UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE … · 2017-03-02 · ii DERECHOS DE AUTOR Yo Christian...
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE ODONTOLOGÍA CARRERA DE ODONTOLOGÍA EFICACIA INHIBITORIA DE CIPROFLOXACINA ÓTICA Y DOXICICLINA SOBRE CEPAS DE PREVOTELLA INTERMEDIA Proyecto de Investigación presentado como requisito previo a la obtención del Título de Odontólogo Quito, enero 2017 Autor: Singo Salazar Christian Andrés Tutor: Dr. Ángel Eduardo Garrido Cisneros
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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
CARRERA DE ODONTOLOGÍA
EFICACIA INHIBITORIA DE CIPROFLOXACINA
ÓTICA Y DOXICICLINA SOBRE CEPAS DE
PREVOTELLA INTERMEDIA
Proyecto de Investigación presentado como requisito
previo a la obtención del Título de Odontólogo
Quito, enero 2017
Autor: Singo Salazar Christian Andrés
Tutor: Dr. Ángel Eduardo Garrido Cisneros
ii
DERECHOS DE AUTOR
Yo Christian Andrés Singo Salazar en calidad de autor del trabajo de
investigación: Eficacia inhibitoria de ciprofloxacina ótica y doxiciclina
sobre cepas de Prevotella intermedia, autorizo a la Universidad Central
del Ecuador a hacer uso del contenido o parcial que me pertenecen, con fines
estrictamente académicos o de investigación.
Los derechos que como autor me corresponde, con excepción de la presente
autorización, seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo
establecido en los artículos 5, 6, 8; 19 y demás pertinentes de la Ley de
Propiedad Intelectual y su Reglamento.
También, autorizó a la Universidad Central del Ecuador realizar la
digitalización y publicación de este trabajó de investigación en el repositorio
virtual, de conformidad a lo dispuesto en el Art. 144 de la Ley Orgánica de
Educación Superior.
Firma:
________________________________
Christian Andrés Singo Salazar
CC. NO 1720574779
iii
APROBACIÓN DEL TUTOR/A
DEL TRABAJO DE TITULACIÓN
Yo Ángel Eduardo Garrido Cisneros en mi calidad de tutor del trabajo de
titulación, modalidad proyecto de Investigación, elaborado por Christian
Andrés Singo Salazar; cuyo título es: Eficacia inhibitoria de
ciprofloxacina ótica y doxiciclina sobre cepas de Prevotella intermedia,
previo a la obtención de Grado de Odontólogo; considero que el mismo reúne
los requisitos y méritos necesarios en el campo metodológico y
epistemológico, para ser sometido a la evaluación por parte del tribunal
examinador que se designe, por lo que APRUEBO, a fin de que el trabajo
sea habilitado para continuar con el proceso de titulación determinado por la
Universidad Central del Ecuador.
En la ciudad de Quito, a los 7 días del mes de Diciembre de 2016
______________________
Dr. Ángel Eduardo Garrido Cisneros
DOCENTE-TUTOR
C.C. 1707216584
iv
APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL
El tribunal constituido por: Dra. Marina Dona, Dra. Daniela Hidalgo Dr. Y
Dr. Jorge Naranjo.
Luego de receptar la presentación oral del trabajo de titulación previo a la
obtención del título de Odontólogo presentado por el señor Christian
Andrés Singo Salazar.
Con el título:
Eficacia inhibitoria de ciprofloxacina ótica y doxiciclina sobre cepas de
Prevotella intermedia.
Emite el siguiente veredicto: (aprobado/reprobado) Aprobado
Fecha: 24-01-2017
Para constancia de lo actuado firman:
Nombre/Apellido Calificación Firma
Presidente Dra. Marina Dona 19 ……………….
Vocal 1 Dra. Daniela Hidalgo 19 ……………….
Vocal 2 Dr. Jorge Naranjo 20 ……………….
v
DEDICATORIA
Con todo mi cariño y mi amor a mis padres; Patricio Segundo Singo Simbaña
y Blanca Olimpia Salazar Lincango, que me supieron educar con valores de
bien y sentimientos humanísticos, y que gracias a esas enseñanzas, una de
mis metas se cumple para poder forjar mi futuro.
A mis hermanos Ivan y Dennys; que supieron apoyarme en todo momento,
espero que este pequeño paso que doy sea de inspiración para sus próximos
proyectos de vida y para su formación profesional.
A mis amigos/compañeros/hermanos de carrera quienes saben mis caídas y
logros agradezco de todo corazón su compañía y sus buenas intenciones.
Muchas gracias: Sebastián Jácome, Rommel Farinango, Byron Hernández,
Esteban Jaramillo, Santiago Gualotuña, Andrea Vinueza, Diana Gordon,
Marco Vizuete, Miguel Sosa, Freddy Medina, David Villamarin, Eliana
Ricaurte, Karen Reyes, Lizeth Yerovi, Yessenia Lozada, Mishell Viteri.
Al Dr. Eduardo Ángel Garrido Cisneros, que como tutor, me ha orientado y
apoyado de forma amable, responsable y de forma científica el trabajo de
tesis, superando mis expectativas de estudiante y queriéndolo no solo como
tutor si no como un amigo de confianza. Muchas Gracias.
vi
AGRADECIMIENTO
Agradezco a todas las personas que forman parte del Laboratorio de
Microbiología perteneciente a la facultad de Veterinaria de la Universidad
central del Ecuador, especialmente al Dr. Carlos Gómez quien con su
conocimiento y pasión a su profesión ha logrado enseñarme un poco de su
gran conocimiento .
A los pasantes del laboratorio que me ayudaron en la parte práctica
asesorándome y aclarando cualquier duda, les estoy eternamente agradecido.
vii
ÍNDICE DE CONTENIDO
DEDICATORIA ............................................................................................................................... v
AGRADECIMIENTO ...................................................................................................................... vi
ÍNDICE DE CONTENIDO............................................................................................................... vii
ÍNDICE DE TABLAS ....................................................................................................................... xi
ÍNDICE DE FIGURAS ................................................................................................................... xii
ÍNDICE DE ANEXOS .................................................................................................................... xiii
RESUMEN .................................................................................................................................. xiv
ABSTRACT ................................................................................................................................... xv
INTRODUCCIÓN ......................................................................................................................... xvi
CAPÍTULO I ..........................................................................................................................1
EL PROBLEMA ......................................................................................................................1
1.1 Planteamiento del problema ..................................................................................................1
1.2 Formulación de la pregunta de investigación .........................................................................2
1.3 Objetivos de la investigación ..................................................................................................3
1.3.1 Objetivo general ..............................................................................................................3
1.3.2 Objetivos específicos .......................................................................................................3
1.4 Justificación ............................................................................................................................4
1.5 Hipótesis .................................................................................................................................5
CAPÍTULO II .........................................................................................................................6
MARCO TEÓRICO .................................................................................................................6
2.1 Enfermedad periodontal ........................................................................................................6
2.1.1 Definición ........................................................................................................................6
2.1.2 Periodontitis Crónica .......................................................................................................6
2.2 Etiopatogenia .........................................................................................................................7
2.3 Biofilm ....................................................................................................................................8
2.3.1 Definición .......................................................................................................................8
2.3.2 El biofilm en infecciones ..................................................................................................8
2.3.3 Colonización exitosa del biofilm ......................................................................................9
2.4 Propiedades del biofilm..........................................................................................................9
2.4.1 Estructura ........................................................................................................................9
2.4.2 Exopolisacáridos el eje de la biopelícula........................................................................10
2.4.3 Heterogeneidad fisiológica dentro de los biofilms ........................................................10
2.4.4 Desinserción de las células de los biofilms ....................................................................10
viii
2.4.5 Quorum sensing ............................................................................................................11
2.5 Formación del biofilm ..........................................................................................................11
2.5.1 Adhesión .......................................................................................................................11
2.5.2 Coagregación .................................................................................................................12
2.6 Biofilm de Placa la bacteriana subgingival ............................................................................13
2.7 Prevotella intermedia ...........................................................................................................14
2.7.1 Genero Prevotella .........................................................................................................14
2.7.2 La especie Prevotella intermedia ..................................................................................14
2.7.3 Patogenicidad ................................................................................................................15
2.7.3.1 La adhesión y la fijación ..........................................................................................15
2.7.3.2 La proteólisis y bacteriocina ...................................................................................15
2.7.3.3 La absorción de hierro ............................................................................................15
2.7.4 Cultivo ...........................................................................................................................16
2.8 Antimicrobianos ...................................................................................................................16
2.8.1 Definición ......................................................................................................................16
2.8.2 Uso de los antimicrobianos en el tratamiento de periodoncia ......................................17
2.8.3 Clasificación de los antimicrobianos usados en periodoncia .........................................17
2.8.3.1 Antimicrobianos sistémicos ....................................................................................17
2.8.3.2 Antimicrobianos locales .........................................................................................18
2.9 Antimicrobianos locales empleados en el estudio ...............................................................19
2.9.1 Doxiciclina .....................................................................................................................19
2.9.1.1 Mecanismo de acción .............................................................................................19
2.9.2 Ciprofloxacina ................................................................................................................19
2.9.2.1 Mecanismo de acción .............................................................................................20
CAPÍTULO III ...................................................................................................................... 21
Metodología ...................................................................................................................... 21
3.1 Tipo de investigación ............................................................................................................21
3.1.1 Experimental .................................................................................................................21
3.1.2 Cuantitativo ...................................................................................................................21
3.1.3 Comparativo: .................................................................................................................21
3.2 Población y muestra .............................................................................................................21
3.2.1 Criterios de inclusión .....................................................................................................21
3.3 Variables ...............................................................................................................................22
3.3.1 Conceptualización de las variables ................................................................................22
3.3.1.1 Variables dependientes ..........................................................................................22
3.3.1.2 Variables independientes .......................................................................................22
ix
3.3.2 Operacionalización de las variables ...............................................................................23
3.4 Materiales y métodos...........................................................................................................23
3.4.1 Compra de la cepa .........................................................................................................23
3.4.2 Almacenamiento de la cepa ..........................................................................................23
3.4.3 Activación de la cepa Prevotella Intermedia ATCC25611 ..............................................24
3.4.3.1 Elección del medio para activación. .......................................................................24
3.4.3.2 Preparación del Agar Chocolate .............................................................................24
3.4.3.3 Activación de la cepa ..............................................................................................24
3.4.3.4 Incubación de la cepa .............................................................................................24
3.4.3.5 Control de la cepa ...................................................................................................24
3.4.4.1 Preparación en el tubo de criogenización ..............................................................24
3.4.4.2 Pase de la sepa a los tubos de glicerol ....................................................................25
3.4.4.3 Criogenización ........................................................................................................25
3.4.5 Experimentación .....................................................................................................25
3.4.5.2 Fórmula de Mac Farland .............................................................................................25
3.4.5.3 Antibiograma ..........................................................................................................25
3.4.5.3 Medición.................................................................................................................26
3.5 Recursos ...............................................................................................................................26
3.5.1 Infraestructura ..............................................................................................................26
3.5.2 Recursos materiales ......................................................................................................26
3.6 Procedimientos y técnicas ....................................................................................................27
3.7 Aspectos éticos .....................................................................................................................27
3.7.1 Beneficencia ..................................................................................................................27
3.7.2 Bondad ética..................................................................................................................27
3.7.3 Confidencialidad ............................................................................................................28
3.7.4 Riesgos potenciales del estudio .....................................................................................28
3.7.5 Beneficios potenciales del estudio ................................................................................28
3.7.5.1 Directos: .................................................................................................................28
3.7.5.2 Indirectos:...............................................................................................................28
CAPÍTULO IV ...................................................................................................................... 29
RESULTADOS ..................................................................................................................... 29
4.1 Toma y manejo de datos ......................................................................................................29
4.2 Análisis de los resultados .....................................................................................................31
CAPÍTULO V ....................................................................................................................... 35
5.1 Discusión ..............................................................................................................................35
5.2 Conclusiones ........................................................................................................................37
x
5.3 Recomendaciones ................................................................................................................38
BIBLIOGRAFÍA .............................................................................................................. 39
xi
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 1 Operacionalización de variables ....................................................................... 23
Tabla 2 Medida de los halos obtenidos sobre la cepa Prevotella Intermedia
ATCC25611 ............................................................................................................ 29
Tabla 3 Cuadro de equivalencias de sensibilidad de los medicamentos ....................... 30
Tabla 4 Estadísticos descriptivos para el halo de inhibición de Ciprofloxacina ótica y
Doxiciclina sobre cepas de Prevotella Intermedia ATCC25611 ............................. 31
Tabla 5 Prueba de normalidad ....................................................................................... 32
Tabla 6 Resultados de la prueba U Mann Whitney ....................................................... 33
Tabla 7 Comparación del valor medio del halo de inhibición y límite de sensibilidad
por grupo ................................................................................................................. 33
xii
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1 Estabilidad de los antimicrobianos ................................................................. 30
Figura 2 Diagrama de caja y bigotes para el comportamiento del halo de inhibición de
Ciprofloxacina ótica y Doxiciclina sobre cepas de Prevotella Intermedia
ATCC25611 ............................................................................................................ 32
Figura 3 Comparación del valor medio del halo de inhibición y límite de sensibilidad
por grupo ................................................................................................................. 34
Figura 4 Diagrama de la asociación entre especies subgingivales, adaptado a la
clasificación de Socransky ...................................................................................... 43
Figura 5 Equipo Biobase utilizado para la criogenización de la cepa a 80°C ............... 43
Figura 6 Pase de la cepa y vista después de una semana. .............................................. 44
Figura 7 Distribución del Medio Agar Mueller Hinton en las cajas pretil. ................... 44
Figura 8 Fórmula de Mac Farland ................................................................................. 45
Figura 9 Siembra de la Prevotella intermedia en Agar Mueller Hintom ....................... 45
Figura 10 Micropipetas calibradas a 50ul para ciprofloxacina y 250ul para suero
fisiológico para obtención de ciprofloxacina ótica a concentración de 5ug/10ul ... 46
Figura 11 Ciprofloxacina ótica 3mg/ml y preparación a la concentración de 5ug/10ul.
................................................................................................................................. 46
Figura 12 Aplicación de la ciprofloxacina de 5ug/10ul y suero fisiológico 10ul sobres
discos en blanco. ..................................................................................................... 47
Figura 13 Discos secados y listos para colocación en Agar Mueller Hintom ............... 47
Figura 14 Colocación de discos sobre Agar Mueller Hinton con siembra de Prevotella
Intermedia................................................................................................................ 48
Figura 15 Incubadora utilizada para el tiempo de 24h de espera para lectura del
antibiograma y jarra de anaerobiosis. ..................................................................... 48
Figura 16 Agar Mueller Hinton con siembra de Prevotella Intermedia después de las
24h. .......................................................................................................................... 49
Figura 17 Medición de los halos con la regla Antibiotic Zone Scale. ........................... 49
xiii
ÍNDICE DE ANEXOS
Anexo 1 Compra de cepa ............................................................................................... 50
Anexo 2 Certificado de la experimentación realizada en la Facultad de Veterinaria de la
UCE ......................................................................................................................... 51
Anexo 3 Certificado de capacitación.............................................................................. 52
Anexo 4 Renuncia del estadístico a los derechos de autor y propiedad intelectual ....... 53
Anexo 5 Manual de eliminación de desechos ................................................................ 54
Anexo 6 Manual de Bioseguridad .................................................................................. 57
Anexo 7 Certificado del subcomité de ética ................................................................... 58
Anexo 8 URKUND ........................................................................................................ 58
xiv
TEMA: Eficacia inhibitoria de ciprofloxacina ótica y doxiciclina sobre
cepas de Prevotella intermedia.
Autor: Christian Andrés Singo Salazar
Tutor: Ángel Eduardo Garrido Cisneros
RESUMEN
La enfermedad periodontal, una patología de carácter infeccioso afecta los
tejidos de soporte de los dientes, con alta prevalencia a nivel mundial. El
biofilm es el agente etiológico, en él, actúan un consorcio de bacterias entre
las que se ha identificado a la Prevotella intermedia (Pi), bacteroide que
pertenece al complejo naranja y sirve como nexo para la progresión de la
enfermedad periodontal. El tratamiento principal propuesto es el raspado y
alisado radicular, pero como terapia periodontal no suele ser suficiente en
algunos sitios y existen recidivas; se han sugerido terapias complementarias
para mejorar su eficacia, entre estas, utilizar antimicrobianos locales que
presentan buenos resultados clínicos. Determinar la eficacia inhibitoria de la
ciprofloxacina ótica y de la doxiciclina sobre las cepas de Prevotella
Intermedia ATCC25611.Estudio comparativo, donde se realizaron 10
muestras con disco de ciprofloxacina ótica (5ug/10ul), con disco de
doxiciclina (5ug), colocados en agar Mueller Hinton con cultivo de Pi y
posterior lectura de halos a las 24 horas. Inhibición del crecimiento de la
Prevotella Intermedia ATCC 25611, Ciprofloxacina Ótica, Doxicilina. En
todas las muestras se encontró inhibición del crecimiento bacteriano. Se
obtuvieron medias de los halos producidos por ciprofloxacina ótica (35mm)
y doxiciclina (37.5mm) las cuales estuvieron lejos del mínimo de
sensibilidad: 21 para la ciprofloxacina y 16 para la doxicilina. Los datos
obtenidos indican que ciprofloxacina tiene la misma eficacia inhibitoria que
la doxicilina sobre el crecimiento de la Prevotella Intermedia ATCC25611.
Palabras clave: CIPROFLOXACINA, DOXICICLINA, EFICACIA
INHIBITORIA, PREVOTELLA INTERMEDIA.
xv
Theme: Eficacia inhibitoria de ciprofloxacina ótica y doxiciclina sobre
cepas de Prevotella intermedia.
Author: Christian Andrés Singo Salazar
Tutor: Ángel Eduardo Garrido Cisneros
ABSTRACT
Periodontal decease is pathology with an infectious character which affects
tissues that support teeth, with a high prevalence worldwide. The biofilm is
the etiologic agent, and a series of bacteria act within it, including the one
identified as Intermediate Prevotella (Pi), bacteroid that belong to the orange
complex and works as a link for the progression of the periodontal decease.
The main treatment proposed is scaling and root planning, but as periodontal
therapy is generally not enough is some areas and relapses often occur. The
additional complementary therapies have been suggested to improve
efficacy, including the use of local antimicrobial agents that have shown
good clinical results. Determine the inhibitory efficacy of aural ciprofloxacin
and of doxycycline on the strains of Intermediate Prevotella ATCC25611.
Comparative study based on 10 samples of aural ciprofloxacin (5ug/10ul)
and doxycycline (5ug), set on agar Mueller Hinton with Pi and subsequent
reading of halos 24 hours later. Growth inhibition of Intermediate Prevotella
ATCC25611, aural ciprofloxacin, doxycycline,. In all samples, the was
bacterial growth inhibition. On average, halos produced by aural
ciprofloxacin (35mm) and for doxycycline (37.5mm) were far from
minimum of sensitivity: 21 for ciprofloxacin and 16 for doxycycline. The
data obtained indicate that ciprofloxacin has the same inhibitory efficacy that
doxycycline on the growth of Intermediate Prevotella ATCC25611.
Keywords: CIPROFLOXACIN, DOXYCYCLINE, INHIBITORY
EFFICACY, INTERMEDIATE PREVOTELLA
xvi
INTRODUCCIÓN
La periodontitis es una de las enfermedades crónicas más comunes que afecta a tejidos
de soporte del diente (ligamento periodontal, hueso, cemento, o tejidos blandos) con una
alta prevalencia en adultos. Su etiología es bacteriana, en su mayoría por bacterias
anaerobias, gram negativas entre las que se encuentra la Prevotella intermedia que crece
prevalentemente en sitios subgingivales (1). La evolución de la periodontitis puede
conducir a la pérdida progresiva de la unión del tejido conjuntivo y hueso alveolar, si no
se trata adecuadamente (2).
Socransky en 1998 clasificó a los microorganismos según el papel que desempeñan en la
enfermedad periodontal y los ubicó didácticamente en complejos de colores (3):
Complejo amarillo: especies del género Streptococcus como Streptococcus sanguinis,
Streptococcus mitis, Streptococcus oralis, Streptococcus gordonii y Streptococcus
intermedius. Complejo verde: Capnocytophaga gingivalis, Capnocytophaga ochracea,
Capnocytophaga sputigena, Campylobacter concisus, Eikenella corrodens y
Actinobacillus actinomycetemcomitans serotipo A. Complejo morado: Veillonella
párvula y Actinomyces odontolyticus. Complejo naranja: Fusobacterium sp. y
subespecies, Peptostreptococcus micros, Prevotella nigrescens, Prevotella intermedia,
Campylobacter rectus, Campylobacter gracilis, Campylobacter showae, Eubacterium
nodatum y Streptococcus constellatus. Complejo Rojo: Tannerella forsythia (antes
llamada Bacteroides forsythus), Porphyromonas gingivalis y Treponema denticola (4).
Tanto el complejo naranja como el rojo son considerados como agentes etiológicos más
importantes de la enfermedad periodontal (5).
La Prevotella intermedia, posee propiedades virulentas semejantes a la Phorphyromonas
gingivales, se encuentra ubicada en el complejo naranja que sirve como nexo o puente
para la colonización del complejo rojo (Tannerella forsythia, Porphyromonas Gingivalis
y Treponema) que son de colonización tardía (5).
Se han propuesto un tratamiento quirúrgico y no quirúrgico de la enfermedad, este último
consiste en controles de la placa bacteriana motivación del paciente, control de placa y el
usos de antimicrobianos (6).
Los antimicrobianos han sido utilizados como terapia complementaria sistémica y local,
hay múltiples opciones de antimicrobianos locales, tales como metronidazol,
clorhexidina, minociclina, doxiciclina y tetraciclina. Los medicamentos de
administración local se utilizan en bolsas periodontales y pueden inhibir o eliminar los
microorganismos patógenos periodontales así como modular la respuesta inflamatoria de
los tejidos (2).
El tratamiento mecánico no quirúrgico (raspado y alisado radicular) es la piedra angular
de la terapia periodontal y el principal método recomendado para controlar las infecciones
periodontales (6), tiene como objetivo restaurar la compatibilidad biológica de las
superficies radiculares periodontalmente enfermas para que, posteriormente, pueda
ocurrir las inserciones de las tejidos periodontales a la superficie tratada, sin embargo
existen casos donde el tratamiento mecánico no es suficiente y existe recidiva (7). Esta es
xvii
la razón que se busque el desarrollo de tratamientos complementarios al mecánico, debido
a la recidiva en ciertos pacientes donde este no ha sido suficiente, entre ellos tenemos los
antimicrobianos locales (2).
En el presente estudio se analiza la eficacia inhibitoria dos antimicrobianos locales: la
doxiciclina, una tetraciclina sintética (8) bastante utilizada en periodoncia vs la
ciprofloxacina, un antimicrobiano activo contra bacilos gramnegativos, incluyendo todos
los facultativos y algunos patógenos periodontales putativos anaeróbicas y con poco uso
en periodoncia (9)
1
CAPÍTULO I
EL PROBLEMA
1.1 Planteamiento del problema
Se indica que la eliminación o disminución adecuada de las bacterias
periodontopáticas en la microbiota subgingival es esencial para la curación
periodontal (10). El desbridamiento radicular mecánico es un requisito para controlar
la infección periodontal, la mejoría clínica posterior al desbridamiento está
directamente relacionada con el grado en el cual los microbios patógenos
subgingivales han sido eliminados (10).
Se llega a la conclusión que el desbridamiento mecánico subgingival convencional
no suele erradicar todas las bacterias periodontopáticas del ecosistema subgingival
(10). Con el avance de las investigaciones han aparecido métodos nuevos y se han
modificados los protocolos de terapéuticos (6). Entre las opciones de tratamiento se
plantea el uso de láser que dispersa la energía y penetra durante la irradiación en las
bolsas periodontales, atenuando con una baja intensidad de energía para estimular a
las células de los de tejidos adyacentes dando como resultado una reducción de las
condiciones inflamatorias, una mayor proliferación celular, un flujo aumentado de
linfa y por tanto mejora la inserción del tejido periodontal (7).
Una revisión sistémica indica el efecto de los antimicrobianos sistémicos y locales
como opciones adjuntas al raspado y alisado radicular Los antimicrobianos
sistémicos llegan ampliamente a los tejidos intraorales por vía sérica, pueden ser más
prácticos que la terapia antimicrobiana local para el paciente con múltiples sitios
periodontales afectados además de afectar a patógenos periodontales que colonizan
la mucosa oral o están presentes en la saliva y el riesgo de recolonización subgingival
de agentes patógenos se ve reducido (10).
El tratamiento con antimicrobianos locales tiene como beneficio una mayor
concentración del agente en los sitios subgingivales, en comparación con un régimen
de administración sistémica del fármaco. La desventaja de la terapia antimicrobiana
de administración local es la dificultad de colocar concentraciones terapéuticas del
agente antimicrobiano en las partes más profundas de la bolsa periodontal o en las
lesiones de la furca por lo que la eficacia depende también de que el tiempo de
contacto entre el agente antimicrobiano y los microorganismos sea suficiente (10) .
Se sugiere que la liberación local de medicamentos como complemento del
tratamiento convencional se debe reservar a sitios que no responde o pacientes con
enfermedad recurrente que necesitan un enfoque alternativo del tratamiento, muy
2
pocos estudios han comparado la eficacia de diferentes sistemas de liberación local,
por lo que es difícil concluir que un sistema es superior a otro (10).
En el presente estudio se plantea a la Ciprofloxacina ótica, un antibiótico utilizado
para los oídos como una alternativa de antibiótico local en el tratamiento periodontal
en comparación con la Doxcicilina un antimicrobiano muy utilizado.
1.2 Formulación de la pregunta de investigación
¿Qué antimicrobiano, entre la ciprofloxacina ótica y la doxicilina producirá un mayor
efecto inhibitorio sobre la cepa Prevotella Intermedia ATCC 25611?
3
1.3 Objetivos de la investigación
1.3.1 Objetivo general
Determinar la eficacia inhibitoria de la ciprofloxacina ótica y de la doxicilina
sobre las cepas de Prevotella Intermedia.
1.3.2 Objetivos específicos
Determinar el efecto inhibitorio de la ciprofloxacina ótica en cepas de
Prevotella Intermedia ATCC 25611 mediante el halo de inhibición.
Determinar el efecto inhibitorio de doxiciclina sobre cepas de Prevotella
Intermedia ATCC 25611 mediante el halo de inhibición.
Comparar la eficacia de la ciprofloxacina ótica, doxicilina y del control negativo
sobre cepas de Prevotella Intermedia ATCC25611, midiendo el halo de
inhibición producida por cada una.
4
1.4 Justificación
Hay diferentes opciones de antimicrobianos como complemento de la terapia no
quirúrgica, que pueden ser liberados localmente dentro de la mucosa como
metronidazol, clorhexidina, minociclina, doxiciclina y tetraciclina (2).
Estas drogas usadas en bolsas periodontales pueden inhibir o eliminar los
microorganismos periodontopatógenos y modular la respuesta inflamatoria de los
tejidos (2).
En un estudio sistemático señalan que las fibras de tetraciclina, doxiciclina y
minociclina alcanzaron un benefició significante (2).
En una revisión sistemática de los efectos de antimicrobianos como terapia adjunta
al desbridamiento subgingival, la evidencia científica soporta el uso de
antimicrobianos en sitios periodontales profundos o recurrentes (11) .
El uso de sistemas de liberación de drogas, dentro de las bolsas obteniendo un
mejoramiento clínico significativo como terapia adjunta del raspado y alisado
radicular, pero determina que deben realizarse más estudios que indiquen más
específicamente la situación en la que la liberación de drogas sea más beneficiosa
(11).
5
1.5 Hipótesis
H0: La ciprofloxacina ótica presenta igual o mayor halo de inhibición
comparada a la producida por la doxiciclina.
H1: La ciprofloxacina ótica tendrá un menor halo de inhibición comparada
a la producida por la doxiciclina.
6
CAPÍTULO II
MARCO TEÓRICO
2.1 Enfermedad periodontal
2.1.1 Definición
La enfermad periodontal se puede definir como cualquier alteración de los tejidos
que rodean al diente (ligamento periodontal, hueso, cemento, o tejidos blandos) en
diferentes grados (12).
La gingivitis es el grado más leve de la enfermedad periodontal, corresponde a una
inflamación de los tejidos blandos del diente principalmente de la encía, luego se
encuentra el término periodontitis donde ya existe destrucción progresiva de
estructuras periodontales como el ligamento periodontal y el tejido conectivo
gingival y hueso alveolar (12).
La enfermedad periodontal se la considera un problema de salud pública en diversas
partes del mundo y llega a ser una de las principales causas de pérdida de dientes
(13).
Por otro lado, la enfermedad periodontal está asociada a diferentes manifestaciones
de enfermedades sistémicas y es considerada un factor de riesgo para la iniciación o
la progresión de otras enfermedades (13).
La misma puede agravarse debido a factores de riego como: fumar tabaco,
enfermedades sistémicas, medicamentos como esteroides, antiepilépticos,
medicamentos durante la terapia de cáncer, mala colocación de puentes dentales,
apiñamiento dental, falta de dientes, embarazo y enfermedades que provoque una
baja respuesta inmunitaria como VIH, diabetes y trastornos de neutrófilos (13).
2.1.2 Periodontitis Crónica
La periodontitis crónica es una forma de periodontitis de progresión lenta y de
periodos de exacerbación aguda, que inicia como una gingivitis; está progresión es
mantenida por la presencia del biofilm, la susceptibilidad intrínseca de los
mecanismos de defensa del huésped, que llegan a destruir tejidos de soporte (5).
Los principales síntomas de la enfermedad periodontal son la pérdida ósea y de
inserción pero esta no afecta a todos los dientes por igual si no que tiene predilección
por sitios y sujetos (5).
7
Resulta interesante que cuando existen afectaciones en el nivel de inserción en
transcursos de tiempo solo algunos sitios experimentan realmente una destrucción
periodontal amplia (5) (11).
Entonces podemos determinar 3 puntos importantes sobre la Periodontitis crónica.
Está relacionada con las características y del sujeto y que solo algunos sujetos
experimentan destrucción avanzada
Afectación de dientes específicos
La progresión de la enfermedad es continua con breves episodios de exacerbación
localizada (5).
Características clínicas de la periodontitis
Inflamación gingival
Sangrado durante el sondeo
Formación de bolsa periodontal
Perdida de inserción y perdida de hueso alveolar (5).
2.2 Etiopatogenia
La presencia de bacterias dentro de la cavidad bucal llega a colonizar los tejidos
blandos, incluyendo encías, mejillas, lengua y los dientes tanto por debajo como por
encima del margen gingival (14).
Se estima que 300 y 400 especies diferentes de microrganismos alberga la cavidad
bucal y que generalmente estos viven en armonía con el huésped; sin embargo en
ciertas circunstancias de un grupo selecto de organismos tiene el potencial para causar
la enfermedad periodontal (14).
Se han publicado muchas investigaciones acerca de la etiología de la enfermedad
periodontal, y la conclusión aceptada es que en la enfermedad actúan un consorcio
de bacterias (biofilm) y no un solo organismo (15) (11).
8
2.3 Biofilm
2.3.1 Definición
El Biofilm se ha definido como una comunidad microbiana compleja que se
encuentra en las superficies del diente, incrustado en una matriz de polímero de
origen bacteriano que ofrece ventajas a su crecimiento (16).
La principal ventaja es la protección que ofrece el Biofilm a las especies
colonizadoras frente a mecanismos competitivos procedentes de factores ambientales
y de los mecanismos de defensa del huésped (17) así también contra sustancias
tóxicas (químicos letales, antimicrobianos) además facilita la ingestión de alimentos,
la alimentación cruzada (una especie provee de nutrientes a otra), eliminación de
productos extracelulares, interacciones metabólicas entre especies y promoción de
intercambio genético (5).
Todas estas ventajas indican que el Biofilm es una organización compleja donde es
fundamental conocer su formación y las estructuras que lo hacen el agente etiológico
de la enfermedad periodontal (18).
2.3.2 El biofilm en infecciones
En las enfermedades infecciosas existen interacciones población-medio ambiente
que implican, un huésped más un microorganismo con la capacidad para la
colonización y la patogénesis. El huésped debe ser colonizable receptivo a la
invasión por el agente de enfermedad en específico. No todos los animales superiores
son colonizables por todas las bacterias patógenas, hongos o virus (19).
Existen tres tipos de barreras que hacen que exista falta de receptividad:
Las barreras del huésped no receptivo.
Los factores asociados con la resistencia del huésped receptivo antes de su
primer contacto.
Los obstáculos para el desarrollo o la actividad bacteriana que aparecen como
consecuencia de la infección (19).
El momento en que existe colonización , existe una modificación del hábitat
resultante de la presencia de una o más poblaciones bacterianas, cambios que puede
afectar el tamaño, la actividad o la supervivencia de la población invasora o uno o
más segmentos de la comunidad, por ejemplo la respuesta del huésped produciendo
anticuerpos (19).
9
2.3.3 Colonización exitosa del biofilm
El biofilm tiene que pasar por varios requisitos para su colonización como:
Presencia en el lugar colonizable en el momento correcto
Posesión de una capacidad de supervivencia que permita una viabilidad prolongada en circunstancias nocivas
Capacidad para obtener todos los nutrientes del ecosistema.
Capacidad para tolerar todos los factores no microbiológicos ecológicamente significativos del medio ambiente, p. PH, niveles de O2, temperatura, presión
osmótica, potencial de reducción de la oxidación.
La posesión de mecanismos para superar o hacer frente a la resistencia ambiental atribuible a huéspedes viables.
Capacidad para superar o hacer frente a la resistencia ambiental atribuible a especies que ya están en el hábitat.
Capacidad para crecer tan rápidamente como los vecinos
Capacidad para adherirse a superficies apropiadas (19).
2.4 Propiedades del biofilm
2.4.1 Estructura
Están constituidas en su mayoría por una matriz estructurada o glicocáliz (75-80%)
y las microcolonias (15-20%) que pueden tener una sola especie simple pero más
frecuente compuestas de varias especies diferentes (17).
Presentan un sistema de burbujas o canales de agua que permite el paso de nutrientes
y otros agentes que actúan como un sistema circulatorio ¨primitivo¨ entre las
microcolonias. La difusión de nutrientes que pasan hacia las colonias adheridas,
utilizan los canales de agua, en lugar de hacerlo desde la matriz (17).
10
2.4.2 Exopolisacáridos el eje de la biopelícula
El biofilm está compuesto en su mayoría por el material ¨seco¨ (mezcla de
expolisacáridos, proteínas, sales y material celular) y los expolisacáridos constituyen
el 50-95% (17).
Estos exopolisacáridos pueden ser producidos por las mismas bacterias y
dependiendo de su estado fisiológico y la presencia sustratos específicos estos pueden
variar (pH, carga iónica, concentraciones) alterando la estructura y causando un
cambio en la red de gel tridimensional de polisacáridos; los mismos que pueden ser
degradados y reutilizados por las bacterias dentro del biofilm (17) (3).
Los expolisacáridos cumplen varias funciones dentro del biofilm una de ellas es la
protección, evitando su desecación y el ataque de agentes dañinos, como también
podrían actuar como un amortiguador y ayudar a retener enzimas extracelulares
(sustratos), aumentando la utilización de los mismos por parte de las células
bacterianas (17).
2.4.3 Heterogeneidad fisiológica dentro de los biofilms
Dentro de un biofilm se pueden encontrar estados fisiológicos extremadamente
diferentes que pueden ser producto de una misma especie, creando una gama casi
infinita de microhábitats óptimos para el crecimiento y permitiendo mecanismos de
defensas contra sustancias toxicas (antibióticos, sustancias químicas, respuesta del
huésped) (17) (9).
En el uso de antibióticos solo llegan a actuar en la forma activa de las bacterias que
se encuentran en la capa externa del biofilm, mientras que las células del interior
permanecerán intactas, pero no solo este mecanismo de capas puede servir de
protección. Las células bacterianas pueden producir sustancias que sirven como
líneas de defensa contra los antibióticos como son beta-lactamasas, catalasas,
peróxido-dismutasas que sirven de defensa contra los iones oxidantes liberados por
los fagocitos (17) (3).
Las células bacterianas no solo producen enzimas protectoras también producen
enzimas que atacan a los tejidos como las elastasas celulasas (17).
2.4.4 Desinserción de las células de los biofilms
Es fundamental que se presente la desinserción de las bacterias, esto permitirá la
colonización de nuevas bacterias (17) y por lo tanto el avance de la enfermedad
periodontal (18).
11
Esta separación también sirve como medio de defensa donde las células bacterianas
separadas pueden protegerse de los sistemas de defensa del huésped, de forma similar
a la protección proporcionada por el biofilm (17).
La separación puede ser de una célula simple (erosión) donde esta es de forma
previsible continua y una separación esporádica de grandes grupos de células (muda)
donde grandes partes del biofilm se desprenden de forma previsible (17) (3).
2.4.5 Quorum sensing
La comunicación intercelular es esencial para que el biofilm pueda cumplir con
ciertas funciones. El Quorum sensing regula la expresión de genes específicos
acumulando compuestos de señalización que permiten esta comunicación
intercelular, pero no solo eso, además provee de propiedades distintivas a los biofilms
(17) (18).
Por ejemplo la resistencia a antibióticos, la capacidad de influir en el crecimiento de
especies bacterianas estimulándolas o inhibiendo el crecimiento de especies
competidoras, todo esto gracias a la expresión de genes específicos (17) (18).
2.5 Formación del biofilm
La formación del biofilm es una ruptura del ecosistema normal que se encuentra en
la cavidad oral, además de ser una interacción con el huésped, para lo cual se requiere
ciertos factores y mecanismos que permitan la formación y la expresión de su
patogénesis (19).
2.5.1 Adhesión
En la boca las bacterias tiene a su disposición una amplia variedad de superficies para
su adherencia, sin embargo la característica esencial para el crecimiento y desarrollo
de las microcolonias que componen el biofilm es que esta debe ser en una superficie
sólida (diente) (17).
Las estructuras por el cual llegan a colonizar una superficie son varios; las fimbrias
(pili) son apéndices proteináceos, muy flexibles que miden de 2-8nm y que pueden
transportar adhesinas, estas pueden ser de tipo 1 que se asocian a la adhesión de
proteínas ricas en prolina acídica salival y a la estaterina depositada dentro del biofilm
salival, las fimbrias de tipo 2 se las asocia con la adhesión a los receptores
glucosídicos en las células epiteliales, a los leucocitos polimorfonucleares y a los
estreptococos orales (17).
12
Otro mecanismo de adherencia son las fibrillas que son más cortas que las fimbrias y
pueden distribuirse de forma densa o escasa en la superficie de la célula, entre las
especies que utilizan este mecanismo encontramos a la Prevotella Intermedia (17).
2.5.2 Coagregación
Cuando se habla de coagregación se está hablando de asociación de las
microcolonias que forman al biofilm, esta no es de forma aleatoria y para ello
Socrasnky realizó un estudio donde se analiza muestras de placa dentobacteriana a
través de la técnica ¨checkboard¨ que permite la identificación simultánea de
múltiples especies bacterianas en mezclas complejas de microorganismos y los
clasifica en complejos (4):
Complejo amarillo:
Especies del género Streptococcus como Streptococcus sanguinis, Streptococcus
mitis, Streptococcus oralis, Streptococcus gordonii y Streptococcus intermedius.
Complejo verde:
Capnocytophaga gingivalis, Capnocytophaga ochracea, Capnocytophaga sputigena,
Campylobacter concisus, Eikenella corrodens y Actinobacillus
actinomycetemcomitans serotipo a.
Complejo morado:
Veillonella párvula y Actinomyces odontolyticus.
Complejo naranja:
Fusobacterium sp. y subespecies, Peptostreptococcus micros, Prevotella nigrescens,
Prevotella intermedia, Campylobacter rectus, Campylobacter gracilis,
Campylobacter showae, Eubacterium nodatum y Streptococcus constellatus.
Complejo Rojo:
Tannerella forsythia (antes llamada Bacteroides forsythus), Porphyromonas
gingivalis y Treponema denticola.
Especies no agrupadas:
A. actinomycetemcomitans serotipo b, Selenomonas noxia y Actinomyces viscosus
(4).
13
Una vez clasificadas las microcolonias, se debe entender como estas interactúan entre
sí; la colonización inicial en la superficie del diente limpio, es primero acondicionada
por la saliva y el líquido crevicular, donde a continuación actúan los complejos
amarillo, verde y púrpura formando así dentro de las primeras 4 horas una placa
temprana, donde el 60-90% lo conforma el complejo amarillo (19).
La película acondicionada para la colonización proporciona varios receptores para la
unión de bacterias orales, como las proteínas ricas en prolina acídica, fimbrias tipo 1
para el A. Naeslundii, estaterina para fusobacterias y la especies Veilonella a través
de gluconatos catalizados por glucosil-tranferaras en presencia de sacarosa (17).
La especie Streptococcus tiene un alto grado de coagregación, que contribuye a la
colonización temprana y a la formación de biofilms más complejo, uniendo a otras
especies o remplazándolos (17) (18).
La colonización de especies gramnegativas se vuelve representativa en una fase
posterior donde el biofilm dental es dominado por Fusobacterium nucleatum, esta
especie tiene gran capacidad para congregarse con múltiples especies (complejo
naranja y rojo), así también para unirse a la película salival (17) (18).
2.6 Biofilm de Placa la bacteriana subgingival
La placa subgingival se puede dividir en tres clases: adherida, no adherida y asociada
al epitelio. La placa subgingival adherida está asociada al diente y se compone
principalmente de bacilos grampositivos y cocos (15).
Estas poblaciones pueden sobrevivir en ambientes de nutrición limitada y en
condiciones estrictamente anaerobias, y son relativamente estables en la placa
subgingival además están relacionadas con la deposición de cálculo gingival y con la
caries radicular (15).
Los bacilos móviles y los gramnegativos se encuentran en mayor porcentaje en la
placa libre, no adherida, que se extiende hasta el límite de la placa apical. Esta parece
ser el área más bioactiva, porque desde los tejidos periodontales se excreta gran
cantidad de fluido inflamatorio gingival crevicular; los miembro dominantes de la
placa no adherida son la P. gingivalis y T. denticola, y se considera que inducen a la
inflamación acelerada, como agentes patógenos periodontales (15).
La placa asociada al epitelio está débilmente adherida al epitelio gingival y consta de
bacilos gramnegativos móviles. La inmunotinción ha revelado que de los miembros
principales de la placa epitelial son Prevotella intermedia/Prevotella nigrecens. Se
considera que la placa asociada al epitelio desempeña un importante papel en la
14
patogénesis periodontal y está implicada especialmente en la invasión bacteria del
tejido conjuntivo (15).
Estas tres clases de placa subgingival están estrechamente relacionadas entre sí y
constituyen un reflejo del ecosistema de la comunidad microbiana subgingival (15).
2.7 Prevotella intermedia
2.7.1 Genero Prevotella
Prevotella, previamente clasificada en el género Bacteroides, es un género que está
conformado por bacilos, anaerobios gramnegativos, ligeramente sacarolíticas (20).
Se clasifican como "Especies no pigmentadas "y "Especies pigmetadas ", está ultima
forman colonias lisas y brillantes con gris, marrón claro o de color negro en la placa
de agar sangre (21).
A pesar de que generalmente tienen una capacidad limitada para fermentar ácido
amino y requieren hemina y menadiona para crecer, la Prevotella es un género versátil
que se ha observado en diversos sitios anatómicos, tales como la cavidad oral, del
tracto respiratorio superior vías, tracto urogenital, rumen y excrementos humanos
(21).
Muchos taxones Prevotella de la cavidad oral son posibles / oportunista patógenos.
Se ha demostrado que la Prevotella spp está asociada con el dolor y la inflamación y
Canal "húmedo" de las enfermedades orales (21).
Además, Prevotella intermedia, Prevotella dentalis, Prevotella dentícola,
meleninogénica son conocidos por ser patógenos bajo una amplia gama de
situaciones e invadir en el los tejidos del huésped (21).
2.7.2 La especie Prevotella intermedia
Es una especie del género Prevotella, del grupo de la Prevotella pigmentada. Son
bacterias anaerobias gramnegativas que tiene forma de cocobacilos o como bastones
alargados, emiten fluorescencia bajo luz ultravioleta y son productoras de Indol del
triptófano (20).
Dentro de su estructura encontramos adhesinas y residuos proteicos y glucoproteicos
que actúan como receptores en los procesos de formación del biofilm (adhesión,
agregación y coagregación); tiene capacidad para degradar inmunoglobulinas, acción
toxica sobre fibroblastos, actividad fibrinolítica y tiene un mayor crecimiento por
hormonas esteroideas como el estradiol y la progesterona (20).
15
Con respecto a las enfermedades, está asociado con periodontitis periapical, el noma
(una enfermedad aguda gangrenosa enfermedad coloniza el surco gingival y con
enfermedades periodontales) (21).
2.7.3 Patogenicidad
2.7.3.1 La adhesión y la fijación
La adhesión a la superficie del diente o de la mucosa es el primer paso y un requisito
esencial para la supervivencia de patógenos y su patogenisidad en la cavidad oral,
para lo cual la Prevotella Intermedia hace uso de las fibrillas y la producción de
adhesinas (21).
2.7.3.2 La proteólisis y bacteriocina
Los principales factores de virulencia de la Prevotella Intermedia es la proteasa o
peptidasa y que se encargan de degradar el tejido de soporte periodontal; la proteólisis
es también una importante parte de la vía de señalización implicadas en mecanismos
de inflamación (21), activan pro-colagenasas del hospedero, median la adhesión de
eritrocitos y de otras células, benefician la adherencia, neutralizan el sistema inmune
del hospedero, modifican los receptores para una fácil adherencia en superficies
orales así como la fijación a otras bacterias y su colonización en sitios subgingivales
(22).
Una gran proporción de las proteasas se localizan en el citoplasma y participan en el
metabolismo básico de aminoácidos y la modificación postraduccional (expresión
genética) (21).
Estudios anteriores han demostrado que Prevotella intermedia, degrada también las
proteínas como las inmunoglobulinas y LPS proteínas para impedir la defensa del
huésped (21), que son un factor virulento que produce alteraciones y destrucción del
tejido periodontal, perdida de inserción, afectación del hueso alveolar, degradación
del colágeno (22).
2.7.3.3 La absorción de hierro
16
La lisis de eritrocitos y la degradación de la hemoglobina son la fuente de hierro
principal de la Prevotella intermedia; este proceso se inicia con la acumulación de los
eritrocitos a través de la hemaglutinina (21).
La Prevotella intermedia también tiene actividad hemolítica, que se puede observar
en medios con sangre de conejo / oveja / humana, formando halos beta hemolíticos
(21).
En la degradación de la hemoglobina, actúa la citeinproteasa Interpein A, donde la
hemoglobina es transformada en oxihemoglobina y por oxidación a
metahemoglobina liberando Fe (III) que ayuda a su crecimiento y un pigmento
(protoporfirina IX) , en la ausencia de hierro utiliza hemina para su desarrollo. La
cisteinproteasa Interpein A también interviene en la respuesta inmune del huésped,
degradando el factor de complemento C3 (21).
2.7.4 Cultivo
Las colonias crecen en un medio de agar sangre anaerobio. También se utiliza
colonias el medio selectivo de vancomicina y kanamicina, actúa inhibiendo el
desarrollo de los bacilos gramnegativos facultativos y bacterias grampositivas (23).
El uso de medios enriquecidos con vitamina K y hemina hacen la tenga un mejor
desarrollo. Las especies de Prevotella intermedia utilizan también carbohidratos
como fuente de carbono y energía. Las colonias se observan convexas, lisas,
circulares y algunas veces B-hemolíticas y pigmentadas de un color grisáceo (23).
Dentro de las características bioquímicas:
Productoras de Indol 8+)
Fermentan carbohidratos como la glucosa (+), sucrosa (+)
Catalasa (-) (23)
En cuanto a la atmosfera que necesita la Prevotella Intermedia se puede llevar acabo
en una jarra de anaerobiosis donde se encuentra una mezcla de gases que
contiene 80% N210% CO210% H2 y también se necesita una incubadora que este
a la temperatura de 37°C (23).
2.8 Antimicrobianos
2.8.1 Definición
En el sentido más estricto, los antibióticos son sustancias antimicrobianas producidas
por diversas especies de microorganismos (bacterias, hongos y actinomicetos) que
suprimen el crecimiento de otros microorganismos y que con el tiempo el ser humano
las ha desarrollado y modificando (24).
17
2.8.2 Uso de los antimicrobianos en el tratamiento de periodoncia
La eliminación o disminución adecuada de las bacterias periodontopáticas en la
microbiota subgingival es esencial para la curación periodontal. El desbridamiento
radicular mecánico es un requisito para controlar la infección periodontal, y la
mejoría clínica posterior al desbridamiento está directamente relacionada con el
grado en el cual los microbios patógenos subgingivales han sido eliminados. Sin
embargo el desbridamiento mecánico subgingival convencional no suele erradicar
todas las bacterias periodontopáticas del ecosistema subgingival (10).
Los sitios con bolsas periodontales profundas, surcos, furcas concavidades son
difíciles de acceder con los instrumentos periodontales. Por lo tanto, las bacterias
periodontales pueden permanecer en esos sitios. Además, se han detectado bacterias
periodontales en mucosa, lengua, amígdalas y encías, desde donde pueden colonizar
la placa dental (10).
En tales casos, los agentes antimicrobianos pueden ayudar a acabar de suprimir los
patógenos periodontales. Además, la mayoría de las especies bacterianas residen en
una biopelícula dentro de la bolsa subgingival, y los microorganismos en al
biopelícula son más resistentes a la acción bactericida de los antibióticos, en
comparación con las formas plantónicas (10).
Por lo tanto, el tratamiento de la enfermedad periodontal sólo con agentes
antimicrobianos puede, con frecuencia, a no ser suficiente, y debe realizarse
habitualmente la instrumentación mecánica, para desorganizar la biopelícula y
eliminar el curso de los depósitos bacterianos previamente el tratamiento
antimicrobiano (10).
2.8.3 Clasificación de los antimicrobianos usados en periodoncia
2.8.3.1 Antimicrobianos sistémicos
El usos de antimicrobianos sistémicos tiene varias ventajas sobre la liberación local
de fármacos. Como los fármacos sistémicos llegan ampliamente a los tejidos
intraorales por vía sérica, pueden ser más prácticos que la terapia antimicrobiana local
para el paciente con múltiples sitio periodontales afectados. Además, los fármacos
sistémicos pueden afectar a los agentes patógenos periodontales que colonizan la
mucosa oral o están presentes en la saliva, y el riesgo de recolonización subgingival
de agentes patógenos tras el tratamiento periodontal se ve reducido (10).
18
La microbiota subgingival de las periodontitis a menudo anida más de una especie
periodontopáticas, y ciertas combinaciones bacterianas han sido relacionadas con la
destrucción periodontal. Como la microbiota subgingival en la enfermedad
periodontal destructiva consta de varios agentes patógenos periodontales con
diferentes susceptibilidades a los antibióticos, a veces se recomienda utilizar dos
antimicrobianos (10).
Según la American Academy of Periodontology, indica que el uso antibióticos
sistémicos no es aceptable como tratamiento sistémico en la periodontitis crónica,
estos deben ser considerados en pacientes con diferentes tipos de periodontitis
agresivas (10).
2.8.3.2 Antimicrobianos locales
El beneficio del tratamiento microbiano local es que se puede conseguir una mayor
concentración del agente en los sitios subgingivales, en comparación con un régimen
de administración sistémica del fármaco (10).
La desventaja de la terapia antimicrobiana de administración local es la dificultad de
colocar concentraciones terapéuticas del agente antimicrobiano en las partes más
profundas de la bolsa periodontal o en las lesiones de la furca (10).
Los antimicrobianos locales depende mucho del tiempo de aplicación y no suelen ser
adecuados para la eliminar todas las baterías periodontopáticas, entonces la eficacia
de estas dependen del tiempo de aplicación entre el agente y antimicrobianos con los
microorganismos (10).
Se han realizado diferentes estudios donde se usan agentes antimicrobianos locales
como complemento del raspado y alisado radicular, y evalúan el efecto
microbiológico de los agentes antimicrobianos como tetraciclina, minociclina y
doxiciclina, los cuales demostraron ser eficaces contra bacterias grampositivas y
gramnegativas (10).
El uso de los agentes antimicrobianos locales en sitios en donde no existe diferencia
clínica al tratamiento de alisado y radicular frecuentemente responde al tratamiento
antibiótico. Un complemento del tratamiento convencional es el uso de
antimicrobianos locales donde se debe utilizar en sitios que no muestra mejorías o
pacientes con enfermedad recurrente que necesitan un enfoque alternativo del
tratamiento. Sin embargo, solo unos pocos estudios han comparado la eficacia de
diferentes sistemas de liberación local. Por ello es difícil concluir que un sistema es
superior a otro (10).
19
2.9 Antimicrobianos locales empleados en el estudio
2.9.1 Doxicilina
Las tetraciclinas, el clorhidrato de tetraciclina, el hidrato de doxiciclina y el
clorhidrato de minociclina son antibióticos de amplio espectro, activos contra las
bacterias grampositivas y gramnegativas. (8)
Las reacciones adversas son relativamente mínimas y, se semejanza de otros
antibióticos de amplio espectro, pueden causar supresión de la flora habitual. Los
derivados de las tetraciclinas especialmente la doxiciclina y la minociclina, se
diferencian por cambios mínimos de los constituyentes químicos, haciendo que la
doxiciclina y minociclina sean más lipofílicas que sus progenitoras, mejorando la
absorción sistémica y penetren con más eficacia en las células bacterianas, lo cual
permite administrar dosis menores y más espaciadas (8).
2.9.1.1 Mecanismo de acción
Las tetraciclinas penetran en los microorganismos por un proceso de difusión pasiva
para vencer la pared y transporte activo dependiente de energía para ganar a la
membrana celular. Las células sensibles concentran el medicamento de modo que su
concentración intracelular, es mayor que la extracelular (25).
Se ligan a la subunidad 30S ribosomal en un posición que bloquea la unión del
aminoácido tRNA al sitio receptor en el complejo RNAm-ribosomal. Esto resulta en
la inhibición de la síntesis de proteínas en forma selectiva, pues las células de los
mamíferos, no concentran tetraciclinas (25).
2.9.2 Ciprofloxacina
La ciprofloxacina es un antimicrobiano activo contra bacilos gramnegativos,
incluyendo todos los facultativos y algunos patógenos periodontales putativos
anaeróbicas. Ya que demuestra un efecto mínimo en especies de Streptococcus, que
están asociados con la salud periodontal, su administración puede facilitar el
establecimiento de la microflora asociado con la salud periodontal. En la actualidad,
la ciprofloxacina es el único antibiótico en la terapia periodontal a la que todas las
cepas de A. actinomycetemcomitans son susceptibles. También se ha utilizado en
combinación con metronidazol (9).
20
2.9.2.1 Mecanismo de acción
La ciprofloxacina actúa inhibiendo a las enzimas bacterias girasa DNA y la
toposiomerasa IV y II, estas tiene un papel muy importante durante la réplica o
transcripción del ácido ribonucleico del DNA (24).
El DNA está compuesto por una doble hélice que debe estar separada durante la
replicación, sin embargo este fenómeno de separación produce un “desenrollado” o
un “superenrollado” que puede llevar al microorganismo a la muerte (24).
Es ahí donde entra en acción la girasa DNA que reduce la tensión molecular del DNA
a través de la hidrolisis del trifosfato de adenosina (ATP) y requiere el corte de ambos
cordones de DNA para que pase el segmento de éste a través del espacio así creado
para su posterior selle de la doble hélice (24).
21
CAPÍTULO III
Metodología
3.1 Tipo de investigación
3.1.1 Experimental: Es experimental por que se evalúa a dos antimicrobianos sin
conocer los resultados que se van a obtener.
3.1.2 Cuantitativo: se trata de responder a la pregunta de investigación a través
de evidencia numérica, por lo cual la eficacia será demostrada a través de la
medición del halo inhibitorio en las cepas de Prevotella Intermedia, y el tiempo
de desarrollo de dicho halo en comparación entre los antibióticos utilizados.
3.1.3 Comparativo: se evalúa la eficacia inhibitoria de las dos variables del
estudio: ciprofloxacina ótica y doxiciclina.
3.2 Población y muestra
Población: Cepa Prevotella Intermedia ATCC25611 cultivadas en Agar Muelle
Hinton.
Muestra: 10 cultivos de Mueller Hinton donde se realizó el cultivo de la Cepa
Prevotella Intermedia ATCC25611; y se colocó 3 discos: disco de doxiciclina (30ug),
disco de ciprofloxacina ótica (5ug), suero fisiológico (10ul).
3.2.1 Criterios de inclusión
Cepas de Prevotella Intermedia ATCC 25611
Disco de doxiciclina de 30ug
Ciprofloxacina ótica colocada en discos en blanco a una concentración de 5ug
3.2.2 Criterios de exclusión
Cepas que se encuentren contaminadas
Discos de doxiciclina que no sea de la concentración de 30ug
Discos en blanco que no estén a una concentración de 5ug
Ningún otro medio que no sea el Agar Mueller Hinton (Cultivo para
antibiograma).
22
3.3 Variables
3.3.1 Conceptualización de las variables
3.3.1.1 Variables dependientes
Inhibición del crecimiento de la Prevotella Intermedia ATCC25611: Análisis
microbiológico que permite determinar si los microorganismos son resistentes, con
sensibilidad media o sensible a un antibiótico por medio de la capacidad de limitar el
crecimiento, en este caso de la Prevotella Intermedia cultivada.
3.3.1.2 Variables independientes
Ciprofloxacina ótica (5ug):
Antimicrobiano de tipo fluorquinolona, de amplio espectro, activo contra bacilos
gramnegativos, incluyendo todos los facultativos y algunos patógenos periodontales
putativos anaeróbicas.
Doxiciclina (50ug):
Antimicrobiano derivado de la tetraciclinas, de amplio espectro, activos contra las
bacterias grampositivas y gramnegativas
Suero Fisiológico (10ul):
Conocido también como solución salina normal, es una solución estéril que contiene
cloruro de sodio al 0,9%.
23
3.3.2 Operacionalización de las variables
Tabla 1 Operacionalización de variables
Variable Tipo Clasificación Categorías Nivel de
medición
Inhibición del
crecimiento de
la Prevotella
Intermedia
ATCC 25611
Dependiente
Cuantitativa
Resistente
Intermedia
Sensible
Ordinal
Ciprofloxacina
ótica.
Independiente
Cuantitativa
Inhibe
No inhibe
Dicotómico
Doxiciclina
Independiente
Cuantitativa
Inhibe
No inhibe
Dicotómico
Suero
Fisiológico
Independiente
Cuantitativa
Inhibe
No inhibe
Dicotómico
3.4 Materiales y métodos
3.4.1 Compra de la cepa
Se realizó el pedido de la cepa en MEDIBAC, distribuidor de material de laboratorio,
donde se demoraron 30 días para la entrega.
3.4.2 Almacenamiento de la cepa
Se almacenó la cepa de Prevotella Intermedia ATCC25611 en el laboratorio de
microbiología de la Facultad de Veterinaria de la UCE hasta realizar la activación de
la cepa.
24
3.4.3 Activación de la cepa Prevotella Intermedia ATCC25611
3.4.3.1 Elección del medio para activación.
El medio que se utilizó fue el Agar chocolate, un agar exclusivo para
microorganismos anaerobios.
3.4.3.2 Preparación del Agar Chocolate
Suspender 40 g del polvo en un litro de agua destilada.
Dejar reposar 5 minutos y mezclar perfectamente hasta obtener una
suspensión homogénea.
Calentar con agitación frecuente y hervir 1 minuto.
Autoclavar la solución obtenida por 20 minutos a 121°C.
Se deja enfriar hasta llegar a una temperatura de 45-50°C.
A continuación se agregó sangre desfibrinada al 5%, homogeneizar y
distribuir en placas.
Después de añadir la sangre y agitando frecuentemente se mantiene el medio
de cultivo a 80°C por 10 minutos hasta que adquiera un color pardo
achocolatado. (26)
3.4.3.3 Activación de la cepa
Se siguió los pasos que indica el fabricante en la página web (27) , en el agar
chocolate en una cámara de flujo.
3.4.3.4 Incubación de la cepa
Se la coloca en una jarra de anaerobiosis y se la mantiene en la incubadora a 37 °C
por 48 horas para posterior control.
3.4.3.5 Control de la cepa
El control de la cepa se la hizo 48 horas posteriores al día de incubación a través de
una tinción gram y llevadas al microscopio para constatar que la cepa se encontraba
pura y en condiciones para la realización de la congelación de la misma.
3.4.4 Congelación de la cepa
3.4.4.1 Preparación en el tubo de criogenización
Se preparó 300ug de Cerebro Corazón Infusión Agar y 600ug de glicerol, todo esto
autoclavado y llevado a cabo en la cámara de flujo.
25
3.4.4.2 Pase de la sepa a los tubos de glicerol
En la cámara de flujo con un asa se tomó una muestra mínima de la cepa Prevotella
intermedia que estaba activada en el agar chocolate y se lleva a los tubos de glicerina,
donde se deja esta muestra y se tapa el tubo para a continuación llevarlo al vortex
para su homogenización.
3.4.4.3 Criogenización
Se obtuvo 7 tubos para congelarlos, los mismos que se llevaron al laboratorio de
biología molecular y se los guardó en la congeladora a -80°C.
3.4.5 Experimentación
3.4.5.1 Preparación de la ciprofloxacina ótica a la concentración de 5ug/10ul .
Para el uso de la ciprofloxacina ótica (3mg/ml) se bajó su concentración, utilizando
50ul de ciprofloxacina ótica y 250 ul de suero fisiológico para llegar a la
concentración de 5ug/10ul, equiparando la concentración de discos de la doxicilina
de 30ug. Con la obtención de la ciprofloxacina ótica de 5ug/10ul se embebió en
discos en blanco para posterior secado y listos para el uso en el antibiograma.
3.4.5.2 Fórmula de Mac Farland
De la cepa inicial con la que se trabaja, se realizará un pase pero con la Fórmula de
Mac Farland. Se lo realiza en la cámara de flujo donde se necesita 10ml de Cloruro
de Sodio y la cepa. Con un asa llevamos una cantidad de la bacteria hacia el tubo de
Cloruro de Sodio, se lo mezcla bien en el vórtex y se mide la concentración del tubo
que debe llegar a 1.5 𝑋 108 𝑝𝑜𝑟 𝑚𝑙8 células. Una vez hecho esto con un hisopo
remojado en el tubo de Fórmula de MacFarland se lleva al Medio de MH, aquí no se
utiliza la técnica de estriación, se pinta con el hisopo el medio.
3.4.5.3 Antibiograma
Una vez hecho los medios de Mueller Hinton y realizado la siembra de la Prevotella
Intermedia, se procedió a colocar los discos de doxiciclina, discos de la
ciprofloxacina ótica (Anexo 5), y discos en blanco embebidos con suero fisiológico.
Llegando hacer 10 cultivos donde cada uno consto de tres discos por cultivo.
26
3.4.5.3 Medición
Se llevó a cabo mediante la medición de los halos obtenidos de los cultivos de
Prevotella Intermedia ATCC 25611 con la regla Antibiotic Zone Scale y serán
comparados con el cuadro de los datos obtenidos en el BD BBL Sensi-Disc
Antimicrobial Suceptibibility Test Disc que no indica si es sensible intermedio o
resistente de acuerdo al parámetro para cada antimicrobiano.
3.5 Recursos
3.5.1 Infraestructura
Laboratorio de Microbiología de la facultad de Veterinaria de la Universidad Central
del Ecuador.
3.5.2 Recursos materiales
Cepa Prevotella Intermedia ATCC 25611
Discos en blanco
Discos de Doxiciclina de 30ug
Ciprofloxacina (ciproval ótico 0,30 g / 100ml)
Regla Antibiotic Zone Scale
Medio de cultivó Agar chocolate
Medio de cultivo Mueller Hinton
Jarra de anaerobiosis
Vela
Micro pipeta
Balanza
Estufa
Cajas petri
Tubos de ensayo
Hisopos
Alcohol
Algodón
Portas y cubre Objetos
Microscopio
Incubadora
Cámara de Flujo
Vórtex
Densitómetro
Asas de inoculación plásticas
27
3.6 Procedimientos y técnicas
Cepa de estudio
Activación de la cepa
Criogenización de la cepa
Medio de cultivo para antibiograma Agar Mueller Hinton
Fórmula de McFarland
Siembra en Mueller Hinton
Preparación de Ciprofloxacina a 5ug
Colocación de la ciprofloxacina en discos en blanco
Colocación de discos de ciprofloxacina en las siembras de Prevotella
intermedia
Colocación en jarra de anaerobiosis
Control del antibiograma
Toma de datos
Manejo de los desechos
3.7 Aspectos éticos
El presente estudio se trabajará con cepas de Prevotella Intermedia puras que serán
manejadas adecuadamente bajo normas de bioseguridad del Laboratorio de
microbiología de la Facultad de Veterinaria y Zootecnia de la UCE que se someten a
la reglamentación del MSP y no se intervendrá en muestras biológicas ni tejidos
humanos lo que lo justifica como un estudio in vitro.
Para la correcta manipulación de la muestra se realizó la capacitación del investigador
en el manejo bajo las normas de bioseguridad del Laboratorio de microbiología del
Laboratorio de la Facultad de Veterinaria y Zootecnia de la UCE.
3.7.1 Beneficencia
Con el siguiente estudio se pretende identificar cual es el antimicrobiano más eficaz
como tratamiento complementario al raspado y alisado radicular, para disminuir la
incidencia de recidivas de la enfermedad periodontal.
3.7.2 Bondad ética
Se evaluará la eficacia de la Ciprofloxacina en la inhibición del crecimiento de
Prevotella Intermedia, pues se pretende encontrar una alternativa al Gold estándar
que permita complementar a la terapia mecánica (raspado y alisado radicular) en el
tratamiento de la enfermedad periodontal
28
3.7.3 Confidencialidad
Los datos de registro de las muestras en las cajas Petri de cultivo se llevarán por
medio de códigos donde se indica el nombre de la bacteria, el # de la cepa, el número
de muestra y la fecha con el fin de evitar sesgos y errores durante la investigación.
Los datos se obtenidos serán manejados de forma exclusiva por el Autor y la
Universidad Central del Ecuador.
3.7.4 Riesgos potenciales del estudio
El manejo de las muestras se realizó bajo el protocolo de bioseguridad y manejo de
desechos del laboratorio de Microbiología de la Facultad de Veterinaria y Zootecnia
de la UCE que se basa en el del ministerio de salud, con lo que se evitará riegos para
el operador.
3.7.5 Beneficios potenciales del estudio
3.7.5.1 Directos:
En periodoncia se podrá contar con información relevante respecto a la posibilidad
de utilizar la ciprofloxacina de manera local como una alternativa complementaria a
la terapia mecánica básica.
3.7.5.2 Indirectos:
La población se puede ver beneficiada con el desarrollo de terapias complementarias
en el tratamiento de la periodontitis.
29
CAPÍTULO IV
RESULTADOS
4.1 Toma y manejo de datos
Para la determinación del efecto inhibitorio de la Ciprofloxacina ótica y la
Doxiciclina en cepas de Prevotella Intermedia ATCC 25611, se determinó el halo de
inhibición por medición directa en 10 muestras por grupo. Estos resultados se
organizaron en una base de datos en el programa SPSS 22, gracias al cual se procedió
al cálculo de valores estadísticos descriptivos e inferenciales con la finalidad de
comprobar la hipótesis planteada en esta investigación
H0: La ciprofloxacina ótica presenta igual o mayor halo de inhibición
comparada a la producida por la doxiciclina.
H1: La ciprofloxacina ótica tendrá un menor halo de inhibición comparada
a la producida por la doxiciclina.
En la tabla 2 se puede observar los datos obtenidos durante la experimentación con
la respectiva numeración y fechas para posterior análisis cuantitativo y cualitativo.
Tabla 2 Medida de los halos obtenidos sobre la cepa Prevotella Intermedia
ATCC25611
N° Placa
Agar
Doxiciclina
30ug
Ciprofloxacina
5ug
Control negativo (
Suero fisiológico 10ul ) Fecha
1 38mm 34mm 0mm 24.06.16
2 38mm 36mm 0mm 24.06.17
3 38mm 36mm 0mm 24.06.18
4 37mm 36mm 0mm 28.06.16
5 38mm 31mm 0mm 28.06.17
6 38mm 34mm 0mm 28.06.18
7 37mm 36mm 0mm 01.07.16
8 35mm 34mm 0mm 01.07.17
9 36mm 36mm 0mm 01.07.18
10 40mm 37mm 0mm 01.07.19
Fuente: Directa
Elaboración: Investigador
30
Figura 1 Estabilidad de los antimicrobianos
Fuente: Directa
Elaboración: Investigador y Estadístico
En la tabla 2 y gráfico 1, se presentan los datos en el orden recolectado (criterio de
estabilidad) observándose comportamiento prácticamente planicùrticos que dan la
idea de estabilidad y homogeneidad de los resultados.
Tabla 3
CUADRO DE EQUIVALENCIAS SOBRE LA RESISTENCIA Y SENSIBILIDAD DE LA CEPA DE PI
Doxiciclina Ciprofloxacina ótica
RESISTENTE ≤ 12 mm ≤ 15 mm
INTERMEDIO entre 13 y 15 mm entre 16 y 20 mm
SENSIBLE ≥ 16 ≥ 21
Fuente: Directa
Elaboración: Investigador y Estadístico
En la tabla 3 se presenta un cuadro de equivalencias de los valores establecidos para
conocer si la cepa es resistente, intermedia y sensible, en el cual se puede verificar
que existe diferencia en cuanto a los valores, que dificultan establecer una
comparación más acertada y exacta del comportamiento o relación que existen entre
las variables analizadas, situación que fue solventada mediante el concepto de
dispersión relativa.
34 36 36 3631
34 3634
3637
38 38 38 37 38 38 3735
36
40
M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8 M9 M10
Ciprofloxacina 5ug mm Doxiciclina 30ug mm
31
4.2 Análisis de los resultados
Para la comparación de la eficacia de la Ciprofloxacina ótica y Doxiciclina sobre
cepas de Prevotella Intermedia ATCC25611, se determinaron los estadísticos
descriptivos que se observan en la tabla 4
Tabla 4 Estadísticos descriptivos para el halo de inhibición de Ciprofloxacina ótica
y Doxiciclina sobre cepas de Prevotella Intermedia ATCC25611
Estadísticos Ciprofloxacina Doxiciclina
Media 35,00 37,50
95% de intervalo de confianza para la media
Límite inferior 33,74 36,53
Límite superior 36,26 38,47
Media recortada al 5% 35,11 37,50
Mediana 36,00 38,00
Varianza 3,11 1,83
Desviación estándar 1,76 1,35
Mínimo 31,00 35,00
Máximo 37,00 40,00
Rango 6,00 5,00
Rango intercuartil 2,00 1,25
Asimetría -1,37 -0,17
Curtosis 1,97 1,09
Error estándar 0,56 0,43
Fuente: Directa
Elaboración: Investigador y Estadístico
32
Figura 2 Diagrama de caja y bigotes para el comportamiento del halo de inhibición de
Ciprofloxacina ótica y Doxiciclina sobre cepas de Prevotella Intermedia ATCC25611
Fuente: Directa
Elaboración: Investigador y Estadístico
Se observó una mayor dispersión en el grupo en que se empleó la ciprofloxacina
ótica, y un valor mediano superior en la Doxicilina.
La prueba de Shapiro Wilks, así como la de Kolmogorov Smirnov fueron necesarias
para determinar si las distribuciones de los dos grupos experimentales cumplían el
criterio de normalidad.
Tabla 5 Prueba de normalidad
GRUPO
Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
Estadístico gl Sig. Estadístico gl Sig.
Ciproflaxacina ,315 10 ,006 ,814 10 ,022
Doxiciclina ,256 10 ,062 ,905 10 ,247
Fuente: Directa
Elaboración: Investigador y Estadístico
33
El resultado de la prueba se interpreta de la siguiente manera: partiendo de la
afirmación que α = 0,05, es decir el 5% de error, cuando el p-valor (Sig.) es ≥ α, se
comprueba que la distribución tiende a ser normal. Los resultados de la prueba
indican que la distribución no tienen tendencia normal para la ciprofloxacina ótica su
p-valor = 0,006 (0,022), aunque si se cumplió para Doxicilina con p-valor = 0,062
(0,247). Por lo que para la comparación se empleó la prueba U Mann Whitney.
Tabla 6 Resultados de la prueba U Mann Whitney
GRUPO N Rango
promedio
Suma de
rangos
U de Mann-Whitney
W de Wilcoxon
Z Sig. asintótica (bilateral)
Significación exacta [2*(sig. unilateral)]
HALOS Ciproflaxacina 10 6,55 65,50 10,500 65,500 -3,059 ,002 ,002b
Doxiciclina 10 14,45 144,50 Total 20
Fuente: Directa
Elaboración: Investigador y Estadístico
En la tabla 6 se puede observar el resultado de la prueba aplicada para comparar los
halos medios de inhibición.
Tabla 7 Comparación del valor medio del halo de inhibición y límite de sensibilidad
por grupo
GRUPO Media Límite Dispersión relativa
Ciproflaxacina
35,00 21 67% Doxiciclina 37,50 16 134%
34
La Doxiciclina no solo presentó un halo de inhibición mayor que el de
Ciprofloxacina, sino que además la dispersión relativa (alejamiento del límite de la
zona de sensibilidad) fue significativamente mayor (134%) contra una dispersión
relativa de la Ciproflaxacina (67%). Sin embargo no es un análisis que demuestre
mayor efectividad porque ambas se encuentran dentro del rango de sensibilidad y
tienen parámetros diferentes. Para establecer una mayor sensibilidad debería
realizarse un análisis de contaje bacteriano, que no es motivo de este estudio.
0,00
5,00
10,00
15,00
20,00
25,00
30,00
35,00
40,00
Ciproflaxacina Doxicilina
Media
Límite
Figura 3 Comparación del valor medio del halo de inhibición y límite de
sensibilidad por grupo
35
CAPÍTULO V
5.1 Discusión
El presente proyecto de investigación in vitro permitió comparar la eficacia
inhibitoria de la doxiciclina un antimicrobiano local de la familia de las tetraciclinas
muy usada por el profesional contra la ciprofloxacina ótica un antimicrobiano
perteneciente a la familia de las quinolonas, efectivo contra bacilos gramnegativos,
incluyendo todos los facultativos y algunos patógenos periodontales putativos
anaeróbicas sobre cepas de Prevotella Intermedia ATCC25611 y se determinó que la
doxiciclina tiene un mayor efecto inhibitorio al producido por la ciprofloxacina ótica,
comprobándose la hipótesis nula.
Una vez indicado los resultados de esta investigación, se procede a realizar una
discusión con los antecedentes de investigaciones previas acerca del tema a
investigar, con el objetivo de establecer hallazgos similares o a su vez desacuerdo
que permitan generar nuevos aportes científicos.
Hanes et al (28) en un metaanálisis donde se revisaron 19 artículos, donde se compara
el raspado y alisado radicular vs raspado y alisado radicular más el uso de
antimicrobianos locales entre los que se usaron doxiciclina, minociclina en
periodontitis crónicas, llegando a resultados como reducción de profundidad de
sondaje y un mejor nivel de inserción clínica, estos resultados indican que el uso de
antimicrobianos de aplicación local tiene un mejor resultado como terapia adjunta al
RSP.
En otro estudio, Clay et al (8) también muestra que el uso de antimicrobianos locales
como el uso de la doxiciclina al 10% ( Atridox ®) y clorhidrato de tetraciclina en
fibras de copolímero de acetato de (vinilo/etileto (Actisite®) sometidos a estudios
exhaustivos demostraron mejorías clínicas en el nivel de inserción y profundidad de
sondaje de la misma manera que el estudio de Hanes, además de las microbianas en
comparación con el desbridamiento mecánico exclusivo haciéndolo un excelente
antimicrobiano de liberación local, comprobante su importancia para el presente
estudio y ser objeto de comparación con otros antimicrobianos, sin embargo estos
estudios clínicos se han realizado solo en periodontitis crónica, por lo que se debería
realizar también en formas más agresivas de periodontitis.
Rams et al (29) en un estudio que realiza aislamientos subgingivales de S. constellatus
y S. intermedius, pertenecientes al complejo amarillo a los cuales de forma in vitro
son expuestos a antimicrobianos obteniendo los siguientes resultados ; todos o casi
todos fueron susceptibles a amoxicilina, clindamicina y azitromicina, susceptibilidad
intermedia a ciprofloxacina y frecuentemente resistente a doxiciclina ,indicando
susceptibilidad variable y en dificultando la elección empírica de antibióticos en
periodontitis en el trabajo del profesional por lo que es importante comprender los
efectos inhibitorios de los antimicrobianos en toda la pirámide propuestas por
36
Socranky y aún más en microorganismos paeriodontopatógenos aislados de pacientes
con respecto a cada región abriendo a campo a más investigaciones.
Matesanz et al (11) examina 52 artículos donde se compara el raspado y alisado
radicular con terapia adjunta de antimicrobianos y el raspado radicular, en el cual
aplicación subgingival de las fibras de tetraciclina, la doxiciclina liberada
sostenidamente y la minociclina demostraron un beneficio significativo en la
reducción de profundidad de sondaje (DMP entre 0,5 y 0,7 mm) y la aplicación local
de clorhexidina y metronidazol mostró un efecto mínimo en comparación con el
placebo (DMP entre 0,1 y 0,4 mm), concluyendo así la evidencia científica apoyando
el uso adjunto de antimicrobianos locales al raspado y alisado radicular en sitios
periodontales profundos o recurrentes, sobre todo cuando se usan vehículos con
liberación prolongada, lo que plantea que el estudio de vehículos son parte esencial
para el correcto desempeño de los antimicrobianos locales.
Palacio et al (29) indica las ventajas del uso de antimicrobianos de liberación local
como: mantenimiento de la concentración de la droga entre los límites terapéuticos,
disminución de la dosis del medicamento, reducción del potencial de resistencia
bacteriana en otras partes del cuerpo y minimiza los efectos secundarios permitiendo
utilizarlos en pacientes con enfermedades sistémicas, por lo que Rovai et al (30)en
un metaanálisis de artículos sobre el uso de los antimicrobianos locales entre ellos:
minociclina, azitromicina, claritromicina y doxiciclina en pacientes don diabetes y
diagnosticados con periodontitis con una profundidad de sondaje de ≥ 5 mm
presentan mejorías en profundidad de sondaje e inserción clínica, resultados que
concuerda con los de Hanes y Clay además en dos de los seis artículos examinados
indican que no existe efectos adversos o complicaciones además que un paciente
controlado presentará mejores resultados clínicos que un paciente no controlado.
En una revisión sistemática realizada por Chambrone et al (31) donde se examina 7
artículos sobre el uso de antimicrobianos de uso local y sistémicos en pacientes
fumadores con profundidad de sondaje ≥ 5 mm, se obtiene que los pacientes con
enfoque local obtuvieron mejorías clínicas significativas en profundidad de sondaje
e inserción clínica al contrario de los pacientes que tenían el enfoque sistémico que
no presento gran mejoría, es importante entender que los pacientes en el estudio
fumaban alrededor de 10 cigarrillos como mínimo por un periodo de al menos 12
meses y el estudio realizado por Johnson et al (32) demuestra que el tabaquismo
puede disminuir el efecto de los tratamientos periodontales no quirúrgicos y
quirúrgicos influyendo en la respuesta del huésped, la ecología oral y la
vascularización y sin embargo se obtiene buenos resultados con el uso de
antimicrobianos locales como lo demuestra Chambrone.
37
5.2 Conclusiones
De los resultados obtenidos en el presente trabajo de investigación se puede concluir
que:
La ciprofloxacina ótica presento una media de halos de 35mm,
considerándola sensible a partir de 21, por lo tanto se determina su efecto
inhibitorio sobre la cepa Prevotella Intermedia ATCC25611.
La doxiciclina presento una media de halos de 37.5mm, considerándola
sensible a partir de 16, por lo tanto se determina su efecto inhibitorio sobre la
cepa Prevotella Intermedia ATCC25611.
Los parámetros de sensibilidad para doxiciclina y ciprofloxacina son
diferentes por lo que no se pueden comparar, y se llega a concluir que los dos
antimicrobianos inhiben el crecimiento de la cepa Prevotella Intermedia
ATCC25611.
38
5.3 Recomendaciones
Realizar estudios microbiológicos de antimicrobianos locales,
comparándolos y determinado su eficacia inhibitoria.
Llevar a cabo un estudio sobre las bacterias patógenas periodontales presentes
en pacientes ecuatorianos.
Realizar estudios de comparación de antimicrobianos locales en bacterias
subgingivales asiladas de pacientes ecuatorianos.
Estudiar a los antimicrobianos locales más a fondo, no solo en periodontitis
crónica, también en formas de periodontitis más agresivas para determinar
sus mejorías clínicas.
39
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Local and Systemic Antimicrobials in the Non-surgical Treatment of Smokers With
41
Chronic Periodontitis: A Systematic Review. Journal of Periodontology. 2016 Nov; 87(11):
p. 1320-1332.
32. Johnson G, Guthmille J. The impact of cigarette smoking on periodontal disease and
treatment. Periodontol 2000. 2007; 44: p. 178–194.
33. Rams T, Feik D, Mortensen J, Degener J, Van Winkelhoff A. Antibiotic Susceptibility of
Periodontal Streptococcus Constellatus and Streptococcus Intermedius Clinical Isolates.
Journal of Periodontology. 2014 Diciembre; 85(12): p. 1792-1798.
43
FIGURAS
Fuente: Kinane F, Lindhe J. Periodontología Clínica e Implantología Odontológica. 4th
ed. (5)
Fuente: directamente por el investigador
Figura 5 Equipo Biobase utilizado para la criogenización de la cepa a 80°C
Figura 4 Diagrama de la asociación entre especies subgingivales, adaptado
a la clasificación de Socransky
44
Figura 6 Pase de la cepa y vista después de una semana.
Fuente: directamente por el investigador
Figura 7 Distribución del Medio Agar Mueller Hinton en las cajas pretil.
Fuente: directamente por el investigador
45
Figura 8 Fórmula de Mac Farland
Fuente: directamente por el investigador
Fuente: directamente por el investigador
Figura 9 Siembra de la Prevotella intermedia en Agar Mueller Hintom
46
Fuente: directamente por el investigador
Figura 11 Ciprofloxacina ótica 3mg/ml y preparación a la concentración de 5ug/10ul.
Fuente: directamente por el investigador
Figura 10 Micropipetas calibradas a 50ul para ciprofloxacina y 250ul para suero fisiológico
para obtención de ciprofloxacina ótica a concentración de 5ug/10ul
47
Fuente: directamente por el investigador
Fuente: directamente por el investigador
Figura 12 Aplicación de la ciprofloxacina de 5ug/10ul y suero fisiológico 10ul sobres discos en
blanco.
Figura 13 Discos secados y listos para colocación en Agar Mueller Hintom
48
Fuente: directamente por el investigador
Figura 15 Incubadora utilizada para el tiempo de 24h de espera para lectura del
antibiograma y jarra de anaerobiosis.
Fuente: directamente por el investigador
Figura 14 Colocación de discos sobre Agar Mueller Hinton con siembra de Prevotella
Intermedia.
49
Fuente: directamente por el investigador
Figura 17 Medición de los halos con la regla Antibiotic Zone Scale.
Fuente: directamente por el investigador
Ciprofloxacina
Halo inhibitorio
Figura 16 Agar Mueller Hinton con siembra de Prevotella Intermedia después de las 24h.
Doxiciclina
Suero fisiológico
50
ANEXOS
Anexo 1 Compra de cepa
51
Anexo 2 Certificado de la experimentación realizada en la Facultad de Veterinaria de la
UCE
52
Anexo 3 Certificado de capacitación
53
Anexo 4 Renuncia del estadístico a los derechos de autor y propiedad intelectual
54
Anexo 5 Manual de eliminación de desechos
PROCEDIMIENTO DE ELIMINACIÓN DE DESECHOS
1. Objetivos
Eliminar los desechos producidos en el Laboratorio de Bacteriología de forma
segura y que no afecte a la salud de las personas ni al medio ambiente.
2. Alcance
Se aplica a todo tipo de desechos producidos en el Laboratorio de Bacteriología.
3. Simbología y Abreviaturas
LB: Laboratorio de Bacteriología
FMVZ: Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
MP: Manual de Procedimientos
4. Responsabilidades
Es responsabilidad del profesor de la cátedra de Bacteriología y Micología, que
realice dirija las prácticas en el Laboratorio de Anatomía, los estudiantes que
realizan las prácticas y el personal de limpieza y desinfección debidamente
capacitado.
5. Definiciones
Corto-punzante: Materiales que por sus características pueden realizar
cortes y cuya manipulación se considera riesgosa, tras el contacto con
humanos, animales o sus muestras biológicas.
Desecho común: Cualquier tipo de desecho que no sea considerado una fuente contaminación y que no sufra procesos de descomposición ni que
se considere corto-punzante.
Desecho infeccioso: Cualquier tipo de desecho que tenga riesgo de descomposición y por su naturaleza se considere un foco de infección.
Procedimiento: Conjunto de actividades que aseguran la ejecución de un objetivo.
Responsable: Persona que tiene la obligación de manejar la
documentación designada por el MP.
Revisión: Actividad emprendida para asegurar la conveniencia y eficacia del tema objeto de la revisión, para alcanzar los objetivos establecidos.
55
Verificación: Confirmación de que se han cumplido los requisitos
especificados.
6. Descripción
a. Eliminación de desechos comunes (no contaminados / no infecciosos)
i. Estos desechos se colocan en recipientes rotulados como
“DESECHOS COMUNES” y que contienen fundas de color
negro.
ii. Una vez que estos contenedores están llenos, las fundas son
cerradas, rotuladas y dispuestas al camión de basura local.
b. Eliminación de desechos corto-punzantes
i. Almacenamiento en recipientes rígidos de polipropileno color rojo
con el símbolo de riesgo biológico (Guardián).
ii. Una vez con el recipiente lleno, se dispone de este material a través
del gestor municipal autorizado para la eliminación de residuos
peligrosos.
c. Eliminación de Vidriería Rota
i. La disposición de vidriería rota se someterá a autoclave si proviene
de cultivos, reservas de cultivo o muestras biológicas.
ii. Se designará un recipiente rígido de polipropileno o una caja de
cartón; con la etiqueta: “VIDRIO ROTO”.
iii. El contenedor se ubicará estratégicamente dentro del área sucia.
iv. Se descartará en las zonas designadas por la Institución para la
recolección rutinaria de basura.
d. Eliminación de material contaminado reutilizable designado al
tratamiento en Autoclave
i. Todos los elementos en esta categoría serán acopiados en el área
sucia.
ii. Serán sometidos a un tratamiento de descontaminación
(autoclave).
iii. Todos los elementos serán lavados y secados (Cristalería).
iv. Y por último se clasificarán y almacenarán.
e. Eliminación de material contaminado no reutilizable designado al
tratamiento en autoclave
i. Esta categoría engloba a materiales como hisopos de mango de
madera, palillos de madera, cultivos, reservas de cultivo, material
desechable, etc.
ii. Todos estos elementos se recolectarán en recipientes resistentes
con tapa.
56
iii. Serán sometidos a un tratamiento de descontaminación
(autoclave).
iv. Se dispondrán en bolsas de polietileno de color rojo.
v. Se descartará en las zonas designadas por la Institución a través del
gestor municipal autorizado para la eliminación de residuos
peligrosos.
7. SUSTENTO LEGAL
ECUADOR. MINISTERIO DE SALUD PÚBLICA. Reglamento Sanitario sobre
Manejo de Residuos Peligrosos. Decreto No 148 del 16 de Junio de 2004.
ECUADOR. MINISTERIO DE SALUD PÚBLICA. Subsecretaría de Salud
Pública. Reglamento Sanitario sobre Manejo de Residuos de Establecimientos de
Atención de Salud. Decreto No 6 del 4 de Diciembre de 2009.
8. REFERENCIAS
BAELO, MARÍA ELISA; MARTÍNEZ, FELIPE. Guía de Seguridad y Buenas Prácticas en
el Laboratorio. Universidad de León. España, 2013
NORTH CAROLINA STATE UNIVERSITY. Laboratory Biosafety Manual. USA, 2014.
ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD, OMS. Manual de Bioseguridad en el
Laboratorio, Tercera Edición. Suiza, 2005
SALKIN, I., & KRISIUNAS, E. Medical and Infectious Waste Management. Anthology of
Biosafety II: Facility Design Considerations.
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO, UNAM. Manual de
Procedimientos de Bioseguridad. México, 2011
57
Anexo 6 Manual de Bioseguridad
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA
PROCEDIMIENTO DE BIOSEGURIDAD
Código: FMVZ.LB.PR.001
Versión: 001
Fecha: 16-05-2015
PROCEDIMIENTO DE BIOSEGURIDAD
1. OBJETIVOS
El presente documento ofrece una guía que promueva un ambiente de trabajo adecuado y
seguro durante la función de actividades que realizan los profesionales, personal de apoyo
y estudiantes, que laboran y/o realizan prácticas dentro del Laboratorio de Bacteriología
y Micología.
2. ALCANCE
Se aplica a todos los documentos que se originan a partir de este y todos los manuales de
procedimientos de los laboratorios de la FMVZ, profesionales, personal de trabajo y
estudiantes que laboran y realizan prácticas en el LB.
3. SIMBOLOGÍA Y ABREVIATURAS
LB: Laboratorio de Bacteriología
FMVZ: Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
MP: Manual de Procedimientos
POE: Procedimiento Operativo Estandarizado
SL: Subcomisión de Laboratorios
UCE: Universidad Central del Ecuador.
4. RESPONSABILIDADES
Es responsabilidad del Coordinador de la Subcomisión de Laboratorios (CSL), y de los
coordinadores de cada laboratorio de la FMVZ, la aplicación, modificación y
cumplimiento del presente manual.
5. DEFINICIONES
- BIOSEGURIDAD
La seguridad biológica o bioseguridad, es la aplicación del conocimiento, de las técnicas
y de los equipos necesarios para prevenir la exposición del personal, del área de
laboratorio y del medio ambiente a agentes potencialmente infecciosos o biopeligrosos.
58
- Agentes biopeligrosos: Son todos aquellos agentes biológicos y materiales que son potencialmente peligrosos para los seres humanos, los animales y las plantas.
Entre ellos podemos citar: bacterias, virus, hongos, parásitos, productos
recombinantes, alérgenos, priones, etc.
- Riesgo microbiológico: El Riesgo Microbiológico se encuentra presente cada vez que se realiza una actividad práctica en el Laboratorio, donde se requiera la
manipulación de cultivos de microorganismos, los cuales pueden alcanzar
concentraciones muy elevadas y pueden llegar a provocar una infección si no son
manipulados adecuadamente. Para que se produzca un accidente por un agente
biológico deben estar presente básicamente 4 elementos: un huésped susceptible,
un agente infeccioso, una concentración suficiente de éste y una ruta de
transmisión adecuada; siendo este último punto el que mejor se puede controlar
en el laboratorio.
- Vías de infección: Formas que pueden ingresar al organismo a través de: la boca, los pulmones, la piel (intacta o lesionada), la conjuntiva, etc
- Boca: Comer, beber y fumar en el laboratorio. Pipetear con la boca.
- Piel: Inoculación accidental por medio de agujas hipodérmicas u objetos corto punzantes.
- Ojos: Salpicaduras de material infeccioso, Transferencia indirecta a través de objetos contaminados.
- Pulmones: Inhalación de aerosoles.
- Grupo de nivel de riesgo 1. (Riesgo individual y comunitario escaso o nulo).
Grupo de riesgo constituido por microorganismos que tienen pocas probabilidades
de provocar enfermedades en humanos o en animales.
- Grupo de nivel de riesgo 2. (Riesgo individual moderado, riesgo comunitario bajo). Grupo de riesgo constituido por agentes patógenos que pueden provocar
enfermedades en humanos o en animales, pero que tiene pocas probabilidades de
entrañar un riesgo grave para el personal del laboratorio, la comunidad, los
animales o el ambiente.
Grupo de nivel de riesgo 3. (Riesgo individual elevado, riesgo comunitario moderado). Grupo de riesgo constituido por agentes patógenos que pueden
provocar enfermedades graves en humanos o en animales, con bajo riesgo de pro-
pagarse en la comunidad. Se aplicará al diagnóstico, investigación y producción
en el cual se trabaja con agentes que pueden causar una enfermedad grave o
potencialmente letal, principalmente como resultado de la exposición a aerosoles.
El personal de laboratorio debe tener capa-citación continua y supervisión de un
profesional habilitado.
Grupo de nivel de riesgo 4. (Riesgo individual y comunitario elevado). Grupo de riesgo constituido por agentes patógenos que pueden provocar enfermedades
graves en las personas o en los animales, con alto riesgo de propagarse en la
comunidad. El personal debe usar indumentaria de protección adecuada.
59
6. DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO
a. Generalidades.
Los responsables del cumplimiento de este manual son: personal del aseo y todo el
personal asignado al laboratorio como su sitio de trabajo habitual (Analista, Auxiliar de
Laboratorio, Instructor u otro cargo similar).
- El acceso al laboratorio debe estar limitado, para personas ajenas o particulares al LB.
- Los símbolos o etiquetas de bioseguridad deben colocarse cerca de todas las
puertas del laboratorio y en todos los equipos de trabajo (por ejemplo,
incubadoras, campanas, refrigeradores y congeladores).
- Se prohíbe el ingreso de niños menores de 12 años de edad y mascotas en las áreas de laboratorio.
- Todos los laboratorios deben quedar cerrados con llave fuera de horas de trabajo.
- Además, todos los congeladores y refrigeradores ubicados en los corredores deben quedar cerrados con llave.
b. Lavado de las manos
- Lavarse por lo menos durante un minuto con jabón germicida antes de salir del
laboratorio y después de manipular materiales infecciosos. (Cuando no se
disponga de jabón germicida, debe utilizar alcohol [70%] para limpiarse las
manos.)
c. Comer, beber o fumar
- No debe permitirse comer, beber ni fumar en las áreas de trabajo de los laboratorios
- Los artículos personales (por ejemplo, carteras de mano, espejuelos o billeteras) no deben colocarse en las mesas de trabajo.
d. Pipetear con la boca
- Está estrictamente prohibido pipetear con la boca en el laboratorio. Deben utilizarse los bulbos de goma o dispositivos mecánicos.
e. Objetos punzantes
- Se debe tomar en todo momento un alto grado de precaución con objetos filosos
o cortantes contaminados, incluidas agujas, jeringuillas, láminas, pipetas, tubos
capilares y bisturíes.
- Deseche los objetos puntiagudos o filosos en un recipiente designado para ello.
- Los cristales rotos no se deben manipular directamente con las manos, sino que se deben remover con métodos mecánicos (por ejemplo, una brocha y recogedor,
tenazas o pinzas).
f. Aerosoles
- Minimizar la formación de salpicaduras o de aerosoles.
- Las asas que contienen material infeccioso tienen que secarse en aire caliente
sobre un mechero antes de flamearlas.
- Se debe utilizar gasa para sacar las tapas de las muestras de sangre, también alrededor de la tapa del frasco de hemocultivo
- Nunca se deben cortar las agujas ni sacar las jeringuillas antes de que se pasen por el autoclave.
- En procedimientos con alto riesgo de generar aerosoles infecciosos, o su manipulación resulta en una salpicadura de la cara, se debe realizarse en gabinetes
de seguridad.
60
- Usar máscaras protectoras cuando se trabaja con altas concentraciones o grandes
volúmenes de agentes infecciosos.
g. Descontaminación de las mesetas de trabajo y otras superficies
- Limpiar con un desinfectante después de haber trabajado con agentes infecciosos
o muestras clínicas o después de derrames, salpicaduras u otra contaminación por
materiales infecciosos.
h. Disposición de los materiales contaminados
- Desechos, tales como placas, tubos, muestras clínicas y otros materiales contaminados desechados deben colocarse en recipientes especiales para desechar
objetos punzantes o afilados (por ejemplo, jeringuillas o cristales rotos) para
reducir al mínimo el riesgo. Y pasar por el autoclave antes de ser eliminados.
i. Autoclave
- Los laboratorios NBS 2/3 deben disponer de una autoclave que sea operado solamente por personal capacitado para este fin. Para verificar que cada autoclave
esté trabajando apropiadamente, debe incluirse regularmente en su carga una tira
de esporas u otros indicadores biológicos designados para probar la eficiencia de
la esterilización. Cada carga del autoclave debe ser monitoreada con cinta sensible
a la temperatura (testigo), termógrafo u otros medios (por ejemplo, indicadores
biológicos).
j. Refrigeradores y congeladores
- Inspeccionar refrigeradores y congeladores regularmente para determinar la presencia de viales o tubos rotos que contengan agentes infecciosos.
- Limpiar regularmente con desinfectante y descongelarse para prevenir posible
contaminación o fallos de temperatura.
k. Prevención de incendios
- Los mecheros deben utilizarse lejos de las lámparas y del material inflamable.
- El material inflamable a granel se debe almacenar en gabinete de seguridad.
- Los mecheros tienen que estar apagados cuando no estén en uso. Todos los laboratoristas tienen que conocerla ubicación de los extintores de incendio, las
mantas contra incendio y las duchas; las instrucciones de seguridad y las rutas de
evacuación deben estar señalizadas.
7. PRACTICAS ESPECIALES
a. Transporte de materiales de riesgo biológico
- Para el transporte de agentes infecciosos, el recipiente primario del agente
infeccioso (independientemente de su tamaño) tiene que ponerse en un contenedor
secundario irrompible y que pueda ser sellado.
b. Descontaminación de derrames
- Aísle el área para prevenir el ingreso de personas ajenas.
- Use guantes y ropa protectora.
- Absorba o cubra el material derramado con toallas desechables.
- Sature las toallas con un desinfectante de nivel alto o intermedio apropiadamente
diluido y déjelas en el lugar por lo menos por 15 minutos antes de sacarlas y
eliminarlas.
- Limpie el área utilizando toallas empapadas en desinfectante y deje que el aire seque el área.
- Ponga todos los materiales desechables utilizados para la descontaminación del derrame dentro de un recipiente para riesgos biológicos.
61
- Manipule el material de la misma forma que otros desperdicios infecciosos.
c. Accidentes
- Todos los daños o incidentes raros deben notificarse inmediatamente al supervisor.
- Cuando se producen heridas por cortes o pinchazos con agujas o cristales rotos, y existe la posibilidad de que estos estén infectados, se deberá lavar rápidamente el
área afectada con jabón desinfectante y agua durante 15 minutos.
d. Batas de laboratorio
- Utilizar batas protectoras, delantales, blusas o uniformes mientras se está trabajando en el laboratorio. Las batas o túnicas de laboratorio deberán ajustarse
apropiadamente y cubrir los brazos hasta el codo.
e. Guantes
- Independientemente del tipo de material infeccioso, habrá que utilizar guantes cuando se llevan a cabo procedimientos que tienen grandes posibilidades de riesgo
- Los guantes deben utilizarse siempre que se manipulan muestras clínicas, fluidos
corporales y tejidos humanos o animales.
- El personal de laboratorio se debe quitar los guantes cuando estos se contaminan por derrames o salpicaduras, o cuando se ha terminado el trabajo con materiales
infecciosos.
- No se utilizar el teléfono ni abrir las puertas con guantes utilizados en pruebas de laboratorio.
- Se deben desechar todos los guantes usados, colocarlos junto con otros materiales
desechables y llevarlos al autoclave.
8. TIPOS DE ACTIVIDAD QUE SE PUEDEN DESARROLLAR CON LOS
MICROORGANISMOS
A: Actividad que no multiplica ni disemina el microorganismo
B: Actividad que multiplica y/o disemina el microorganismo
C: Trabajo con animales potencialmente infectados
62
Anexo 7 Certificado del subcomité de ética
63
Anexo 8 URKUND
