LE SERODIAGNOSTIC DE LA SYPHILIS
VDRL - TPHA
Elabor par : YASMERO
2O14
PLAN DE TRAVAIL
Introduction
I. Dfinition de la syphilis
II. Les symptmes et les phases dvolution de la syphilis
III. Les ractions de la srologie
IV. Linterprtation des rsultats
Conclusion
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Introduction 1
Le diagnostic srologique repose sur la mise en vidence des anticorps induits par linfection et retrouvs dans le srum, celui-ci est trait pour retirer certaines substances qui peuvent gner la technique ce qui aboutit une certaine dilution Le patient doit tre de prfrence jeun.
I. Dfinition de la syphilis 2 La syphilis est une maladie infectieuse relativement frquente. En recrudescence, elle se trouve au 3me rang aprs les candidoses et les chlamydioses. Cause par un spirochte, le trponme ple (Treponema pallidum). La syphilis se transmet par les rapports sexuels, par voie transplacentaire ou exceptionnellement par contacts sanguins (piqre, transfusion). Le srodiagnostic de la syphilis est un examen consistant rechercher dans le sang des anticorps spcifiques la maladie. Celui-ci permettra de dterminer le stade de l'infection.
II. Les symptmes et les phases dvolution de la syphilis : 3, 4 La syphilis volue en 3 phases sur plusieurs mois (voire plusieurs annes), entrecoupes de phases asymptomatiques pendant lesquelles seul le diagnostic srologique est possible.
Quant La priode dincubation (temps entre le contact et lapparition des symptmes), celle-ci varie habituellement entre 10 et 90 jours. Les symptmes peuvent passer inaperus ou tre mal reconnus, et peuvent mme ne pas se manifester du tout. Mais lorsquils sont prsents, les symptmes se manifestent en trois stades:
Stade primaire
Trois quatre semaines aprs le contact, un chancre (ulcre trs superficiel, bords rguliers, dont la base est enfle et qui peut mesurer jusqu 1 cm de diamtre) apparat au site dentre du microbe (bouche, pnis, vagin ou anus). Le chancre ne cause gnralement pas de douleur et peut tre associ
1 Otto Braun-Falco, Dermatology, 2000, 282 p. 2
ADAM WYNTER, the Rosen Publishing Group, 2007, 64 p. 3
Didier Bessis, C. Francs, B. Guillot, Manifestations dermatologiques des maladies infectieuses mtaboliques et
toxiques, 2009 4 Michel Vaubourdolle, infectiologie 3eme ed. 2007, 334p.
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des ganglions (petites bosses non douloureuses). Cest par contact direct avec ce chancre que linfection se transmet. La gurison du chancre se produit spontanment (sans traitement) en 3 8 semaines. Cependant, l'individu reste contagieux et le test sanguin de dpistage est souvent ngatif ce stade.
Stade secondaire
Non traite, la syphilis volue et quelques semaines (de six semaines six mois) plus tard, des rougeurs apparaissent sur la peau et les muqueuses, accompagnes de fivre, de fatigue, de maux de tte et de douleurs musculaires. Ces symptmes disparaissent d'eux-mmes sans traitement. La syphilis passe alors dans une phase de latence. Cest une priode dite silencieuse pendant laquelle linfection volue sans manifestation aucune. Seul un test de sang peut rvler la prsence du microbe. La personne demeure contagieuse. Le test sanguin sera gnralement positif ce stade, mais peut tre faussement ngatif chez les individus infects par le VIH.
Stade tertiaire
Aprs plusieurs annes, parfois 10 30 ans, des complications srieuses peuvent affecter la peau, les os, ainsi que les organes vitaux tels que le systme nerveux et le systme cardio-vasculaire.
III. Les ractions srologiques :
A - Raction antigne non trponmique : VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) Principe du VDRL :
Raction dagglutination passive sur lame en verre.
Lantigne utilis est dorigine cardiolipidique constitu de microcristaux de cholestrol sur lesquels sont adsorbs les molcules de cardiolipide = Haptne de Wasserman.
Des particules de charbon sont piges dans la combinaison Ac-Ag pour faciliter la lecture.
Rsultat du dpistage est rendu positif ou ngatif.
Rsultat est rendu en titre en cas de dpistage positif
Selon lorigine de lantigne utilis
Raction antigne non trponmique (Ag cardiologique)
Raction antigne trponmique
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Technique du VDRL : Elments de la raction :
Srum frais.
Eau physiologique.
Antigne VDRL prs lemploi. Matriel:
Centrifugeuse
Micropipettes rglables (5-50L)
Plaques en verre
Portoir pour tubes hmolyse
Agitateur rotatif de Kline
Container de dchets contamins
Eau de Javel Mode opratoire :
a. La raction qualitative
Distribuer 50L de srum sur chaque puits de la plaque en verre.
Ajouter 16 L dAntigne VDRL
Placer la plaque sur lagitateur de Kline pendant 8 mn
Lire immdiatement au microscope
Deux types de ractions
Raction qualitative (Dpistage)
Raction quantitative (Dpistage Positif)
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a. 1. Manipulations pour le test qualitatif
PUITS
Tmoin + Tmoin - Tmoins Ag VDRL
Srum inconnu
Srum 50 L du srum + 50 L du srum - 50 L deau physiologique
50 L du srum inconnu
Antigne VDRL 16 L 16 L 16 L 16 L
Placer sur un plateau rotatif (agitateur de kline) pendant 8 mn
Lecture + - -
a. 2. Lecture du VDRL
b. La raction quantitative :
Lorsque la raction quantitative est positive on ralise la mme raction avec une srie de dilution du srum au (1/2, , 1/8, 1/16, 1/32) avec de leau physiologique.
Le titre danticorps est exprim par linverse de la dernire dilution donnant une raction positive nette.
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b. 1. Manipulations pour le test quantitatif
PUITS
1 2 3 4 5
Eau physiologique
50 L 50 L 50 L 50 L 50 L
Dilution 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32
Srum analyser en L
50 L Reporter 50
Reporter 50 L
Reporter 50 L
Reporter 50 L
Jeter 50 L dans leau de Javel
Ag VDRL 16 L 16 L 16 L 16 L 16 L
Agitation pendant 8 mn
Lecture
B - Raction antigne trponmique : TPHA (Treponema Pallidum Hemagglutination Assay) Principe du TPHA :
Raction dhemmagglutination passive ralise sur des microplaques.
LAntigne utilis est un lysat de trponema pallidum adsorb sur des hmaties.
Le dpistage consiste tester le srum la dilution de 1/80.
Des dilutions sont effectues pour le titre dans le cas du dpistage positif.
Technique du TPHA : Elments de la raction :
Srum frais.
Coffret de ractif prs lemploi. Matriel :
Centrifugeuse
Micropipettes rglables (5-50L), (50 200 L)
Pipette multicanaux
Plaques de microtitration fond en U
Cnes pour micropipettes
Portoir pour tubes hmolyse
Container de dchets contamins
Eau de Javel
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Mode opratoire :
a. La raction qualitative
Distribuer le diluant dans les puits de microtitration comme suit dans le 1er, 3me, et 4 me puits mettez 25 L, dans le 2me puits mettez 100 L.
Ajouter 25 L du srum tester dans le puits numro 1.
Diluer lchantillon 1/20.
Ajouter 75 L de la suspension dHNS au puits 3, et le mme volume de suspension dHS au puits 4
La dilution finale des puits 3 et 4 est 1/80.
Couvrir la microplaque et laisser reposer pendant 45 60 min.
Effectuer la lecture lil nu.
a. 1. Manipulations pour le test qualitatif
Deux types de ractions
Raction qualitative (Dpistage)
Raction quantitative (Dpistage Positif)
3me
puits
1er
puits 2me
puits
4me
puits
25 L 25 L 25 L
25 L
25 L du
diluant
+ 25 L du
srum
100 L du
diluant
25 L du
diluant
+ 75 L
dHS
25 L du
diluant
+ 75 L
dHNS
Schma illustrant le mode opratoire du test TPHA
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a. 2. Lecture du TPHA
1er Puits : voile uniforme couvrant tout le puits Fortement positif. 2me Puits: voile couvrant le 2/3 du puits Moyennement positif. 3me Puits: voile couvrant le 1/3 du puits Faiblement positifs. 4me Puits: Anneau trs serr bord nets (absence de voile) Ngatif.
b. La raction quantitative :
Lorsque la raction qualitative est positive (1/80) on ralise une srie de dilution du srum (1/80, 1/160, 1/320, 1/640, 1/1280, 1/2560)
Le titre danticorps est exprim par linverse de la plus haute dilution donnant encore une raction positive
Cupule
A B C D E F G H
Tampon en L
25 25 25 25 25 25 25
Srum 1/20 en L
25 25* * * * * * **
HS en L 75 75 75 75 75 75 75 75
Dilution 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560 1/5120 1/10240
Lecture + + + + + - - -
Titre retenu 1280 ( dernire cupule prsentant une hmagglutination nette ).
* : reporter 25 l dans la cupule suivante gauche.
**: jeter 25 l dans l'eau de javel
Srum n1
Srum n1
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IV. Linterprtation des rsultats :
VDRL TPHA Diagnostic Examens complmentaires
- - Syphilis exclue ou contamination trs rcente
Refaire une srologie 10 15 jours plus tard
+ + Forte probabilit de syphilis
Situer le stade de linfection par une srologie quantitative
- + Syphilis rcente traite ou ancienne (traite ou non traite)
Une srologie quantitative
+ - Il faut confirmer le TPHA ngatif par une autre raction (FTA)
Si la raction FTA est ngative, il sagit dun faux positif en VDRL
Conclusion :
Le dpistage syphilitique repose sur la combinaison VDRL-TPHA en raison de: - La grande efficacit pour la dtection de T. Pallidum et lexclusion de toute autre forme
dinfection trponmique. - La lecture des rsultats peut seffectuer aprs une dure courte de la ralisation des
tests. - Ce sont les meilleurs tests pour effectuer un dpistage de routine
Pour poser le diagnostic, un bilan srologique complet est conseill afin de mieux situer lanciennet de linfection, surtout en labsence de signes cliniques.
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