Xtraction Techniques of Medicinal Plants

“ Phytochemical Screening and Extraction “

Disuun Oleh : Kelompok VII

Farmasi C

1. Irda Rizky ( 201310410311005 )2. Sofia Rusdeni ( 201310410311073 )3. Chicy Anita Hardianty ( 201310410311078 )

4. Muhammad Erfan ( 201310410311109 )

FAKULTAS ILMU KESEHATAN

PROGRAM STUDY FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG

2014 / 2015

KATA PENGANTAR

Puji syukur kita panjatkan atas kehadirat Tuhan Yang Maha Esa, atas limpahan Rahmat

dan Hinayah - Nyalah kami dapat menyelesaikan makalah yang berjudul “ Phytochemical

Screening and Extraction ”. Shalawat serta salam tetap tercurahkan atas junjungan kita Nabi

Muhammad Saw, yang telah membawa kita dari alam kegelapan menuju alam yang terang

benderang seperti yang kita rasakan saat ini.

Makalah ini telah kami susun sesuai dengan apa yang dibahas dalam jurnal internasional .

Kami berharap dengan tersusunnya makalah ini dapat menambah wawasan kami beserta teman-

teman khususnya mengenai “ Phytochemical Screening and Extraction ”.

Dalam penulisan makalah ini, masih banyak kekurangan dan jauh dari kesempurnaan.

Maka dari itu, kami berharap Bapak dan Ibu maupun teman-teman dapat memberikan kritik dan

saran yang membangun guna untuk penyempurnaan dalam pembuatan makalah selanjutnya.

Terima kasih.

Malang, 29 Desember 2014

Penyusun

ABSTRACT

Plants are a source of large amount of drugs comprising to different groups such as

antispasmodics, emetics, anti-cancer, antimicrobials etc. A large number of the plants are

claimed to possess the antibiotic properties in the traditional system and are also used extensively

by the tribal people worldwide. It is now believed that nature has given the cure of every disease

in one way or another. Plants have been known to relieve various diseases in Ayurveda.

Therefore, the researchers today are emphasizing on evaluation and characterization of various

plants and plant constituents against a number of diseases based on their traditional claims of the

plants given in Ayurveda. Extraction of the bioactive plant constituents has always been a

challenging task for the researchers. In this present review, an attempt has been made to give an

overview ofcertain extractants and extraction processes with their advantages and disadvantages.

Keywords: Medicinal plants, phytochemicals, extraction, solvent, screening.

ABSTRAK

Tanaman merupakan sumber dari sejumlah besar obat yang terdiri dari kelompok yang

berbeda seperti antispasmodik, muntah, anti-kanker, antimikroba dan lain-lain. Sejumlah besar

tanaman memiliki sifat antibiotik dalam sistem tradisional dan juga digunakan luas oleh

masyarakat adat di seluruh dunia. Hal ini sekarang dipercaya bahwa alam telah memberikan

penyembuhan pada setiap penyakit dalam satu atau berbagai macam cara. Tanaman telah dikenal

untuk meringankan berbagai penyakit di Ayurveda. Oleh karena itu, para peneliti saat ini

menekankan pada evaluasi dan karakterisasi berbagai tanaman dan konstituen tanaman terhadap

sejumlah penyakit berbasis klaim tanaman tradisional yang ada di Ayurveda. Ekstraksi tanaman

bioaktif konstituen selalu menjadi tugas yang menantang bagi para peneliti. Dalam review

sekarang ini, sebuah upaya telah dilakukan untuk memberikan gambaran of certain ekstraktan

dan proses ekstraksi dengan keunggulan dan kelemahannya.

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Ekstraksi (sebagai istilah yang digunakan secara farmasi) adalah pemisahan

bagian aktif jaringan tanaman obat (dan hewan) menggunakan pelarut selektif melalui

prosedur standar. Produk yang diperoleh dari campuran tanaman relatif kompleks

metabolit, dalam keadaan cair atau semipadat atau (setelah menghilangkan pelarut) dalam

bentuk bubuk kering, dan dimaksudkan untuk penggunaan oral atau eksternal. Ini

termasuk kelas preparasi dikenal sebagai decoctions, infus, ekstrak cairan, tincture,

pilular (semipadat) ekstrak atau bubuk ekstrak. Persiapan tersebut telah populer disebut

galenicals, dinamai Galen, dokter Yunani abad kedua .

Tujuan dari prosedur ekstraksi standar untuk simplisia (bagian tanaman obat)

adalah untuk mencapai bagian terapi yang diinginkan dan untuk menghilangkan bahan

yang tidak diinginkan oleh pengobatan dengan pelarut selektif dikenal sebagai menstrum.

Ekstrak yang diperoleh, setelah standardisasi, dapat digunakan sebagai agen obat seperti

itu dalam bentuk tincture atau ekstrak cairan atau diproses lebih lanjut untuk dimasukkan

dalam bentuk sediaan seperti tablet dan kapsul. Produk ini mengandung campuran

kompleks dari berbagai metabolit tanaman obat, seperti alkaloid, glikosida, terpenoid,

flavonoid dan lignan [3].

B. Rumusan Masalah

1. Bagian manakah dari bahan tanaman yang dapat diekstraksi ?

2. Pelarut apa saja yang dapat digunakan dalam proses ekstraksi ?

3. Bagaimana prosedur kerja dari ekstraksi ?

BAB II

PEMBAHASAN

A. Bahan Tanaman

Tanaman berbasis konstituen alami dapat diturunkan dari setiap bagian dari

tanaman seperti kulit kayu, daun, bunga, akar, buah-buahan, biji, dan lain-lain. Setiap

bagian dari tanaman mengandung bahan komponen aktif. Pemutaran sistematis spesies

tanaman dengan tujuan menemukan bioaktif senyawa baru merupakan kegiatan rutin di

banyak laboratorium. Analisis ilmiah komponen tanaman mengikuti jalur logis. Tanaman

dikumpulkan baik secara acak atau dengan mengikuti petunjuk yang diberikan oleh

penyembuh local wilayah geografis di mana tanaman dapat ditemukan [5].

Bahan tanaman segar atau kering dapat digunakan sebagai sumber untuk ekstraksi

komponen sekunder tanaman. Banyak penulis telah melaporkan tentang ekstrak

tumbuhan yang disiapkan dari jaringan tanaman segar. Logika ini berasal dari pengobatan

etno yang menggunakan bahan tanaman segar tradisional dan suku orang banyak. Tapi

banyak tanaman yang digunakan dalam bentuk kering (atau sebagai ekstrak cair) oleh

pengobatan tradisional dan karena perbedaan kadar air dalam jaringan tanaman , tanaman

biasanya dikeringkan diudara sampai berat konstan sebelum ekstraksi. Peneliti lain

mengeringkan tanaman dalam oven sekitar 40 ° C selama 72 jam. Dalam sebagian besar

karya yang dilaporkan, bagian bawah tanah (akar, umbi, rimpang, umbi dan lain-lain)

dari tanaman yang banyak digunakan secara luas dibandingkan dengan bagian tanah

dalam mencari senyawa bioaktif memiliki sifat antimikroba [1, 4].

B. Pilihan Pelarut

Penentuan Keberhasilan senyawa biologis aktif dari bahan tanaman sangat

tergantung pada jenis pelarut yang digunakan dalam prosedur ekstraksi. Sifat pelarut

yang baik dalam proses ekstraksi tanaman sebaiknya, toksisitas rendah, kemudahan

penguapan pada panas rendah, promosi penyerapan fisiologis yang cepat dari ekstrak,

tindakan pengawet, ketidak mampuan untuk menyebabkan ekstrak ke kompleks atau

memisahkan. Faktor-faktor yang mempengaruhi pilihan pelarut yang jumlah fitokimia

bisa diekstrak, laju ekstraksi, keragaman senyawa ekstrak yang berbeda, keragaman

penghambatan senyawa yang diekstrak, kemudahan penanganan dalam ekstrak, toksisitas

pelarut dalam proses bioassay, bahaya kesehatan potensial dari ekstraktan [6]. Pilihan

pelarut dipengaruhi oleh apa yang dimaksudkan dengan ekstrak. Karena produk akhir

akan berisi jejak pelarut sisa, pelarut harus tidak beracun dan tidak boleh mengganggu

bioassay tersebut. Itu Pilihan juga akan tergantung pada senyawa yang ditargetkan untuk

diekstraksi [1, 4].

Berbagai macam pelarut yang digunakan dalam prosedur ekstraksi adalah:

1. Air:

Air adalah pelarut universal, digunakan untuk produk tanaman ekstrak dengan

aktivitas antimikroba. Meskipun pengobatan tradisional menggunakan air sebagai

keutamaan tetapi ekstrak tanaman dari pelarut organic telah ditemukan untuk

memberikan lebih banyak aktivitas antimikroba yang konsisten dibandingkan dengan

ekstrak air. Juga flavonoid yang larut dalam air (kebanyakan anthocyanin) tidak

memiliki antimikroba signifikansi dan fenolat air larut hanya penting sebagai

senyawa antioksidan [4].

2. Aseton:

Aseton banyak komponen hidrofilik dan lipofilik, dari duanya yang digunakan

pabrik adalah larut dengan air, stabil dan memiliki toksisitas rendah ke bioassay yang

digunakan, sangat ekstraktan, terutama untuk studi antimikroba di mana senyawa

fenolik lebih banyak dituntut untuk studi extracted. A melaporkan bahwa ekstraksi

tanin dan fenolik lain adalah baik dalam aseton berair daripada di air metanol [4, 6].

Kedua aseton dan methanol ditemukan untuk mengekstrak saponin yang memiliki

aktivitas antimikroba [1].

3. Alkohol:

Aktivitas ekstrak yang tinggi etanol dibandingkan dengan ekstrak air dapat

dikaitkan dengan kehadiran jumlah yang lebih tinggi polyphenol dibandingkan

dengan ekstrak air. Ini berarti bahwa mereka lebih efisien dalam dinding sel dan

degradasi benih yang memiliki karakter unpolar dan menyebabkan polifenol yang

akan dirilis dari sel. Penjelasan yang lebih bagi penurunan aktivitas ekstrak air dapat

dianggap berasal dari oksidase enzim polifenol, yang menurunkan polifenol dalam

ekstrak air, sedangkan di metanol dan etanol mereka tidak aktif. Selain itu, air adalah

media yang lebih baik untuk terjadinya mikro-organisme dibandingkan dengan etanol

[7]. Semakin tinggi konsentrasi lebih flavonoid bioaktif senyawa yang terdeteksi

dengan etanol 70% karena polaritas yang lebih tinggi dari etanol murni. Oleh

menambahkan air ke murni etanol hingga 30% untuk mempersiapkan etanol 70%

polaritas pelarut meningkat [8]. Selain itu, etanol ditemukan lebih mudah menembus

membran sel untuk mengekstrak bahan intraselular dari bahan tanaman [9]. Karena

hampir semua komponen diidentifikasi dari tanaman aktif terhadap mikroorganisme

yang aromatik atau senyawa organik jenuh, mereka yang paling sering diperoleh

melalui etanol atau ekstraksi metanol [10]. Methanol lebih polar daripada etanol

namun karena sitotoksik yang alam, hal ini tidak cocok untuk ekstraksi di jenis

penelitian tertentu karena dapat menyebabkan salah hasil.

4. Kloroform:

Lakton Terpenoid telah diperoleh ekstraksi berturut-turut gonggongan kering

dengan heksana, kloroform dan metanol dengan kegiatan berkonsentrasi dalam fraksi

kloroform. Kadang-kadang tanin dan terpenoid akan ditemukan dalam fase air, tetapi

mereka lebih sering diperoleh dari pengobatan dengan kurang polar pelarut [10].

5. Eter:

Eter umumnya digunakan secara selektif untuk ekstraksi coumarin dan asam

lemak [10].

C. Prosedur ekstraksi

a. Homogenisasi jaringan tanaman:

Homogenisasi jaringan tanaman dalam pelarut telah banyak digunakan oleh para

peneliti. Kering atau basah, bagian tanaman segar digiling dalam blender untuk

partikel halus, dimasukkan ke dalam jumlah tertentu pelarut dan dikocok dengan kuat

selama 5 - 10 menit atau kiri selama 24 jam setelah ekstrak ini disaring. Filtrat

kemudian dapat dikeringkan untuk mengurangi tekanan dan dilarutkan kembali dalam

pelarut untuk menentukan konsentrasi. Namun beberapa peneliti disentri fugasi

filtrate untuk klarifikasi ekstrak [4].

b. Serial ekstraksi lengkap:

Ini adalah satu lagi Metode umum ekstraksi yang melibatkan berturut-turut

ekstraksi dengan pelarut meningkatkan polaritas dari non polar (heksana). Untuk

pelarut yang lebih polar (metanol), untuk memastikan bahwa berbagai polaritas

macam senyawa bisa diekstraksi. Beberapa peneliti menggunakan ekstraksi soxhlet

bahan tanaman kering menggunakan pelarut organik. Metode ini tidak dapat

digunakan untuk senyawa thermolabile sebagai pemanasan berkepanjangan karena

dapat menyebabkan degradasi senyawa [4].

c. Ekstraksi Soxhlet:

Ekstraksi Soxhlet hanya diperlukan di mana senyawa yang diinginkan memiliki

kelarutan terbatas dalam pelarut, dan pengotor tidak larut dalam pelarut itu. Jika

senyawa yang diinginkan memiliki kelarutan yang tinggi dalam pelarut maka filtrasi

sederhana dapat digunakan untuk memisahkan senyawa dari larutan substansi.

Keuntungan dari sistem ini adalah bahwa alih-alih banyak bagian pelarut hangat yang

melewati sampel, hanya satu batch pelarut didaur ulang. metode ini tidak dapat

digunakan untuk senyawa thermolabile pemanasan berkepanjangan dapat

menyebabkan degradasidari senyawa [24].

d. Maserasi:

Dalam maserasi (untuk cairan ekstrak), seluruhnya atau bubuk kasar tanaman obat

disimpan dalam kontak dengan pelarut dalam kontainer tutup untuk jangka waktu

tertentu dengan sering agitasi sampai materi larut dibubarkan. Metode ini paling

cocok untuk digunakan dalam kasus obat thermolabile [1].

e. Rebusan:

Metode ini digunakan untuk ekstraksi larut dalam air panas yang stabil dan

konstituen. Simplisia direbus dalam air selama 15 menit, pendinginan dengan air

dingin yang cukup melalui obat untuk menghasilkan volume yang diperlukan [2].

f. Infusion:

Ini adalah solusi encer dari komponen yang mudah larut dari simplisia. infus

segar disusun dengan maserasi padatan dalam waktu singkat baik dengan air dingin

atau mendidih [2].

g. Pencernaan:

Ini adalah jenis maserasi di yang panas lembut diterapkan selama Proses ekstraksi

maserasi. Hal ini digunakan saat suhu cukup tinggi tidak menyenangkan dan efisiensi

pelarut dari menstrum meningkat [2].

h. Perkolasi:

Adalah prosedur yang paling sering digunakan untuk mengekstrak bahan aktif

dalam penyusunan tincture dan cairan ekstrak. Sebuah cerek penapis (sempit,

berbentuk kerucut kapal terbuka di kedua ujungnya) umumnya digunakan. Bahan-

bahan padat dibasahi dengan jumlah yang tepat dari yang ditentukan menstrum dan

didiamkan selama sekitar 4 jam dalam wadah tertutup dengan baik, setelah itu massa

dikemas dan bagian atas cerek penapis ditutup. menstrum tambahan ditambahkan

untuk membentuk lapisan dangkal di atas massa, dan campuran dibiarkan basah

dalam cerek penapis tertutup selama 24 jam. Outlet cerek penapis kemudian dibuka

dan cairan terkandung di dalamnya diperbolehkan menetes perlahan. Menstrum

tambahan ditambahkan sesuai kebutuhan, sampai langkah meresap sekitar three

quarters dari volume yang diperlukan dari produk . Marc tersebut kemudian ditekan

dan cairan yang menyerap bertambah. Menstrum cukup ditambahkan ke hasil volume

yang dibutuhkan, dan campuran cair diklarifikasi dengan penyaringan atau dengan

berdiri diikuti oleh decanting [3].

i. Sonication:

Prosedur ini melibatkan penggunaan USG dengan frekuensi mulai dari 20 kHz

sampai 2000 kHz; ini meningkatkan permeabilitas dinding sel dan menghasilkan

kavitasi. Meskipun proses ini berguna dalam beberapa kasus, seperti ekstraksi

rauwolfi root, aplikasi skala besar yang terbatas karena biaya yang lebih tinggi. Salah

satu kelemahan dari Prosedur ini kadang-kadang diketahui merusak efek energi

ultrasound (lebih dari 20 kHz) pada konstituen aktif tanaman obat melalui

pembentukan gratis radikal dan akibatnya tidak diinginkan perubahan dalam molekul

obat [3].

Penapisan fitokimia: fitokimia Pemeriksaan dilakukan untuk semua ekstrak sebagai

per metode standar.

1. Deteksi alkaloid:

Ekstrak yang terlarut secara individual dalam encer klorida asam dan disaring.

a) Mayer Test: Filtrat diobati dengan Reagen Mayer (Kalium iodida Merkuri).

Pembentukan endapan berwarna kuning menunjukkan adanya alkaloid.

b) Wagner Test: Filtrat diobati dengan Reagen Wagner (Yodium di Kalium Iodide).

Pembentukan coklat / kemerahan endapan menunjukkan adanya alkaloid.

c) Dragendroff itu Test: Filtrat diperlakukan dengan reagen Dragendroff yang (larutan

Kalium iodida Bismuth). Pembentukan merah endapan menunjukkan adanya alkaloid.

d) Hager di Test: Filtrat diobati dengan Reagen Hager itu (asam picric jenuh solusi).

Kehadiran alkaloid dikonfirmasi oleh pembentukan endapan berwarna kuning.

2. Deteksi karbohidrat:

Ekstrak yang terlarut secara individual dalam 5 ml air suling dan disaring. Filtrat

digunakan untuk menguji Kehadiran karbohidrat.

a) Molisch yang Test: Filtrat diobati dengan 2 tetes larutan α-naftol dalam alcohol

tabung reaksi. Pembentukan cincin ungu di persimpangan menunjukkan adanya

Karbohidrat.

b) Benediktus Test: Filtrat diobati dengan Reagen dan Benediktus dipanaskan

dengan lembut. Jeruk endapan merah menunjukkan adanya mengurangi gula.

c) Fehling Test: Filtrat yang dihidrolisis dengan dil. HCl, dinetralkan dengan

alkali dan dipanaskan dengan solusi Fehling A & B. Pembentukan endapan merah

menunjukkan kehadiran gula pereduksi.

3. Deteksi glikosida:

Ekstrak yang dihidrolisis dengan dil. HCl, dan kemudian dilakukan tes untuk

glikosida.

a) Modified Uji Borntrager ini: Ekstrak diobati dengan Ferri Chloride dan solusi

direndam dalam air mendidih selama sekitar 5 menit. Campuran didinginkan dan

diekstraksi dengan volume yang sama dari benzena. Itu Lapisan benzena

dipisahkan dan diperlakukan dengan larutan amonia. Pembentukan rose pink

warna dalam lapisan ammonical menunjukkan kehadiran glikosida anthranol.

4. Hukum yang Test:

Ekstrak diobati dengan natrium nitropruside di piridin dan sodium hidroksida.

Pembentukan merah muda menjadi merah darah warna menunjukkan adanya jantung

glikosida.

5. Deteksi saponin

a) buih Test: Ekstrak diencerkan dengan suling air 20ml dan ini terguncang di

yang lulus silinder selama 15 menit. Pembentukan 1 cm lapisan busa

menunjukkan kehadiran saponin.

b) Foam Test: 0,5 gram ekstrak terguncang dengan 2 ml air. Jika busa yang

dihasilkan tetap berlangsung selama sepuluh menit itu menunjukkan adanya

saponin.

6. Deteksi pitosterol

a) Salkowski yang Test: Ekstrak diperlakukan dengan kloroform dan disaring.

Filtrate diobati dengan beberapa tetes Conc. Sulfat asam, terguncang dan

didiamkan. Penampilan warna kuning keemasan menunjukkan kehadiran

triterpen.

b) Uji Libermann Burchard ini: Ekstrak diperlakukan dengan kloroform dan

disaring. Filtrat diobati dengan beberapa tetes anhidrida asetat, direbus dan

didinginkan. Conc. Asam Sulfat ditambahkan. Pembentukan cincin cokelat di

persimpangan menunjukkan kehadiran pitosterol.

7. Deteksi fenol Ferri Chloride Test:

Ekstrak diobati dengan 3-4 tetes larutan klorida. Formasi warna hitam kebiruan

menunjukkan adanya fenol.

8. Deteksi tannin Gelatin Test:

Untuk ekstrak, 1% larutan gelatin mengandung natrium klorida ditambahkan.

Pembentukan endapan putih menunjukkan kehadiran tanin.

9. Deteksi flavonoid

a) Alkaline Reagent Test: Ekstrak yang diobati dengan beberapa tetes natrium

hidroksida solusi. Pembentukan warna kuning yang intens, yang menjadi

berwarna pada penambahan encer asam, menunjukkan adanya flavonoid.

b) Memimpin asetat Test: Ekstrak diperlakukan dengan beberapa tetes larutan

timbal asetat. Pembentukan warna kuning endapan menunjukkan adanya

flavonoid.

10. Deteksi protein dan asam amino

a) Xanthoproteic Test: Ekstrak yang diobati dengan beberapa tetes pekat. Asam

nitrat. Pembentukan warna kuning menunjukkan kehadiran protein.

b) Ninhydrin Test: Untuk ekstrak, 0,25% b / v ninhidrin reagen ditambahkan dan

direbus selama beberapa menit. Pembentukan warna biru menunjukkan adanya

asam amino.

11. Deteksi diterpenes Tembaga asetat Test:

Ekstrak dilarutkan dalam air dan diperlakukan dengan 3-4 tetes tembaga solusi

asetat. Pembentukan hijau zamrud warna menunjukkan adanya diterpenes [25, 26, 27].

BAB III

PENUTUP

A. Kesimpulan

Prosedur non standar ekstraksi dapat menyebabkan degradasi fitokimia hadir di

tanaman dan dapat menyebabkan variasi sehingga mengarah kepada kurangnya

reproduktifitas. Harus dilakukan upaya untuk menghasilkan batch dengan kualitas

sekonsisten mungkin (dalam kisaran sesempit mungkin) dan mengembangkan serta

mengikuti proses ekstraksi terbaik.

Parameter dasar yang mempengaruhi kualitas ekstrak yang [1]:

1. Bagian tanaman yang digunakan sebagai bahan awal

2. Pelarut yang digunakan untuk ekstraksi

3. Prosedur Ekstraksi

Pengaruh fitokimia tanaman diekstraksi tergantung pada [1]:

1. Sifat dari bahan tanaman

2. Asal

3. Tingkat pengolahan

4. Konten Moisture

5. Ukuran Partikel

Variasi dalam metode ekstraksi yang berbeda yang akan mempengaruhi

komposisi kuantitas dan metabolit sekunder ekstrak tergantung pada [1]:

1. Jenis ekstraksi

2. Waktu ekstraksi

3. Suhu

4. Sifat pelarut

5. Konsentrasi Pelarut

6. Polaritas

DAFTAR PUSTAKA

1. Ncube NS, Afolayan AJ, Okoh AI. Assessment techniques of antimicrobial properties of natural compounds of plant origin: current methods and future trends. African Journal of Biotechnology 2008; 7 (12): 1797-1806.

2. Remington JP. Remington: The science and practice of pharmacy, 21stedition, Lippincott Williams & Wilkins, 773-774.

3. Handa SS, Khanuja SPS, Longo G, Rakesh DD. Extraction Technologies for Medicinal and Aromatic Plants. International centre for science and high technology, Trieste, 2008, 21-25.

4. Das K, Tiwari RKS, Shrivastava DK. Techniques for evaluation of medicinal plant products as antimicrobial agent: Current methods and future trends. Journal of Medicinal Plants Research 2010; 4(2): 104-111.

5. Parekh J, Karathia N, Chanda S. Evaluation of antibacterial activity and phytochemical analysis of Bauhinia variegataL. bark. African Journal of Biomedical Research 2006; 9: 53-56.

6. Eloff JN. Which extractant should be used for the screening and isolation of antimicrobial components from plants. Journal of Ethnopharmacology 1998; 60: 1–8.

7. Lapornik B, Prosek M, Wondra, A. G. Comparison of extracts prepared from plant by-products using different solvents and extraction time. Journal of Food Engineering 2005; 71: 214–222.

8. Bimakr M. Comparison of different extraction methods for the extraction of major bioactive flavonoid compounds from spearmint (Mentha spicata L.) leaves. Food Bioprod Process 2010; 1-6.

9. Wang GX. In vivo anthelmintic activity of five alkaloids from Macleaya microcarpa(Maxim) Fedde against Dactylogyrus intermediusin Carassius auratus. Veterinary Parasitology 2010; 171: 305–313.

10. Cowan MM. Plant products as antimicrobial agents. Clinical microbiology reviews 1999; 12(4): 564-582.

11. Kumar R, Sharma RJ, Bairwa K, Roy RK, Kumar A. Pharmacological review onnatural antidiarrhoel agents. Der Pharma Chemica 2010; 2(2): 66-93.

12. Sutar N, Garai R, Sharma US, Sharma UK. Anthelmintic activity of Platycladus orientalis leaves extract. International Journal of Parasitology Research 2010; 2(2): 1-3.

13. Mute VM. Anthelmintic effect of Tamarind indicalinn leaves juice exract on Pheretima posthuma. International journal of pharma research and development 2009; 7: 1-6.

14. Sharma US, Sharma UK, Singh A, Sutar N, Singh PJ. In vitro anthelmintic activity of Murraya koenigii linn. Leaves extracts. International journal of pharma and bio sciences 2010; 1(3): 1-4.

15. Mali RG, Mahajan SG, Mehta AA. In-vitro anthelmintic activity of stem bark of Mimusops elengi Linn.Pharmacognosy Magazine 2007; 3(10): 73-76.

16. Patel J, Kumar GS, Qureshi MS, Jena PK. Anthelmintic activity of ethanolic extract of whole plant of Eupatorium odoratum. International Journal of Phytomedicine 2010; 2: 127-132.

17. Roy H. Preliminary phytochemical investigation and anthelmintic activity of Acanthospermum hispidum DC. Journal of Pharmaceutical Science and Technology 2010; 2 (5): 217-221.

18. Cruz ASP. Anthelmintic effect of Solanum lycocarpumin mice infected with Aspiculuris tetraptera. The journal of American science 2008; 4(3): 75-79.

19. Wang GS, Han J, Zhao LW, Jiang DX, Liu YT, Liu XL. Anthelmintic activity of steroidal saponins from Paris polyphylla. Phytomedicine 2010; 17: 1102-1105.

20. Vidyadhar S, Saidulu M, Gopal TK, Chamundeeswari D, Rao U, Banji D. In vitro anthelmintic activity of the whole plant of Enicostemma littoraleby using various extracts. International journal of applied biology and pharmaceutical technology 2010; 1(3): 1119-1125.

21. Shaibani TRMA, Phulan MS, Shiekh M. Anthelmintic activity of Fumaria parviflora