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TALLER DE DIAGNÓSTICO Y VACUNAS VETERINARIAS / DIAGNOSIS AND VETERINARY VACCINES WORKSHOP
PRESENTACIONES ORALES / ORAL PRESENTATIONS
VACD-O-1. CSF IN THE EUROPEAN UNION. DIAGNOSTIC AND VACCINES POLICIES / PESTE PORCINA CLÁSICA EN LA UNIÓN EUROPEA. DIAGNOSTICO Y POLÍTICAS DE VACUNACIÓN. Volker Moennig, Institute of Virology, Hannover, Germany VACD-O-2. RTq-PCR IN VETERINARY DIAGNOSTIC/ PCR-RTq EN EL DIAGNÓSTICO VETERINARIO. Stefanie Schmeiser, Institute of Virology, Hannover, Germany VACD-O-3. INFLUENZA PORCINA: EMERGENCIA E IMPACTO / SWINE INFLUENZA: EMERGENCY AND IMPACT. Heidy Díaz de Arce, CENSA, Cuba. VACD-O-4. AVANCES EN EL DIAGNÓSTICO DE LOS MICIOPLASMAS. EXPERIENCIA
DE CUBA EN LA TEMATICA Evelyn Lobo Jefe de MYCOLAB (Laboratorio de diagnóstico de micoplasmas), CENSA. [email protected]
Los micoplasmas fueron aislados por primera vez, en 1899, de bovinos que padecían la
Pleuroneumonia contagiosa biovina, desde entonces y hasta la actualidad han sido
aislados de especies de animales, plantas, cultivos celulares y productos biofarmacéuticos
de aplicación biomédica, hoy se conocen más de 200 especies de estos micoorganismos.
La última década se ha caracterizado por numerosos avances en el esclarecimiento de los
factores de virulencia de las bacterias, con excepción de los micoplasmas, una vez que los
estudios sobre su patogenicidad se han quedado muy atrás de otros modelos
experimentales. La única excepción ha sido con respecto al estudio de la variabilidad
antigénica. El descubrimiento de la impresionante capacidad que los micoplasmas poseen
para mantener una arquitectura de superficie que es antigénicamente y funcionalmente
versátil situó a estos microorganismos en el grupo de ―elite‖ de bacterias patógenas y
parásitos, distinguiéndose por su sorprendente variabilidad antigénica. Esta versatilidad
constituye una estrategia de supervivencia de los micoplasmas en los organismos que
parasitan. Para su diagnóstico y caratcerización se han desarrollado técnicas que van
desde el cultivo microbiológico hasta el empleo de técnicas moleculares. En Cuba fueron
aislados por primera vez a inicio de los 80s y desde entonces se han reportado afectando a
bovinos, aves, cerdos y otras especies de interés veterinario. MYCOLAB es el único
laboratorio, a nivel nacional, que realiza investigaciones en el tema de la micoplasmología,
cuenta con un sistema de calidad bajo la norma ISO/IEC: 17025 para laboratorios
157 acreditados y ha desarrollado un sistema de diagnóstico que incluye técnicas de
diagnóstico desde el cultivo microbiológico, pruebas bioquímicas, serológicas y varios
ensayos moleculares como la Hibridación de acidos nucleicos (HAN) y diversos ensayos
de PCR (simple, anidado, RFLP, RAPD, DGGE). La aplicación de estas técnicas ha
permitido la detección, aislamiento y caracterización filogenética de estos microorganismos
que afectan a especies de interes económico. El presente trabajo tiene como objetivo
mostrar las experiencias de Cuba en el aislamiento y caracterizacion de micoplasmas que
afectan especies de interés económico.
VACD-O-5. DIAGNÓSTICO Y CARACTERIZACIÓN MOLECULARES EN
BACTERIOLOGÍA VETERINARIA EN CUBA Ivette Espinosa Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Cuba Los métodos convencionales que se utilizan en el diagnóstico bacteriológico se basan en la
detección de características fenotípicas como las propiedades culturales, tintoriales y
bioquímicas. Estos ensayos pueden resultar subjetivos e ineficientes, fundamentalmente
cuando se trata de entidades microbianas que provienen de poblaciones heterogéneas
donde existe una microflora comensal abundante, incluso cuando podrían estar presentes
cepas avirulentas de la especie de interés. Los procedimientos basados en la detección de
marcadores específicos en el genoma, orientan la detección de los aislados con
potencialidades genéticas de expresar factores que contribuyen a su virulencia. En
nuestras condiciones la utilización de ensayos moleculares como la reacción en cadena de
la polimerasa ha permitido la detección de diferentes genotipos de Streptococcus suis y
Pasteurella multocida, entidades asociadas a diferentes manifestaciones clínicos en
cerdos. Los aislados de S.suis del genotipo cps2j-serotipo2 que provenían de animales con
procesos invasivos resultaron negativos para los tres marcadores suilisina (syl), factor
extracelular (ef) y muramidasa (mrp), mientras los aislados de pulmón de este serotipo
evidencian los tres marcadores génicos. Estos datos contribuyen al conocimiento de la
enfermedad, al diagnóstico diferencial de los procesos respiratorios en el cerdo y al
desarrollo de medidas encaminadas a su control.
VACD-O-6. Conferencia Dr. Andrew Potter, Director Vaccine and infectious Disease Organization (VIDO) Canada VACD-O-7. MicroRNAs CODIFICADOS POR VIRUS QUE AFECTAN AL CERDO / MicroRNAs ENCODED BY VIRUSES AFFECTING SWINE. Jose Ignacio Nuñez, CReSA, España
158 VACD-O-8. UNMASKING THE PROTECTIVE MECHANISMS AGAINST CLASSICAL SWINE FEVER VIRUS: IMPLICATIONS FOR VACCINE DEVELOPMENT / DESENMASCARANDO LOS MECANISMOS DE PROTECCIÓN CONTRA EL VIRUS DE LA PESTE PORCINA CLÁSICA: IMPLICACIONES PARA EL DESARROLLO DE VACUNAS. Llilianne Ganges, CReSA, España
VACD-O-9. COMPUTER AIDED IDENTIFICATION OF POTENTIAL ANTIBACTERIAL VACCINE TARGETS
J.A. Agüero*, L. Aguilar-Bultet*, Y. Estévez-Diepa**, Y. Abreu-Jorge** and A. Lage-Castellanos*** *Microbial Genomics and Bioinformatics Laboratory. Molecular Biology Department. Microbiology Direction. National Center for Animal and Plant Health (CENSA), Havana. Cuba. [email protected] **Computer Science Department, Direction of Technological Innovation Management, National Center for Animal and Plant Health (CENSA), Havana. Cuba. *** Statistics and Mathematics Department, Cuban Neuroscience Center. Havana. Cuba. Vaccinology has proved to be very effective in preventing infectious bacterial diseases.
However, there are several human and animal pathogens for which vaccines have not yet
been discovered. The advent of the genomic era has recently led to a new generation of
rationally designed vaccines developed using reverse vaccinology. This approach reduces
the time required for the identification of candidate vaccines and provides new solutions for
those vaccines which have been difficult or impossible to develop. A candidate vaccine
should be highly expressed, available for immune surveillance, and possess epitopes that
the host recognises. For this reasons the pathogenic genome should be scanned for open
reading frames, sub-cellular location of predicted proteins, their functions and antigenic
characteristics of them. Predicting such diverse properties remains challenging. No one
method is universally applicable and successful; rather we need to integrate several
approaches in our research. An appraisal of a possible methodology to access these issues
is presented and discussed.
VACD-O-10. AVANCES EN LA GENERACIÓN DE LAS VACUNAS VETERINARIAS Y
SU PERSPECTIVA DE DESARROLLO INDUSTRIAL.
Siomara Martínez, B. Corona Grupo de Biología Molecular, Dirección de Microbiología. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). [email protected] La vacunación continúa siendo la vía más sostenible y de mayor impacto en el control de
enfermedades infecciosas, dado por la mayor factibilidad económica, a lo que se agrega el
problema que representa la resistencia de los patógenos a antibióticos. En este sentido, las
vacunas resultantes de la biotecnología desempeñan un papel importante en el control y la
vigilancia de algunas de las enfermedades animales más importantes, zoonosis y
159 seguridad alimentaria. La obtención de las nuevas generaciones de vacunas a ciclo
cerrado, deben pasar por diferentes requerimientos que transitan desde la investigación
básica, pasando por pruebas de concepto que demuestren su robustez pero considerando
imperativos comerciales, requerimientos locales con respecto a la enfermedad así como
las perspectivas globales del control de la misma. A esto debe agregarse las regulaciones
cada vez mayores de bioseguridad y Calidad. Otros criterios a tener en cuenta están
relacionados con que las producciones de las vacunas dirigidas a los animales de
producción se caracterizan por ser grandes pero obtenidas a bajo costo.
Sobre las vacunas de nuevas generaciones existen presiones regulatorias y legales cada
vez mayores sobre todo las que contienen organismos vivos genéticamente modificados
así como fuertes medidas de Bioseguridad relacionadas con las enfermedades zoonóticas,
liberación al ambiente y los patógenos transmitidos por alimentos. Uno de los aspectos
que más inciden en la factibilidad de producción de las vacunas dirigidas a los animales
son los relacionados con los sistemas productivos donde las regulaciones cada vez
mayores, las Buenas Prácticas de Producción, así como los retos de las producciones de
antígenos a gran escala unido a cambios en los Sistemas productivos y las nuevas
formulaciones de los medios de cultivo, encarecen los mismos. En el trabajo se realiza un
análisis de las tendencias de las nuevas generaciones de Vacunas Veterinarias desde una
Perspectiva Industrial.
VACD-O-11. 3RS ALTERNATIVE METHODS FOR POTENCY AND SAFETY TESTING OF VETERINARY VACCINES: A CURRENT OVERVIEW AND NEW TRENDS / 3R MÉTODOS ALTERNATIVOS PARA LAS PRUEBAS DE POTENCIA Y LA SEGURIDAD DE LAS VACUNAS VETERINARIAS: UNA VISIÓN ACTUAL Y NUEVAS TENDENCIAS. Mario Landys, Instituto Finlay, Cuba
PRESENTACIONES EN CARTELES / POSTER PRESENTATIONS
VACD-1. FACTIBILIDAD DEL USO DE LA PROTEÍNA RECOMBINANTE VP3 DE
GUMBORO EN UN ENSAYO INMUNOENZIMÁTICO TIPO ELISA
A. Alfonso y J. Noda
Dirección de Microbiología, Grupo de Virología Animal. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Apartado 10, San José de las Lajas, La Habana, Cuba. Correo electrónico: [email protected]
Nuestro objetivo fue demostrar la factibilidad del empleo de la proteína recombinante VP3
del virus de la enfermedad de Gumboro para el desarrollo de un ELISA indirecto que
permita detectar anticuerpos específicos a esta proteína. Los sueros positivos se
obtuvieron por inoculación experimental. Se empleo el formato de ELISA indirecto y se
titularon los reactantes por el método de tablero de ajedrez. Para la realización del ELISA
160 indirecto una placa de 96 pozos fue recubierta con la proteína recombinante VP3 a razón
de 5 ug/ml y se emplearon diluciones de suero y conjugado de 1:100 a 1:600 y de 1:12500
a 1:100000 respectivamente. Los resultados arrojaron una excelente diferenciación entre
los sueros positivos y negativos en las diferentes diluciones, sobre todo en las diluciones
inferiores. Se apreció una disminución progresiva de la densidad óptica del suero positivo
con el aumento de las diluciones del mismo y del conjugado, a excepción del negativo,
demostrando una reacción específica del analito (IgY) por la proteína VP3. Pudimos
determinar que tanto los reactivos, metodología y protocolos seleccionados nos permiten
distinguir muy bien entre los sueros positivos reactivos a VP3 y los negativos,
demostrándose además que dicho ensayo poseía una tendencia a dar muy poco fondo.
Con estos resultados podemos concluir que el uso de la proteína recombinante VP3 de
Gumboro es factible para su empleo en el desarrollo de un ensayo inmunoenzimático tipo
ELISA.
VACD-2. DETECCIÓN DE BRONQUITIS INFECCIOSA Y METAPNEUMOVIRUS AVIAR MEDIANTE RT-PCR EN MUESTRAS CLÍNICAS DE AVES CON PROCESOS
RESPIRATORIOS Ana M. Acevedo*, M. Colás**, Y. Burgher*, D. Relova*, A. Merino**, J. Noda*. *Grupo de Virología Animal, Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Apartado 10, San José de las Lajas, La Habana, Cuba. [email protected] ** Laboratorio de Investigación y Diagnóstico Aviar (LIDA. La Habana. Cuba. El virus de la bronquitis infecciosa y el metapneumovirus aviar son dos agentes infecciosos
virales con manifestaciones clínicas muy semejantes que provocan un impacto económico
severo en la industria avícola. Para identificar la posible presencia de estos agentes en
aves con clínica respiratoria, se obtuvieron muestras de tráquea pulmón y exudados
traqueales procedentes de cinco granjas de ponedoras. El diagnóstico virológico se realizó
por aislamiento viral en embrión de pollo y la identificación por RT-PCR específico para
bronquitis y metapneumovirus aviar. Se obtuvo aislamiento viral de bronquitis en tres de las
granjas evaluadas y la detección directa del virus por RT-PCR tanto a partir de la muestra
clínica como de los aislados obtenidos. En las poblaciones evaluadas no se detectó
metapneumovirus aviar, no obstante se cuenta con la metodología de diagnóstico para la
detección e identificación por métodos moleculares y convencionales de este agente, no
disponible anteriormente en el país.
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VACD-3. COMPORTAMIENTO DE LA RABIA HUMANA EN HUAMBO, ANGOLA EN LOS AÑOS 2008-2009
A.M.A.F. Pereira*, J. Morais*, M.A. Abeledo**, E. Roque***, J. Álvarez ***, A. José**** B.C.N Canele***** *Facultad de Medicina Veterinária Huambo-Universidad José Eduardo dos Santos, Huambo, Angola **Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Mayabeque, Cuba ***Universidad Agraria de la Habana, Cuba ****Dirección General del Instituto de los Servicios de Veterinaria *****ADRA-Angolana Acción para el Desarrollo Rural y Ambiente correo electrónico: [email protected] La rabia es una zoonosis reportada por la Organización Mundial de la Salud con una
elevada mortalidad en África e Asia. Estudios realizados en Angola en las décadas de
1930- 1960 hacen mención a los perros como principales transmisores de la enfermedad
diagnosticada en caninos salvajes en el laboratorio. En los últimos años se registra un
número elevado de casos en el país, lo que crea un impacto de gran importancia para la
salud pública. En este trabajo se analiza el comportamiento de la rabia humana en los
años 2008 y 2009 en Huambo y para ello se obtuvieron los datos de los registros del
Hospital General de Huambo, Departamento de Salud Pública de Huambo, informes
anuales de la Dirección General y Provincial de Huambo del Instituto de los Servicios de
Veterinaria, e Informes Síntesis del Municipio Sede do Huambo. Los indicadores
analizados fueron los casos de rabia humana, número de personas mordidas y la
cobertura vacunal animal. El mayor número de casos se registro en el municipio de
Huambo sede y la franja etaria más afectada fue el grupo de 1-10 años. La tasa de
mortalidad calculada en humanos fue de 0,96 % en 2008 y se incrementó a 1% en 2009,
a pesar de registrarse un incremento del número de animales vacunados. Se concluye que
es necesario incrementar la vigilancia epidemiológica y el control de esta zoonosis en la
provincia de Huambo, así como implementar labores educativas en las comunidades.
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VACD-4. ESTABLECIMIENTO DE UN PROGRAMA DE EDUCACIÓN SANITARIA SOBRE LA RABIA EN LA PROVINCIA DE HUAMBO, ANGOLA
A.M.A.F Pereira*, J. Morais*, M.A. Abeledo**, E. Roque***, J. Álvarez***, B.C.N Canele***** *Facultad de Medicina Veterinária Huambo-Universidad José Eduardo dos Santos, Huambo, Angola. [email protected] **Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Mayabeque, Cuba. ***Universidad Agraria de la Habana, Mayabeque, Cuba. ****Dirección General del Instituto de los Servicios de Veterinaria. *****ADRA – Acción Angolana para el Desarrollo Rural y Ambiente. La rabia es considerada una zoonosis mundial, siendo África e Asia los continentes que
registran el mayor número de casos. Se estima una mortalidad humana mundial de la
rabia canina de 55.000 muertes al año. Varios son los factores que concurren para el
fracaso del combate contra esta zoonosis siendo los principales: el nivel bajo de
compromiso político, la falta de datos cuantitativos y el bajo nivel de educación de la
población. En este trabajo se presentan los resultados de un programa de educación
comunitaria en el municipio Huambo sede, que contó con la integración de los líderes
tradicionales, profesores (las escuelas), dirigentes políticos, y técnicos de salud y
veterinaria con el objetivo de sensibilizar a la población, principalmente niños e jóvenes de
los riesgos, prevención y actuación durante la exposición a la enfermedad.
VACD-5. DETERMINACION DE LA EXTENSIDAD DE INVASION POR FASCIOLA SPP.
EN REBAÑOS BOVINOS EN HUAMBO, ANGOLA Kialanda M. Monteiro-Noel*, L. Mutaquileno-Lucas*, E. Roque-López**, R. Castillo-Torres***, M. I. Percedo-Abreu**** *Universidade José Eduardo Dos Santos, Faculdade Medicina Veterinaria, Huambo, Angola. [email protected] **Faculdad de Medicina Veterinaria, Universidad Agraria de la Habana (UNAH), Cuba ***Universidad de Matanzas, Faculdad de Medicina Veterinaria, Matanzas, Cuba. ****Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Mayabeque, Cuba En Angola están identificadas las especies Fasciola hepatica y F. gigantica afectando a los
rebaños bovinos. Con el objetivo de determinar el nivel de infestación por Fasciola spp. en
la provincia de Huambo se realizó muestreo coprológico en rebaños bovinos de sistemas
extensivos de producción de carne, por ser este el principal tipo de ganadería en el
territorio. Los muestreos se realizaron durante el período de noviembre/2009 a
noviembre/2010. Las muestras de heces fecales se tomaron directamente del recto de los
animales de diferentes categorías zootécnicas (terneros, novillas y adultos). Se investigó el
49 % del total de bovinos de los rebaños objeto de estudio, de los cuales 1101 resultaron
positivos (864 adultos, 173 novillas y 74 terneros), para un 76,14 % de extensión de
invasión (E.I) por Fasciola spp. Aunque la E.I fue mayor en unos municipios que en otro,
163 en general fue muy alta la prevalencia de animales infectados en todos ellos. Por otra
parte, la mayor EI se observó en los rebaños estudiados en los meses de noviembre y
diciembre de 2009, correspondientes a la época de lluvia.
VACD-6. ANÁLISIS DE CEPAS DE ANAPLASMA MARGINALE UTILIZANDO LAS
SECUENCIAS REPETIDAS DE LA PROTEÍNA PRINCIPAL DE SUPERFICIE 1A (MSP1A)
Belkis Corona, A. Rodríguez, S. Martínez Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Apartado 10, San José de las Lajas, La Habana, Cuba. [email protected] Anaplasma marginale es un patógeno del ganado bovino, que causa severas pérdidas
económicas en las regiones tropicales y subtropicales. Las proteínas principales de
superficie de los cuerpos iniciales de este hemoparásito están involucradas en las
interacciones patógeno-hospedero y garrapata-patógeno y han sido utilizadas como
marcadores para la caracterización genética de cepas de Anaplasma marginale y estudios
filogenéticos. La proteína MSP1a varía entre cepas de regiones geográficas diferentes en
el número y secuencias de las regiones repetidas en tandem en la región amino-terminal.
En el presente estudio caracterizamos 24 cepas de Anaplasma marginale utilizando la
secuencia descrita para la proteína MSP1a. Estos resultados corroboran la heterogeneidad
de cepas de Anaplasma marginale en regiones endémicas y que el análisis filogenético de
las secuencias repetidas en tandem de esta proteína MSP1a no resulta en clusters
relacionados con el origen geográfico de las cepas, pero contribuye a entender la
diversidad genética y la evolución de A. marginale.
VACD-7. DETECCION DE ANAPLASMA MARGINALE EN BUFALOS (BUBALUS BUBALIS) DE LA REGIÓN OCCIDENTAL DE CUBA MEDIANTE UN ENSAYO DE
NPCR.
D. Obregón*, E. Roque*, M. Santos**, S. Martinez**, A.H. Fonseca***, B. Corona** *Universidad Agrária de La Habana, Autopista Nacional Km 23 ½, Mayabeque, Cuba. [email protected] **Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Autopista Nacional, Km 23 ½, Mayabeque, Cuba ***Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, BR 465, Km 7, Seropédica,R.J, Brasil. La especie bubalina fue introducida en Cuba recientemente, mostrando excelentes
resultados productivos y reproductivos. La situación de salud en ellos ha sido poco
estudiada, aunque se reconoce su resistencia natural a varias enfermedades reportadas en
el país, incluidas las hemoparasitosis. Los búfalos también son susceptibles a la infección
por Anaplasma marginale, pero la anaplasmosis clínica difícilmente se presenta,
164 permaneciendo como portadores asintomáticos, lo que facilita la trasmisión a los bovinos.
El presente trabajo tuvo como objetivo determinar la presencia de A. marginale en búfalos
de la región occidental de Cuba. Para ello se desarrolló un ensayo de nPCR, a partir de la
amplificación del gen msp5 de este hemoparásito. Se analizaron 52 muestras de ADN,
extraído de sangre de animales, seleccionados al azar en 6 granjas del occidente de Cuba,
a los que se le realizó Frotis Sanguíneo. Del total de muestras analizadas, 47 (90,4%)
muestras resultaron positivas por el nPCR, visualizándose en todos los casos una banda
de 345 pb, mientras que solo 5 animales (9,6%) fueron positivos en el Frotis Sanguíneo,
sin diferencias significativas entre las proporciones, según las granjas de procedencia, o
las categorías de los animales, confirmándose la presencia de A. marginale en búfalos en
esta región.
VACD-8. A SYBR GREEN-BASED REAL-TIME RT-PCR ASSAY FOR THE DETECTION
OF AVIAN H5 HEMAGGLUTININ SUBTYPES Carmen L. Perera*, L.J. Pérez*, H. Díaz de Arce*, F. Cilloni**, A. Salviato**, S. Marciano**, A. Salomoni**, M.S. Beato**, A. Romero**, I. Capua**, G. Cattoli** *Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Mayabeque, Cuba **Istituto Zooprofilattico Sperimentale delle Venezie, Research and Development Department, OIE/FAO and National Reference Laboratory for Newcastle Disease and Avian Influenza, OIE Collaborating Centre for Epidemiology, Training, and Control of Emerging Avian Diseases, Viale dell‘Università 10, Legnaro, Padova, Italy Accurate and rapid detection and subtyping of avian influenza outbreaks allows measures
to be implemented at a time when the disease situation is more amenable to control. In this
study a SYBR Green real time reverse transcription-PCR (RRT-PCR) was developed for
the detection of avian H5 hemagglutinin (HA) subtype. Sequence analysis of the Mexican
lineage H5N2 isolates (subgroup B) revealed several mismatches in the primer/hydrolysis
probe set reported in a previous RRT-PCR. To circumvent the challenge that these viruses
represent for the molecular diagnosis the present assay have been designed to detect all
North American H5 avian influenza isolates published in GenBank at present including the
low pathogenic H5N2 Mexican lineage. The method successfully detected a range of
different avian influenza strains belonging to subtype H5 from both Eurasian and North
American lineages representing different avian H5 clades from various geographic
locations. The linear ranges of the SYBR Green RRT-PCR assay span within 107-103
EID50/mL and 4.2 x 105-4.2 x 100 gene copies/µl. The analytical sensitivity of the RRT-PCR,
relative to the detectable infectious virus titer, was consistently observed to be 0.1
EID50/mL, and in terms of HA gene copy number, the limit of detection for the H5 reference
viruses was 4.2 gene copies/µl of in vitro transcribed RNA. The assay proved to be useful
165 for the detection of H5 avian influenza viruses in clinical samples from experimental and
natural infected birds.
VACD-9. REASSORTANT LOW PATHOGENIC AVIAN INFLUENZA H5N2 VIRUSES IN
AFRICAN WILD BIRDS Chantal J.Snoeck*, A.T. Adeyanju**, S. De Landtsheer*, U. Ottosson***, S. Manu**, W. Hagemeijer****, T. Mundkur****, C.P.Muller* *Institute of Immunology, Centre de Recherche Public-Santé/National Public Health Laboratory, 20A rue Auguste Lumière, L-1950 Luxembourg, Grand-Duchy of Luxembourg. Tel.: +352 490604 220, Fax: +352 490686. [email protected] **AP Leventis Ornithological Research Institute, University of Jos, Jos, Nigeria ***Ottenby Bird Observatory, Degerhamn, Sweden ****Wetlands International, Wageningen, the Netherlands Although wild birds are the major reservoir of low pathogenic avian influenza (LPAI) and
migratory flyways connect wildlife from Northern and Southern hemisphere, the presence
and persistence of avian influenza in African birds is poorly understood. As part of the
surveillance for highly pathogenic avian influenza (HPAI) H5N1 viruses in Africa, we
monitored avian influenza in wild and domestic birds in two different regions in Nigeria. We
found low pathogenic avian influenza (LPAI) H5N2 viruses in three Spur-winged Geese
(Plectropterus gambensis) in the Hadejia-Nguru Wetlands. Phylogenetic analyses revealed
that all genes, except NS, of the LPAI H5N2 viruses were more closely related to genes
recently found in wild and domestic birds in Europe. The NS genes formed a sister group to
other African NS genes. This suggested that the Nigerian LPAI H5N2 viruses found in wild
birds were reassortants exhibiting a NS gene that circulated for at least 7 years in African
birds, and is part of the African influenza gene pool, and genes that were more recently
introduced into Africa from Eurasia most probably by intercontinental migratory birds.
Interestingly the HA and NA genes formed a sister branch to HPAI H5N2 strains found in
the same wild bird species in the same wetland only one year earlier. The presence of LPAI
H5N2 in wild birds in the Hadejia-Nguru Wetlands where wild birds and poultry occasionally
mix provides ample opportunities for infections across species boundaries with the potential
risk of generating HPAI viruses after extensive circulation in poultry.
REFERENCES
CJ Snoeck, AT Adeyanju, S De Landtsheer, U Ottosson, S Manu, W Hagemeijer, T
Mundkur, CP Muller. Reassortant low pathogenic avian influenza H5N2 viruses in African
wild birds. J Gen Virol. Epub ahead of print
166
MF Ducatez, CM Olinger, AA Owoade, S De Landsheer, W Ammerlaan, HGM Niesters,
ADME Osterhaus, RA Fouchier, CP Muller. 2006. Avian flu: multiple introductions of H5N1
in Nigeria. Nature 442, 37.
MF Ducatez, CM Olinger, AA Owoade, Z Tarnagda, MC Tahita, A Sow, S De Landtsheer,
W Ammerlaan, JB Ouedraogo, ADME Osterhaus, RA Fouchier, CP Muller. 2007. Molecular
and antigenic evolution and geographical spread of H5N1 highly pathogenic avian influenza
viruses in western Africa. J Gen Virol 88, 2297-306.
VACD-10. NEUTRALIZING ANTIBODIES AGAINST PANDEMIC (H1N1) 2009,
SEASONAL H1N1 2007/2008 AND AVIAN-LIKE H1N1 SWINE INFLUENZA VIRUS IN SWINE CONTACTS, WESTERN-EUROPE
Nancy A. Gerloff*, L. Nina*, P. Weicherding**, C.P Muller* *Institute of Immunology, Centre de Recherche Public-Santé/National Public Health Laboratory, 20A rue Auguste Lumière, L-1950 Luxembourg, Grand-Duchy of Luxembourg. Tel.: +352 490604 220, Fax: +352 490686. [email protected] **Health Inspection, Health Directorate, 5A rue de Prague, L-2348 Luxembourg, Grand-Duchy of Luxembourg Serological studies for swine influenza viruses (SIVs) in humans with occupational
exposure to pigs have only been reported from the Americas, but not from Europe. Human
infections with SIV have been rare and mostly reported in contacts with swine (Myers,
Olsen et al. 2007), as serological studies suggest that swine workers are at increased risk
of zoonotic infection with SIV (Gray, McCarthy et al. 2007) (Newman, Reisdorf et al. 2008).
In this study, we analyzed neutralizing antibodies against pandemic H1N1 2009 influenza
virus, a 2007/2008 seasonal H1N1 virus and an avian-like, enzootic H1N1 SIV in 211 swine
contacts in Luxembourg compared to a matched general population. We showed that swine
workers have more often and higher titers of antibodies against pandemic flu and SIV than
the control population, and that these titers cannot be explained by cross-reactivity with
antibodies at least from recent seasonal flu. Antibodies against SIV and pandemic
correlated with each other but not with the 2007/2008 seasonal H1N1. Antibodies
neutralizing SIV were also found in the Luxembourg swine population. Sequential infections
with variants of human seasonal H1N1 viruses may have increased the chance of
serological cross-reaction with the antigenically distinct H1N1 viruses tested for. We
assume that these cross-reactive antibodies may provide some level of cross-protection but
further studies are required to determine to what extent the serological responses correlate
with infection.
167 REFERENCES
Gray, G. C., T. McCarthy, et al. 2007. "Swine workers and swine influenza virus infections."
Emerg Infect Dis 13(12): 1871-8.
Myers, K. P., C. W. Olsen, et al. 2007. "Cases of swine influenza in humans: a review of
the literature." Clin Infect Dis 44(8): 1084-8.
Newman, A. P., E. Reisdorf, et al. 2008. "Human case of swine influenza A (H1N1) triple
reassortant virus infection, Wisconsin." Emerg Infect Dis 14(9): 1470-2.
VACD-11. UNUSUAL HEPATITIS B VIRUS SUBGENOTYPE A AND ABSENCE OF
TYPICAL WEST AFRICAN GENOTYPES IN AFRICAN DESCENDANTS, HAITI Iris E. Andernach*, C. Nolte**, J.W. Pape**, C.P. Muller* *Institute of Immunology, Centre de Recherche Public-Santé/National Public Health Laboratory, 20A rue Auguste Lumière, L-1950 Luxembourg, Grand-Duchy of Luxembourg. Tel. : +352 490604 220, Fax : +352 490686. [email protected], **Les Centres GHESKIO, B.P. 15727, Port-au-Prince, Haiti In sub-Saharan Africa Hepatitis B virus (HBV) is highly endemic and most infections are
caused by genotype E and A. The low genetic diversity of genotype E, suggesting its short
natural history in Africa, is however difficult to reconcile with (a) its high prevalence and
extensive geographic spread and (b) a long natural history of genotype A in Africa. In Haiti,
with >90% of the population descending from African slaves, HBV infections were mostly
caused by genotype A1, today mainly found in East-Africa. Surprisingly, 20% belong to a
rare subgenotype A5, which so far was only found in the former Bight of Benin, a primary
slave trading post. A sizeable portion also belonged to genotype D (D4 and D3).
Phylogenetic analyses also indicate that Haitian A subgenotypes separated early from their
African ancestors and that similar genotype D3/D4 strains (and prevalences) are found in
Rwanda. In contrast, the most prevalent sub-/genotypes in West Africa of today (E and A3)
are very rare in Haiti. This strongly indicates that this genotype emerged in the general
population in Africa only after the transatlantic slave trade had come to an end, e.g. within
the last 200 or 300 years, and explains the low genetic diversity of genotype E. The high
prevalence of HBV genotype E in large part of Africa further suggests that HBV
hyperendemicity is a recent phenomenon, and probably the result of the extensive use of
unsafe needles, therefore shedding new light on the current African genotype E puzzle in
Africa.
REFERENCES
Andernach, I. E., J. M. Hubschen, and C. P. Muller. 2009. Hepatitis B virus: the genotype E
puzzle. Rev Med Virol 19:231-40.
168
Andernach, I. E., C. Nolte, J. W. Pape, and C. P. Muller. 2009. Slave Trade and Hepatitis B
Virus Genotypes and Subgenotypes in Haiti and Africa. Emerg Infect Dis 15:1222-8.
Hubschen, J. M., J. Mugabo, C. A. Peltier, J. C. Karasi, A. Sausy, P. Kirpach, V. Arendt,
and C. P. Muller. 2009. Exceptional genetic variability of hepatitis B virus indicates that
Rwanda is east of an emerging African genotype E/A1 divide. J Med Virol 81:435-40.
VACD-12. EFFECT OF COILED-COIL PEPTIDES ON A TYPE III SECRETORY SYSTEM
MEDIATED MODEL OF BACTERIAL PATHOGENICITY
M. Larzábal*, E. Zotta***, B.C. Rabinovitz**, Elsa C. Mercado**, Á. Cataldi*. *Instituto de Biotecnología and **Instituto de Patobiología, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria, Los Reseros y Las Cabañas, (1712) Castelar, Buenos Aires, Argentina. [email protected] ***Laboratorio de Fisiopatogenia, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires, Paraguay 2155 (1121) C.A. Buenos Aires, Argentina. Many animal and human pathogenic gram-negative bacteria such as Salmonella,
Enterohmorrhagic (EPEC) and Enteropathogenic (EHEC) Escherichia coli, Yersinia
possess a type III secretion system (TTSS) that is used to deliver virulence proteins directly
into the host cell. In this study we assayed coiled-coil peptides, previously tested as
effective against TTSS from EPEC and EHEC, in a mice model of Citrobacter rodentium
infection. For this, a group of 5 C57BL/6J mice (Group 1) was orally treated daily with CoilA
and CoilB peptides prior to challenge with C. rodentium and for 6 days after inoculation
(dpi). Group 2 was the untreated control. Both groups were orally inoculated on day 8 with 5
x 109 CFU of a strain of C. rodentium. Stool samples were recovered at different dpi to
determine the number of CFU/g of feces. Group 1 excreted a smaller amount of CFU/g
during the first 3 dpi, compared to Group 2. After sacrifice at 13 dpi, small and large
intestine samples were taken for histological analysis. Colon samples of the untreated
group showed areas with loss of superficial epithelium, damaged cells and endoluminal
mononuclear inflammatory infiltrate, consistent with histological lesion induced by
C.rodentium. Mice treated with peptides CoilA and CoilB kept normal the surface epithelium
showing a similar structure as an uninfected control group. These results suggest that pre-
treatment with coiled-coil peptides prevents colon damage of mice inoculated with C.
rodentium. These encouraging results prompted us to test coiled-coil peptides as treatment
or vaccines in other models of bacterial infections.
REFERENCES
Larzábal M, Mercado EC, Vilte DA, Salazar-González H, Cataldi A, Navarro-García F.
2010. Designed coiled-coil peptides inhibit the type three secretion system of
169 enteropathogenic Escherichia coli. PLoS ONE; 5(2): e9046.
doi:10.1371/journal.pone.0009046.
Vilte DA, Larzábal M, Cataldi AA, Mercado EC. 2008. Bovine colostrum contains
immunoglobulin G antibodies against Intimin, EspA, and EspB and inhibits hemolytic
activity mediated by the type three secretion system of attaching and effacing Escherichia
coli. Clin Vaccine Immunol; 15:1208-13.
Johnson-Henry KC, Nadjafi M, Avitzur Y, Mitchell DJ, Ngan BY, Galindo-Mata E, Jones NL,
Sherman PM. 2005. Amelioration of the effects of Citrobacter rodentium infection in mice by
pretreatment with probiotics. J Infect Dis; 191:2106–17.
VACD-13. VIRULENCE GENES OF ESCHERICHIA COLI STRAINS ISOLATED FROM
CALVES IN BUENOS AIRES, ARGENTINA
D.A. Vilte, B.C. Rabinovitz, A.M. Elizondo, Elsa C. Mercado Instituto de Patobiología, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria, Los Reseros y Las Cabañas, (1712) Buenos Aires, Argentina. [email protected] Several virulence factors homologous to those identified in Escherichia coli pathogenic for
humans, have been recognized in E. coli isolated from diarrheic calves, and eventually,
healthy animals. In this study we investigated the virulence profile of E. coli strains isolated
from 137 diarrheic or septicemic calves less than 90 days old submitted for diagnostic by 38
farms during 2007-2010. Three multiplex PCRs were used to determine 15 virulence genes
on 410 E. coli isolates. P, Afimbrial Afa-8, F17 and S adhesins were identified in 52%, 42%,
29% and 3% of animals, respectively. The gene eae, associated to a type 3 secretion
system, was detected in 12% of animals, while the Cytolethal Distending Toxin III and IV,
Cytotoxic Necrotizing Factor (CNF) 2 and Shiga toxin (Stx) encoding genes were detected
in isolates from 18%, 7%, 13% and 12% of animals, respectively. F5, F41, heat-stable
enterotoxin a, Stx2 and CNF1 encoding genes were not detected. Aerobactin gene was
identified in isolates from 50% of animals. Enterohemolysin and alfa-hemolysin were
produced by isolates from 14% and 8% of animals, respectively. E. coli isolates showed
adhesins that allow them to colonize and in some cases destroy the bovine intestinal
microvilli, and toxins that are highly cytotoxic to epithelial cells. These results suggest that
the strains of E. coli isolated in Argentina from diarrheic or septicemic calves do not belong
to a pathotype stable characteristic, such as enterotoxigenic, but have a variable profile of
virulence. That should be taken into account to design new vaccines.
REFERENCES
Van Bost S, Jacquemin E, Oswald E, Mainil J. 2003. Multiplex PCRs for identification of
necrotoxigenic Escherichia coli. J Clin Microbiol, 41:4480-2.
170
Franck SM, Bosworth B, Moon HW. 1998. Multiplex PCR for enterotoxigenic, attaching and
effacing, and Shiga toxin-producing Escherichia coli strains from calves. J Clin Microbiol,
36:1795-7.
VACD-14. 16S rDNA PCR - DENATURING GRADIENT GEL
ELECTROPHORESIS (DGGE) AND AMPLIFICATION OF INTERGENIC SPACER REGION 16S- 23S rRNA GENE IN STUDY OF CUBAN ISOLATE OF MYCOPLASMA
HYOPNEUMONIAE
Evelyn Lobo*, C. Poveda**, A. Suárez**, Y. Hernández*, A. Ramírez**, J.B. Poveda**
*Laboratorio de Diagnóstico de Micoplasmas (MYCOLAB), grupo de Biología Molecular, Dirección de Microbiología, CENSA, Cuba. [email protected] **Laboratorio de Diagnóstico de Micoplasmas, Instituto Universitario de Sanidad Animal (IUSA), Universidad de Las Palmas de Gran Canarias, España
In Cuba has been detected in the presence of Mycoplasma hyopneumoniae (M.
hyopneumoniae) from lungs with lesions typical of enzootic pneumonia, but never there has
been a study of molecular characterization of this microorganism. The aim of this study was
to investigate the heterogeneity of isolates of M. hyopneumoniae by DGGE technique
(denaturing gradient gel electrophoresis). The results obtained in the characterization of
isolates of M. hyopenumoaniae, determined the presence of at least three different
genotypes circulating in the western and central regions of the country. The difficulties in
the identification by traditional breeding techniques in the case of porcine mycoplasmas and
the advantages of DGGE in the rapid detection and differentiation of isolated makes this
technique a very useful tool for studies of characterization of these microorganisms
VACD-15. COMPARACIÓN FILOGENÉTICA DE AISLADOS DE MYCOBACTERIUM
BOVIS OBTENIDOS DE GANADO SACRIFICADO EN RASTROS DE BAJA CALIFORNIA
C. Martínez-Vidal*, S. Hori-Oshima*, A. De la Mora-Valle*, R.M. Bermúdez-Hurtado*, L. Galván-Lara**, T.B. Rentería-Evangelista*, G. López-Valencia*, G.E. Medina-Basulto*.
*Instituto de Investigaciones en Ciencias Veterinarias UABC. Obregón y Julián Carrillo S/N Col. Campestre CP. 21386, Mexicali Baja California, México. Tel/Fax: (686) 5 63 69 06. [email protected] **Rastro TIF 54. Km. 9.5 Carret. Mexicali-San Felipe S/N Col. Colorado VII, Mexicali Baja California, México. En México, la Tuberculosis bovina (TBB) es uno de los principales problemas que enfrenta
la ganadería y es un serio problema de salud pública. Las diferentes técnicas de
genotipificación pueden ayudar a establecer la relación que existe entre las diferentes
cepas presentes en una región y determinar algunos factores que incidan posteriormente
en los programas de control y erradicación de la enfermedad. En el presente trabajo se
171 aplicó la técnica de VNTR a 11 aislados provenientes de ganado sacrificado en un rastro
de Mexicali B.C. y a 10 aislados de ganado sacrificado en un rastro de Tijuana B.C. Se
utilizaron oligonucleótidos específicos para amplificar los loci ETR-A, ETR-B, QUB11a,
QUB11b, QUB1895, QUB26, QUB3232 y QUB3336, determinándose el parentesco relativo
entre las cepas aisladas, así como el poder discriminatorio para cada locus en particular y
para todos los loci en su conjunto. Se obtuvieron 14 perfiles alélicos al utilizar los 8 loci con
un poder discriminatorio de 0.90 siendo el locus QUB 3336 el que mostró el mayor poder
discriminatorio (h=0.72) en tanto el locus ETR-B mostró un nulo poder discriminatorio
(h=0.00). En un dendrograma, se observaron 6 grupos genéticos, en los cuales se
encuentran indistintamente aislados de Tijuana y Mexicali Baja California, sin embargo, se
encontraron genotipos específicos para cada una de las dos regiones. Los resultados
sugieren que aúnque el movimiento de ganado y la compra venta en la región han
provocado la dispersión de cepas en estas dos áreas, se puede discernir el origen de la
mayoría de los aislados.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Martinez LR, Harris B, Black IV WC, Meyer RM, Brennan PJ, Vissa VV, Jones RL. 2008.
Genotyping North American animal M. bovis isolates using multilocus variable number
tandem repeat analisis. J Vet Diagn. Invest; 20: 707-715.
Roring S, Alistair NS, Hewinson RG, Neill SD, and Robon AS. 2004. Evaluation of variable
number tandem repeat (VNTR) loci in molecular typing of Mycobacterium bovis isolates
from Ireland. Vet. Microbiol; 101: 65-73.
VACD-16. DEVELOPMENT AND VALIDATION OF A NOVEL SYBR GREEN 1 REAL-
TIME RT-PCR ASSAY FOR DETECTION OF CLASSICAL SWINE FEVER VIRUS VALIDATED IN DIFFERENT REAL-TIME PCR PLATFORMS
Heidy Díaz-de Arce*, L.J. Pérez*, J. Tarradas**, R. Rosell**,***, C.L. Perera*, M. Muñoz**, M.T. Frías*, J.I. Nuñez**, Ll. Ganges**. *Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), La Habana, Cuba. **Centre de Reserca in Sanitat Aimal (CReSA), UAB Bellaterra, 08193 Barcelona, Spain. ***Departament d´Agricultura, alimentación i Acció Rural de la Generalitat de Catalunya 10 (DAR), Spain. Classical swine fever is a highly contagious viral disease causing severe economic losses
in pig production almost worldwide. The rapid dissemination of the virus and the variability
of the clinical signs demand the adoption of rapid and accurate methods for CSFV detection
as basis for the implementation of effective control measures. Here we describe the
development and evaluation of a novel quantitative real time RT-PCR assay for the
detection of CSFV based on SYBR-Green coupled to melting curve analysis. The analytical
172 and diagnostic performances of the method using two real time PCR instruments were
compared. The assay was specific and proved to detect the major genotypes of CSFV. The
assay limit of detection in cell culture medium and serum was 0.1TCID50/reaction and 1
TCID50/reaction in tissue homogenate for both platforms. The limit of detection was 1, 10
and 102 gene copies/µL when nuclease free water, serum and tissue homogenate were
used as sample matrices, repectively, for both instruments. The assay analysis of 108
tissue homogenate and serum samples from naturally and experimentally CSFV infected
and non-CSFV infected animals proved that the SYBR-Green real time RT-qPCR for
diagnosis and quantification of CSFV provides a highly sensitive and specific method for
classical swine fever diagnosis.
VACD-17. ESTUDIO RETROSPECTIVO DE AGENTES INFECCIOSOS QUE AFECTAN LA REPRODUCCION BOVINA EN EL DEPARTAMENTO DEL CAQUETÁ, COLOMBIA
J.L. Motta-Giraldo*, I. Y. Waltero-García**, M. A. Abeledo***, O. Fernández*** *Florencia, Caquetá, Colombia. [email protected] **Laboratorio de Diagnóstico Veterinario ICA, Florencia, Caquetá, Colombia. ***Dirección de Salud y Producción Animal, Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Mayabeque, Cuba. Los agentes infecciosos que afectan la reproducción bovina causan un gran efecto sobre la
producción, amenazando la potencialidad pecuaria de cualquier región. Para conocer el
comportamiento de los agentes infecciosos que afectan la reproducción, se analizaron los
resultados de las investigaciones serológicas para brucelosis, leptospirosis, herpesvirus
bovino -1 (HVB-1), diarrea viral bovina (DVB) y Neospora caninum, de los casos enviados
al laboratorio por los propietarios de los hatos bovinos en el departamento del Caquetá,
Colombia, en los años 1999 - 2009. La información fue obtenida de la base de datos del
ICA (Instituto Colombiano Agropecuario), seccional Caquetá. Los mayores porcentajes de
animales seropositivos se concentraron en los municipios del norte, centro y oriente del
departamento, mientras que al sur fue menor. Los animales seropositivos en promedio por
meses durante los 11 años fueron estables para brucelosis; para IBR y DVB se
acumularon principalmente en los meses del segundo semestre, mientras que para
Leptospirosis entre Junio y Septiembre. En el caso de Neospora, las investigaciones
comenzaron en 2007 y en los 3 años solo se trabajaron 36 muestras, de las cuales 12
fueron positivas (33,3%). Se concluye que aunque la tasa investigación fue baja, los
agentes infecciosos que afectan la reproducción parecen ser de importancia en el
departamento de Caquetá y es necesario profundizar en su papel entre las causas de
problemas reproductivos.
173
VACD-18. MOLECULAR DETECTION OF TORQUE TENO SUS VIRUS IN LYMPHOID TISSUES IN CONCOMITANT INFECTIONS WITH OTHER PORCINE VIRAL
PATHOGENS L.J. Pérez*, Heidy Díaz-de Arce*, M.T. Frias*, C.L. Perera*, Ll. Ganges*, J.I Núñez ** *Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), La Habana, Cuba **Centre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA), UAB-IRTA, Campus de la Universitat Autònoma de Barcelona, 08193 Bellaterra, Barcelona, Spain In this study, 40 pigs with respiratory and wasting disorders from Cuban swine herds were
screened by PCR for the presence of TTSuV1, TTSuV2, PCV-2, PPV and CSFV in spleen
samples. Besides, the variability of the porcine TTSuV sequences obtained was
investigated by phylogenetic analysis. The current study showed for the first time the
presence of TTSuV1 and TTSuV2 in Cuban swine herds. The investigation revealed the
following infection rates: TTSuV1 40%, TTSuV2 37.5%, PCV-2 70%, PPV 37.5% and CSFV
in 52.5%. The presence of two or more of these viruses in different rates in the same
spleen samples was revealed. Also, a higher genetic diversity of TTSuV2 sequences was
observed regarding TTSuV1 sequences.
VACD-19. GESTIÓN DE LA SEGURIDAD BIOLÓGICA EN EL LABORATORIO DE
VIROLOGÍA DEL CENSA
Marvis E. Suárez-Romero, V.V. Barceló-Pérez, L. Pastor-Chirino. Centro Nacional de Seguridad Biológica, CSB, ORASEN-CITMA. Calle 28 No. 502, CP 11300, Playa, C. Habana, Cuba. Telf. 2023255. [email protected] El trabajo en las instalaciones destinadas a la sanidad animal presentan riesgos de
contaminación para el trabajador y el medio ambiente, situación que la bioseguridad debe
considerar para establecer criterios de seguridad que han de tenerse en cuenta durante su
diseño y explotación (Rodríguez J, 2007) Se reconoce internacionalmente que los agentes
biológicos utilizados en dichas instalaciones pudieran tener efectos adversos sobre la salud
humana, animal y la biodiversidad si no son manipuladas correctamente en sus diferentes
actividades o conservadas en instalaciones no seguras.
El Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria solicitó autorización al Centro Nacional de
Seguridad Biológica (CSB) para la explotación del laboratorio de virología, en el cual se
llevan a cabo actividades con cepas virales veterinarias para el diagnóstico y la obtención
de vacunas. Dicho laboratorio fue sometido a una evaluación de riesgo teniendo en cuenta
el diseño del mismo, el cumplimento de las prácticas y procedimientos y el empleo de los
equipos de seguridad (Menéndez, JC et al. ,2005). Los resultados de la evaluación
realizada declararon que se debía perfeccionar básicamente la gestión de la bioseguridad
174 en relación al diseño de la instalación, la cual fue cumplida por la entidad a partir de los
señalamientos realizados.
Es objetivo de nuestro trabajo mostrar el proceso de identificación e implementación de
medidas que debió cumplir el laboratorio de virología para reducir el riesgo a un nivel
aceptable, el cual trajo consigo el otorgamiento de la licencia de seguridad biológica para la
explotación del mismo.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Rodríguez, J. Bioseguridad en el diseño de instalaciones con riesgo biológico. Tomo I.
Ciudad Habana: Editorial Academia, 2007. p.15.
Menéndez, JC y Rodríguez, J. Evaluación de Riesgo. En: Menéndez, JC et al. Manual de
Inspección de Seguridad Biológica. Ciudad Habana: Editorial Academia, 2005. p.88.
VACD-20. IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE ESTRONGÍLIDOS
GASTROINTESTINALES EN CAPRINOS DEL VALLE DEL CAUTO EN LA PROVINCIA DE GRANMA
Niurky Rojas-Gámez*, M. La O-Arias*, J. Arece-García**, M. Carrión-Muchulí*, C. San Martín-Acosta*, K. Pérez-Corría* y P. Valerino-Cambar*** *Instituto de Investigaciones Agropecuarias‖ Jorge Dimitrov‖ km 16 y ½ Carretera Manzanillo Bayamo. CP. 85100. Granma. Cuba. [email protected] **Estación Experimental de Pastos y Forrajes ―Indio Hatuey‖. Central España Republicana. CP. 44280. Matanzas, Cuba. ***Universidad de Granma km 17 Carretera Manzanillo Bayamo. C.P: 85100. Granma Este trabajo se realizó con el objetivo de identificar y caracterizar las especies de
estrongilidos gastrointestinales que afectan los caprinos del Valle del Cauto en la provincia
de Granma, así como aportar elementos cognoscitivos, relacionados con su diagnóstico.
Para el mismo se separaron los diferentes compartimientos del tracto digestivo (cuajar,
intestino delgado e intestino grueso) y se colectaron todos los parásitos adultos para su
posterior caracterización e identificación. Los géneros se identificaron sobre la base de la
morfología general y las especies en función de las características morfométricas de las
espículas de los machos, la identificación estructural de la corona cervical y la vesícula
cefálica. En el caso del género Haemonchus, por la similitud de las especies que lo
conforman, se midió el largo total de las espículas, distancia de la punta de la espícula
derecha a su respectivo gancho y distancia de la punta de la espícula izquierda a su
respectivo gancho. En el caso de las demás especies se observaron y cuantificaron las
estructuras claves para su identificación. Los resultados obtenidos determinaron que los
caprinos del Valle del Cauto se encuentran infestados por cuatro especies de estrongílidos
gastrointestinales Oesophagopstomun columbianum, Trichostrongylus colubriformis,
175 Haemonchus contortus y Haemonchus placei con espículas de 797, 171, 398 y 429 µm
respectivamente. La identificación de la especie Haemonchus placei en el ganado caprino
implica variaciones en las estrategias de prevención y control para la especie y no para el
género. En la población de parásitos del género Haemonchus se encontraron
particularidades en el diagnóstico de las especies, dada por el largo de las espículas.
VACD-21. FEEDING PERFORMANCE OF TWO SPECIES OF IXODIDAE TICKS ATTACHED ON RESISTANT RABBITS
P.H. Nunes*, K.C.S. Furquim**, G.H. Bechara**, M.I. Camargo-Mathias***
*Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Departamento de Medicina, Veterinária Preventiva e Saúde Animal (VPS/FMVZ/USP), Universidade de São Paulo (USP), Av. Prof. Orlando Marques de Paiva, 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP, Brazil, CEP 05508-270. **Departamento de Patologia Veterinária, FCAV, UNESP, Via de Acesso Prof. Paulo Castellane, s/n, CEP: 14884-900, Jaboticabal, S.P., Brazil. ***Departamento de Biologia, Instituto de Biociências, UNESP, Av. 24 A, nº 1515, Cx. Postal 199, CEP: 13506-900, Rio Claro, S.P., Brazil. In certain tick-host relationships tick‘s saliva inoculation can induce resistance by the host
as demonstrated by alterations in several alimentary and reproductive biological
parameters of the ectoparasite (Jittapalapong et al., 2000). The aims of this study were to
analyse the necessary feeding time to reach full engorgement and the engorgement weight
of Amblyomma cajennense and Rhipicephalus sanguineus females tick fed on resistant
rabbits. The resistance of hosts was induced by successive infestations (Amblyomma
cajennense) and by inoculation of salivary gland extracts (SGE) (Rhipicephalus
sanguineus). The results revealed that rabbits acquire resistance against A. cajennense
from the second infestation as demonstrated by the increase in female feeding time to full
engorgement and decrease in its engorgement weight. Concerning R. sanguineus, the
results of the challenge test, the averages obtained did not present significant differences,
except for the average weight of engorgement for females of the test group immunized with
extract of salivary glands of females in the sixth day of feeding (p < 0.05) in relation to
control group. The glandular extract of salivary glands of females in the sixth day of feeding
(SGE6) was not efficient in the immunization against R. sanguineus infestation, instead
induced the hosts to a response that significantly benefited the progression of females‘
feeding, even more than what was observed in control group.
Supported by FAPESP
176 REFERENCES
S Jittapalapong, RW Stich, JC Gordon, TE Wittum, OO Barriga. 2000. Performance of
female Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae) fed dogs exposed to multiple
infestations or immunization with tick salivary gland or midgut tissues. J. Med. Entomol.
37(4), 601-611.
VACD-22. HISTOLOGICAL DESCRIPTION OF THE SALIVARY GLANDS OF ADULT TICKS ORNITHODOROS BRASILIENSIS, ARAGÃO, 1923.
L.F.S. Costa*, P.H. Nunes**, J.F. Soares**, M.B. Labruna**, J.R. Martins***, J.R. Júnior****, M.I. Camargo Mathias*. *Departamento de Biologia, Instituto de Biociências, Unesp, Av. 24 A, nº 1515, CEP 13506-900, Rio Claro, SP, Brazil. **Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Departamento de Medicina, Veterinária Preventiva e Saúde Animal (VPS/FMVZ/USP), Universidade de São Paulo (USP), Av. Prof. Orlando Marques de Paiva, 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP, Brazil, CEP 05508-270. ***Fundação Estadual de Pesquisa Agropecuária, Estrada do Conde nº 6000 / Acesso 02: BR 116, Km 291CEP: 92900-000 Eldorado do Sul / RS. ****Laboratório de Peptídeos e Enzimas Proteolíticas Universidade Federal do Rio Grande do Sul Centro de Biotecnologia. Rua Sarmento Leite, 245 – Centro Porto Alegre - RS, 90050-170.
The ticks of the genus Ornithodoros are parasites of birds, reptiles and mammals, including
man. Ornithodoros are vectors of borrélias that causes relapsing fever in different parts of
the world and they are also potential reservoirs and vectors of other pathogens. The
Ornithodoros brasiliensis that is found eventually parasitizing humans in the south area of
Brazil was already described as being vector of the Borrelia brasiliensis. The objective of
this work was of accomplishing the first histological description of the salivary glands of this
species that can become a problem in the public health of the areas of its occurrence. The
obtained results showed that the salivary glands of males and females of Ornithodoros
brasiliensis present the same structure of other argasids species. They are formed by two
types of acini, one of them agranular (type I) and the other granular (type II). The agranular
acinus consists of a big central cell and smaller cells around it with a lot of membrane folds
and, probably, have important role in the osmorregulation process. The granular acinus
presents three types of secretory cells denominated as a, b and c as in other argasids
species. These cells differ amongst themselves mainly as for the type of secretion granules
present in its cytoplasm.
177 REFERENCES
Mans B.J., Venter J.D., Coons L.B., Louw A.I., Neitz A.W. 2004. A reassessment of argasid
tick salivary gland ultrastructure from an immuno-cytochemical perspective. Exp. Appl.
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Roshdy M.A. 1972. The subgenus Persicargas (Ixodoidea, Argasidae, Argas). 15. Histology
and histochemistry of the salivary glands of A. (P.) persicus (Oken). J.Med.Entomol. 9:143–
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Sonenshine, D.E. 1991. The female reproductive system. In: SONENSHINE, D.E. (Org.).
Biology of Ticks. New York: Oxford University Press, p. 280-304.
VACD-23. EVALUACIÓN DE LA TÉCNICA SEROLÓGICA AUBIODOT PARA EL
DIAGNÓSTICO RÁPIDO DE LA LEPTOSPIROSIS CANINA
R.L. García*, M.A. Abeledo**, H. Machado***, D. Feraud*. *Facultad de Medicina Veterinaria, UNAH; Mayabeque, Cuba. [email protected] **Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, Mayabeque, Cuba ***Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología, La Habana, Cuba. La leptospirosisis es una enfermedad reemergente presente en muchos países,
principalmente con clima húmedos tropicales. Dentro de las especies muy vinculadas al
hombre se encuentran los caninos, los mismos han sido reconocidos como posibles
reservorios presentando una infección subclínica. Ha sido el objetivo de este trabajo la
evaluación de la técnica serológica rápida Aubiodot con el empleo del antígeno de
Leptospira biflexa (saprófita), cepa patoc. Para ello se tomaron 84 muestras de suero a
caninos recogidos aparentemente sanos y mantenidos en instalaciones. Las muestras
fueron analizadas por la técnica de Aubiodot y después enviadas para su análisis y
comparación con la Técnica Microaglutinación (MAT) de referencia, en el Centro Nacional
de Epizootiología y Diagnóstico. Como resultado se obtuvo una coincidencia en 73
(86.9%), de estos 26 sueros como verdaderos positivos y en 47 como verdaderos
negativos: Los indicadores mostraron una sensibilidad de 83.8% y una especificidad
88.6%, con un Valor Predictivo Positivo (81.2%) y el Coeficiente Kappa (0.72) aportó
favorable correspondencia entre las dos técnicas. Predominó, el serovar canicola con 15
muestras (13%) y el serovar pomona en 9 muestras (8%) además en casos aislados los
serovares australis, ballum y icterohaemorrhagiae. Se concluye que el Aubiodot es capaz
de identificar en breve tiempo la leptospirosis canina de forma cualitativa, lo que permitirá
aplicar con seguridad y rapidez las medidas terapéuticas en la Clínicas Veterinarias.
Además, el empleo de una cepa no patógena disminuye los riesgos de contaminación en la
manipulación.
178 VACD-24. DESARROLLO DE UN PCR ESPECIE ESPECÍFICO PARA LA DETECCIÓN DE MYCOPLASMA GALLISEPTICUM Y SU DIFERENCIACIÓN CON MYCOPLASMA
IMITANS Y. Lozada*, Evelyn Lobo*, M Colas**, S. Martínez*. *Laboratorio de Diagnóstico de Micoplasmas (MYCOLAB). Grupo de Biología Molecular, Dirección de Microbiología, CENSA, Cuba. [email protected] **Laboratorio de Investigaciones y Diagnóstico Aviar.
El Síndrome respiratorio crónico de las gallinas (SRC) es una enfermedad infecto
contagiosa de curso crónico, su etiología es un complejo multifactorial donde intervienen
varios agentes y factores, reconociéndose a Mycoplasma gallisepticum el agente etiológico
principal, aunque en los últimos años se ha reportado la participación de cepas altamente
virulentas de Mycoplasma synoviae produciendo lesiones típicas del SRC, incluso
actualmente de reconoce que micoplasmas no patógenos bajo determinadas condiciones
epizootiológicas pueden participar en la etiología del SRC, tal es el caso de Mycoplasma
gallinarum y Mycoplasma imitans, quienes fueron capaces de inducir aerosaculitis, cuando
se combinaron con el virus de la Bronquitis infecciosa aviar. En el siguiente trabajo nos
propusimos evaluar un PCR especie específico para la detección de Mycoplasma
gallisepticum utilizando como diana el gen mgc2. Como parte de este trabajo se llevó a
cabo estudios de factibilidad en nuestras condiciones, también se evaluó la robustez
empleando diferentes temperaturas de alineamiento, además se estimó la sensibilidad
analítica del ensayo que resultó ser de 1 pg/µL. La utilización de cebadores diseñados
sobre la base de la secuencia del RNAr 16S de los micoplasmas garantiza la especificidad
de especie, en el caso particular de Mycoplasma gallisepticum y Mycoplasma imitans no
se emplea ya que presentan en su genoma una alta homología alrededor de un 99%, por
eso en nuestro trabajo se decidió emplear como diana el gen mgc2 lo que nos hace contar
en nuestro laboratorio con un sistema altamente específico y nos evita diagnosticar
muestras falsas positivas.
179
VACD-25. RELACIÓN DE LOS ÍNDICES DE INFESTACIÓN DE VARROA DESTRUCTOR CON LOS INDICADORES BIOMÉTRICOS LONGITUD DEL ALA
ANTERIOR Y DIÁMETRO DE LAS CELDAS DE OBRERAS Anisley Pérez-Hernández, J. Demedio-Lorenzo Universidad Agraria de La Habana. Autopista Nacional y Carretera de Tapaste, San José de las Lajas, Provincia Mayabeque. Cuba. Telf. 047-86-0101. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootécnia. [email protected]
Estudiando los primeros trabajos biométricos realizados en Cuba hace ya más de 20 años
resulta del máximo interés poder evaluar los índices de infestación de Varroa destructor en
colmenas maternas y paternas de un centro de crianza de reinas y determinar su relación
con las características biométricas que permitan comprender los posibles cambios sufridos
por la especie bajo la influencia de diversos factores en este período. El estudio se
desarrolló en un Centro de Crianza de Abejas Reinas (CCR) de la provincia de La Habana,
durante los meses de febrero/2007 a mayo/2008. No se apreció relación entre los índices
de infestación por V. destructor y los indicadores longitud del ala y diámetro de las celdas
de obreras. Hubo predominio de la coloración negra en las abejas de las colmenas
maternas, procedentes de un mismo apiario de genética, donde se aplica como criterio de
selección la baja tasa de infestación resultando un predominio de abejas de coloración
negra. Se hizo evidente la necesidad de profundizar en los estudios biométricos,
conductuales y moleculares de las abejas y los ácaros Varroa presentes en el país.
VACD-26. PREVALENCIA DE NEUMONÍA EN CERDOS DE CEBA DESTINADOS A LA
PRODUCCIÓN DE UN SURFACTANTE NATURAL C. Bulnes*, R. Durand*, A. Pérez** y E. Lobo*** *Dpto. Patología, **Dir. Calidad y ***Grupo de Bacteriología. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). [email protected] Con el objetivo de estudiar la prevalencia de neumonía en cerdos de ceba criados bajo
condiciones experimentales de explotación, para la producción de un surfactante natural,
se trabajaron 615 animales del cruce comercial York-Shire, Landrace x Duroc que fueron
sacrificados al arribar a los 87 ± 3Kg de masa corporal. Los cerdos correspondientes al
grupo I, (459 animales) fueron mantenidos durante el periodo de preceba y ceba en una
unidad experimental con control estricto de las condiciones de manejo y alimentación, el
Grupo II (156 animales) proceden de una granja controlada con ciclo cerrado de
producción que fue utilizada como control del ensayo. Los resultados evidenciaron la
presencia de Neumonía en el 47% de los cerdos estudiados en el grupo I y de 98% en el
grupo II (p<0.001), el análisis del grado de severidad de las lesiones demostró también
180 diferencias significativas entre grupos (p<0.001), se aisló P. multocida, P. hemolítica y
Mycoplasma spp entre otros microorganismos de los cerdos afectados de ambos grupos y
se demostró la efectividad de un sistema de manejo estrictamente controlado en la
disminución de la prevalencia de neumonía en cerdos donantes de pulmones como
materia prima de un surfactante natural.
VACD-27. MANIFESTACIONES CLÍNICAS Y CAMBIOS ANATOPATOLÓGICOS EN POLLOS DE CEBA INOCULADOS CON LA CEPA R. LOW DE MYCOPLASMA
GALLISEPTICUM
C. Bulnes* y E. Lobo**
*Dpto Patología, Dirección Salud y Producción Animal y **Dpto. Bacteriología, Dirección
Microbiología. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). [email protected]
Se infestaron experimentalmente 20 pollos de ceba de 21 días de edad (grupo I) que
fueron inoculados simultáneamente por las vías senoinfraorbital e intratraqueal con 25
mg/ml de una cepa R low de M. gallisepticum para valorar las manifestaciones clínicas y
las lesiones anatomopatológicas más significativas. Otros 20 pollos de igual edad y raza
(grupo II) fueron utilizados como controles. Se realizó observación clínica durante 14 días
posteriores a la inoculación, momento en el que fueron sacrificados por el método de
desangrado. Desde el punto de vista clínico se observó, tos, disnea, secreciones nasales y
oculares e inflamación de los senos infraorbitarios en el 95% de los animales inoculados y
la presencia de un cuadro lesional caracterizado por discreto engrosamiento y opacidad de
los sacos aéreos, así como hemorragias petequiales en la porción superior de la tráquea,
ligera y de la laringe. No se apreciaron otras alteraciones en el resto de los órganos del
tracto respiratorio de las aves inoculadas. Estos cambios no fueron observados en los
animales utilizados como controles. Se demostró que la cepa R low de M. gallisepticum, es
patógena en pollos de 21 días inoculados por las vías seno infraorbital e intratraqueal de
forma combinada lo que quedó demostrado por las manifestaciones clínicas y
morfopatologícas observadas que se caracterizaron por sinusitis, laringitis, traqueitis y
aerosaculitis discreta.
181 VACD-28. CONTROLES OFICIALES DE TRIQUINA EN MATADEROS DE PORCINO EN
ESPAÑA
F.A. Pérez-Pérez*, Maria J. Estévez-Herrera** *Veterinario. Área G. S. Sierra De Huelva. Junta de Andalucía. Centro de Salud Cumbres Mayores. C.P. 21380 .España **Dra. Veterinaria. Laboratorio Sanidad Animal. Junta de Extremadura. Ctra Los Santos S/N. C.P.06300 Zafra. España. En la zona de explotación de ganado porcino extensivo (zonas adehesadas del suroeste
de España), es muy significativo el consumo de carne de cerdo y derivados cárnicos, que
pueden estar infestados por nematodos del género Trichinella.
Las pruebas de diagnóstico de triquina se encuadran dentro de las pruebas de laboratorio
que deben realizarse en el marco de los Controles Oficiales Veterinarios y como tales,
deben seguir los procedimientos de acreditación necesarios y exigidos conforme a
normativas de la Unión Europea, para cumplir las garantías satisfactorias de implantación
de sistemas de control de calidad de estos análisis, y según los parámetros establecidos
sobre los controles oficiales efectuados para garantizar la verificación del cumplimiento de
la legislación en materia de piensos y alimentos y la normativa sobre salud animal y
bienestar de los animales, donde especifica que los laboratorios deben estar acreditados
según las normas europeas. En el presente trabajo se tratan los procedimientos
registrados en la acreditación de los laboratorios que se quieren autorizar para la
realización de estas técnicas, de modo que las unidades analíticas de los mataderos,
cumplan la legislación española y europea vigente. Podemos concluir que asistiremos a un
escenario futuro en el que el diagnóstico oficial de triquina podrá realizarla el matadero en
las modalidades de acreditación de su laboratorio por ENAC, o mediante la concertación
de los análisis con un laboratorio ajeno acreditado para la técnica de triquina, o bien por el
sistema de laboratorio de referencia y laboratorio satélite vinculado (localizado en
matadero).
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
REGLAMENTO (CE) 2075/2005 DE LA COMISIÓN por el que se establecen normas
específicas para los controles oficiales de la presencia de triquinas en la carne. (DO L 338
de 22.12.2005, p. 60)
REGLAMENTO (CE) 882/2004 DEL PARLAMENTO EUROPEO Y DEL CONSEJO sobre
los controles oficiales efectuados para garantizar la verificación del cumplimiento de la
legislación en materia de piensos y alimentos y la normativa sobre salud animal y bienestar
de los animales (DO L 191 de 28.5.2004, p. 1).
182
VACD-29. SEROPREVALENCIA Y FACTORES DE RIESGO ASOCIADOS A BRUCELOSIS DE LOS CAPRINOS EN CINCO MUNICIPIOS DEL CENTRO DE
VERACRUZ M. Arilla*, S.G. Hernández-Ruiz**, M. Villanueva-Valencia**, D.I. Martínez-Herrera**, L.X. Nouvel*, J.A. Villagómez-Cortés**, V. Vela-Cerón***, A.E.J. Peniche-Cardeña**, J.F. Morales-Alvarez****, R. Flores-Castro**** *Ecole Nationale Vétérinaire de Toulouse 23, chemin des Capelles, 31076 Toulouse cedex 03, France. **Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Veracruzana. Circunvalación esq. Yañez s/n, Col. Unidad Veracruzana, C.P. 91710, Veracruz, México. Telf. +52 (229) 9342075 y 9344053. [email protected]. ***Centro Universitario Interamericano del Pacífico. Licenciatura en Medicina Veterinaria y Zootecnia. Calle Francisco Villa s/n, Colonia Santa Cecilia, Tapachula, Chiapas, CP 30739. ****Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal. Km 15.5 Carretera México-Toluca, Col. Palo Alto, C.P. 05110, Cuajimalpa, México, Distrito Federal. Para conocer la prevalencia y factores de riesgo asociados a brucelosis caprina en cinco
municipios de la zona centro de Veracruz, México, se realizó un estudio polietápico
estratificado. El tamaño de muestra se calculó con Win Episcope Ver. 2.0 para obtener 182
animales y una fracción de muestreo de seis por unidad de producción (UP). Las UP se
determinaron por conglomerados con las tablas de valores propuestas por Canon y Roe,
obteniéndose 26. Se realizaron las pruebas de tarjeta al 3% e inmunodifusión radial (IDR)
como tamiz y confirmatoria, respectivamente. Para determinar los factores de riesgo se
realizaron dos cuestionarios, uno general por cada UP seleccionada y uno individual por
animal muestreado. Los resultados se analizaron por epidemiología descriptiva y la
asociación por Odds Ratio (OR). De los 182 sueros, seis resultaron positivos (3.3%) a
tarjeta; sin embargo ninguna se confirmó por IDR, por lo tanto la seroprevalencia general
fue de 0%. Ninguno de los datos obtenidos resultó factor de riesgo (P>0.05); sin embargo,
la ingestión de calostro y vacunación contra brucelosis resultaron ser factores protectores.
Se concluye que la seroprevalencia es baja en los municipios y que el consumo de calostro
y la vacunación protegen contra la infección.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Al-Majali, A.M., Talafha, A.Q., Ababneh, M.M. 2009. Seroprevalence and risk factors for
bovine brucellosis in Jordan. Journal of Veterinary Science. 10(1):61-5
Coelho AM, Coelho, A.C., Roboredo, M., Rodriguez, J. 2007. A case-control study of risk
factors for brucellosis seropositivity in Portuguese small ruminants herds. Preventive
Veterinary Medicine. 14;82(3-4):291-301
183
Martínez H.D.I, Morales M.J.A., Peniche C.A., Molina S.B., Rodríguez C.M.A., et al. 2010.
Use of RB51 vaccine for small ruminants brucelosis prevention, in Veracruz, México.
International Journal of Dairy Science. 5(1): 10-17
VACD-30. SEROPREVALENCIA Y FACTORES DE RIESGO ASOCIADOS CON
NEOSPOROSIS CAPRINA EN CINCO MUNICIPIOS DEL CENTRO DEL ESTADO DE VERACRUZ, MEXICO
J.C. Huerta-Peña*, D.I. Martínez-Herrera*, A.E.J. Peniche-Cardeña*, M. Villanueva-Valencia*, S.G. Hernández-Ruiz*, J.A. Villagómez-Cortés*, F.T. Barradas-Piña**, J.F. Morales-Alvarez***, R. Flores-Castro*** *Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Veracruzana. Circunvalación Esq. Yáñez s/n, Col. Unidad Veracruzana, C.P. 91710, Veracruz, Veracruz, México. Tel. y Fax: +52 (229) 9342075 y 9344053. [email protected] **Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro de Investigación Regional Golfo Centro. Campo Experimental La Posta. Km. 22.5 Carretera Veracruz-Cordoba Paso del Toro, Paso del Toro, C.P. 94277, Medellín de Bravo, Veracruz, México. ***Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal. Km. 15.5 Carretera México-Toluca, Col. Palo Alto, C.P.05110, Cuajimalpa, México, Distrito Federal. El objetivo del trabajo fue determinar la seroprevalencia y los factores de riesgo asociados
con la neosporosis caprina mediante un estudio polietápico y estratificado en municipios de
la zona centro del estado de Veracruz; se muestrearon 182 animales de 26 unidades de
producción (UP), con una fracción de muestreo de seis por UP estimado con Win Episcope
Ver. 2.0. Las UP fueron seleccionadas por conglomerados con las tablas de valores de
Cannon y Roe. El diagnóstico se realizó con un ELISA comercial. La seroprevalencia se
determinó con el programa VassarStats® y los factores de riesgo por Razón de Momios
(RM). La seroprevalencia general fue de 3.84%, por municipios afectados 60% y por UP
15.38%. El municipio de Coacoatzintla es de riesgo para la infección (RM=5.958; IC95%:
1.271–27.940) y los municipios de Coatepec, Chiconquiaco, así como los sementales son
factores protectores (RM=0; IC95%: 0–0). Se concluye que la neosporosis caprina tiene una
seroprevalencia baja, pero con distribución media dentro de los municipios y UP. Los
caprinos que se encuentran en Coacoatzintla tienen 5.9 más veces riesgo de infectarse
con Neospora caninum, en cambio los ubicados en Coatepec y Chiconquiaco, así como los
sementales son factores protectores.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Chartier, CH., Baudry C., Losson, De Meerschman F. B., Romand S., Thulliez P. 2000.
Neosporosis en la cabra: resultados de dos encuestas serológicas en el oeste de Francia.
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Figliuolo, L.P.C., Kasai N., Ragozo A.M.A., de Paula V.S., Dias R.A., Souza S.L.P.,
Rodrigues A.A.R., Viana R.B., Aguilar D.M., Gennari S.M. 1998. Prevalencia de anticorpos
anti-Neospora caninum em ovinos e caprinos do Estado de Sao Paulo. I Fórum Brasileiro
de Estudos sobre Neospora caninum 28 47-49.
Gondim, L.F., McAllister M.M., Mateus-Pinilla N.E., Pitt W.C., Mech L.D., Nelson M.E.
2004. Transmission of Neospora caninum between wild and domestic animals. Journal of
Parasitology. 90, 1361-1365.
VACD-31. SEROPREVALENCIA Y FACTORES DE RIESGO ASOCIADOS A LEPTOSPIROSIS DE LOS CAPRINOS EN CINCO MUNICIPIOS DEL CENTRO DE
VERACRUZ, MÉXICO J.A. Santos-Bonilla*, D.I. Martínez-Herrera*, D. Romero-Salas*, F.T. Barradas-Piña**, A.E. Peniche-Cardeña*, J.A. Villagómez-Cortés*, J.V. Ornelas-Cruz*, J.F. Morales-Álvarez***, A.R. Pérez-Mata***, R. Flores-Castro***. *Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Veracruzana. Circunvalación Esq. Yáñez s/n, Col. Unidad Veracruzana, C.P. 91710, Veracruz, Veracruz, México. Tel. y Fax: +52 (229) 9342075 y 9344053. [email protected]. **Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro de Investigación Regional Golfo Centro. Campo Experimental La Posta. Km. 22.5 Carretera Veracruz-Cordoba Paso del Toro, Paso del Toro, C.P. 94277, Medellín de Bravo, Veracruz, México. ***Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal. Km. 15.5 Carretera México-Toluca, Col. Palo Alto, C.P.05110, Cuajimalpa, México, Distrito Federal. Con objeto de determinar la seroprevalencia y factores de riesgo asociados con
leptospirosis caprina se realizó un estudio transversal polietápico, estratificado en
Unidades de Producción (UP) de cinco municipios del estado de Veracruz, México. La
muestra se calculó con el programa Win Episcope Ver. 2.0; así, se obtuvieron 182
animales con fracción de muestreo de 6 por UP, determinadas por conglomerados con las
tablas de Cannon y Roe, para obtener 26 UP. Se realizó la prueba de aglutinación
microscópica (MAT), para 7 serovares. La seroprevalencia se calculó con el programa
VassarStat® y para los factores de riesgo, la Razón de Momios (RM). La seroprevalencia
general fue 13.74% y por municipios 80%. Las seroprevalencias para Chiconquiaco,
Coatepec, Coacoatzintla, Tlacolulan y Yecuatla fueron 18.75%, 17.07%, 30.56%, 0% y
2.94%, respectivamente. El municipio de Coacoatzintla es factor de riesgo para Leptospira
spp y para L. hardjo y; Coatepec para L. tarassovi. Los municipios de Chichonquiaco y
Tlacolulan son factores de protección para L. tarassovi y, los de Tlacolulan y Yecuatla, para
L. Bratislava; así como las cabras en ordeña para Leptospira spp. Se concluye que la
seroprevalencia de leptospirosis caprina es moderada, pero tiene gran distribución en los
municipios.
185 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Cunha, E.L.P., Mota, R.A., Meireles, L., Silva, A.C.C., Silva, A.V., Langoni, H. 1999.
Pesquisa de Aglutininas anti-Leptospira em soros de caprinos no estado de Pernambuco,
Brasil. Revista Brasileira Medicina Veterinária 21: 38–40
Lilenbaum, W., Nunes de Souza, G., Ristow, P., Cortez Moreira, M., Fraguas, S., da Silva
Cardoso, V., Roland Oelemann, W.M. 2007. A serological study on Brucella abortus,
caprine arthritis-encephalitis virus and Leptospira in dairy goats in Rio de Janeiro, Brazil.
Veterinary Journal, 173(2): 408-412.
Lilenbaum, W., Varges, R., Medeiros, L., Cordeiro, A.G., Cavalcanti, A., Nunes de Souza,
G., Richtzenhain, L.J., Vasconcellos, S.A. 2008. Risk factors associated with leptospirosis
in dairy goats under tropical conditions in Brazil. Research in Veterinary Science, 84(1): 14-
17.
VACD-32. ESTUDIO EPIDEMIOLÓGICO DE ARTRITIS-ENCEFALITIS CAPRINA EN
MUNICIPIOS DEL CENTRO DE VERACRUZ
S.G. Hernández-Ruiz*, D.I. Martínez-Herrera*, A.E.J. Peniche-Cardeña*, J.A. Villagómez-Cortés*, M. Villanueva-Valencia*, J.F. Morales-Álvarez**, R. Flores Castro**. *Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Veracruzana. Circunvalación Esq. Yáñez s/n, Col. Unidad Veracruzana, C.P. 91710, Veracruz, Veracruz, México. Telf. y Fax: +52 (229) 9342075 y 9344053. [email protected] **Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal. Km. 15.5 Carretera México-Toluca, Col. Palo Alto, C.P.05110, Cuajimalpa, México, Distrito Federal. La Artritis - Encefalitis Caprina (AEC) es una enfermedad de amplia distribución mundial
que afecta a caprinos sin distinción de sexo, raza o edad. Es considerada una enfermedad
crónica que presenta diversas manifestaciones clínicas y que conlleva a grandes pérdidas
económicas para la caprinocultura. Así, el objetivo de este trabajo fue estimar la
seroprevalencia y los factores de riesgo asociados a la presencia de AEC en 14 municipios
del centro de Veracruz, México; para ello, se realizó un estudio polietápico estratificado. El
tamaño de muestra se calculó con Win Episcope Ver. 2.0 bajo la modalidad ―estimar
proporciones‖ para una prevalencia de 50%, error 5% y confiabilidad 95%, lo que implicó al
menos 385 animales con una fracción de muestreo de seis por unidad de producción (UP).
Las UP en cada municipio se seleccionaron por conglomerados con las tablas de valores
propuestas por Canon y Roe y se obtuvieron 81 para los 14 municipios. Fueron
muestreadas hembras a partir de los tres meses de edad y todos los sementales. Las
muestras séricas obtenidas se procesaron con dos kits comerciales de ELISA indirectos en
modalidades de tamiz y confirmatorio. Para la determinación de los factores de riesgo se
realizó un cuestionario general por cada UP muestreada y un cuestionario individual por
186 animal muestreado. Los resultados obtenidos se analizaron por epidemiología descriptiva y
la asociación entre las variables se calculó por Razón de Momios (RM). Así se obtuvieron
565 muestras, de las cuales 43 resultaron positivas y se confirmaron sólo 36 para una
seroprevalencia general de 6.3%; de los 14 municipios muestreados 9 (64.2%) resultaron
afectados y; de las 81 UP muestreadas, 18 (22.2%). Así, fueron identificados como
factores de riesgo animales pertenecientes a las municipalidades de Coatepec y
Coacoatzintla, los sementales, el rango de 7 a 12 meses de edad, animales cuyo origen
fueron los estados de Querétaro y Guanajuato, los tipos de explotación estabulada y
semiestabulada y, la presencia de artritis. Por otro lado, la ausencia de signos clínicos
resultó ser un factor protector. Se concluye que la seroprevalencia de AEC es baja pero de
alta distribución dentro de los municipios y rebaños, así como una marcada diversidad de
factores de riesgo contribuyen a su presencia.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Lilenbaum, W., Nunes de Souza, G., Ristow, P., Cortez Moreira, M., Fraguas, S., da Silva
Cardoso, V., Roland Oelemann, W.M. 2007. A serological study on Brucella abortus,
caprine arthritis-encephalitis virus and Leptospira in dairy goats in Rio de Janeiro, Brazil.
Veterinary Journal, 173(2): 408-412.
VACD-33. CIRCOVIROSIS PORCINA Y SÍNDROMES ASOCIADOS EN CUBA.
DESCRIPCIÓN DEL CUADRO CLÍNICO LESIONAL
Patricia Domínguez, M.I. Precedo, O. Fonseca, L. Pérez, C.L. Perera. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria. [email protected] Actualmente se conoce la existencia de una epizootia mundial conocida como el Síndrome
Multisistémico de Emaciación Postdestete (PMWS) o circovirosis porcina (CP) que
ocasiona importantes pérdidas en la producción. La infección por PCV2 se ha asociado a
diversos procesos patológicos que afectan al cerdo, incluyendo la circovirosis porcina (CP),
fallo reproductivo, síndrome de dermatitis y nefropatía porcino (SDNP), neumonía
proliferativa necrotizante (NPN) y complejo respiratorio porcino (CRP). En varias provincias
del país se ha reportado la presencia de CVP2 asociado a cuadros clínico-lesionales
compatibles con PMWS y PDNS. Es por ello que resulta necesario profundizar en el
diagnóstico de la circovirosis y otros problemas asociados al CVP2. Se estudiaron treinta y
seis cerdos de cinco granjas ubicadas en tres provincias del país. Los signos clínicos
evaluados incluyeron la condición corporal, signos respiratorios y digestivos (tos, disnea y
diarrea), palidez en la piel, y el aumento de tamaño de los ganglios linfáticos inguinales
superficiales así como lesiones hemorrágicas en piel. Los cerdos afectados tenían entre 7-
187 15 semanas. La morbilidad osciló entre 10-25% y la mortalidad fue menor al 50% en los
animales afectados. Se realizó la necropsia en todos los animales. El 64% de los cerdos
fueron positivos a la presencia de antígeno de PCV2 en uno o más tejidos por HIC e IHQ.
El marcaje se limitó al citoplasma de las células. El 50% de los animales resultaron
además positivos a PVP y PPC.
VACD-34. EVALUACIÓN DE LA INTERFERENCIA DE LOS ANTICUERPOS MATERNOS EN CRÍAS INMUNIZADAS CON UN CANDIDATO VACUNAL DE
SUBUNIDAD PROTEICA (E2)
E. Vega*, M. Barrera*, M.A. Abeledo*, P. Alfonso*, M.P. Rodríguez-Moltó**, M.T. Frías-Lepoureau*, M.I. Percedo, J. M. Figueredo*, S. Castell*. *Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Apdo 10, San José de Las Lajas, Habana, Cuba. [email protected] **Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología (CIGB). Habana, Cuba. El objetivo fue evaluar la inmunidad inducida por un candidato vacunal de subunidad
proteica E2, contra la Peste Porcina Clásica en cerdos con diversas condiciones de
inmunidad pasiva. Para ello, se evaluó la respuesta inmune humoral inducida por la
administración del candidato vacunal ante la presencia de anticuerpos maternos derivados
de la inmunización de las madres con la vacuna viva atenuada de la Cepa China y con el
propio candidato vacunal de subunidad proteica E2. Se concluye que el candidato vacunal
de subunidad proteica E2, es capaz de inducir una respuesta inmune humoral satisfactoria
frente a anticuerpos de origen materno homólogos y heterólogos, lo que representa un
aspecto fundamental para su aplicación en edades tempranas y en condiciones de
endemismo de la enfermedad.
VACD-35. EVALUACION EN CAMPO DE LA VACUNA DE MYCOBACTERIUM BOVIS
BCG CONTRA LA TUBERCULOSIS BOVINA
G. López-Valencia*, T. Renteria-Evangelista*, J. de Jesús-Williams**, A. Licea-Navarro***, A. De la Mora-Valle*, G. Medina-Basulto*, J.C. Herrera*, R.M. Bermúdez*, S. Hori*, C. Pujol*.
*Instituto de Investigaciones en Ciencias Veterinarias Universidad Autónoma de Baja California. Obregón y Julián Carrillo S/N Col. Campestre CP. 21386, Mexicali Baja California, México. Tel/Fax: (686) 5 63 69 06. [email protected] **Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Autónoma de Yucatán, México. ***Centro de Investigación Científica y de Educación Superior-Ensenada, México. La tuberculosis (TB) en animales sigue siendo un problema de salud a nivel mundial. La
mejor opción para el control de la TB a largo plazo en bovinos es el desarrollo de vacunas.
La vacuna de Mycobacterium bovis-BCG (Mb-BCG) ha sido evaluada a nivel experimental,
188 pero es necesario que esta, sea evaluada bajo condiciones de infección natural. En el
presente trabajo, se evaluó bajo condiciones de campo, la vacuna de Mb-BCG en un hato
lechero con alta prevalencia (40%) de TB. Un total de 140 becerros negativos a
tuberculosis (<2 semanas de edad) fueron incluidos en el estudio. El grupo 1: incluyó 70
becerros vacunados (una sola dosis 1x106) y el grupo 2: incluyó 70 no vacunados. Todos
los animales permanecieron juntos durante todo el estudio (12 meses) compartiendo el
mismo corral y expuestos de forma natural al estar en contacto con vacas tuberculosas.
Los resultados muestran que la TB fue mayor en el grupo no vacunado (22.7% Vs 9.2%)
(p=0.03). Además, se observó que los becerros no vacunados tienen 2.6 (IC95%: 1.07–
5.68) veces más probabilidad de infectarse que los vacunados. Adicionalmente, se realizó
la prueba PCR de muestras de exudado nasal. Las diferencias entre las proporciones de
eliminación de los dos grupos (21.7% Vs 0%) fueron diferentes (p=0.03). Todos los casos
positivos a PCR (5/44) se presentaron en los no vacunados, ese hallazgo sugiere que el
uso de la vacuna puede ser capaz de prevenir que los animales tuberculosos eliminen
bacilos en su secreción nasal hasta el primer año de edad.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Buddle, M.B. 2001. Vaccination of cattle against Mycobacyerium bovis. Tuberculosis. 81:
125-132.
Vordermeier, H.M.; Chamber, M.A.; Buddle, B.M.; Pollock, J.M.; Hewinson, R.G. 2006.
Progress in the development of vaccines and diagnostic reagent to control tuberculosis in
cattle. The Veterinary Journal. 171: 229-244.
VACD-36. VACUNAS AVICOLAS Y PARA PORCINOS
Irina Díaz-Alfonso, E. Rodríguez-Pérez Novartis AG. Dirección: Calle A, Esquina 21, Vedado, Habana, Cuba. [email protected], [email protected] Novartis es una compañía multinacional que se dedica a la elaboración de productos
farmacéuticos y biotecnológicos tanto para la salud humana como animal, tiene como
objetivo mejorar la salud, el bienestar y la productividad del ganado y asegurar que las
mascotas disfruten de una vida más sana y prolongada. Las unidades de negocios en que
se divide Sanidad Animal son: Mascotas, Equinos, Ganado Vacuno, Aves y Cerdos. Desde
su creación su prioridad fundamental ha sido la innovación y el desarrollo de nuevos
productos medicinales entre los que cabe destacar las vacunas avícolas y para porcinos.
Dentro de la amplia cartera de vacunas tenemos para las aves TABIC MC, TABIC VH, H
120, VH + H-120, COXABIC y para los porcinos se encuentran MYCO SHIELD, PARVO
189 SHIELD L5E, PORCINE PILE SHIELD. Estas vacunas prevén enfermedades como
Gumboro, Newcastle Cepa VH, Bronquitis infecciosa, Coccidiosis, Neumonía, Parvovirus,
Escherichia Coli, entre otras. Es importante tener en cuenta que si el pie de cría está
siendo inmunizado se debe considerar la vacunación cuando los anticuerpos maternos
estén bajos para aplicar la dosis en la línea de producción. Durante los últimos años,
Novartis ha sido la empresa con el mayor número de nuevas entidades moleculares
aprobadas por la Food and Drug Administration (FDA) de EE.UU. Los científicos se centran
especialmente en las enfermedades que siguen presentando necesidades médicas
insatisfechas y trabajan para garantizar que Novartis mantenga su importante cartera de
productos en desarrollo y su trayectoria de grandes éxitos en el descubrimiento de
fármacos innovadores.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Forward research, Convenient formulation study, enero 2007
ESCCAP de las siglas en inglés “European Scientific Councel Companion Animal
Parasites” o Consejo Científico Europeo para el estudio de parásitos de Animales de
Compañía), www.esccap.com
Ensayo de palatabilidad/aceptabilidad: datos sobre el estudio de archivo número NAH-02-
0054
VACD-37. RETROVIRUS AVIARES COMO CONTAMINANTES DE VACUNAS:
MÉTODOS ACTUALES DE DETECCIÓN.
Julia Noda, D. Relova, A.M. Acevedo
Grupo de Virología Animal, Dir. De Microbiología, Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Apdo 10, San José de las Lajas, CP 32 700, La Habana, Cuba. [email protected]
Los retrovirus de la Leucosis aviar (VLA) y Reticuloendoteliosis (VRE) se han descrito
como contaminantes de vacunas utilizadas para el control de enfermedades en la
avicultura comercial. La transmisión vertical del VLA por vía del huevo embrionado, tanto
congénita (virus exógenos) como genética (virus endógenos) posibilita la infección de
pollos libres de patógenos específicos destinados a la producción de embriones para la
elaboración de vacunas y la contaminación de los bancos de semillas y/o el producto final.
La posibilidad de recombinación genética entre los virus exógenos y endógenos se
reporta, con riesgo potencial de infección por estos retrovirus cuando vacunas
contaminadas son aplicadas por vía parenteral, en la fase de mayor susceptibilidad de las
aves causando inmunotolerancia o tumores. La detección de retrovirus en vacunas
establecida por los organismos reguladores requiere de la multiplicación en cultivos
190 celulares e identificación por fijación del complemento (COFAL) y la inmunofluorescencia
para ALV y REV, respectivamente. La menor sensibilidad de estos ensayos y la
emergencia de recombinantes y variantes de VLA no revelados por ellos, ha determinado
el desarrollo de métodos alternativos como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y
la PCR en tiempo real complementados por análisis con enzimas de restricción y
secuenciación de ácidos nucleicos, han dado lugar a herramientas más rápidas, sensibles
y especificas para revelar retrovirus en vacunas comerciales. Este trabajo está dirigido a la
discusión de los riesgos del empleo de vacunas contaminadas con retrovirus aviares y la
aplicación de las tecnologías moleculares actuales para la detección e identificación de
estos virus en el control de calidad de vacunas aviares.
VACD-38. CHANGES IN SALIVARY GLANDS OF FEMALES TICKS FED ON HOST IMMUNIZED WITH GLANDULAR EXTRACTS OF RHIPICEPHALUS SANGUINEUS
K.C.S. Furquim*, M.I. Camargo-Mathias**, G.H. Bechara*
*Departamento de Patologia Veterinária, FCAV, UNESP, Via de Acesso Prof. Paulo Castellane, s/n, CEP: 14884-900, Jaboticabal, S.P., Brazil **Departamento de Biologia, Instituto de Biociências, UNESP, Av. 24 A, nº 1515, Cx. Postal 199, CEP: 13506-900, Rio Claro, S.P., Brazil
The pharmacological and immunological properties of ticks‘ saliva provide them with a very
successful spoliative action on hosts (Wikel, 1999). The saliva acts in the modulation of
immune-inflammatory response of the host, allowing feeding of the ticks (Sauer et al. 2000).
The aim of this study was verify the action of hosts resistance (rabbits) acquired by the
immunization with the extracts in the several secretor time of salivary glands cycle of
females fed on them. It was verified that the resistance to salivary gland extracts of R.
sanguineus females fed for 2 (SGE2) and 4 days (SGE4) acted in the cells of acini II and III,
being c1 and c5 (II) and d (III) inactivated due to the action of SGE2 and c1 and c4 (II) and f
(III) inactivated by the action of SGE4. As for the resistance to salivary gland extract of
females fed for 6 days (SGE6) the effect was only on cells of acini II (c1, c3 e c4), which
were also inactivated. In addition, the hosts‘ resistance to SGE2-SGE6 extracts made the
degenerative process precoceous in comparison to naïve hosts. These results making it
clear that the immunization of the hosts with glandular extracts SGE2-SGE6 had influenced
the glandular physiology of R. sanguineus, which is an important information in the search
for a way to control these ectoparasites.
Supported by FAPESP
191 REFERENCES
JR Sauer, RC Essenberg, AS Bowman. 2000. Salivary glands in ixodid ticks: control and
mechanism of secretion. J Insect Physiol 46, 1069-1078.
SK Wikel. 1999. Tick modulation of host immunity: an important factor in pathogen
transmission. Int J Parasitol 29, 851-859.
VACD-39. TEST DEL GAMMA-INTERFERON COMO PRUEBA COMPLEMENTARIA A LA INTRADERMOTUBERCULINIZACION EN EL PROGAMA DE ERRADICACION DE
TUBERCULOSIS BOVINA EN ESPAÑA
Maria J. Estévez-Herrera*, F.A. Pérez-Pérez**. *Dra. Veterinaria. Laboratorio Sanidad Animal. Junta de Extremadura. Ctra Los Santos S/N. C.P.06300 Zafra. España. **Veterinario. Área G. S. Sierra De Huelva. Junta de Andalucía. Centro De Salud Cumbres Mayores. C.P. 21380 .España
Los Programas Nacionales de Erradicación de Tuberculosis Bovina en España han sufrido
diversas modificaciones a lo largo de los años, con el fin de adaptarse a los cambios y
conocimiento científico de la enfermedad. Un pilar principal fue incrementar la sensibilidad
del diagnóstico, tanto a nivel de rebaño como individual. En España se consideran como
pruebas de diagnóstico oficial: Intradermotuberculización (IDTB) simple y comparativa,
prueba de gamma-interferón (γ-IFN) e Identificación del agente.
La prueba de γ-IFN mide la liberación de una linfoquina (interferón gamma) en un sistema
de cultivo de sangre completa ―in vitro‖ tras la estimulación de los linfocitos con tuberculina
bovina y aviar. La detección de este componente mediante realización de un ensayo ELISA
indicaría la presencia de la enfermedad.
Comparada con la IDTB, la prueba de γ-IFN posee una sensibilidad elevada pero parece
menos específica.
El test de γ-IFN, en el ámbito de la normativa europea y española, se contempla como una
prueba complementaria y paralela a la técnica de diagnóstico de IDTB.
Podemos concluir que el uso de la tecnica del γ-IFN permitirá la detección del máximo
número de animales infectados en rebaños positivos y que el aumento de sensibilidad de
esta prueba como complementaria a la cutánea en la erradicación de la tuberculosis
bovina, ofrece incuestionables beneficios a toda la sociedad por la lucha y eliminación de
esta grave zoonosis.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Manual de las Pruebas de Diagnóstico y de las Vacunas para los Animales Terrestres
(actualizado: 16.04.2008).
192
Programa Nacional de Erradicación de Tuberculosis Bovina presentado por España para el
Año 2011. Dirección General de Recursos Agrícolas y Ganaderos. Subdirección General
de Sanidad de Producción Primaria. Ministerio de Medio Ambiente y Medio Rural y Marino.
Gobierno de España.
VACD-40. CONTROL DE GARRAPATAS (RIPHICEPHALUS BOOPHILUS MICROPLUS)
EN BOVINOS CON EL INMUNÓGENO HERBER BIOGAR EN GUANARE, PORTUGUESA, VENEZUELA
A.R Botello*, A.L. Botello**, C.N. Borroto***, M. Suárez***, D. Pérez****, Y.V. Rodríguez*****, H. Fajardo**, K. Pérez**, A.O. González******, A.N. Rodríguez*******, B. Linares****, M. Colicchia****, I. Gómez**, P. Peraza****, A.M. Gort*******. *Empresa Agropecuaria, Mayarí, Holguín, Cuba. **Instituto de Investigaciones Agropecuarias ―Jorge Dimitrov‖. Granma, Cuba. [email protected] ***Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología, La Habana, Cuba. ****Servicio Agropecuario de Sanidad Animal, Venezuela. *****Universidad de Granma. Cuba. ******Empresa Agropecuaria Genética de Matanza, Cuba. Empresa Agropecuaria Genética de Matanza, Cuba. *******Instituto de Medicina Veterinaria, Cuba. La presente investigación se realizó con el objetivo de controlar la garrapata
(Riphicephalus Boophilus microplus) por medio del inmunógeno Herber biogar en bovinos
en el municipio de Guanare, Portuguesa, Venezuela. Se investigaron 28 unidades con una
masa bovina de 1 776 animales mestizos (Holstein x Cebú) de doble propósito y se
conformaron dos tratamientos bajo un diseño completamente aleatorizado no pariado,
cada uno compuesto por 888 animales, al primer grupo, no se le aplicó el inmunógeno, al
segundo se le administró por vía intramuscular el inmunógeno contra la garrapata
(Riphicephalus Boophilus microphlus) (dos mL/animal). A los que se les midió: proporción
de animales afectados con garrapatas, morbilidad y morbiletalidad. Las comparaciones se
realizaron mediante una prueba de hipótesis de Z. El 100% de las muestras de garrapatas
investigadas (Riphicephalus Boophilus microphlus) lo que propició la acción del
inmunógeno Herber biogar que disminuyó el número de bovinos afectados con garrapatas
a 6% en dos años, como un efecto indirecto se redujo la morbilidad de las enfermedades
hemoparasitarias (babesia y anaplasma).
193 VACD-41. HISTOPATOLOGÍA DE EMBRIONES DE POLLO INOCULADOS CON LECHE
DE VACAS SEROPOSITIVAS A BRUCELLA ABORTUS E. Pulido-Camarillo*, D.I. Martínez-Herrera**, V.T. Pardío-Sedas**, A. López-Merino***, J.F. Morales-Álvarez*, H. Ramírez-Mendoza****, F. Rivera-Benítez****, O. Padrón-Tello**, A.E.J. Peniche-Cardeña**, R. Flores-Castro*. *Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal. Km. 15.5 Carretera México-Toluca, Col. Palo Alto, C.P.05110, Cuajimalpa, Distrito Federal, México. **Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Veracruzana. Circunvalación Esq. Yáñez s/n, Col. Unidad Veracruzana, C.P. 91710, Veracruz, Veracruz, México. Tel. y Fax: +52 (229) 9342075 y 9344053. [email protected] ***Instituto Politécnico Nacional. Escuela Nacional de Ciencias Biológicas. Campus Santo Tomas. Prolongación de Carpio y Plan de Ayala s/n, Col. Santo Tomas, C.P. 11340, Delegación Miguel Hidalgo, México D.F. ****Universidad Nacional Autónoma de México, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Circuito Exterior, Ciudad Universitaria, C.P. 04510, Delegación Coyoacán, México, D.F. El objetivo de este estudio fue determinar el efecto histopatológico que produce Brucella
spp. en embriones de pollo (EP) inoculados con leche de bovinos infectados. Se usaron
100 EP de siete a nueve días de edad divididos en tres grupos. El Grupo I integrado por 80
EP, se dividió en ocho subgrupos de 10 EP que se inocularon con leche de 8 vacas
seropositivas de una unidad de producción infectada con brucelosis y con una
seroprevalencia de 24% a pruebas serológicas oficiales. El Grupo II fue el testigo positivo
de 10 EP inoculados con una cepa de campo de Brucella abortus. El Grupo III de otros 10
EP, inoculados con leche ultra pasteurizada adicionada con antimicrobianos del medio de
Farrell como testigo negativo. Los resultados se analizaron por la prueba de Kruskal-Wallis.
El EP sirvió para lograr la infección e inducción de daños en la citoarquitectura del hígado y
membrana corioalantoidea al observar inflamación y necrosis en tejidos de EP tanto del
testigo positivo como en los inoculados con 7/8 muestras de campo con tinción de H&E
(Hematoxilina y eosina) con una Suma de Rangos de 210. Se concluye que la técnica de
H&E es adecuada para la identificación de alteraciones histológicas causadas por Brucella
abortus.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Meador V.P., Tabatabai L.B., Hagemoser W.A., Deyoe B.L.1986. Identification of Brucella
abortus in formalin-fixed, paraffin embedded tissues of cows, goats and mice with avidin-
biotin-peroxidase complex immunoenzymatic staining technique. Amer J Vet Res 47:2147-
2150.
194
Xavier N., Paixao T. A., Poester F. P., Lage A. P., and Santos R. L. (2009): Pathological,
immunohistochemical and bacteriological study of tissues and milk of cows and fetuses
experimentally infected with Brucella abortus. J. Comp. Path.140:149-157.
VACD-42. IDENTIFICACIÓN DE INMUNOTOLERANCIA EN PROGENIE DE VACAS
INFECTADAS CON BRUCELLA ABORTUS O. Padrón-Tello*, D.I. Martínez-Herrera*, A. Peniche-Cardeña*, E. Pulido-Camarillo**, J.F. Morales-Álvarez**, A. López-Merino***, F.T. Barradas-Piña****, M.A. Rodríguez-Chessani*, R. Flores-Castro** *Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Veracruzana. Circunvalación Esq. Yáñez s/n, Col. Unidad Veracruzana, C.P. 91710, Veracruz, Veracruz, México. Telf. (229) 9342075 y 9344053. [email protected] **Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro Nacional de Investigación Disciplinaria en Microbiología Animal. Km. 15.5 Carretera México-Toluca, Col. Palo Alto, C.P.05110, Cuajimalpa, México, D.F. ***Instituto Politécnico Nacional. Escuela Nacional de Ciencias Biológicas. Campus Santo Tomas. Prolongación de Carpio y Plan de Ayala s/n, Col. Santo Tomas, C.P. 11340, Delegación Miguel Hidalgo, México D.F. ****Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Centro de Investigación Regional Golfo Centro. Campo Experimental La Posta. Km. 22.5 Carretera Veracruz-Cordoba Paso del Toro, Paso del Toro, C.P. 94277, Medellín de Bravo, Veracruz, México. La progenie de vacas infectadas con Brucella abortus podrían adquirir la bacteria durante
su estadio fetal y generar tolerancia inmune. Para identificarlos, se realizó un ensayo
clínico con dos grupos de becerros seronegativos. El grupo I, con siete hembras se vacunó
con cepa S19 a dosis normal y el grupo II; con ocho machos, sirvió como control. Sin
excepción, se tomaron muestras de suero sanguíneo en siete ocasiones cada 45 días y,
sangre completa con anticoagulante los días 45 y 135 postvacunación. Se realizaron las
pruebas serológicas oficiales y la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Los
resultados obtenidos se analizaron por la prueba de proporciones. En la evaluación
serológica del grupo I, todos los animales observaron el título máximo de anticuerpos en el
primer muestreo y a partir del cuarto descendieron de manera heterogénea hasta que
resultaron seronegativos al tamizaje. Los animales del grupo II se mantuvieron negativos.
Los resultados de la PCR fueron negativos para ambos grupos. Sólo se observaron
diferencias significativas entre grupos (P< 0.05) para la seroconversión en los primeros dos
muestreos. Se concluye que el hato carece de animales inmunotolerantes y que la PCR no
fue un método adecuado para demostrar ese evento.
195 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Baek, K. B., Lee, O. B., Hur, J., Rahman, M.S., Lee, I. S., Kakoma, I. 2005. Evaluation of
the Sprague-Dawley rat as a model for vertical transmission of Brucella abortus. The
Canadian Journal of Veterinary Research. 69: 305–308.
Crowford, R. P., Adams, G. A., and William J.D.1988. Relationship of days in gestation at
exposure and development of Brucellosis in strain 19 vaccinated heifers. Am J Vet Res.
49:1037-1039.
Rentería, E.T.B.; Nielsen, K.; Licea, N.A.F.; Montaño, G.M.F.; Moreno, R.J.F. 2003.
Evaluación de un programa de control de la brucelosis bovina en hatos lecheros de Baja
California. Tec. Pecu. Méx. 41: 275-282.
VACD-43. RESPUESTA HUMORAL A DOS PRODUCTOS VACUNALES CONTRA LA
PESTE PORCINA CLÁSICA EN CONDICIONES DE CAMPO
O. Fonseca*, P. Domínguez*, R. González***, M. Reyes***, E. Ferrer*, M. Suárez**, M.P. Rodríguez**, O. Fernández*, M.T. Frías*, M.I. Percedo*
*Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Habana, Cuba. [email protected] **Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología (CIGB), La Habana, Cuba. ***Empresa Agropecuaria Pinar del Río, Candelaria, Pinar del Río.
La peste porcina clásica (PPC), es una enfermedad altamente contagiosa presente en
Cuba de forma endémica y está sujeta a un programa de control que incluye la vacunación
con la Cepa China (CCh), de LABIOFAM, S.A, de probada seguridad y eficacia. Buscando
las bondades de una vacuna marcadora que permita diferenciar animales enfermos de
vacunados, entre otros beneficios, se desarrolló un candidato vacunal por subunidad
proteica E2 (VE2) que tras resultados preclínicos favorables, se evaluó en condiciones de
campo en una granja porcina que había sido vacunada sistemáticamente con la CCh.
Mediante neutralización de la peroxidasa (NPLA) se evaluó la respuesta inmunológica de
animales vacunados con la CCh y con el nuevo candidato. Para ello se investigaron
muestras de sangre obtenidas en diferentes momentos del ciclo tecnológico (de preceba a
ceba). Se pudo determinar que los animales vacunados con el candidato vacunal tuvieron
20,85 veces más probabilidad de tener títulos de anticuerpos ≥1:50 que los vacunados con
la CCh. También se comprobó que a diferencia de los primeros, estos animales
mantuvieron altos títulos hasta el final de la ceba (p<0.05).
196
VACD-44. AISLAMIENTO DE BORDETELLA AVIUM EN PONEDORAS WHITE LEGHORN EN CUBA: PRIMER REPORTE
J. Vichi*, M. Colas**; J. Lopez**, I. Espinosa*, M García**, A. Merino**, S. Martinez* *Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). [email protected] **Laboratorio de Investigaciones y Diagnóstico Aviar (LIDA) Bordetella avium es un bacilo pequeño, gram negativo, mótil, que coloniza la tráquea de
pavos, pollos y otros tipos de aves. La infección producida por esta bacteria ocasiona
considerables pérdidas económicas y su importancia reside en su alta morbilidad y las
complicaciones con otras infecciones concurrentes. Con el objetivo de aislar e identificar
los agentes bacterianos asociados a trastornos respiratorios, 11 muestras biológicas se
colectaron de ponedoras White Leghorn provenientes de una granja del occidente del país,
con manifestaciones clínicas respiratorias. Muestras de tráquea, seno infraorbital y pulmón
se seleccionaron y sembraron en Agar Sangre. Colonias aisladas, lisas, grises,
sospechosas de Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) se les realizó tinción de gram, y se
sembraron por estrías en Agar Sangre suplementado con gentamicina 5µg/mL y Agar
Mackonkey. Los aislamientos sospechosos de ORT que no crecieron en Agar Mackonkey
se identificaron por PCR a partir de colonia, mientras que aislados microbianos con
crecimiento positivo se identificaron por perfil de pruebas bioquímicas mediante el Sistema
API (Biomériux). Tres de los aislados crecidos en formas de colonias blanco-amarillo con
cambios en la coloración del medio se identificaron como Bordetella avium (0000063, API
20 NE). Los aislados con crecimiento en forma de colonias rosadas en Agar Mackonkey se
identificaron como Escherichia coli (5144562, API 20 E). Este estudio constituye el primer
reporte de aislamiento de Bordetella avium en Cuba, en ponedoras White Leghorn, y
destaca el papel de ORT, E. coli y B. avium como bacterias patógenas del tracto
respiratorio de aves ligeras.
VACD-45. OBTENCIÓN DE ANTISUEROS EN CONEJOS AL GENOTIPO CPS 2J+ DE
STREPTOCOCCUS SUIS. CARACTERIZACIÓN PRELIMINAR M. Baez, I. Espinosa, S. Martínez. Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria. Streptococcus suis es una bacteria gram-positiva que produce infecciones altamente
patológicas en el ganado porcino. Se reconocen 35 serotipos de esta especie, según los
polisacáridos capsulares, de ellos el serotipo 2 resulta de mayor patogenicidad y causa
eventuales zoonósis en humanos. En Cuba el diagnóstico de esta enfermedad se realiza
mediante el cultivo y aislamiento del agente causal, sin embargo no existen herramientas
diagnósticas disponibles para la tipificación rápida con un mínimo de condiciones de
197 equipamiento. El objetivo del trabajo es obtener sueros específicos al genotipo cps 2J+
Streptococcus suis. Para ello se utilizó un aislado de campo del genotipo cps 2J+ de
Streptococcus suis caracterizado por pruebas bioquímicas y tipificación molecular por
PCR, a partir del cual se prepararon los inmunógenos correspondientes. Como modelo
experimental se utilizaron conejos inoculados por vía endovenosa. La titulación se realizó
mediante la técnica de aglutinación rápida en placa. Los sueros resultaron específicos a los
aislados del genotipo cps 2J+ de Streptococcus suis con títulos hasta 1/32, lo que permitió
distinguir entre otros aislados de otros genotipos y excluyente para otras entidades que
afectan el sistema respiratorio del cerdo. Este trabajo permite contar con un antisuero
específico promisorio para el desarrollo de técnicas serológicas que facilitan la
serotipificación de aislados del serotipo 2 de Streptococcus suis.
VACD-46. PRIMER REPORTE DE RETICULOENDOTELIOSIS AVIAR EN CUBA
Damarys Relova*, A. Merino**, O. Gonzalez***, Y. Miranda**, S. Cuello*, J. Noda* *Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). Apartado 10, CP 32700. San José de Las Lajas. La Habana. Cuba. [email protected] **Laboratorio de diagnostico aviar (LIDA). Mulgoba. Santiago de las Vegas. La Habana, Cuba. ***Instituto de Investigaciones Avícolas (IIA). Cacahual. Santiago de las Vegas. La Habana, Cuba. El virus de la reticuloendoteliosis aviar (REV) constituye en la actualidad un importante
agente infeccioso causante de neoplasia del tejido linfoide y otros tejidos, atraso en el
crecimiento e inmunosupresión. A partir de los antecedentes en nuestro país de aves
seroreactoras a este virus y afectadas por enfermedad tumoral en granjas de pollos
comerciales, se procedió a determinar la presencia de este agente viral con el empleo del
ensayo de PCR en tiempo real (con las siglas en ingles, rPCR). La detección por rPCR se
realizó a partir del DNA extraído de sangre u órganos hematopoyéticos de gallinas con
enfermedad tumoral procedentes de seis granjas comerciales de dos regiones geográficas.
Para este ensayo se diseñaron una pareja de cebadores y una sonda de hidrólisis
específicos para el segmento LTR del VRE. La confirmación de la identidad del fragmento
amplificado, se llevo a cabo en una muestra representativa de cada región mediante PCR
convencional con el uso de la misma pareja de cebadores. Los resultados obtenidos
revelaron amplificación de VRE en 6 de las 20 muestras evaluadas. Las secuencias
nucleotídicas obtenidas y analizadas por el programa BLAST revelaron que los dos
fragmentos amplificados de las dos muestras tienen identidad del 97% y 100%
respectivamente con cepas de referencia de VRE. Estos resultados confirman la presencia
por primera vez en Cuba del VRE y su participación en la etiología de la enfermedad
198 tumoral en las granjas avícolas. Estudios posteriores deberán ser realizados para conocer
la situación epidemiológica de este agente en el país.
VACD-47. APPLICATION OF FREEMAN-WIMLEY PREDICTION ALGORITHM TO
COMPUTATIONAL IDENTIFICATION OF BETA-BARREL MEMBRANE PROTEINS IN MYCOPLASMA PREDICTED PROTEOMES: COMPARISON WITH ANOTHER METHOD J.A. Agüero*, L. Aguilar-Bultet*, Y. Estévez-Diepa**, Y. Abreu-Jorge** and A. Lage-Castellanos*** *Microbial Genomics and Bioinformatics Laboratory. Molecular Biology Department. Microbiology Direction. National Center for Animal and Plant Health (CENSA), Havana. Cuba. [email protected] **Computer Science Department, Direction of Technological Innovation Management, National Center for Animal and Plant Health (CENSA), Havana. Cuba. *** Statistics and Mathematics Department, Cuban Neuroscience Center. Havana. Cuba. The attachment of mycoplasmas to mucosal epithelium of respiratory tract of birds is
thought to be a prerequisite for infection and disease. The critical role of cytadherence in
virulence is reflected by the inability of noncytadhering mycoplasma strains to cause
disease in experimentally infected animals. Data emerging from mycoplasma studies
indicate that several cytadhesion or related components have yet to be identified, defined,
and characterized, steps which are crucial to understand the exact contribution of each of
these molecules in promoting and maintaining a successful infection in the avian host.
Proteins involved in this process are anchored and/or exposed in mycoplasma surface.
Transmembrane beta-barrels (TMBBs) constitute one of the known structural classes of
integral membrane proteins. They perform critical functions, including active ion-transport,
passive nutrient intake and osmotic regulation, also act as proteases, lipases and may be
important for cell-cell adhesion, having great potential for using in vaccine or drug therapy
development. In a previous work TMBBs from Mycoplasma gallisepticum (MG) and
Mycoplasma synoviae (MS) predicted proteomes were in silico identified using PROB
software. Recently, Freeman and Wimley developed a TMBBs prediction algorithm which
showed better performance than any other previously published. This algorithm was
implemented by our group in a web-based application and this allowed to re-annotate the
earlier results using the new approach.
199
VACD-48. LA ACTIVIDAD DE SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD Y DE ACREDITACIÓN EN MYCOLAB
Evelyn Lobo*, Y. Lozada*, Y. Burgher*, A. Betancourt**, S. Martínez***, M. Santos***, B. Corona***, Y. Riveron**, A. Vega****, E. Roque**, O. Pérez****, E. Pérez*****, S. Roman******, R. Sánchez****** *MYCOLAB, Laboratorio para el diagnóstico de micoplasmas, Dirección de Microbiología, CENSA. Dra. Evelyn Lobo, PhD, Investigador Titular. Jefe de MYCOLAB. Directora de Microbiología. [email protected] **Grupo de calidad. Dirección de Calidad, CENSA ***Grupo de Biología Molecular, Dirección de Microbiología, CENSA ****Dirección de Microbiología, CENSA *****Dirección de Servicios tecnológicos ******Grupo de Metrología, CENSA La actividad de los sistemas de gestión de la calidad, el proceso de acreditación de
ensayos y certificación de laboratorios se ha visto potencializada, en los últimos años, en
los centros de investigación que pertenecen al Ministerio de Educación Superior de nuestro
país. MYCOLAB1, perteneciente al CENSA2, tiene como misión realizar servicios científico
técnicos para la detección de micoplasmas en los productos biotecnológicos de aplicación
biomédica que son desarrollados por la Biotecnología cubana, como la vacuna contra la
Hepatitis B, candidatos vacunales contra el cáncer de cabeza y cuello, eritropoyetina
recombinante utilizada en pacientes con afecciones renales crónicas, anticuerpos
monoclonales utilizados en tratamientos y como diagnósticadores, entre otros productos.
Además realiza investigaciones encaminadas al diagnóstico y control de las micoplasmosis
que afectan a ganados de interés económico como el cerdo, aves y bovinos. En la última
década este laboratorio, único de su tipo en el país, ha desarrollado la actividad de gestión
de la calidad aplicada al sistema de diagnóstico, basada en la norma internacional ISO/IEC
17025 para laboratorios acreditados, con ensayos validados lo cual permite brindar un
servicio de alta confiabilidad, seguridad y rapidez con los mismos estándares de los
laboratorios de referencia a escala internacional. MYCOLAB recibe auditorías externas,
tanto nacionales (CIM3, CIGB4, ONARC5) como internacionales (OMS6 y la OIE7) y ha
participado en estudios interlaboratorio que han demostrado la competencia técnica del
mismo. En la actualidad el personal del laboratorio fue evaluado por el ONARC con
resultados satisfactorios, se encuentra acreditando ocho ensayos y fue entregado a la OIE,
para su valoración, el expediente de Laboratorio de Referencia de la OIE para el
diagnóstico de la micoplasmosis en Mesoámerica y el Caribe.
1Laboratorio para el diagnóstico de micoplasmas 2Centro Nacional de sanidad Agropecuaria 3Centro de Inmunología Molecular 4Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología
200 5Organo Nacional de Acreditación de la república de Cuba 6Organización Mundial de la Salud 7Organización Internacional para la sanidad Animal
VACD-49. INTOXICACIÓN EN CABRAS ESTABULADAS DE LA RAZA BOER ASOCIADO A LA INGESTIÓN DE PASTO MULATO (BRACHIARIARUZIZIENSIS Y
BRACHIARIABRIZANTHA) Patricia Domínguez-Pérez, J.M. Figueredo, M.I. Percedo-Abreu, M. Díaz, Y. Martínez-García, P. Alfonso-Zamora Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria. [email protected] Se realizó el estudio-diagnóstico en un rebaño estabulado de 98 caprinos (23 machos y 75
hembras), importados de Canadá de la raza Boer. La alimentación básica de inicio
consistió en pienso de producción nacional, forraje de pasto Mulato (B.ruzizienses x B.
brizanta), procedente del área forrajera de la propia unidad, heno elaborado a partir de la
misma planta y agua ad libitum. Se realizaron estudios bacteriológicos, virológicos y
hematológicos, a los animales fallecidos se les realizó la necropsia y se practicaron
estudios histopatológicos. La enfermedad tuvo un proceso de curso sub-agudo,
caracterizado principalmente por inapetencia, desmedro progresivo, parálisis ruminal en
casos aislados, ictericia y ausencia de fiebre en la mayoría de los animales, posteriormente
se sucedieron afectaciones respiratorias. La morbilidad llegó a un 50 % y la mortalidad
alcanzó el 16% debido a un síndrome de insuficiencia hepato-renal y diátesis hemorrágica
por insuficiencia hepática aguda. El proceso ocurrido fue producto del consumo de pasto
Mulato como forraje y heno, inducido por la existencia de saponinas presentes en esta
especie de Brachiaria.
VACD-50. EVIDENCIA DE MARCADORES GENETICOS DE VIRULENCIA EN CEPAS DE STREPTOCOCCUS SUIS Y PASTEURELLA MULTOCIDA DE ORIGEN CUBANO
Ivette Espinosa, G. Miranda, M. Báez, S. Martínez, P. Domínguez, M.I. Percedo, E. Lobo, P. Alfonso Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria, [email protected] Streptococcus suis y Pasteurella multocida son dos entidades bacterianas de alta
diversidad genética, que participan como agentes secundarios en procesos respiratorios
del cerdo, sin embargo existen cepas de alta virulencia que ocasionan diversos cuadros
clínicos. S.suis se asocia a meningitis, artritis y septicemia incluso en humanos con riesgo
profesional, mientras las cepas toxigénicas de P.multocida, inducen la rinitis atrófica. En
este trabajo se realizó la identificación mediante reacción en cadena de la polimerasa de
fragmentos de diferentes genes relacionados con la virulencia de ambas entidades,
201 específicamente la presencia de serotipos capsulares 2 y 9 a través de fragmentos de
genes relacionados con la biogénesis de polisacáridos capsulares (cps2J y cps9J) y tres
proteínas suilisina (syl), muramidasa (mrp) y factor extracelular (ef). Para P.multocida se
estudió la presencia del gen de la toxina dermoncrótica (toxA), polisacáridos capsulares de
los serotipos A y D, así como otros genes relacionados con factores de adhesión. Se
detectó por primera vez en el país la presencia de aislados del serotipo 2(cps2J+) de
S.suis procedentes de casos clínicos con procesos invasivos, los cuales fueron negativos
para los marcadores syl, mrp y ef. Se detectaron aislados de los serotipos 2 y 9 asociados
a proceso respiratorios en los cuales se evidenció la amplificación de los marcadores syl,
ef y mrp. Todos los aislados estudiados de P.multocida corresponden al serotipo A y se
detectaron 4 aislados positivos para el fragmento del gen toxA. En este estudio se
evidencia la diversidad genética de aislados de ambas entidades asociados a diferentes
procesos clínicos en cerdos.
VACD-51. CONSIDERACIONES EN LA IMPLANTACION DE LA GESTION DE CALIDAD
EN EL DIAGNOSTICO DE LA BRUCELOSIS EN ESPAÑA Maria J. Estévez-Herrera*, F.A. Pérez-Pérez** * Dra. Veterinaria. Laboratorio Sanidad Animal. Junta de Extremadura. Ctra Los Santos S/N. C.P.06300 Zafra. España.
** Veterinario. Área G. S. Sierra De Huelva. Junta de Andalucía. Centro de Salud Cumbres Mayores. C.P. 21380 .España
Los primeros programas de lucha contra la brucelosis en España se inician en los años 50
con las llamadas Campañas de Saneamiento Ganadero. En nuestros días esta lucha se
engloba dentro de los Programas Nacionales de Erradicación de la Enfermedades de los
Animales, donde se establece que el diagnóstico de Brucelosis se llevará a cabo por los
laboratorios oficiales de Sanidad Animal, de acuerdo con los métodos oficialmente
aprobados, mediante la realización de las pruebas de rutina del Rosa de Bengala y
confirmación con fijación del complemento.
En este trabajo destacamos la importancia del resultado laboratorial para la elaboración de
un diagnóstico dentro del Plan Nacional de Erradicación de la Brucelosis en España, a
través de la implantación de un sistema de gestión de calidad en los laboratorios oficiales
de diagnóstico, incluyendo parámetros de sensibilidad y especificidad. Estos datos
laboratoriales se relacionan con la prevalencia de la enfermedad en los últimos años.
Todo ello analizado en cumplimiento con el marco normativo de la Unión Europea y
basado en las directrices de la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE).
202 Las estimaciones sobre sensibilidad y especificidad diagnóstica serán tan exactas como
sea posible, puesto que, cuando los valores de la prueba se indican sin disponer de datos
acerca de ambos parámetros, no es posible inferir predicciones sobre el estado infectivo o
prevalencia de la enfermedad en la población estudiada; de ahí la importancia de
implantación de la gestión de calidad en los laboratorios de realización de pruebas
veterinarias.
VACD-52. IMPLEMENTATION OF FREEMAN-WIMLEY PREDICTION ALGORITHM IN A WEB-BASED APPLICATION, FOR IN SILICO IDENTIFICATION OF BETA-BARREL
MEMBRANE PROTEINS
J.A. Agüero*, Y. Estévez-Diepa**, L. Aguilar-Bultet*, Y. Abreu-Jorge** and A. Lage-
Castellanos***
*Microbial Genomics and Bioinformatics Laboratory. Molecular Biology Department.
Microbiology Direction. National Center for Animal and Plant Health (CENSA), Havana.
Cuba. [email protected]
**Computer Science Department, Direction of Technological Innovation Management,
National Center for Animal and Plant Health (CENSA), Havana. Cuba.
*** Statistics and Mathematics Department, Cuban Neuroscience Center. Havana. Cuba.
Integral membrane proteins (IMPs) constitute about 20-30% of all bacterial proteins. IMPs
come in two structural classes, alpha-helical (AMPs) and transmembrane beta-barrels
(TMBBs). TMBBs are embedded in the outer membranes of bacteria (both gram negative
and acid fast gram positive), mitochondria and chloroplasts. They perform critical functions,
including active ion-transport, passive nutrient intake and osmotic regulation, also act as
proteases, lipases and may be important for cell-cell adhesion, having great potential for
use in vaccine or drug therapy development. Several methods have been applied for
TMBBs prediction, utilizing different algorithmic techniques and there is a number of freely
available predictors. They can be divided to those based on Hidden Markov Models, Neural
Networks and Support Vector Machines. Recently Freeman and Wimley developed a
prediction algorithm based on the physicochemical properties of TMBBs, accuracy of which
(99%) is comparable to the accuracy of AMPs prediction and exceeds the accuracy of other
TMBBs prediction methods, and a Matthews Correlation Coefficient (MCC) of 0.748 when
using the most efficient prediction criteria, which is better than any previously published
algorithm. With its use it was implemented a web-based application using Grails, which is
an open source web application framework that leverages the Groovy programming
language. This system is capable of processing from one protein sequence to complete
predicted proteomes up to 3000 proteins with a response time of about 0.65 seconds per
500-residue protein, allowing graphical analyses for each protein.
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