1micro.md.chula.ac.th/documents/docs/20190325_185814_WI-V... · Web view2.1.2 การเพ...

ฝายจลชววทยาโรงพยาบาลจฬาลงกรณ

1873 ถนนราชดำาร ปทมวน กทม. 10330

วธปฏบตงาน ( Work Instruction )หนวยไวรสวทยา

หองปฏบตการไวรสวทยา

WI-V-20-061แกไขครงท : 07วนท 1 มนาคม 2562หนา : 1/14

เรอง การตรวจหาสารพนธกรรมของเชอไวรสกอโรคในระบบทางเดนหายใจโดยวธ NxTAG® Respiratory Pathogen Panel (RPP)

การอนมตเอกสาร

ผจดทำา นางฐตยา กนทาดงนกวทยาศาสตร

ผทบทวน น.ส.ลกคณา ธรรมโชตรจน

นกวทยาศาสตรผอนมต ผศ.นพ. เอกสทธ โกวทย

ดำารงคผจดการวชาการ

ประวตการแกไข

ครงท วนท รายละเอยดทแกไข00 31 พฤษภาคม

2556เรมตนออกนำาไปใช

01 25 ตลาคม 2556

หนา 3/14 ขอ 2 ลบขอความ หลอด (array tube) หรอ เปลยนขอความจาก หลอด เปน หลม CS (CLART Strip) หนา 3/14 ขอ 2 เปลยนจาก array tube เปน หลม CSหนา 6/14 ขอ 6.7 เปลยนขอความจาก 55 ๐ C เปน 59 ๐ C ขอ 6.8.2.1 เปลยนขอความจาก อณหภมหอง เปน อณหภม 4 ๐ C

เอกสารควบคม/หามถายเอกสาร







หนา 9/14 ขอ 7.3.8 เปลยนขอความจาก 1 ไมโครลตร เปน 0.75 ไมโครลตร หนา 10/14 ขอ 7.4.2 เปลยนขอความจาก Tube adapter เปน ในชอง Select Rack เลอก 96 well plate เปลยนขอความจาก ชอง เปน แถว ขอ 7.4.3 เปลยนขอความจาก CLART_Pneumovir เปน CLART_Pneumovir 16sc4 หนา 14/14 ขอ 11.1 เปลยนขอความจาก (F-2077/4-7-56) เปน (F-2077)ขอ 11.3 เพมขอความ และเขาไปใส comment "RSV 19N“ กด Enter ขอ 11.4 เพมขอความใหเขาไป comment "RSV 19P“ กด Enter จะปรากฎคำาวา "Positive for…" ใหพมพใสชอไวรสทใหผลบวกในชองวาง

02 6 ตลาคม 2557

หนา 1/14 ผทบทวน เปลยนขอความจาก นกเทคนคการแพทย เปน นกวจยหนา 10/14 ขอ 7.4.6 เพมขอความ การ print ผล โดยกด View Report และกด Print เพอพมพผลการ ทดสอบ

6 สงหาคม 2558

ทบทวนและไมมการแกไข

03 16 ตลาคม 2558

หนา 5/4 ขอ 3.3 เปลยนขอความจาก (WI-V-23-002) เปน (WI-23-001)








3.4 เปลยนขอความจาก (WI-V-25-001) เปน (WI-25-004)หนา 14/14 ขอ 11.2 เปลยนขอความจาก ระบบคอมพวเตอร เปน ระบบสารสนเทศ เปลยนขอความจาก (WI-V-23-002) เปน (WI-23-001)

04

30 พฤศจกายน 2558

แกไขทงฉบบ

05 20 มถนายน 2559

หนา 5/12 ขอ 5 เพมขอความ การปฏบตงานกบตวอยางทกลาวขางบนใหยดตามวธปฏบตงาน WI-V-19-001 เรอง การรบตวอยางและการเกบรกษาตวอยางสงสงตรวจ โดยใหผทำาการทดสอบทำาการปฏบตงานทตชวนภยระดบ 2 (Biosafety cabinet class II) ขนไป หนา 7/12 ขอ 3 เพมขอความ ผสมใหเขากนดดนำายา 10 µl ใสหลอด 0.2 มลลลตรแลวเตมตวอยางอก 10 µl ได ปรมาตรสดทาย 20 µl นำาไปวางทเครอง Thermal cycler หนา 10/12 เพมขอ 12. การบำารงรกษาและการสอบเทยบ เครองมอ

31 ตลาคม 2560


06 15 พฤษภาคม 2561

แกไขทงฉบบ

28 กนยายน 2561


07 1 มนาคม 2562

หนา 7/14 ขอ 3.2 เปลยนขอความจาก High Pure Viral Nucleic Acid Kit Package Insert. (SD-








20293) เปน วธปฏบตเรอง การใชงานและการดแลเครองสกดสารพนธกรรมอตโนมตยหอ Precision System Science (PSS) รน magLEAD 12 gC (WI-V-18- 010)หนา 12/14 ขอ 7.2.1 เปลยนขอความทงหมดเปน สกดสารพนธกรรม โดยดดตวอยาง 200 ไมโครลตร ใสใน หลอดฝาเกลยวขนาด 1.5 ml (1.5ml sample tube) เตม Internal control(NxTAG ® MS2) 10 ไมโครลตร จากนนทำาการสกดสารพนธกรรม โดยใชเครองสกดสารพนธกรรมอตโนมต ยหอ PSS รน magLEAD 12gC ปฏบตตาม WI-V-18-010








1.วตถประสงค ชดนำายา NxTAG® Respiratory Pathogen Panel ใชเพ อ

ตรวจหาสารพนธกรรมของเชอไวรสและ เชอแบคทเรยทกอโรคในระบบทางเ ด น ห า ย ใ จ (Respiratory virus panel pathogens) ไ ด แ ก Influenza A virus (H1 and H3 subtype), Influenza B virus, Respiratory syncytial virus (RSV), Coronaviruses (strain 229E, OC43, NL63, HKU1), Parainfluenza viruses (type 1 ถ ง 4), Human Metapneumovirus, Enterovirus/Rhinovirus, Adenovirus, Human Bocavirus, Chlamydophila pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae, และ Legionella pneumophila ในสงสงตรวจจากระบบทางเดนหายใจ โดยใชหลกการ multiplex RT-PCR ในการเพมปรมาณสาร








พนธกรรมรวมกบเทคโนโลย Universal Tag sorting system ซงทำาการทดสอบโดยอตโนมตดวยเครอง MAGPIX System

2.หลกการ 2.1 Principle of the test procedure

ช ดน ำายา NxTAG® RPP ใช หล กการทดสอบ one-step multiplex reverse-transcriptase polymerase chain reaction ในการเพมจ ำานวน viral DNA และ RNA เป าหมายในหลอดทดลอง รวมกบการใช Universal Tag sorting system (Luminex) ในขนตอนการ detection การทดสอบประกอบดวย 2 ขนตอนไดแก

2.1.1 Specimen preparation การสกดสารพนธกรรม (Total Nucleic Acid) จากสงสงตรวจ โดยใชนำายา High Pure Viral Nucleic Acid

2.1.2 การเพมจ ำานวน DNA เป าหมาย (viral target) และการตรวจสอบ PCR product ทได โดยในขนตอนแรก viral RNA จ ะ ถ ก เ ป ล ย น เ ป น cDNA ด ว ย ก ร ะ บ ว น ก า ร reverse transcription โดยไพรเมอรทจ ำาเพาะและเพมจำานวนดวยเทคนค PCR ในหลอดเดยวกน ไพรเมอรทใชจะมความจำาเพาะสำาหรบแตละชนดไวร ส และท ปลาย 5’ ของ primer ข างหน งจ ะต ด tag DNA sequence เพ อไวส ำาหรบจบก บ anti-tag sequence ทอย บน bead สวน primer อกขางหนงทปลาย 5’ จะตดฉลากดวย biotin ดงนน PCR product ทไดจงม Tag sequence และม biotin ตดอย PCR product จะมขนาดชวง 58-206 bp ไมรวมขนาดของ








tag ซ ง ม ค ว า ม ย า ว 24-mer tag ข น ต อ น ถ ด ม า เ ป น ก า ร hybridization/detection โดย PCR product จะถกผสมก บ universal array (bead mix) และ streptavidin ทต ดฉลากด ว ย R-phycoerythrin โ ด ย magnetic bead จ ะ ม ส า ย specific anti-TAG สนๆ ตดบนผวของ bead ซงจะจบกบ PCR product ทเป น specific viral target โดยกระบวนการ anti-tag/tag hybridization ปลายอกดานหนงของ PCR product ซงม biotin ตดอยจะจบอยางจำาเพาะกบ streptavidin ทตดฉลากด ว ย R-phycoerythrin ห ล ง จ า ก น น ป ฏ ก ร ย า hybridization/detection จะถกค ดเล อก (sort) และอานโดยเครอง MAGPIX เพอวดสญญาณ Multi Dimension Detection (MDD) ในแตละ bead population สำาหรบ pathogen target หรอ assay control โดยค า fluorescence น จ ะถกว เคราะห อตโนมตโดยโปรแกรม SYNCT ซงจะนำาคา fluorescence มาแปลผล การตรวจพบ viral target ในต วอย าง โดยเท ยบก บค า fluorescence threshold ของแตละชนดไวรส2.2 Clinical significantนำายา NxTAG® RPP สามารถตรวจวเคราะหเชอไวรสได 18 ชนดดงน- Influenza Type A และ B เปน RNA virus อยในกลม Orthomyxovirus family มการระบาดในฤดหนาว Type A ม 2 subtypes ทสำาคญคอ H1 subtype และ H3 subtype โดยปกต Type A จะมความรนแรงมากกวา type B และ strain H3N2 จะม








อตราการตายทสงกวา และบาง subtype สามารถตดตอจากสตวสคนไดคอ avian H5N1 โดยแรกเร มพบการตดเชอเฉพาะในนก เทานน แตในป 1997 พบการตดตอมาสคนจากการสมผสนกทตดเชอ- Respiratory Syncytial Virus (RSV) เ ป น RNA virus อยในกลม Paramyxovirus family ม 2 subtypes คอ RSV A และ RSV B โดยท RSV A จะมความรนแรงมากกวา RSV B มรายงานพบการระบาดในชวงเดอน พฤศจกายน ถง เมษายน โดยเฉพาะเดอน ธนวาคม, มกราคม และ กมภาพนธ จะมการระบาดสงทสด - Human Metapneumovirus (hMPV) เ ป น ส า เ ห ต การตดเชอในระบบทางเดนหายใจทงสวนบน และสวนลางไดในทกชวงกล มอาย hMPV เป น RNA virus อยในกล ม Paramyxovirus family มรายงานพบการระบาดในชวงเด ยวก บ RSV คอเด อน พฤศจกายน ถง เมษายน - Rhinovirus เป น RNA virus อยในกล ม Picornavirus family เปนสาเหตการตดเชอใน ระบบทางเดนหายใจไดมากทสด โดยพบวามากกวาคร งของการตดเชอทงหมดม สาเหตจากไวรสชนดน เน องจากไวรสม variation สงในสวนของ capsid protein จงทำาใหม serotype ของ Rhinovirus มากกวา 100 serotypes ม รายงานพบการระบาดในชวงเดอนกนยายน และ ตลาคม - Enterovirus พบเปนสาเหตการตดเชอในระบบทางเดนหายใจไดสง สามารถกอใหเกดอาการแตกตางกนตงแตอาการเพยงเลกนอยจ น ถ ง อ า ก า ร ร น แ ร ง เ ช น aseptic meningitis, paralysis,








myocarditis แ ล ะ neonatal Enteroviral sepsis เ ป น ต น enterovirus เปน RNA virus อยในกลม Picornavirus family ม ห ล า ย subtype ไ ด แ ก echovirus 31 serotypes, Coxsackievirus A 23 serotypes, Coxsackievirus B 6 serotypes , Enterovirus serotypes 68, 69, 70 และ 71, poliovirus 3 serotypes มรายงานพบการระบาดในชวงกลางฤดรอนจนถงตนฤดใบไมรวง- Parainfluenza (PIV) พบเปนสาเหตอาการ croup ในเดก และเปนสาเหตการตดเชอใน ระบบทางเดนหายใจสวนลางรองจากการตดเชอ RSV ไวรส Parainfluenza เปน RNA virus อยในกลม paramyxovirus family ม 4 serotypes ค อ PIV1, PIV2, PIV3 และ PIV4 โดย PIV1 และ PIV2 มกพบการระบาดในชวงฤดใบไมรวง สวน PIV3 สามารถพบการระบาดไดตลอดปแตพบไดบอย ในชวงฤดใบไมผลจนถงชวงตนฤดรอน PIV4 พบไดนอยมากอาจเนองมาจากการตดเชอไวรสน ทำาใหเกดอาการเพยงเลกนอยหรอมกไมทำาใหเกดอาการในคนสวนใหญ - Coronavirus พบเป นสาเหตของไขหวดได บอยรองจาก Rhinovirus มการระบาดในฤดหนาวและฤดใบไมผล Coronavirus เป น RNA virus อยในกล ม Coronavirus family ในอด ตม 3 ก ล ม ค อ Group I Human Coronavirus (HCoV) 229E strain, Group II Human Coronavirus (HCoV) OC43 strain, Group III Coronavirus Avian virus แ ล ะ ม Coronavirus กลมอนทไมใช 3 กลมน ซงเปนสาเหตของโรคตดเชอ








ทางเดนหายใจรนแรงเฉยบพลน (SARS) หลงจากนนมาทำาใหมการส น ใ จ ท จ ะ ศ ก ษ า Coronavirus ม า ก ข น แ ล ะ ท ำา ใ ห ค น พ บ Coronavirus ใ ห ม อ ก 2 strains ค อ HCoV-NL63 แ ล ะ HCoV-HKU1- Adenovirus เปนสาเหตของหลายกลมอาการไดแก ตดเชอทางเดนหายใจ, ตดเชอทางเดนอาหาร, ตาแดง, นวในกระพาะปสสาวะ และผน Adenovirus เปนสาเหตของการตดเชอทางเดนหายใจในผใหญ ประมาณ 1-7% และ 5-10% ในเด ก Adenovirus เป น DNA virus ม ม า ก ก ว า 50 serotypes แ บ ง อ อ ก เ ป น 6 subgroups ไดแก A – F การระบาดของ Adenovirus จะพบไดไมมากในประชากรปกต แตจะพบการระบาดไดเมอมสภาวะทเอออำานวย เชนในบรเวณทมประชากรอยอยางแออด - Human Bocavirus เ ป น DNA virus อ ย ใ น ก ล ม parvovirus family เปนสาเหตใหเกดอาการในระบบทางเดนหายใจไดแก cough, rhinorrhea, fever และ wheezing และบางคร งทำาใหเกดอาการทองเสย Human Bocavirus (HBoV) ม 4 types คอ HBoV1 – 4 ซง Human Bocavirus มกตรวจเจอรวมกบการตดเชอ pathogen ชนดอนรวมดวย- Chlamydophila pneumoniae เป น DNA bacteria อยในกลม Chlamydiae family ซงกอโรคในระบบทางเดนหายในสวนลางเป นสาเหตใหเก ดอาการได แก slight fever, rhinitis, hoarseness และ long-lasting dry cough ผ ป วยท ต ด เช อ








แบคทเรยชนดนสวนใหญมกจะ ไมแสดงอาการ มรายงานพบการระบาดในชวงฤดหนาว (เดอนมกราคมถงเมษายน)- Mycoplasma pneumoniae เปน DNA bacteria อยใน class Mollicutes, family Mycoplasmataceae ซงกอโรคในระบบทางเดนหายในสวนบนเปนสาเหตใหเกดอาการเฉพาะท เรยกวา tracheobronchitis (chest cold) การตดเช อแบคทเรยนสวนใหญพบในผปวยทมอายมากกวา 5 ป มรายงานพบการระบาดตลอดทงป สวนใหญพบในชวงฤดรอนถงฤดใบไมรวง- Legionella pneumophila เป น DNA bacteria ก อโรค Legionella disease (LD) อยใน genus Legionella ซงมการงานการคนพบแบคทเรยชนดนมากกวา 50 สายพนธ แตมเพยง 24 สายพนธ เทานนทสามารถกอโรคในระบบทางเดนหายใจของมนษยได อาการท พบได แก headache, myalgia (muscle pain), asthenia และ anorexia รายงานการระบาดสวนใหญพบในชวงฤดรอนถงฤดใบไมรวง

3. เอกสารอางอง 3.1 NxTAG® Respiratory Pathogen Panel Package Insert Rev A, December 2016, Luminex Molecular Diagnostics, Toronto, ON M5G 1Y8, Canada. (SD-20397)








3.2 วธปฏบตเรองการใชงานและการดแลเครองสกดสารพนธกรรม อตโนมตยหอ Precision System Science (PSS) รน magLEAD 12 gC (WI-V-18-010)3.2 วธปฏบตเรองการรบตวอยางและการเกบรกษาตวอยาง (WI-V-19-001)3.3 วธปฏบตเรองการรายงานและตรวจสอบผลการวเคราะห (WI-23-001)3.4 วธปฏบตเรองมาตรการการปฏบตงานเพอความปลอดภยของบคลากรในหองปฏบตการ (WI-25-004)

4.สมรรถนะของการทดสอบ4.1 ความไวในการตรวจ (Sensitivity)

เตรยมตวอยางสำาหรบการตรวจหา limit of detection (LOD) ใชไวรสททราบปรมาณแลว มาทำาการเจอจาง (serial dilution) โดยคา LOD เปนคาความเขมขนหรอปรมาณตวอยางไวรสตำาสด ทใหผลบวกอยางนอย 95% ในการทดสอบอยางนอย 20 ครง LOD สำาหรบแตละ viral targets ซงถกตรวจสอบโดยชดนำายา NxTAG® RPP แสดงดงตารางท 1ตารางท 1 ความไวในการตรวจของชดนำายา NxTAG® RPP








5.ชนดของสงสงตรวจ ชนดของภาชนะเกบตวอยางและสารทจำาเปนตองเตม 5.1 สงสงตรวจจากทางเดนหายใจสวนบน ไดแก

- Nasopharyngeal swab- Throat swab








5.2 สงสงตรวจจากทางเดนหายใจสวนลาง ไดแก - Bronchoalveolar lavage (BAL)- Bronchial washing- Sputum

5.3 ปรมาณสงสงตรวจและวธการเกบสงสงตรวจ:5.3.1 สงสงตรวจจากทางเดนหายใจสวนบน

- Nasopharyngeal swab- throat swab- Nasal swab

ใชชด swab สำาหรบเกบสงสงตรวจสำาหรบแตละชนดสงสงตรวจ และเกบลงใน Viral Transport Media (VTM) สามารถขอ transport tube ไดจากหองรบสงสงตรวจ ฝายจลชววทยา ชน 3 อาคาร ภมสรมงคลานสรณ

5.3.2 สงสงตรวจจากทางเดนหายใจสวนลาง - Broncho alveolar lavage- Bronchial washing

ปรมาตร 5-10 ml (Minimum volume = 1.5 ml) เกบตวอยางใสภาชนะปราศจากเชอ (Sterile Container) โดยไมตองเตมสารรกษาสภาพสงสงตรวจ ปดฝาใหสนท

- Sputum เกบลงใน Viral Transport Media (VTM)- Endotracheal aspirates

ปรมาตร 2-3 มลลลตร (Minimum volume = 1.5 มลลลตร) เกบลงใน Viral Transport Media (VTM)








การปฏบตงานกบตวอยางทกลาวขางบนใหยดตามวธปฏบตงาน WI-V-19-001 เรอง การรบตวอยางและการเกบรกษาสงสงตรวจ โดยใหผทำาการทดสอบทำาการปฎบตงานทตชวนรภยระดบ 2 (Biosafety cabinet class II) ขนไป5.4 การนำาสงสงสงตรวจ5.4.1 ปดฝาภาชนะสงสงตรวจใหสนท ตดฉลากระบ ชอ,

นามสกล, HN ของผปวย, วนท-เวลาเกบสงสงตรวจและชนดของสงสงตรวจ พนพาราฟลม

5.4.2 ใสตวอยางตรวจในถงพลาสตก zip-lock bag ทเตรยมให ปดใหสนท ใสในกระปองทตดสตกเกอรวตถอนตรายทางชวภาพ (Biohazard sign)

5.4.3 รบนำาสงหองปฏบตการทนท หลงการเกบสงสงตรวจ พรอมใบ Request โดยนำาสงทอณภมเยน (2-8oC)

5.5 การเกบรกษา สงสงตรวจสามารถเกบทอณหภม 2-8oC ไดนาน 7 วนหลงจากการเกบตวอยาง

6 วสดและอปกรณ 6.1 Instrument and Equipment

- Applied Biosystems GeneAmp® PCR System Veriti thermal cycler

- Luminex MAGPIX® system- Micropipettes with aerosol barrier, plugged tips

or positive displacement tips (P10, P100, P200, P1000)








- Biological Safety Cabinet Class ll- Vortex mixer- Spin down centrifuge- PCR cool rack- Water bath

6.2 Materials- Sterile 2 ml, 1.5 ml polypropylene screw-cap

tube- Disposable gloves

6.3 Reagents & Reagent preparationReagents: - NxTAG® RPP (REF: I051C0448)- MAGPIX® Performance Verification Kit (REF:

MPXIVD-PVER-K25) - MAGPIX® Calibration Kit (REF: MPXIVD-CAL-

K25) - MAGPIX® Drive Fluid 4PK (REF: MPXDF-4PK-1)

Reagent Storage and Preparation- ชดนำายา NxTAG® RPP เปนนำายาชนดแหง

(Lyophilized) พรอมใชงาน เกบทอณหภม 2-8oC สามารถใชไดจนถงวนหมดอายทระบขางกลอง มาพรอมกบ MS2 และ Foil seal

- ชดนำายา MAGPIX® Performance Verification Kit และ MAGPIX® Calibration Kit เปนนำายาพรอมใชงานเกบทอณหภม 2-8oC ใชไดจนถงวนหมดอายทระบขางกลอง








- MAGPIX® Drive Fluid เปนนำายาพรอมใชงาน เกบทอณหภม 15-30 oC สามารถใชไดจนถงวนหมดอายทระบขางกลอง

6.4Control Material and Control material preparation6.4.1 Control materials:

- Negative control: xTAG® RNase-Free Water เกบทอณหภม -20 oC ± 5 oC สามารถใชไดจนถงวนหมดอายทระบขางกลอง

- External Positive Control: Pool ตวอยาง CAP EQC โปรแกรม Infectious Disease, Respiratory Panel (IDR) แบง aliquot เกบท -70 oC ± 5 oC

- Internal control: xTAG® MS2 ซงเปน Bacteriophage MS2 เกบทอณหภม -20oC ± 8oC สามารถใชไดจนถงวนหมดอายทระบขางกลอง

6.4.2 Control material preparation- กอนการใชงาน ใหนำาออกมาวางใหละลายทอณหภมหอง ผสม

ใหเขากน และ ป นตกกอนใชงาน

7 วธปฏบต 7.1ขนตอนการรบสงสงตรวจ

7.1.1 เมอสงสงตรวจมาถงหองปฏบตการ เจาหนาทผชวยตรวจสอบชนด, ปรมาณและคณภาพของ specimen








7.1.2 ตรวจสอบชอ นามสกล, วนเดอนปเกด หรอ HN ของผปวยในใบ Request และ บนฉลากของ Specimen ใหตรงกน

7.2ขนตอนการทำาทดสอบ7.2.1 สกดสารพนธกรรม โดยดดตวอยาง 200 ไมโครลตร ใสใน

หลอดฝาเกลยวขนาด 1.5 ml (1.5ml sample tube) เตม Internal control (NxTAG ® MS2) 10 ไมโครลตร จากนน ทำาการสกดสารพนธกรรม โดยใชเครองสกดสารพนธกรรม อตโนมต ยหอ PSS รน magLEAD 12gC ปฏบตตาม WI- V-18-010

7.2.2 การเตรยมนำายาสำาหรบเพมจำานวนสารพนธกรรมa)นำา NxTAG assay plate และ Extracted product

มาวางไวใน cool blockb)Label number บน assay plate ใหตรงกบ

number บน elution tubec) ดงแผนพลาสตกทปดบน NxTAG assay plate ออก

โดยไมตองดงแผน foild) เตม extracted nucleic acids ทสกดเสรจแลวใน

NxTAG assay plate ใสลงไป หลอดละ 35 µl โดยใสตามลำาดบ number ใหตรงกน สำาหรบ Negative control tube ใหใสเปน xTAG RNase-








free water (โดยการใช Pipette Tip เจาะทะลแผน foil ในมม 45 องศา)

e)ทำาการผสมโดยการ ดด-ปลอย จำานวน 5-10 ครงf) ปด NxTAG assay plate โดยใช foil sealg)นำาหลอดปฎกรยาเขาเครอง GeneAmp PCR System

รน Veriti7.2.3 การเปดเครอง Thermal cycler และการตงคาโปรแกรม

a) เปด switch power ของเครอง GeneAmp® PCR system Veriti

b) ตงโปรแกรม PCR condition ดงนc) นำา NxTAG assay plate ใสลงในเครอง

7.2.4 อานผลการทดสอบโดยเครอง MAGPIX System 8 การควบคมคณภาพของวธทดสอบ

8.1 พนทและวธปฏบตงาน โดยพนทปฏบตงานออกเปนสวนตาง ๆ ดงน 8.1.1 Specimen preparation ใชทำาการสกดสาร

พนธกรรมจากสงสงตรวจโดยปฏบตงานใน safety cabinet class II








8.1.2 Post amplification analysis เปนสวนททำาการ Visualization8.1.3 เครองมอทมผลตอการทดสอบมการทำา Calibration

และบำารงรกษาอยางสมำาเสมอ และปฏบตตามคมอการใชงาน

8.1.4 มการทำา Inter-lab comparison และการประเมนความสามาการทดสอบภายในหอง ปฏบตการอยางนอยปละ 1 ครง 8.1.5 ตวควบคมภายใน (Internal Control) ตองแสดงผล Pass

9 การอานผลและการรายงานผล การวเคราะหผลและการตรวจสอบความถกตองจะถกทำาโดย

อตโนมตโดยใชโปรแกรม SYNCT ซงจะนำาคา Multi Dimension Detection (MDD) มาแปลผลการตรวจพบ Viral target ในตวอยาง โดยเทยบกบคา Threshold ของแตละชนดเชอกอโรคคาชวงในการรายงาน (Reportable interval of examination results)

การรายงานผลรายงานเปน Negative หรอ Positive แยกออกเปนแตละชนดของเชอกอโรค ทางเดนหายใจ 21 สายพนธการสรปผล (Laboratory interpretation)9.1 การแปลผล Pathogen Target Calls ยกเวนสำาหรบ

Influenza- Positive: ตรวจพบ pathogen target








- Negative: ตรวจไมพบ pathogen target- Invalid: มความผดพลาดอยางใดอยางหนงในสวน assay

parameters หรอ controls9.2 การแปลผล Influenza A Calls

- Influenza A H1positive: ตรวจพบ influenza A และ/หรอ influenza A H1-A และ/หรอ influenza A H1-B

- Influenza A H3 positive: ตรวจพบ influenza A H3 และ/หรอ influenza A

- Influenza A H1 และ Influenza A H3 positive: ตรวจพบ influenza A H3 และ/หรอ influenza A และ/หรอ influenza A H1-A และ/หรอ influenza A H1-B

- Negative: ตรวจไมพบ influenza A, H1-A, H1-B และ H3

9.3 Control Calls- PASS: สามารถตรวจพบ internal/run control- FAIL: ไมสามารถตรวจพบ internal/run control- Invalid: ไมสามารถผลแปลของ internal/run control

ได เนองจากไมตรงตามเกณฑ กำาหนดของวธการทดสอบ9.4 ผลการทดสอบ invalid results ใหทำาการทดสอบใหมเรม

ตงแตการเตรยมตวอยาง, amplification และ detection








10 อน ๆ (ตวรบกวนและปฏกรยาขาม, วธการคำานวณผลการทดสอบ, คาอางองในคน, ขอบเขตของผลการทดสอบ, คาวกฤต, ขอควรระวง)

ค ว ร ร ะ ว ง ต ว ย บ ย ง ป ฏ ก ร ย า เ อ น ไ ซ ม DNA polymerase เ ช น Hemoglobin, สวนประกอบของ paraffin, เกลอ เปนตน ทอาจจะพบไดในสงสงตรวจ

11 การบนทก11.1 บนทกผลการทดสอบลงในใบบนทกผลการทดสอบ Respiratory virus 19 subtypes(F-2077) ขอ งผ ป วย แ ต ล ะรา ย ใน แฟม Respiratory virus 19 subtypes11.2 จากนนบนทกผลลงในระบบคอมพวเตอร ตามขนตอนวธปฏบตเรองการลงผลและการทวน สอบผลการทดสอบ (WI-V-23-002)11.3 กรณผล Negative พมพ N ในชองผลและเขาไปใส comment "RSV 18N “กด Enter11.4 กรณ ผล Positive ให เข า ไป comment "RSV 18P“ กด Enter จะปรากฎคำาวา "Positive for…" ใหพมพใสชอไวรสทใหผลบวกในชองวาง

12 ผรบผดชอบ นกวทยาศาสตรและนกเทคนคการแพทยทไดรบการมอบหมาย (F-1618)


1micro.md.chula.ac.th/documents/docs/20190325_185814_WI-V... · Web view2.1.2 การเพ...

Documents

Transcript of 1micro.md.chula.ac.th/documents/docs/20190325_185814_WI-V... · Web view2.1.2 การเพ...