Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer
Transcript of Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer
![Page 1: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/1.jpg)
Published OnlineFirst October 21, 2014.Cancer Res Yann Simon Gallot, Anne-Cécile Durieux, Josiane Castells, et al. cancerMyostatin gene inactivation prevents skeletal muscle wasting
Updated version
10.1158/0008-5472.CAN-14-0057doi:
Access the most recent version of this article at:
Material
Supplementary
http://cancerres.aacrjournals.org/content/suppl/2014/10/21/0008-5472.CAN-14-0057.DC1.html
Access the most recent supplemental material at:
Manuscript
Authoredited. Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been
E-mail alerts related to this article or journal.Sign up to receive free email-alerts
Subscriptions
Reprints and
To order reprints of this article or to subscribe to the journal, contact the AACR Publications
Permissions
To request permission to re-use all or part of this article, contact the AACR Publications
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 2: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/2.jpg)
� �
Myostatin gene inactivation prevents skeletal muscle wasting
cancer
�
����� ���� ���� ��� ������������ �������
���������� ��� ����
��� ������� ����� ���������
���
�������� �����!�� "��� #��� �����
��� ������� $���
%�� ������� &������ '� ��'�(�
��� & ������
"�)��*�� ����+��� �����,�
%�� ������� -�.
*�� "����� � ��'��))��
/�� ����� ������
!� ����
�������������0��1����� ��
�
�"���� �������#'1�����������2&���������3��,���� �����"1���0�*!4!%����� �& �������0������
!5-$��3�$�677��1���+��������������� ��� ��������0�%*474��� 8��������0������
%5-$��3�$��4�9��3�� �����-� �� ���:�������0�7%444������ �0��������0������
*5-�&$�� 3�474�� 5-$�� 3���!%/�� �����-� "���� �1�� 3��,���� �� ��� "1��� 0�79744�
;��������0������
/�-$�� 3�$� /!%9�� "���� ���� ��� ������� ����������� ��� ��� ��������� &���� -�����
��8�����������"1���0�7944<�"1���0������
�
�����8�������� '�=� ������0��1����� �
� � � � "���� �������#'1�����������>&��������
� � � � 0���� ����������������/������������#����
� � � � *!4!%����� �& ������������!��0������
� � � � ?��=�4%%�*�<<�*!��*�<<�
� � � � 0��=�4%%�*�<<�*!��*�<6�
� � � � &����=������@)��1����� A���,�� �� �����@)��
�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 3: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/3.jpg)
� !
������������ ��������������������������
�
-�8 �� ������)��� ��)��� ���� �B������������@�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 4: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/4.jpg)
� %
��������
�
���'����� ��� �� ������ B�� ���� �1����� '� � �� ���� ��� �����)���� �1� � ����� 1� ����
� ��� 1�)���1�8� ��� ��B� '���,�������������@�:B�,���� �� ��� ��������� ����� �'B�
'����,��������)��(��� ����������'���� ���.���� '������� ��������@�5�� '�������� �� ��1��B��
�� ��� '�� '18 '����� '� � '�� ������ 8� ���� 1� � ��� ��� ��,�,��� ��� ���� ���� '��
8� '�������� )� ���'������������� ������ B�� ���� ��� ����������� ���@�Myostatin� �����
���� �,� ���8��,�� ��� '����,��������)��(��� ���������������������������������) ���B� '�
"�B��� ����� �������� C""�D� ������ �� ���ApcMin/+� ����� ��� �� �����'������� )� ����� ���
��������������'����@����'���� �����1��1� � �������� ���� ��� '���� �,� ���)�������)�����
8� ��1 ��� 8� 'B�1�� �1� ��'��� ���� '�� ��8������� )� � �8'1����� ��� ������� ��$0�� ����
��0��E� �������������B� '��� 8'��1����� ��������@�- ���1��1� � ������������8�����
'����B '�)�""�� ����� '������������ '����.��)��� �� �����8�18�����ApcMin/+������ '���
� ����1� ����������� ���,�,��� ��� � '� ����@� ����� ��8������� ����1���� ��� '�� ""�� ����
�'B��� '���8'�� 18�� ���������� ���B� '�����������8�������)���������,�,������ ���
� ��������� �,�������������������88 ���@�?�(��� �� '������� ����� �� ��,������������ ����
���� )��1� � ��� ��� '�� 8� '�������� )� ������� ���'����� ���� ���(� '��� ���� ��� � ���
��B '��B� '��8���� ����)��)�� '������������ �������)��������������1� �����������@�
�
�
�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 5: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/5.jpg)
� *
������������
�
������� ���'����� ��� �� B�� ���� �1����� �'���� ���.��� �1� '�� ���� ������ ���� )� ��1�
B���' � '� ������ ��)����8�� ���)����8��� �����������(��� ����������B'���� '�����������
8� ���� �8�� �� � ��� ���� �,��1� 8�����,��� C�D@� ?���� ���� '� �����,��� )�� ��� �������
���'���������8� �64F�)�8� ��� ��B� '���,���������������8�� �������1����8������ ���������� ����
��������C!D@�����������'���������� ��)��!4F�)������������ ������ '��C%D���������� �����1�
�� ���� ��� ����������+���� 1�)���)�������������� ���� 1�)���'� '���81����������������
���,�,���)��������8� ��� ��C*D@�
��))���� � � �� ������'�,���������,��8��� � ��� � ������� ���'������ �� ���'� �� ���� � '���
����� ��, ��� � '�� '���8�� ��� 8 �� ���� )� ��'��� ���� 18��55� �� �,��� ����8 �� C�� $55D�
���� ��� ���������� ��������� �1� �� �,���� ���� 1� � ��� C�� �D� C��,��B��� ��� /D@� �� �� ��� ��
'��'�1������,��������)� '�� ����)�������B '� )�� ��G� ��8��)���1������1������ ���
)�� �(��� ��� ������ )������ C7D@��� �� �� �� ��� ��� �� �����E8��������� ������ �1� �������� �
�� $55�������� $55���B'��'� '��������� ������� �,� �� 18��5��� �,�������8 ��������(�B�����
�� �,�������8 ����(��(������C��(D�*�����/@�?'������� ������������8'�8'�1�� ���)����!�����
���%�� '�� ������ ���B� '� ���*� �� � �� ���!E%E*� �8�����B'��'� '��� �� ���� �� � '��
�������� � ������������ �������8 ��@�
�� ��������� ��������� ��)��(��� ������������@�Mstn���������� �,� ������������(��� ���
������ '18�� �8'1� C7�� <D��B'������ )�����,����8������� )��� �� �������� �(��� ���������
� �8'1� C6��4D@� ��� ��������� ��� �� �� ��8������� ��� '�� �������� ����� ���� )� �� �8���
���� ���� �������� � �(��� ��� ������ B�� ���� C/D�� ���������� ������� ���'����� C����7D@� 5��
���� ����� )� ������� ���'������ ������ �� ��� )� �� ������� )�� )� �� $55�� 8�����,���
�(��� �������������C�*���/D����� ����������� ���� '�C�/���7D��������������� ��)��8���C�/D@�
:B�,���� �� �'� ����� )� ���� ���� �� $55�� �������� '��� ����� '�� ��))���� 1� ���
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 6: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/6.jpg)
� /
��������� ���� '�����8�� �,���))�� ��)��� �������� �,����C�/D��B'�����8���������������8�
������ ��������1��� ��������������� � ����������(��1��� ���� ��� � '��B�� �����1�����C/D@�
5�� '��� � ��1��B�� �� �� � �D� ��� ������ '������������'�������1�B'��'�Mstn� �����
���� �,� ��� �1� �� ��� '�� ������ )� ������� ���'������ ���� ��D� � ������� '�� 8�������
'���8�� ��� �8�� �)�Mstn� ����� ���� �,� ��@������B� '������� ���)� '�� '��������)� '��
Mstn� ����� B���� ����� ��� !� ��))���� � ������ ����� )� ������� ���'������ '�� "�B��� �����
��������C""�D� ������������������� '��ApcMin/+������������)������ ��� �������
�������'�����C�<���6D@�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 7: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/7.jpg)
� 7
�������������������
�
��������
������8����� ��B��������� ����������������B� '� '��&��8�������� 1������������
)�� '���������������)������ �1��������)������� �)���8��8���@���� � � �,���/<�"E7�Mstn�
(��(�� � CMstn-/-D� ���� B���� 8��,����1� ���������� ����� �
HEH� ���� C<D@� ?'�� )�����Mstn�
������� CB'���� '�� '��������)� '��Mstn������ ��� )���(���B� '���8����)� ��#��� ��D�'��������
���� ����1� ������� �1���8���������������������� � '��.1� ��� ���@��/<�"E7�ApcMin/+�����
����B���� 8���'����� )�� ���(���"���� �1@� ?� ������ ��ApcMin/+EMstn-/-
����� ApcMin/+�
�����B����)��� �� ��� �Mstn-/-�)�����@�ApcMin/+Mstn+/-
����������)�� '��8����1�B����
'���� ��� �Mstn-/-�)�����@�ApcMin/+Mstn+/+
��ApcMin/+Mstn+/-�����ApcMin/+Mstn-/-
�����B����
���� �)�����1���� 18������1���@�
�
������������� ������!�"��"������"�������#����"��������
"�B��� ������������� C""�D������� C��������?18����� ��������� ��D�B������� ����� ���
��&����88���� ���B� '��4F�)� ����,��������������F�8����������� ��8 1����� �%<I��
����/F��;!�������@�Mstn-/-�C�*@/*�J�4@64�� '�K��L��D�����B���� 18��C�*@74�J�4@9/�� '�K�
�L�!D���������B��������� ������1������� ���B� '�/����47�""������������/4�M��)�� ������
�#��@��� ���Mstn-/-�C�*@7<�J��@�%�� '�K��L6D�����B���� 18��C�*@77�J�4@9/�� '�K��L9D�
���� ���� �����,��� � ������ �#��@� ����� B���� ���B��� )�� ���� B� ��� ad� libitum@� ��1�
B���' ��)���� �(������ �����.��B����������������1@�
�
���$�$��������
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 8: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/8.jpg)
� <
���,�,����� ��B����� ����������B���� 18��C�/@47�J�4@7!�� '�K��L!4D�����Mstn-/-�C�/@�/�
J�4@�7�� '�K��L�<D����������� ���B� '�""�������@���1�B���' ��)���� �(������ ���
��.��B����������������1��� ������ '@�
���,�,��� �� � B��� ���� �� ������� ���ApcMin/+Mstn+/+C�L%4D��ApcMin/+Mstn+/-
� C�L�/D� ����
ApcMin/+Mstn-/-� C�L�!D����� ���@�ApcMin/+Mstn+/+
� B���� ����� �� ��� ��� '@� ���,�,��� �� ��� )�
ApcMin/+Mstn+/-�����ApcMin/+Mstn-/-
�����B������ ��������� ��� '������)�*/�B��(�@�
�
���$��������������
�����B�������� '� �.���C�@8@���N�� ���)�94��@(����(� ����������4��@(�
����1��.���D�%/�
��1���) ��� '�������� ���)�""�������@�Extensor digitorum longus��gastrocnemius��soleus�����
tibialis anterior������������B������� �������,�����������8��� �������B������8���1���������
����B���'��@������B���� '���(�������1����,����������� ��@�
�
�������������"�#���$���
#�����C!/4�M�D�B���'����.������/4�O��)����)�����1������������ ���C�������� '����
B� '� '���1��� ��4@/��D� '� �'���8��,����1��8�� ��1��,�8�� ��@�-���������B���������
�������� ������� ������@���8����B���������� ���������)���/����������� ��)������ ��4�444���
� �*I��)���/���@�?'����8���� �� �C!44�O�D�B��� '����������B� '��44�O��)�4@������ '���
��� � �� ��))��� C8:� L� !@!D@� ���� ����� ����� �� ���� B���� �� ������� �1� ������'�����
�'�� ���8'1�C���?�(�5�� ���� ���@$@"@D�������8� ����������,� ���B� '����'1����@�
�
���%����� ��
? ��� $-�� B��� ����� ��� )�� gastrocnemius� ������ ���� ��� ������ �1� ������ '��
$-���1�0������?�����������P� �CQ�����D@�$-��C*44���D�B�����,����� ����������������� '��
�����8 ���-���1� '�����(� �C���$��D@�?'������� ���)�B����������,�����8�������+�����������
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 9: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/9.jpg)
� 6
��� ��������88���� ��1�?������@�$���� ���#�$�B���8��)���������!4�M��)�����,����������
'�� ��0�� � &,������� ��8��� ��� C���$��D@� 0����������� �� ���� 1� B��� �������� ������ ��
�0R97�$����?���#�$��� �� ��� �1� �� C���$��D@��� ��B���� ����1.��� ������ '��HH�?�
� '�� )� ����1���@� $�)������� ������ C'18��� '���� �������� 8'�8'����1�� ����)�������
������� 8� ���� ������ #4� ���� S� ������D�B���� ����� � �����.�� '�� ��8������� ��,���� )�
������)��� ���� �C6D@�
�
��������&���"�����
Gastrocnemius������������ ��� �������B����'����.���C�=!4����� ���B =,�D�������
�������� /4���?����:�����))��� C8:�<@*D� �� ��������44���-����� !���&�?���!���
&�?���/4���G���1���8'�8'� ���/4��������)������������������ ',����� ���
�!4����(�����������������F�?�� ��R��44������ '������ ��)������ ��!�444���)���4����� �
*I�@�#� ��������� �� ���)� '����8���� �� �B����� �������� �</4���C���$��D@��
�
�����������'����
0��"����������1����� )�������� ���8 ��������������8���� ��� ������������ ��������� �
5T��S��5T��S���%!E���%7
�����8<4�7P?'�*!�E���*!*
�C���$��D�B���������� ���)��!�'����B� '�/4�M��
)� 8� ���� )��� ���� C�=�4� ���� ��� ,�=,�D� ��� 97�B���� 8�� ��@� ��8���� B���� '��� B��'����
������ ��� B� '� �� ��1�� ��� �� ������� )�� %4� ���� )��B��� �1� '�� ������ ��� B� '� ��
� ��8 �,����U8'1���1 '���� ��� ��� )�� �4� ��@� ?'�� ����1���� ����� ��� )� �� ������������
)����������� �� �� ���� B'��'� ���B��� ���� ������ ���� �)��� ��� )� '�� ���� � 8� ����
'���'� '�� ���� )����������� ������� ������� )� '�� ����� ���� +��� �)��� ��� )� '�� ���� �
8� ���� '���'� '�� )����������� �� ���� 1� )� 8'1���1 '���@� 0����������� �� ���� ���� B����
���������������#���V�!44��1� ����� ���� �C���$��D@��� ��B��������1.������������
#�������������) B���@�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 10: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/10.jpg)
� 9
0��B�� ������ �����1�����/4�M��)�8� �����B��������,������!@/F�����8�1���1������
������ '����� ���� �4@*/�M��� ������������������C�&�:��� '�����"�)����������D������
������ ��� ,�����' � B� '� '�� �88�8��� �� �� ���1@� �� ������� ������ � *&��#�� C�=/44�
,�E,�D�� -0�T�� 87/� C�=744D�� -0�T�� 87/���/%7
� C�=!44D�� ������� 8� ���� C�8D� �7� C�=744D��
�8�7���!%/E!%7
� C�=644D�� ���!E%� C�=/44D� ���� ���!���*7/E*7<
E%���*!%E*!/
� C�=!44D�B���� )�������
����������?��'���1@��� ������������� �����C�=��444D���������!�C�=644D�B����)����� ��
���.��� ��'���1@��� ������������� �� �/�� ��!��8����C�=644D��0�;%����!/%
�C�=/44D��
"�%��C�=644D�����S� �������C�=!�444D�B����)�������������'@�5����� ���B� '�'��������'�
8�����������N��� ����������1��� ���1�C��(D����B��� '���'����������� ��� �� ���)�
����8������ C�&� :��� '����� "�)�� ��������D@� "������� B�� ���� �� �� B���� +��� �)����
������ 5����� �) B��������1���� C-� ����� 5�� � � ���)�:��� 'D@�S� ������� ����� ��B����
����� ��'��(�)���+����8� ����������@�
���8����%� ��.1�� �� �,� 1� B��� )���� ������1� CW���� L� %64� �� ���� W���� L� *74� �D�
�� ������� �� ��� 8� ���� �� ��� �� �1� ������ ��� 1����8����� �����8�<�����*�
� '1��������C���'�D������)�������� ����� �� ��C�9D@�
�
��������������������(��'(�����ApcMin/+Mstn+/+���#�ApcMin/+Mstn-/-���"��
?'�� ����� �� �� ���� B��� ����)���1� ������ ��� ��� ���1� � '�� � ��'� ���� 8������ � '��
����������B����� ��� �%��+������� ����C�88���������������B����� �� ���D@�?'������B���
���� ��,��@����� ��� ����B���� )���'���B� '�#����8����� ���� �������1����� )����� ����4F�
8���)�����'1���)��!*�'��@���� ����B���� '����������B� '�#���C%����!�'���D������ ������
���4@�F�� '1���������� )�� %�'��@�#�18��B���� ��� ��������� �������� ���������8�� ����
B������ ����.������X������!���!�%������Y%������ ��@�
�
��������"��
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 11: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/11.jpg)
� �4
� � �� ������8�������B��������������������� �8������� ������������ B�B�1�����1����
)� ,��������� B� '� '�� � ���� �-�B���P����� post� hoc� �� � ����� � ���� �)1� �8���)���
��))���������� B���������C���8'#���#����/@4%D@�� ���� >�� � �� �B��������)���8�������
�� B���� B����� ���@���))�������������,�,����� ���B����� ��������1� '���'���+����� �� @�
?� ����� � )�� ��))�������� ��� ���B���' � � � ��� '� �� B����B���� 18�� ����Mstn-/-� ���
������������� ��� ����1����)� �,��������B���8��)���� C��8���-; �K������������8 �D@�
?'��S���,���)������)�������B����� �� �4@4/�)�������8������@��� ������8����� �����������J�
�&@�
� �
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 12: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/12.jpg)
� ��
������
�
Mstn�!�������"��$������(��$��������������)����������"��������������������%*�����!���"��
��1������)� ������gastrocnemius���������������8� ������ �� �B���������������������
B���� 18�� ���������������C0��@�����D@��1��� ��� ���� ������� ���� ��� '��������������
��1����� C0��@� ��D�� )� ����� C0��@� ��D�� ���� �8�� ��1�8��,�� ��� ���� )� �(��� ���������
���� C0��@� ��D� ���� 8� ���� �� �� � C0��@� ��D@� #� �� ��� ������ �������B�� ���� ���Mstn-/-�
����������� ���� B��� ���� ����� �� ��� �1� '�� 8�����,� ��� )� 8����� ���� �����
����� �� ��� C0��@� �&� ������88���� ��1�0��@� �D@�#��,�� ���)� �(��� ������������� ����
B�����������,����� extensor�digitorum�longus��tibialis�anterior�����soleus��������)�Mstn-/-�
����������� ���� C��88���� ��1� 0��@� !D@� 58� �� �1�� ������� �� �(�� B��� � � ��))���� �
�� B���� ���8�� C��88���� ��1� 0��@� %D@��� �� ���� '��� 8� �� �� '���� ���� �(��� ���������
������ �� �8'1������������������'����@�
�
Mstn�!�������"��$������#�"�����������������!�� �+�
?�����B '�B�������,�������44F�)�������� � ���B���' �B��������)���� �1��B������
Mstn-/-������8����� �B���� 18������C0��@�!�D@�58� �� �1���� ��per se������ ��� ��� '��
in vitro�8���)��� �,���'���� ���� ����)�""�������� C��88���� ��1�0��@�*���D@�&�8�������)�
������������ ���� ����������� ��(���� B��� '���)��� �� ������� ��� ��� �����@� $-��
��,����)�,����������� '��������B '�)�� ��C &�0D�������N�����,���)� ���������������
���� ��B '� C!4D�� ������� ����8� ��� �� C�"3?�D�� '�� 8������� � ������� ����8� ��� ���
��1� 18��� )� ������� ������ C!�D�� ���� '18�������������� )�� �� C:50D��S�� �� �������8 �����
�� �,� �� )� &�0� ���� �"3?�� ����� ��8������� C!!D�� B���� �����)���� �1� �B����� ��� '��
���� )�Mstn-/-� ���� C0��@� !�D@� ?���� ���� �� �,��� ���������� '��� ����� �1� ����� �'B�� �
��'��� ����������������� �����������C!%D@��� �,��������'����'� ���������8� �����)�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 13: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/13.jpg)
� �!
,������G������� ���)�����)������ ������ �,�����,G��G�D���� �,������CG�EG�D������� �,���
�� CG�EG�D� C!*D@� 5�� '�� 8����� � � ��1�� $-�� ��,���� )� � '� G�� ���� G�� ������ �� B����
�����)���� �1� �B��� ��� '�� ���� )� Mstn-/-� ���� C0��@� !�D@� &�8������� )� � '� 18�� 55�
C�� $55�D����� 18��5�C��(*D�����8 ����B'��'� ����������� �,����������C!*D�B���������B�����
��� '�� ����)�Mstn-/-�����C0��@�!�D@�
?'��8������� 1� '� ��� �������������� �����B '��1�������������88 ����)� ���������
B������� ��,�� ��� ��@������ �� �B� '� '���'18 '������$-����,���)�?Z&�P�������������
)� �88 ���� C!/D�� ���� 8� ���� �� �� �� ���� �����!� 8� ���� �� �� ���� ���8����%� ��.1��
�� �,� 1�B����'��'��� ��� '�� ����)�Mstn-/-����� C0��@�!����������88���� ��1�0��@�*�D@�
�� �� '���� '��������� �������� �� '� ��� ��������8������� '����8�������)���������,�,������
���������������� ���������������������������88 ���@�
�
Mstn� !���� ���"��$������ ����������� �+�� �"��$������ ��� (������'��"� (��+ �'�� ��� �)�������
���"���������������%*�����!���"��
�� ����������8��,�� �������B�� �����1������� ���� '������������ B����8� �����1� '�����
���E�� ������� ��@� Z�� )��� � ��8����� '�� ������ ��� )� '�� �( E������� ���� � )�
��8�1���� C?;$D�8� 'B�1������������ ������ ��)� �(��� ���������8� �����1� '�����B'���
�� �,� ��� 8��,�� �� ������ � �8'1� in vivo� C!7�� !<D@� :B�,���� 8'�8'�1�� ��� ��,���� )�
�B�� �����))�� ���)� '��8� 'B�1�� ����������8<4�7P�� �8�7����� '�� ������ ��� ��8������
*&���������#� ����C*&��#D����B�������������)���� �1�����������������8���� � �����B '�
��� '��gastrocnemius�������)�� '�B���� 18������Mstn-/-�����C0��@�%D@
Z�� ��� � ��,�� ��� ��� B'� '����� �� ���� ��� ����������� ���� B��� ������ ��� B� '� ���
��'��� ���)� '�����+�� ���8� �����8� 'B�1@�5����������� '����8�������)��������8���)���
&%� ���+�� ��� �������� C��0��E� ������� ���� ��$0�D� �������� �1� ��� ��B '� ��� '��
gastrocnemius� ������ )� B���� 18�� ���� B��� �8�� ��1� ���� ��� ���Mstn-/-� �����������
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 14: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/14.jpg)
� �%
���� C0��@� *���D@� ?�������8 � ��,��� )� )�('���� ��� ;� C0�;D� %�� �� �������8 ��� )�� ��
��,�,��� ��� '�� ��8������� )���0��E� ������� ������$0�� C!6�� !9D�� B��� ���� ��(���1�
�������� ���Mstn-/-� ����������� ���� C0��@� *�D@� :B�,���� 0�;%� 8'�8'�1�� ��� ��,���
�����������'������C0��@�*�D@��� �,��8'�8'�1�� ���)��)�87/������� � ��� �)�-0��
�������8 ���)�� ����,�,������ '����8�������)���$0��C%4D��B�������%�)����B������Mstn-
/-� ����������� ���� �8����� B� '� B���� 18�� ����������� ���� C0��@� *&D@�
#'�8'�1�� ��� )� 5T�S� �� ���%!� ���� ���%7�� ���B�� '�� �������� )�-0�T�� �1� 5T�S@� 5T�S�
8'�8'�1�� ���� B'��'� B��� ��(���1� ���������� ��� '�� gastrocnemius� ������ )� B���� 18��
���� ��� ���8���� � �����B '�� �����������'������ ���Mstn-/-� ��������������� C0��@�
*0D@����������1�� �������8 ���,����)�?Z&�P�����(��� ���������B�� �����1 (����C%�D������
?$�07�����&%����+�� �����������������8 � ��8� ������+������)�� '���� �,� ���)�-0�����
���8���� �?Z&�P�C%!D��B�����B�������� ������Mstn-/-� ���������������C0��@�*��:D@�
Z�������� ���� '����8�������)��� 8'��1����� ��������� C%%��%*D@��1 8����������
������������ )��� )� ��� ������������ ��� 8� ���� ���' � �'���� %� C"�%D� ��� ��
8� 18�������(���)��� 8'��1�C%/D��B���������)���� �1��������������gastrocnemius�������
)�B���� 18�� ��������������@�-�,���� ���B��� ����,��� ���Mstn-/-� ���������������
C0��@�/�D@�3�(��$-����,�������� �/�� ��!�8� �����8����B�������� �B����� ���Mstn-/-�
����������8���� � �����B '��8����� �B���� 18������C0��@�/���D@������ �,��1������
'���� )�������� ������ �� '� � �� �� ���� � ���� ��� '�� �� �,� ��� )� 8� ��1 ��� 8� 'B�1�� ���
�(��� ��������������������������'����@�
�
����-�"��$�����!�����!�����)����������"���������������%*�����!���"��
&��,� ��� ��8������� )� �� �,���� 8� ���������B�� ���� ���� ���'����� �1� �8������� ����
'����8�������)���0��E� �������C%7D�������� �,� ���)��� �,����������������������� ��������
���������� ���'����� C/�� %<D@� Z�� '���)��� �� ������� B'� '��� �� �� ���� 8�����1� �� �����
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 15: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/15.jpg)
� �*
�� �,������������@����8�������1���� �� �������8 ���,��������������'���������B���� 18�� ���
�������� ���� C0��@� 7�D@� ?�������8 � ��,���� )� �� �,��� G�� ���� �� $55�� B���� ���������� ���
���8���� � �����B '�� '����B���� 18������Mstn-/-�����C0��@�7���D���� � �������8 ���,����
)� ��(*� ���� ��(/� B���� �������� ��� Mstn-/-� ���� �1� ��� ��B '� C0��@� 7��&D@� 0�����1��
���!E%�8'�8'�1�� ����������!E%�8� ������ �� �B��������������B���� 18������Mstn-/-�
��������������������'������������8���� � �����B '�C0��@�70D@�?'���)������ ������
���� � � ���� � ��(���1� �� ��� �� �E�� �,��� ���������� ��� �(��� ��� ������ %/� ��1�� �) ���
������ ���)�""�������@�
�
Mstn�!�������"��$������#������"���'�(�����!�����$�$���������������%*�����!���"����#�
ApcMin/+���"��
""�� ����������� ���� ���)�� ��� �� �� '��� B�� ���� �1����� �'���� ���.��� �1�
8�������,��B���' �����C0��@���D�������� '�C0��@�<�D@�- ���1���� ������B��������� ���B� '�
�������)���� �8����� ���)����������,�,���C0��@�<�D@�Z�� '���)����������� '���))����1�)�
Mstn���������� �,� ������ApcMin/+����������� �����'�������)������ ����������C�<��%6D�
���� ���'����� C�6D� '� � �������� �� � � ��� ��� '�� adenomatous polyposis coli� CApcD� �����
�������� � �� �8��� �� �� ����� ��8������ C���D� C�<D@� 5�� '������ � � ��� ��� Apc� ����� ���
���8������� )�� '�� ��� �� ��� ���� ��,��8�� � )� )������� ����� ��� 8�18���� C%6D�� ���
�� ���� ����� � ��'��� ��� �������� �'���� ���.��� �1� ������� )� '�� ������ �� �� ���@� ?'��
��,�� ���� )�ApcMin/+ ���� ��� '�� �������� 8��������� )� ��� ��B '� ����������B�� ����
C�6D� '� � ������ �����1� ���� ��� � '����������� ���'������ �8����� � '�� ������ ���)�
��� ������� B'��'� �������� �� ����1� )�� � ��� ��B '� ���� ������ B�� ���@� ;��
'� ��.1���� Mstn+/-� ���� '.1���� Mstn-/-
� ���� ��� ���(�������� ���,�,��� )� ApcMin/+�
����B�������(���1�8�������C0��@�<�D@�Z'����44F�)�ApcMin/+Mstn+/+�����'��������!9�
B��(���) ������ '����� �94F�)�ApcMin/+Mstn+/-�����ApcMin/+Mstn-/-
�����B����� �������,�@�;)�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 16: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/16.jpg)
� �/
� ���B���� 18������Mstn-/-�����'������������)��8������������������ ����C��88���� ��1�
0��@�/�D@�5����������� '�����,�,����� ��)�ApcMin/+Mstn-/-�����B��������� ���B� '�������� ���
��� '�� ������ ���� ��.�� )� �� �� ����� 8�18�� C0��@� <���� ���� ��88���� ��1� 0��@� /�D@�
��,��8�� � )� 8�18���� ��� ������1� ������ ��� B� '� ������ ���� ���1� )����� C�<D@�
��������� � )� '�� ��� � ��� '���)��� �� ��� ��� ����� � ������� '�� '��� '� � � ��� )� '��
������@� Z'������ '�� ��� � B��� ����8���� ��� ApcMin/+Mstn+/+� ����� � � B��� �8�� ��1�
8�����,��� ���ApcMin/+Mstn-/-����� C0��@� <&D@� 0�����1���� �� ���� �� '��ApcMin/+
� ���(������
� ���� ��� '����������������1�����C0��@�<0D�������8�� ��1�8��,�� ��� '������)��(��� ���
����������C0��@�<�D@�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 17: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/17.jpg)
� �7
�����������
�
������������� ������'������������ �)�� �������,�� � �����1����� '� ����������� ���� 1�
)�� �'� '���81�� ���������� ������1� ���(�� �������� 8'1������ 8��)������ ���� 8� ��� >��
+���� 1� )� ��)��� ���� �� �� ��1� ���������� ���,�,��� ��� ������� 8� ��� �� C*D@� �� '��'� ������
B�� ����� '��(�1�)�� ����)�������������� ������'������ ��� ������.��������)�� �����8�������
)�� '�� ��� '� )� ��1� ������� 8� ��� �� C%D�� � � ������� �� 8��1� ������ �� 8������ B'���
����������'������������1����������� ������@�?'��8����� �� ��1�������1������� ��� '� �
���� ���� �� �� ��� ��� �))�� �,�� � �� ��1� � 8��,�� � �(��� ��� ������ B�� ����� � ��B� ���
��B '������ �������������,�,����� �����""�� �������������������ApcMin/+ ���@�
���'���� �����1���� ������8� ���������� �������1���8��������8� �����1� '�����C9��
%9D� ���� ����������� 8� ���� ������� ��� C%9D@� ;��� )�������� �'B���� '� �Mstn� ���� ���� � �
� ���� �� '�� ��'��� ��� )� �( E?;$� 8� 'B�1� �������� �1� ��� ��B '�� �� � ���� �����1�
� ���� ��� '�� �� �,� ��� )� 8� ��1 ��� 8� 'B�1��� ������1� ������ �� '� � �� �� ���� 8�,�����
8� �� ��������� ����������������������B�� �����1���8�������� '���� �,� ���)�8� ��1 ���
8� 'B�1�@� :B�,���� B�� ���� � �������� '�� 8������� 1� '� � 8� ���� �1� '����� ����� ���
������ ��� ��))���� �1� �������� ������� '�� ��� ������ )� ������� ���'����@� ?'�� ��'������
���������� '�� ���'�� ��� � � �� '�,�� ����� �� �,�������� �� � ������� ���'����� ��� ���������� �
����� �� � � ���� � ��� 8�� �� )�� �� ���� ���� �� B���� '�� '� � ���� '�� ��� '���'� '��
8���� ���)� ���� ����'� �����,��� ���'�� ��� )�� ��� C!D@� 5�� '��8����� � � ��1�� �������8 �
��,����)�?Z&�P����8B��)����(��� ���������B�� �����1 (����C%�D������ '� �)�?$�07��� ��
�B�� �����))�� ��C%!D��B������(���1�������������(��� ���������)�Mstn-/-� �����������
���@�0�� '������B����������,��� '� �������� ������,����)��� �������1 (����������B�����
���Mstn-/-������8����� �B���� 18��������������������� ����C��88���� ��1�0��@�7D@�
?'���)������ �� ���� ������� ���� �� )�,����1� � ������ ���� '�� ��,���)����'�� ��� )�� ��@�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 18: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/18.jpg)
� �<
:B�,�������� �������,�� ��� ����B���������������1� �������1��� ������ '������)��� �����
'�������� ���)� '��8���� ���)����'�� ���)�� ��@�
�1� � ��������� �,������������1��������� ��� $55�������� $55���B'��'� '��������� ������
�� �,� ��� 18��5� �� �,��� ����8 ���� ��(� *� ���� /@� -�� '��� �������8 � ��,���� )� �� �,��� G���
�� $55�����(*�������(/��������!E%�8'�8'�1�� ����B��������� �� �1������� ������B����
18������Mstn-/-�����������8���� � �����B '�������� ���� '� �1� � ��E�� �,�������������
B��� � � �8������ %/� ��1�� �) ��� ������ ��� )� ""�� �����@� :B�,���� � � ��� 8������� '� �
1� � ��E�� �,��������������B�����))���� ����1� ������ ����� B����B���� 18������Mstn-/-�����
�������� ������� '�� ��� ������ )� ��� ��B '@� 5�� ��88� � )� '��� ����8 ���� 1� � ���
��8������� ���� �������� ���'������ ��� �(��� ��� ������ )� B���� 18�� ���� ��� ���8���� �
��� ��B '� � � ��1� %/�� ��� ����,� ���B'��'� �� ��� ��B� '� ���� '�� � ������ '� ���������
1� � ��� ��8������� ��� ���8���� � ��� ��B '�� �� � � � �������� ��� 8�� �� C����7D@�
?'���)������� ���� ���)�1� � ��E�� �,����������������B���� 18������������������������
������� '�� ���������)� �����B '@�0�����1�������������,���)�����!E%�8'�8'�1�� ���
B�������,����� B����B���� 18������Mstn-/-������ ���1�%/�������� ���� '� � '�������������
��)���������1����� ���� ���� �1��))�� ��� '���8� 'B�1����Mstn-/-����@�
#�����,� ��� )� �(��� ��� ������ ���� ���Mstn-/-� ����������� ���� ���� ApcMin/+Mstn-/-
�
���������������B� '�� �������'B���� '� ���+��� �� ���)��� ������������� �,���������� ���1�
������ �� ���)��� ������� )��)��� $55������ ���� ���� �������))�� �� ������������)�
����������'����� C�/�� �7D@� :B�,���� ��� � ��1� �� ����� '���� ����,� ���� �1� �'B���� '� �
�� ��per se��������� ������� ������ �)�����������'�� ����������������������'����@�;���
�1� +��� ��� B'� '��� '�� �������������� 8'�� 18�� )� Mstn-/-� ���� ��� '�� ������ )��
8� �� ��� ������ � ������ B�� ���@� #��,���� � ������ '�,�� ������1� ���� �� ��� '� � '��
���(���� )� �� $55�� ���������� � � '�� ��� )� ��� ��,��8�� � ��� ���� ���� 8�,�����
8� �� ��� ������ � ������� ���'����� C�/�� �7D@� �� '��'� '�� � �� ��1� ����� ��� '���� � ������
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 19: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/19.jpg)
� �6
��'��� �� � '� �� �� ���� �� �,��� ����������� '���� �� �� � ����1� ������ � '� � �� �� ��'��� ���
��)���� ����� ����� � �(��� ��� ������ � �8'1@� ?'��� ���� ������� '�� +��� ��� )� B'� '���
���(���� �� �,����1� 8�,���� ���� ����� 8� �� ��� ������ � ������� ���'����@���� ��������� ���
�� �,��� ��,��� '��� ����� ��8� ��� ��� ��1� �� ������ � � ���� ���������� ������� ���'����� C/D@�
5����������������� ������,���)��� �,����������������8� ���������B�� ���������))�� � '� �
���� ���8����� ����� ������������C%7D@�0�� '��������'��� ���)��� $55������������������
�������'18�� �8'1�� '����B���� 18������Mstn-/-�����C*4D@������������� ��'�,�����������
� ������ �1� ������ ��� �� ���� $55� �� ���1� C*�D@� ?�� '���� '���� �� �� ��88� � ��� �8� �� �
����)��� �,������� '�������� ���)��(��� �����������������������'����@�:B�,�����������
�� $55� ���� ���� ��� �� ���� � )�� '��� ��������� ���'� ��� ���� �8'���� ��� 8� ����� C*!D��
B'��� 8�� �,�� �� ��� �� �(��� ��������� '�� ����� '��� ����� ����� �1� ���� �� ��� C*%��
**D@�?'���)���� '������)������ �))�� �)� ��'��� ����� '��� �������� �,���� '���'������ $55�
���(��������������� ������������1� '����'��� ���)������8'���� ���8� ����@��8���)���
��'��� ���)��� ������ �,���� ��� '���� �� �)�����������'������'�������B���������� ����
�� B���� '�����8�� �,���))�� ��)��� �������� �,���@
;��� � ��(���� )������� )� '�� 8����� � � ��1� B��� '�� ����� ��� ��� ��� ��B '� ���Mstn-/-�
���������))�� � '� ��������� ���� ��� ��������������� ���� ���������������������������
��� ��������� ��� �88 ���@�?��� ��B '�B��� ������(���1� ��B��� ���ApcMin/+Mstn-/-������
�� '���B� '���8�����,� ���)���1�B���' ������(��� ������������@��� '��'�������� ���
��� ��� ��B '� '��� � � ����� �1� �� �����1� ����,��� C�*�� �/D�� '�� ������ � )�������� ����
����� �� � B� '� �� 8��,���� � ��1� ���� �� ���� '� � ������ �� ��� )� �� ������� �� $55��
��B���""�� �����B '��������C�7D@�;����� ����������)�� '�����88� ����1����� ��������
8'����������� � ������ �'B���� '� � ����� ��E��'��� ��� )��� $55� ���������� ��B�� ���
��,��8�� � ��� ������ C*/�*6D@� ?�(��� �� '���� ��� ����� �� ���� �)1� �� �� ��� �� 8 �� ����
��B '�8� ����)�� ������� �� ����� ���8��������@�?'���)���� '�������� �)��������'�,��
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 20: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/20.jpg)
� �9
�8���� ���� ��� '�� ������� )� ��B� ������ ���� � �� ������ )�� '�� ��� �� � )� ���� )� '��
�� �� ������������������@�
5 ����������� '� ��8� �!4F�)������������ ���� ��� �����1�����,��)�����'������� '���
'�������� � ���������� C!D@�:�����B��������1��'B� '� 8��,�� ���)�������B�� ��������
����� ��� ��� ��� ��B '� ���Mstn-/-�����B��� ������ ���B� '� ��� ��������� ��� ���,�,��� �� �@�
?'������� ������ �����B '�8�����1��� ���� ��� ������������ '�����,�,����� ��)�Mstn-/-�
����������� ���@� :B�,���� '��� �� �� ��������� �))�� � ����� ���� � � ��8����� '��
8������� ���,�,��� )� ""�� ����������� ���=� B'��� �� �,�������� ����1���� B��� ����� �
����� �)����))����������� ���B���' �����,�,����� ��B���� ���������)���� �1��������������Mstn-
/-� ��������������@���������� ����� B����8�����,� ���)��(��� ������������������� ���
��� ��� ��B '� ���� ��� ��������� ��� ���,�,��� �� �� ���� � � 8�,�� ������� 1�� �� ���'���� ���
���(���� B���� '����)�� ����������������1�8������@��(��� ������������ � � �������8� �� �
�����,���)����������@���������������� '��������� ����8��)���������������� ��������,��
�(��� ��������� 8� ���� ������� �����1� ��������� '�� �,�������� 1� )� ������� 8��������� )��
��,������������������������ �� ��1�8�,���������1�����������)��)�� ���� ������
C*9D@��� ���� �,��1�� ��� �� ���8��� �1� )������� ��� �� )��+��� � )� ��� �,�� � ��� ������� 8� ��� �� C!D@
#�����,� ��� )� ������ ���� ���� )��� ��� B���� '���)��� ��� ����)������ �1� ��� �������
���8��� �1� ������ )��� ��� ���� ����� '��� �� ���� �� � 8�������� ��)��8��@� 0�����1��
8�����,� ���)��(��� ����������������������� ����� ���� � '��������������8'1�������� �,� 1�
'� � ������ B� '� '�� 8��������� )� '�� ��������� ���� �� �� ��1� � ����1� B'��� ��1�
������ �����@�
?'��8����� �� ��1������� ��� '� �8�����,�����(��� ��������������'����������)� '�������
)� �� ��,�� ���� ����� � � 8�������� ���,�,��� ��� 8� ��� ��B� '� ��,������ �������@�:B�,����
)�� '���� ������B���������������1� �8�������1��� ������ '���� �� ���������)��� ���)��� ��
��'��� ��@� Z�� ���� ����� ��� ��)�� ��� ��� � '�� ������� ���� ��,��� )� �� �� ���� '���
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 21: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/21.jpg)
� !4
�� $55���������C�� �,�������'������������8'���� ���8� ����D�����������8� ��� �@�#�������
��))����������� '����8�������)��� ������ '����� $55����������� B����������� 18����'����
��������� ������@�0�����1�����'��������� ���1������ ������������������ ���������������
����������������������8������'�����'��� �)��������������)��������8�����1�����������8�������
�����.� ������������������ �8'1@�?'���� '����,��8�� �)�(�B����������� �� ������
)�� '�� ��� �� �)�����������'������1���������88�������� � '���8� '������� �� �� ����
������ ���B� '�������B�� ���������������,���� �����������@�
� �
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 22: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/22.jpg)
� !�
��.��/��0�����
�
?'�� �� '��� '��(� ��,��� ������� )�� '��� '��8� ��� ������ ��� 18���@� ?'��� � ��1� B���
��88� ��� �1� ���� �� )�� '�� "����� �� ��� ��� ������� ���� '�� 5�� � � � -� ����� ��� �������
C5-��D@�
� �
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 23: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/23.jpg)
� !!
�����
�
�@� 0�����P��� �������0����(�������������� 5���������&��0����������$"�� � � ��@���)��� ��� ����
������)��� ���)�����������'����=������ ���� �������������@�"���� �;���@�!4��K�!=*69�9/@�
!@� ?���������@����'������)�����������'����@�#'1����$�,@�!449K69=%6��*�4@�
%@� ?���������@�����������'����@������;8������ ��� ���@�!4�4K!7=�*7�/�@�
*@� ?���������@����'���������������8� ��� �@�-� �$�,�������@�!44!K!=67!�<�@�
/@� :��� :Q�� ['�� R�� �� �'� Z&�� �������� �"@� �1� � ��E�� �,��� 8� 'B�1� �� �����=�
������������������� '���8�� ���8 �� ���@�5� ������'����������@�!4�%K*/=!%%%�*<@�
7@� ��#'���������"�B��������"�����@�$����� ���)� �(��� ������������� ��������1�����B�
?�0��� ����8��)���1�����@�-� ���@��99<K%6<=6%�94@�
<@� ���� �"��#�� ������0������0��#����� ����$1�"������B�������� ���@������ �����(��� ���
������ ���� �1� 8� �� ���� �������8���)��� ���� �,� ��� )� '�� 1� � ��� ����@� �������@�
!44%K%/=!!<�%6@�
6@� �����������������'��������.� ����P������-������)1�$��#������8����� ���@�&� 8���
��8�������)�1� � ������������ �8'1�)����� ��(��� ����������1�����������������������
��8������@�&��������1@�!44<K�*6=%�*4�<@�
9@� �����'��������������������.� � ���P������-������)1�$������ ���� � � ��@��B��
������ ���)��( E������� ���� �)���8�1��������������8� 'B�1�������8���� �1� � ���
,����8�����������(��� ��������@�&��������1@�!449K�/4=!67�9*@�
�4@� [����� ?��� ��,���� � �� P������� "��� :�1���� #�� &�+����� �0�� ?(����� P-�� � � ��@�
5���� ��� )� ���'����� ��� ���� �1� �1� ������1� ������ ����� 1� � ��@� �������@�
!44!K!97=�*67�6@�
��@� �� �����#��������� ��������� ����#�����0��$�))�#������������ ���@��������1� � ���
����������������'�����������8����� �������������'����@�&����������5�,�� @�!446K%6=/%��6@�
�!@� "������������[��"����Z��Z����$��?����#�������$��� ���@��1� � ����� �������$-������ ���
��������B '�����������������������'��������@������?'��@�!446K�/=�//�74@�
�%@� ��� � ��� #����� 0�� ������ ��� $�))� #�� ������� ��� ������� 0��� � � ��@� ����� 1�����
��'��� ��� ���� �� '�� 1� � ��E)���� � ��� ����� B� '� � �8�,���� ���'����� ��� ���
�����������@������������������?���� �@�!449K9=746��7@�
�*@� ����1� P���(� �&�� �1����� ?�� "��(� ���� #��� ��� P������� "��� [����� ?�@� ��� ��
��'��� ���)�1� � ���)���1�8� �����8�����,����(��� ���������������������)��������
���'����@����'����8'1��$������@�!4�4K%9�=�/*6�/*@�
�/@� ['��R��Z�����"��"������������PB�(�P�������Q��� ���@�$�,������)�����������'���������
������B�� �����1��� $55���� ������������ �8����������,�,��@�����@�!4�4K�*!=/%��*%@�
�7@� ���+�� �����?�������;�8��������������#� �������8��,����&��� ���@��1� � ������(����
������ �� $55�� �� ������ ��� ���� �������� '�� "�B��� ����� �������� ����� �� ��� '��
�8�,��� � )�������B�� ���� ���� 8'1������ 8��)�����@� �����'���������8�����������@�
!4�!K%=%<�*%@�
�<@� ������$��#� �:����,��Z0@�������� �� � ��� '� �8�����8���� ��� �8����� �� �����
��8��������� '�����@��������@��994K!*<=%!!�*@�
�6@� ��� ���,��� P��� ������� 0��� #�������� ��,��� ��������� ���� ������ ��@� 5� �����(���7� ����
���'���������8����E\����@�����#'1����$�����5� �����8�#'1���@�!446K!9*=$%9%�*4�@�
�9@� ��� '�� #�� �����.� ��� 0�,���� 0��� �����'�� ��� 0������ "�� ��� "�� � � ��@� $����� ��� )�
���+�� ���8� ����� �1� ��� ���8���� ��.1�� �� �,� ����� ���� �� ����������� 8� �������� ��� �� �
������������������8���� ���������@�#)����������'@�!44<K*/*=7!/�%%@�
!4@� $�8������������������@�$���)� '�� &�0E &�0$��������������������1����� '���81@���,�
�������$��@�!4�!K��*=!%<�7<@�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 24: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/24.jpg)
� !%
!�@� ���'�����"��$����� ������ � ��@���������� ���� ��������� ������ ��� )� ������� ����8� ���
C�"3?D�8� ��������������@��������#'1���@�!44/K!4!=7/*�7!@�
!!@� ����.���"@�:1���1�� ��� )�:50��=� �1���� �������� � � '���������� ��,��@� #'1����1@�
!44*K�9=�<7�6!@�
!%@� :��"B�������'���&��['����"��Z� ���P����������#��"�88���#��� ���@�?���� ������ �,���
����8 ����(��(����������'��� ������������������ ����������� '���'�����'�����)��� ���
�8���� ��1� ��� �� &�0� '���8���@��������$��@�!4��K<�=�%7!�<%@�
!*@� �� ��)��,�����Z������ �@� ?'�� ����' � ���� '�� ���(� ������ )� �� �,��� ��� B���� '������� ����
������@�����������@�!4�!K�!/=%9!9�%<@�
!/@� �'��'�8� ��'�����������#$��R��:��:��������� �:��:���������� ���@�?Z&�P������B�
����� ��� ������� ��� '�� ��� �������� )�� �� )���1� '� � B��(�1� �������� �88 ���@� �� ����
�'�@��99<K!<!=%!*4���4@�
!7@� $��������������������(������$�����$��-���.�"��� � �?-��� ���@������ ���)�5�0���
�������� �(��� ��� 1 ���� '18�� �8'1� �1� #5C%DPE�( E?;$� ���� #5C%DPE�( E��P%�
8� 'B�1�@�-� ���������@�!44�K%=�449��%@�
!<@� ������ ���� � � � ?-�� ��.���.���� P�����Z;�� � ,��� �"�� ���������� $�� � � ��@� �( E?;$�
8� 'B�1�������������������� ��)��(��� ���������'18�� �8'1���������8��,�� �������� �8'1�
���,�,@�-� ���������@�!44�K%=�4�*�9@�
!6@� �������������������������� �����(��(�������������&��#���������� ���@�0�� �������8 ���)�� ���
������� '��� �8'1����� ������+�� ����������� ������������������(��� ���������� �8'1@�����@�
!44*K��<=%99�*�!@�
!9@� � � � ?-�� ���N��� ��� ����(�� ���� #����� 0�� ?�)�1,�� ��� P����� Z;�� � � ��@� ?'�� 5�0�
�E#5%PE�( � 8� 'B�1� 8��,�� �� ��8������� )� ������ � �8'1��������� ���+�� ��� �������� �1�
��'��� ����0;R;� �������8 ���)�� ��@��������@�!44*K�*=%9/�*4%@�
%4@� �������0��� .�����?�B��-&����@���������.�#���;'�����"��,�:���� ���@�5PP�� �E-0�(�88���
�� �,� ������������,����������B�� ����������@�����@�!44*K��9=!6/�96@�
%�@� �� �������'� ������ ���P������� "��'�?��)����))�&��Z�� ���� ���"��:�� � � ��@� ?'��?Z&�P�
0��*��1� ���������� ����������� ��)������,� ������������(��� ���������� �8'1�������@���
��������@�!4�4K�66=6%%�*9@�
%!@� #����#P����8 ���P���'� ���������#����������P�������1������'������ ���@�?���� ������� ���
)�?$�07���'��� ���(��� ���������B�� ����������@�����������@�!4�4K�9�=�%9/�*��@�
%%@� ��������������������$������ ���������&��$���)�$������#�����#�� � � ��@� 0�;%�
�� ������ 8'��1�����(��� ������������,�,@�������� ��@�!44<K7=*/6�<�@�
%*@� ['�� ��� ����� � ���� ��'���� ��� ��� #�� ������� ��� ��'��))��� ��� � � ��@� 0�;%� ������ ��1�
�� �,� ��� 8� ���� ������� ��� �1� '�� �� 8'����E�1����� ���� 8� ������ 8� 'B�1�� ���
� �8'1���������������@�������� ��@�!44<K7=*<!�6%@�
%/@� P����(1�������������0��������,��'�:������'��$?�����,�����.�������������P��� ���@�
����������� )�� '�� ���� ���� �� ��8�� � ��� )� ����1�� )�� �� ����� �� 8'��1@� �� 8'��1@�
!4�!K6=**/�/**@�
%7@� �'����"��Z�� ��P"��Z�����(���&�����8'1�P?��?'���$&����(��N������ ���@�&��,� ���
��8�������)��� �,����8� ���������B�� �����������'����@�0��&���@�!4�*K!6=�<���!%@�
%<@� �� .�(�����0������������� '����#��P�����"��"��:��������1��@���,��8�� �)��������
���'�������(���1����������������� ���������'�������)����� ����@�#���-� �����������3���
�@��99*K9�=66�<�!�@�
%6@� ���������?'��,����������B� .�Z������������������ �"������� ����:��� ���@�5��� �)��� ���
�����'���� ���.� ���)� '��)������������ ���8�18������������@�����@��99�K77=/69�744@�
%9@� "(�����1� ������1� �� �� ������B��� ��� ����(��� #��� �'������� P������� $�� � � ��@�
�1� � ��� 8� ��� '��B�� ���� )� '����1���� � ��� ����� '���'� 8� ���� ���+�� ���
8� ����� 8� 'B�1����� ��� ���� )� ��������� 8� ����@� �� �� #'1���� ����� #'1���@�
!4��K%4�=��%�7�!*@�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 25: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/25.jpg)
� !*
*4@� "�������$����"�����,����� ���������� '���������&��?(�����P-��� ���@�$����� ���)�
��������B '��1��� �8��������������������� '���'��� �,��� 18��55�����8 ��@�#���-� �������
����3����@�!44/K�4!=�6��<�!!@�
*�@� "��'�?��)����))� &������ �� ���� �'�88���� P�� 5�����N� ��� 0����� �-�� :�� ���� ��� � � ��@� ���
�� ���1� ���(���� �� �,��� 18�� 55� ����8 ��� �������� � ���� �(��� ��������� '18�� �8'1� ����
8� �� ��)��� �8'1@������������@�!4�*K%*=747��6@�
*!@� ��.�� ?��� �'��� R�� ��� ��� ��,�� #�� ['���� ��� :���� ���� � � ��@� #� ���� ���� �)��� ��� ����
)��� ����� ,����� ��� )� �� �,���� ���� ���� �8'���� ��� 8� ���� ��� ��� ������� �� �,���
���������������� ��@����&�������@�!446K!!=!769�<4!@�
*%@� ��� ���$����'��B���&�������B������ ���.�����['�����&�.�&��� ���@���#������������� ����
���������@�-� ����� @�!4�%K*/=�%49��6@�
**@� Z�����(�� �&�� �'��� �"�� Q���� :�� "��� ��� �������� ���� ��1��� ��� � � ��@� ?'�� ����
�8'���� ��� 8� ���� ����� ��� �� 8�� �,�� ������ �� )� �(��� ��� ������ ���@� �� ����� ���@�
!4�%K!4%=%*/�/<@�
*/@� ��8����������'���"��P����?$���� .�(���@�0���� � ������������ ��)�������� ���
8��������� ���� '�� �� �,����������� B�� ���� �1����� ��� ��'�������)����� � ���@�
&��������1@�!444K�*�=!%�9�!<@�
*7@� ���,��� P��� Z���))� ?P�� 0������� ���� �� '��� ��� ������1� ��� �� .�(� ��@� �� �,���
���������� '���'� �� �,��� ����8 �� 18�� 55� ������� '�� ���'�������(�� �18 �� ��� ��'�����
��)����� ����@����&�������@��997K�4=/%*�*%@�
*<@� "��Q��P����$��3����B��P��;2������&��",������P"�����'�������� ���@�#��,�� ���)�
���'�������(���1�������,��8�� ���������� ���)� ���8��������������'�������)����� �
����)��B���������� �� ���)����'�������� �,�������8 �� 18��55�������0��8� ���@����
:��$�8��@�!44<K�%=7</�6%@�
*6@� P���� ?$�� #���8� �� ��� Z���� #�� Z���))� ?P�� ���� 5�� �1���� ���� � � ��@� ?����������
����� � � ��1� ���� �8��� )��� ��=� '�� ���� )� )�������� ���� ���� '���� ��� �������
��B '����� ����������@����&�������@��999K�%=6/��7/@�
*9@� �������� ���� "8�.������� 0�@� ?'�� �����1� � � �� )� ����������� �� �@� �� ���� �'�@�
�99�K!77=!9<6�6!@�
�
� �
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 26: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/26.jpg)
� !/
��0���0����
�
��!����12�Mstn�!�������"��$������(��$��������������)����������"����������������%*�����!�
��"�2�����'�����������1�B���' �������� '��������)�����������'����@����,��������)� ����@�
��� gastrocnemius� ������ ���@� ��� gastrocnemius� ������ 8� ���� �� �� @� &�� 8�����
����� �� ���)� ��� ���� �����@�Z���� 18�� ����Mstn�E������B���� ������ ���B� '�"�B���
����� �������� C""�D� ������ �� �����,��� �#��@� ?������� B���� ��,��� %/� ��1�� �) ��� '��
������ ���)�""�������@��� �����������J��&�C�L6��!E���8D@�]�#�X�4@4/��]]�#�X�4@4������
]]]�#�X�4@44�@�
�
��!����32�Mstn�!�������"��$��������#�"���������!�� �+���#��&(�����������!�������$��$�#�
�������������*��������#���!��!������4��"��$�����!�����!4� +������"������!��(�(�����2����
���B���' @���� &�0�����"3?������:50��S� �������8 � ��,���� ��� '�� ����)�B���� 18��
����Mstn�E�����@������ �,���G����� �,���G����� $55��������(*� �������8 ���,������� '�� ����
)�B���� 18�� ����Mstn�E�� ���@� ��� ?Z&�P� �������8 � ��,��� ��� '�� ���� )�B���� 18�� ����
Mstn�E�� ���@� &� ���� 0�� ����� � ����1���� )� ���� 8� ���� �� �� � C&D� ���� ���� �����!�
8� ������ ��C0D���� '�� ����)�B���� 18������Mstn�E�����@����)���� ������������ ��)�
���8����%���.1���� �,� 1���� '�� ����)�B���� 18������Mstn�E�����@�Z���� 18������Mstn�E��
����B���������� ���B� '�"�B����������������C""�D������@�?�������B������,���%/���1��
�) ��� '�������� ���)�""�������@��� �����������J��&�C�L6��!E���8D@�]�#�X�4@4/��]]�#�X�
4@4������]]]�#�X�4@44�@�
�
��!���� 52� �)�-���� (��+ �'� ��� ��+�*���#� ��� gastrocnemius ���"��� ��� ��#%�'(�� ��#�
Mstn%-%���"��#����!�"��"���"�"+�&��2��������� �����1����)�*&��#��8'�8'�1�� �����
?'�%<�����?'�*7@����"����������1����)�8<4�7P�8'�8'�1�� �����?'�*!���������*!*@����
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 27: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/27.jpg)
� !7
����� � ����1���� )� �8�7� 8'�8'�1�� ��� �� ���!%/� ���� ���!%7� ���� �8�7� 8� ����
�� �� @�Z���� 18������Mstn�E������B���������� ���B� '�"�B����������������C""�D�������
�������,����#��@�?�������B������,���%/���1���) ��� '�������� ���)�""�������@��� ������
�����J��&�C�L6��!E���8D@�]�#�X�4@4/��]]�#�X�4@4������]]]�#�X�4@44�@�
�
��!���� 62� Mstn� !���� ���"��$������ ����������� �+�� �"��$������ ��� �*�7�����%(����������
(��+ �'� ��#� ��%� (��+ �'� ��� gastrocnemius� ���"��� #����!� "��"��� "�"+�&��2� �����
�������8 � ��,���� )� ��0��E� ������� C�D�� ��$0�� C�D� ���� 0�;%� C�D@� ��� ����� �
����1���� )� 0�;%� 8'�8'�1�� ��� �� ���!/%@� &�� ����� � ����1���� )� -0�� 87/�
8'�8'�1�� ��� �� ���/%7� ���� -0�� 87/� 8� ���� �� �� @� 0�� "������ ����1���� )� 5T�S
8'�8'�1�� ��������%!��������%7�����5T�S�8� ������ �� @�������:�� �������8 ���,����)�
?Z&�P�C�D�����?$�07�C:D@�Z���� 18������Mstn�E������B���� ������ ���B� '�"�B��� �����
��������C""�D��������������,����#��@�?�������B������,���%/���1���) ��� '�������� ���
)�""�� �����@��� �� ���������J��&� C�L6��!E���8D@� ]� #�X� 4@4/�� ]]�#�X� 4@4�� ���� ]]]�#�X�
4@44�@�
�
��!���� 82� Mstn� !���� ���"��$������ ����������� �+�� �"��$������ ��� ����(+�!'%�'�������
(��+ �'� ��� gastrocnemius� ���"��� #����!� "��"��� "�"+�&��2� ��� ����� � ����1���� )�
"�%��5� ���� "�%��55� 8� ���� �� �� @� ��� 3�(�� �������8 � ��,��@� ��� ����� � ����1���� )�
� �/�� ��!� 8� ���� �8���@�Z���� 18�� ����Mstn�E������B���� ������ ���B� '�"�B��� �����
��������C""�D��������������,����#��@�?�������B������,���%/���1���) ��� '�������� ���
)�""�� �����@��� �� ���������J��&� C�L6��!E���8D@� ]� #�X� 4@4/�� ]]�#�X� 4@4�� ���� ]]]�#�X�
4@44�@�
�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 28: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/28.jpg)
� !<
��!���� 92� ����-�"��$��� ��!�����!� ��� gastrocnemius� ���"��� #����!� "��"��� "�"+�&��2� ���
�� �� �������8 � ��,��@� ��&�� �������8 � ��,���� )� �� �,��� G�� C�D���� $55�� C�D����(*� C�D� ����
��(/�C&D@�0������� �����1����)����!E%�8'�8'�1�� ��������*7/E*7<��������*!%E*!/�
�������!E%� 8� ���� �� �� @�Z���� 18�� ����Mstn�E������B���� ������ ���B� '�"�B��� �����
��������C""�D��������������,����#��@�?�������B������,���%/���1���) ��� '�������� ���
)�""�� �����@��� �� ���������J��&� C�L6��!E���8D@� ]� #�X� 4@4/�� ]]�#�X� 4@4�� ���� ]]]�#�X�
4@44�@�
��!���� :� Mstn� !���� ���"��$������ (�����!�� �����(��� ��� ���� �����%*�����!� ��"�� ��#�
ApcMin/+���"�2�������,�,����� ��)�B���� 18������Mstn-/-� ��������������@����P�8����������
8� � �'B���� '� �Mstn� ����� ���� �,� ��� ���� �����1� 8������ ��)��8��� )�ApcMin/+Mstn+/-�
���� �pcMin/+Mstn-/-� ���@� ��� ��8����� � �,�� ���� ������� ��� ���� )� �� �� ���� � ������ B� '�
� '1�����������'B������ �8����� �� �����8�18�����ApcMin/+Mstn+/+@���� '��������������.��
)��� �� �����8�18�����������������ApcMin/+Mstn-/-����@�&��'�� ��� ����ApcMin/+Mstn+/+
�����
ApcMin/+Mstn-/-����@�0��Mstn���������� �,� ���8��,�� ����1�B���' ��������ApcMin/+
����@����
8��,�� ���)� �(��� ���������B�� ���� ���ApcMin/+Mstn-/-����@������B����!%@%�J�4@9�B��(��
��� � � '�� ��� )� ����1���@��� �� ��������� J� �&� C�L*�<E���8D@� ]]�#�X� 4@4�� ���� ]]]�#�X�
4@44�@�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 29: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/29.jpg)
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 30: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/30.jpg)
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 31: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/31.jpg)
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 32: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/32.jpg)
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 33: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/33.jpg)
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 34: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/34.jpg)
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
![Page 35: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer](https://reader031.fdocuments.us/reader031/viewer/2022020213/5750a4361a28abcf0ca89b62/html5/thumbnails/35.jpg)
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057