FACULTÉ DES SCIENCES

DOMAINE DES SCIENCES ET TECHNOLOGIES

MENTION PHYSIOLOGIE ANIMALE PHARMACOLOGIE ET COSMÉTOLOGIE

LABORATOIRE DE PHARMACOLOGIE GÉNÉRALE,

DE PHARMACOCINÉTIQUE ET DE COSMÉTOLOGIE

MÉMOIRE POUR L’OBTENTION DU DIPLÔME DE MASTER

Option : PHARMACOLOGIE

Présenté par :

RANDRIAMALALA Narivony

Le : 14 Septembre 2018

Devant le jury composé de :

Président : Professeure RANDRIANAVONY Patricia

Rapporteur : Professeur Titulaire RANDIMBIVOLOLONA Fanantenanirainy

Examinateur : Docteur ANDRIAMALALA Solofoniaina Gabriel

Année : 2016-2017

LPGPC

ÉTUDE DE L’ACTIVITÉ DE L’EXTRAIT

RAN 21 SUR L’HYPERGLYCÉMIE CHEZ

LA SOURIS

PROMOTION : 2016-2017 (MIRAY)

OPTION : PHARMACOLOGIE

LABORATOIRE : Laboratoire de Pharmacologie Générale, de

Pharmacocinétique et de Cosmétologie (LPGPC)

BP : 8357

E-MAIL : frandimbi@gmail.com

FACULTÉ DES SCIENCES

UNIVERSITÉ D’ANTANANARIVO

ÉTUDE DE L’ACTIVITÉ DE L’EXTRAIT

RAN 21 SUR L’HYPERGLYCÉMIE CHEZ

LA SOURIS

Nom

Prénoms

Adresse

E-mail

Tél

: RANDRIAMALALA

: Narivony

: Lot IIIK36 Bis A Ankaditoho

: narandriamalalami@gmail.com

: 034 53 144 70

REMERCIEMENTS

Je souhaite à remercier ici tous ceux et celles qui ont contribué à la réalisation de ce mémoire.

A Monsieur RANDIMBIVOLOLONA Fanantenanirainy, Professeur titulaire, Directeur du

Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie, pour

m'avoir accueilli au sein de son laboratoire, et pour ses précieux conseils, sa réactivité

incontestable et sa grande disponibilité. Veuillez trouver ici l'expression de ma profonde

gratitude.

A Madame la Professeure RANDRIANAVONY Patricia qui m'a toujours aidé depuis que j'ai

intégré la mention Physiologie Animale, de Pharmacologie et de Cosmétologie. Vous m'avez

accueilli avec une grande disponibilité et générosité et m'a apporté une aide précieuse et

efficace tout au long de mon travail. Merci de m'avoir fait partager vos expériences. Malgré

vos multiples et lourdes responsabilités, vous n'avez pas ménagé votre temps pour présider le

jury de ce mémoire. Veuillez trouver ici l'expression de ma sincère reconnaissance et mon

profond respect.

Au Docteur ANDRIAMALALA Solofoniaina Gabriel, d’avoir accepté d'examiner mon travail.

Je vous suis reconnaissant d'avoir voulu porter intérêt à ce travail.

Au Docteur Nat QUANSAH, Directeur du SIT StudyAbroad, Madagascar, pour vos

participations dans notre formation, et d’avoir bien voulu corriger la version anglaise de mon

résumé, malgré votre programme chargé. Je vous adresse mes sincères remerciements

Mes chaleureux remerciements s’adressent également au personnel enseignant, technique et

administratif de la mention Physiologie Animale, de Pharmacologie et de Cosmétologie,

Faculté des Sciences de l’Université d’Antananarivo et l'équipe du laboratoire de

Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie, pour m'avoir aidé à

atteindre mon objectif.

A la promotion MIRAY, pour leur sympathie, leur amitié, et leur aide durant ces années

d'études qu'on avaient passé ensemble.

A mes parents, pour tout ce que vous avez fait pour moi, pour vos soutiens tout au long de mes

études et pour votre patience pendant ce travail de mémoire. A mes sœurs et mes amis proches,

merci pour vos soutiens, vos conseils, vos bénédictions et vos prières. Longue vie à vous !

A tous, Merci.

.

i

TABLE DES MATIÈRES

TABLES DE MATIÈRES……………………………………………………………... i

LISTE DES FIGURES………………………………………………………………… ii

LISTE DES TABLEAUX…………………………………………...……………….… iii

LISTE DES SIGLES ET DES ABRÉVIATIONS………………………….………...... iv

I. INTRODUCTION………………………………………………………….………... 1

II. MATERIÉLS ET MÉTHODES…………………………………………………….. 4

A. Partie chimique………………….………………………………………………..… 4

1. Préparation de l’extrait ……………………………………………………….……... 4

2. Criblage phytochimique…………………….……………………………………….. 4

B. Partie pharmacologique…...……………………………………………………….... 6

1. Animaux d’expérimentation…………………………………………….…………... 6

2. Méthode utilisée pour mesurer la glycémie…………………………………………. 6

3. Étude de l’extrait sur l’hyperglycémie………………………………………………. 7

a. Étude de l’effet de RAN21 sur l’hyperglycémie transitoire…………………….…... 7

b. Étude de l’effet du régime enrichi en lipide sur le poids des souris………………… 7

c. Étude de l’effet de l’extrait sur le poids de souris engraissées………………………. 7

d. Étude de l’effet du régime hyperlipidique sur la glycémie………………………….. 8

e. Étude de l’effet de l’extrait RAN 21 sur la glycémie des souris engraissées………... 8

C. Expression et analyse des résultats………………………………...………………... 8

III. RÉSULTATS……...…………………………………………………………..….... 9

A. Partie chimique…………………………………..…………………………………. 9

1. Rendement de l’extraction………………………………….……………………….. 9

2. Résultats du criblage phytochimique………………….…………………………….. 9

B. Partie pharmacologique…………..………………………………………………… 10

1. Effet de L’extrait RAN 21 sur l’hyperglycémie transitoire…………………….…… 10

2. Effet du régime hyperlipidique sur le poids des souris……………………………… 11

3. Effet de l’extrait RAN 21 sur le poids des souris obèses……………………………. 11

4. Effet du régime hyperlipidique sur le poids des souris……………………………… 12

5. Effet de l’extrait RAN 21 sur la glycémie des souris obèses………………………... 13

IV. DISCUSSION……………………...………………………………………………. 15

V. CONCLUSION………………………………………………………………...…… 17

VI. BIBLIOGRAPHIE………………...……………………………………………….. 18

ii

LISTE DES FIGURES

Figure1. Glucomètre utilisé pour mesurer la glycémie des souris dans le présent travail... 6

Figure 2. Variation de la glycémie des souris non traité et des souris ayant reçu l’extrait

RAN 21 aux doses de 50, 100, 200 mg/kg par rapport à celle des souris témoin, 30 min

après l’administration de la solution glucosée (4 g/kg) ( ± ; n = 3; P < 0,05) .................

10

Figure 3. Variation du poids des souris non traités ayant reçu un régime normal, et celle

des souris soumises à un régime hyperlipidique, constitué de 3 g de provende « LFL

14/20 » mélangées à 2 g de saindoux par souris, par jours, pendant 21 jours ( ± ; n

=12 ; P < 0,05) …………………………….………………………………………….......

11

Figure 4. Variation du poids des souris non traités, des témoins obèses et des souris

obèses traitées avec l’extrait RAN 21, administré par voie orale, une fois par jours, aux

doses de 50,100 et 200 mg/kg ( ± ; n = 3; P < 0,05) ……………….…..…..………….

12

Figure 5. Variation de la glycémie des souris ayant reçu de la provende normale et celle

des souris ayant reçu de la provende enrichie en lipide pendant 21 jours ( ± ; n = 12 ;

P < 0,05)…………………………………………………………………………………..

13

Figure 6.Variation de la glycémie des souris ayant reçu de la provende normale et celle

des souris obèses ayant reçu de l’eau distillée, et celle des souris obèses traitées avec

l’extrait RAN 21, administré par voie orale aux doses de 50,100 et 200 mg/kg ( ± ; n =

3 ; P < 0,05) .........................................................................................................................

14

iii

LISTE DES TABLEAUX

Tableau I. Tests utilisés pour déterminer les familles chimiques présentes dans

l’extrait RAN 21……………………..………………………………………………...

5

Tableau II. Les familles chimiques présentes dans l’extrait RAN 21………………… 9

iv

LISTE DES SIGLES ET DES ABRÉVIATIONS

% : Pourcent

± : Plus ou moins

< : Inférieur à

°C : Degré Celsius

Cl-

cm

ED

: Ion chlore

: Centimètre

: Eau distillées

DID : Diabète insulinodépendant

DNID : Diabète non insulinodépendant

Et al. : Alli

FeCl3 : Chlorure ferrique

G : Gramme

H : Heure

H2SO4 : Acide sulfurique

Kg : Kilogramme

LPGPC

L

: Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie

: Litre

mM : Millimolaire

: Moyenne

Mg : Milligramme

mg/kg

mmol/ l

: Milligramme par kilogramme

: Milli mole par litre

Min : Minutes

N : Nombre d’animaux utilisés

NaCl : Chlorure de sodium

NaOH : Hydroxyde de sodium

OMS : Organisation Mondial de la Santé

P : Seuil de signification

: Ecart type réduit

S : Seconde

INTRODUCTION

1

I. INTRODUCTION

A jeun, la glycémie se situe entre 0,9 et 1,1 g/l (5 et 6,11 mmol/l), au-delà de 7 mmol/l, on

parle d’hyperglycémie (MIZOCK, 1995). Au cas où elle devient chronique, elle est à l’origine

de différentes pathologies comme la néphropathie, la rétinopathie, l’impuissance,

l’artériopathie, la gangrène des extrémités, la polynévrite, la détérioration des vaisseaux

sanguins et des nerfs, les infections. Le diabète est un exemple de maladie qui exprime d’une

manière évidente une hyperglycémie. Elle se présente sous 2 formes : le diabète du type 1

insulino-dépendant (GRIMALDI et al., 2009) et le diabète du type 2 non insulino dépendant

(DNID) (KLOTZ, 1967). Par ailleurs, il existe aussi le diabète gestationnel qui est lié à une

résistance à l’insuline. Elle survient pendant la grossesse, mais peut également persister après

la grossesse (PAPOZ et al., 1994). C’est une maladie caractérisée par une hyperglycémie

résultant du défaut de sécrétion d’insuline ou de l’action de l’insuline sur les cellules cibles ou

les deux (American Diabetes Association, 2014). Cette hyperglycémie chronique est souvent

associée à une hypertension, à des sensations de fatigue et de soif exacerbée,

d’engourdissement et de picotement des pieds et des mains, lenteur de cicatrisation, trouble de

la vision, à une dyslipidémie et à une obésité abdominale (BOREL et al., 1999).

Elle se produit en cas d’un régime riche en glucides et lipides, ou lors d’un manque d’exercice

physique, d’un stress, du traitement médicamenteux comme la cortisone, d’insuffisance en

insuline, de la déshydratation, de la libération anormale de glucose par le foie, du rhume et

d’autres pathologies (GHAMARIAN et al, 2012; American Diabetes Association, 2018).

Afin de trouver une explication à ce taux élevé de glucose dans le sang, il est nécessaire de

comprendre l’homéostasie du glucose. En fait, celle-ci est régulée par l’action de l’insuline,

une hormone hypoglycémiante, et les hormones cataboliques hyperglycémiants.

L’insuline abaisse la glycémie en inhibant la mobilisation de substrats endogènes et en activant

l’intégration du glucose dans les cellules utilisatrices. En effet, pour la grande majorité des

tissus de l’organisme, le glucose est la source potentielle énergétique (MIZOCK, 1995).

L’élévation de la glycémie stimule la sécrétion de l’insuline au niveau des cellules bêta des

îlots de Langerhans localisées dans le pancréas (ANDREELLIF, 2003). Cette hormone

favorise l’utilisation du glucose par les cellules utilisatrices et sa mise en réserve en stimulant

la glycogenèse au niveau des cellules hépatiques et musculaires et la synthèse des acides gras

au niveau des cellules adipeuses, en même temps elle inhibe l’hydrolyse des triglycérides et la

glycogénolyse hépatique (SHAH et al., 2011). Elle stimule également la lipogenèse au niveau

des tissus adipeux (MAGNAM et KTORZA, 2005).

2

Tandis que le glucagon, l’adrénaline, les glucocorticoïdes et l’hormone de croissance

mobilisent les substrats endogènes et augmentent la glycémie. En cas d’hypoglycémie les

cellules alpha des îlots de Langerhans sont stimulées et sécrètent le glucagon. A son tour, au

niveau des cellules hépatiques le glucagon stimule l’hydrolyse du glycogène, et libère le

glucose pour compenser l’hypoglycémie (TAPPY, 2004).

L’hyperglycémie chronique résulte du dysfonctionnement de la régulation de la glycémie. Cela

peut être dû à l’insuffisance ou l’absence de la sécrétion d’insuline, ou à la résistance à

l’insuline des cellules cibles (MAGNAN et KTORZA, 2005). D’autres facteurs peuvent

également provoquer l’hyperglycémie, par exemple une alimentation riche en graisse animale

ou en sucre, pauvre en fibre et la sédentarité. Dans d’autres cas, les tissus périphériques sont

incapables d’utiliser correctement le glucose circulant, diminue en effet la fonction sécrétrice

des cellules bêta tout en augmentant la résistance à l’insuline (KLOTZ, 1967).

Cependant, il est important de traiter l’hyperglycémie pour prévenir les nombreuses

pathologies et complications qu’elle engendre. En effet, la diminution de l’hyperglycémie se

fait soit par apport d’insuline exogène (PAPOZ et al., 1994) soit à l’aide des médicaments

agissant sur le métabolisme glucidique, comme les insulino sensibilisateurs, les insulino

sécréteurs, et les inhibiteurs de l’alpha-glucosidase. Les insulino sensibilisateurs comme les

biguanides dans la famille des Metformines (GLUCOPHAGE®) augmentent la sensibilité à

l’insuline des cellules utilisatrices de glucose, en outre ils inhibent la néoglucogenèse et la

glycogénolyse au niveau du foie et du muscle, réduisant ainsi la production de glucose. Tandis

que les insulino sécréteurs comme les sulfamides hypoglycémiants (Glimbenclamide :

DAONIL® ; Glipizide : GLIBENESE®), les glinides (répaglinide : NOVONORM®),

augmentent la sécrétion d’insuline par les cellules bêta du pancréas ; cet effet est dépendant de

la présence de cellules bêta actives dans les îlots pancréatiques. Enfin, les inhibiteurs de

l’alpha-glucosidase comme l’Acarbose (GLUCOR®) et miglitol (DIASTABOL®) inhibent

d’une façon compétitive l’alpha-gucosidase responsable de la réabsorption intestinale du

glucose. Ceci diminue la quantité circulant de glucose donc diminue la glycémie (EDDI et

WAKIM, 2014).

Par ailleurs, de nombreuses plantes médicinales fournissent une source alternative de

composés hypoglycémiants comme Citrullus colocynth (coloquinte) (CUCURBITACEAE),

les écorces de Ficus bengalensis (GEETHA, 1994).

A Madagascar, de nombreuses plantes médicinales, sont utilisés pour contrôler la glycémie.

Par exemple les feuilles d’Euphorbia hirta (jean robert) (EUPHORBIACEAE), les graines

d’Eugenia jambolana (rotra) (MYRTACEAE) sont utilisées sous forme de décoctée, pour

3

leurs effets hypoglycémiantes (CHATUVERDI., et al., 2009; RABESA, 1986;

RAJASEKARAN et al., 2007).

Selon les enquêtes ethnobotaniques que nous avions effectuées dans la région d’Alaotra

Mangoro, à Morarano Andasibe, le décocté des feuilles de la plante sujet de ce mémoire, est

utilisé en cas d’une fatigue, accompagné d’une polyurie suivie d’une polydipsie. Cela nous a

permis de supposer que cette plante possèderait une activité hypoglycémiante. Pour contribuer

à comprendre son activité, dans la prise en charge de l’hyperglycémie, nous avons préparé

l’extrait RAN21 dont nous avons testé son effet chez la souris rendues hyperglycémiques.

MATÉRIELS

ET

MÉTHODES

4

II. MATÉRIELS ET MÉTHODES

A. PARTIE CHIMIQUE

1. Préparation de l’extrait

Les feuilles de la plante utilisées dans ce travail ont été récoltées dans le quartier de Morarano

Andasibe, région d’Alaotra Mangoro au mois d’Août 2017. Après un séchage à l’ombre, à la

température ambiante, pendant 4 semaines, elles ont été broyées à l’aide d’un broyeur

électrique (BROOK CROMPTON SERIES 2000) au Laboratoire de Pharmacologie Générale,

de Pharmacocinétique et de Cosmétologie (LPGPC). Ensuite, 200 g de la poudre obtenue ont

été macérés dans 1,5 litre de mélange éthanol- eau (60 : 40), à la température ambiante,

pendant 3 jours. Le macérât a été agité une fois par jour. Puis, il a été ensuite filtré sur du coton

hydrophile. Le filtrat ainsi obtenu a été évaporé à l’aide d’un distillateur à la température de

80° C, puis dans un bain marie, à la température de 100° C pour l’évaporer à sec.

L’extrait obtenu a été codé RAN 21, puis pesé pour calculer le rendement de l’extraction selon

la formule :

1. Criblage phytochimique de l’extrait RAN 21

Pour déterminer les différentes familles chimiques présentes dans l’extrait RAN 21, un

criblage phytochimique a été effectué suivant les méthodes décrites par FONG et al., (1977).

Ce test est basé sur la présence d’une précipitation et /ou d’un changement de coloration de

l’extrait en utilisant des réactifs spécifiques pour chaque famille chimique. L’apparition du

précipité ou du changement de coloration en présence d’un réactif spécifique indique la

présence de la famille chimique correspondante dans l’extrait (tableau I).

La teneur de ces familles chimiques dans l’extrait RAN 21 a été appréciée en utilisant les

signes suivants :

- : Absence de la famille chimique,

± : Présence de la famille chimique en très faible teneur,

+ : Présence de la famille chimique en faible teneur,

++ : Présence de la famille chimique en teneur moyenne,

+++ : Présence de la famille chimique en forte teneur,

5

Tableau I. Tests utilisés pour détecter les différentes familles chimiques présentes dans

l’extrait RAN 21 (FONG et al. ,1977).

Familles chimiques Tests Réactifs Observations

ANTHOCYANES

BATH-SMITH

HCl à froid Coloration rouge

LEUCOANTHOCYANES HCl concentré + bain

marie

Coloration rouge

Violacée

SAPONINES

MOUSSE

HCl + Agitation

Persistance d’une

mousse (3cm

d’épaisseur) après

30mn

SUCRES RÉDUCTEURS Liqueur de Fehling+

Bain-marie

Précipitation rouge

brique

POLYSACCHARIDES + 3Volumes d’éthanol

absolu Trouble

COUMARINES NaOH 10% Fluorescence à l’UV

ALCALOÏDES DRAGENDORFF,

MAYER, WAGNER Précipitation

TANINS

Gélatine + NaCl Précipitation verte

Gélatine + FeCl3

Méthanol

Précipitation

bleue

COMPOSÉS

PHÉNOLIQUES Gélatine 1% Précipitation

FLAVONOÏDES WIL-STATER Ruban de Mg + HCl

concentré Coloration rouge

STÉROÏDES ET

TRITERPÈNES

LIERMAN

BURCHARD

Anhydride acétique +

H2SO4 Coloration violette

BADGET

KEDDE Acide picrique Coloration rouge

SALKOWSKI H2SO4 Anneau de séparation

rouge

6

B. PARTIE PHARMACOLOGIE

L’activité de l’extrait RAN 21 a été étudiée sur une hyperglycémie expérimentale chez la

souris. Elle a été provoquée en administrant une solution de glucose par voie orale, ou en

instaurant un régime hyperlipidique (LEMHADRI et al., 2007).

1. Animaux d’expérimentation

Des souris de race SWISS, de sexe femelle, pesant entre 20 à 25 g, élevées à l’animalerie de

LPGPC ont été utilisées. Ces animaux ont été élevés à la température de 25° C, avec une

alternance de lumière et d’obscurité de 12/12 h. Elles ont été nourries avec de la provende LFL

14/20 et ont un accès libre à de l’eau. Ces animaux ont été mis à jeun pendant 18 heures avant

chaque manipulation.

2. Méthode utilisée pour mesurer la glycémie

La glycémie a été mesurée en prélevant du sang dans la veine mandibulaire de la mâchoire

supérieure des souris, puis la goutte de sang a été récupérée sur une bandelette fournie avec le

glucomètre « One call plus ©». La glycémie s’affiche sur l’écran de l’appareil (Figure 1).

Figure 1. Glucomètre utilisé pour mesurer la glycémie des souris dans le présent travail.

7

3. Étude de l’extrait sur l'hyperglycémie

L’activité de l'extrait a été évaluée sur une hyperglycémie transitoire provoquée par une

solution de glucose, et sur une hyperglycémie chronique provoquée par un régime enrichi en

lipide.

a. Étude de l’effet de RAN 21 sur l’hyperglycémie transitoire

Des animaux mis à jeun pendant 18 heures ont été utilisés. Un prélèvement sanguin a été

effectué au niveau de la veine mandibulaire des souris afin de mesurer leur glycémie de base.

Les souris ont été répartis en 5 lots de 3 souris : un lot d’animaux témoins qui n’ont reçu aucun

produit durant le test, tandis que les animaux du lot rendu hyperglycémique ont reçu 10 ml/kg

d’eau distillée, et enfin, les souris du lot traité ont reçu l’extrait RAN 21 aux doses respectives

de 50, 100 et 200 mg/kg par voie orale dans un volume d’eau de 10 ml/kg (DIEHL et al.,

2001). Trente minutes après l’administration de l’extrait et de l’eau distillée, une solution de

glucose 4 g/kg a été administrée chez chaque animal, dans un volume de 10 ml/kg (DIEHL et

al., 2001). Du sang a été prélevé au niveau de la veine mandibulaire de chaque animal 30, 60,

90 et 120 min après la surcharge glucosée (SY et al., 2008). Ensuite la glycémie a été mesurée.

b. Étude de l’effet du régime enrichi en lipide sur le poids des souris

Dans le but d’étudier l’effet de l'extrait RAN 21 sur l’hyperglycémie chronique, celle-ci a été

provoquée en donnant aux souris un régime enrichi en lipide, constitué de 3 g de provende

mélangés avec 2 g de saindoux, par souris, par jour. La glycémie de base de tous ces animaux

a été mesurée, tous les matins à jeun, durant 21 jours. Pendant cette période, les souris ont été

pesées à jeun une fois par jour (LEMHADRI et al., 2007).

c. Étude de l’effet de l’extrait sur le poids de souris engraissées

Pour étudier l’effet de l’extrait RAN 21 sur le poids, les animaux ont été répartis en 5 lots de 3

animaux : 1 lot de souris non traitées, 1 lot témoin avec des souris engraissées ayant reçu de

l’eau distillée et 3 lots de souris engraissées traitées avec l’extrait RAN 21 aux doses de 50,

100, et 200 mg/kg, dissout dans 10 ml/kg d’eau distillée, une fois par jour, pendant 7 jours.

Ensuite tous les animaux ont été pesés à jeun pour suivre la variation de leur poids pendant le

traitement (LEMHADRI et al., 2007).

8

d. Étude de l’effet du régime hyperlipidique sur la glycémie

Afin d’évaluer l’effet du régime enrichi, la glycémie de base de tous ces animaux a été

mesurée, à jeun. Puis ils ont été soumis à un régime enrichi en lipide. Durant cette période, la

glycémie des souris a été mesurée, une fois par jour, à jeun (LEMHADRI et al., 2007).

e. Étude de l’effet de l’extrait RAN 21 sur la glycémie des souris engraissées

Afin d’évaluer l’effet de l’extrait RAN 21 sur l’hyperglycémie chronique, celle-ci a été

provoqué chez la souris par un régime hyperlipidique. Après cette période d’engraissement, les

animaux ont été répartis en 4 lots de 3 animaux : un lot témoin constitué de souris rendues

hyperglycémiques ayant reçu 10 ml/kg d’eau distillée, par voie orale, une fois par jour à jeun,

puis 3 lots d’animaux hyperglycémiques ayant reçu l’extrait RAN 21, par voie orale, aux doses

de 50, 100, et 200 mg/kg une fois par jour, dans 10 ml/kg d’eau distillée, pendant 7 jours, à

jeun, puis un lot de souris non traitées. Afin d’estimer l’effet de RAN 21, la glycémie de tous

les animaux a été mesurée tous les matins à jeun (LEMHADRI et al., 2007).

C. EXPRESSION ET ANALYSE DES RÉSULTATS

Les résultats ont été exprimés sous forme de moyennes avec écart type réduit ( ± ). Ces

moyennes ont ensuite été comparées entre elles en utilisant le test ‘t’ de Student. La différence

a été considérée comme significative avec une valeur de P < 0,05.

RÉSULTATS

9

III. RÉSULTATS

A. PARTIE CHIMIQUE

1. Rendement de l’extraction

L’évaporation à sec du filtrat obtenu après macération de 200 g de poudre de plante sèche,

donne 20 g d’extrait de couleur noire avec une texture pâteuse, soit un rendement de 10%.

2. Résultats du criblage phytochimique

Le criblage phytochimique effectué sur l’extrait RAN 21 révèle la présence d’alcaloïdes, de

tanins, de stéroïdes et de sucres réducteurs en forte teneur. Tandis que les terpènoïdes et les

stéroïdes y sont présents en teneur moyenne (Tableau II).

Tableau II. Les familles chimiques présentes dans l’extrait RAN 21

FAMILLES CHIMIQUES TENEUR

Composées phénoliques +++

Alcaloïdes +++

Tanins +++

Stéroïdes +++

Sucres réducteurs +++

Flavonoïdes ++

Terpènoïdes ++

Légende :

++ : Forte teneur

+++ : Teneur moyenne

10

B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE

1. Effet de l’extrait RAN 21 sur l’hyperglycémie transitoire

La glycémie de base des souris est égale à 5,47 ± 0,05 mmol/l. La glycémie des souris non

traitées reste constante pendant la période d’observation. L’administration d’une solution de

glucose par voie orale augmente temporairement la glycémie des animaux. Elle atteint une

valeur maximale, à la trentième minute. La glycémie des souris témoins retourne à sa valeur

normale après 120 minutes, et celle des animaux traités avec l’extrait après 60 minutes (P <

0,05) (Figure 1).

Par ailleurs, la valeur maximale de la glycémie des souris témoins est supérieure à celles des

animaux traités avec l’extrait. Elle est égale à 8,37 ± 0,33 mmol/l, contre 7,10 ± 0,12, 6,37 ±

0,23 et 6,13 ± 0,20 mmol/l chez les souris traitées avec l’extrait aux doses de 50, 100, 200

mg/kg (P < 0,05) (Figure 1). Ces résultats montrent que RAN 21 diminue l’hyperglycémie

provoquée par l’ingestion de la solution de glucose.

Figure 2. Variation de la glycémie des souris non traité ( ) et des souris ayant reçu l’extrait

RAN 21 aux doses de 50 ( ), 100 ( ), 200 ( ) mg/kg par rapport à celle des souris témoin

( ), 30 min après l’administration de la solution glucosée (4 g/kg) ( ± ; n = 3 ; P < 0,05).

11

2. Effet du régime hyperlipidique sur le poids des souris

Avant les expériences les souris pèsent 24,2 ± 0,1 g. Le poids des souris ayant reçu un régime

normal reste constant. Après le régime hyperlipidique le poids des souris augmente. Au bout

de 21 jours, elles pèsent 31,4 ± 0,25 g (P < 0,05) (Figure 2).

n

Figure 3. Variation du poids des souris non traités ayant reçu un régime normal ( ) , et celle

des souris soumises à un régime hyperlipidique ( ), constitué de 3 g de provende « LFL

14/20» mélangées à 2 g de saindoux par souris, par jour, pendant 21 jours ( ± ; n = 12 ; P <

0,05).

3. Effet de l’extrait RAN 21 sur le poids des souris obèses

En traitant une fois par jour les souris rendues obèses avec l’extrait RAN21, leur poids diminue

en fonction du temps et de la dose de l’extrait administrée. Celui des animaux témoins reste

constant, soit 24,9 ± 0,6 g. Le poids des souris obèses traités avec de l’eau distillée reste

également constant et est égal à 31,4 ± 0,25 g. Par ailleurs celui des souris obèses traitées avec

l’extrait aux doses de 50, 100 et 200 mg/kg passe de 31,4 ± 0,25 g à 24,9 ± 0,6 , 22 ± 0,05 et

22,15 ± 0,1 g respectivement (P < 0,05). En analysant ces courbes, il apparaît qu’après 5 jours

de traitement avec l’extrait à la dose de 50 mg/kg, le poids des animaux traités avec l’extrait

12

revient à sa valeur normale. Enfin, le poids des souris traitées avec l’extrait RAN21 aux doses

de 100 et 200 mg/kg, est inférieur à celui des souris témoins (figure 3).

Ces résultats montrent que l’extrait RAN 21 diminue le poids des souris rendues obèses avec le

régime enrichi en lipide.

Figure 4. Variation du poids des souris non traités ( ) , des témoins obèses ( ) et des souris

obèses traitées avec l’extrait RAN 21, administré par voie orale, une fois par jour, aux doses de

de 50( ) ,100 ( ) et 200( ) mg/kg ( ± ; n = 3 ; P< 0,05).

4. Effet du régime hyperlipidique sur la glycémie des souris

Avant le régime hyperlipidique la glycémie de tous les animaux est égale à 5,21 ± 0,5 mmol/l.

Elle reste constante pour les animaux nourris avec de la provende normale. Par contre, elle

augmente chez les souris dont la nourriture est constituée de provende enrichie en lipide. Après

21 jours, la glycémie des animaux ayant reçu de la provende normale est égale à

5,15 ± 0,05 mmol/l, contre 8,29 ± 0,1 mmol/l chez les souris nourries avec de la provende

enrichie en lipide (P < 0,05) (figure 4). Cela montre que le régime enrichi en lipide augmente

la glycémie des souris.

13

Figure 5. Variation de la glycémie des souris ayant reçu de la provende normale ( ) et celle

des souris ayant reçu de la provende enrichie en lipide pendant 21 jours ( ) ( ± ; n = 12 ;

P < 0,05).

5. Effet de l’extrait RAN 21 sur la glycémie des souris obèses

Au début des expériences, la glycémie des souris obèses est égale à 8,29 ± 0,1 mmol/l, contre

5,15 ± 0,05 mmol/l chez les souris normales. Après 5 jours de traitement, la glycémie des

souris normales reste constante, tandis que celle des souris traitées avec l’extrait RAN 21 et

celle des souris obèses témoins diminuent. La glycémie des souris témoins obèses est

supérieure à celle des souris obèses traitées avec l’extrait. Elle diminue en fonction de la dose

administrée.

Après 5 jours, celle des témoins obèses est égale à 7,1 ± 0,1 mmol/l, contre 4,9 ± 0,1, 4,7 ±

0,05, 3,9 ± 0,7 mmol/l chez les souris traitées avec l’extrait aux doses de 50, 100 et 200 mg/kg

(P < 0,05). En outre la glycémie des souris traitées avec l’extrait à la dose de 200 mg/kg est

inférieure à celle des souris normales (Figure 5). D’après ces résultats, l’extrait RAN 21

diminue l’hyperglycémie des souris obèses.

14

Figure 6. Variation de la glycémie des souris ayant reçu de la provende normale ( ), celle

des souris obèses ayant reçu de l’eau distillée ( ) ,et celle des souris obèses traitées avec

l’extrait RAN 21, administré par voie orale aux doses de 50( ) ,100 ( ) et 200( )

mg/kg ( ± ; n = 3 ; P < 0,05).

DISCUSSION

15

IV. DISCUSSION

L’objectif de ce travail a été d’étudier l’activité de l’extrait RAN 21 sur l’hyperglycémie

expérimentale chez la souris de race SWISS. Il a été testé sur l’hyperglycémie transitoire

provoquée par une surcharge glucosée et l’hyperglycémie chronique provoquée par un régime

riche en lipide.

La surcharge glucosée provoque une hausse de la glycémie d’une manière temporaire

(KERNAN et al., 2005). La diminution de la glycémie est due à l’inhibition de l’absorption de

glucose au niveau de la paroi intestinale ou à l'action de l'insuline au niveau des tissus

périphériques : le foie, le muscle en brûlant le glucose ou en le stockant sous forme de

glycogène ou en diminuant la glycogénolyse hépatique (YASODHA et al., 2008).

Nos résultats montrent que l’extrait RAN21 inhibe l’hyperglycémie transitoire. Cet effet peut

être dû aux flavonoïdes qui stimuleraient la libération d’insuline après les cellules bêta

pancréatiques ou sur l’activité périphérique de l'insuline notamment en stimulant le stockage

du glucose sous forme de glycogène ou la transformation du glucose en énergie. L’étude de

l’effet de la plante Rhazia stricta (APOCYNACEAE) chez les souris montre que les

flavonoïdes diminuent l’hyperglycémie en stimulant la sécrétion d’insuline (WASFI et al.,

1994). L’extrait RAN 21 pourrait aussi stimuler le stockage du glucose sous forme de

glycogène en activant le glycogène synthase dans le foie et les muscles squelettiques ou

inhiber la glycolyse hépatique ou favoriser la libération de l’insuline en activant la fermeture

du canal potassique de type K+/ATP, engendrant la dépolarisation de la membrane des cellules

bêta et l’ouverture du canal calcique voltage dépendant. L’influx de calcium qui s’ensuit

provoque l’exocytose de l’insuline induisant sa sécrétion (SY et al., 2004 ; KETI et al., 2017).

Par ailleurs, il a été rapporté que les alcaloïdes présents dans l’extrait des feuilles d’Argémone

mexicana (PAPAVERACEAE), et dans celles de Berberis vulgaris (BERBEDACEAE)

augmentent la sensibilité des cellules utilisatrices à l’insuline réduisant ainsi la glycémie

(NAWEL et al, 2011 ; PRAVEEN et al, 2012). Nous émettons une hypothèse que l’activité

hypoglycémiante de l’extrait RAN21 pourrait être due à l’augmentation de l’intégration du

glucose dans les cellules cibles. En se rapportant sur les résultats du criblage chimique, il se

peut que des alcaloïdes présents dans l’extrait puissent être les principes actifs de l’extrait.

Dans le deuxième test, nous avons provoqué l’hyperglycémie avec un régime riche en lipide,

ce qui entraine un surpoids provoqué par un développement de tissus adipeux viscéraux. Cet

état pathologique provoque une intolérance au glucose en augmentant la mise en circulation de

lipide. L'augmentation de la concentration plasmatique en acides gras libres diminue l'action de

16

l'insuline qui normalement devrait stimuler le stockage et l'utilisation de glucose, conduisant à

une hyperglycémie chronique (ROBERT et al., 2011 ; TONG et al, 2016).

La diminution de la glycémie, ainsi que la perte du poids des souris obèses traitées avec

l’extrait pourraient être due aux flavonoïdes présents dans l’extrait. Des recherches portant sur

ces molécules montrent qu’elles stimulent l'utilisation périphérique du glucose et ou stimulent

la sécrétion d'insuline (RORIVE et al., 2005 ; VINAYAGAM et XU, 2015).

Chez des souris rendues hyperglycémiques suite à un régime riche en lipide les flavonoïdes

extraits de Cassia fistulla (FABACEAE) diminuent la glycémie en stimulant la sécrétion

d'insuline au niveau du pancréas et en améliorant la sensibilité des cellules à l'insuline

(DANISH et al., 2011).

Le criblage phytochimique effectué sur l’extrait RAN 21 a révélé la présence d’alcaloïdes, de

composés phénoliques, de tanins, de flavonoïdes, de terpènoïdes, de stéroïdes, et de sucre

réducteur. Parmi ces familles chimiques, les flavonoïdes sont reconnus comme des molécules

hypoglycémiantes (FONG et al., 1977).

L’activité anti hyperglycémique de l’extrait RAN 21 pourrait être attribuée à cette famille qui

stimule la sécrétion d’insuline.

CONCLUSION

17

V. CONCLUSION

Cette étude montre que l’extrait RAN 21 diminue l’hyperglycémie transitoire provoquée par

une surcharge glucosée et l’hyperglycémie chronique provoquée par un régime enrichi en

lipide chez la souris. L’action hypoglycémiante de l’extrait pourrait être due aux flavonoïdes

ou aux alcaloïdes qui stimuleraient la sécrétion d’insuline, ou augmenterait la sensibilité des

cellules cibles à l’insuline. Des études approfondies sont nécessaires afin d’isoler les

molécules responsables de cette activité et d’apporter des précisions sur leurs mécanismes

d’action.

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ÉTUDE DE L’ACTIVITE DE L’EXTRAIT SUR L’HYPERGLYCÉMIE CHEZ LA SOURIS

Auteur : RANDRIAMALALA Narivony

Adresse : Lot IIIK36 Bis A Ankaditoho

Contact : 034 53 144 70

E-mail : narandriamalalami@gmail.com

Année : 2016-2017

Rapporteur :Pr RANDIMBIVOLOLONA Fanantenanirainy

Laboratoire de Pharmacologie Générale,

de Pharmacocinétique et de Cosmétologie

Faculté des Sciences,

Université d’Antananarivo

E-mail :frandimbi@gmail.com

BP : 8357

RÉSUMÉ

La présente étude a eu pour objectif d’étudier l’activité de l’extrait RAN 21 chez la souris rendue

hyperglycémique. Une surcharge glucosée et un régime hyperlipidique ont été effectués pour

provoquer l’hyperglycémie des souris. L’extrait RAN 21 réduit l’hyperglycémie transitoire des

souris 30 minutes après l’administration de la surcharge glucosée (4 g/kg) dont la valeur passe de

5,15 ± 0,5 à 8,37 0,33 mmol/l chez les souris du lot témoin, contre 7,10 ± 0,12, 6,37 ± 0,23 et

6,13 ± 0,20 mmol/l chez les souris traitées avec l’extrait aux doses de 50, 100 et 200 mg/kg

(P <0,05). Le régime enrichi en lipide augmente le poids et la glycémie des souris après 21 jours de

traitement. Leur poids est égal à 24,2 ± 0,1 g pour les souris normales contre 31,4 ± 0,38 g pour les

souris rendues obèses, avec une glycémie de 5,15 ± 0,5 contre 8,29 ± 0,1 mmol/l (P < 0,05). L’extrait

RAN 21 diminue le poids et la glycémie de ces animaux. Le poids des souris témoins obèses est égal

à 31,1 ± 0,6 g contre 22,15 ± 0,1, 22 ± 0,05, 24,75 ± 0,70 g chez les souris traitées aux doses de 50,

100 et 200 mg/kg (P <0,05). Par ailleurs, la glycémie des souris témoins obèses est égale à

7,1 ± 0,1 mmol/l, contre 4,9 ± 0,1, 4,7 ± 0,05, 3,9 ± 0,7 mmol/l chez les souris traitées avec l’extrait

aux doses de 50, 100 et 200 mg/kg (P <0,05). Ces effets pourraient être dus aux flavonoïdes ou aux

alcaloïdes présents dans l’extrait RAN 21.

Mots clé : Hyperglycémie, régime riche en lipide, solution glucosée, souris.

ABSTRACT

The present study was undertaken to screen the activity of RAN 21 on induced hyperglycemia in

mice. Concentrated glucose solution and lipid enriched food were used to induce hyperglycemia. Oral

administration of RAN 21 improved glucose tolerance. The peak blood glucose level was obtained at

30 min of glucose load (4 g/kg), the normal blood sugar is equal to 5.15 ± 0.5 and rises at

8.37 0.33 mmol/l in the control group, versus 7.10 ± 0.12, 6.37 ± 0.23 and 6.13 ± 0.20 mmol/l in the

groups treated with RAN 21 at doses 50, 100 et 200 mg/kg (P <0.05). Enriched food increases the

body weight and blood glucose level, from 24.2 ± 0.1 g to 31.4 ± 0.38 g and 5.15 ± 0.5 to 8.29 ± 0.1

mmol/l respectively (P < 0. 05). Oral administration of RAN 21 during 5 days reduces the blood

glucose level from 8.29 ± 0.1 mmol/l to 7.1 ± 0.1 mmol/l in the control group, versus 4.9 ± 0.1, 4.7 ±

0.05, 3.9 ± 0.7 mmol/l in the groups treated with RAN 21 at doses of 50, 100 et 200 mg/kg (P <0.05).

Key words: hyperglycemia, enriched food, glucose solution, mice