The Survival and Growth of Bacillus Cereus in Rice

8/13/2019 The Survival and Growth of Bacillus Cereus in Rice

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J . H y g . , C a m b . 1 9 7 4 ) , 7 3 4 3 3 433P r i n t e d i n G r e a t B r i t a i n

The s u r v i v a l a n d g r o w t h o fB a c i l l u s c e r e u s i n b o i l e d a n d f r i e d r i c e i n r e l a t i o n t o o u t b r e a k s

o f f o o d p o i s o n i n gBY R . J . GILBERT, M . F . STRINGER* AND T . C . PEACEtF o o d H y g i e n e L a b o r a t o r y , C e n t r a l P u b l i c H e a l t h L a b o r a t o r y ,C o l i n d a l e A v e n u e , L o n d o n NW9 5HT

R e c e i v e d 2 4 May 1 9 7 4 )SUMMARY

A n u m b e r o f o u t b r e a k s o f f o o d p o i s o n i n g a t t r i b u t e d t o B a c i l l u s c e r e u s h a v eb e e n r e p o r t e d r e c e n t l y a n d a l l h a v e b e e n a s s o c i a t e d w i t h c o o k e d r i c e u s u a l l yf r o m C h i n e s e r e s t a u r a n t s a n d t a k e - a w a y s h o p s .

T e s t s w e r e m a d e t o a s s e s s t h e h e a t r e s i s t a n c e o f B . c e r e u s s p o r e s i n a q u e o u ss u s p e n s i o n , t h e g r o w t h o f t h e o r g a n i s m i n b o i l e d r i c e s t o r e d a t t e m p e r a t u r e s i nt h e r a n g e 4 - 5 5 C . , a n d t h e e f f e c t o f c o o k i n g a n d s t o r a g e o n t h e g r o w t h o f t h eo r g a n i s m i n b o i l e d a n d f r i e d r i c e . T h e s p o r e s o f B . c e r e u s s u r v i v e d c o o k i n g a n dw e r e c a p a b l e o f g e r m i n a t i o n a n d o u t g r o w t h . T h e o p t i m u m t e m p e r a t u r e f o r g r o w t hi n b o i l e d r i c e was b e t w e e n 3 0 0 a n d 3 7 0 C . a n d g r o w t h a l s o o c c u r r e d d u r i n g s t o r a g ea t 1 5 0 a n d 4 3 0 C .T o p r e v e n t f u r t h e r o u t b r e a k s i t i s s u g g e s t e d t h a t r i c e s h o u l d b e b o i l e d i n s m a l l e rq u a n t i t i e s o n s e v e r a l o c c a s i o n s d u r i n g t h e d a y , t h e r e b y r e d u c i n g t h e s t o r a g e t i m eb e f o r e f r y i n g . A f t e r b o i l i n g t h e r i c e s h o u l d e i t h e r b e k e p t h o t > 6 3 0 C . ) o r c o o l e dq u i c k l y a n d t r a n s f e r r e d t o a r e f r i g e r a t o r w i t h i n 2 h r . o f c o o k i n g . B o i l e d o r f r i e dr i c e m u s t n o t b e s t o r e d u n d e r warm c o n d i t i o n s e s p e c i a l l y i n t h e r a n g e 1 5 - 5 0 C .

INTRODUCTIONO v e r 3 0 s e p a r a t e i n c i d e n t s o f f o o d p o i s o n i n g a s s o c i a t e d w i t h c o o k e d r i c e u s u a l l y

f r i e d ) a n d u s u a l l y f r o m C h i n e s e r e s t a u r a n t s o r t a k e - a w a y s h o p s h a v e b e e n r e p o r t e di n G r e a t B r i t a i n s i n c e 1 9 7 1 P u b l i c H e a l t h L a b o r a t o r y S e r v i c e , 1 9 7 2 , 1 9 7 3 , a n d u n -p u b l i s h e d i n f o r m a t i o n ) . B a c t e r i o l o g i c a l e x a m i n a t i o n o f f o o d r e m n a n t s a n d f a e c a ls p e c i m e n s h a s f a i l e d t o y i e l d a n y o f t h e o r g a n i s m s u s u a l l y a s s o c i a t e d w i t h f o o dp o i s o n i n g , a n d s t a p h y l o c o c c a l e n t e r o t o x i n was n o t d e t e c t e d i n t h r e e s a m p l e s o fc o o k e d r i c e f r o m s e p a r a t e o u t b r e a k s . I n m o s t o f t h e i n c i d e n t s l a r g e n u m b e r s o fa e r o b i c , s p o r e - f o r m i n g b a c i l l i , i d e n t i f i e d a s B a c i l l u s c e r e u s , h a v e b e e n i s o l a t e d f r o mr e m n a n t s o f c o o k e d r i c e o r f r o m f a e c a l s p e c i m e n s o r f r o m b o t h . P l a t e c o u n t s o nb l o o d a g a r o f B . c e r e u s i n c o o k e d r i c e f r o m 1 7 i n c i d e n t s h a v e r a n g e d f r o m 3 x 1 0 5t o 2 x 1 0 9 / g . w i t h a m e d i a n v a l u e o f 5 x 1 0 7 / g . G i l b e r t T a y l o r , t o b e p u b l i s h e d ) .

* P r e s e n t a d d r e s s : C r o s s - I n f e c t i o n R e f e r e n c e L a b o r a t o r y , C e n t r a l P u b l i c H e a l t h L a b o r a -t o r y , London NW9 5HT.t P r e s e n t a d d r e s s : D e p a r t m e n t o f B i o l o g i c a l S c i e n c e s , U n i v e r s i t y o f B a t h , C l a v e r t o nDown, Bath BA2 6AY.


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R . J . G I L B E R T , M . F . S T R I N G E R AND T . C . PEACET a b l e 1 . O r i g i n o f B . c e r e u s c u l t u r e s

C u l t u r e O r i g i nBC 1 S t o c k c u l t u r e , NC TC 9 9 4 7BC 2 F r i e d r i c e - f o o d p o i s o n i n g o u t b r e a k 1 i n EnglandBC 8 F r i e d r i c e r o u t i n e f o o d s a m p l eBC 9 Uncooked r i c e - r o u t i n e f o o d s a m p l eBC 1 0 F r i e d r i c e - r o u t i n e f o o d s a m p l eBC 2 3 F a e c e s - f o o d p o i s o n i n g o u t b r e a k 2 i n E n g l a n dBC 2 5 F a e c e s - f o o d p o i s o n i n g o u t b r e a k 3 i n E n g l a n dBC 4 0 V a n i l l a s a u c e - f o o d p o i s o n i n g o u t b r e a k i n NorwayBC Br S t o c k c u l t u r e

E a c h e p i s o d e h a s b e e n c h a r a c t e r i z e d by a n a c u t e a t t a c k o f n a u s e a a n d v o m i t i n gu s u a l l y b e t w e e n 1 a n d 5 h r . a f t e r t h e m e a l ; d i a r r h o e a h a s n o t b e e n a commonf e a t u r e , o c c u r r i n g i n o n l y a b o u t 2 5 o f p a t i e n t s . S i m i l a r o u t b r e a k s w i t h r e s p e c tt o i n c u b a t i o n p e r i o d , s y m p t o m s , f o o d v e h i c l e s a n d t h e i s o l a t i o n o f l a r g e n u m b e r so f B . c e r e u s h a v e b e e n r e p o r t e d r e c e n t l y f r o m A u s t r a l i a D r J . T a p l i n , p e r s o n a lc o m m u n i c a t i o n ) a n d C a n a d a L e f e b v r e , G r e g o i r e , B r a b a n t T o d d , 1 9 7 3 ) .

T h e a i m s o f t h e p r e s e n t w o r k w e r e t o s t u d y i t h e h e a t r e s i s t a n c e o f B . c e r e u ss p o r e s i n a q u e o u s s u s p e n s i o n , i i t h e g r o w t h o f B . c e r e u s i n b o i l e d r i c e s t o r e d a tv a r i o u s t e m p e r a t u r e s , i i i t h e e f f e c t o f c o o k i n g a n d s t o r a g e o n t h e g r o w t h o f t h eo r g a n i s m i n b o i l e d a n d f r i e d r i c e ; a n d i v ) t o s u g g e s t w a y s t o r e d u c e o r p r e v e n tt h i s t y p e o f f o o d p o i s o n i n g .

MATERIALS AND METHODSB a c t e r i a

T h e c u l t u r e s o f B . c e r e u s u s e d a n d t h e i r s o u r c e s a r e g i v e n i n T a b l e 1 . C u l t u r eBC 2 w a s k i n d l y d o n a t e d b y Dr P . N . C o l e m a n , F r i a r a g e H o s p i t a l , N o r t h a l l e r t o n ,BC 2 3 a n d 2 5 b y Dr P . R . M o r t i m e r , P u b l i c H e a l t h L a b o r a t o r y , T e e s s i d e , BC 4 0b y P r o f e s s o r S . H a u g e , I n s t i t u t t f o r N e e r i n g s m i d d e l h y g i e n e , O s l o 1 , N o r w a y , a n dBC B r b y Dr A . B r i g g s , S c h o o l o f P h a r m a c y , U n i v e r s i t y o f L o n d o n .P r e p a r a t i o n o f s p o r e s u s p e n s i o n s

T h e s p o r u l a t i o n medium was s o i l - e x t r a c t a g a r G o r d o n S m i t h , 1 9 5 5 ) w i t hi n c u b a t i o n a t 3 0 0 C . f o r 1 0 d a y s s p o r u l a t i o n medium 1 . F o r two c u l t u r e s , BC 9a n d 2 5 , s p o r e s w e r e a l s o p r o d u c e d o n n u t r i e n t b r o t h c o n t a i n i n g 1 t 5 o f D a v i sa g a r a n d 0 - 0 0 1 o f a d d e d Mn2+ a s MnSO4 a n d 0 0 0 1 o f a d d e d C a 2 + a s C a C l 2w i t h i n c u b a t i o n a t 3 0 0 C . f o r 1 0 d a y s s p o r u l a t i o n medium 2 ) o r a t 3 7 0 C . f o r4 d a y s s p o r u l a t i o n medium 3 ) .

V e g e t a t i v e c e l l s w e r e r e m o v e d b y w a s h i n g 3 t i m e s w i t h s t e r i l e d i s t i l l e d w a t e r a n ds e p a r a t i n g b y d i f f e r e n t i a l c e n t r i f u g a t i o n L o n g W i l l i a m s , 1 9 5 8 ) . A q u e o u s s p o r es u s p e n s i o n s , a l l > 9 5 a n d u s u a l l y > 9 9 p h a s e - b r i g h t s p o r e s , w e r e s t o r e d a t4 0 C . A h e a t - s h o c k t r e a t m e n t was n o t g i v e n d u r i n g t h e p r e p a r a t i o n o f s p o r es u s p e n s i o n s .

4 3 4


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B . c e r e u s i n c o o k e d r i c eR i c e

L o n g g r a i n r i c e w a s p u r c h a s e d f o r t h e w o r k .D i l u e n t a n d c o l o n y p l a t e c o u n t m e t h o d

A l l d i l u t i o n s w e r e made i n q u a r t e r - s t r e n g t h R i n g e r s s o l u t i o n .C o l o n y p l a t e c o u n t s w e r e made o n b l o o d a g a r c o n t a i n i n g 5 d e f i b r i n a t e d h o r s eb l o o d b y m e a n s o f a m o d i f i e d M i l e s M i s r a 1 9 3 8 ) t e c h n i q u e w i t h i n c u b a t i o n f o r1 8 - 4 0 h r . a t 3 0 0 C . I n e x p e r i m e n t s w h e r e l o w n u m b e r s o f B . c e r e u s w e r e e x p e c t e d0 5 m l . v o l u m e s w e r e p l a t e d .D e t e r m i n a t i o n o f h e a t r e s i s t a n c e o f B . c e r e u s s p o r e s i n a q u e o u s s u s p e n s i o n

S a m p l e s 0 - 2 m l . ) w e r e d i s t r i b u t e d f r o m a 1 m l . s y r i n g e i n t o 2 m l . f r e e z e - d r y i n ga m p o u l e s w h i c h w e r e s e a l e d u n d e r a i r . T h e a m p o u l e s w e r e h e a t e d a t 9 0 0 , 9 2 . 5 0a n d 9 5 0 C . by t o t a l i m m e r s i o n i n a t h e r m o s t a t i c a l l y c o n t r o l l e d w a t e r b a t h a n d a t1 0 0 0 C . i n b o i l i n g w a t e r . A m p o u l e s w e r e r e m o v e d a t a p p r o p r i a t e t i m e i n t e r v a l sa n d i m m e d i a t e l y c o o l e d i n a n i c e - w a t e r m i x t u r e . T h e y w e r e o p e n e d , t h e c o n t e n t sw a s h e d o u t a n d t e n f o l d d i l u t i o n s p r e p a r e d a n d p l a t e d .

S u r v i v o r c u r v e s o f l o g p e r c e n t a g e s u r v i v i n g o r g a n i s m s a g a i n s t t i m e w e r ec o n s t r u c t e d , u s i n g t h e mean c o u n t f r o m 2 o r 3 u n h e a t e d a m p o u l e s a s 1 0 0 .D e c i m a l r e d u c t i o n t i m e s D ) , t h e t i m e r e q u i r e d t o r e d u c e t he number o f s u r v i v i n go r g a n i s m s b y 9 0 a t a c o n s t a n t t e m p e r a t u r e , w e r e c a l c u l a t e d f r o m r e g r e s s i o na n a l y s e s o f l o g 1 o c o l o n y p l a t e c o u n t s f o r v a r i o u s i n t e r v a l s o f t i m e , u s i n g t h e d i g i t a lc o m p u t e r p r o g r a m o f N a v a n i , S c h o l e f i e l d K i b b y 1 9 7 0 ) . V a l u e s f o r z , t h en u m b e r o f d e g r e e s o f t e m p e r a t u r e t o b r i n g a b o u t a t e n f o l d c h a n g e i n D v a l u e s ,w e r e a l s o c a l c u l a t e d .G r o w t h o f B . c e r e u s i n b o i l e d r i c e

T w o - l b . c a . 9 0 0 g . ) q u a n t i t i e s o f r i c e w e r e r i n s e d t w i c e i n c o l d w a t e r t o r e m o v es u p e r f l u o u s s t a r c h . T h e w a s h e d r i c e w a s m i x e d w i t h f o u r p i n t s c a . 2 2 7 0 m l . ) o fc o l d w a t e r , b r o u g h t t o t h e b o i l a n d a l l o w e d t o s i m m e r w i t h o c c a s i o n a l s t i r r i n gu n t i l a l l t h e w a t e r was a b s o r b e d , c a . 2 0 m i n . T h e b o i l e d r i c e w a s r i n s e d o n c e i nb o i l i n g w a t e r t o f a c i l i t a t e s e p a r a t i o n o f t h e g r a i n s a n d 1 0 g . s a m p l e s w e r e d i s -t r i b u t e d i n t o 1 l b . s c r e w - c a p p e d j a r s .

T e n f o l d d i l u t i o n s o f s p o r e s u s p e n s i o n s o f BC 2 , 9 a n d 2 5 w e r e p r e p a r e d a n d0 - 2 m l . v o l u m e s w e r e d i s t r i b u t e d o n t o t h e s u r f a c e o f t h e r i c e w i t h a 5 0 d r o p / m l .p i p e t t e t o g i v e a n i n i t i a l i n o c u l u m o f B . c e r e u s s p o r e s b e t w e e n c a . 1 0 a n d 2 x 1 0 4 / g .o f r i c e . S e t s o f j a r s w e r e s t o r e d a t 4 0 , 1 0 0 , 1 5 0 , 2 2 0 , 3 0 0 , 3 7 0 4 3 0 a n d 5 5 0 C . f o rp e r i o d s o f t i m e u p t o 3 d a y s . J a r s w e r e r e m o v e d a t v a r i o u s t i m e i n t e r v a l s a n d 9 0 m l .o f d i l u e n t w e r e a d d e d t o e a c h t o g i v e a 1 / 1 0 d i l u t i o n . A f t e r t h o r o u g h m i x i n g ,f u r t h e r t e n f o l d d i l u t i o n s w e r e p r e p a r e d a n d p l a t e d o n b l o o d a g a r f o r c o u n t s .E f f e c t o f c o o k i n g a n d s t o r a g e o n t h e g r o w t h o f B . c e r e u s i n b o i l e d a n d f r i e d r i c eA 5 l b . q u a n t i t y o f r i c e was r i n s e d t w i c e i n w a t e r a n d i n o c u l a t e d w i t h l o wn u m b e r s o f s p o r e s o f BC 2 , c a . 1 4 0 s p o r e s / g . o r BC 9 , c a . 6 8 0 s p o r e s / g . T e n p i n t s o f

4 3 5


4/12

R . J . G I E L B E R T , M . F . S T R I N G E R AND T . C . P E A C E100

10~~~

I - W I0 x

X 0 - 1 xsoo

001

1 2 0 2 4 0 3 6 0 4 8 0H e a t i n g t i m e m i n )F i g . 1 . Heat r e s i s t a n c e o f B . c e r e u s sp ores i n aq u e o u s s u s p e n s i o n a t 9 0 0 C . c u l t u r eBC 8 ; *, c u l t u r e BC 9 ; x, c u l t u r e BC 2 5 .

1 0 010~~~

L 0~~~O~~~~~~~S- 1

X001 _ \ \ \o0 01

0 0010

H e a t i n g t i m e m i n . ) 3 5

F i g . 2 . Heat r e s i s t a n c e o f B . cerews spores i n aque ou s s u s p e n s i o n a t 1 0 0 0 C . 0, c u l t u r eBC 8 ; *, c u l t u r e BC 9 ; x, c u l t u r e BC 2 5 .

4 3 6


5/12

B . c e r e u s i n c o o k e d r i c e 4 3 7T a b l e 2 . H e a t r e s i s t a n c e o f B . c e r e u s s p o r e s i n a q u e o u s s u s p e n s i o n

D e c i m a l r e d u c t i o n t i m e s m l n ) a t C .t A I z v a l u eC u l t u r e 9 0 9 2 - 5 9 5 1 0 0 0 C . )

BC 1 6 7 3 6 1 7 2 * 3 6 * 8BC 2 1 0 0 6 2 2 1 6 0 7 - 7BC 8 1 1 2 7 4 3 6 7 - 5 8 - 3BC 9 2 1 1 3 5 * 0 1 * 2 7 - 9BC 1 0 9 3 5 9 2 4 4 . 2 7 * 2BC 2 3 1 0 4 7 1 3 3 5 - 0 7 - 4BC 2 5 9 0 5 7 2 3 4 7 7 - 6BC 4 0 3 5 2 3 7 * 2 1 - 6 7 - 1BC Br 1 3 7 7 3 3 6 4 * 5 6 - 7w a t e r w e r e a d d e d a n d t h e m i x t u r e c o o k e d a s b e f o r e . A f t e r r i n s i n g o n c e w i t h b o i l i n gw a t e r t h r e e 1 0 g . s a m p l e s w e r e t a k e n f r o m d i f f e r e n t a r e a s s u r f a c e , m i d d l e a n db a s e ) a n d d i l u t i o n s p r e p a r e d a n d p l a t e d . C o u n t s w e r e a l s o c a r r i e d o u t o n 1 0 g .p o r t i o n s o f r i c e , s a m p l e d a t t h r e e d i f f e r e n t a r e a s w i t h i n t h e b u l k , a t i n t e r v a l s u p t o2 4 h r . a f t e r b o i l i n g . D u r i n g t h i s p e r i o d t he c oo k i n g v e s s e l w a s l e f t o n t h e b e n c ht o c o o l s l o w l y t o r o o m t e m p e r a t u r e 2 3 - 2 6 C . ) .A f u r t h e r t h r e e 2 5 0 g . p o r t i o n s o f r i c e w e r e s a m p l e d a s b e f o r e , a n d e a c h w a sf r i e d i n a p a n f o r c a . 1 i m i n . m i x e d w i t h f r e s h l y b e a t e n e g g a n d a s m a l l a m o u n t o f

c o r n o i l . T h r e e 1 0 g . s a m p l e s o f e a c h p o r t i o n o f f r i e d r i c e w e r e t a k e n f o r p l a t ec o u n t s i m m e d i a t e l y a f t e r f r y i n g a n d a g a i n a f t e r 2 4 h r . s t o r a g e a t room t e m p e r a t u r e .T h e f r i e d r i c e w a s t h e n f r i e d a s e c o n d t i m e i n s m a l l a m o u n t s o f c o r n o i l f o r c a .1 m i n . C o u n t s w e r e c a r r i e d o u t o n t h r e e 1 0 g . s a m p l e s o f e a c h p o r t i o n i m m e d i a t e l ya f t e r r e f r y i n g a n d a g a i n a f t e r 2 4 h r . s t o r a g e a t r o o m t e m p e r a t u r e .

RESULTSN e a r l y a l l t h e s u r v i v o r c u r v e s f o r t h e n i n e B . c e r e u s s t r a i n s w e r e l i n e a r o n ap l o t o f l o g p e r c e n t a g e s u r v i v o r s a g a i n s t t i m e o f h e a t i n g F i g s . 1 , 2 ) w i t h c o r r e l a t i o n

c o e f f i c i e n t s g r e a t e r t h a n t a b u l a t e d v a l u e s a t P = 0 0 5 f o r t h e a p p r o p r i a t e d e g r e e so f f r e e d om . T h e s e c u r v e s a r e t h e r e f o r e e x p o n e n t i a l . C a l c u l a t e d D a n d z v a l u e s a r eg i v e n i n T a b l e 2 . T h e D v al u e s w e r e i n t h e r a n g e 2 1 - 1 3 7 m i n . a t 9 0 C . a n d 12t o 7 * 5 m i n a t 1 0 0 0 C . O f t h e n i n e s t r a i n s s p o r e s o f BC B r w e r e t h e m o s t r e s i s t a n ta t 9 0 0 C . a n d t h o s e o f BC 8 a t 9 2 . 5 0 a n d 1 0 0 0 C . T h e z v a l u e s w e r e i n t h e r a n g e6 . 7 - 8 . 3 0 C . , w i t h a mean o f 7 . 4 0 C .

S u r v i v o r c u r v e s f o r BC 2 3 a n d BC B r a t 9 5 0 C . d i d n o t a p p e a r t o b e l i n e a r w h e np l o t t e d , a n d t h e c u r v e f o r BC 2 a t 9 5 0 C . s h o w e d a n i n i t i a l s h o u l d e r b e f o r e i tb e c a m e e x p o n e n t i a l F i g . 3 ) . H o w e v e r , c o e f f i c i e n t s o f l i n e a r c o r r e l a t i o n f o r t h e s et h r e e c u r v e s w e r e g r e a t e r t h a n t a b u l a t e d v a l u e s a n d t h e d a t a c o u l d t h e r e f o r e b er e p r e s e n t e d a p p r o x i m a t e l y b y s t r a i g h t l i n e s .

T a b l e 3 s h o w s D a n d z v a l u e s f o r s p o r e s o f BC 9 a n d BC 2 5 p r o d u c e d u n d e rv a r y i n g c o n d i t i o n s o f g r o w t h a n d s p o r u l a t i o n . F o r b o t h s t r a i n s t h e s p o r e s p r o d u c e do n s o i l - e x t r a c t a g a r w e r e t h e m o s t r e s i s t a n t a t 1 0 0 0 C .


6/12

4 3 8 R . J . G I L B E R T , M . F . S T R I N G E R AND T . C . P E A C E1 0 0 o

1 0

0o l00 - 0 1

0

0 - 0 0 1

I I 2 5 5 0 7 5 1 0 0 1 2 5 1 5 0H e a t i n g t i m e m i n . )

F i g . 3 . H e a t r e s i s t a n c e o f B . c e r e q b s p o r e s i n a q u e o u s s u s p e n s i o n a t 9 5 0 C . 0 , c u l t u r eBC 2 ; x , c u l t u r e BC 2 3 .T a b l e 3 . H e a t r e s i s t a n c e i n a q u e o u s s u s p e n s i o n o f B . c e r e u s s p o r e s

p r o d u c e d u n d e r d i f f e r e n t c o n d i t i o n sS p o r u l a t i o n D e c i m a l r e d u c t i o n t i m e s m i n ) a t 0 0 .medium an d valueC u l t u r e c o n d i t i o n s * 9 0 9 2 - 5 9 5 1 0 0 0 C . )

BC 9 1 2 1 1 3 5 0 1 * 2 7 - 92 2 7 N . T . 4 - 8 0 - 6 6 - 13 2 7 N . T . 5 * 2 0 9 6 - 8

BC 2 5 1 9 0 5 7 2 3 4 - 7 7 - 62 6 4 N . T . 2 0 3 - 2 7 - 73 7 7 N . T . 2 5 3 * 9 7 . 7* S e e t e x t . N . T . , n o t t e s t e d .

T o t a l c o l o n y c o u n t s o f t h e u n c o o k e d r i c e w e r e < 1 0 0 / g . b u t B . c e r e u s w a si s o l a t e d a f t e r e n r i c h m e n t i n n u t r i e n t b r o t h . B . c e r e u s w a s n o t i s o l a t e d , h o w e v e r ,f r o m c a . 2 g . o f u n i n o c u l a t e d r i c e t a k e n f r o m a l a r g e b u l k w h i c h h a d b e e n b o i l e d f o r2 0 m i n .

T h e g r o w t h o f BC 2 , 9 a n d 2 5 i n b o i l e d r i c e s t o r e d a t d i f f e r e n t t e m p e r a t u r e s i nt h e r a n g e 4 - 5 5 C . i s s h o w n i n T a b l e s 4 a n d 5 . A t 4 0 a n d 1 0 0 C . t h e r e w a s n og r o w t h w i t h a n y o f t h e t h r e e s t r a i n s a f t e r 3 d a y s s t o r a g e . T h e r e w a s s l i g h t g r o w t ha t 1 5 0 C . , much m o r e a t 2 2 0 C . a n d t h e o p t i m u m w a s r e a c h e d a t 3 0 0 t o 3 7 0 C .G r o w t h a t 4 3 0 C . was more r a p i d t h a n a t 1 5 C . b u t l e s s t h a n t h a t a t 2 2 0 C . A t


7/12

B . c e r e u s i n c o o k e d r i c eT a b l e 4 . G r o w t h o f B . c e r e u s s p o r e s i n b o i l e d r i c e s t o r e d a t 4 0 , 1 0 0 , 1 5 0 , 4 3 0 a n d 5 5 0 C .

S t o r a g et e m p e r a t u r eC u l t u r e C . )BC 2

BC 9

BC 2 5

41 01 54 35 54

1 01 54 35 541 0

1 54 35 5

L o g c o u n t o f B . c e r e u s i n b o i l e d r i c ea f t e r s t o r a g e h r . )0 A40 1 6 2 4 4 8 7 2

N.T.N.T.2 - 7 83 - 7 02 - 9 0N.T.N.T.3 - 0 84 - 1 83 - 4 8N.T.N.T.2 - 7 83 - 4 82 - 9 0

3 - 7 03 - 7 82 - 8 84 - 4 02 - 3 03 - 7 83 - 8 53 - 1 84 - 6 53 - 2 43 - 6 03 - 6 02 - 8 83 - 6 62 - 6 0

3 . 7 43 - 8 53 - 1 84 . 5 4< 1 - 3 03 - 8 53 - 7 83 - 3 04 . 7 42 - 3 03 - 4 83 . 5 43 - 1 84 - 1 81 - 9 0

3 . 7 43 . 7 42 - 7 42 - 5 43 . 5 43 - 8 13 - 8 12 - 8 13 - 3 04 - 3 03 - 6 03 - 6 02 - 6 02 - 9 33 . 9 3

3 - 6 03 . 7 43 - 3 0N.T.N.T.3 - 7 83 - 7 83 - 6 0N.T.N.T.

3 . 5 43 - 7 03 - 3 0N.T.N.T.

N . T . , n o t t e s t e d .T a b l e 5 . G r o w t h o f B . c e r e u s i n b o i l e d r i c e s t o r e d a t 2 2 0 , 3 0 0 a n d 3 7 0 C .

S t o r a g et e m p e r a t u r e -C u l t u r e 0 C . )BC 2

BC 9

BC 2 5

2 23 03 72 23 03 72 23 03 7

Log c o u n t o f B . c e r e u s i n b o i l e d r i c e a f t e r s t o r a g e h r . )0 4 9 1 8 2 3 2 8 3 31 - 0 01 - 0 0

1 - 0 01 - 6 01 - 6 01 - 6 01 - 3 01 - 3 01 - 3 0

N.T.2 - 3 53 - 4 02 - 4 02 - 7 03 - 9 0N.T.2 - 7 03 - 5 2

3 - 1 85 - 7 05 - 4 03 - 6 56 - 1 86 - 9 03 - 3 05 - 6 55 - 1 8

5 - 4 06 - 8 17 - 3 05 - 6 07 - 5 17 - 9 35 - 4 86 - 7 07 - 2 4

5 . 9 37 - 1 87 . 5 46 - 5 47 . 9 38 - 2 46 - 4 07 - 0 07 - 8 1

6 - 2 47 - 6 07 - 7 86 - 7 48 - 1 88 - 4 86 - 6 07 - 4 87 . 9 3

6 - 3 07 - 8 17 - 8 56 - 8 88 - 4 88 - 6 06 - 7 47 - 6 08 - 0 0

5 5 0 C . t h e r e w as no g r o w t h a n d t h e number o f o r g a n i s m s r e c o v e r e d d e c r e a s e dw i t h s t o r a g e t i m e . Mean g e n e r a t i o n t i m e s i n t h e l o g a r i t h m i c p h a s e o f g r o w t h ,c a l c u l a t e d R o s e , 1 9 6 8 ) f r o m p l a t e c o u n t s o f B . c e r e u s i n b o i l e d r i c e a f t e r s t o r a g ef o r 4 a n d 9 h r . , w e r e i n t h e r a n g e 2 6 - 3 1 m i n . a t 3 0 0 C . a n d 3 0 - 5 4 m i n . a t 3 7 0 C .T o t a l c o l o n y c o u n t s on u n i n o c u l a t e d f r e s h l y b o i l e d r i c e s t o r e d a t 3 0 0 a n d 3 7 0 C .f o r 2 4 h r . w e r e 2 - 4 x 1 0 3 / g . a n d 3 - 5 x 1 0 3 / g . r e s p e c t i v e l y .T h e e f f e c t s o f t h e b o i l i n g , s t o r a g e , f r y i n g a n d s t o r a g e s e q u e n c e o n t h e s u r v i v a la n d g r o w t h o f BC 2 a n d 9 a r e s h o w n i n F i g s . 4 - 5 . F i g . 4 s h o w s t h e r a n g e o f c o u n t so f B . c e r e u s f r o m 3 s a m p l i n g s i t e s w i t h i n t h e r i c e a n d i n d i c a t e s an u n e v e n d i s t r i -b u t i o n o f o r g a n i s m s w h i c h most p r o b a b l y o c c u r r e d w h e n t h e r i c e was i n o c u l a t e d .I n g e n e r a l , p l a t e c o u n t s on b o i l e d r i c e w e r e g r e a t e r f o r s a m p l e s t a k e n f r o m t h es u r f a c e t h a n f o r t h o s e t a k e n f r o m t h e m i d d l e o r b a s e o f t h e r i c e b u l k .

C o u n t s o f BC 2 a n d 9 were < 2 0 / g . i n i n o c u l a t e d b o i l e d r i c e s a m p l e d i m m e d i a t e l y

4 3 9


8/12

R . J . G I L B E R T , M . F . S T R I N G E R A N D T . C . P E A C E1 0 8 r

1 0 7 l

1 0 6 ia

00C )

U0v

1 0 4 I

1 0 3

1 0 2 1

I n o c u l u m A

I

I J JB C D

T r e a t m e n tE F

F i g . 4 . Range o f c o u n t s o f B . c e r e u w i n b o i l e d an d f r i e d r i c e a f t e r c o o k i n g an di s t o r a g e . x , c u l t u r e BC 2 ; 0 , c u l t u r e BC 9 .C u m u l a t i v eKey P l a t e c o u n t a f t e r t i m e h r . )

ABCDEF

B o i l i n g 2 5 m i n . )S t o r a g eF r y i n g 1 j m i n . )S t o r a g eF r y i n g 1 m i n . )S t o r a g e

02 42 44 84 87 2

a f t e r p r e p a r a t i o n a n d a f t e r s t o r a g e f o r 2 h r . V i a b l e s p o r e s w e r e p r e s e n t i n t h e r i c e ,h o w e v e r , b e c a u s e v e g e t a t i v e g r o w t h o c c u r r e d on s u b s e q u e n t s t o r a g e F i g . 5 .A f t e r 2 4 h r . s t o r a g e l a r g e n u m b e r s o f B . c e r e u s were p r e s e n t i n t h e b o i l e d r i c e a n dm i c r o s c o p i c e x a m i n a t i o n s h o w e d t h a t many o f t h e v e g e t a t i v e c e l l s c o n t a i n e d s p o r e s .R a p i d f r y i n g r e d u c e d t h e n u m b e r o f o r g a n i s m s b u t t ho s e t h at s u r v i v e d , p r e s u m a b l yh e a t - r e s i s t a n t s p o r e s , w e r e c a p a b l e o f g e r m i n a t i o n a n d o u t g r o w t h . G r o w t h a n ds p o r e f o r m a t i o n o c c u r r e d w h e n t h e f r i e d r i c e was s t o r e d a g a i n a t room t e m p e r a t u r e .T h e r e w a s a s e c o n d r a p i d f a l l i n b a c t e r i a l n u m b e r s w h e n t h e r i c e w a s r e f r i e d a n ds u b s e q u e n t s t o r a g e f o r a t h i r d t i m e a g a i n e n c o u r a g e d b a c t e r i a l g r o w t h .

I c

4 4 0

l o s s


9/12

B . c e r e u s i n c o o k e d r i c e

1 0 8

B o i l e d F r i e d r i c e 1r i c e F F r yF r y F r y

1 0 7

1 0 6

I / .

0

~ 1 0 40~~~~~~~~~

1 0 3C~~~~~1 0 ,

0 2 4 4 8 7 2S t o r a g e t i m e a t 2 3 - 2 6 C h r .F i g . 5 . E f f e c t o f c o o k i n g and s t o r a g e o n t h e g r o w t h o f B . c e r e u s B C 2 ) i n b o i l e da n d f r i e d r i c e . P o i n t s p l o t t e d a r e m e d i a n v a l u e s o f c o u n t s on 3 s a m p l e s o f r i c e .

DISCUSSIONT h e e x p e r i m e n t s d e s c r i b e d i n t h i s p a p e r w e r e d e s i g n e d t o s i m u l a t e t h e t i m e sa n d m e t h o d s o f c o o k i n g a n d t h e s t o r a g e c o n d i t i o n s u s e d b y s o m e C h i n e s e r e s -

t a u r a t e u r s P e r r y , 1 9 7 4 ; M o r t i m e r M c C a n n , 1 9 7 4 ) .I t a p p e a r s t o b e t h e p r a c t i c e i n many C h i n e s e r e s t a u r a n t s a n d t a k e - a w a ys h o p s t o s a v e p o r t i o n s o f b o i l e d r i c e f r o m b u l k c o o k i n g u n t i l r e q u i r e d f o r f r y i n g .T h e b o i l e d r i c e i s a l l o w e d t o d r y o f f a t room t e m p e r a t u r e f o r v a r y i n g p e r i o d so f t i me f r o m a f e w h o u r s t o a b o u t 3 d a y s , b u t u s u a l l y o v e r n i g h t . T h e r i c e i s t h e ne i t h e r r e h e a t e d o r more u s u a l l y f r i e d f o r a v e r y s h o r t t i m e w i t h b e a t e n e g g a n d as m a l l amount o f o i l b e f o r e s e r v i n g : t h e b e a t e n e g g i s n o t a l w a y s f r e s h l y p r e p a r e da n d may i t s e l f b e h i g h l y c o n t a m i n a t e d w i t h a v a r i e t y o f b a c t e r i a . T h e C h i n e s e a r er e l u c t a n t t o s t o r e b o i l e d r i c e i n a r e f r i g e r a t o r b e c a u s e t h e y s a y t h e r i c e g r a i n s s t i c kt o g e t h e r a n d i t b e c o m e s d i f f i c u l t t o t o s s t h e m i n b e a t e n e g g d u r i n g f r y i n g . I nsome i n s t a n c e s t h e f r i e d r i c e i s s t o r e d a t room t e m p e r a t u r e a n d f l a s h f r i e d a g a i nb e f o r e s e r v i n g .

4 4 1

2 8 HYG 7 3


10/12

R . J . G I L B E R T , M . F . S T R I N G E R AND T . C . P E A C ET h e s i t u a t i o n i s made w o r s e by t h e p r e p a r a t i o n o f l a r g e b u l k s o f b o i l e d r i c e

w h i c h t a k e s e v e r a l h o u r s t o c o o l d o w n , a n d t h e r e a r e r e p o r t s M o r t i m e r M c C a n n ,1 9 7 4 ) o f t h e p r a c t i c e o f a d d i n g f r e s h b a t c h e s o f b o i l e d r i c e t o t he r e m a i n s o f o l d ,w h i c h a r e s o m e t i m e s l e f t o v e r f r o m t h e p r e v i o u s d a y . W h e t h e r t h e b o i l e d r i c e i sa l l o w e d t o d r y o f f f o r v a r y i n g p e r i o d s o f t i m e a t k i t c h e n t e m p e r a t u r e o r i s l e f ti n o r n e a r a warm o v e n , c o n d i t i o n s may b e i d e a l f o r t h e g e r m i n a t i o n a n d o u t g r o w t ho f s p o r e s w h i c h h a v e s u r v i v e d t h e b o i l i n g p r o c e s s .B a c i l l u s c e r e u s i s common i n s o i l a n d o n v e g e t a t i o n a n d h a s b e e n i s o l a t e d i ns e v e r a l c o u n t r i e s f r o m a w i d e v a r i e t y o f r o u t i n e s a m p l e s o f f o o d N y g r e n , 1 9 6 2 ;J a n t e a , M i l o s e s c u , B i s t r i c e a n u B a d - O p r i s e s c u , 1 9 6 5 ; M o s s e l , Koopman J o n g e r i u s , 1 9 6 7 ; Kim G o e p f e r t , 1 9 7 1 ) . N y g r e n 1 9 6 2 ) , f o r e x a m p l e , r e p o r t e d a ni s o l a t i o n r a t e o f 4 7 - 8 a f t e r e x a m i n a t i o n o f 3 , 8 8 8 s a m p l e s o f f o o d a n d f o o di n g r e d i e n t s i n S w e d e n . I n f o o d p o i s o n i n g o u t b r e a k s i n t h i s c o u n t r y t h e m o s t l i k e l ys o u r c e o f B . c e r e u s i s t h e u n c o o k e d r i c e . The h e a t r e s i s t a n c e o f B . c e r e u s d u r i n g t h eb o i l i n g , f r y i n g o r r e h e a t i n g o f r i c e i s i m p o r t a n t a n d t h e d a t a p r e s e n t e d s h o w t h a to r g a n i s m s , p r e s u m a b l y s p o r e s , s u r v i v e c o o k i n g a n d a r e c a p a b l e o f g e r m i n a t i o na n d o u t g r o w t h .

T h e D 1 0 0 0 v a l u e s o f t h e n i n e s p o r e s u s p e n s i o n s o f B . c e r e u s s t u d i e d w e r e i nt h e r a n g e 1 - 2 - 7 - 5 m i n . , s i m i l a r t o t h o s e r e p o r t e d b y M u r r e l l W a r t h 1 9 6 5 )0 - 8 - 1 4 - 2 m i n . , B r i g g s 1 9 6 6 ) 5 - 5 m i n . a n d M o l i n S n y g g 1 9 6 7 ) 8 - 0 m i n . , f o rs p o r e s h e a t e d i n a q u e o u s s u s p e n s i o n o r p h o s p h a t e b u f f e r . I n t h e p r e s e n t s t u d yv a r i a t i o n s i n s p o r u l a t i o n medium a n d i n c u b a t i o n c o n d i t i o n s h a d l i t t l e e f f e c t o nt h e h e a t r e s i s t a n c e o f t h e s p o r e s p r o d u c e d a n d n o n e o f t h e s p o r e s u s p e n s i o n s s h o w e da n y e v i d e n c e o f e x c e p t i o n a l r e s i s t a n c e t o h e a t .

R e s u l t s f r o m g r o w t h e x p e r i m e n t s i n b o i l e d r i c e i n o c u l a t e d w i t h s p o r e s u s p e n -s i o n s o f B . c e r e u s B C 2 , 9 o r 2 5 ) s h o w e d t h a t t h e o p t i m u m t e m p e r a t u r e f o rv e g e t a t i v e c e l l g r o w t h w a s b e t w e e n 3 0 0 a n d 3 7 0 C . T h e minimum t e m p e r a t u r e f o rv e g e t a t i v e g r o w t h w a s b e t w e e n 1 0 0 a n d 1 5 0 C . M o l 1 9 5 7 ) r e p o r t e d t h a t B . c e r e u sw o u l d g r o w i n y e a s t e x t r a c t p h o s p h a t e b r o t h w h e n s t o r e d a t 1 2 0 C . f o r a f e w d a y sb u t n o t a t 8 0 C . when h e l d a s l o n g a s 4 m o n t h s .T h e o u t b r e a k s o f f o o d p o i s o n i n g a t t r i b u t e d t o B . c e r e u s i n G r e a t B r i t a i n s i n c e1 9 7 1 d i f f e r i n a n u m b e r o f r e s p e c t s s u c h a s i n c u b a t i o n p e r i o d , s y m p t o m s a n d f o o dv e h i c l e s , f r o m o u t b r e a k s h i t h e r t o r e p o r t e d i n s e v e r a l o t h e r c o u n t r i e s H a u g e , 1 9 5 0 ,1 9 5 5 ; G oe p f e r t , S p i r a K i m , 1 9 7 2 ) . T h e s h o r t i n c u b a t i o n p e r i o d b e t w e e n 1 a n d5 h r . ) f o r t h e e p i s o d e s i n t h i s c o u n t r y i s o f p a r t i c u l a r i n t e r e s t a n d i t s u g g e s t s t h a tt h e i l l n e s s i s c a u s e d b y a t o x i n p r o d u c e d i n t h e r i c e . T h e l a r g e n u m b e r s o f B . c e r e u si s o l a t e d f r o m s a m p l e s o f f r i e d o r b o i l e d r i c e i m p l i c a t e d i n o u t b r e a k s i n d i c a t e st h a t n e i t h e r t h e o r g a n i s m s s p o r e s ) n o r t h e t o x i n a r e d e s t r o y e d i n t h e p r o c e s s o ff r y i n g o r r e h e a t i n g . Work i s i n p r o g r e s s o n t h e t y p i n g o f B . c e r e u s u s i n g a n t i s e r ap r o d u c e d i n r a b b i t s a g a i n s t H a n t i g e n s .

U n t i l t h e m e t h o d s d e s c r i b e d i n t h i s p a p e r f o r t h e p r e p a r a t i o n a n d i n p a r t i c u l a rt h e s t o r a g e o f c o o k e d r i c e a r e d i s c o n t i n u e d , o u t b r e a k s o f f o o d p o i s o n i n g w i l lo c c u r . L o n g , s l o w c o o l i n g a n d n o n - r e f r i g e r a t e d s t o r a g e o f c o o k e d r i c e , i n d e e d o fa l l c o o k e d f o o d s , p r o v i d e i d e a l c o n d i t i o n s f o r b a c t e r i a l g r o w t h p a r t i c u l a r l y f r o ms u r v i v i n g s p o r e s . To p r e v e n t f u r t h e r o u t b r e a k s :

4 4 2


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B . c e r e u s i n c o o k e d r i c e 1 ) R i c e s h o u l d b e b o i l e d i n s m a l l e r q u a n t i t i e s o n s e v e r a l o c c a s i o n s d u r i n g t h e

d a y , t h e r e b y r e d u c i n g t h e s t o r a g e t i m e b e f o r e f r y i n g . 2 ) A f t e r b o i l i n g t h e r i c e s h o u l d e i t h e r b e k e p t h o t , a t n o t l e s s t h a n 6 3 C . 1 4 5 0 F . ) , or c o o l e d q u i c k l y a n d t r a n s f e r r e d t o a r e f r i g e r a t o r w i t h i n 2 h r . o f c o o k i n g .T h e c o o l i n g o f r i c e , e s p e c i a l l y l a r g e b u l k s o f b o i l e d r i c e , w i l l b e h a s t e n e d by d i v i d i n gt h e p r o d u c t i n t o s e p a r a t e p o r t i o n s o r by s p r e a d i n g t h e b u l k i n c l e a n s h a l l o wc o n t a i n e r s . 3 ) B o i l e d o r f r i e d r i c e m u s t n o t b e s t o r e d u n d e r warm c o n d i t i o n s a n d n e v e r a ta t e m p e r a t u r e b e t w e e n 1 5 0 a n d 5 0 0 C . U n d e r n o c i r c u m s t a n c e s , t h e r e f o r e , s h o u l dc o o k e d r i c e b e s t o r e d a t k i t c h e n t e m p e r a t u r e f o r m o r e t h a n 2 h r . 4 ) T h e b e a t e n e g g u s e d i n t h e p r e p a r a t i o n o f f r i e d r i c e s h o u l d b e f r e s h l yp r e p a r e d .

W e a r e g r a t e f u l t o Dr T . A . R o b e r t s , M e a t R e s e a r c h I n s t i t u t e , L a n g f o r d , B r i s t o l ,f o r u n d e r t a k i n g t h e c o m p u t e r a n a l y s i s o f r e s u l t s f r o m t h e h e a t - r e s i s t a n c e s t u d i e sa n d t o Dr B e t t y C . H o b b s f o r h e r a d v i c e a n d e n c o u r a g e m e n t . W e a r e a l s o i n d e b t e dt o t h e many P u b l i c H e a l t h I n s p e c t o r s who s u p p l i e d u s w i t h i n f o r m a t i o n o n C h i n e s er e s t a u r a n t s a n d t h e i r c u l i n a r y p r o c e d u r e s .

Tw o o f u s a r e g r a t e f u l t o t h e P u b l i c H e a l t h L a b o r a t o r y S e r v i c e f o r g r a n t sw h i c h e n a b l e d u s t o w o r k i n t h e F o o d H y g i e n e L a b o r a t o r y d u r i n g o u r u n d e r g r a d -u a t e s t u d i e s a t t h e U n i v e r s i t y o f W a l e s M . F . S . ) a n d t h e U n i v e r s i t y o f B a t h T . C . P . .

REFERENCESB R I G G s , A . 1 9 6 6 ) . The r e s i s t a n c e o f s p o r e s o f t h e g e n u s B a c i l l u 8 t o p h e n o l , h e a t a n d r a d i a t i o n .J o u r n a l o f A p p l i e d B a c t e r i o l o g y 2 9 , 4 9 0 .G O E P F E R T , J . M . , S P I R A , W . M. K I M , H. U . 1 9 7 2 ) . B a c i l l u 8 c e r e u 8 : f o o d p o i s o n i n g o r g a n i s m .A r e v i e w . J o u r n a l o f M i l k an d Food T e c h n o l o g y 3 5 , 2 1 3 .GORDON, R . E . S M I T H , M. M. 1 9 5 5 ) . P r o p o s e d g r o u p o f c h a r a c t e r s f o r t h e s e p a r a t i o n o fS t r e p t o m y c e 8 and N o c a r d i a . J o u r n a l o f B a c t e r i o l o g y 6 9 , 1 4 7 .HAuGE, S . 1 9 5 0 ) . M a t f o r g i f t n i n g e r f r e m k a l t av B a c i l l u s c e r e U 8 . N o r d i s k H y g i e n i 8 k T i d s k r i f t3 1 , 1 8 9 .HAUGE, S . 1 9 5 5 ) . Food p o i s o n i n g c a u s e d by a e r o b i c s p o r e - f o r m i n g b a c i l l i . J o u r n a l o f A p p l i e dB a c t e r i o l o g y 1 8 , 5 9 1 .J A N T E A , F . , M I L O S E S C U , P . , B I S T R I C E A N U , E . B A D - O P R I S E S C U , D . 1 9 6 5 ) . I n c i d e n t a B a c .

c e r e u 8 i n p r e p a r a t e c u l i n a r e . M i c r o b i o l o g i a P a r a z i t o l o g i a E p i d e m i o l o g i a 1 0 , 1 6 3 .K I M , H . U . G O E P F E R T , J . M. 1 9 7 1 ) . O c c u r r e n c e o f B a c i l l u s c e r e u s i n s e l e c t e d d r y f o o dp r o d u c t s . J o u r n a l o f Milk an d Fo od T e c h n o l o g y 3 4 , 1 2 .L E F E B V R E , A . , G R E G O I R E , C . A . , B R A B A N T , W . TODD, E . 1 9 7 3 ) . S u s p e c t e d B a c i l l u s c e r e u sf o o d p o i s o n i n g . E p i d e m i o l o g i c a l B u l l e t i n , C a n a d a 1 7 , 1 0 8 .L O N G , S . K. W I L L I A M S , 0 . B . 1 9 5 8 ) . Method f o r r e m o v a l o f v e g e t a t i v e c e l l s f r o m b a c t e r i a ls p o r e p r e p a r a t i o n s . J o u r n a l o f B a c t e r i o l o g y 7 6 , 3 3 2 .M i E E s , A . A . M I S R A , S . S . 1 9 3 8 ) . The e s t i m a t i o n o f t h e b a c t e r i c i d a l p o w e r o f t h e b l o o d .J o u r n a l o f H y g i e n e 3 8 , 7 3 2 .M O L , J . H. H. 1 9 5 7 ) . The t e m p e r a t u r e c h a r a c t e r i s t i c s o f s p o r e g e r m i n a t i o n an d g r o w t h o fB a c i l l u s c e r e u s . J o u r n a l o f A p p l i e d B a c t e r i o l o g y 2 0 4 5 4 .M O L I N , N . S N Y G G , B . G . 1 9 6 7 ) . E f f e c t o f l i p i d m a t e r i a l s on h e a t r e s i s t a n c e o f b a c t e r i a l

s p o r e s . A p p l i e d M i c r o b i o l o g y 1 5 , 1 4 2 2 .MORTIMER, P . R . MCCANN, G . 1 9 7 4 ) . Food p o i s o n i n g e p i s o d e s a s s o c i a t e d w i t h B a c i l l u sc e r e u s i n f r i e d r i c e . L a n c e t i , 1 0 4 3 .2 8 - 2

4 E 4 X - = - 3


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4 4 4 R . J . G I L B E R T , M . F . S T R I N G E R AND T . C . PEACEM O S S E L , D . A . A . , KooPmAN, M. J . J O N G E R r u s , E . 1 9 6 7 ) . E n u m e r a t i o n o f B a c i l l u s c e r e u si n f o o d s . A p p l i e d M i c r o b i o l o g y 1 5 , 6 5 0 .MURRELL, W . G . WARTH, A . D . 1 9 6 5 ) . C o m p o s i t i o n and h e a t r e s i s t a n c e o f b a c t e r i a l s p o r e s .I n S p o r e s e d . L . L . C a m p b e l l and H. 0 . H a l v e r s o n ) , v o l . I I I , p . 1 . An n A r b o r , M i c h i g a n :A m e r i c a n S o c i e t y f o r M i c r o b i o l o g y .N A V A N I , S . K . , S C H O L E F I E L D , J . K I B B Y , M. R . 1 9 7 0 ) . A d i g i t a l c o m p u t e r p r o g r a m f o r

t h e s t a t i s t i c a l a n a l y s i s o f h e a t r e s i s t a n c e d a t a a p p l i e d t o B ac i l l u s s t e a r o t h e r m o p h i l u s .J o u r n a l o f A p p l i e d B a c t e r i o l o g y 3 3 , 6 0 9 .NYGREN, B . 1 9 6 2 ) . P h o s p h o l i p a s e C - p r o d u c i n g b a c t e r i a a n d f o o d p o i s o n i n g . A c t a p a t h o l o g i c ae t m i c r ob i ol o g i c a s c a n d i n a v i c a , S u p p l e m e n t u m 1 6 0 , 1 .P E R R Y , J . 1 9 7 4 ) . Food p o i s o n i n g f r o m f r i e d r i c e . E n v i r o n m e n t a l H e a l t h 8 2 , 5 0 .P U B L I C HEALTH LABORATORY S E R V I C E 1 9 7 2 ) . Food p o i s o n i n g a s s o c i a t e d w i t h B a c i l l u sc e r e u s . B r i t i s h M e d i c a l J o u r n a l i , 1 8 9 .P u B L I c HEALTH LABORATORY S E R V I C E 1 9 7 3 ) . B a c i l l u s c e r e u s f o o d p o i s o n i n g . B r i t i s h M e d i c a lJ o u r n a l i i i , 6 4 7 .R O S E , A . H . 1 9 6 8 ) . C h e m i c a l M i c r o b i o l o g y , 2 n d e d . , p . 2 5 3 . L o n d o n : B u t t e r w o r t h s an d C o . P u b l i s h e r s ) L t d .

The Survival and Growth of Bacillus Cereus in Rice

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