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    Papel central del colonizador temprano Veillonella sp. en el

    establecimiento de comunidades de biofilms multiespecficos con inicial,

    medio, y los fines colonizadores de esmalte.

    Titulo original: Central Role of the Early ColonizerVeillonellasp. in Establishing

    Multispecies Biofilm Communities with Initial, Middle, and Late Colonizers ofEnamel.

    Autores: Saravanan Periasamy y Paul E. Kolenbrander.

    Lugar: Infeccin oral e inmunidad rama del Instituto Nacional de Investigacin

    Dental y craneofacial, institutos nacionales de salud, Bethesda, Maryland.

    Fecha: Recibido el 16 de Diciembre de 2009 y Aceptado el 4 de Febrero de 2010.

    INTRODUCCIN

    La cavidad oral humana tiene muchas bacterias que residen en ellas que sedividen en cientos de especies. Se organizan en comunidades multiespecficosdespus de cada tratamiento de higiene oral; por ejemplo, el desarrollo de la placadental en el esmalte comienza con los colonizadores iniciales estreptococos yactinomyces que son seguidas por la temprana colonizacin deVeillonella, por lacolonizacin de medio porphyromonas, Fusobacterias y la tarda colonizacin deaggregatibacters.Durante el inicio de la biopelcula los estreptococos y actinomices se unen paraestar en la saliva para el recubrimiento de pelcula de esmalte.

    A su vez, otras especies se unen a las clulas, un proceso llamado coadhesion.Este proceso y coagregacin definido como el reconocimiento especfico de clulaa clula, as como el crecimiento de clulas adherentes los cuales contribuyen aldesarrollo de la placa.

    Aunque se conoce que metabolizan los cultivos puros de bacterias orales de ladieta de azcares a cido lctico, para el crecimiento de la comunidad en la salivacomo nica fuente de nutrientes. La mayora de los cultivos puros y muchascombinaciones de especies son incapaces de crecer en toda la saliva, que es uncomplejo fuente nutricional. El crecimiento podra, de hecho, requerir de laorganizacin espacial y las interacciones mutualistas entre especies

    seleccionadas que son capaces de convertir la nutricin latente en la nutricinutilizable.Los estreptococos forman 60 a 90% de la placa supra gingival de biomasa en lasprimeras 24 h de la colonizacin. Convierten carbohidratos a cidos orgnicos decadena corta, tales como el cido lctico y el cido pirvico. Veillonellaconstituyen tanto como 5% de la biomasa inicial de la placa pero no puedencatabolizar azcares. Se basan en la fermentacin de cidos orgnicos tales como

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    cido lctico y as establecer una conveniente alimentacin de cadena metablicaen la placa dental.Estudios in vivo con ratas gnotobitico demostraron queVeillonellafue incapacesde establecer monoinfecciones. Se inocul en ratas ya monoinfectados con unacepa deStreptococcus mutanscongregados con esa tensin de Veillonella, el

    nmero de Veillonella en los dientes de los animales coinfectados fue 1,000 vecessuperior al nmero de cepa no-co-agregacin de Veillonella.

    Tambin, en ratas gnotobitico, la disminucin de las caries obtuvo puntuacionesde placa de biofilms de dos especies que para la colonizacin de especiesindividuales por estreptococos e insercin deVeillonellaque reduce la actividad decaries y la desmineralizacin del esmalte por los estreptococos.Se yuxtaponen con el receptor de coagregacion polisacrido-cojinete estreptococosen las primeras comunidades en vivo y una rpida sucesin de filotipos de

    Veillonella ocurre en estas comunidades. Estos informes ofrecen amplia evidenciaque estn vinculados en biofilms orales Veillonella y estreptococos.

    A.Generalidades de lasVeillonellas

    Son fenotpicamente muy similares, siete especies se reconocen por el anlisis de

    homologa de su ADN. Este gnero comprende un grupo de diplococo gram

    negativos anaerobios estrictos, de la familiaNeisserianceaem.

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    Su Habitat se da en la boca, tracto intestinal y respiratorio del hombre y otros

    animales

    Las especies deVeillonellafiguran entre las primeras colonizantes de la cavidad

    oral y una vez que han colonizado tienden a persistir en ese ambiente como

    microbiota normal. En la cavidad oral se detectan en la mayora de las superficiesmucosas, la saliva y las placas dentales tanto subgingival como supragingivales.

    El requisito para la colonizacin microbiana inicial es la adherencia bacteriana a

    las superficies orales. La colonizacin primaria con Veillonella spp. en las

    superficies orales es independiente de la presencia de dientes erupcionados. La

    adherencia deVeillonella spp. a los tejidos del husped y a la hidroxiapatita

    cubierta con saliva es pobre, pero participan en congregaciones interbacterianas,

    un modo por el cual se fijan va la unin secundaria a otras bacterias capaces de

    la adhesin primaria.

    Dado que estn involucradas en interacciones beneficiosas en la cascada de

    colonizacin oral y el mantenimiento de la homeostasis, debe conocerse su rol e

    impacto especfico

    B.Caractersticas de las Veillonellas

    Las Veillonellas son cocos gram-negativos anaerbicos

    estrictos asociados con la salud oral.

    Macroscpicamente, las colonias en

    medios de Agar lactato aparecen en forma

    de diamantes o corazn, liso, opaco,

    blanco grisceo y con consistencia grasosa como

    la mantequilla.

    Microscpicamente miden de 0.3 a 0.5

    micrmetros de dimetro.

    Las colonias deVeillonella spp. producen fluorescencia roja visible con luz

    ultravioleta, que desaparece.

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    C. Factores de virulencia

    No forma esporas ni

    capsulas. Poco despus del

    nacimiento, esta bacteria

    aparece en la boca humana.

    El incremento en el nmero de

    Veillonella ocurre despus

    de la colonizacin de la

    especie bacteriana predominante

    Se ha sugerido que los cocos del gneroVeillonellapodran contrarrestar la

    formacin de caries dental.

    Se conocen varias especies de Veillonella parvula, Veillonella alcalescens,Veillonela discordes, Veillonella reniformes, Veillonella orviculatus y Veillonella

    vulvovaginitidis.De stas, solo la Veillonella se ha encontrado en abscesos

    periodontales, gingivitis y algunas infecciones urinarias.

    D. Caractersticas estructurales

    Los microorganismos pertenecientes al Gnero Veillonella metabolizan lactato y

    succinato, reducen la cisteina, cistina, tiosulfato y dan lugar a la formacin deradicales sulfihidrilos (SH2).

    Para su desarrollo utilizan ciertos metabolitos intermedios como el piruvato,

    lactato, malato, fumarato, y oxaloacetato, junto con el dixido de carbono

    esencial. El metabolismo del lactato puede definir el grado de acidez de la placa

    dental.

    E. Medio de cultivo en la cual crece

    Para cultivo: Medios Agar de lactato o Agar de cerebro corazn infusin (BHI).

    Para aislamiento selectivo: Medio Agar de lactato con 715mcg/ml de vancomicina.

    Para el mantenimiento: liofilizacin en leche descremada para almacenamiento a

    largo plazo.

    Para Incubacin

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    Temperatura: 30-37 C

    Tiempo: 48 horas.

    Ambiente: anaerobios.

    pH: 6.5-8.0.

    F. Patologas que produce apartes de la de la cavidad oral

    LaVeillonellarara vez es un patgeno importante. Estos organismos producen

    serolgico especficas endotoxinas (lipopolisacridos) que inducen pirgenos y el

    fenmeno de Schwarzman en conejos.

    Las infecciones causadas por estas bacterias rara vez se informaron, ya que en la

    mayora de los casos son considerados como flora normal o microorganismos no

    patgenos. Han sido aislados de infecciones de cabeza y cuello, la piel e

    infecciones de tejidos blandos e infecciones en el tracto respiratorio, lquido

    peritoneal y la sangre y tambin morder infecciones de la herida La mayora de

    Veillonella sp a partir de muestras clnicas son V. prvula, sino tambin V. dispar,

    V. Atypica y se han aislado de muestras humanas especie recin descubierta V.

    montpellierensis. Veillonella sp puede ocurrir en infecciones graves como la

    meningitis y endocarditis.

    Veillonella sp. Tambin se ha identificado como una causa de discitis (una

    inflamacin del disco intervertebral) anaerbica.

    Se aisl especies Veillonella en seis pacientes con neumonitis anaerbico; tres

    aislamientos se hicieron crecer en cultivo puro. Tambin cultivaron este

    organismo en cuatro pacientes cada uno con absceso pulmonar y empiema.

    Brook 7 revis los 83 aislamientos de especies Veillonella que se recuperaron en

    83 nios durante un perodo de 20 aos.

    En aspiracin bacterias anaerobias neumona de un sitio de transporte normal

    (orofaringe) pueden pasar a otra rea normalmente libre de organismos para

    producir infeccin en ese sitio. Estos patgenos oportunistas rara vez se

    recuperan como aislamientos individuales. A menudo se mezclan con otras

    bacterias anaerobias o aerobias.

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    G. Sensibilidad antibitica

    Veillonella spp. Son generalmente susceptibles a la mayora de los antibiticos

    utilizados para el tratamiento de infecciones anaerobios, incluyendo los

    antibiticos -lactmicos (penicilinas y cefalosporinas), clindamicina,

    metronidazol. Sin embargo, Veillonella spp. Son generalmente resistentes a la

    tetraciclina y slo son poco sensibles a la eritromicina.

    Es imperativo que cada vez que las infecciones causadas por Veillonella spp. Se

    sospecha, se utilizan agentes distintos de stos. Aislados ocasionales de

    Veillonella spp. Puede, sin embargo, muestran resistencia a la penicilina, as

    como otros agentes.

    Tabla 1. Distribucin de cepas Veillonella de acuerdo a su sensibilidad a los

    antibiticos -lactmicos.

    Determinado por E-test.

    Nmero entre parntesis indica el nmero de cepas probadas.

    MATERIALES Y MTODOS

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    Cepas bacterianas y condiciones de cultivo. Rutinariamente se cultivaS. oralis

    34 yActinomyces orisATCC 43146 en Todd - Hewitt caldo. (THB) (Difco

    Laboratories, Detroit, MI) o en agar THB.Veillonellasp. cepa PK1910 fue crecido

    en THB complementado con 0.6% de cido lctico (THBL). A.

    actinomycetemcomitansJP2 (un bueno regalo de D. Demuth, la Universidad deLousville, Louisville, KY) se cultivaba en cerebro corazn infusin suplementado

    (BHI) (Difco) con bicarbonato de sodio 0.04% y extracto de levadura 2%.

    Nucleacin defusobacteriumATCC 10953 fue crecido en BHI suplementado con

    0.25% L - cido glutmico. Extracto de Porphyromonas gingivalis ATCC 33277

    (un bueno regalo de R.J Lamony, University of Florida, Gainesville, Florida) fue

    cultivada en BHU suplementado con 0,1% de levadura, 0.5% de hemina y

    menadiona de 0.001%. Todas las especies fueron cultivadas en una Bactron

    anaerobio (N2-CO2-H2 90:5:5) cmara ambiental (Sheldon Manufacturing Inc.,

    Cornelius, OR) a 37 C.

    Preparacin de saliva.Saliva de 6 a 10 individuos sanos fue recogido en el hielo,

    agrupado en el hielo y tratado con dithiotheitol de 2,5 mM por 10 min con

    agitacin para reducir la agregacin de protenas salivales. La saliva fue

    centrifugada y procesada como se describi anteriormente (17). Brevemente, el

    sobrenadante se diluy con agua destilada para producir 25% saliva y luego se

    filtr a travs de un 0.22 - m acetato de celulosa libre de tensioactivos de

    tamao de poro (SFCA) filtro de baja protena de unin (Nalge Nunc International,

    Rochester. NY) y almacenado a-20 C. Antes de su uso, la saliva se descongelan y

    se centrifug para remover cualquier precipitado resultante de la congelacin y

    descongelacin.

    Anlisis de lactato.Concentraciones de lactato (M) se calculan a partir de

    curvas estndar obtenidas mediante diluciones seriadas 2 veces de lactato. Se

    cuantificaron las concentraciones de cido lctico en filtro - saliva estril en el

    depsito y la saliva de efluente de la salida de la clula de flujo en 4 h y 18 h con

    un kit de anlisis acido lctico (Bio visin, Mountain View, CA). La saliva

    efluentes se filtr a travs de un 0.22 - m antes de filtro para anlisis.

    Preparacin de la clula de flujo. Dos tracks (cada pista era 40 mm de largo, 3

    mm de ancho y 2 mm profundo) se muelen en un bloque de polyerthylene de alta

    densidad, resultando en dos compartimientos, cada uno con un volumen de l

    240 . Un cubreobjetos de vidrio que sirve como el sustrato de fijacin para la

    biopelcula creciente, fue asegurado a las clulas de flujo reutilizable con un

    adhesivo de silicona. Las clulas de flujo fueron limpiadas durante la noche con

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    0.1m HCL y enjuaga con 5 ml de agua destilada, seguida de inyeccin de etanol al

    70% en las clulas de flujo e incubar durante 20 min. Las clulas de flujo fueron

    tratadas luego con saliva humana estril del 25% por 15 min a 37 C en una

    cmara de anaerobia para acondicionar la superficie de vidrio con componentes

    salivales.

    Condiciones de crecimiento de biofilm en las clulas de flujo. Cultivos

    bacterianos durante la noche fueron cosechadas por centrifugacin y lavados dos

    veces con saliva humana estril 25% y la densidad ptica a 600 nm se ajust

    usando saliva en 0,1, que es equivalente aproximadamente a 1 x 107 a 3 x 10 7

    clulas / ml. flujo de las clulas fueron inoculado cual una, dos o tres especies.

    Dos especies. Dos especies y tres especies inoculaciones fueron primero

    coagregantes (mezclando porciones de 0.1 ml de combinaciones apropiadas de

    Veillonellasp., S. oralis,A. oris, F, nucletum, P. gingivalisyA.

    actinomycetemcomitans[equivalente a alrededor de 1 x 10 6 a 3 x 106 clulas de

    cada especies]), que fue seguidas por la incubacin de las clulas de flujo en la

    cmara anaerbica para proporcionar un ambiente favorable a laVeillonellasp. ,

    P. gingivalisyF. nucleatum, que son anaerobios estrictos. La nica fuente

    nutricional fue saliva de 25% estril suministrado con un caudal de 0,2 ml/min,

    que aproxim sin estimular el flujo salival en la boca.

    Biofilm de tincin. Tincin de las clulas vara en los diferentes experimentos.

    Cuando las cepas fueron creciendo como monocultivos. Se visualizaron por

    inmunofluorescencia primaria con cada Alexa Fluor 488 (Invitrogen) conjugadainmunoglobulina G de un antisuero policlonal y S. oralis, a. oralis, Veillonella sp.

    Cuando varias especies fueron inoculared, visualizacin de especies fue por

    inmunofluorescencia primaria con Alexa Fluor 488-, Alexa Fluor 633, Alexa

    Fluor488-, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 488 - y Alexa Fluor 546 conjugada

    inmunoglobulina G de un antisuero policlonal aS. oralis, Veillonellasp.,A . oralis,

    F. nucleatum,A. actinomycetemcomitansy P. gingivalis, respectivamente.

    Inmunofluorescence fue realizado por inyeccin de anticuerpos (5 g/ml en filtro

    esterilizado fosfato tampn salino [PBS] que contiene albmina de suero bovino

    1% wt/vol) en la pista de la clula de flujo apropiado e incubar durante 20 min.Un ltimo lavado con PBS haba precedido microscopa de lser confocal. No

    hubo reactividad cruzada con cepas no homologas observ basado en la tincin

    de anticuerpos.

    Imagen y anlisis estadstico. TCS - SP2 confocal microscopio (Leica, Exton, PA)

    con un 40 x 1,25--apertura numrica (NA) aceite inmersin lente fue utilizada

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    para grabar montones de imagen confocal en cinco lugares al azar cerca del

    centro de las clulas de flujo, alterar que fotosinttica de biofilm se determinaron

    por anlisis volumtrico (IMARIS versin 5,71; Bitplane AG, Zurich, Suiza).

    Umbrales de biofiltros fluorescencia fueron fijados manualmente para pxeles

    rojos, verdes y azules, con voxels cbicos utilizados para la determinacin delbiovolumen. Cinco conjuntos de datos confocales se analizaron para cada punto

    del tiempo, y se calcularon la media y desviacin estndar. Un anlisis

    unidireccional de varianza en el nivel de confianza del 95% con un Tukey no

    paramtrica prueba de comparacin de pares se utiliz para determinar si los

    medios fueron estadstica y significativamente diferentes entre los puntos 4-h y

    18 h de tiempo para cada condicin (uno, dos y tres especies) en la saliva de la

    clula de flujo. Todas las imgenes presentadas son proyecciones mximas de la

    pila de imagen confocal como producidos por el software de Leica TCS (Leica).

    RESULTADOS

    Ensayo de cido lctico. Se cuantific el cido lctico de sin inocular saliva y

    saliva efluentes de flujo celular de uno-dos-, y clulas de flujo tres especies

    inoculadas en 4 h y 18 h de incubacin. El contenido de cido lctico de saliva

    que fue 16 M

    Entre el inculo de una especie, sloS. oralisproduce cido lactico de la saliva y

    sloVeillonellasp .utiliza cido lctico;A. orisparece que no pudo usar o producircido lctico (Fig. 1B). cido lctico no fue producido o consumido porF.

    nucleatum,A.actinomycetemcomitansy p. gingivalis(datos no mostrados).

    Veillonellasp., en colaboracin conS. oralisoA. orisutilizaron cido lactico a

    niveles de por debajo de 5 M (Fig. 1). En comparacin con su capacidad de para

    utilizar el cido lctico por s mismo (Fig. 1B),Veillonellasp fue claramente

    capaces de reducir la concentracin de cido lctico a un nivel mucho menor en

    dos especies de biofilms con estreptococos o actinomyces (Fig. 1 C), sugiriendo

    eso veillonellae crecen bien con estos dos colonizadores iniciales. En biofilms de

    tres especies (Fig. 1), cido lctico fue utilizado rpidamente (en 4 h) porveillonellae, excepto conA. orisyP. gingivalis, donde el cido lctico fue utilizado

    ms lentamente.

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    Clulas inoculadas con una especie de flujo.S. oralis, A. oris, yVeillonellasp.

    fueron inoculadas en clulas de flujo separado. Imgenes de la biopelcula

    formada se obtuvieron despus de 4 h y 18 h de incubacin y utilizada para

    cuantificar las clulas de la biopelcula como del biovolumen.

    Cada especie mostr apego a la superficie de saliva-condicionada a las 4 h (Fig.

    2). Despus de 18 h de incubacin, el nmero de organismosS. oralisparecen

    aumentar (Fig. 2, paneles superiores), pero los incrementos no fueron

    significativas (Fig. 3). Crecimiento de A. oris ha sido de 3 veces, peroVeillonellasp. no creci (Fig. 3). Se inform antes queP. gingivalis, F. nucleatumyA.

    actinomycetemcomitansno creci como sola especie (19 21).

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    Flujo de clulas inoculadas con dos especies. En el flujo de clulas inoculadas

    con congregados deVeillonellasp. yS. oralis, ambos adjunto a la superficie de

    saliva-condicionada, como se muestra por las especies etiquetado con

    anticuerpos especficos (Fig. 4, paneles inferiores). La fotosintetica deVeillonella

    sp..y S. oraliscada aumento 8 veces entre 4 h y 18 h (Fig. 5A), lo que indica queambas especies crecieron en saliva. Despus de la inoculacin de Veillonella sp. y

    a. oris, cada 7-veces mayor entre 4 h y 18 h (Fig. 4, paneles superiores y 5B),

    indicando que ambas especies crecan en saliva.

    Flujo de clulas inoculadas con tres especies.

    S. oraliscreci cuando fue asociado conF. nucleatum, pero no creci cuando se

    asoci conA. actinomycetemcomitans(datos no se muestra) oP. gingivalis. Estaespecificidad fue explorada ms incluyendo a laVeillonellasp. como la tercera

    especie y examinando la formacin de comunidades de tres especies resultantes

    en clulas de flujo saliva-alimentadas. Curiosamente, S. oralis,Veillonellasp, yF.

    nucleatumfotosinttica aumenta (Fig. 6, paneles superiores) 163-, 100-y 23-

    veces, respectivamente (Fig. 5). ConA. actinomycetemcomitans, fotosinttica deS.

    oralisyVeillonellasp. aumento de 9-veces y 13- veces, respectivamente; la

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    fotosintetica de laA. actinomycetemcomitansaumentado 4 (Fig. 6, paneles

    inferiores, y 5 D). Fotosinttica deS. oralis, Veillonellasp.. yP. gingivalisaument

    significativamente (9, 13 y 9-veces, respectivamente) (Fig. 7, paneles superiores y

    Fig. 8A). En cambio, reemplazarS. oralisconA. oris. dio lugar a la menor

    fotosinttica deA. orisyP. gingivalis(Fig. 8B), aunque inicial a la saliva recubiertade sustrato fue excelente (Fig. 7, paneles inferiores). SloVeillonellasp. parece

    crecer a las 18 h (Fig. 8B). Estos datos indican alta especificidad de las

    comunidades de tres especies de crecimiento en saliva.

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    LasVeillonellasy los estreptococos son metablicamente vinculados a travs de

    fermentacin estreptoccica de azcares en cido lctico, la cual es una fuente de

    carbono para la Veillonella sacaroltica. Adems, la relacin espacial entre estas

    especies influyen en la regulacin de genes in vitro, el intercambio de seales

    difusible entre el socio coagregado Veillonella sp. cepa PK 1910 yStreptoccocusgordiniiV288 resultaron en la regulacin positiva de un promotor del gen de la

    amilasa en la cepa estreptoccica. Estos datos sugieren una asociacin

    metablica cerca de las dos especies. En el presente estudio se informa el cido

    lctico que se utiliza en la biopelculaVeillonella sp.-S. oralisy en los biofilms de

    tres especies con F.nucleatum, A. actinomycetemcomitans, oP. gingivalis.

    Mostramos aqu que la utilizacin de cido lctico a partir deVeillonella sp.-S.

    oralisdos especies de biopelculas se produce ms rpido que lo hace con

    Veillonella sp.-A. orisdos biopelculas especies, lo que sugiere que los

    estreptococos se prefieren en socio comunitario sobre actinomices in vivo.

    Las especies con mayor probabilidad de estar presente temprano en vivo son los

    estreptococos de colonizacin inicial y actinomices. La colonizacin microbiana

    del esmalte es un proceso repetible y selectivo que implica una especie de

    sucesin. Mediante el uso de mtodos moleculares para caracterizar

    temporalmente la diversidad microbiana en un modelo de esmalte recuperable,

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    Streptococcus, ActinomycesyVeillonellase encontraron que puede estar entre los

    gneros dominantes dentro de los primeros 4 das de la colonizacin. Los gneros

    FusobacteriumyPorphyromonasestaban presentes en slo un bajo porcentaje de

    secuencias analizadas y por lo tanto se consideran colonizadores medias; del

    gnero Aggregatibacter no se detect y se considera un colonizador tarde. Ennuestra investigacin actual de las comunidades del biofilm de dos especies in

    vitro,Veillonella sp.es un miembro activo cuando se combina con laS. oralis, A.

    oris, P. gingivalis, F. nucleatumy A.actinomycetemcomitans, que ilustra un papel

    central deVeillonellasen el proceso selectivo de la colonizacin. Del mismo modo,

    incluyendo Veillonella sp. como una tercera especie conS. oralisyF. nucleatum,

    conS. oralisy A ..actinomycetemcomitans, o conS. oralisyP. gingivalisresultaron

    en un excelente crecimiento de todas las especies.

    Curiosamente, los biovolumenes deS. oralis,Veillonella sp.,yF. nucleatum

    aumentaron significativamente entre 4 h y 18 h, cosa que demuestra que

    Veillonella sp.obras de teatro y papel integral en la forestacin crecimiento de la

    comunidad robusta entre los congregados conS. oralis.

    Aunque hemos probado slo seis gneros de bacterias orales en estos estudios de

    clulas de flujo, est surgiendo una imagen de compatibilidad comunidad saliva-

    alimentados y especificidad. Anteriormente, se inform de queF. nucleatum(un

    colonizador inicial del esmalte) requiere deA. oris(un colonizador inicial), con el

    fin de crecer en presencia de S. oralis (un colonizador inicial), el apoyo a la

    sucesin conocida de las especies en forma oral biofilms. Adems, se informanteriormente queA. actinomycetemcomitans(un colonizador tarde) crece

    mutualista con Veillonella sp. (un colonizador precoz) oF. nucleatumcuando

    emparejados en un biofilm de dos especies, pero no mostraron un crecimiento

    significativo cuando se combina con estos socios coagregados en un biopelcula

    de tres especies. En nuestro estudio actual sustituimosS. oralisporF. nucleatum,

    con el resultado de queS. oralisy laVeillonella sp. crecieron significativamente

    pero de nuevoA. actinomycetemcomitansno lo hizo, lo que sugiere que el

    crecimiento de una biopelcula de tres especies requiere diferentes interacciones

    entre especies que lo hace el crecimiento en una de dos especies deA.actinomycetemcomitansbiofilm no puede crecer con S. oralis(datos no

    mostrados);P. gingivalis(un colonizador medio) no pueden crecer conS. oralisy

    de P. gingivalis-S. oralis-A.actinomycetemcomitansde tres especies de biofilm,

    ninguno crecer. Aqu nos muestran que en un P. gingivalis-S. oralis-Veillonella sp.

    las tres especies del biofilm las tres especies crecen, sin embargo en un P.

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    gingivalis-A. oris-Veillonella sp.de tres especies de biofilm ninguno crecer de

    manera significante.

    La imagen que surge es que slo ciertas combinaciones de especies son

    compatibles con el crecimiento y que el crecimiento mutualista en biopelculas de

    dos especies no predice el crecimiento de biopelculas en tres especies. Porejemplo, ninguna de las especies crecen en laP. gingivalis-A. oris-Veillonellasp.

    biofilm de tres especies, aunque por parejas, todos crecen mutuamente.

    Claramente, laVeillonella sp. es un participante integral en las comunidades de

    especies mixtas que forman secuencialmente en el desarrollo temprano, la placa

    dental media y tarda. Cuando se mezcla con S. oralisyF. nucleatum, la

    Veillonella sp. exhibe el mayor incremento crecimiento que hemos observado

    hasta la fecha, lo que sugiere que la rpida utilizacin de esta comunidad de tres

    especies del cido lctico.

    Adems, nuestros resultados indican que laVeillonella sp. son mejor parejas con

    S. orisque conA. oriscuandoP. gingivalises el tercer socio. Esta observacin se

    ve corroborada por la utilizacin ms rpida del cido lctico en el de tres

    especiesS. oralis-Veillonella sp.-P. gingivalis. Proponemos que este papel central de

    las Veillonellasen la formacin de especies mltiples de la comunidad,

    especialmente con los estreptococos, es un elemento clave para facilitar la

    sucesin de especies en el desarrollo de la placa dental in vivo.

    CONCLUSIN

    LaVeillonellason cocos gram-negativos anaerobios asociados con salud oral. Para

    su aislamiento, se han reportado diferentes medios de cultivo

    Estos resultados indican que laVeillonellaoral humana en tres especies se

    distribuyen en las superficies orales que tambin estn ocupadas por sus socios

    de coagregadas y por lo tanto proporcionan evidencia fuerte de colonizacin juega

    un papel fundamental en la ecologa bacteriana de la cavidad bucal.

    RELEVANCIA CLINICA

    Como se demuestra en el estudio laVeillonellaaparece en diferentes estadios de la

    Placa Dental sobreviviendo a la placa inicial, madura, subgingival adherida al

    diente, en placa fosas y fisuras, placa proximal.

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