NTC5135

NORMA TÉCNICA NTC COLOMBIANA 5135

2002-12-13

LECHE. DETERMINACIÓN DEL PUNTO DE CONGELACIÓN. MÉTODO DEL CRIOSCOPIO TERMISTOR (MÉTODO DE REFERENCIA) E: MILK. DETERMINATION OF FREEZING POINT. THERMISTOR

CRYOSCOPE METHOD (REFERENCE METHOD)

CORRESPONDENCIA: Esta norma es idéntica (IDT) a la ISO

5764:2002 - IDF 106:2002 DESCRIPTORES: leche; punto de congelación. I.C.S.: 67.100.10 Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC) Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. 6078888 - Fax 2221435

Prohibida su reproducción Editada 2003-01-22

PRÓLOGO El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993. ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en los mercados interno y externo. La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último caracterizado por la participación del público en general. La NTC 5135 fue ratificada por el Consejo Directivo del 2002-12-13. Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en todo momento a las necesidades y exigencias actuales. A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a través de su participación en el Comité Técnico 311201 Leche y productos lácteos. ALGARRA S.A. ALPINA PRODUCTOS ALIMENTICIOS S.A. CARULLA VIVERO S.A. CHRISTIAN HANSEN - CENTRO AGROLECHERO CONSEJO NACIONAL LÁCTEO CONSEJO NACIONAL DE LA LECHE Y PREVENCIÓN DE LA MASTITIS COOPERATIVA DE LECHEROS DE ANTIOQUIA - COLANTA

INSTITUTO COLOMBIANO AGROPECUARIO - ICA INDEPENDIENTE - HUGO PARDO LA ALQUERÍA S.A. LARKIN LTDA MEALS DE COLOMBIA S.A . NESTLÉ DE COLOMBIA S.A. PARMALAT COLOMBIA LTDA - PROCESADORA DE LECHES S.A., PROLECHE PLASTILENE S.A.

Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las siguientes empresas: ASOCIACIÓN NACIONAL DE INDUSTRIALES ASOCIACIÓN NACIONAL DE LECHEROS - ANALAC COOPERATIVA DE LECHEROS DE LA COSTA - COOLECHERA FRESKALECHE S.A. FRIESLAND COLOMBIA – COLPURACE

INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA DE MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS - INVIMA JAIRO PASACHOA – INGENIERO DE ALIMENTOS LA CAMPIÑA S.A. MINISTERIO DE SALUD

SECRETARIA DISTRITAL DE SALUD UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados normas internacionales, regionales y nacionales.

DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN

NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5135

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LECHE. DETERMINACIÓN DEL PUNTO DE CONGELACIÓN. MÉTODO DEL CRIOSCOPIO TERMISTOR. (MÉTODO DE REFERENCIA) 0. INTRODUCCIÓN 0.1 Esta norma es una adopción idéntica por traducción a la cual se le hicieron cambios editoriales y se le adicionó el Anexo informativo D. 0.2 El método descrito en esta norma emplea un aparato, el crioscopio termistor, denominado usualmente "crióscopo", en el cual un instrumento controlado termostáticamente se enfría y se usa un probador termistor para la medición del punto de congelación. Este método de referencia requiere el uso de instrumentos temporizados que buscan "mesetas". Para mediciones de rutina, se pueden usar otros métodos de crioscopio termistor, por ejemplo, se pueden usar procedimientos de tiempo fijo. Las guías para la aplicación de otros procedimientos se encuentran en el Anexo B. 1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN 1.1 Esta norma establece el método crioscópico de referencia para la determinación del punto de congelación en leche cruda, pasteurizada, tratada por UHT, o esterilizada, ya sean enteras, parcialmente descremadas y descremadas. El punto de congelación se puede usar para estimar la proporción de agua extraña agregada a la leche. El cálculo de la cantidad de esta agua es complicado debido a la variación diaria, estacional, etc., y no está dentro del alcance de esta norma. Los resultados obtenidos desde muestras con una acidez titulable que exceda de 20 ml de solución de hidróxido de sodio (de concentración 0,1 mol/L) por 10 g de sólidos no grasos no será representativa de la leche original. NOTA La esterilización y la pasteurización al vacío pueden afectar el punto de congelación de la leche. 2. REFERENCIAS NORMATIVAS Las siguientes normas contienen disposiciones que, mediante su referencia en esta norma, constituyen parte de ésta. Para referencias fechadas, se aplica únicamente la edición citada. Par referencias no fechadas, se aplica la última edición del documento referenciado (incluida


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cualquier corrección). Sin embargo, se invita a las partes que realizan acuerdos basados en esta norma, a investigar la posibilidad de aplicar la última versión de las normas mencionadas. NTC 4978:2001, Leche y productos lácteos. Método de determinación de la acidez. ISO 707, Milk and Milk Products. Guidance on Sampling. (NTC 666:1996) ISO 1042, Laboratory glassware. One-Mark Volumetric Flasks (NTC 2492:1999) ISO 3696, Water for Analytical Laboratory Use - Specification and Test Methods ISO 5725-1, Accuracy (Trueness and Precision) of Measurement Methods and Results. Part 1: General Principles and Definitions. (NTC 3529-1). ISO 5725-2, Accuracy (Trueness and Precision) of Measurement Methods and Results. Part 2. Basic Method for the Determination of Repeatability and Reproducibility of Standard Measurement Method. (NTC 3529-2). 3. TÉRMINOS Y DEFINICIONES Para los propósitos de esta norma, se aplican los siguientes términos y definiciones. 3.1 punto de congelación de la leche valor obtenido usando el método especificado en esta norma. NOTA El punto de congelación se expresa en miligrados Celsius (m°C). 4. PRINCIPIO Sobreenfriar una muestra para ensayo a una temperatura apropiada e inducir la cristalización, por medios suficientes para causar una liberación instantánea de calor acompañada de calentamiento de la muestra hasta una meseta de temperatura. Éste punto se alcanza cuando el aumento de temperatura no excede de 0,5 m°C en los últimos 20 s. La temperatura así obtenida corresponde al punto de congelación de la muestra de leche. El instrumento de medición se calibra ajustándolo para dar lecturas con dos soluciones normalizadas de cloruro de sodio, usando el mismo procedimiento que se usa para las muestras de leche. 5. REACTIVOS Se usan sólo reactivos de calidad analítica reconocida, a menos que se especifique de otra manera. 5.1 AGUA Que cumpla con el Grado 2 de acuerdo con la norma ISO 3696 o de calidad equivalente, destilada en un aparato de vidrio borosilicato. Hervir el agua y dejarla enfriar hasta 20 °C ± 2 °C, justo antes de su uso.


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5.2 CLORURO DE SODIO, NaCl Molido finamente, secado en un horno eléctrico (véase el numeral 6.7), a 300 °C ± 25 °C durante 5 h, o secado alternativamente en una estufa (véase el numeral 6.8), a 130 °C ± 2 °C, durante por lo menos 24 h, dejándolo enfriar hasta temperatura ambiente en un desecador (véase el numeral 6.9). 5.3 SOLUCIÓN NORMALIZADA DE CLORURO DE SODIO Pesar en un matraz (véase el numeral 6.5) con aproximación al 0,1 mg, la cantidad apropiada (véase la Tabla 1) de cloruro de sodio seco (véase el numeral 5.2). Disolver en agua (véase el numeral 5.1) y transferirlo a un recipiente volumétrico aforado de 1 000 ml (véase el numeral 6.6). Diluir hasta la marca de 1 000 ml con agua (véase el numeral 5.1) a 20 °C ± 2 °C y se mezcla. Alternativa y preferiblemente, compensar la solución normalizada de cloruro de sodio sobre una base de gramo por kilogramo (véase la Tabla 1, segunda columna) en peso de la cantidad requerida de cloruro de sodio seco preparado (véase el numeral 5.2) con aproximación al 0,1 mg más cercano y disolver éste en exactamente 1 kg de agua (véase el numeral 5.1). Almacenar la solución normalizada a aproximadamente 5 °C, en recipientes de polietileno bien tapados (véase le numeral 6.10) y de una capacidad no mayor que 250 ml. Antes de usar la solución normalizada, invertirla y rotar suavemente el recipiente varias veces para mezclar su contenido completamente. En ningún momento se debe agitar fuertemente la solución normalizada porque se puede incorporar aire. Vertir las muestras de solución normalizada desde los recipientes y nunca se deben usar pipetas para este propósito. No se deben usar soluciones normalizadas de recipientes con un volumen menor de un cuarto de su contenido, o que tengan más de dos meses de elaboración, o que contengan mohos visibles.

Tabla 1. Punto de congelación de las soluciones normalizadas de cloruro de sodio

Solución de NaCl a 20 °C, en g/L de solución

Solución de NaCl, en g/kg de agua

Punto de congelación, en m°C

6,731 6,763 - 400,0 6,868 6,901 - 408,0 7,587 7,625 - 450,0 8,444 8,489 - 500,0 8,615 8,662 - 510,0 8,650 8,697 -512,0 8,787 8,835 - 520,0 8,959 9,008 -530,0 9,130 9,181 - 540,0 9,302 9,354 - 550,0 9,422 9,475 - 557,0

10,161 10,220 - 600,0 Para este método de referencia, únicamente usar la solución normalizada de cloruro de sodio sin preservar. Para los métodos de rutina se pueden usar las soluciones normalizadas con agentes fungicidas o fungistáticos. Para una guía véase el Anexo B. 6. APARATOS Y EQUIPOS Aparatos y equipos usuales de laboratorio, en particular los siguientes:


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6.1 CRIOSCOPIO Consiste en un dispositivo de enfriamiento controlado termostáticamente, una sonda termistor con un circuito asociado y un dispositivo de lectura, un agitador para las muestras y un dispositivo de cristalización. Véase la Figura 1. 6.1.1 Dispositivo de enfriamiento Se pueden usar diferentes tipos de dispositivos de enfriamiento termostatados. Los siguientes tipos se dan como ejemplos.

- De inmersión: con un baño de enfriamiento con una capacidad almacenamiento adecuada;

- De circulación: con un flujo continua de líquido de enfriamiento alrededor de la

muestra; - De bloque de enfriamiento: un bloque de enfriamiento con una cantidad pequeña

de líquido de enfriamiento. Después de iniciar el congelamiento, permitir que la temperatura del líquido de enfriamiento alrededor del tubo de muestra sea constante a - 7,0 °C ± 0,5 °C. NOTA Un líquido de enfriamiento adecuado es una solución acuosa de 33 % (fracción volumétrica) de propilenglicol. 6.1.2 Dispositivo de medición, circuito asociado y dispositivo indicador de lectura El termistor debe ser del tipo sonda de vidrio, con un diámetro de 1,60 mm ± 0,4 mm y con una resistencia eléctrica entre 3 Ohms y 30 kOhms a 0 °C. El tipo y dimensiones del material del asta, incluyendo un posible relleno, no debe permitir una transferencia de calor en la muestra mayor de 2,5 x 10-3 J/s bajo las condiciones de operación. Cuando la sonda está en la posición de trabajo, la punta del termistor debe estar situada sobre el eje de la muestra y a distancias iguales desde las paredes internas y desde el fondo interior del tubo (véase la Figura 1). El termistor y el circuito asociado deben permitir al operador alcanzar una discriminación de 1 m°C o mejor, sobre un rango de – 400 m°C hasta – 600 m°C. La linearidad del circuito debe ser tal que no se introduzca un error mayor de 1 m°C en cualquier punto dentro del rango de – 400 m°C hasta 600 m°C cuando el instrumento es operado correctamente. El dispositivo indicador de lectura debe proveer una discriminación de 1 m°C o mejor, sobre un rango de al menos 0 m °C hasta – 1 000 m°C. 6.1.3 Dispositivo de agitación Usar un alambre o varilla de un metal inerte a la leche, para agitar la muestra para ensayo durante el enfriamiento. El alambre de agitación debe ser ajustable en cuanto a amplitud y estar colocado verticalmente de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El alambre debe vibrar lateralmente con una amplitud de 2 mm a 3 mm para asegurar que la temperatura dentro de la muestra permanece uniforme durante el enfriamiento. Al momento de su operación normal de agitación, el alambre no debe golpear la sonda de vidrio o la pared del tubo.


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Clave

1. Mandril

2. Tubo de la muestra

3. Alambre de agitación

4. Bulbo del termistor

50,5 ± 0,2

Ø 13,7 ± 0,3

1

2

3

4

Dimensiones en milímetros

Figura 1. Detalles del crioscopio termistor 6.1.4 Dispositivo para iniciar la congelación Puede ser cualquier dispositivo que, cuando opere, inicie instantáneamente la congelación de la muestra para ensayo cuando alcance -3,0 °C. Se puede usar el alambre de agitación (véase el numeral 6.1.3) para este propósito. Un método es aumentar la amplitud de vibración durante 1 s a 2 s, de modo tal que el agitador dé contra la pared del tubo de muestra (véase el numeral 6.2). 6.2 TUBOS PARA LA MUESTRA Los tubos para la muestra (véase la Figura 1) son de vidrio borosilicato, de 50,5 mm ± 0,2 mm de longitud; de 16,0 mm ± 0,2 mm de diámetro externo y de 13,7 mm ± 0,3 mm de diámetro interno. El espesor de pared, en todo el tubo, no debe variar en más de 0,1 mm. Los tubos deben ser de forma uniforme tal que los puntos de congelación se obtengan con volúmenes iguales de la misma solución. Se verifica la igualdad antes de usarlos. 6.3 FUENTE ELÉCTRICA Capaz de operar dentro de las especificaciones del fabricante. 6.4 BALANZA ANALÍTICA Capaz de pesar con aproximación a 0,1 mg.


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6.5 BOTELLAS DE PESAJE 6.6 MATRACES DE UN AFORO De 1 000 ml de capacidad que cumplan con los requisitos de ISO 1042, Clase A (NTC 2492:1999). 6.7 HORNO ELÉCTRICO Capaz de mantener una temperatura de 300 °C ± 25 °C. 6.8 ESTUFA DE SECADO Bien ventilada, capaz de mantener una temperatura de 130 °C ± 2 °C. 6.9 DESECADOR 6.10 BOTELLAS DE POLIETILENO De capacidad máxima de 250 ml, con tapón adecuado. 7. TOMA DE MUESTRAS La toma de muestras no hace parte de este método. Un método de toma de muestras recomendada se encuentra en la norma ISO 707 (NTC 666). Es importante que el laboratorio reciba una muestra que es verdaderamente representativa y que no ha sido alterada o cambiada durante el transporte o el almacenamiento. Si es necesario, las muestras para ensayo se pueden almacenar a una temperatura entre 0 °C y 6 °C. Es preferible ensayar las muestras inmediatamente llegan al laboratorio. 8. CALIBRACIÓN DEL CRIOSCOPIO Se asegura que el crioscopio (véase el numeral 6.1) esté en condiciones operativas de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se verifica la posición de la sonda, la amplitud de la vibración del alambre de agitación y la temperatura del instrumento de agitación (véase el numeral 6.1.1). Se seleccionan dos soluciones normalizadas de cloruro de sodio (véase la Tabla 1), de modo que sean las que más se acercan al valor esperado de punto de congelación de la leche en ensayo. La diferencia en los puntos de congelación de las dos soluciones normalizadas de cloruro de sodio no debe ser menor de 100 m°C. Se debe tener cuidado de que las temperaturas de las soluciones normalizadas de cloruro de sodio y las de la muestra de ensayo sean similares. Se vierten 2,5 ml ± 0,1 ml de las soluciones normalizadas de cloruro de sodio de la solución en un tubo para muestra (véase el numeral 6.2) limpio y seco y se calibra el crioscopio de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se usan tubos de muestra (véase el numeral 6.2), del mismo tipo de los usados durante el ensayo de la muestra. Después de esto, el crioscopio termistor está listo para el uso.


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9. PROCEDIMIENTO 9.1 PREPARACIÓN Si es necesario remover de la muestra para ensayo cualquier cuerpo extraño visible o grasa de mantequilla sólida mediante filtración en un recipiente limpio y seco. Mezclar la muestra completamente, usar un filtro que sea inerte a la leche y efectivo cundo se use a la temperatura del laboratorio. Iniciar el procedimiento en las muestras para ensayo a su temperatura de almacenamiento o después que han alcanzado la temperatura del laboratorio antes de comenzar la determinación. Sin embargo, las muestras para ensayo y las soluciones normalizadas de cloruro de sodio deben tener la misma temperatura al comienzo de la determinación. (Véase también el numeral 8.) 9.2 ACONDICIONAMIENTO DE LA MUESTRA Determinar la acidez titulable de la leche (NTC 4978), si existen dudas acerca de la condición de la muestra, en lo posible al mismo tiempo que la determinación del punto de congelación. Los resultados obtenidos para las muestras de ensayo con una acidez titulable que exceda 20 ml de solución de hidróxido de sodio 0,1 mol/L por 10 g de sólidos no grasos no será representativo de la leche original. 10. PROCEDIMIENTO 10.1 ENSAYOS PRELIMINARES Realizar verificaciones de los instrumentos de acuerdo con las instrucciones del fabricante. 10.2 ENSAYO DE CALIBRACIÓN DE RUTINA Antes de cada serie de determinaciones, se mide el punto de congelación de una solución normalizada de cloruro de sodio (véase el numeral 5.3), (por ejemplo una solución cuyo punto de congelación sea - 512 m°C), hasta que dos determinaciones consecutivas no difieran en más de 1 m °C. Recalibrar el crioscopio como se describe en el numeral 8, si el promedio aritmético de los dos resultados difieren del punto de congelación de la solución normalizada de cloruro de sodio usada en más de 2 m°C. Realizar la calibración de rutina por lo menos una vez por hora si el crioscopio está en uso continuo. 10.3 DETERMINACIÓN Se invierte suavemente y se rota el frasco con la muestra de leche varias veces para mezclar su contenido de tal modo que se evite la incorporación de aire. Vertir por medio de una pipeta limpia y seca 2,5 ml ± 0,1 ml de leche a un tubo para muestras limpio y seco. Hay que asegurarse que el vástago del termómetro y el agitador estén limpios y secos. Si fuera necesario se seca cuidadosamente con papel absorbente suave y limpio.


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Insertar el tubo de la muestra en el crioscopio calibrado (véase el numeral 6.1) de acuerdo con las instrucciones del fabricante y encender el instrumento para enfriar la muestra para ensayo e iniciar la congelación a - 3,0 °C ± 0,1 °C. La meseta se alcanza cuando el aumento de temperatura cerca de los últimos 20 s ha excedido 0,5 m°C. Para instrumentos con una resolución no mayor de 1 m°C, la meseta se alcanza tan pronto como la temperatura permanece constante durante 20 s y se registra esta temperatura. Abandonar el ensayo si por cualquier razón la congelación se inicia antes que la temperatura sea de – 3°C ± 0,1 °C, y repetir la determinación con otra muestra de leche de 2,5 ml ± 0,1 °C. Si también se congela esta segunda muestra antes de la temperatura especificada, se calienta una porción de muestra de ± 0,1 ml a 45 °C y se mantiene a esta temperatura durante 5 min para fundir la grasa. Luego se enfría de nuevo hasta la temperatura de ensayo y hacer la determinación inmediatamente. NOTA El tiempo entre el inicio del punto de congelación y la obtención del valor, y el tiempo durante el cual la temperatura permanece constante difieren de muestra en muestra y es mucho menor para agua y para soluciones de cloruro de sodio que para la leche. Cuando la medida se ha completado satisfactoriamente, retirar el tubo, enjuagar con agua y secar el termistor y el agitador con un papel absorbente, suave y limpio, y realizar una segunda determinación sobre otra muestra de leche. Si los dos puntos de congelación difieren más que el valor de la repetibilidad (véase el numeral 12.2), descartar el resultado y realizar dos determinaciones sobre otra muestra. 11. CÁLCULO Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS 11.1 CÁLCULO Si la calibración se confirma mediante el resultado de la verificación de calibración de rutina, tomar como resultado el promedio de los dos valores obtenidos, redondeados hasta la tercera cifra significativa. Si la calibración no se confirma, repetir el procedimiento. (Véase el numeral 10). 11.2 EXPRESIÓN DE RESULTADOS Expresar los resultados del ensayo de punto de congelación hasta tres cifras significativas. Redondear el promedio de los resultados como sigue: Si la cuarta cifra significativa es 5, cambiar la tercera cifra significativa al número par más cercano. En seguida se dan ejemplos de los resultados promedio redondeados de valores de punto de congelación (en miligrados Celsius).

Resultados por duplicado Resultado 1 Resultado 2

Valor promedio

- 540 - 542 - 541 - 541 - 542 - 542 - 540 - 541 - 540


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12. PRECISIÓN 12.1 ENSAYO INTERLABORATORIO Los valores para límites de repetibilidad y reproducibilidad se derivaron de ensayos interlaboratorio realizados de acuerdo con las normas ISO 5725-1 (NTC 3529-1) e ISO 5725-2 (NTC 3529-2). Detalles de los ensayos interlaboratorios de los métodos están resumidos en el Anexo A. Los valores derivados de este ensayo interlaboratorio no se pueden aplicar a rangos de concentraciones y matrices diferentes a los dados. NOTA La IDF establece una guía específica para los ensayos interlaboratorios sobre métodos de análisis y los productos lácteos. Está basado en la norma ISO 5725 (NTC 3529-1, NTC 3529-2, NTC 3529-3). 12.2 REPETIBILIDAD La diferencia absoluta entre valores independientes obtenidos en determinaciones por duplicado usando el mismo método, en material de ensayo idéntico, en el mismo laboratorio, por un mismo analista, usando el mismo equipo, en un intervalo de tiempo corto, no debe exceder de 4 m°C, en el 5 % de los casos. 12.3 REPRODUCIBILIDAD La diferencia absoluta entre valores obtenidos en determinaciones por duplicado y llevadas a cabo en laboratorios diferentes con la misma muestra, con distintos operadores y equipo, no debe exceder de 6 m °C, en el 5 % de los casos. 13. INFORME 13.1 El informe debe incluir la información siguiente: 13.1.1 Toda la información requerida para la identificación completa de la muestra para laboratorio; 13.1.2 Método de muestreo usado, si se conoce; 13.1.3 Método de muestreo usado con referencia a esta norma 13.1.4 Todos los detalles de operación no especificados en esta norma, o considerados como opcionales, junto con detalles de cualquier incidente que pueda influenciar los resultados; 13.1.5 La acidez titulable, si se determinó; 13.1.6 Los resultados de ensayo obtenidos, o si se verificó la repetibilidad, el resultado final citado obtenido.


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ANEXO A (Informativo)

RESULTADOS DE LOS ENSAYOS INTERLABORATORIOS

A.1 GENERALIDADES Después de un preestudio realizado en octubre de 1998, se realizó un estudio colaborativo internacional entre 19 laboratorios y trece países, en septiembre de 1999. El ensayo incluyó 18 muestras para ensayo, dividida en 36 duplicados a ciegas:

6 pares de muestras de leche descremada UHT en tres niveles diferentes;

6 pares de muestras de leche entera UHT a tres niveles diferentes;

6 pares de muestras de leche cruda a tres niveles diferentes; Los ensayos se organizaron por Netherlands Milk Control Station, Zutphen (NL) y el Inspectorate for Health Protection, Leeuwarden (NL). Las muestras para ensayo fueron preparadas y distribuidas por Cecalait, Poligny (FR), quienes también realizaron análisis estadísticos de acuerdo con la norma ISO 5725-1 (NTC 3529-1) e ISO 5725-2 (NTC 3529-2) para proporcionar datos de precisión como se muestra en las Tablas de la A.1 a la A.3. A.2 RESULTADOS DE LOS ENSAYOS

Tabla A.1. Resultados para los ensayos de leche descremada UHT

Muestra 1 2 3 4 5 6 Promedio grandea

Número de laboratorios participantes después de eliminar a los valores extremos

17 16 17 18 18 17

Valor promedio, m°C - 497,4 - 498,8 - 512,0 - 518,1 - 536,1 - 539,4 - 517,0 Desviación estándar de repetibilidad, sr , m°C Límite de repetibilidad, r (2,8 sr), m°C Coeficiente de variación de repetibilidad, %

1,2 3,3

0,23

1,0 2,9

0,21

1,2 3,2

0,22

1,1 3,0

0,21

1,2 3,3

0,22

1,0 2,9

0,19

1,1 3,1

0,21 Desviación estándar de reproducibilidad, sR, m°C Límite de reproducibilidad, R (2,8 sR), m°C Coeficiente de variación de reproducibilidad, %

1,2 3,5

0,25

1,3 3,6

0,26

1,2 3,3

0,23

1,6 4,5

0,31

1,4 4,0

0,31

2,0 5,6

0,37

1,5 4,2

0,29 a Los valores grandes promedio fueron calculados usando sólo datos de muestras sin eliminar a los valores

extremos. El valor grande promedio de la muestra fue calculado promediando. Todos los promedios estadísticos se calcularon a partir de la raíz cuadrada del promedio de las desviaciones al cuadrado.

Tabla A.2. Resultados para los ensayos de leche entera UHT

Muestra 1 2 3 4 5 6 Promedio

grandea Número de laboratorios participantes después de eliminar a los valores extremos

17 17 17 17 18 18


1,2 3,5

0,25

1,7 4,7

0,34

2,0 5,5

0,38

1,1 3,1

0,22

1,4 3,9

0,26

1,2 3,4

0,22

1,5 4,1


2,0 5,6

0,41

2,3 6,4

0,46

2,7 7,7

0,53

1,5 4,2

0,29

2,0 5,6

0,38

2,3 6,4

0,43

2,2 6,1

0,42 a Los valores grandes promedio fueron calculados usando sólo datos de muestras sin eliminar a los valores

extremos. El valor grande promedio de la muestra fue calculado promediando. Todos los promedios estadísticos se calcularon a partir de la raíz cuadrada del promedio de las desviaciones al cuadrado.


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Tabla A.3. Resultados para los ensayos de leche cruda

Muestra 1 2 3 4 5 6 Promedio grandea

Número de laboratorios participantes después de eliminar a los valores extremos

18 18 18 17 18 17


1,4 3,8

0,28

1,3 3,6

0,25

1,3 3,7

0,26

1,4 3,8

0,26

1,3 3,6

0,24

1,1 3,2

0,21

1,3 3,6


2,1 5,9

0,42

2,5 7,0

0,50

2,6 7,4

0,51

2,1 6,0

0,41

2,2 6,2

0,41

2,3 6,5

0,42

2,3 6,5

0,45 a Los valores grandes promedio fueron calculados usando sólo datos de muestras sin eliminar a los valores extremos.

El valor grande promedio de la muestra fue calculado promediando. Todos los promedios estadísticos se calcularon a partir de la raíz cuadrada del promedio de las desviaciones al cuadrado.


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ANEXO B (Informativo)

DIRECTRICES PARA LA APLICACIÓN DE MÉTODOS DE RUTINA CON CRIOSCOPIO TERMISTOR

B.1 INTRODUCCIÓN Esta norma describe los métodos crioscópicos de referencia para la determinación del punto de congelación de la leche. En la práctica, la aplicación de los métodos con crioscopio termistor pueden ser atractivos por las siguientes razones:

- Lograr una duración del ensayo más corta y adelantar el momento de la interrupción de la medición;

- Mantener los instrumentos en operación, para los cuales no es posible una

adaptación completa a los requisitos del método de referencia.

Ejemplos de métodos, de desviaciones o de ambos, en uso son:

- Interrumpir la medición a los 30 s, 50 s, 60 s, o a 90 s después del arranque de congelación;

- Interrumpir la medición cuando la lectura del instrumento es constante hasta

dentro de ± 1 m°C durante 20 s;

- Trabajar con partes del instrumento con desviaciones características;

- Usar otros volúmenes de muestra;

- Aplicar otras temperaturas de congelación. Cuado se aplican métodos de rutina, se debe hacer una corrección en los resultados del ensayo de rutina para obtener un acuerdo promedio con el resultado de las mediciones del crioscopio termistor de referencia. Determinar los valores de corrección para circunstancias características. Este anexo suministra directrices para establecer valores de corrección. B.2 PREREQUISITOS El método de rutina aplicable debe cumplir con requisitos tales como:

- Usar el mismo principio de ensayo, por ejemplo, un método crioscopio termistor; - Lograr una discriminación de 1 m°C o mejor sobre un rango de - 400 °C hasta

600 m°C; - Tener una linearidad con errores no mayores de 1 m°C dentro de un rango de

- 400 °C hasta 600 m°C;


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- Lograr una interrupción de la medición no antes de 30 s después del arranque de la congelación;

- Tener una repetibilidad no mayor de lo especificado en el numeral 12.2.

B.3 DETERMINACIÓN DEL VALOR DE CORRECCIÓN B.3.1 Generalidades La corrección necesaria debe ser determinada a través de mediciones comparativas con métodos de referencia y métodos de rutina, usando un número suficiente de muestras representativas de la leche bajo consideración. B.3.2 Toma de muestras y tratamiento Para este propósito, se reúnen muestras para ensayo que sean representativas de la población objetivo, por ejemplo, que cubran un rango normal en la variación de la composición y el rango del valor del punto de congelación ocurre para los tipos de muestra bajo consideración (Por ejemplo, leche cruda, leche pasteurizada, o leche pasteurizada descremada). Tomar y tratar las muestras de acuerdo a los numerales 7 y 9. B.3.3 Número de muestras para ensayo El número mínimo de muestras, n, debe ser tal que no se excede una diferencia crítica de 0,4 m°C. Se calcula, n, usando la siguiente ecuación de aproximación:

2950 )Du.

(n ,dσ=

en donde:

n = es el mínimo número de muestras para ensayo;

σd = es la desviación estándar de las diferencias entre los métodos para muestras individuales

u0,95 = es el valor numérico de la distribución normal reducida a su nivel de

intervalo de confianza unilateral del 95 %.

D = es el valor definido para la diferencia crítica. EJEMPLO Para σd = 3,0 m°C, u0,95 = 1,645 y D = 0,4 m°C, n ≥ 152 muestras. B.3.4 Calibración y verificación de la calibración Analizar las soluciones de cloruro de sodio (véase el numeral 5.3) con valores de punto de congelación conocido bajo las mismas condiciones como para muestras de ensayo. Tener cuidado que las condiciones son las mismas para ambos métodos, de referencia y de rutina. También usar la misma solución normalizada de cloruro de sodio.


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B.3.5 Medición de las muestras de ensayo Con métodos de rutina, se pueden usar en las soluciones normalizadas de cloruro de sodio (véase el numeral 5.3) un fungicida o agente fungistático. Sin embargo, la adición no debe tener un efecto mayor de +1,0 m°C comparado con una solución sin preservación, con la misma concentración de cloruro de sodio. Si se usa, el agente preservante debe ser de calidad grado analítico y su uso no debe estar sujeto a limitaciones impuestas por regulaciones ambientales. Cuando se usa un preservativo, la concentración de cloruro de sodio más baja, apenas alcanza el mismo punto de congelación que la solución normalizada de cloruro de sodio sin preservar (Véase la Tabla 1). Establecer una fecha apropiada de expiración basada en estudios validados. Determinar el punto de congelación de las muestras para ensayo por duplicado con el método de referencia descrito en esta norma. Determinar el punto de congelación de la misma serie de muestras para ensayo por duplicado con el método de rutina, en relación con los numerales 9 y 10 de esta norma. Deben evitarse las diferencias ambientales entre mediciones sucesivas o entre mediciones realizadas por el método de referencia y el método de rutina; por ejemplo, asegurar el almacenamiento apropiado (de 0 °C a 6 °C) de muestras en botellas bien tapadas. B.3.6 Cálculo del valor de corrección Corregir cada resultado individual por una cantidad correspondiente a la diferencia entre el punto de congelación de la muestra de control usada (véase el numeral 5.3) y el valor determinado en la próxima verificación de calibración. Entonces se calculan los valores del punto de congelación promedio obtenido para la medición por duplicado usando el método de referencia. Similarmente, obtener el valor promedio para las mediciones de los métodos de rutina. Calcular la desviación estándar s, de las diferencias individuales entre de las diferencias individuales entre los resultados promedio obtenidos por ambos métodos. Borrar los valores extremos, por ejemplo, muestras con diferencias mayores de 3 s. Entonces se calcula la diferencia promedio entre los resultados obtenidos por los dos métodos. Redondear hasta la segunda cifra significativa. Usar este valor como el valor de corrección. Si después de borrar los valores extremos, s es todavía mayor de 3,0 m°C, se considera inexacto y por tanto inaceptable trabajar con un valor de corrección. En la Tabla B.1 se muestra un ejemplo de una serie de muestras reducidas (n = 10).


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Tabla B.1. Ejemplo

Resultados con un método de referencia (1) Resultados con el método de rutina (2) Dife-rencia (2)–(1)

Después de la corrección Después de la corrección

Muestra

1 2 1 2 Prome-dio

1 2 1 2 Prome-dio

512 muestra de control

- 512,4 - 513,0 - 511,5 - 512,7

1 - 517,5 - 518,2 - 516,8 - 517,5 - 517,5 - 518,1 - 519,2 - 518,0 - 519,1 - 518,55 - 1,40 2 - 538,1 - 536,9 - 537,4 - 536,2 - 536,80 - 537,3 - 539,0 - 537,2 - 538,9 - 538,05 - 1,25 3 - 521,8 - 521,3 - 521,1 - 520,6 - 520,85 - 522,9 - 521,8 - 522,8 - 521,7 - 522,25 - 1,40 4 - 528,6 - 529,9 - 527,9 - 529,2 - 528,55 - 530,3 - 531,4 - 530,2 - 531,3 - 530,75 - 2,20 5 - 522,3 - 520,9 - 521,6 - 520,2 - 520,90 - 527,3 - 529,2 - 527,2 - 529,1 - 528,15 - 7,25a 6 - 515,7 - 518,1 - 514,9 - 517,3 - 516,10 - 517,7 - 518,9 - 518,1 - 519,3 - 518,70 - 2,60 7 - 523,4 - 522,1 - 522,6 - 521,3 - 521,95 - 525,2 - 524,7 - 525,6 - 525,1 - 525,35 - 3,40 8 - 512,2 - 513,8 - 511,4 - 513,0 - 512,20 - 514,1 - 513,4 - 514,5 - 513,8 - 514,15 - 1,95 9 - 516,1 - 514,2 - 515,3 - 513,4 - 514,35 - 517,5 - 518,2 - 517,9 - 518,6 - 518,25 - 3,90 10 - 521,6 - 522,3 - 520,8 - 521,5 - 521,15 - 521,4 - 523,4 - 521,8 - 523,8 - 522,80 - 1,65 512 muestra de control

- 513,1 - 512,5 - 511,7 - 511,5

Diferencia promedio

- 2,7

Valor de s 1,73 Diferencia promedio después de borrar el dato de muestra con valor extremo - 2,2 Valor de s después de borrar el dato de muestra con valor extremo 0,88 a el valor extremo

La diferencia promedio entre los resultados cuando se mide con el método de rutina y el método de referencia en esta muestra es de – 2,2 m°C. Este es también el valor de corrección necesario cuando se mide con este método de rutina. En este caso, este lleva a una corrección de temperatura más moderada. B.4 VALIDEZ EL valor de corrección calculado es válido para la combinación específica del tipo de ensayo y los atributos del método de rutina, por ejemplo, propiedades del instrumento, el momento de interrumpir la medición, el volumen de muestra y la temperatura de congelación.


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ANEXO C (Informativo)

AJUSTE DEL VALOR DEL PUNTO DE CONGELACIÓN USADO COMO REFERENCIA PARA LA LECHE GENUINA

Para estimar si una muestra contiene o no agua extraña, es necesario comparar el punto de congelación de esta muestra para ensayo con el punto de congelación de la leche genuina, por ejemplo, leche que se sabe está libre de agua extraña. Para algunas muestras (por ejemplo, leche procesada hecha de una mezcla de leches suministradas por diferentes hatos, no siempre es posible obtener un valor de referencia para la leche genuina. En tales casos, es necesario ajustar un valor promedio establecido para la leche genuina. Algunos países han logrado establecer un valor para el punto de congelación de la leche genuino después de completar encuestas extensivas. Otros, han adoptado un valor basado en algunos años de observaciones históricas. Una desviación en la escala de temperatura del punto de congelación ocurre probablemente cuando cambia el método usado respecto del método de referencia descrito en esta norma. Este cambio en la escala de temperatura es, en parte, debido a la normalización más eficaz de los componentes del instrumento y de sus características, y en parte debido a la redefinición del punto de interrupción de la curva del punto de congelación de la leche. Claramente, este cambio en la escala dará un aumento en el cambio de las lecturas del punto de congelación en relación de aquellos previamente registrados. Esto hace necesario aplicar un cambio pequeño a los valores históricos usados en leche genuina. Si no se hace un ajuste, un error sistemático se aplicará a la evaluación de agua extraña en leche. Se recomienda, por tanto, ajustar “solo una vez” el valor aplicado a la leche genuina para llevarlo alinearlo con la nueva escala en esta norma. Tal ajuste debe hacerse por, o establecido bajo la supervisión de, cada autoridad nacional. El ajuste puede hacerse siguiendo el procedimiento dado en el Anexo B con las siguientes precauciones que serán tomadas.

a) Buscar las orientaciones de un estadístico para establecer el número óptimo de muestras requerido en la comparación para obtener cualquier error sistemático a un nivel aceptable bajo.

b) Usar muestras para ensayo en el procedimiento que representen tan

aproximadamente como sea posible al tipo de leche que se está ensayando rutinariamente.

c) Ensayar una serie de muestras en el procedimiento por aproximación siguiendo

este método normalizado del crioscopio de referencia.

d) Obtener un registro de este estudio para referencias futuras.


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ANEXO D (Informativo)

OTRAS NORMAS INTERNACIONALES SOBRE EL MISMO TEMA NOTA Las normas citadas a continuación se relacionan únicamente para información; se invita a consultar las respectivas ediciones vigentes. Organismo internacional Número norma Alcance Norma ISO

relacionada Official Methods of Analysis of AOAC, 17 TH Edition, 2000.

AOAC Official Method 990.22 Freezing Point of Milk. Thermistor Cryoscope Method. IDF – ISO – AOAC Method

Aplicable a leche entera, parcialmente descremada descremada o pasteurizada, UHT, homogeneizada, o esterilizada.

ISO 5764:2002


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BIBLIOGRAFÍA IDF 135, Milk and Milk Products. Precision Characteristics of Analytical Methods. Outline of Collaborative Study Procedure. International Dairy Federation, Bulletin of IDF, 1983, No. 154. International Dairy Federation, Bulletin of IDF, 1986, No. 207.

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