Vorlesung GMP&Zelltherapeutika WS 2014.15 Version 15.12.2014 · ZHMB$M.Sc.$HuMB$Advanced$Modul$II"...

Good Manufacturing Prac0ce (GMP)/ Zelltherapeu0ka

Ins$tut für Klinische Hämostaseologie & Transfusionsmedizin, Campus Homburg AG Klinische Zelltherapie Prof. Dr. Hermann Eichler Dr. Isabelle Müller Gebäude 1 DRK-‐Gebäude Tel. 06841/16-‐22530 06841/16-‐41124 [email protected] [email protected]

ZHMB M.Sc. HuMB Advanced Modul II "Signalleitung und Transport” WS2014/15 Good Manufacturing Prac0ce (GMP)/ Zelltherapeu0ka

ArzneimiYelgesetz

¤  Defini0on ArzneimiYel ¤  § 2 ArzneimiYelbegriff

(1) ArzneimiYel sind Stoffe oder Zubereitungen aus Stoffen, 1. die zur Anwendung im oder am menschlichen oder 0erischen Körper bes0mmt sind und als

MiYel mit Eigenschaèn zur Heilung oder Linderung oder zur Verhütung menschlicher oder 0erischer Krankheiten oder krankhaèr Beschwerden bes0mmt sind oder

2. die im oder am menschlichen oder 0erischen Körper angewendet oder einem Menschen oder einem Tier verabreicht werden können, um entweder

a) die physiologischen Funk0onen durch eine pharmakologische, immunologische oder metabolische Wirkung wiederherzustellen, zu korrigieren oder zu beeinflussen oder

b) eine medizinische Diagnose zu erstellen.

¤  Anforderungen an die ArzneimiYel ¤  Herstellung von ArzneimiYeln ¤  Zulassung und Registrierung von Fer0garzneimiYeln ¤  Abgabe von ArzneimiYeln ¤  Schutz des Menschen bei der klinischen Prüfung ¤  Sicherung und Kontrolle der Qualität ¤  Beobachtung, Sammlung und Auswertung von ArzneimiYelrisiken ¤  Überwachung ¤  Haùng für ArzneimiYelschäden

2

05.01.2015


Gentherapeu$ka

Rekomb. Nukleinsäuren in:

-‐ Vektoren -‐DNA oder RNA -‐gene0sche veränderten

Zellen -‐Viren

ArzneimiYel für neuar0ge Therapien

05.01.2015

3

ATMP Advanced Therapy Medicinal Products

Soma$sche Zelltherapeu$ka

Entwickelte Zellen für

Krankheits-‐: -‐Behandlung -‐Präven0on -‐Diagnose

Biotechnologisch bearbeitete Gewebeprodukte

Entwickelte Zellen für Gewebe-‐: -‐Regenera0on, -‐Reparatur -‐Ersatz

Kombinierte ATMP


Gentherapeu0kum

Biologisches ArzneimiYel zur Anwendung im oder am Menschen mit folgenden Merkmalen: ¤  enthält einen Wirkstoff, der eine rekombinante Nukleinsäure

enthält oder daraus besteht, der im Menschen verwendet oder ihm verabreicht wird, um eine Nukleinsäuresequenz zu regulieren, zu reparieren, zu ersetzen, hinzuzufügen oder zu enkernen.

und ¤  seine therapeu0sche, prophylak0sche oder diagnos0sche Wirkung

steht in unmiYelbarem Zusammenhang mit der rekombinanten Nukleinsäuresequenz, die es enthält, oder mit dem Produkt, das aus der Expression dieser Sequenz resul0ert.

05.01.2015

4


Soma0sches Zelltherapeu0kum

Biologisches ArzneimiYel zur Anwendung im oder am Menschen, das folgende Merkmale aufweist: ¤  besteht aus Zellen oder Gewebe, die substanziell* bearbeitet wurden, so dass

biologische Merkmale, physiologische Funk0onen oder strukturelle Eigenscha`en, die für die beabsich0gte klinische Verwendung relevant sind, verändert wurden.

oder ¤  besteht aus Zellen oder Gewebe, die im Empfänger im Wesentlichen nicht

der(n)selben Funk0on(en) dienen sollen wie im Spender, oder es enthält derar0ge Zellen oder Gewebe. Dieser Bes0mmungszweck wird auch „non-‐homologous use“ genannt.

und ¤  ihm werden Eigenscha`en zur Behandlung, Vorbeugung oder Diagnose von

Krankheiten durch pharmakologische, immunologische oder metabolische Wirkungen der enthaltenen Zellen oder Gewebe zugeschrieben und es wird zu diesem Zweck im Menschen verwendet oder ihm verabreicht.

05.01.2015

5


Biotechnologisch bearbeitetes Gewebeprodukt

Biologisches ArzneimiYel zur Anwendung im oder am Menschen, das folgende Merkmale aufweist: ¤  enthält biotechnologisch bearbeitete Zellen oder Gewebe oder es besteht aus ihnen. und ¤  Ihm werden Eigenscha`en zur Regenera$on, Wiederherstellung oder zum Ersatz menschlichen

Gewebes zugeschrieben. ¤  Zellen oder Gewebe gelten als biotechnologisch bearbeitet, wenn sie wenigstens eine der

folgenden Bedingungen erfüllen: ¤  Die Zellen oder Gewebe wurden substanziell* bearbeitet, so dass biologische Merkmale,

physiologische Funk0onen oder strukturelle Eigenscha`en, die für die beabsich0gte Regenera0on, Wiederherstellung oder den Ersatz relevant sind, erzielt werden.

oder ¤  Die Zellen oder Gewebe sind nicht dazu bes0mmt, im Empfänger im Wesentlichen dieselbe(n)

Funk0on(en) auszuüben wie im Spender (non-‐homologous use).

¤  Keine biotechnologisch bearbeiteten Produkte sind Produkte, die ausschließlich nicht lebensfähige menschliche oder 0erische Zellen und/oder Gewebe enthalten oder aus solchen bestehen und die nicht hauptsächlich pharmakologisch, immunologisch oder metabolisch wirken.

05.01.2015

6


Kombinierte ATMP

Als „kombiniertes ArzneimiYel für neuar0ge Therapien“ gilt ein ATMP, das folgende Voraussetzungen erfüllt: ¤  Es enthält als festen Bestandteil eines oder mehrere Medizinprodukte im

Sinne des Ar0kels 1 Absatz 2 Buchstabe a der Richtlinie 93/42/EWG oder eines oder mehrere ak0ve implan0erbare medizinische Geräte im Sinne des Ar0kels 1 Absatz 2 Buchstabe c der Richtlinie 90/385/EWG.

und ¤  Sein Zell-‐ oder Gewebeanteil muss lebensfähige Zellen oder Gewebe

enthalten. oder ¤  Sein Zell-‐ oder Gewebeanteil, der nicht lebensfähige Zellen oder Gewebe

enthält, muss auf eine Weise auf den menschlichen Körper einwirken können, die im Vergleich zu den genannten Produkten und Geräten als Hauptwirkungsweise betrachtet werden kann.

05.01.2015

7


Regulatorische Anforderungen nehmen mit Entwicklungsstufe zu

05.01.2015

10

¤  Unterschiedliche Stufen der Produktentwicklung fordern unterschiedliche Dossiers zur Bewertung durch unterschiedliche Behörden!

Phase I

Phase II GMP

Herstellung

Phase III

Herstellung-‐ erlaubnis Genehmigung für Klinische Studien

Länderebene Na0onal: PEI EMA/PEI

Zentrale EU Zulassung

EG 1394/2007 (ATMP-‐ Verordnung) § 13 AMG (Deutsches ArzneimiYelgesetz)

¤  Regulierung findet auf EU-‐Ebene staY; EU-‐Richtlinien sind im AMG umgesetzt


ArzneimiYel von Forschung zur Zulassung

05.01.2015

12

Phase I

Methodenvalidierung, Wirksamkeit, Produktspezifika0on

Phase II

Forschung

Phase III

Labormaßstab

Präklinische Phase

Markt-‐ware

Produk0onsmaßstab

GMP


Ethikkommission

05.01.2015

13

¤  Beurteilt, ob Vorhaben anhand der Normen, die durch Gesetze oder Richtlinien vorgegeben sind, ethisch vertretbar ist.

¤  Projekt muss hohe wissenscha`liche Qualität aufweisen. ¤  Einverständniserklärung: Jeder Studienteilnehmer muss sein freies,

informiertes Einverständnis geben. ¤  Risikominimierung


Herstellung Tumorlysat •  Resek0onsmaterial von Glioblastom-‐Pa0enten •  mechanische Zerkleinerung, Homogenisierung,

Avitalisierung (6x Wechsel 5min LN2 -‐ 5min 56°C, 60 Gy), Bes0mmung Proteingehalt

•  Nachweis Avitalität (Trypanblau-‐Färbung, ATP-‐Assay)

Gewinnung & Anreicherung der CD14+ Monozyten •  Leukapherese

•  Leukozyten (weiße Blutkörperchen) werden aus dem Blut getrennt.

•  Dichte-‐Gradient-‐Zentrifuga0on (Elutria0on) •  weißen Blutkörperchen werden von peripheren mononukleären Blutzellen getrennt

Generierung unreifer DC •  In-‐vitro Konversion der Monozyten durch Zytokine GM-‐

CSF & IL-‐4 zu unreifen dendri0schen Zellen

Generierung reifer DC •  Reifung durch Zytokine TNF-‐α & IL-‐1β und

Tumorbeladung in ak0ve, reife dendri0sche Zellen

Vakzinierung •  Intradermale Injek0on der DC zurück in den Pa0ent •  Ak0vierung der IA & Rückbildung Tumor

Soma$sche Zelltherapeu$ka -‐ ATMP Herstellung von autologe DC für die Immuntherapie -‐ Experimenteller Au{au

14 14

+ GM-‐CSF & IL-‐4

Tumor-‐lysat

DC-‐Zellkultur

+ TNF-‐α & IL-‐1β

Tumorlysat-‐ beladene DC

Monozyten-‐Zellkultur


GMP

¤  Good Manufacturing Prac0ce = Gute Herstellungspraxis ¤  Umsetzung von Gesetzen und pharmazeu0schen Regelwerken in die

Produk0onspraxis ¤  GMP ist eine Verordnung zur Qualitätssicherung bei der Herstellung

von ArzneimiYeln

¤  Was ist Qualität? ¤  Reproduzierbarkeit ¤  Eignung für einen vorgesehenen Zweck ¤  Jede Charge innerhalb festgelegter Grenzen gleich ¤  Qualität entsteht durch die Summe aller Tä0gkeiten in einem Prozess ¤  Kontrollierte und nachvollziehbare Abläufe

05.01.2015

15


Praxisbeispiel „GMP“: Kuchenbacken

05.01.2015

17

Qualitätsrelevante Parameter

Alltag

GMP

Rohstoffe Eier, Zucker, Mehl etc. im Laden kaufen

¨  Rohstoffspezifika0on erstellen ¨  Rohstoffe gegen Spezifika0on prüfen und

freigeben

Ausrüstung und Geräte

Backofen mit Ober-‐ und Unterhitze

Qualifizierter Backofen: ¨  Thermostat kalibrieren ¨  Temperaturverteilung mit Sensoren prüfen ¨  Gerät für Zweck freigeben

Teigherstellung

Rezept kann nach Belieben variiert werden

¨  festgelegte Herstellungsvorschri` ¨  jeder SchriY wird dokumen0ert und

qui�ert

Backen

ca. 60 min bei 160°C

¨  Festlegung Temperatur-‐Bereich (160 ± 2°C) ¨  kon0nuierliche Temperatur-‐Überwachung ¨  Dokumenta0on des Temperatur-‐Verlaufs

Abkühlen

Auf dem Küchen0sch ¨  definierte Raumbedingungen (Temperatur, Lu`feuch0gkeit, Keime)

¤  Was unterscheidet den Kuchen vom Arzneimi\el? Beim Arzneimi\el gefährden Abweichungen unmi\elbar die Qualität des Produkts und damit Sicherheit des Pa$enten!


Verschiedene Aspekte von GMP

05.01.2015

18

Gebäude

GMP

Dokumen-‐ta0on

Rohstoffe Produk0ons-‐prozess

Personal

Qualitäts-‐kontrolle

Geräte/Anlagen/ Ausrüstung

Hygiene


Hygiene

¤  Hygieia verkörperte im an0ken Griechenland die Präven0vmedizin ¤  Lehre von der Erhaltung der Gesundheit und der vorbeugenden

Verhütung von Krankheiten ¤  Hygiene dient dem Schutz des Produktes vor Kontamina$onen mit

Mikroorganismen oder Par0keln ¤  Besondere Bedeutung in der Biotechnologie

fer0ges Endprodukt ist in der Regel nicht sterilisierbar àAnwendung o` parenteral (Injek0on in Blutkreislauf)

¤  Personalhygiene ¤  Betriebshygiene:

¤  Herstellung pharmazeu0scher Produkte erfolgt in der Regel in Reinräumen

¤  Reinräume unterliegen einem festgelegten Hygieneprogramm

05.01.2015

19


Mögliche Kontamina0onsquellen

05.01.2015

20

Geräte und Anlagen

Kontamina$onen (Par$kel,

Mikroorganismen)

Wasser

Rohstoffe

Räume

Verpackungen

Lu`


Reinraum-‐Anlage: Prinzipieller Au{au

¤  Definierte Lu`zufuhr über Hochleistungsfilter (Staubpar0kel tragen Bakterien)

¤  Überdruck zur Umgebung (+ 15 Pa pro Reinraumklasse) ¤  Reinraumklassen D -‐ A ¤  Reinraumgerechte Konstruk0on:

¤  GlaYe Oberflächen ¤  Wände und Decken kompleY verfugt ¤  Spezielle Fussböden ¤  Keine Ö�ffnungen (z. B. Bodenabflüsse) ¤  Geschlossene Fenstersysteme

¤  Bauliche und organisatorische Maßnahmen (z.B. Personal-‐,Materialschleusen)

05.01.2015

21


Überwachung der Reinraum-‐Anlage: Reinraum-‐Monitoring

¤  Messung der Par0kelzahl in der Lu` mit Laser-‐Par0kel-‐Counter

¤  Messung der Lu`keimzahl ¤  Lu`keimsammler (Aufschleudern von Lu`

auf festen Nährboden) ¤  Sedimenta0onsplaYen

¤  Messung der Oberflächenkeimzahl mit KontaktplaYen

05.01.2015

24


Anforderungen der Reinraum-‐Klassen: Keimbelastung (EU-‐GMP-‐Leikaden)

¤  Keimverbreiter Nr. 1 im Reinraum ist der Mensch Ein gesunder Mensch gibt pro Tag ca. 29 Mio. Keime in seine Umgebung ab

05.01.2015

25

Klasse Lu`probe KBE/m3

Petrischalen (Durchm. 90mm) Abdruck KBE/4Std

Kontaktpla\en (Durchm. 55mm) KBE/Pla\e

Handschuh-‐Abdruck 5 Finger KBE/Handschuh

A <1 <1 <1 <1

B 10 5 5 5

C 100 50 25 -‐

D 200 100 50 -‐


Anforderungen der Reinraumklassen: Par0kelbelastung (EU-‐GMP-‐Leikaden)

05.01.2015

26

Zum Vergleich: ¤  Stadtlu` enthält ca. 500 – 1000 Mio. Par0kel ≥ 0,5 μm pro m3

¤  Berglu` (2000 m Höhe) enthält bis 30 Mio. Par0kel ≥ 0,5 μm pro m3

Klasse at rest in opera$on

Par0kel ≥ 0,5 μm pro m3

Par0kel ≥ 5 μm pro m3

Par0kel ≥ 0,5 μm pro m3

Par0kel ≥ 5 μm pro m3

A 3250 20 3250 20

B 3250 29 325 000 2 900

C 325 000 2 900 3 250 000 29 000

D 3 250 000 29 000 nicht festgelegt nicht festgelegt


Personalhygiene: Reinraumkleidung

¤  Besteht aus „par0kelarmem“ Gewebe ¤  Schützt das Produkt vor

Kontamina0on ¤  Besteht entsprechend der

Reinraumklassifizierung aus – Overall oder zweiteiliger Reinraumanzug ¤  Reinraumschuhe ¤  Kop{edeckung ¤  Mundschutz ¤  Handschuhe

¤  Betreten des Reinraumes durch Personalschleusen: genaue Vorschri`en

05.01.2015

28



05.01.2015

31

Gebäude

GMP

Dokumen-‐ta0on


Personal



Hygiene


Dokumenta0on

¤  Good Manufacturing Prac0ce = Give me More Paper ¤  Ziele der Dokumenta0on:

¤  KompleYe Rückverfolgbarkeit ¤  Vollständige Nachvollziehbarkeit

Was nicht dokumen$ert ist, wurde nicht durchgeführt!

05.01.2015

32


Warum muss dokumen0ert werden?

¤  Nachvollziehbarkeit der Daten bei eventuellen Problemen mit der ArzneimiYelcharge (wer hat wann was und wie gemacht?)

¤  Vermeidung von Fehlern durch eindeu$ge Festlegung der Abläufe (z. B. Herstellungsanweisung)

¤  Reproduzierbare Steuerung von Prozessen (z. B. Wiegen, Sterilisieren etc.)

¤  Bestä0gung der Übernahme der Verantwortlichkeit durch Unterschri`en

05.01.2015

33


Dokumenta0onsarten im GMP-‐Betrieb

05.01.2015

34

Schulungs-‐protokolle

GMP-‐Dokumente

Hygiene-‐protokolle

Änderungs-‐dokumenta0on

Kalibrier-‐protokolle

Arbeitsan-‐weisungen (SOPs)

Logbücher von Geräten /MPB

Chargen-‐protokolle


Medizinproduktebuch -‐ Logbuch

05.01.2015

39

Kalibrierung

Medizin-‐produkte-‐

buch Wartung

Belegung

Änderungen

Reparatur

Reinigung

Requali-‐fizierung

¤  jede Eintragung von einem Verantwortlichen visiert (abgezeichnet) ¤  Macht den „Lebenslauf“ eines Gerätes nachvollziehbar



05.01.2015

40

Gebäude

GMP

Dokumen-‐ta0on


Personal


Geräte/ Anlagen/ Ausrüstung

Hygiene

Qualifizierung und Validierung

Qualifizierung

¤  Dokumen0erter Nachweis, dass Ausrüstungsgegenstände (Anlagen, Geräte, Räume etc.) für den vorgesehenen Zweck geeignet sind, einwandfrei arbeiten und zu den erwarteten Ergebnissen führen

¤  Qualifizierung ist ausrüstungsbezogen !

Validierung

¤  Dokumen0erter Nachweis, dass Prozesse (z. B. DC-‐Herstellung )innerhalb festgelegter Grenzen zu den erwarteten Ergebnissen führen

¤  Validierung ist prozessbezogen !

05.01.2015

42


Grundlagen der Qualifizierung

Ziele der Qualifizierungstä0gkeiten ¤  Sicherstellen, dass das Gerät / die Anlage ein geeignetes Design für

den Einsatz im GMP-‐Umfeld besitzt ¤  Überprüfung, ob die Installa0on korrekt und gemäß der Planung

erfolgt ist ¤  Überprüfung der Funk0onalität

Frühzei0ges Erkennen von Mängeln oder Abweichungen Ablauf der Qualifizierung ¤  Designqualifizierung DQ (Design Qualifica0on) ¤  Installa0onsqualifizierung IQ (Installa0on Qualif.) ¤  Funk0onsqualifizierung OQ (Opera0onal Qualif.) ¤  Leistungsqualifizierung PQ (Performance Qualif.)

05.01.2015

43


Au{au eines einzelnen Qualifizierungstests

¤  Testziel: Was soll getestet werden? ¤  Testbeschreibung: Wie soll der Test durchgeführt werden? ¤  Akzeptanzkriterien Eindeu$ge Festlegung

(nicht: „Ergebnisse entsprechen den Erwartungen“) ¤  Resultate: Dokumenta0on der Testergebnisse + Wer hat wann was

gemacht? ¤  Testbeurteilung: Test insgesamt erfüllt?

05.01.2015

44


Grundlagen der Validierung

¤  Validierung erfolgt vor Markteinführung des ArzneimiYels ¤  Teil der Zulassungsdokumenta0on

¤  Dokumen0erter Nachweis, dass der Herstellungsprozess innerhalb festgelegter Grenzen reproduzierbar zum erwarteten Ergebnis führt

¤  Z.B. drei Validierungschargen mit erhöhtem Kontrollaufwand ¤  ErmiYlung von Art und Umfang der Kontrollpunkte durch eine

Risikoanalyse ¤  Beispiele

¤  Herstellungsprozesse ¤  Sterilabfüllung von Produktlösung ¤  Analysenmethoden/ Assays ¤  Reinigung von Geräten ¤  Kühltransport temperaturempfindlicher Substanzen

05.01.2015

45


Development of a GMP-‐compliant produc0on process for autologous, tumor-‐lysate pulsed dendri0c cells (ATMP)

A prerequisite for the processing of clinically applicable cell based medicinal products is a fine-‐grained GMP validation protocol

1.

Methods & Results

1.

Methods

DC-‐generation protocol using ficollized PBMC followed by plate

adherence

The exact procedure of performed clinical process validation is

coordinated in advance with

supervisory authority

Generated quality data were used to

apply for the manufacturing

authorization based on pharmaceutical law, and details of clinical process validation were

agreed in advance with the local drug

authority. All production steps, were validated and finally approved.

1.

Transfer into a closed system using large-‐scale monocyte

isolation techniques with GMP-‐compatible

reagents

day 0*

day 7* day 9* day2* day 4* day 6* day > 9 *

Apheresis & Enrichment of monocytes & differentation

cytokines

Manufacturing steps

Medium & differentation

cytokines Vaccination of DC Vaccination of

cryoconserved DC

Tumor lysate & maturing cytokines

Preclinical process validation

day < 0*


cytokines

Differentiation cytokines Preparation

Clinical process validation

Clinical patient study



05.01.2015

49

Gebäude

GMP

Dokumen-‐ta0on


Personal


Geräte/ Anlagen/ Ausrüstung

Hygiene


Wissenscha`liche Herausforderungen

05.01.2015

50

Nicht-‐klinische Aspekte

¨  Verfügbare & relev. Tiermodelle ¨  Toxikologie

¨  Pharmakovigilanz ¨  Biodistribu8on ¨  Tumorigenität

¨  Immunogenität ¨  Prolifera0ons-‐/Differenzierungskapazität

¨  Manipula0onslevel: in vitro/ex vivo Vermehrung/ Ak0vierung

ATMP

Ausgangsmaterial ¨  Materialzuverlässigkeit

¨  Spendertestung ¨  Mikrobiolog. Sicherheit der Gewinnung ¨  Herkun` der Zellinie (allogen -‐ autolog)

¨  Variabilität

Qualitätsaspekte ¨  Charakterisierung

¨  Iden0tät ¨  Sterilität ¨  Reinheit

¨  Verunreinigungen ¨  Potency

Transport zum Hersteller ¨  KühlkeYe

¨  Lebensfähigkeit der Zellen ¨  Chemikalien für Kryonservierung

¨  Sterilität

¨  adäquater Nachweis der Wirkung („proof of concept“) ¨  Interak0on zwischen Produkt und umgebendem Gewebe ¨  Begründung für gewählten Dosierungen und Häufigkeit ¨  Sekundäre Pharmakodynamik zur Bes0mmung anderer

physiologischer Effekte als dem therapeu0schen Effekt. ¨  Expression biologisch ak0ver Substanzen

Klinische Aspekte ¨  Sichere ini0ale Dosis

¨  Art der Anwendung (lokal, systemisch..) ¨  Reak0on im Menschen

¨  Nachverfolgung ¨  Wirksamkeit


Grundsätze zum Design eines Produk0onsprozesses

Schon bei der Entwicklung im Labormaßstab beachten: ¤  Auswahl der Rohstoffe (Herkun`, Preis, TSE-‐Risiko) ¤  Prozess muss Scale-‐up-‐fähig sein (z. B. kein Wachstum auf festen

Kulturmedien) ¤  Möglichst einfache Prozesse ¤  Robuste Prozesse ¤  Kühlbedingungen vermeiden ¤  Keine An0bio0ka im Fermenta0onsmedium

05.01.2015

51


Herstellungsphasen: Präklinische Phase

¤  Durchführung von Versuchen an isolierten Zellen, Zellkulturen, Organen sowie Tierversuche

¤  Tierversuche werden durchgeführt, um das biologische Geschehen in einem Lebewesen nachzuvollziehen (z. B. Bioverfügbarkeit), daher kann nicht gänzlich darauf verzichtet werden (gesetzliche Vorgaben)

¤  Der neue Arzneistoff wird dem Tier verabreicht: ¤  1) Wie toxisch ist die Substanz ¤  2) TriY der erwartete und erwünschte Effekt auf? ¤  Verläu` die Reak0on posi0v gemäß den Erwartungen folgt eine detaillierte

Untersuchung. ¤  Detaillierte Untersuchung: Testung auf Verträglichkeit und eventuelle

Nebenwirkungen, Risiko auf Erbgutschädigung, Missbildungsauslösung und Krebserzeugung.

¤  Von 10.000 Substanzen bleiben ca. 10 übrig, die für geeignet zur Weiterentwicklung befunden werden

¤  + 3 klinische Phasen ¤  Bis zur Zulassung sind in der Regel ca. 11-‐ 12 Jahre vergangen!

05.01.2015

52

Development of a GMP-compliant production process for autologous, tumor-lysate pulsed dendritic cells (ATMP)

1.

Methods & Results

day 0*

day 7* day 9* day2* day 4* day 6* day > 9 *

Apheresis & Enrichment of monocytes & differentation

cytokines Manufacturing steps


cytokines Vaccination of DC Vaccination of

cryoconserved DC Tumor lysate &

maturing cytokines

Preclinical process

validation

phenotype vitality vitality

protein quantification

avitalization

day < 0*


cytokines

Differentiation cytokines

solutions

Preparation

FBS

ATP-‐Assay, SIA, CASY & trypan blue

batch controls

migration assay Storage stability of the DC preparation

vitality

allogenic tumor lysate

Clinical process

validation

leucapheresis & elutriation

MediaFill test

3 bags mycoplasma& endotoxine

batch controls

protein quantification

avitalization ATP-‐Assay & trypan blue

sterility

sterility

sterility

cell count phenotype vitality sterility



sterility Storage stability of the DC

preparation

infection serology

sterility sterility sterility

migration assay

HSA

allogenic tumor lysate

G M P

2

1

solutions: sterility

vitality phenotype phenotype phenotype

cell count

Quality after cryopreservation


autologous T-‐cell-‐stimulation assay

Quality after cryopreservation

Migratory capacity of matured DCs towards CCL19 + CCl21 in transwell assay Viability of fresh or cryoconserved

mature DC in final product container CD86, CD80, HLA-‐DR and CD80 as surrogate markers for DC maturation

after cryoconservation

Characterization of cryoconserved matured DCs

Finally, mature DCs were cryopreserved and thawed without significant loss of both vitality and function as shown by migration, marker expression as well as additional stability tests in the final product container.

Leukocytes depletion chamber + ficoll

cell count cell count cell count

mycoplasma& endotoxine


Valida0on of a non-‐vital tumor lysate (cTL) Trypan blue staining

57

B A

C

Trypan blue staining is a tool to differen0ate viable from non-‐viable par0cles within TL.

Müller, I., et al. Transfusion and Medicine Hemotherapy. 2014


58

Valida0on of a non-‐vital tumor lysate (cTL) CASY TTC cell counter

B

C

D

A A

B

lTC (median diameter 18-‐20 µm; 87.5% of cells > 10µm) were significantly larger than par0cles detected in cTL (78.7% of par0cles < 10µm).

Short coming: no interpreta0on of larger par0cles (>10 µm)


59

A B Ø

10

100

1000

10000

100000

1000000

abso

lute

luci

fera

se u

nits

PBMCs /complete avitalized tumor

ATP-‐release assay reliably detects the absence of viable, metabolically ac0ve cells, but requires large amounts of 0ssue

Valida0on of a non-‐vital tumor lysate (cTL) ATP-‐Assay Valida0on of a non-‐vital tumor lysate: ATP-‐Assay


60

A C

D B

SIA is an effec0ve tool to confirm complete destruc0on of cells within cTL based on size, shape and morphology with a very small amount of cTL

Valida0on of a non-‐vital tumor lysate: ATP-‐Assay



05.01.2015

61

Gebäude

GMP

Dokumen-‐ta0on


Personal



Hygiene


Daten zur Qualität

¤  Herstellungserlaubnis = Definiertes, (validiertes), GMP-‐konformes Herstellungsverfahren

¤  Endprodukt-‐Spezifika0on: ¤  Begründete Spezifika0onen für

¤  Wirkstoff, Verunreinigungen, Reinheit, Zellzahl/Vitalität ¤  Zellsubstrat, Medien, Reagenzien, Proteine, DNA, Spezifische Gene/

Onkogene ¤  Mikrobielle Sicherheit ¤  Virussicherheit/TSE ¤  Stabilität ¤  Spezifische Ak0vität (Potency)

¤  Auf Basis der Charakterisierungsstudien definiert ¤  Begrenzt durch Produktmenge & Zeitspanne bis zur Freigabe

05.01.2015

62


66

Vorlesung GMP&Zelltherapeutika WS 2014.15 Version 15.12.2014 · ZHMB$M.Sc.$HuMB$Advanced$Modul$II"...

Documents

Transcript of Vorlesung GMP&Zelltherapeutika WS 2014.15 Version 15.12.2014 · ZHMB$M.Sc.$HuMB$Advanced$Modul$II"...