UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL FACULTAD DE ODONTOLOGA
EFICACIA EN LA CICATRIZACIN DEL APSITO CON ACEITE ESENCIAL DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (mua) VERSUS EL APSITO QUIRRGICO CONVENCIONAL EN
GINGIVECTOMIAS EN ORYCTOLAGUS CUNICULUS (conejos)
TESIS
PARA OBTENER EL TTULO PROFESIONAL DE
CIRUJANO DENTISTA
Presentada por El Bachiller:
CASAS ALARCN, SAL
LIMA PER
2011
EFICACIA EN LA CICATRIZACIN DEL APSITO CON ACEITE ESENCIAL DE MINTHOSTACHYS MOLLIS (mua) VERSUS EL APSITO QUIRRGICO CONVENCIONAL EN
GINGIVECTOMIAS EN ORYCTOLAGUS CUNICULUS (conejos)
MIEMBROS DEL JURADO
Mg. C.D. PEDRO ROMERO CARLOS: PRESIDENTE
C.D. LUIS GONZLES GONZLES: SECRETARIO
Mg. C.D. MARIA ELENA MOSCOSO SNCHEZ: VOCAL
Mg. C.D. NEME PORTAL BUSTAMANTE: MIEMBRO DEL JURADO
C.D. ORISON PARDO MATOS: SUPLENTE
AGRADECIMIENTO
Al Dr. Cachay, al Dr. Chuna, al Dr. Mallma y al
Dr. Montes por su gran ayuda en la realizacin
del presente trabajo de investigacin, que me
brindaron su total y completo apoyo de una
manera desinteresada e incondicional.
A mis amigas Mara Isabel y Milagros Felicia
por su colaboracin y compaa constante, y
sobre todo por su demostracin de amistad y
confianza.
A mis jurados por las sugerencias y aportes
brindados.
A todos los que me ayudaron de alguna u otra
manera el la realizacin del presente trabajo
de investigacin.
DEDICATORIA
A Dios por cuidarme y guiarme
en todo momento, a mis padres
Alberto y Dolores, y a mis hermanos, y muy en
especial a mi hermana Romy por brindarme
su apoyo y confianza incondicional a lo
largo de toda mi vida.
NDICE
TTULO
RESUMEN
ABSTRACT
Pg.
I. INTRODUCCIN 1
II. HIPTESIS. 27
III. OBJETIVOS 28
IV. MATERIALES Y MTODOS 29
V. RESULTADOS.. 37
VI. DISCUSIN 44
VII. CONCLUSIONES. 47
VIII. RECOMENDACIONES 49
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.. 5o
X. ANEXOS. 54
RESUMEN
El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar el efecto del apsito con
aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) en comparacin con el
apsito quirrgico convencional en gingivectomias de conejos
(Oryctolagus cuniculus). Siendo un estudio de tipo longitudinal,
prospectivo, comparativo y experimental. Se utilizaron 18 conejos
(Oryctolagus cunculus) sometidos a gingivectomias divididos en tres
grupos: Grupo A tratados con apsito con aceite esencial de
Minthostachys mollis (mua). Grupo B con apsito quirrgico
convencional y el grupo C control. Las gingivectomias se realizaron en la
regin anterior maxilar y mandibular por cada conejo aproximadamente
de 3 por 2 mm de longitud. Los resultados obtenidos indican que el grupo
tratado con el apsito con aceite esencial de Minthostachys mollis (mua)
despus de las gingivectomias presentaron menor grado de clulas PMN
(polimorfonucleares neutrfilos) en comparacin con el grupo que se
trato con apsito quirrgico convencional y el control. A los 3 das y 7
das el grupo tratado con el apsito con aceite esencial de Minthostachys
mollis (mua) despus de las gingivectomias presenta menor grado de
linfocitos y macrfagos; como tambin mayor grado de fibroblastos en
comparacin con el grupo que se trato con apsito quirrgico
convencional y el control. A la vez el grupo tratado con el apsito con
aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) presenta mayor grado de
epitelizacin en comparacin con el grupo que se trato con apsito
quirrgico convencional y el control.
Con este estudio se ha demostrado la mayor eficacia del apsito con el
aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) en comparacin con el
apsito quirrgico convencional en la cicatrizacin de gingivectomias.
Palabras clave: cicatrizacin, Minthostachys mollis (mua), flavonoides.
ABSTRACT
The aimed of this study was to evaluate the effect of essential oil dressing
Minthostachys mollis (mua) compared with conventional surgical
gingivectomy dressing in rabbits (Oryctolagus cuniculus). It is a
longitudinal, prospective and experimental study. We used 18 rabbits
underwent gingivectomy divided into three groups: Group A treated with
essential oil dressing Minthostachys mollis (mua). Group B with
conventional surgical dressing and the group C control. The gingivectomy
was performed in the anterior maxilla and mandible of each rabbit in about
3 to 2 mm in length. The results indicate that the group treated with the
essential oil dressing Minthostachys mollis (mua) after gingivectomy cells
had lower level of PMN (polymorphonuclear cells - neutrophils) compared
with the group that was treated with conventional surgical dressing and
also at y the control group . By the day 3 and 7, the group treated with
essential oil dressing Minthostachys mollis (mua) after gingivectomy
showed low levels of lymphocytes , macrophages, and fibroblasts.
Furthermore, greater results compared with the group that was treated
with dressing conventional surgical and control. While the group treated
with essential oil dressing Minthostachys mollis (Mua) has better degrees
of epithelialization compared with the group that was treated with
conventional surgical dressing and control.
This study has demonstrated the greater effectiveness of the dressing with
the essential oil of Minthostachys mollis (Mua) compared with
conventional surgical dressing in the healing of gingivectomy.
Key words: healing, Minthostachys mollis (Muna), flavonoids.
1
I. INTRODUCCIN
El retraso de la cicatrizacin de heridas de la mucosa bucal y la evolucin
lenta y complicada de la misma son un gran problema para el cirujano
dentista muchos son los agentes que determinan que este proceso resulte
lento como los agentes locales y los generales. La inflamacin lleva
tambin a un retraso en la cicatrizacin y cierre de la misma.
Varias investigaciones se han realizado en bsqueda de mejores
resultados ya sea a travs de mejores sustancias o tcnicas en el manejo
de las heridas quirrgicas o infectadas a nivel de la mucosa bucal.
En estos casos el manejo teraputico de rutina es asistir al uso adecuado
de antiinflamatorios qumicos. Pero lo importante seria realizar una
tcnica que nos lleve a observar mejores resultados en pacientes con
complicaciones.
Muchas han sido las tcnicas que se han intentado y que se siguen
intentando, tales como rayos lser, la sangre de grado, ua de gato,
corticoides, etc.
La yodopovidona al 5 % constituye tambin un medicamento cicatrizante
y antisptico quirrgico muy utilizado en heridas de cavidad bucal. (31)
Dentro de los factores que influyen, podemos mencionar los factores
generales como, enfermedades sistmicas (diabetes, hipertensin,
anemia, etc.) y los factores locales que son los que ms intervienen, como
los procesos infecciosos, pero a nivel local existen componentes; como el
tejido conectivo en especial por las fibras colgenas que se pueden
estimular para mejorar la cicatrizacin.
2
Desde la antigedad las enfermedades bucales han hecho sufrir al
hombre, y como prueba de ello se sabe que la Odontologa fue practicada
en las culturas Egipcia, Mesopotmica, Incaica y Maya. Incluso, se
conoce que los indios Norteamericanos tenan muy en alto el concepto de
una boca limpia, y con ese propsito masticaban gomas, resinas y ciertas
races de plantas para, de esa manera, mantener limpios sus dientes y
prevenir la caries.
El Minthostachys mollis o mua, es importante estudiarla ya que existen
estudios que han demostrado su propiedad bactericida y fungicida de
manera directa, y al ser preparados con otros compuestos estas
propiedades podran variar.
La Minthostachys mollis (mua) contiene flavonoides; la mayora de los
detectados responden a estructuras de flavonoles 3- 4 dihidroxilados en
el anillo B, glicosilados en posicin C3. Los flavonoides retiran oxgeno
reactivo especialmente en forma de aniones superxidos, radicales
hidroxilos, perxidos lipdicos o hidroperxidos. De esta manera bloquean
la accin deletrea de dichas sustancias sobre las clulas. Sus efectos
citoprotectores son, por ejemplo, bien potentes en fibroblastos de la piel
humana, queratinocitos, clulas endoteliales y ganglios sensoriales
cultivados en presencia de sulfoxina-butionina, un inhibidor irreversible de
la glutatin sintetasa. (1)
Por este motivo nos hemos planteado realizar un estudio para evaluar la
eficacia en la cicatrizacin del apsito con aceite esencial Minthostachys
mollis o mua, en comparacin con el apsito quirrgico convencional
(oxido de zinc ms eugenol) en gingivectomias realizadas en conejos
3
(Oryctolagus cuniculus). Por tal motivo nos planteamos la siguiente
pregunta:
Cul es la eficacia en la cicatrizacin del apsito con aceite esencial de
Minthostachys mollis o mua, en comparacin con el apsito quirrgico
convencional en gingivectomias realizadas en conejos (Oryctolagus
cuniculus)?
El Per presenta una riqueza y mega diversidad de plantas
medicinales nativas, que es uno de los pilares de la
etnofarmacologa y la medicina tradicional, desde la poca del
Incanato hasta la actualidad. Siendo estas utilizadas en forma
emprica por sus bondades teraputicas en el cuidado y restauracin de la
salud. (12)
Dentro de este contexto, los aceites esenciales (AE) son productos
naturales de gran valor e importancia econmica. (25)
La bioactividad de los AE se investiga a partir de los efectos
farmacolgicos que son producidos por sus metabolitos, los cuales
son obtenidos por diferentes tcnicas fisicoqumicas a partir de las hojas.
(25)
Son pocas las plantas peruanas que han validado su uso tradicional,
una de estas es la Minthostachys mollis, conocida popularmente como
mua, la cual es usada para el tratamiento de dolencias de las vas
respiratorias y digestivas. (6)
La mua habita en los diferentes pisos ecolgicos de nuestra serrana
crece entre 2500 y 3500 msnm, donde existe en abundancia. (29)
Es una planta hemicriptfila que durante el invierno (fro y seco)
4
desaparecen sus hojas para brotar nuevamente con las primeras lluvias
de la primavera. (21)
Diversos estudios han mostrado su efecto antibacteriano e insecticida ,
otros han explorado qu metabolitos estn presentes en su aceite
esencial. (9)
Antes de considerar los procesos de reparacin tisular, es importante
tener presente que la cicatrizacin, es el resultado de la regeneracin de
los tejidos y del cierre de una herida; la cicatrizacin no es un fenmeno
aislado y su evolucin est condicionada por una serie de factores
bioqumicos a nivel de la solucin de continuidad que representa la lesin,
por unos cambios en las estructuras tisulares y por una serie de procesos
que determinan la formacin de la cicatriz. (7)
El epitelio lesionado tiene una habilidad para regenerarse y restablecer la
integridad a travs de un proceso de migracin epitelial conocido con el
nombre de "inhibicin por contacto". En general un borde libre de epitelio
contina migrando (por proliferacin de clulas germinales que empujan
el borde libre hacia delante) y se detiene en su migracin al hacer
contacto con otro borde libre de epitelio. Este proceso se regula por la
actividad histoqumica de las clulas epiteliales que han perdido contacto
con otras clulas epiteliales a su alrededor. (8)
En aquellas heridas en las que nicamente se ha afectado la superficie
del epitelio (abrasiones), ocurre una migracin del epitelio a travs de una
matriz base de tejido conectivo. En heridas en las que el epitelio ha sido
lesionado en profundidad, ste migra si existe una base de tejido
conjuntivo, permaneciendo debajo de la superficie del coagulo de sangre
5
que esta desecado (la costra) hasta alcanzar el otro margen epitelial. Una
vez que la herida est totalmente epitelializada, la costra se afloja y se
desprende fcilmente. (4)
Un ejemplo clsico del proceso de inhibicin por contacto ocurre cuando
se produce una apertura accidental hacia el seno maxilar. Si el epitelio de
la pared del seno como el de la mucosa bucal, son lesionados, comienza
una migracin en ambas partes hasta hacer contacto entre s, creando un
tracto epitelizado entre la cavidad bucal y el seno maxilar que se conoce
como fstula bucosinusal. (4)
Cicatrizacin
La cicatrizacin es un proceso natural que posee el cuerpo para
regenerar los tejidos de la dermis y epidermis en respuesta a una lesin,
siendo el resultado la regeneracin de los tejidos y el cierre de una
herida. Su evolucin esta a nivel de la solucin de continuidad que
presenta la lesin, por unos cambios en las estructuras tisulares y por una
serie de procesos a nivel celular, que termina en la formacin de cicatriz.
(3)
Tipos de cicatrizacin, segn la unin de los bordes Los cirujanos usan los trminos cicatrizacin por primera intencin,
segunda intencin y tercera intencin para describir tres procesos
bsicos en la cicatrizacin de las heridas. (5)
Cicatrizacin por primera intencin
Los mrgenes de la herida estn en contacto (2), es decir, tiene los
planos cerrados, estando suturada o no, por lo tanto los bordes de la
6
herida en la cual no ha ocurrido prdida de tejido son colocados en la
posicin anatmica exacta en que se encontraban antes de la lesin. La
herida se repara con una mnima formacin de cicatriz. Estrictamente
hablando la cicatrizacin por primera intencin es nicamente una teora
ideal, imposible de alcanzar clnicamente; no obstante, el trmino es
generalmente usado para sealar que los bordes de una herida son
reaproximados. Esta es la forma de cicatrizacin que se podra esperar
despus de la extirpacin de una lesin en una parte de la cavidad bucal
donde la flexibilidad de los tejidos es tal que la herida se puede unir o
suturar. (15). Este proceso de cicatrizacin requiere de una menor
epitelizacin, depsito de colgeno, contraccin y remodelacin. Por lo
tanto, la cicatrizacin ocurre mucho ms rpido, con un bajo riesgo de
infeccin y con una menor formacin de cicatriz que en las heridas que lo
hacen por segunda intencin. Ejemplos de este tipo de reparacin son:
reduccin adecuada de fracturas de hueso, reposicin de laceraciones,
colgajos y reanastmosis anatmica de los nervios. (5)
Cicatrizacin por segunda intencin
La cicatrizacin por segunda intencin ocurre cuando los bordes de la
herida no han sido afrontados, o bien cuando se ha producido despus
de la sutura una dehiscencia de la misma dejando que se produzca un
cierre espontneo. Aparece en este caso un tejido de granulacin que no
es ms que la proliferacin conjuntiva y vascular. En este proceso la
epitelizacin se efecta de una manera ms lenta a travs de dos vas:
centrpeto es decir, de los bordes de la herida hacia el centro partiendo de
7
los islotes epiteliales, y centrfugo de los islotes hacia la periferia. (15)
En contraste, la cicatrizacin por segunda intencin significa que existe
prdida de tejido por lo que hay una brecha entre los bordes de la herida,
esta cicatrizacin se da regularmente en tejidos poco flexibles, cuyos
bordes no se pueden aproximar, en este caso se requiere de la migracin
de gran cantidad de epitelio, deposicin de colgeno, contraccin y
remodelacin. Su evolucin es muy lenta y genera una cicatriz de mayor
tamao que en el caso de la cicatrizacin por primera intencin existiendo
un mayor riesgo de infeccin en la herida, se habla de la cicatrizacin de
este tipo en el cual la herida se granula hacia adentro ya que el material
que llena el defecto se llama tejido de granulacin. (15)
Este tipo de herida es el resultado de la biopsia de una lesin en una zona
de la cavidad bucal en la cual los tejidos no son flexibles y cuyos bordes
no se pueden aproximar. Es bsicamente idntico al de la cicatrizacin
por primera intencin a excepcin de que los fibroblastos y los capilares
tienen una mayor distancia para migrar, se forma ms tejidos de
granulacin y la necesidad de curacin es lenta. (13,15)
Otros ejemplos de este tipo de cicatrizacin son la del alvolo dentario
posterior a una exodoncia, fracturas pobremente reducidas y lesiones
muy aparatosas con prdida de tejido. (5)
Cicatrizacin de tercera intencin
Cuando la aproximacin de los bordes se realiza varios das despus que
se produjo la solucin de continuidad, o la cicatrizacin ocurre cuando se
cierra una herida mediante una sutura despus de un perodo de
8
cicatrizacin por segunda intencin. El cierre se hace cuando se est
seguro de que se ha superado el riesgo de infeccin. (5)
Esta forma de cierre se efecta sobre todo en las heridas contaminadas
en la que no es conveniente suturar de inmediato porque se propicia la
infeccin, cuando se considere que la contaminacin est controlada y es
remota la probabilidad de infeccin es en este el momento indicado para
la realizacin de la sutura. (5)
En sntesis, independientemente de la aproximacin o no de los bordes, el
proceso de reparacin es igual, se puede resumir como la formacin y
maduracin del tejido de granulacin con migracin de los bordes
epiteliales, la diferencia radica en que por primera intencin se acelera el
proceso en cuanto al tiempo de curacin, al ser menor el espacio entre los
mrgenes de la herida. (5)
La curacin de una herida esta, en gran parte, influida por el estado
nutricional del enfermo, ya sea por desnutricin o por falta de asimilacin.
La cicatrizacin es el resultado de la regeneracin de los tejidos y del
cierre de una herida. Su evolucin esta a nivel de la solucin de
continuidad que presenta la lesin, por unos cambios en las estructuras
tisulares y por una serie de procesos a nivel tisular, que determina la
formacin de la cicatriz. (23)
La rotura local de la relacin intercelular y la prdida del contacto suele
ser el primer efecto de una lesin a partir del cual se inicia el proceso de
curacin siendo la respuesta inflamatoria la primera fase de todo proceso.
(15). Se sabe que las clulas inflamatorias regulan la separacin de la
matriz del tejido conjuntivo. En los rganos y tejidos humanos que han
9
perdido la capacidad de regenerar sus propias clulas, la cicatrizacin se
hace gran parte por sntesis de tejido conectivo para suplir defectos o unir
bordes de la herida. Este proceso comienza con la formacin de tejido de
granulacin donde los fibroblastos forman el elemento celular ms
importante hasta que la cicatrizacin se complete, junto con un lecho
capilar para un buen aporte sanguneo. (26)
En toda lesin tisular sin importar su naturaleza sea incisiones de origen
traumtico, por quemaduras, heridas limpias o infectadas la respuesta
tiene un mismo esquema fundamental, pero con variantes particulares
inherentes al tipo de traumatismo y al tipo de tejido lesionado. (4)
Etapas en la cicatrizacin de las heridas
Independientemente de la causa que origin la lesin, en la herida se
inicia un proceso, el cual tiene como fin ltimo trabajar para devolver la
integridad al tejido afectado. Como se indic anteriormente, este proceso
se llama cicatrizacin el cual se divide tpicamente en tres fases:
inflamatoria, proliferativa y de remodelacin. Las plaquetas con su
liberacin de citoquinas y factores de crecimiento son esenciales en cada
fase. (7)
Etapa de inflamacin o del sustrato
La inflamacin comienza inmediatamente despus de que el tejido es
lesionado y en ausencia de factores que la prolonguen, dura
aproximadamente de 3 a 5 das. Existen dos fases en la inflamacin:
vascular y celular. La fase vascular ocurre cuando empieza la inflamacin,
10
inicialmente con una vasoconstriccin debido a la ruptura celular, con la
finalidad de disminuir la prdida de sangre en el rea de la lesin, y a su
vez promover la coagulacin sangunea. Pocos minutos despus, la
histamina y las prostaglandinas E1 y E2, elaboradas por los leucocitos
causan vasodilatacin y aumento de la permeabilidad al crear pequeas
aberturas entre las clulas endoteliales, lo cual permite el escape de
plasma y leucocitos que migran hacia los espacios intersticiales,
facilitando la dilucin de los contaminantes y generando una coleccin de
fluidos que es conocido como edema. (8)
Los signos propios de la inflamacin son eritema, edema, dolor, calor (30
a.C 38 d.C) y prdida de la funcin. El calor y el eritema son causados
por la vasodilatacin; el edema es producido por la trasudacin de
lquidos; el dolor y la prdida de la funcin son causadas por la histamina,
quininas y prostaglandinas liberadas por los leucocitos, as como por la
presin del edema. (5)
La fase celular de la inflamacin es disparada por la activacin del
sistema de complemento, un grupo de enzimas plasmticas. Existen
diversos tipos de enzimas pero las ms importantes son el C3 y C5, las
cuales actan como factores qumicos, haciendo que los leucocitos
polimorfonucleares (neutrfilos) se agrupen y modifiquen en el lado de la
lesin (marginacin) y luego migren a travs de las paredes de las clulas
endoteliales (diapdesis). De la misma manera, ayudan a la opsonizacin
de las bacterias facilitando su fagocitosis y provocando su lisis al insertar
perforinas formadoras de poros en las membranas de bacterias y clulas
extraas. (4,18)
11
Una vez en contacto con el material extrao (por ejemplo una bacteria) los
neutrfilos liberan el contenido de sus lisosomas (degranulacin). Las
enzimas lisosmicas (formadas fundamentalmente por proteasas y
protenas antimicrobianas llamadas defensinas) trabajan para destruir las
bacterias y otros materiales extraos y para digerir tejido necrtico. Este
proceso es tambin ayudado por los monocitos, quienes de la sangre
penetran en los tejidos transformndose en macrfagos tisulares, los
cuales fagocitan cuerpos extraos y tejidos necrticos. (5,19)
Con el tiempo aparecen dos grupos de linfocitos: B y T. Los linfocitos B
son responsables de la inmunidad humoral. Se encargan, adems, de
reconocer el material antignico y producir anticuerpos a partir de las
clulas plasmticas. Participan en la formacin de clulas de memoria
para identificar materiales extraos e interactan con el complemento
para lisar clulas invasoras. Por su parte, los linfocitos T aparecen en tres
grupos: los T ayudadores los cuales estimulan a las clulas B para su
proliferacin y diferenciacin; los T supresores que trabajan para regular a
los T ayudadores en su funcin; y los T citotxicos, que lisan clulas que
se presentan como extraas. Durante la inflamacin, pequeas
cantidades de fibrina son depositadas para permitir a la herida resistir
ciertas fuerzas de tensin. (23) Debido a los cambios bioqumicos y
celulares que abarca esta fase se puede dividir en tres sub fases:
humoral, enzimtica y celular, as como tambin en respuesta vascular,
respuesta hemosttica y respuesta celular. (23)
En el transcurso del primer da despus de afrontar los bordes de la
herida, es decir, despus de 24 horas, los fenmenos de la inflamacin se
12
producen por una serie de mediadores que pueden ser de origen
exgeno, por ejemplo: los productos liberados por grmenes que pueden
aumentar la permeabilidad capilar y atraer los leucocitos en la zona
lesionada, o de origen endgeno sea provenientes del plasma. (23)
Al mismo tiempo los primeros cambios celulares que se producen son
depsitos de elementos formes de la sangre y del plasma en la superficie
de seccin de la herida con formacin de cogulos; la fibrina y las
plaquetas se separan de los elementos formes emigrando estas ltimas
hacia las paredes de la herida, para adherirse a los capilares lesionados y
propiciar la formacin de microtrombos. El sistema de coagulacin que es
la reaccin ms temprana y que interviene en esta fase inicial constituye
un estimulador rpido de la herida, de la conversin de fibringeno a
fibrina que proporciona un elemento estimulante a los macrfagos y de los
pequeos ppticos que son sustancias quimiotcticas de los leucocitos,
los cuales se liberan durante la polimerizacin de la fibrina. (23)
La respuesta inflamatoria est condicionada por una serie de mediadores
qumicos como la histamina y serotonina y una diversidad de enzimas
hidrolticas liberadas por linfocitos, macrfagos y monocitos, solo ejercen
sus efectos cuando ocurre una lesin que los libera al liquido tisular
convirtindolos en los primeros mediadores cuyo efecto es transitorio, la
histamina produce una breve fase de constriccin arteriolar, y luego una
vasodilatacin local y un aumento de la permeabilidad capilar. La
serotonina contribuye al aumento de la permeabilidad capilar, es liberada
en el momento de la adhesin plaquetaria a la pared vascular lesionada
esto contribuye a la vasoconstriccin y a la formacin de microtrombos
13
destinado a producir una hemostasia local. (23)
Por otro lado las enzimas intracelulares como el monofosfato cclico de
adenosina y el monofosfato cclico de guanosina participan en la
liberacin de mediadores como la histamina. El monofosfato cclico de
adenosina tambin favorece la liberacin de enzimas lisosomicas
especficas que ayudan en la reparacin de las heridas. A travs del
monofosfato cclico de guanosina hay una vinculacin entre los agentes
vasoactivos que provocan los cambios en la permeabilidad muscular, y
las enzimas que producen los cambios tisulares y los procesos de
reparacin. (23)
La respuesta celular comienza despus de 12 a 16 horas de que la herida
se produjo, las primeras clulas inflamatorias que aparecen son los
leucocitos polimorfonucleares, sin los cuales no hay un control eficaz de la
sepsis de la herida. Los leucocitos contienen grnulos citoplasmticos que
quizs constituyan una fuente de enzimas y, adems, participan en la
fagocitosis, aunque no es su principal actividad; sin embargo, la actividad
fibrinoltica est relacionada directamente con la desintegracin de los
granulocitos. (15)
Luego aparecen los linfocitos los cuales son productores de anticuerpos
especficos. Los linfocitos T segregan linfoquina capaces de regular el
crecimiento y la actividad de los fibroblastos y la sntesis de colgeno.
Estos linfocitos pueden inhibir la migracin de los fibroblastos y la sntesis
de las protenas por la va de los mediadores solubles. Asimismo debe
existir un equilibrio en la regulacin de las linfoquinas, el que puede llevar
a una cicatrizacin dbil o, a la inversa, a una fibrosis excesiva (15)
14
Los macrfagos y sus lisosomas contienen grandes cantidades de
enzimas hidrolticas, las cuales son esenciales en la digestin, transporte
del material de desbridamiento de la herida, as como liberadores de
citocinas o factores de crecimiento que participan en la regulacin de la
fibrosis, la cicatrizacin de las heridas crnicas y en las injurias cutneas,
la angiogenia y la osteogenia, estimulan la mitosis y la migracin de
clulas hacia la herida e influyen en la fibroplasia.
Finalmente las clulas plasmticas producen anticuerpos especficos
contra bacterias y antgenos provenientes de cuerpos extraos. (15)
Los macrfagos que migran y se establecen al final de la fase inflamatoria
parecen desempear un papel muy importante al estimular la actividad de
sntesis de los fibroblastos. (15)
Etapa fibroblstica o proliferativa
Los fibroblastos comienzan con el depsito de grandes cantidades de
fibrina y tropocolgeno, as como otras sustancias iniciando la fase
fibroblstica en la reparacin de la herida. Las sustancias consisten en
diversos polisacridos, los cuales actan como fijadores de las fibras de
colgeno. La fibrina forma una red que permite a los nuevos capilares
atravesar la herida de un borde a otro. Los fibroblastos se originan
localmente y a travs de las clulas mesenquimticas pluripotenciales,
stas comienzan con la produccin de tropocolgeno al tercer o cuarto
da despus de la lesin. Los fibroblastos tambin secretan fibronectina,
una protena a la cual se le han encontrado diversas funciones, entre
estas se encuentran ayudar a estabilizar la fibrina; permite el
15
reconocimiento del material extrao que debe ser removido por el sistema
inmunolgico; participar como factor quimiotctico de los fibroblastos, y
ayudar a guiar a los macrfagos en su actividad fagocitara a lo largo de la
red de fibrina. La etapa fibroblstica contina con el incremento y el
aumento de nuevas clulas. La fibrinlisis ocurre causada por la plasmina,
que aparece en los nuevos capilares y remueve la red de fibrina
innecesariamente elaborada. (5)
Los fibroblastos depositan el tropocolgeno, precursor del colgeno
comenzando por debajo y atravesando la herida. Inicialmente el colgeno
es producido en exceso y puesto de una manera poco organizada, esta
sobreabundancia de colgeno es necesaria para darle cierta fuerza al
rea de la herida. Debido a la deficiente orientacin de las fibras de
colgeno la herida no es capaz de resistir fuerzas de tensin durante esta
fase, la cual dura de 2 a 3 semanas. Si la herida es sometida a alguna
tensin al comienzo de la fase fibroblstica, se tiende a maltratar la lnea
de la lesin. No obstante, si es sometida a una tensin cerca del final de
esta etapa, ocurre una unin entre el viejo colgeno y el nuevo colgeno
formado a nivel de la lesin. Clnicamente al final de este perodo la
herida se presenta dura, debido al excesivo acumulo de colgeno y
eritematosa por el alto grado de vascularizacin. La herida alcanza entre
70% y 80% de la resistencia a la tensin respecto al tejido antes de ser
lesionado. (4)
En el depsito de tejido conjuntivo participa de manera predominante el
fibroblasto, clula de aparicin repentina en el sitio de la lesin y que
16
sintetiza colgeno responsable de la resistencia en el tejido cicatrizal,
secreta mucopolisacridos que contribuye a la orientacin de las fibras
colgenas, a la remodelacin de la herida al transformarse en colgeno
maduro y desaparecer como clula. Despus de su secrecin por la
clula, las fibras colgenas se alinean inmediatamente y de manera
adyacente a los mrgenes de la clula. La colgena entrecruzada
proporciona mejor resistencia que la que est sometida a un continuo
proceso de sntesis y lisis. (5)
Los aminocidos se incorporan a las protenas por diferentes vas para
formar precursores de colgeno que participan en la cicatrizacin. La fase
proliferativa comprende del quinto al vigsimo da del proceso de
cicatrizacin, y se caracteriza por una rpida fibroplastia que sustentan el
fibroblasto y el colgeno.
Aproximadamente hacia el quinto da, el espacio incisional, rico en
botones capilares provenientes de ambos lados de la herida, est lleno de
tejido conectivo con fibroblastos para crear conductos vasculares
continuos, es este estadio de cicatrizacin de la herida la vascularizacin
es mxima.
En la segunda semana de la cicatrizacin hay acumulo continuo de
colgeno y proliferacin de fibroblastos en el tejido conectivo escindido, el
infiltrado leucocitario y el edema que se incrementaron disminuye
progresivamente. En este momento palidece la cicatrizacin al parecer
por una creciente acumulacin de colgeno acompaada por una lenta
desaparicin de los conductos vasculares. (4)
El incremento de colgeno intensifica la presin mecnica sobre los
17
conductos vasculares, despus de algunos das puede observarse que
disminuye la vascularizacin. (4)
Etapa de remodelacin o regenerativa
La remodelacin constituye la etapa final del proceso de cicatrizacin, es
tambin conocida con el trmino de "maduracin de la herida". Durante
esta fase muchas fibras de colgeno que fueron depositadas de manera
desordenada son destruidas y remplazadas por nuevas fibras, las cuales
se orientan de una manera ms efectiva para soportar las fuerzas de
tensin en el rea de la herida. Entretanto, la resistencia de la herida
aumenta lentamente, pero no en la magnitud en que se produjo durante la
fase fibroblstica. La fuerza de la herida nunca alcanza el 80% u 85% de
la resistencia que el tejido tenia previa a la lesin. Algunas fibras de
colgeno son removidas para dar suavidad a la cicatriz. Como el
metabolismo de la lesin se reduce, la vascularidad tambin disminuye y
por ende el enrojecimiento de la herida. La elasticidad en ciertos tejidos
como la piel y ligamentos no se recuperan durante la cicatrizacin, lo que
genera prdida de flexibilidad a lo largo de la cicatriz. (4)
Por ltimo, cerca del final de la etapa fibroblstica y al inicio de la
remodelacin la herida se contrae. En muchos casos, la contraccin juega
un papel importante en la reparacin de la herida. Durante este perodo,
los bordes migran hacia el centro. En una herida en la cual sus bordes no
fueron colocados adecuadamente, la contraccin disminuye el tamao de
la misma, beneficiando al tejido. (5)
No obstante la contraccin puede causar problemas, tal es el caso de las
18
quemaduras cutneas de tercer grado, en las que se produce deformidad
y se debilita la piel. Otra desventaja de la contraccin se ve en individuos
que sufren cortes curvos en su piel, en estos frecuentemente se produce
una eversin al ser aproximados los bordes. (4)
La epitelizacin aporta cierto grado de resistencia a la cicatriz, pero su
propsito es cubrir en forma hermtica la superficie de la herida, puede
observarse la migracin de clulas epiteliales a partir de los bordes para
unirse en la lnea media y formar un puente; por lo general, ello coincide
en el tiempo con la aparicin del tejido de granulacin y entre ambos
procesos cubren el defecto en perfecta concordancia. (5)
La sangre y los lquidos corporales contienen fibronectina y vitronectina
que favorecen la migracin de clulas epiteliales, ms an diversos
factores de crecimiento (citocinas) estimulan la migracin y mitosis de
queratinocitos para recubrir la prdida de espesor parcial en mucosa. (14)
Debe hacerse mencin de los miofibroblastos, clulas de tipo fibroblasto
que poseen componentes de msculo liso en el citoplasma, estos
miofibroblastos reaccionan ante agonistas y antagonistas farmacolgicos
del msculo liso y su influencia parece ser importante en esta etapa de la
cicatrizacin. (13)
Hacia el final de la primera semana la herida est cubierta de una
epidermis de espesor casi normal y la hendidura subepitelial est llena de
tejido conectivo vascularizado, que empieza a depositar fibras de
colgeno. (13)
Factores que interfieren en la cicatrizacin
El cirujano bucal puede crear las condiciones que favorezcan o no el
19
proceso normal de cicatrizacin. Adhirindose a los principios quirrgicos
de restablecer la continuidad de los tejidos, minimizando el tamao de la
herida y restaurando posteriormente la funcin, se facilita el proceso de
cicatrizacin. Se debe recordar que las heridas de piel, msculos,
ligamentos y mucosa bucal nunca sanan sin dejar cicatriz. El cirujano
debe dirigir sus esfuerzos a reducir la prdida de la funcin y a lograr, en
la medida de lo posible, una mnima cicatriz. (7). Los factores que
interfieren en el normal proceso de cicatrizacin de las heridas pueden ser
clasificados en dos categoras: factores locales, los cuales son fcilmente
controlables por el cirujano bucal, y factores generales, ms complejos y
difciles de reconocer, ya que muchas veces pueden actuar de una forma
desconocida. A continuacin se definen cada uno de ellos:
Factores Locales
Entre los factores locales podemos sealar los siguientes:
Cuerpos extraos
Es cualquier entidad que el organismo detecte como extrao, o el sistema
inmunolgico del husped lo vea como ajeno, tal es el caso de bacterias y
el hilo de sutura. Los cuerpos extraos pueden provocar tres problemas:
primero facilita la proliferacin de las bacterias, causando infeccin y
daos en el husped; en segundo lugar elementos no bacterianos pueden
interferir en la respuesta de defensa del husped y permitir la infeccin; el
tercer problema es que actan como antgenos generando respuestas
Inmunolgicas que provocan una prolongada inflamacin. (8,14)
Tejido necrtico
El tejido necrtico puede causar dos problemas. En primer lugar, sirve de
20
barrera que interfiere en la accin reparativa de las clulas. La inflamacin
aumenta debido a que los leucocitos deben eliminar los restos de tejido
mediante un proceso de fagocitosis y lisis. El segundo problema que
puede generar es que el tejido necrtico constituye un nicho importante
para la proliferacin de bacterias. Este puede contener sangre que se
acumula en la herida (hematoma) por lo que constituye una excelente
fuente de nutrientes para el crecimiento de las bacterias. (7, 20, 22)
Isquemia.
La isquemia de la herida interfiere en su cicatrizacin por diversas causas.
La isquemia de los tejidos promueve la necrosis. sta tambin provoca
una reduccin en la migracin de los anticuerpos, leucocitos, antibiticos,
entre otros, incrementando las probabilidades de una infeccin, as mismo
reduce el aporte de oxgeno y los nutrientes necesarios para la reparacin
de la herida. Entre las posibles causas de isquemia podemos indicar:
diseo incorrecto del colgajo, presin externa sobre la herida, presin
interna sobre la herida (hematoma), anemias, ubicacin incorrecta de las
suturas, entre otros. (3, 22)
Tensin
La tensin sobre una herida es un factor que impide su cicatrizacin. Si la
sutura es colocada con una excesiva tensin, va a estrangular los tejidos,
produciendo isquemia. Si la sutura es removida antes de tiempo, existe el
riesgo de la reapertura de la herida lo que producira una cicatriz mucho
mayor. Si la sutura es removida tardamente se corre el riesgo de dejar
marcas desfigurativas cuando la epitelializacin sigue la va de las sutura.
(8)
21
Tambin podemos tomar en consideracin como factores locales que
interfieren en la cicatrizacin los siguientes: infecciones, irradiacin previa
sobre la piel, mala orientacin y manipulacin brusca de los bordes de la
herida, entre otros. (7)
Factores Generales
Entre los factores generales que pueden interferir en el proceso normal de
cicatrizacin, tenemos los siguientes:
Dficit proteico y vitamnico, los cuales pueden obstaculizar la sntesis de colgeno y de fibroblastos.
Radiacin teraputica, en estos casos existe alteracin del riego sanguneo de los maxilares y por ende reduccin del potencial
seo para la reparacin.
Vejez, con la edad la respuesta del organismo se reduce producto de alteraciones en la actividad celular y capacidad regeneradora.
Trastornos metablicos (diabetes, hipercalcemia), se relaciona con la cicatrizacin tisular deficiente y con la disminucin en su
respuesta a la infeccin. (8)
Trastornos medicamentosos (antimetablicos, inmunosupresores) y hormonales.
Adems de los factores que acabamos de sealar, la localizacin de la
herida y el tamao de sta juegan un papel importante debido a que, en
un rea con mayor aporte vascular el proceso de cicatrizacin ser mucho
ms efectivo, de la misma forma una herida amplia tarda ms en
recuperarse que una de menor tamao. (5)
22
La Minthostachys mollis (mua) es una planta nativa usada por los
pobladores de las diferentes localidades de la serrana como saborizantes
de los alimentos, propiedades medicinales digestivas, eliminacin de la
flema del pecho y curacin de tumores etc. (21)
El aceite esencial de este gnero tiene accin parasiticida y acaricida
debido a algunos principios qumicos activos como pulegona, mentona,
celo, existentes en la planta. (28)
En cuanto a su composicin qumica los aceites esenciales estn
constituidos por compuestos predominantemente hidrocarbonatos
llamados terpenos y sesqui terpenos y actan como soporte de los
compuestos oxigenados, como alcoholes, aldehdos, cetonas y steres a
los cuales se debe preponderantemente su aroma. (24)
Estudios estn demostrando el increble poder curativo de los aceites
esenciales, debido a que crean un ambiente en el que no pueden vivir las
bacterias, hongos y virus. (25)
En el Per se han evaluado la actividad antimicrobiana del aceite esencial
de la Minthostachys mollis (mua) utilizando la metodologa de
incorporacin en agar, copos de algodn, excavacin en placas de agar y
por discos de papel. El aceite esencial obtenido por destilacin de arrastre
a vapor fue evaluado sobre tres bacterias enteropatgenas: Escherichia
coli, Salmonella entrica, ser tiphy shiguella dysentereae concluyendo que
el mtodo de incorporacin en agar es el ms adecuado y que los tres
microorganismos fueron sensibles al aceite esencial. (24)
Ahora bien, es extremadamente difcil mantener en el tiempo, por
mtodos mecnicos, el estndar apropiado de placa dental.
23
Consecuentemente y debido a las limitaciones individuales para su
remocin, se han agregado agentes antimicrobianos a los enjuagues
bucales con la finalidad de hacer ms efectivos los modos de limpieza
tradicional. (16,31)
Al respecto, se ha evaluado el efecto de antibiticos tpicos, compuestos
oxigenados, compuestos cuaternarios de amonaco, compuestos
fenlicos, extractos de plantas, bis-bisguanidas, flor y combinaciones
antimicrobianas. (25)
Salmn en 1994 estudi los aspectos fitoqumicos, toxicolgicos,
antimicrobianos y bromatolgicos de Minthostachys mollis (mua). No
obtuvo halos de inhibicin a ninguna concentracin y en ninguna cepa.
(Cndida albicans ATCC 10231, Eschenchia coli ATCC 8739 y
Staphylococus aureus ATCC 6538) por lo que no pudo determinar
fehacientemente su actividad antimicrobiana.
Poblete, E. en 1998 demostr que el aceite esencial de mua tiene efecto
contra Phytophtora infestans, Fusarium solanaceum y Erwinea carotovora
que son patgenos de la papa.
Inga & Guerra en 2000, demostraron mediante un estudio las
propiedades bactericidas / bacteriostticas del aceite esencial de
Minthostachys mollis frente a Staphylococus aureus ATCC 25923, B.
cereus MC, Salmonella typhi, S. sonnei MC, Escherichia coli ATCC.
25922 y K. pneumoniae ATCC 10031. Adems de la accin fungisttico /
fungicida para Fusarium moniliforme y Aspergius nge.
24
En el estudio de Primo & col en 2001 se estudia, a Minthostachys
verticillata "Peperina", observndose buena actividad antibacteriana
contra S. aureus, B. cereus, E. coli, P. Mirabillis y antiviral contra el virus
Herpes Simplex Tipo 1 y el virus de la Pseudorrabia, aunque con escasa
actividad contra P. aeruginosa.
Salmon (1994) & Ornachea (1979) demostraron que la Minthostachys
mollis contiene flavonoides y la mayora de los detectados responden a
estructuras de flavonoles 3-4 dihidroxilados en el anillo B, glicosilados en
posicin C3. Los antecedentes de flavonoides del gnero informan ya
sobre este tipo de derivados en otras especies aunque tambin lo hacen
sobre derivados glicosilados de la misma aglicona, pero en posicin C7,
detectados en menor proporcin en esta oportunidad, en lo que a flavonas
se refiere, se detect y en escasa concentracin, una sola de ellas, la
diosmetina.
Martnez (2002). Demostr que adems combaten la inflamacin y las
alergias y aumentan la efectividad de las clulas natural killer del sistema
inmunolgico. De hecho, se ha demostrado que los flavonoides
pertenecientes a plantas medicinales de Tafi del Valle, Tucumn
(Argentina), tienen actividad antimicrobiana. Muchos de estos efectos
antiinflamatorios y antialrgicos podran explicarse a travs de su accin
inhibidora sobre el factor de transcripcin nuclear kappa B, activador de
muchas citocinas proinflamatorias. Tambin ejerceran su accin
antiinflamatoria al inhibir las actividades enzimticas del metabolismo del
cido araquidnico por la va de la 5-lipooxigenasa, as como por su
25
actividad antiproteoltica al inhibir algunas proteasas de la matriz. (17)
As, la gensteina bloquea el desarrollo de tumores al prevenir la
formacin de nuevos vasos impidiendo con ello la llegada del oxgeno y
nutrientes a las clulas neotumorales. (30)
Accin antioxidante de los flavonoides. La capacidad de los polifenoles
vegetales para actuar como antioxidantes en los sistemas biolgicos fue
ya reconocida en los aos treinta; sin embargo, el mecanismo
antioxidante fue ignorado en gran medida hasta hace poco tiempo. El
creciente inters en los flavonoides se debe a la apreciacin de su amplia
actividad farmacolgica. Pueden unirse a los polmeros biolgicos, tales
como enzimas, transportadores de hormonas, y ADN; quelar iones
metlicos transitorios, tales como Fe2+, Cu2+ , Zn2+, catalizar el
transporte de electrones, y depurar radicales libres . Debido a este hecho
se han descrito efectos protectores en patologas tales como diabetes
mellitus, cncer, cardiopatas, infecciones vricas, lcera estomacal y
duodenal, e inflamaciones. Otras actividades que merecen ser
destacadas son sus acciones antivirales y antialrgicas, as como sus
propiedades antitrombtica y antiinflamatorias. Siguiendo estos criterios,
el flavonoide quercitina es el que mejor rene los requisitos para ejercer
una efectiva funcin antioxidante. Su capacidad antioxidante medida
como es de 4,7 mM, lo que resulta 5 veces mayor al demostrado por las
vitaminas E y C y tiene una hidrosolubilidad similar a la de la vitamina E.
La funcin antioxidante de la quercitina muestra efectos sinrgicos con la
vitamina C.
26
Los flavonoides retiran oxgeno reactivo especialmente en forma de
aniones superxidos, radicales hidroxilos, perxidos lipdicos o
hidroperxidos. De esta manera bloquean la accin deletrea de dichas
sustancias sobre las clulas. Sus efectos citoprotectores son, por ejemplo,
bien potentes en fibroblastos de la piel humana, queratinocitos, clulas
endoteliales y ganglios sensoriales cultivados en presencia de sulfoxina-
butionina, un inhibidor irreversible de la glutatin sintetasa. (10,30)
27
II. HIPTESIS
Sabiendo que el Minthostachys mollis (mua) tiene propiedades
antiinflamatorias, antibacterianas y antifngicas por tener los principios
activos de flavonoides; es probable que el efecto cicatrizal del aceite
esencial de Minthostachys mollis sea ms eficaz que el del apsito
quirrgico convencional en gingivectomias realizadas en conejos
(Oryctolagus cuniculus).
28
III. OBJETIVOS
3.1 OBJETIVO GENERAL
Evaluar el efecto del apsito con aceite esencial de Minthostachys
mollis (mua) en comparacin con el apsito quirrgico convencional
(oxido de zinc ms eugenol) en la cicatrizacin de gingivectomias
realizadas en conejos (Oryctolagus cuniculus).
3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
Evaluar el efecto cicatrizal (a nivel celular, fibroso y de epitelizacin) del apsito con aceite esencial de Minthostachys
mollis (mua), en gingivectomias realizadas en conejos
(Oryctolagus cuniculus) a 1,3 y 7 das.
Evaluar el efecto cicatrizal (a nivel celular, fibroso y de epitelizacin) del apsito quirrgico convencional (oxido de zinc
ms eugenol) en gingivectomias realizadas en conejos
(Oryctolagus cuniculus) a 1,3 y 7 das.
Comparar los resultados en los grupos de estudio.
29
IV. MATERIALES Y MTODOS
4.1 TIPO DE ESTUDIO
Longitudinal, prospectivo, comparativo, experimental.
4.2 POBLACIN
Conejos (Oryctolagus cuniculus) sometidos a gingivectomias.
4.3 CRITERIO DE INCLUSIN
- Conejos sanos.
- De ambos sexos.
- de 3 a 4 meses de edad.
4.4 MUESTRA
TAMAO: El tamao de la muestra se determino mediante el criterio No
probabilstico. Por conveniencia. Por ser un trabajo experimental. Se
utilizaron 18 conejos (Oryctolagus cuniculus) los cuales fueron divididos
de la siguiente manera:
1.-Grupo experimental (con mua)
Estuvo conformado por las gingivectomias tratadas con aceite esencial de
Minthostachys mollis (mua), se trabajaron 6 conejos dos gingivectomias
por cada conejo y se sacrificaron 2 conejos a 1, 3 y 7 das.
2.-Grupo con apsito convencional
Estuvo conformado por las gingivectomias tratadas con apsito quirrgico
convencional (oxido de zinc ms eugenol) se trabajaron 6 conejos dos
gingivectomias por cada conejo y se sacrificaron 2 conejos a 1, 3 y 7
das.
30
3.-Grupo control
Estuvo conformado por las gingivectomias no tratadas con ninguna
sustancia, se trabajaron 6 conejos dos gingivectomias por cada conejo y
se sacrificaron 2 conejos a 1, 3 y 7 das.
4.5 VARIABLES
Variable Independiente:
o Apsito con aceite esencial de Minthostachys mollis (mua).
o Apsito quirrgico convencional (eugenol mas oxido de zinc).
Variable dependiente:
o Efecto cicatrizal (a nivel celular, fibroso y epitelizacin).
4.6 OPERACIONALIZACIN DE LAS VARIABLES
Dimensin Indicador Escala Valor
Respuesta
Histopatolgica.
- Clulas :PMN
linfocitos,
macrfagos,
Fibroblastos,
epitelializacin.
Ordinal
0: ausente.
1: pocos.
2: regular.
3: aumentados.
31
4.7 PROCEDIMIENTO
1.- OBTENCIN DEL ACEITE ESENCIAL DE Minthostachys mollis
(mua).
-RECOLECCIN: Se realiz en el casero de HUANCHAY, ubicada en la
provincia de HUARAZ entre los 78 39 30 longitud oeste y los 7 4030
latitud sur, a 2800 msnm en el departamento de ANCASH; recolectndose
15 Kg de hojas jvenes y en buen estado de plantas que se hallan en las
riveras de los ros y de las acequias ya que son plantas silvestres que
crecen en zonas donde hay permanente humedad.
-LIMPIEZA: Una vez recolectadas las hojas se procedi a lavarlas
dejando caer chorros de agua repetidas veces. Separando las hojas que
se hallan en mal estado para su posterior eliminacin y dejando solo las
que se hallan en buen estado. Se secan e introducen en sobres de papel
y fueron llevadas al consultor para su clasificacin taxonmica y
certificacin botnica.
-SECADO: Las hojas se almacenaron en un ambiente oscuro
impidiendo la exposicin directa a los rayos solares, colocando las
hojas dispersas para disminuir la humedad gradualmente por 7 das.
-OBTENCION DEL ACEITE ESENCIAL: Se realiz en el laboratorio de
farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la UNMSM.
Utilizando el Mtodo de destilacin de Arrastre a Vapor, ya que es el
mtodo ms preciso para la obtencin de aceites esenciales y que tiene
por finalidad separar los principios voltiles contenidas en una mezcla
32
compleja de compuestos no voltiles, este mtodo es el ms utilizado por
que los aceites esenciales son insolubles o poco solubles en agua y es
ms fcil la separacin ya que se realiza por diferencia de densidades y a
la vez tambin el costo de operacin es bajo.
Para la obtencin del aceite esencial se realizaron los siguientes pasos:
- Se colocaron las hojas en un lugar bajo sombra con una adecuada
ventilacin por un lapso de 4 das con buena ventilacin libre de
humedad y de contaminacin.
- Las hojas y tallos se cortaron manualmente con la finalidad de que la
parte cortada se exponga mayormente al contacto con el vapor
durante el proceso de destilacin.
- El procedimiento en si se realiz colocando los 15 kilos de la planta en
la pera de decantacin en dos tiempos en el baln se coloc dos litros
de agua, posteriormente se calent el agua hasta que hierva y el vapor
atraviese las hojas de la planta que se hallan en la pera y finalmente
se pudo apreciar el paso del vapor de agua con el aceite a travs del
refrigerante siendo recolectado en un vaso de precipitacin.
- En el vaso de precipitacin por diferencia de densidades el aceite
pudo ser separado con una bureta.
- Finalmente para su conservacin se coloc en un frasco color mbar y
en refrigeracin a 4 C.
-PARTE QUIRRGICA
SELECCIN Y DISTRIBUCIN DE LOS CONEJOS: Los especmenes de
experimentacin correspondieron a 18 conejos todos fueron evaluados
clnicamente por un mdico veterinario, controlando el peso y tamao
33
para determinar su estado de salud. Los animales se distribuyeron en
jaulas de 1x1m siendo cada grupo de 6 conejos (lagomorfos) .Su
alimentacin fue a base de conejina (aproximadamente 200 gr por conejo
al da) y agua.
Los animales de laboratorio a utilizar fueron 18 conejos de raza California,
hembras y machos de 3 meses de edad aproximadamente, con un peso
promedio que oscilo entre 2.0 Kg mas menos 200 gr, se dividieron en 3
grupos de 6 especmenes cada grupo en forma aleatoria simple. Estos
grupos correspondieron a los tiempos de estudio de 1 da, 3 das y 7 das,
respectivamente.
Se elaboro una hoja de datos donde se indico el peso, la dosis de cada
una de las drogas usadas, la va y las observaciones; adems de una
hoja de datos para el rea quirrgica donde se realiz las gingivectomias
y el tipo de grupo al que pertenece.
Protocolo Quirrgico
El procedimiento quirrgico se realiz en la Unidad de Ciruga
Experimental de la UPSJB.
- Se peso a los animales, se calculo la dosis de acuerdo al peso, lo
sedamos y luego los anestesiamos.
- Se les realiz una marca, para luego proceder a realizar la ciruga
despus de ello se procedi al llenado de la hoja de datos y
finalmente se les ubic a los animales dentro de sus respectivas
jaulas.
- Las gingivectomias se realizaron en la regin anterior maxilar y
34
mandibular por cada conejo de aproximadamente 3 por 2 mm.
- Se coloc el apsito de acuerdo al grupo al que perteneca.
Secuencia completa
Los animales fueron pesados, para luego anestesiar a los especmenes
por va intraperitoneal. Se les administro 0,2 ml de Promazil, 0,6 ml de
Xilacina y 0,8 ml de Ketamina con jeringa de tuberculina.
Se les diferencio escribiendo su nmero en el dorso de ambas orejas con
plumn indeleble. Se realiz el lavado del rea adyacente a la zona
quirrgica, primero con jabn lquido, luego con yodopovidona y por ultimo
con suero fisiolgico. Previamente se coloco una gasa estril de comisura
a comisura para evitar alguna aspiracin.
1. Grupo experimental (con mua)
Estuvo conformado por las gingivectomias tratadas con apsito de aceite
esencial de Minthostachys mollis (mua), se trabajaron 6 conejos dos
gingivectomias por cada conejo y se sacrificaron 2 conejos a 1, 3 y 7
das.
2.-Grupo con apsito convencional
Estuvo conformado por las gingivectomias tratadas con apsito quirrgico
convencional (oxido de zinc ms eugenol) se trabajaron 6 conejos dos
gingivectomias por cada conejo y se sacrificaron 2 conejos a 1, 3 y 7
das.
3.-Grupo control
Estuvo conformado por las gingivectomias no tratadas con ninguna
sustancia se trabajaron 6 conejos dos gingivectomias por cada conejo y
35
se sacrificaron 2 conejos a 1, 3 y 7 das.
Tcnica Histolgica
Todas las muestras fueron sometidas a los mismos procedimientos,
primero se fijaron con formol neutro al 10%, luego se descalcifico con
cido ntrico durante 5 das, se efectu la deshidratacin con alcoholes en
diferentes concentraciones de menor a mayor de 75% a 95%. Luego se
realiz el clareamiento en xilol para luego realizar el bao de parafina. Se
realiz la microtomia (3 um por lmina). Las lminas histolgicas se
realizaron con coloracin de Hematoxilina eosina y hematoxilina frrica.
La evaluacin microscpica
Se obtuvieron 36 cortes histolgicos, 12 por cada uno de los grupos de
evaluacin.
Seguidamente se efectu la lectura de las lminas histolgicas en el
Laboratorio de Histologa de la Facultad de Odontologa de la Universidad
Nacional Federico Villareal.
Se realiz el estudio de los cortes con un microscopio de luz (Olympus) a
10x y 40x de aumento para todas las lecturas, basadas en el proceso de
cicatrizacin de acuerdo a los objetivos de estudio.
Se realizaron las microfotografas de las lminas histolgicas con una
cmara digital en el laboratorio de Histologa.
La evaluacin del proceso de cicatrizacin fue realizada por un patlogo
utilizando el mtodo ciego para las lecturas de las muestras.
4.8 PROCESAMIENTO DE DATOS
Los datos fueron recopilados en una ficha de tabulacin y despus
36
analizados, y presentados en tablas y figuras del programa Microsoft
Office Excel 2007.
4.9 PLAN DE ANLISIS
Obtenida la informacin ordenada, se analizaron mediante la prueba de
Kruskal Wallis para determinar la relacin del grado de presencia de
cada una de las clulas que participan en la cicatrizacin en relacin al
tiempo y al tipo de tratamiento.
37
V. RESULTADOS
1.- En la tabla y figura No 1; se observa el promedio del grado de clulas
PMN (polimorfonucleares neutrfilos) de acuerdo al tratamiento a 1da;
el grupo tratado con el apsito de aceite esencial de Minthostachys
mollis (mua) presenta un grado de 1.8; el grupo tratado con apsito
quirrgico convencional de 2.8 y el grupo control de 3. Al utilizar la
prueba de Kruskal Wallis con la cual se obtuvo un resultado
estadsticamente significativo (p
38
grado de 1.3; el grupo tratado con apsito quirrgico convencional de 2.3
y el grupo control de 2.8. Al utilizar la prueba de Kruskal Wallis se obtuvo
un resultado el cual es estadsticamente significativo a los 3 y 7 das
(p0.05).
5.- En la tabla y figura No 5; se observa el promedio del grado de
epitelizacin de acuerdo al tratamiento a los 7 das el grupo tratado con el
apsito de aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) presenta un
grado de 1.3; el grupo tratado con apsito quirrgico convencional de 0.8
y el grupo control de 0.3. Al utilizar la prueba de Kruskal Wallis se obtuvo
un resultado el cual es estadsticamente significativo a los 7 das
(p
39
TABLA No1
PROMEDIO DEL GRADO DE PMN DE ACUERDO AL TRATAMIENTO A LAS 24 HORAS.
GRUPO No Media Mediana Rango
Minthostachys mollis 4 1,8 2 3,8
Apsito Qx. Convencional 4 2,8 3 8,7
Control 4 3 3 11,5
P=0,022
FIGURA No 1.
40
TABLA No 2
PROMEDIO DEL GRADO DE LINFOCITOS EN CADA GRUPO DE TRATAMIENTO DE ACUERDO AL TIEMPO.
GRUPO No Media Mediana Rango
3 das
Minthostachys mollis 4 1,3 1 4,2
Apsito Qx. convencional 4 2,3 2 8,7
Control 4 2,8 3 11,1
7 das
Minthostachys mollis 4 1,8 2 3,6
Apsito Qx. convencional 4 2,8 3 8,9
Control 4 3 3 11,5
p=0,047 p= 0,017
FIGURA No 2
41
TABLA No 3
PROMEDIO DEL GRADO DE MACRFAGOS EN CADA GRUPO DE TRATAMIENTO DE ACUERDO AL TIEMPO.
GRUPO No Media Mediana Rango
3 das
Minthostachys mollis 4 0,8 1 3,9
Apsito Qx. convencional 4 1,3 1 7,7
Control 4 2,3 2 12,4
7 das
Minthostachys mollis 4 1,3 1 3,5
Apsito Qx. convencional 4 2,3 2 8,6
Control 4 2,8 3 11,9
p=0,011 p= 0,011
FIGURA No 3
42
TABLA No 4
PROMEDIO DEL GRADO DE FIBROBLASTOS EN CADA GRUPO DE TRATAMIENTO DE ACUERDO AL TIEMPO.
GRUPO No Media Mediana Rango
3 das
Minthostachys mollis 4 2 2 10,5
Apsito Qx. convencional 4 1,8 2 9
Control 4 1,3 1 4,5
7 das
Minthostachys mollis 4 2,8 3 11,6
Apsito Qx. convencional 4 2 2 6,4
Control 4 2 2 6
p=0,087 p= 0,087
FIGURA No4
43
TABLA No 5
PROMEDIO DEL GRADO DE EPITELIZACIN EN CADA GRUPO DE TRATAMIENTO DE ACUERDO AL TIEMPO.
GRUPO No Media Mediana Rango
7 das
Minthostachys mollis 4 1,3 1 11,8
Apsito Qx. convencional 4 0,8 1 7,4
Control 4 0,3 0 4,8
p=0,044
FIGURA No 5
44
VI. DISCUSIN
El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar el efecto del apsito con
aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) en comparacin con el
apsito quirrgico convencional (oxido de zinc ms eugenol) en
gingivectomias realizadas en conejos (Oryctolagus cuniculus).
Los resultados demostraron una mejora en la cicatrizacin, en especial al
provocar menor reaccin inflamatoria debido a los flavonoides que es el
principio activo presenta en el aceite esencial de Minthostachys mollis
(mua) y que han sido validados por muchos estudios. Se observa menor
presencia de clulas PMN (polimorfonucleares neutrfilos), macrfagos
y linfocitos en comparacin con el apsito quirrgico convencional (oxido
de zinc ms eugenol) de manera estadsticamente significativa .Esto se
debe a la presencia de flavonoides as como lo demuestra el estudio de
Primo (2001).
A su vez otro estudio tambin menciona el efecto antibacteriano del
Minthostachys mollis como el trabajo de Inga y Guerra en el 2000,
quienes demostraron mediante un estudio las propiedades bactericidas /
bacteriostticas del aceite esencial de Minthostachys mollis frente a
Staphylococus aureus ATCC 25923, B. cereus MC, Salmonella typhi, S.
sonnei MC, Escherichia coli ATCC. 25922 y K. pneumoniae ATCC 10031.
Adems de la accin fungisttico / fungicida para Fusarium moniliforme y
Aspergius nge.
El efecto antibacteriano tambin es sobre bacterias facultativas as lo
demuestra el estudio de Primo & col en 2001 que estudia, a
45
Minthostachys verticillata "Peperina", observndose buena actividad
antibacteriana contra S. aureus, B. cereus, E. coli P. Mirabillis y antiviral
contra el virus Herpes Simplex Tipo 1 y el virus de la Pseudorrabia,
aunque con escasa actividad contra P. aeruginosa.
La epitelizacin tambin fue favorable al utilizar el aceite esencia de mua
esto por el efecto citoprotector que nos brindan los flavonoides presentes
en el aceite esto tambin es demostrados con el estudio realizado por
Martnez (2002), quien menciona que los flavonoides retiran oxgeno
reactivo especialmente en forma de aniones superxidos, radicales
hidroxilos, perxidos lipdicos o hidroperxidos. De esta manera bloquean
la accin deletrea de dichas sustancias sobre las clulas. Sus efectos
citoprotectores son, por ejemplo, bien potentes en fibroblastos de la piel
humana, queratinocitos, clulas endoteliales y ganglios sensoriales
cultivados en presencia de sulfoxina-butionina, un inhibidor irreversible de
la glutatin sintetasa. (10, 17)
El aceite esencial inactiva a las bacterias presentes en la primera fase de
la cicatrizacin de tal manera que el efecto antibacteriano fue eficaz esto
esta demostrado con nuestros resultados en la cual hay menos cantidad
de clulas PMN (polimorfonucleares) ,linfocitos y macrfagos ;estos datos
estn contrastados tambin con Martnez (2002) quien menciona que los
flavonoides adems combaten la inflamacin y las alergias y aumentan la
efectividad de las clulas natural killer del sistema inmunolgico. De
hecho, se ha demostrado que los flavonoides pertenecientes a plantas
medicinales de Tafi del Valle, Tucumn (Argentina), tienen actividad
antimicrobiana. Muchos de estos efectos antiinflamatorios y antialrgicos
46
podran explicarse a travs de su accin inhibidora sobre el factor de
transcripcin nuclear kappa B, activador de muchas citocinas
proinflamatorias. Tambin ejerceran su accin antiinflamatoria al inhibir
las actividades enzimticas del metabolismo del cido araquidnico por la
va de la 5-lipooxigenasa, as como por su actividad antiproteoltica al
inhibir algunas proteasas de la matriz.
Algunos estudios estn dando mayor fuerza al uso de aceites esenciales
mucho ms aquellos en los que el principal principio activo son los
flavonoides as como el estudio de Salmon (1994) & Ornachea(1979)
despus de realizar sus estudios sobre Minthostachys mollis (mua) en
cuanto a su composicin qumica encontraron que los aceites esenciales
estn constituidos por compuestos predominantemente hidrocarbonatos
llamados terpenos y sesqui terpenos y actan como soporte de los
compuestos oxigenados, como alcoholes, aldehdos, cetonas y esteres a
los cuales se debe preponderantemente su aroma .Estudios estn
demostrando el increble poder curativo de los aceites esenciales, debido
a que crean un ambiente en el que no pueden vivir las bacterias, hongos y
virus, ya que contiene flavonoides y la mayora de los detectados
responden a estructuras de flavonoles 3-4 dihidroxilados en el anillo B,
glicosilados en posicin C3.
47
VII. CONCLUSIONES
Al primer da el grupo tratado con apsito, con aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) despus de las gingivectomias presenta
menor grado de clulas PMN (polimorfonucleares - neutrfilos) en
comparacin con el grupo que se trato con apsito quirrgico
convencional (oxido de zinc ms eugenol) y el control.
A los 3 das y 7 das el grupo tratado con apsito, con aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) despus de las gingivectomias
presenta menor grado de linfocitos en comparacin con el grupo que
se trato con apsito quirrgico convencional (oxido de zinc ms
eugenol) y el control.
A los 3 das y 7 das el grupo tratado con apsito, con aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) despus de las gingivectomias
presenta menor grado de macrfagos en comparacin con el grupo
que se trato con apsito quirrgico convencional (oxido de zinc ms
eugenol) y el control.
A los 3 das y 7 das el grupo tratado con apsito, con aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) despus de las gingivectomias
presenta mayor grado de fibroblastos en comparacin con el grupo
que se trato con apsito quirrgico convencional (oxido de zinc ms
eugenol) y el control.
A los 7 das el grupo tratado con apsito, con aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) despus de las gingivectomias presenta
mayor grado de epitelizacin en comparacin con el grupo que se
48
trato con apsito quirrgico convencional (oxido de zinc ms eugenol)
y el control.
49
VIII. RECOMENDACIONES
Realizar estudios experimentales en la que se utilice el aceite esencial de Minthostachys Mollis (mua) en cirugas mayores de la
cavidad bucal.
Evaluar el efecto antimictico del aceite esencial de Minthostachys Mollis (mua) en estomatitis subprotesis.
Aplicar el aceite esencial de Minthostachys mollis (mua) en pacientes con gingivitis severa.
Recomendar tambin el uso de Minthostachys mollis (mua) como enjuagatorio diario en personas con gingivitis y que tengan
enfermedades sistmicas como la diabetes.
50
IX. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.
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54
X. ANEXOS
55
ANEXO 1.
FICHA DE RECOLECCION DE DATOS.
GRUPO CON MINTHOSTACHYS MOLLIS
GRUPO CON APOSITO CONVENCIONAL
GRUPO CONTROL
Ficha de Identificacin.-
- Espcimen No.-......................................
- Peso.- .......................................
- Color.-........................................................
Fecha de intervencin............................Hora.............................
Fecha de Sacrificio...............................Hora..............................
Tiempo de duracin del trabajo Quirrgico:....................
Curso clnico Post operatorio:
Positivo.
Negativo.
Por qu?...................................................................
Herida PMN Linf. Macrfagos fibroblastos EPITELIZACIN
No 1
No2
56
FOTOGRAFIA No1.
Equipo de anestesia y sedacin
FOTOGRAFIA No 2.
Equipo de ciruga utilizado en el experimento
57
FOTOGRAFIA No 3.
Preparacin de la anestesia y sedante
FOTOGRAFIA No 4.
Anestesia intraperitoneal del conejo con ayuda del veterinario
58
FOTOGRAFIA No 5.
Localizacin de la zona de gingivectomia del maxilar superior e
inferior
FOTOGRAFIA No 6.
Realizacin de la gingivectomia en el maxilar superior
59
FOTOGRAFIA No 7.
Realizacin de la gingivectoma en el maxilar inferior
FOTOGRAFIA No 8.
Preparacin del apsito con aceite esencial de Minthostachys mollis
60
FOTOGRAFIA No 9.
Colocacin del apsito con aceite esencial de Minthostachys mollis
FOTOGRAFIA No 10.
Preparacin del apsito quirrgico convencional
61
FOTOGRAFIA No 11.
Colocacin del apsito quirrgico convencional
FOTOGRAFIA No 12.
Introduccin del bloque en formol
62
FOTOGRAFIA No 13.
Evaluacin del bloque para la preparacin de lminas
FOTOGRAFIA No 14.
Evaluacin de las lminas histolgicas
63
FOTOGRAFIA No 15.
Clasificacin de las lminas histolgicas por grupo
FOTOGRAFIA No 16.
Observacin de las lminas histolgicas
64
MICROFOTOGRAFIA No 1.
Presencia de PMN en el grupo de control a un aumento de 100x a las
24 horas.
MICROFOTOGRAFIA No 2.
Presencia de PMN en el grupo con Minthostachys mollis a un
aumento de 400x. a las 24 horas.
65
MICROFOTOGRAFIA No 3.
Presencia de PMN en el grupo con apsito quirrgico convencional a
un aumento de 100x a las 24 horas.
MICROFOTOGRAFIA No 4.
Presencia de linfocitos y macrfagos en el grupo de control a un
aumento de 400x a los 3 das.
66
MICROFOTOGRAFIA No 5.
Presencia de linfocitos y macrfagos en el grupo con apsito con
Minthostachys mollis a un aumento de 100x a los tres das.
MICROFOTOGRAFIA No 6.
Presencia de linfocitos y macrfagos en el grupo con cemento
quirrgico convencional a un aumento de 100x a los 7 das.
67
MICROFOTOGRAFIA No 7.
Presencia de fibroblastos en el grupo con cemento quirrgico
convencional a un aumento de 100x a los 7 das.
MICROFOTOGRAFIA No 8.
Presencia de fibroblastos en el grupo con Minthostachys mollis a un
aumento de 400x a los 7 das.
68
MICROFOTOGRAFIA No 9.
Presencia de fibroblastos y fibras colgenas en el grupo con
Minthostachys mollis a un aumento de 400x a los 7 das.
MICROFOTOGRAFIA No 10.
Presencia de epitelizacin en el grupo con Minthostachys mollis a
un aumento de 100x a los 7 das.
69
MICROFOTOGRAFIA No 11.
Presencia de fibras colgenas desordenadas a los 7 das en el
grupo de control a un aumento de 100x.
MICROFOTOGRAFIA No 12.
Presencia de fibroblastos en el grupo con apsito con
Minthostachys mollis a un aumento de 400x a los 7 das.
70
MICROFOTOGRAFIA No 13.
Presencia de epitelizacin en el grupo con Minthostachys mollis a
un aumento de 400x a los 7 das.
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