Nuclear jak3 and its involvement in cd4 activation
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Unité d’Immunogenétique Cellulaire, Département Infection et Epidémiologie et Département d’Immunologie, Institut Pasteur, Paris, France.
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Unité d’Immunogenétique Cellulaire, Département Infection et Epidémiologie et Département d’Immunologie, Institut Pasteur, Paris,
France.
Es un microscopio óptico, la luz que
incide sobre la muestra estudiada no la
atraviesa sino que el mismo lente
ilumina y recibe la luz emitida por la
muestra. Su funcionamiento se basa
en la propiedad de fluorescencia que
tienen ciertas moléculas denominadas
fluorocromos.
Los fluorocromos son sustancias que tienen
la propiedad de emitir un fotón de una
longitud de onda determinada cuando son
excitados por un fotón incidente de una
longitud de onda característica.
Fuente de emisión
Filtro de ExcitaciónFiltro de barrera
Espejo dicroico
Muestra
1. La lámpara emite luz en todo el espectro
2. El filtro de excitación sólo deja pasar la parte del
espectro necesaria para excitar la muestra
3. El espejo dicroico refleja hacia la muestra la excitación
correspondiente.
4. La muestra se excita con la luz que le llega y emite en un espectro superior al
de la excitación.
5. El espejo dicroico transmite la emisión de la muestra
6. El filtro barrera hace una selección exacta del espectro de emisión que nos interesa.
Filtro de excitación:selecciona la luz de lalongitud de ondaincidente.
Espejo dicroico: refleja laluz de ciertas longitudesde onda mientras quedeja pasar la luz delongitudes de ondamayores.
Filtro de emisión obarrera: selecciona lalongitud de ondafluorescente emitida porel fluorocromopermitiendo que lleguehasta los oculares.
Objetivos: Pata obteneruna intensidad de laseñal óptima se debeemplear una aperturanumérica elevada y elmenor aumento posible.
Fluorocromos utilizados::
• Anticuerpo de conejo anti-JAK3
• Anticuerpo de conejo anti-pY980-JAK3
• Anticuerpo ratón anti-CD4
• DAPI
CD4
Dapi
JAK3
Localización nuclear de
JAK3 en los linfocitos CD4.
Cada celda está representada con y sin núcleoDapi y, con y sin etiquetado CD4 para visualizarmejor la presencia de JAK3 en el núcleo ycitoplasma.
CD4
Dapi
pY980-JAK3
Localización nuclear de JAK3
fosforilada en los linfocitos CD4.
Cada celda está representada con y sin núcleoDapi y, con y sin etiquetado CD4 para visualizarmejor la presencia de JAK3 fosforilado en elnúcleo y citoplasma.
La microscopía de fluorescencia se aplica a la determinación cuantitativa de aminoácidos, proteínas, ácidos
nucleicos y muchos fluorocromos celulares.
Este tipo de técnica ha sido importante en el estudio de señalización de enfermedades como el SIDA.
Por primera vez, se muestra localización nuclear de JACK3.
El JAK3 se observa en su ubicación subcelular en cantidades comparables, en los núcleos de los linfocitos CD4 de
pacientes sanos e infectados por VIH.
El estudio demostró que la infección por VIH no afecta la localización nuclear de JAK3.
Se demostró que la JAK3 fosforilada es mas abundante en los núcleos de las células T CD4+ de los pacientes
virémicos, y puede estar implicado en la patogénesis de la infección.
