dalam larutan murni, seperti pada metode penambahan/adisi
standar. Konsentrasi dari susbtansi dalamsuatu sampel dikalkulasi
berdasarkan perbedaan yang terukur antara sampel yang ditambahi
standar/spiked dan sampel yang tidak ditambahi standar/unspiked. =etode
ini dapat diaplikasikan untuk mayoritas analisis kromatograk dan
spektroskopik, seperti *!, AA7, dan 6!P, khususnya pada kasus #ika analisisdengan mudah diganggu oleh senyaa/komponen (matriks" di dalam sampel
kompleks yang dapat menyebabkan determinasi yang tidak tepat.
9.5.2 Analisis dengan HP-!
HP-! dapat dipasangkan dengan banyak #enis dete;tor, seperti dete;tor 01, DAD,
dete;tor kondukti)itas elektrik, dete;tor @uorosens, dete;tor indeks refraktif, dan
dete;tor spektrometri massa yang lebih ma#u. Di antara dete;tor
8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177
10/16
;ahaya 01 yang ditransmisikan melalui sel dan konsentrasi dari solut didalamnya
mengikuti Hukum 3eer.
Detektor 01 dengan pan#ang gelombang yang telah ditentukan menggunakan
;ahaya dengan pan#ang gelombang tunggal yang dihasilkan oleh suatu #enis lampu
dis;harge (lampu/perangkat yang menghasilkan ;ahaya dengan ;ara mengalirkanlistrik internal antara elektroda dalam suatu gas" spesik. Pan#ang gelombang yang
paling sering digunakan adalah 45 nm, dihasilkan dari suatu lampu uap merkuri
bertekanan rendah. Analisis kuantitatif menggunakan detektor ini terbatas hanta
untuk senyaa yang memiliki absorpsi yang baik pada pan#ang gelombang yang
tersedia.
Detektor multi"avelength menggunakan suatu sumber ;ahaya yang meman;arkan
;ahaya dengan berbagai pan#ang gelombang. Dengan detektor ini, ;ahaya dengan
pan#ang gelombanf tertentu dapat dipilih untuk deteksi. 7uatu absorpsi maksimum
biasanya dipilih untuk mendapatkan sensiti)itas maksimal. 7ementara itu, spektra
absorpsi dari senyaa terisolasi dalam elute #uga bisa didapatkan untuk identikasidengan ;ara dipindai pada suatu kisaran/#a#aran pan#ang gelombang. erdapat dua
tipe dasar/utama dari detektor multia)elength, detektor dispersi dan DAD, tetapi
DAD merupakan #enis detektor yang lebih popular.
DAD menggunakan suatu lampu deuterium (H4" atau enon yang meman;arkan
;ahaya meleati #arak spektrum 01. !ahaya dari lampu difokuskan melalui suatu
lensa akromatik melalui sel sampel dan diarahkan ke atas suatu #eru#i/kisi
8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177
11/16
HP-!
8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177
12/16
Preparasi sampel untuk metode HP-!
8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177
13/16
7uatu sampel herbal untuk *!
8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177
14/16
$. Metode urva standar digunakan dengan membuat suatu kelompok larutan
sampel standar dengan konsentrasi yang berbeda
8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177
15/16
AA7 biasanya digunakan untuk mengukur residu logam berat dalam tanaman.
=etode ini memiliki karakteristik seperti akurasi yang tinggi, sensiti)itas yang
tinggi, dan selekti)itas yang baik.
7ampel u#i harus disiapkan dalam bentuk larutan, baik dengan ;ara dilarutkan
dalam pelarut atau dilelehkan pada suhu tinggi.
-arutan standar dan sampel harus disiapkan pada konsentrasi dimana absorbansisampel u#i akan berkisar antara G.4 dan G.8.
Kuantikasi AA7 dapat dilakukan dipengaruhi oleh beberapa gangguan, antara lain'
:. *angguan ionisasi ' menga;u pada gangguan yang diakibatkan ionisasi atom
dan dapat dengan efektif ditekan dan dieliminasi dengan menambahkan
agen deionisasi.4. *angguan sik ' menga;u pada penurunan absorbansi sampel akibat
perubahan karakteristiksik sampel saat pemindahan/transfer,
e)aporasi/penguapan, dan atomisasi. =etode yang paling umum digunakan
untuk mengeliminasi gangguan ini adalah harus memiliki suatu substansi
a;uan/pembanding yang memiliki komposisi serupa dengan sampel u#i, atau
yang menggunakan metode penambahan/adisi standar.2. *angguan optikal' biasanya men;akupi gangguan pada garis spektral dan
garis non
8/18/2019 Willow Jian Hua Liu 4177
16/16
=etode kuantitatif yang umum men;akupi metode standar eksternal, metode
standar internal, metode adisi/penambahan standar, dan metode dilusi isotop. Pada
metode dilusi/pengen;eran isotop, suatu kuantitas radioisotope yang telah
diketahui atau isotop stabil yang langka ditambahkan (spiked" ke dalam sampel.
Top Related