Libro de resúmenes: Sesiones orales Farmadrid XX

8/3/2019 Libro de resmenes: Sesiones orales Farmadrid XX

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2011Vol. 1 No. 1:2

doi: 10:3823/601

Libro de resmenes:Sesiones orales Farmadrid XX

Comit Organizador: Emilio Ambrosio Flores, Alejandro Higuera Matas,Javier Ibias Martn, Nuria del Olmo Izquierdo, Miguel Miguns Vzquez,

Santiago Morales Coria, M Amparo Assis Duart, David Roura Martnez,Gonzalo Lpez Montoya, Departamento de Psicobiologa. Facultad dePsicologa. UNED

Departamento de Psicobiologa. Facultad dePsicologa. UNED

LugarFacultad de PsicologaSaln de ActosC/ Juan del Rosal, 10Ciudad Universitaria28040 - MADRID

Fecha:4 de Julio de 2011

Pgina web: http://www.farmadrid.org.es

Sesin de Apertura

Veinte aos de Farmadrid

Antonio G. Garca y Luis GandaInstituto Tefilo Hernando, Universidad Autnoma de Madrid

En octubre de 1991, un puado de farmaclogos decidimos iniciar reuniones peri-dicas para intercambiar puntos de vista sobre las distintas lneas de investigacinfarmacolgica que se desarrollaban en las universidades, hospitales y laboratoriosfarmacuticos de la Comunidad de Madrid. La primera tuvo lugar en octubre de 1991,y adopt el nombre de Reunin de Farmaclogos de la Comunidad de Madrid; en los

ltimos aos, su nombre se cambi a Farmadrid. Las primeras reuniones se basaronen ponencias. Cuando aument el nmero de comunicaciones, la jornada incluycomunicaciones orales y paneles, cuyo nmero se refleja en la siguiente figura:


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Las sedes y organizadores de las sucesivas jornadas se resumenen la siguiente tabla:

1. Fac. Medicina, Univ. Complutense de Madrid (Santos Barrign,1992) 2. Fac. Medicina, Univ. Autnoma de Madrid (Antonio R. Artalejo,

1993) 3. Fac. Medicina, Univ. Alcal de Henares (Federico Gago Bdenas,

1994) 4. Laboratorios Glaxo (Federico Gmez de las Heras, 1995) 5. Fac. Farmacia, Univ. Complutense de Madrid (Jos Angel Fuen-

tes Cubero, 1996) 6. Fac. Medicina, Univ. San Pablo-CEU (Luis Fernando Alguacil

Merino, 1997) 7. Instituto Cajal, CSIC (Mara Lpez de Ceballos, 1998) 8. Fac. Medicina, Univ. Autnoma de Madrid (Luis Ganda Juan,

1999)

9. Fac. Farmacia, Univ. Alcal de Henares (Enrique Glvez Ruano,2000)

10. Escuela de Optica, Univ. Complutense de Madrid (Jess PintorJust, 2001)

11. Hospital Univ. La Princesa, Univ. Autnoma de Madrid (FranciscoAbad, 2002)

12. Laboratorios Lilly (Luis Emilio Garca Prez, 2003)13. Fac. Medicina. Univ. Alcal de Henares (Teresa Martn-Lucinda

Villaescusa, 2004)14. Fac. Veterinaria, Univ. Complutense de Madrid (Antonio R. Ar-

talejo, 2005)15 -Fac. Ciencias de la Salud, Univ. Rey Juan Carlos (Carlos Goicoe-

chea- M. Jess Alonso, 2006)

16. Fac. Medicina. Univ. Complutense de Madrid (Angela Alsasua-Francisco Prez Vizcaino, 2007)17. Instituto de Qumica Mdica, CSIC (Jos Luis Marco, 2008)18. Instituto de Investigaciones Biomdicas, CSIC (Carmen Valenzu-

ela, 2009)19. Facultad de Farmacia, UCM (Marisol Fernndez, 2010)20. Facultad de Psicologa, UNED (Emilio Ambrosio, 2011)

En conclusin, durante sus 20 aos de vida Farmadrid ha tenidoaltibajos. Sin embargo, gracias al entusiasmo de los organiza-dores y al apoyo continuado de la Fundacin Tefilo Hernando(FTH, UAM), Farmadrid parece haberse consolidado como unforo de debate de ideas farmacolgicas, favoreciendo el es-

tablecimiento de colaboraciones cientficas entre los distintosgrupos de farmaclogos de la Comunidad de Madrid. Adems,contribuye tambin a la formacin de los jvenes investigado-res que presentan sus primeras comunicaciones en Farmadrid.

Sesin Oral I: Sistema Nervioso Central

O.1. La expresin endgena de pleiotrona modu-la los efectos reforzadores de la anfetamina yel dcit cognitivo transitorio causado por eltratamiento crnico con anfetamina durantela adolescencia.

Esther Gramage, Nuria del Olmo, Alberto Fole, Yasmina B. Mar-tn, Gonzalo Herradn. Universidad San Pablo-CEU. Boadilladel Monte, Madrid.

La Pleiotrofina (PTN) es un factor neurotrfico que ejerce im-portantes funciones en la supervivencia y diferenciacin deneuronas dopaminrgicas, as como en la modulacin de la

potenciacin a largo plazo (LTP) hipocampal. La PTN se sobre-expresa en distintas reas cerebrales en respuesta a distintasdrogas de abuso como la anfetamina, lo que sugiere que laPTN podra modular los efectos neuroadaptativos y farmaco-lgicos inducidos por esta droga. Para probar esta hiptesis,estudiamos los efectos de la anfetamina en ratones knockoutde PTN (PTN-/-) y en ratones wyld type(PTN+/+). En estos estu-dios, observamos que una dosis intermedia de anfetamina (3mg/Kg) induce un condicionamiento preferencial al sitio (CPP)similar en ratones PTN-/- y PTN+/+. Adems, los ratones PTN-/- mostraron un significativo aumento en el comportamientode bsqueda de la droga comparado con los PTN+/+ despusde 5 das de la ltima administracin de anfetamina. Una dosis

menor de esta droga (1 mg/Kg) caus un mayor CPP en ratonesPTN-/- y, de nuevo, los ratones PTN-/- continuaron mostrandoun llamativo comportamiento de bsqueda de la droga com-parado con los ratones PTN+/+ 5 das despus de la ltimaadministracin de anfetamina.

Por otra parte, se conoce que la administracin de anfetaminadurante la adolescencia en ratas provoca deficiencias cogniti-vas en el animal adulto. En este sentido, tratamos de averiguarsi la PTN puede ser uno de los factores implicados en los d-ficits cognitivos observados en el adulto despus de la admi-nistracin de anfetamina durante la adolescencia (3 mg/Kg i.p./

da, durante 10 das). Veinticuatro horas despus de la ltimaadministracin de la droga, los ratones PTN+/+ mostraron unaretencin de memoria significativa en el ensayo de evitacinpasiva independientemente del tratamiento recibido. Por elcontrario, en los ratones PTN-/- encontramos un dficit signi-ficativo en la fase de retencin inducido por anfetamina en eltest de la evitacin pasiva, as como 6 das despus de la ltimaadministracin de la droga en el test del laberinto en Y. Sinembargo, 13 y 26 das despus de la ltima administracin deanfetamina, no se encontraron diferencias significativas en ellaberinto en Y entre los ratones PTN-/- pretratados con anfeta-mina y con salino (control). Adems, observamos un aumento

significativo de la LTP hipocampal en rodajas de ratones PTN-/- pretratados con salino comparados con PTN+/+. Curiosa-mente, el tratamiento con anfetamina durante la adolescenciaaument significativamente la LTP en ratones PTN+/+ adultos,pero no produjo ningn efecto en ratones PTN-/-, lo que sugie-re mecanismos de saturacin de LTP en ratones PTN-/-. Estosdatos sugieren que el tratamiento con anfetamina durante laadolescencia provoca un dficit cognitivo transitorio depen-diendo de la expresin endgena de PTN, as como una au-mento a largo plazo de la LTP en ratones normales (PTN+/+).

O.2. Efecto de la metanfetamina en la activacinde las metaloproteinasas: Implicacin en la

neurotoxicidad.

A. Urrutia, A. Rubio-Araiz, MD Gutierrez-Lpez; A El Ali, DM Her-mann, E. OShea, MI Colado. Departamento de Farmacologa.Facultad de Medicina. UCM


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(+)-Metanfetamina (METH) induce, inmediatamente despusde su administracin, una respuesta hipertrmica y un proce-so de estrs oxidativo/nitrosativo que estn implicados en la

neurotoxicidad dopaminrgica inducida por la droga (Krasno-va and Cadet, 2009). En diversos modelos experimentales am-bos factores aumentan la actividad de las metaloproteinasas(MMPs) (Alam et al, 2011; Rosenberg, 2009). El objetivo es eva-luar el efecto de METH sobre la expresin y actividad de MMPsy su relacin con la neurodegeneracin dopaminrgica produ-cida por la droga. Ratones C57BL/6J recibieron METH (4mg/kg,i.p cada 3 horas, 3 veces consecutivas) a 22C y a 4C y se sacri-ficaron 1h, 3h, 24h y 7 das despus. Un grupo de animales fueinyectado con el inhibidor de la actividad de MMPs Batimastat(50mg/kg, i.p. 30 min antes de la primera y ltima inyeccin deMETH). En estriado se cuantific la expresin de MMP-9, su ac-tividad (zimografa en gel) y localizacin (zimografia in situ) as

como la fosforilacin de JNK1/2. Se cuantific la concentracinde dopamina (HPLC) y la densidad de su transportador (DAT)([3H]-WIN 35,428). METH aument la expresin y actividadestriatal de MMP-9 1h despus del tratamiento nicamente.Simultneamente se observ un aumento en la fosforilacinde JNK1/2. Cuando METH se administr a animales manteni-dos a 4C, el aumento en la actividad de MMPs fue sustancial-mente menor. Una semana despus de la administracin deMETH se observ una reduccin en la concentracin estriatalde dopamina y en la densidad de DAT, efectos que no fueronmodificados por la administracin de Batimastat. METH induceun incremento en la actividad y expresin de MMP-9 que es

parcialmente dependiente de la respuesta hipertrmica queinduce la droga pero que parece no estar implicado en la neu-rotoxicidad dopaminrgica.

Referencias:

1. Krasnova I and Cadet J. 2009. Methamphetamine toxicity andmessengers of death. Brain Res Rev, 60, 379-407.

2. Alam M, Mohammad A, Rahman S, Todd K, Shuaib A. 2011.Hyperthermia up-regulates matrix metalloproteinases andaccelerates basement degradation in experimental stroke.Neurosci Lett, 495, 135-139.

3. Rosemberg GA. 2009. Matrix metalloproteinases and their

multiple roles in neurodegenerative diseases. Lancet Neur, 8,205-216.

Agradecimientos:

MICINN (SAF2010-21529; RD06/0001/006), PNSD (PR47/10-17826),UCM (910258), FEDER y RTA

O.3. Posible participacin del factor de transcrip-cin Nrf2 en la depresin.

Mara Dolores Martn-de-Saavedra, Josiane Budni, Mauricio P.Cunha, Silvia Lorrio, Isabel Lastres, Laura del Barrio, Vanessa G-

mez, Ignacio Melgar, Adriana Morgado, Laura G. Curull, IzaskunBuenda, Esther Parada, Ana Lcia S. Rodrigues, Antonio Cua-drado/ Manuela G. Lpez. Instituto Tefilo Hernando de I+D delMedicamento y Departamento de Farmacologa y Teraputica.Facultad de Medicina. Universidad Autnoma de Madrid.

Existe cada vez mayor evidencia de una relacin entre depre-sin e inflamacin. Adems, el hecho de que existan entre un30 40 % de pacientes que no responden a los tratamientos

con antidepresivos hace necesario encontrar una nueva dianateraputica o un tratamiento farmacolgico alternativo. Nrf2es un factor de transcripcin que juega un papel fundamen-tal en defensa celular frente a dao oxidativo y electroflico.Adems se ha descrito que est implicado en la atenuacin deprocesos patolgicos relacionados con inflamacin. Con estosantecedentes nos planteamos la hiptesis de si Nrf2 podraestar relacionado con la fisiopatologa de la depresin y porlo tanto constituir una diana teraputica frente a dicha enfer-medad. As, realizamos distintos test predictivos de compor-tamiento depresivo en ratones salvajes y ratones knock outpara Nrf2. Los tres tests realizados mostraron que los ratonesNrf2 (-/-) presentan un fenotipo depresivo por observarse un

aumento del tiempo de inmovilidad en el test de natacin for-zada, en el test de suspensin de la cola y una disminucindel tiempo de lamido en el test de sacarosa. No se observaronalteraciones en la actividad motora. Las alteraciones a nivel decomportamiento se vieron acompaadas de alteraciones a ni-vel de plasticidad sinptica (BDNF, VEGF y sinaptofisina) y otrosparmetros alterados en pacientes de depresin mayor comoson la fosforilacin de GSK3 en la Ser9 o los niveles de recep-tor glucocorticoide (medidos mediante western blot). Ademsse observ mediante qrt-PCR que la microgla se encuentraactivada en los ratones Nrf2 (-/-). Al administrar rofecoxib,un antiinflamatorio no esteroideo, durante 7 das el fenotipo

depresivo de los ratones Nrf2 (-/-) se vio revertido. Con estosresultados podemos concluir que Nrf2 podra estar implicadoen la fisiopatologa de la depresin por un mecanismo rela-cionado con la inflamacin ya que al eliminar esta protena losratones muestran un comportamiento depresivo acompaadode alteraciones a nivel molecular de distintos parmetros rela-cionados con neuroplasticidad y resistencia a glucocorticoides.

O.4. Estimulacion del ncleo medial del rafe(NMR) modula el status epilepticus (se) in-ducido por pentilentetrazol (PTZ) en ratasjvenes.

Julin. Javela1, Pablo Bascuana1, Eduardo D. Martn2, MiguelA. Pozo11. Unidad de Cartografa Cerebral, Instituto Pluridisci-plinar, Universidad Complutense de Madrid; 2. Grupo de Neu-rofisiologa y Plasticidad Sinptica, Centro Regional de Investi-gaciones Biomdicas, Universidad Castilla-La Mancha.

En los ltimos aos se ha incrementado la evidencia que vin-cula la neurotransmisin serotonrgica con la modulacin deuna gran variedad de modelos experimentales de epilepsia.Si bien esta modulacin se ha relacionado con la activacinde receptores postsinpticos serotonrgicos tipo 5-HT1A, losmecanismos circuitales que subyacen a este control no han

sido claramente determinados. El objetivo del presente tra-bajo ha sido investigar los circuitos serotonrgicos implicadosen la modulacin de las crisis epilpticas del lbulo temporal,en particular la va Rafe-Hipocampo, utilizando un modelo destatus epilepticus (SE) inducido por pentilentetrazol (PTZ). Ratas
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Sprague Dawley macho (17030 g) fueron anestesiadas conisoflorano (al 5% para induccin y al 2% para mantenimiento)y el crneo trepanado para introducir un electrodo bipolar de

estimulacin en el Ncleo Medial del Rafe (NMR), un electrodomonopolar de estimulacin en las colaterales de Schaeffer y unelectrodo de registro en la capa piramidal de CA1 de hipocam-po de acuerdo con las coordenadas estereotxicas. Todos losexperimentos se llevaron a cabo en animales despiertos. Parala induccin del SEse utiliz PTZ, un antagonista de receptoresGABAA, aplicado intraperitonealmente a dosis repetidas de 40,20, 10 mg/kg cada diez minutos hasta desencadenar el SE. Seregistraron los cambios electrofisiolgicos y conductuales y fi-nalmente se evalu la muerte neuronal en cortes histolgicoscon la tincin de Nissl. Los datos fueron analizados medianteun anlisis de varianza de un factor (ANOVA) seguido de un unaprueba post-hoc Dunnett. La aplicacin de PTZ, segn el pro-

tocolo establecido, provoca crisis tnico-clnicas (70-80 mg/kg) que posteriormente desencadena un SE (100 mg/kg). Laestimulacin repetida del NMR (1 tren de 20Hz, 150 A durante1s), en el momento de inicio de los espasmos (estadio 2), fuecapaz de disminuir significativamente tanto el nmero comola duracin de las crisis, aumentando el intervalo de tiempoentre crisis. Igualmente, la estimulacin del NMR impidi el es-tablecimiento del SEinducido PTZ en el 100% de los animalestratados. Los estudios histolgicos mostraron que los animalesestimulados no presentaron muerte neuronal. Estos resultadosindican La estimulacin elctrica del NMR sincronizada con elinicio de las crisis es capaz de abolir el SE inducido por PTZ

en animales jvenes y de esta manera demostrando la parti-cipacin del circuito rafe-hipocampo en la modulacin del SE.Financiado por SAF2009-09020.

O.5. La adquisicin de nuevas estrategias deaprendizaje espacial en el laberinto radial deocho brazos depende de la carga gentica delos individuos: efectos de la administracincrnica de cocana.

Fole A.1,2, Miguns M.1, Higuera-Matas A.1, Ambrosio E.1, DelOlmo N.2. 1. Departamento de Psicobiologa. Facultad de Psi-

cologa. UNED; 2. Departamento de Ciencias Farmacuticas yde la Alimentacin, Facultad de Farmacia. Universidad San Pa-blo CEU, Boadilla del Monte, Madrid.

Experimentos previos realizados en nuestro laboratorio de-mostraron la existencia de importantes diferencias en la plas-ticidad sinptica hipocampal entre las razas de ratas Lewis yFischer344 razas tras la administracin crnica de cocana.Debido a que los mecanismos fisiolgicos que subyacen a losprocesos de aprendizaje y memoria parecen estar ntimamen-te relacionados con los implicados en la adiccin a las drogas,nos planteamos conocer si las diferencias encontradas en laplasticidad sinptica en ambas razas se correlacionaban con

cambios en los procesos de aprendizaje y memoria espacial.Para ello, hemos realizado experimentos conductuales en ellaberinto radial de ocho brazos (RAM) con el fin de evaluar sila administracin crnica de cocana afecta a la adquisicin

de nuevas estrategias de aprendizaje. Se administr cocana(15mg/kg) o salino a ratas macho y adultas de las razas Lewis(LEW) y Fischer-344 (F344) desde siete das antes de iniciar los

ensayos conductuales hasta la finalizacin de los mismos. Seutiliz un protocolo del entrenamiento de los animales en latarea de bsqueda y localizacin de refuerzos de comida quese dispusieron en cuatro de los ocho brazos del laberinto y unavez que los animales hubieron consolidado esta conducta, secambi la localizacin del alimento a cuatro brazos distintos.Los animales F344 presentaron una menor capacidad para laadquisicin de nuevas tareas de aprendizaje espacial que pue-den relacionarse con su menor plasticidad sinptica hipocam-pal. Adems, la administracin crnica de cocana empeor lacapacidad de los animales para la adquisicin de nuevas estra-tegias espaciales siendo este efecto ms significativo en la razaF344. Estos datos revelan que la cocana influye en el aprendi-

zaje espacial en funcin de la carga gentica de los individuos.Investigacin financiada por el Instituto de Salud Carlos III (Redde Trastornos Adictivos, RTA, Proyecto nmero RD06/001/0029),el Plan Nacional sobre Drogas (Proyecto nmero 2008-I-070 de2008-2010) y el Ministerio de Ciencia e Innovacin (Proyectosnmero SAF2007-064890 y SAF2008-02902).

O.6. Efectos a largo plazo de la administracin decocana durante la edad adolescente sobrereceptores cannabinoides cb1 y cb2 en unmodelo animal de separacin materna tem-prana. dimorsmos sexuales.

A. Llorente-Berzala, M.A. Assisb, T. Rubinoc, E. Zamberlettic,E. M. Marcoa, D. Parolaroc, E. Ambrosiob and M. P. Viverosa.aDepartamento de Fisiologa (Fisiologa Animal II), Facultadde Ciencias Biolgicas, Universidad Complutense de Madrid,Instituto de Investigacin Sanitaria del Hospital Clnico San Car-los (IdISSC), Madrid; bDepartamento de Psicobiologa, Facultadde Psicologa, UNED, Madrid; cDBSF y Centro de Neurociencia,Universidad de Insubria (Italia).

La cocana es una de las drogas ilcitas ms consumidas en Eu-ropa, principalmente en edad juvenil. La exposicin a situacio-

nes de estrs en edades tempranas del desarrollo parece con-tribuir al desarrollo de diversas enfermedades neuropsiqui-tricas, que frecuentemente aparecen en la edad adolescente.De hecho, en estudios recientes, hemos descrito importantesalteraciones conductuales, neuroendocrinas, y bioqumicascomo consecuencia de la exposicin a un episodio prolonga-do de separacin materna temprana (SM, 24h el da 9 de vidapostnatal, PN) en ratas. Adems, se han observado importan-tes alteraciones a nivel del sistema cannabinoide endgeno(SCE), que contina su desarrollo y maduracin en la edadadolescente, y que juega un papel crucial en los procesos deadiccin y dependencia. Por ello, en el presente estudio inves-tigamos los efectos a largo plazo de la administracin crnica

de cocana durante la edad adolescente en nuestro modelode SM. Analizamos la expresin y funcionalidad de receptorescannabinoides cerebrales de tipo 1 (CB1), as como las varia-ciones en la expresin de receptores cannabinoides de tipo 2


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(CB2) en la periferia, bazo y mdula sea, dado el importantepapel del SCE en la respuesta inmunitaria y como consecuen-cia de la comorbilidad observada entre el consumo de drogas

de abuso y la aparicin de enfermedades infecciosas. RatasWistarde ambos sexos sometidas al protocolo de SM o man-tenidas en condiciones estndar (control) fueron administra-das con cocana (8 mg/kg/da, i.p.) o salino durante el periodoadolescente (15 das, desde el da 28 al 42 de vida PN). En edadadulta (PN 85), se evalu la expresin y la funcionalidad de losreceptores CB1 en diversas reas cerebrales mediante tcnicasde autorradiografa con [3H]-CP55,940 y [35S]-GTPS estimula-S estimula-da con WIN55,212-2, respectivamente. Tanto la administracinde cocana en edad adolescente como la SM provocaron no-tables cambios sexo-dimrficos a nivel de los receptores CB1,principalmente en relacin a la funcionalidad del mismo. Entrelos resultados ms interesantes cabe destacar que la cocana

produjo, exclusivamente en animales macho control, una dis-minucin significativa en los niveles de expresin de CB1 en lacorteza prefrontal, as como un aumento en la actividad del re-ceptor en el caudado-putamen y el rea tegmental ventral, noobservndose dichos efectos ni en machos SM ni en hembras.Por otro lado, la expresin de receptores CB2, medidos porWestern blot, se vio afectada por ambos tratamientos. Tanto enmachos como en hembras, la SM aument significativamentelos niveles de CB2 en bazo, mientras que la administracin decocana pareci contrarrestar tal efecto. En mdula sea, laexpresin de CB2 pareci disminuir como consecuencia de laadministracin de cocana en edad adolescente. El consumo

de cocana entre los jvenes es un grave problema de saludpblica que puede ir acompaado de importantes complica-ciones neuroinmunolgicas y cuya gravedad podra dependerde la exposicin previa a situaciones de estrs, siendo particu-larmente relevantes los episodios de estrs sufridos en etapastempranas del desarrollo. El empleo del presente modelo ani-mal permite analizar en profundidad las consecuencias a largoplazo de estos dos fenmenos (estrs neonatal y consumoadolescente de cocana), y apunta al SCE como posible dianaen la mediacin de algunos de sus efectos.Financiado por el Instituto de Salud Carlos III, Redes temti-cas de Investigacin Cooperativa en salud (ISCIII y FEDER):

RD06/0001/1013 y RD06/0001/0029. GRUPOS UCM-BSCH(951579) y Plan Nacional sobre Drogas del Ministerio de Sani-dad y Poltica Social (SAS/125/2009 y 2008-I-070).

Sesin Oral II: Mecanismos de sealizacin

0.7. La mutacin P86L-CALHM1, ligada a la enfer-medad de Alzheimer, altera la sealizacin decalcio nuclear.

Ana J. Moreno Ortega1,2,3,4,Javier Egea1,2, Elba Alonso1,3,4, An-tonio G. Garca1,2,3,4, Manuela G. Lpez1,2, Ana Ruiz Nuo1,3,4y

Mara F. Cano Abad1,2,3,4. 1 Instituto Tefilo Hernando de I+Ddel Medicamento y 2 Departamento de Farmacologa y Tera-putica, Universidad Autnoma de Madrid 3Instituto de Inves-tigaciones Sanitarias La Princesa y 4Servicio de FarmacologaClnica, Hospital Universitario La Princesa.

La mutacin P86L del nuevo canal de calcio (Ca2+) CALHM1(acrnimo ingls CALcium Homeostasis Modulator 1) parece es-tar implicada en la progresin de la EA espordica (Lambert y

col., 2010). Se ha visto que este polimorfismo (P86L-CALHM1),adems de alterar la homestasia del Ca2+citoslico, incremen-ta la produccin del pptido beta-amiloide (A) (Dreses-We-rringloer y col., 2008). Datos de nuestro laboratorio demues-tran que P86L-CALHM1 no solo altera la homeostasia de Ca2+en el citosol, sino que tambin lo hace en la mitocondria, lo quepodra originar una sobrecarga de Ca2+mitocondrial y muer-te celular (Moreno-Ortega y col., 2010). Sin embargo poco sesabe de la homeostasia de Ca2+en el ncleo, ya que CALHM1se expresa en el retculo endoplsmico (RE) (y por ende en laenvuelta nuclear) y podra influir en la homeostasia del Ca2+en este compartimento, clave en el control de la transcripcinde genes regulados por Ca2+. El objetivo de nuestro trabajo

fue estudiar la influencia de CALHM1 sobre la concentracinde Ca2+ nuclear ([Ca2+]nu). Para ello, cotransfectamos en c-lulas HeLa: i) un vector vaco (control), ii) el canal nativo (WT-CALHM1), iii) P86L-CALHM1, junto con ecuorina nuclear (unasonda bioluminiscente sensible a Ca2+, dirigida genticamentea ncleo). La expresin de CALHM1 y P86L-CALHM1 aumentla [Ca2+]nu basal y alter la [Ca

2+]nu inducida por un pulso dehistamina (100 M). Estos experimentos sugieren que CALHM1y P86L-CALHM1 estn influyendo en la [Ca2+]nuper seo a tra-vs de los receptores de inositol 1,4,5-trisfosfato (InsP3Rs). Paraconfirmar nuestra hiptesis, empleamos el bloqueante de losInsP3Rs, 2-aminoetoxidifenil borato (2-APB). Observamos que

en presencia de 2-APB no hay una reduccin significativa dela [Ca2+]nubasal; sin embargo, se ve parcialmente reducida la[Ca2+]nu mediada por pulsos de histamina. Estos resultados su-gieren que CALHM1 podra actuar como una canal tipo goteo(leaky-channel) y que alterara la [Ca2+]nu con consecuencias enla transcripcin de genes regulados por Ca2+.

Referencias:

1. Dreses-Werringloer, y col.., 2008. Cell.133:1149-1161. 2. Lambert y col., 2010.J Alzheimers Dis.,22: 247-55. 3. Moreno-Ortega, y col., 2010. Biochem. Biophys. Res. Commun, 391:

722-726.

O.8. Concentraciones nanomolares de ouabanaactivan la va intrnseca de la apoptosis enlas clulas HeLa.

Elba Alonso, 1,3 Mara F. Cano-Abad, 1,3 Ana J. Moreno-Ortega,1,3 Jess Novalbos, 1,3 Juan Milla, 1,2,3 Antonio G. Garca y 1,3

Ana Ruz-Nuo. 1Instituto Tefilo Hernando, 2Departamentode Farmacologa y Teraputica, Facultad de Medicina, Univer-sidad Autnoma de Madrid. 3Servicio de Farmacologa Clnica,Instituto de Investigaciones Sanitarias, Hospital Universitariode la Princesa, Universidad Autnoma de Madrid.

Concentraciones nanomolares de ouabana (OUB), no inhibito-rias de la Na+K+ATPasa (NKA) de la membrana celular, activandiversas seales intracelulares. Nosotros hemos estudiado al-gunas de estas seales tras la incubacin con concentracio-
http://users/home/Documents/01_TRABAJOS/IMEDPUB/06_Farmacologi%cc%81a%20y%20Toxicologi%cc%81a/1%20libro/javascript:AL_get(this,%20'jour',%20'Cell.');http://users/home/Documents/01_TRABAJOS/IMEDPUB/06_Farmacologi%cc%81a%20y%20Toxicologi%cc%81a/1%20libro/javascript:AL_get(this,%20'jour',%20'Cell.');http://users/home/Documents/01_TRABAJOS/IMEDPUB/06_Farmacologi%cc%81a%20y%20Toxicologi%cc%81a/1%20libro/javascript:AL_get(this,%20'jour',%20'Cell.');


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nes nanomolares de OUB durante 24h en clulas HeLa. Trasla estimulacin con histamina, hemos observado una rpidaelevacin del calcio citoslico ([Ca2+]c) en clulas cargadas con

fura-2 que se reduce a la mitad tras incubar con 300 nM deldigitlico. Adems se produce dao y redistribucin de las mi-tocondrias y una disminucin de los niveles de ATP del 40% yun 30% de la viabilidad celular. Las caspasas 3/7 y 9 quintupli-can su actividad mientras que la caspasa 8 no se ve afectada.Z-LEHD-FMK evita la activacin de la caspasa 9 y disminuyea la mitad la apoptosis ouabanica. Esto podra explicarse delsiguiente modo: (i) la unin de la OUB a la NKA produce undao mitocondrial; (ii) este dao conduce a la despolarizacinde la mitocondria y a una disminucin del ATP; (iii) se producela activacin de la caspasa 9 seguida de la activacin de las cas-pasas 3/7; (iiii) la caspasa 3 daa el receptor de 1, 4, 5-inositol-trifosfato del RE provocando un goteo constante de calcio ha-

cia el citosol. Ya que hay una concentracin nanomolar de OUBendgena en mamferos, nuestros resultados podran apuntara un posible papel regulador de la apoptosis de los esteroidescardiotnicos en los procesos fisiolgicos.

O.9. La liberacin de xido ntrico neuronal dis-minuye en arteria mesentrica de hembrasadultas en periodo de lactancia.

Esther Sastre, Javier Blanco-Rivero, Miriam Granado, GloriaBalfagn. Departamento de Fisiologa, Facultad de Medicina.Universidad Autnoma de Madrid.

Ha sido sugerido que la lactancia puede estar contraindi-cada en algunas mujeres con presin arterial lmite, o francahipertensin, puesto que aumenta la resistencia vascular. Eltono vascular de la arteria mesentrica est regulado, entreotros factores, por los distintos tipos de inervacin, entre otras,adrenrgica y nitrrgica. Por lo tanto, el objetivo del presenteestudio fue analizar si la lactancia afecta la respuesta vasomo-tora inducida por estimulacin elctrica (EE) en arteria me-sentrica de rata, as como la participacin de las inervacionesadrenrgica, y nitrrgica en estas posibles modificaciones. Seutilizaron ratas hembra adultas Sprague-Dawley divididas en

dos grupos experimentales: 1) en fase estro, y 2) madres tras unperiodo de lactancia de 21 das. Se analizaron las variacionesde la respuesta vasoconstrictora a EE (200 mA, 0.3 ms, 116 Hz,30 s) en presencia/ausencia de 1 mmol/L del antagonista de losreceptores a-adrenrgicos fentolamina, o de 0.1 mmol/L delinhibidor inespecfico de la xido ntrico sintasa (NOS) L-NAME.Se analiz la respuesta vasoconstrictora a noradrenalina (NA) yvasodilatadora al donante de xido ntrico (NO) DEA-NO. Asi-mismo, se midi la liberacin de NA y de NO, y la expresinproteica de la NOS neuronal fosforilada (P-nNOS).

La respuesta contrctil inducida por EE fue significativamentemayor en madres lactantes. La fentolamina redujo la respues-

ta a EE en igual medida en ambos grupos. Tanto la liberacincmo la respuesta vasoconstrictora a NA fueron similares enambos grupos. L-NAME increment la contraccin inducidapor EE en ambos grupos, pero en mayor medida en hembrasen estro. La respuesta a DEA-NO fue similar en ambos grupos

experimentales. Tanto la liberacin de NO como la expresinde P-nNOS se vieron disminudas en arterias de madres lactan-tes. El incremento en la respuesta vasoconstrictora inducida

por EE en madres lactantes ha podido ser debido a una dismi-nucin en la liberacin deNO de origen neuronal, lo cual puedecontribuir a un aumento en la resistencia vascular perifrica.Subvencionado por el Ministerio de Ciencia e Innovacin(SAF2009-10374)

O.10. Funcin de la mitocondria en la regulacinde la homeostasia intracelular del calcio ysu papel en la secrecin de catecolaminas enlas clulas cromanes bovinas.

Juan-Fernando Padn(1,2); Afonso Caricati-Neto(4), Edilson-Dan-tas Silva-Junior(4), Antonio M. G. de Diego(1,2), Aron Jurkiewi-

cz(4), Antonio G. Garca(1,2,3).1Instituto Tefilo Hernando (ITH);2Departamento de Farmacologa y Teraputica; 3Servicio deFarmacologa Clnica, Hospital Universitario de la Princesa. Fa-cultad de Medicina, Universidad Autnoma de Madrid. 4Depar-tamento de Farmacologa, Universidad Federal de So Paulo(Brasil).

Estudios previos realizados en nuestro laboratorio con clulascromafines bovinas (CCBs) han demostrado que la liberacinde catecolaminas inducida por acetilcolina (ACh), altas concen-traciones de K+o con cafena, se potencia cuando se bloqueacon protonforos la captacin del Ca2+mitocondrial (Montero

et al, Nature Cell Biology 2000; Cuchillo-Ibz et al., J. Physiol.,2004). Sin embargo, todava se desconoce si los bloqueantesms selectivos del uniportador mitocondrial (MUP) como elRU360 (RU), o los inhibidores del intercambiador de Na+/Ca2+(MNCx) como el CGP37157 (CGP), afectan a estas respuestassecretoras. En el presente estudio mostramos los efectos de loscompuestos: RU, CGP, el protonforo FCCP, y la combinacinde oligomicina y rotenona (O/R) (para bloquear la respiracinmitocondrial), sobre la respuesta secretora, y tambin sobrelos cambios en la concentracin de Ca2+ citoslico ([Ca2+]c)inducidos por ACh, en las CCBs. Los resultados que hemos ob-tenido son que RU aument tanto el pico de secrecin (PS)

(95%) como el tiempo de la constante de aclaramiento de la[Ca2+]c(tiCa) (49%). En contraste, el CGP redujo el PS (19%) peroaumenttiCa (64%). La combinacin de RU/CGP aument am-bos, el PS (71%) y tiCa

2+(47%). Por otra parte, el FCCP (110% y248%) y O/R (148% and 58%) incrementaron tanto el PS comola tiCa, respectivamente. Por lo tanto, parece que todas lasmanipulaciones farmacolgicas de los movimientos de calciomitocondrial producen un incremento en la tiCa, mostrandoun enlentecimiento en el aclaramiento del calcio cuando sealtera la funcin mitocondrial. Como consecuencia de esta ma-yor disponibilidad de Ca2+en el citosol, el transporte vesicular,el acoplamiento de las vesculas en la membrana, y la exocitosistambin aumentan. Estos resultados confirman y amplan el

conocimiento de la gran importancia que tiene la mitocondriaen la fina regulacin de la homeostasia celular del calcio, y sufuncin en la respuesta secretora de catecolaminas, tras la ac-tivacin por el neurotransmisor endgeno ACh.
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doi: 10:3823/601

O.11. Los antagonistas de los canales calcio debajo umbral de activacin tambin bloqueanlos canales de calcio de alto umbral.

Jos C. Fernndez-Morales1 , Juan Fernando Padn1, MarcosMaroto1, Enrique Calvo1, Antonio G. Garca1,2 , Antonio M.G.De Diego1. 1Instituto Tefilo Hernando, Departamento deFarmacologa y Teraputica, Facultad de Medicina. Universi-dad Autnoma de Madrid. 2Servicio de Farmacologa Clnica,Hospital Universitario de la Princesa. Universidad Autnomade Madrid.

El Ni2+, mibefradilo y el NNC 55-0396 (NNC) son ligandos am-pliamente utilizados para la caracterizacin farmacolgica delos canales de calcio voltaje-dependientes (CCVD) de bajo um-bral de activacin (tipo T). Sin embargo, a las concentracionesempleadas habitualmente en la literatura, hemos observadoque estos ligandos carecen de la selectividad para bloquearlas corrientes de tipo T. Con el objetivo de conocer en profun-didad sus propiedades farmacolgicas, hemos estudiado susefectos sobre las corrientes de Ba2+ (IBa), la respuesta secre-tora y las variaciones en la concentracin de Ca2+ citoslico([Ca2+]c) en cultivos primarios de clulas adrenales cromafines(CC) de tres especies animales distintas. Hemos empleado larata adulta (CCRA), el ratn (CCRT) y la vaca (CCB), por estardescrito que slo expresan los CCDV de alto umbral N, L yP/Q, y carecer de los de tipo T, y hemos realizado un estudiocomparativo con las CC de rata embrionaria (CCRE), ya que

expresan tanto canales de tipo T como de alto umbral. Estosestudios se realizaron mediante las tcnicas de patch-clamp,amperometra y microscopa de fluorescencia con la sondafluorescente Fura-2. En las CCB, el Ni2+ bloque de formaconcentracin-dependiente la IBa (5 mM extracelular) pro-ducida por despolarizaciones de 50 ms a intervalos de 15 sdesde -80 mV a diferentes potenciales (de -60 a +60). Su IC50en la mxima corriente (-10 mV) fue de 50 M en CCRE y de70 M en CCB (+0 mV). Adems, tambin bloque en CCB deforma concentracin-dependiente los incrementos de [Ca2+]

c, producidos por tres despolarizaciones de K+ (5 s, 45 mM)

aplicadas a intervalos de 3 min. La IC50 fue de (4,27 x 10-5

0,04) M, (3,59 x 10

-5

0,07) M y de (6,91 x 10

-6

0,37) M tras 1,4 y 7 min de perfusin del Ni2+. El bloqueo mximo se produjode forma independiente del tiempo, y fue del 70 %. Adems,en las CCRT observamos una inhibicin de la secrecin cuantalde catecolaminas evocada por K+(75 mM) del 30% y del 70% a25 M y 50 M de Ni2+, respectivamente. En cuanto al mibefra-dilo, en CCB bloquea el aumento de la [Ca2+]ccon una IC50de(1,10 x 10-7 0,21) M, (4,87 x 10-8 0,44) M, y (8,77 x 10-8 0,13)M tras 1, 4, y 7 min de perfusin, respectivamente. Adems,a concentraciones mximas de mibefradilo, este bloqueo estiempo-dependiente, siendo del (42,17 0,19) %, (68,75 7,57)% y (82,58 4,58) % tras 1, 4 y 7 min de perfusin, respecti-vamente. De manera similar, el mibefradilo (10 M) bloque

la IBaen un 55 %, tanto en CCRE como en CCB. Por ltimo, elNNC, un nuevo antagonista derivado del mibefradilo, redujoen CCB la IBaun 30 % a 1 M y prcticamente la abole a 50 M.El bloqueo del transiente de [Ca2+]c tras 7 min de perfusinfue de (89,21 10,79) % a 0.1 M y de (90,13 1,24) % a 1 M.

En conclusin, mostramos en este trabajo que la farmacologaexistente para el aislamiento y estudio de los CCVD de bajoumbral es deficiente, como demuestra el que 2 de los antago-

nistas ms empleados (Ni2+

y mibefradilo) y uno desarrolladorecientemente (el NNC) bloqueen de manera importante laIBa, los incrementos de de [Ca

2+]c y la secrecin cuantal decatecolaminas en tipos celulares que no expresan CCVD debajo umbral. Por lo tanto, se debe de proceder con extremacautela cuando se pretende disecar la funcin de los distintossubtipos de CCVD en clulas que expresan CCVD tanto de altocomo de bajo umbral de activacin.

Sesin Oral III: Inamacin/estrs oxidativo

O.12. Propiedades antiamiloidognicas in vitro de

1,4-naftoquinonas.

Ortega A2, Rincn A1, Roscales S1, Jimnez-Aliaga KL2, Berme-jo-Bescs P2, Martn-Aragn S2, Buxaderas E1, Csk AG1 1. De-partamento de Qumica Orgnica, Facultad de Ciencias Qumi-cas. Universidad Complutense de Madrid. 2. Departamento deFarmacologa. Facultad de Farmacia. Universidad Complutensede Madrid.

Se han estudiado las propiedades antiamiloidognicas de unaserie de 1,4-naftoquinonas (1,4-NQ) en cuanto a su interaccincon el procesamiento de la protena precursora del -amiloide

(APP) por la va amiloidognica. Particularmente se ha en-sayado: la inhibicin de -secretasa (BACE), la inhibicin dela agregacin del pptido -amiloide, y la desagregacin delmismo una vez agregado. Los compuestos con grupos hidro-xilos en el anillo quinnico (2) o bencnico (5, 6), as como 2- y3-aril derivados (11-15) han mostrado actividad inhibitoria deBACE sin efecto en la agregacin o desagregacin del pptido-amiloide. Los compuestos halogenados 8 y 10 fueron selec-tivos en la inhibicin de la agregacin del pptido -amiloide.Por otro lado, 1,4-naftoquinona (1), 6-hidroxi-1,4-naftoquinona(4) y 2-(3,4-diclorofenil)-1,4-naftoquinona (26) no mostraronactividad inhibitoria de BACE, sin embargo fueron activos fren-

te a la agregacin y desagregacin del pptido -amiloide. Layuglona (5-hidroxi-1,4-naftoquinona) (3) y la 3-(p-hidroxifenil)-5-metoxi-1,4-naftoquinona (19) fueron activas en las tres dia-nas estudiadas. Por tanto, los derivados de 1,4-NQ estudiados,especialmente 3 y 19, pueden ser potenciales candidatos parael desarrollo de frmacos que prevengan la agregacin delpptido -amiloide y la neurotoxicidad de la enfermedad deAlzheimer.

O.13. Nuevo mtodo de sntesis de cannabinol yanlogos. Usos potenciales en el tratamien-to de enfermedades neurodegenerativas.

David M. Solano1, Maria Fernandez1,A. Agis2,Wilma Villaro2, J.V.Sinisterra y J.M. Snchez Montero1. 1. Departmento de Qumicay Farmacutica. Facultad de Farmacia. Universidad Compluten-se de Madrid. 2. Departamento de Fisiologa. Facultad de Far-macia. Universidad Complutense de Madrid.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22Fernandez-Morales%20JC%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlushttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22Fernandez-Morales%20JC%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlushttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22Fernandez-Morales%20JC%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlushttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22G%20Garcia%20A%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlushttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22G%20Garcia%20A%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlushttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22G%20Garcia%20A%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlushttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22G%20de%20Diego%20AM%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlushttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22G%20de%20Diego%20AM%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlushttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22G%20de%20Diego%20AM%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlushttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22G%20de%20Diego%20AM%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlushttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22G%20Garcia%20A%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlushttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/entrez?Db=pubmed&Cmd=Search&Term=%22Fernandez-Morales%20JC%22%5BAuthor%5D&itool=EntrezSystem2.PEntrez.Pubmed.Pubmed_ResultsPanel.Pubmed_DiscoveryPanel.Pubmed_RVAbstractPlus


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doi: 10:3823/601

El uso teraputico de los cannabinoides ha sido ampliamen-te demostrado a lo largo de la historia, como analgsicos,antiinflamatorios, antiemticos y actualmente como agentes

neuroprotectores para el tratamiento de enfermedades neu-rodegenerativas como el Alzheimer. En la actualidad el usode estos frmacos est limitado por sus efectos psicotrpicos.Existen ms de 84 cannabinoides en Cannabis sativaalgunosde los cuales carecen de efectos psicoactivos, entre ellos estel cannabinol (CBN). Se trata del producto primario de la de-gradacin del THC y no se suele encontrar demasiado en laplanta. Es un psicoactivo muy leve cuya afinidad es superioren el caso del receptor CB2 y baja en el CB1. En base a esto ya los nuevos descubrimientos en la actividad neuroprotecto-ra de los cannabinoides, hemos diseado una nueva ruta desntesis de CBN y estructuras anlogas diseadas mediantestcnicas de docking molecular con el objetivo de inhibir a la

acetil colinesterasa y desarrollar un potencial frmaco para eltratamiento de la enfermedad de Alzheimer.La nueva ruta desntesis que hemos desarrollado consigue la sntesis total delCBN y otras estructuras anlogas en 5 pasos. Se basa en unaprimera condensacin de 2 ciclos mediante una adicin aro-mtica a un carbonilo, seguida de la isomerizacin del corres-pondiente alcohol benclico y posterior ciclacin obteniendoel sistema de cromeno caracterstico de los cannabinoides. Seha realizado un estudio de las propiedades QSAR de los com-puestos sintetizados mediante tcnicas computacionales ascomo las Ki tericas para cada anlogo con el fin de encontrarun cabeza de serie y correlacionar los resultados con los ensa-

yos de inhibicin in vitro.

O.14. Derivados de hispanolona suprimen la vade sealizacin inamatoria JAK-STAT enclulas de microglia estimuladas con inter-feron-g.

Florencia Cidre1, Sandra Herranz1, Beatriz de las Heras2, EvaCano3, Sonsoles Hortelano1. 1.Unidad de Inflamacin y Cncer.Centro Nacional de Microbiologa. Instituto de Salud Carlos III.Madrid. 2. Departamento de Farmacologa. Facultad de Farma-cia. Universidad Complutense de Madrid. 3. Unidad de Neu-

roinflamacin. Centro Nacional de Microbiologa. Instituto deSalud Carlos III. Madrid.

La bsqueda de nuevos agentes antiinflamatorios derivadosde productos naturales se ha incrementado enormementeen los ltimos aos. Recientemente se ha descrito que deri-vados de la hispanolona como la dehidroisohispanolona (T4)o el 8,9-dehidrohispanolona-15,16-lactol (T11) ejercen efectosanti-inflamatorios en macrfagos peritoneales. Las accionesanti-inflamatorias de los derivados de la hispanolona parecenestar relacionados con la inhibicin de la liberacin de media-dores inflamatorios como el xido ntrico (NO) y las prostag-landinas, as como de citoquinas como TNF-a e IL-6 a travs

de un mecanismo que implica la inhibicin de la activacindel factor de trancripcin NF-kB. Sin embargo, no se conocenlos efectos de estos compuestos en otros tipos celulares impli-cados en la inflamacin como la microgla. As, en este trabajohemos evaluado los efectos anti-inflamatorios de los derivados

de hispanolona en clulas BV2 y en cultivos primarios de micro-gla tras estimulacin con IFN-g. Nuestros datos muestran queambos compuestos son capaces de inhibir la liberacin de NO,

a nivel transcripcional, siendo el compuesto T11 el ms activode los dos. Utilizando tcnicas de microarray y anlisis de PCRcuantitativa comprobamos que el compuesto T11 ejerce unaclara inhibicin de genes regulados por IFN-g tales como lasquimioquinas CXCL-10 (IP-10) y CXCL-9 (MIG). Los efectos inhibi-torios del T11 parecen estar mediados por la inhibicin de la vade sealizacin JAK-STAT. En definitiva, nuestros resultados in-dican un nuevo mecanismo por el cual los derivados de hispa-nolona ejercen sus efectos anti-inflamatorios actuando comoreguladores negativos de la va JAK-STAT. As, la inhibicin de laactivacin de la microglia por parte de los derivados de hispa-nolona puede constituir una nueva estrategia teraputica paranumerosas enfermedades neuroinflamatorias. Este trabajo se

ha llevado a cabo gracias a las ayudas del FIS PI08/0070 y eIISCIII MPY1410/09 para S.H. y del FIS PI09/0218 y dele ISCIIIMPY1415/09 para E.C.

O.15. Efectos neuroprotectores de la combinacinde tocannabinoides del Sativex en mod-elos experimentales de la enfermedad deHuntington.

Sara Valdeolivas1,2,3, Valentina Satta1,4, M. Ruth Pazos1,2, JavierFernndez-Ruiz1,2,3 y Onintza Sagredo1,2,3. 1. Departamentode Bioqumica y Biologa Molecular, Instituto Universitario de

Investigacin en Neuroqumica, Universidad Complutense,Madrid, Espaa; 2. Centro de Investigacin Biomdica en Redsobre Enfermedades Neurodegenerativas (CIBERNED); 3. In-stituto Ramn y Cajal de Investigacin Sanitaria (IRYCIS); 4.Department of Neuroscience, University of Cagliari, Cagliari(Italia).

La manipulacin farmacolgica del sistema cannabinoidepuede servir como estrategia neuroprotectora en diferentestrastornos neurodegenerativos, entre los cuales se encuentrala enfermedad de Huntington, una patologa hereditaria detransmisin autosmica dominante causada por la expansin

del triplete CAG localizado en el exn 1 del gen IT15 que codi-fica la protena huntingtina. La enfermedad se caracteriza porla degeneracin progresiva de las neuronas GABArgicas deproyeccin estriatal y tambin de diferentes subpoblacionesde neuronas piramidales de la corteza cerebral, las cuales sonaltamente susceptibles a la toxicidad causada por la hunting-tina mutada. Mltiples evidencias han demostrado que entrelos diferentes mecanismos citotxicos implicados en esta en-fermedad se encontraran el estrs oxidativo, la excitotoxicidady la inflamacin. Para estudiar estos mecanismos y el poten-cial de los cannabinoides frente a ellos, hemos trabajado condistintos modelos experimentales de la enfermedad de Hun-tington, generados tanto en ratas como en ratones, utilizando

neurotoxinas tales como el malonato, el 3-nitropropionato o elquinolinato. Hemos observado que la administracin de Sati-vex, una mezcla de extractos botnicos ricos en 9-THC y CBDcombinados en proporcin 1:1, redujo el dficit de GABA quese produce en el estriado en el modelo de 3-nitropropionato


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y la prdida neuronal identificada mediante tincin de Nissl encualquiera de estos modelos. Los resultados obtenidos tam-bin demuestran que el Sativex redujo el volumen de edema

(medido mediante NMR in vivo) producido en el estriado porla lesin con malonato o quinolinato, as como se produjo unadisminucin de la astrogliosis (identificada mediante inmuno-tincin para GFAP) y de la microgliosis (identificada medianteinmunotincin para OX-42) en ambos modelos. La administra-cin de Sativex tambin redujo la cada de la expresin delreceptor CB1, de IGF-1 y de SOD-1, as como el incremento enla expresin de calpana, en el modelo de ratas lesionadas con3-nitropropionato. Por consiguiente, estos resultados permitenafirmar que hay datos claros a nivel preclnico en apoyo a unefecto beneficioso del Sativex como posible agente neuro-protector en la enfermedad de Huntington, algo que deberser estudiado cuanto antes en pacientes dada la ausencia de

tratamientos eficaces en esta patologa.

Financiado por CIBERNED (PI2010/06), MICINN, Espaa, y GWPharmaceuticals Ltd., UK

Sesin Oral IV: Farmacologa Clnica

O.16. Efecto de los polimorsmos de CYP2C9 yCYP2C8 sobre la farmacocintica de candes-artn y telmisartn.

Aneta Wojnicz, Manuel Romn Martnez, Mara Talegn Garca,Dolores Ochoa Mazarro, Francisco Abad Santos, Teresa Caba-leiro Ocampo. Servicio de Farmacologa Clnica. Hospital Uni-versitario de la Princesa. Madrid.

Los antagonistas de los receptores de angiotensina II (ARA-II)son frmacos utilizados en el tratamiento de la hipertensin,pero no todos los pacientes responden favorablemente al tra-tamiento. Por este motivo hemos estudiado los polimorfismosde los genes CYP2C8y CYP2C9 para comprobar la posible aso-ciacin con la farmacocintica de candesartn y telmisartn. Decada muestra de sangre de los voluntarios sanos se ha extraido

el ADN en un extractor automtico de cidos nucleicos Magna-Pure (Roche). Los anlisis de mutaciones de los genes CYP2C8yCYP2C9se han realizado mediante PCR a tiempo real en LightCycler (Roche). El anlisis estadstico se realiz con el progra-ma SPSS. En el ensayo clnico de candesartn (una nica dosisde 32 mg) han participado 36 voluntarios sanos y se genotipa-ron 27 (14 hombres, 13 mujeres) y en el de telmisartn (una ni-ca dosis de 80 mg) han participado 48 voluntarios sanos y segenotiparon 43 (18 hombres, 25 mujeres). Se han identificadolos polimorfismos de un solo nucletido de CYP2C8: CYP2C8*2,CYP2C8*3, CYP2C8*4, y de CYP2C9: CYP2C9*2, CYP2C9*3. Los por-tadores del alelo CYP2C9*3 presentan una mayor vida mediade candesartn que los metabolizadores normales (10,87 h vs

10,14 h; p0,05). La vida media de candesartn en los volun-tarios con el genotipo CYP2C8 *1/*4 es 1,56 veces mayor queen los sujetos con el genotipo *1/*1 (13,99 h vs 8,99 h; p0,05).Los voluntarios que son metabolizadores lentos para el CYP2C8(*2/*3 y *3/*4) tienen un aclaramiento mayor del frmaco que

los metabolizadores intermedios (CYP2C8 *1/*2, *1/*3, *1/*4)(15,10 h vs 9,42 h; p0,05). Para telmisartn no se encuentraninguna diferencia significativa. Estos resultados sugieren una

asociacin entre polimorfismos del CYP2C8 y CYP2C9y la far-macocintica del candesartn, pero no del telmisartn.

O.17. Pueden ser los receptores TLR-4 una dia-na interesante para el tratamiento del dolorneuroptico? Resultados preliminares en unmodelo de neuropata por paclitaxel en rata.

David Pascual, Andrea Rincn, Mara Isabel Martn, Carlos Goi-coechea. Departamento de Farmacologa y Nutricin. Facultadde Ciencias de la Salud. Universidad Rey Juan Carlos. Alcorcn.Madrid

Los receptores Toll-like (TLR) son unos receptores relacionadoscon la inmunidad innata y cuando son activados producen laliberacin de citoquinas. Recientes evidencias sugieren que elTLR-4 aumenta la expresin de citoquinas en microglia y astro-citos, iniciando y propagando cuadros como el dolor crnico,lo que los convierte en dianas teraputicas para el estudio denuevos analgsicos. Por otro lado el paclitaxel en un agenteantineoplsico efectivo en el tratamiento de muchos tipos detumores. Uno de sus efectos secundarios ms frecuentes es laneuropata perifrica que en muchas ocasiones obliga a sus-pender el tratamiento y que se suele manifestarse con alodiniae hiperalgesia. El objetivo de este estudio ha sido determinar

la posible implicacin de los receptores TLR-4 en la neuropatainducida por paclitaxel en ratas. El paclitaxel (PTX) fue admi-nistrado por va intraperitoneal (i.p.) (1 mg/kg) en cuatro dasalternos (1, 3, 5 y 7). El inhibidor de la sealizacin de TLR-4,CLI-095 (0.5 mg/kg), se administr en los mismos das que elPTX. Se organizaron tres grupos de animales a los que se lesaplic PTX, PTX y vehculo y PTX + CLI095. Para comprobar eldesarrollo de neuropata perifrica, se valor la hiperalgesiatrmica mediante el plantar test (Hugo Basile) y la alodinia me-cnica mediante un von Frey electrnico (Bioseb-Panlab) en losdas 0, 7, 14, 21 y 28. El PTX produjo hiperalgesia trmica (um-bral trmico: 58.4 % 2.8 vs 100% respuesta basal)y alodinia

mecnica (umbral a estmulos mecnicos: 46.9 % 1.5 vs 100%(respuesta basal) en ambas patas. El CLI095, impidi de maneraestadsticamente significativa el desarrollo de la hiperalgesiatrmica (117.2% 7) y de alodinia mecnica (96.5% 5.3), indu-cida por paclitaxel vsel da 0. El tratamiento con CLI095 previnotanto la alodinia mecnica como la hiperalgesia trmica en losanimales tratados con paclitaxel. Estos resultados preliminares,sugieren que la modulacin farmacolgica de los receptoresTLR-4 podra ser til para el tratamiento del dolor neuroptico.

O.18. Sntesis de nuevos bloqueantes del inter-cambiador Na+/Ca2+ mitocondrial con po-tencial neuroprotector: el caso del ITH505.

J.Martnez-Sanz1 Laura Gonzlez-Lafuente2 Antonio M.G. deDiego1Rafael Len1Cristbal de los Ros2Mercedes Villarroya1.1. Instituto Tefilo Hernando, Departamento de Farmacologay Teraputica, Facultad de Medicina, Universidad Autnoma


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de Madrid. 2. Instituto Tefilo Hernando, Fundacin de Inves-tigaciones Biomdicas, Hospital Universitario de la Princesa.Madrid.

En el Instituto Tefilo Hernando (ITH) nos hemos embarcadoen la bsqueda de potenciales frmacos que prolongue la su-pervivencia de neuronas vulnerables en enfermedades neu-rodegenerativas e ictus. La alteracin de los movimientos deCa2+en la neurona en general, y en la mitocondria en particu-lar, desencadena la apoptosis y la muerte de estas neuronas.Recientemente, hemos descubierto que el compuesto CGP37157, una benzotiazepina que bloquea inespecficamente elintercambiador Na+/Ca2+mitocondrial (INCm), protege clulascromafines y neuronas de hipocampo de rata frente a un es-tmulo de estrs por sobrecarga de Na+ y Ca2+(Nicolau y col,2009 y 2010). Estos datos sugieren que el INCm podra conver-

tirse en una nueva diana para el desarrollo de frmacos neuro-protectores, mitigando la excesiva circulacin neuronal y mito-condrial del Ca2+. Para ello hemos emprendido un proyecto deinvestigacin para sintetizar nuevos derivados del CGP 37157,con estructura general como la que se muestra en la Figura 1.

con glutamato 1 mM, con una mxima proteccin de 52 % a 30mM, como a la sobrecarga de calcio inducida por veratridina30 mM, donde fue capaz de reducir la prdida de viabilidad del

tejido desde 3 mM, con un mximo de 35 % de proteccin a30 mM. Estos resultados son comparables, y en algunos casosmejores, a los obtenidos en nuestro laboratorio para el cabezade serie CGP 37157 lo que, unido al hecho de que ITH505 sepuede considerar un isster modificado para mejorar el per-fil farmacocintico de CGP 37157, nos lleva a pensar que estecompuesto podra ser candidato a un estudio preclnico msexhaustivo, para el tratamiento de enfermedades neurodege-nerativas y/o ictus.

Referencias:

1. Nicolau y col. Biochem. Biophys. Res. Comm.2010, 400, 140-144.

2. Nicolau y col. J. Pharmacol. Exp. Ther.2009, 330, 844-854.

O.19. Efecto neuroprotector de la melatonina ynuevos derivados de la melatonina en mo-delos relacionados con la patologa de la en-fermedad de Alzheimer.

Izaskun Buendia, Esther Parada, Javier Egea, Laura Gonzlez,Laura Gonzlez C, Adriana Morgado, MI Rodriguez Franco, S.Conde y Manuela G. Lpez. Instituto Tefilo Hernando. Depar-tamento de Farmacologa y Teraputica. Facultad de Medicina.Universidad Autnoma de Madrid.

A pesar de la gran prevalencia de la enfermedad de Alzheimer(EA) en nuestra sociedad, aun no existen tratamientos eficacespara estos pacientes ni tampoco buenos modelos experimen-tales in vitro que nos ayuden a evaluar nuevos medicamentosen etapas preclnicas. El objetivo principal de este trabajo hasido poner en marcha modelos in vitro en los que se com-bine la patologa beta amiloide y la hiperfosforilacin de taupara evaluar el potencial teraputico de dos nuevos hbridosde melatonina en la EA. Hemos empleado cultivos organotpi-cos de rodajas de hipocampo de rata de 8-10 das ya que estemodelo nos permite realizar un tratamiento ms crnico conlos txicos b y cido okadaico. La viabilidad se ha evaluadomediante la tincin con ioduro de propidio/ Hoescht.Tambinhemos empleado la lnea celular de neuroblastoma humanoSH-SY5Y y, en este caso, la viabilidad celular se midi mediantela reduccin de la sal de tetrazolio MTT. En el caso de las c-lulas SH-SY5Y, las concentraciones subefectivas seleccionadaspara los txicos fueron las de 1 M de A y 3 nM de AO, cuyaasociacin caus un 40 % de muerte celular; un valor signifi-cativamente mayor al ocasionado por los estmulos por s so-los. En estas condiciones experimentales, hemos evaluado elpotencial efecto neuroprotector de los compuestos ITH12290e ITH12291 en comparacin con melatonina y donepezilo. Lamelatonina a la concentracin de 10 nM y los compuestos

ITH12290 e ITH12291 a la concentracin de 0,1 M ofrecieronuna proteccin superior al 50% frente a la toxicidad inducidapor la combinacin de Ab + AO; el donepezilo no ofreci pro-teccin significativa. Siendo as, analizamos los mecanismosde accin de los compuestos ITH12290 e ITH12291 utilizando

NH

S

O

Cl

Cl

Z X

Y

O

R2

R1

NH

S

O

Me

Cl

FIGURA 1. Posibles derivados basados en el CGP 37157

FIGURA 2. TH505

Presentamos aqu el perfil farmacolgico inicial de uno de es-tos derivados, al que denominamos ITH505, cuya estructuraqumica aparece representada en la Figura 2. El ITH505 produjouna proteccin significativa cuando se ensay en un modelo

de estrs oxidativo sobre clulas de neuroblastoma humanoSH-SY5Y, sometidas al cctel txico de rotenona 30 mM y oli-gomicina A 10 mM, a las concentraciones de 0.3, 1 y 3 mM. Adi-cionalmente, mostr perfil neuroprotector en un modelo derodajas de hipocampo de rata sometidas tanto a la incubacin


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los antagonistas luzindol (antagonista de los receptores demelatonina), queleritrina (inhibidor de PKC), LY 294002 (inhi-bidor selectivo de PI3K/AKt), PD 98059 (inhibidor de MEK/ERK)

y mecamilamina (antagonista no selectivo de nAChR). Para lapuesta en marcha del modelo citotxico en cultivos organot-picos, inicialmente realizamos curvas concentracin-respuestacon A (0,5, 1 y 5 M) y AO (1, 3 y 10 nM). Las concentracionesseleccionadas fueron las de 0,5 M de A y 1 nM de AO; estacombinacin ocasion un incremento sinrgico de la toxicidadcelular que alcanz un 200 % respecto a la basal. En conclusinpodemos decir que hemos puesto en marcha modelos in vitroque combinan la patologa Ab y la hiperfosforilacin de tau encultivos organotpicos de hipocampo y en clulas SH-SY5Y conel objeto de poder remedar de una forma ms fisiopatolgicala EA y as poder evaluar nuevos compuestos con potencialteraputico en esta enfermedad.

O.20. Propiedades neuroprotectoras de querceti-nay rutina en la lnea transgnica SH-SY5YAPPswe.

K.L. Jimnez, P. Bermejo-Bescs, S. Martn-Aragn, J. Bened.Departamento de Farmacologa. Facultad de Farmacia. Univer-sidad Complutense de Madrid.

La doble mutacin sueca (KM670/671NL) de la protena pre-cursora de amiloide (APPswe) est asociada con la aparicintemprana de un tipo de Alzheimer familiar que se transmite de

forma autosmica dominante. Como resultado de esta muta-cin se incrementa la produccin del pptido b-amiloide de 3a 6 veces, ejerciendo un importante efecto neurotxico. En elpresente estudio se evalu la actividad antioxidante y antiami-loidognica de quercetina y rutina utilizando clulas SH-SY5Ytransfectadas con el gen APPswe como modelo experimental.Se determinaron diferentes marcadores de estrs oxidativo yde procesamiento de la APP mediante tcnicas de western bloty RT-PCR. El tratamiento de las clulas con quercetina o rutina,a las concentraciones de 25, 50 y 100 hM ejerce un importan-te efecto antioxidante y antiamiloidognico, sugiriendo unapotencial actividad neuroprotectora en el modelo celular en

estudio.

O.21. Fluoxetina modula la epileptognesis indu-cida por pentilentetrazol.

Tishwant Kanwarjit, Pablo Bascuana, Hctor Plaza Daz, RubnFernndez de la Rosa Jos Julin Javela, James Kelly, Miguel A.Pozo, Mercedes Delgado, Luis Garca-Garca.CAI de Cartografa Cerebral, Instituto Pluridisciplinar. Universi-dad Complutense de Madrid. Instituto Tefilo Hernando. De-partamento de Farmacologa y Teraputica. Facultad de Medi-cina. Universidad Autnoma de Madrid.

El pentilentetrazol (PTZ) es un bloqueante GABArgico queadministrado repetidamente a dosis subconvulsivas induce laaparicin de crisis epilpticas espontneas (kindling). Aunqueel desequilibrio Glutamato/GABA es la causa neuroqumicade la hiperexcitabilidad neuronal responsable de la epilepsia,

poco se conoce del papel de otros neurotransmisores, en espe-cial de la serotonina. El objetivo de nuestro trabajo consisti enestudiar el papel de la transmisin serotonrgica en la epilep-

tognesis inducida por PTZ. Para ello, se administr de formasubcrnica fluoxetina (FLX), frmaco inhibidor del transporta-dor de serotonina. Se evalu la eventual modulacin que di-cho frmaco ejerce sobre los efectos comportamentales, elec-trofisiolgicos, metablicos y neuroqumicos inducidos por laadministracin repetida de PTZ. Se emplearon ratas machoSprague-Dawley de 250 g. El paradigma empleado consistien la administracin diaria durante 16 das de FLX (10 mg/Kgi.p.), perodo durante el que se administr PTZ (40 mg/Kg i.p.) 6veces, evalundose el comportamiento (escala modificada deRacine) durante 20 minutos despus de la inyeccin del PTZ,adems de obtener el registro electrofisiolgico en hipocam-po. Tres das despus de la ltima administracin, se midi la

actividad metablica cerebral in vivomediante tomografa poremisin de positrones (PET), determinndose la captacin defluordesoxiglucosa (FDG) en distintas reas cerebrales. Finaliza-do los estudios in vivo, los animales fueron sacrificados y los ce-rebros extrados para la realizacin de estudios histolgicos yautorradiogrficos. En nuestras condiciones experimentales, laFLX fue capaz de modular la actividad convulsivante inducidapor la administracin PTZ, reduciendo la severidad de las crisisas como la actividad epileptiforme en el registro. Adems, eltratamiento con FLX disminuy significativamente la actividadmetablica, medida mediante el SUV (standard uptake value)en diversas reas cerebrales.La FLX al contrarrestar diversos

efectos inducidos por PTZ, revela un posible papel protectorde la transmisin serotonrgica en la epileptognesis.

Sesin Oral V - Diabetes/obesidad

O.22. Papel de la AMPK en la regulacin de la fun-cin vascular en ratas sensibles y ratas re-sistentes al desarrollo de obesidad.

Danila Del Rio2, Concha F. Garca-Prieto1, Marisol Fernndez-Alfonso2, Beatriz Somoza1, Mariano Ruiz-Gayo1. 1Departamen-

to de Ciencias Farmacuticas y de la Alimentacin. Facultad deFarmacia Universidad San Pablo-CEU. 2Instituto Pluridisciplinary Facultad de Farmacia. Universidad Complutense de Madrid.

La quinasa dependiente de AMP (AMPK) se expresa a nivel ar-terial tanto en clulas endoteliales como en clulas musculares.Tiene un papel protector de la funcin vascular a travs de laestimulacin de la formacin de xido ntrico. El objetivo prin-cipal de este trabajo es determinar si la funcin de la AMPK vas-cular se ve alterada durante el desarrollo de obesidad. Para ellose han utilizado ratas macho de la cepa Sprague Dawley de12semanas de edad, que se dividieron en dos grupos alimentadoscon una dieta control (n=5) que aporta un 10% de Kcal a partir

de grasa animal y con una dieta grasa (n=10), que aporta un45% de Kcal a partir de grasa animal (D12451; Research Diets,EEUU), durante 8 semanas. Tras la primera semana de dieta, lasratas sometidas a la dieta grasa se subdividieron en dos gruposen funcin de su peso corporal: ratas sensibles a la obesidad
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(SO) y ratas resistentes a la obesidad (RO). Antes del sacrificiose determin la resistencia a insulina mediante la realizacinde una sobrecarga de glucosa. Los animales RO mostraron un

peso corporal similar al de las ratas control, mientras que elpeso de las ratas SO fue significativamente superior (p


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KCNQ1 via proteasome. Finally, we analyzed possible changesinduced by PUFAs in channel traffic and in its localization in themembrane. Neither EPA nor DHA modified KCNQ1 traffic. Under

control conditions, KCNQ1 were located in lipid rafts and EPAand DHA treatment impaired the localization of these chan-nels that can account with the increase in the current. Indeed,methyl-beta-cyclodextrin partially prevents the increase of IKsproduced by PUFAs. Therefore, our results demonstrate thatboth EPA and DHA increase the IKsmagnitude, induce KCNQ1degradation via proteasome and modify the membrane locali-zation of this channel subunit. All these effects can account forthe antiarrhythmic properties observed of these PUFAs.Granted by SAF2010-14916 (CV), BFU2008-00431 (AF), CSD2008-00005 (AF) and FIS (RD06/0014/0006, CV).

O.25. La diabetes tipo 1 y la hipoxia moderada in-

ducen diferentes patrones de enfermedadvascular pulmonar en ratas.

Enrique Moreno, Javier Moral-Sanz, Jos G. Lopez-Lopez, Car-men Menndez, Bianca Barreira, Lucia Escolano, Pilar Fernn-dez-Segoviano, Eduardo Villamor, ngel Cogolludo, FranciscoPrez-Vizcano y Laura Moreno. Departamento de Farmacolo-gia, Facultad de Medicina, Universidad Complutense de Ma-drid. Instituto de Investigacin Sanitaria del Hospital Clnico SanCarlos (IdISSC) de Madrid. Ciber de Enfermedades Respiratorias(CIBERES). Instituto de Fisiologia, Benemrita Universidad Au-tonoma de Puebla, Mexico. Servicio de Anatomia Patologica,

Hospital Universitario de Getafe, Madrid. Department of Pedi-Department of Pedi-atrics, Maastricht University Medical Center (MUMC+), Schoolfor Oncology and Developmental Biology (GROW), Maastricht,the Netherlands.

Aunque tanto la diabetes tipo 1 como la tipo 2 se han aso-ciado con una morbilidad sistmica cardiovascular, su relacincon la enfermedad vascular pulmonar no ha sido analizada enprofundidad. Datos epidemiolgicos recientes sugieren que ladiabetes es un factor de riesgo para el desarrollo de hiperten-sin pulmonar. El objetivo del presente estudio fue analizaren un modelo animal la relacin entre la diabetes tipo 1 y en-

fermedad vascular pulmonar. Se usaron ratas Wistar-Kyoto ma-cho que fueron aleatoriamente divididas en un grupo control(salino) y en uno diabtico (inyeccin intraperitoneal de 70 mg/Kg de estreptozotocina) durante 4 semanas y expuestas biena normoxia o a una hipoxia normobrica moderada (14%) du-rante otras 2 semanas. La diabetes unida a la hipoxia provocun moderado aumento tanto en la presin pulmonar diastlicacomo en la presin arterial pulmonar media as como en elpeso del ventrculo derecho, sin embargo los dos factores pors solos no modificaron significativamente ninguno de estosparmetros. Ambos factores aumentaron de manera indepen-diente la muscularizacin de las arterias pulmonares y redu-jeron la expresin del receptor de la protena morfogentica

de hueso tipo 2 (BMPR2) a nivel pulmonar. La hipoxia, pero nola diabetes inhibi las corrientes generadas por los canales de

potasio dependientes de voltaje (Kv); mientras que la diabetespero no la hipoxia indujo una disfuncin endotelial y aumentla actividad mieloperoxidasa en pulmn. La hipoxia moderada

y la diabetes inducen un patrn de cambios diferente en losmarcadores de hipertensin pulmonar y slo la combinacinde ambos factores es capaz de inducir un aumento moderadode la presin arterial pulmonar. Nuestros resultados fortalecenan ms la relacin entre diabetes y enfermedad vascular pul-monar.

O.26. Alteracin de la va de la COX-1 en la res-puesta a la vasopresina en la aorta de ratasZucker obesas.

Sara Benedito, Rosa M Pagn, Medardo Hernndez, AlbinoGarca-Sacristn, Dolores Prieto y Ana Cristina Martnez.

Seccin Departamental de Fisiologa Animal. Facultad de Far-macia. Universidad Complutense de Madrid.

Las concentraciones plasmticas de vasopresina (AVP) se en-cuentran incrementadas en los individuos que padecen dia-betes mellitus (DM) tipo II. Este hallazgo no es sorprendente,puesto que la AVP es una hormona vasoactiva pero tambinpresenta un importante carcter osmorregulador y durante laDM se produce una alteracin de la osmorregulacin. El objeti-vo del presente trabajo fue determinar la existencia de una rela-cin entre el comportamiento vascular de la AVP y el desarrollode DM, es decir, en un estado prediabtico, representado por

la ratas obesas Zucker. Si conocemos su efecto sobre la funcinvascular en una fase inicial de la enfermedad podremos hacerfrente con una mayor eficacia a las serias complicaciones car-diovasculares que pueden sufrir los individuos diabticos. Seaislaron segmentos de aorta torcica de ratas Zucker controles(RZC) y obesas (RZO) y se montaron en migrafos vascularespara el registro de la tensin isomtrica. Se realizaron curvasconcentracin-respuesta de AVP. La sensibilidad y la mximacontraccin de la aorta a la vasopresina fueron significativa-mente menores en RZO que en RZC. La retirada mecnica delendotelio no modific la respuesta inducida por AVP en nin-guno de los dos grupos estudiados. La inhibicin de la sntesis

de prostaglandinas con indometacina (3 M) y con el inhibidorselectivo de la COX-2 (NS 398, 3 M) provoc una reduccinsignificativa de la respuesta de la AVP en ambos grupos deratas. Sin embargo, la administracin del inhibidor selectivode la COX-1 (SC 560, 1 M) solamente influy en la respuestavasopresinrgica de las RZC. Por tanto, podemos concluir queel efecto contrctil de la vasopresina en la aorta de RZC se en-cuentra mediado por prostanoides contrctiles sintetizados atravs de la COX-1 y la COX-2, mientras que en las RZO la afec-tacin de la va de la COX-1 produce como consecuencia quela COX-2 se convierta en la nica enzima de sntesis de prosta-noides que interviene en el efecto contrctil de la AVP inclusoen condiciones de pre-diabetesEste estudio ha sido financiado

por los proyectos n SAF2006-09191 y SAF2009-10448 del Mi-nisterio de Ciencia e Innovacin.


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Sesin Oral VI: Cardiovascular

O.27. Papel de la esngomielinasa neutra en te-

jidos vasculares sensibles a cambios en lapresin parcial de oxgeno.

Luca Escolano1, Laura Moreno1, Javier Moral1, Enrique More-no1, Carmen Menendez1, Bianca Barreira1, Eduardo Villamor2,Francisco Perez-Vizcaino1, Angel Cogolludo1. 1. Departamentode Farmacologa. Facultad de Medicina. Universidad Complu-tense de Madrid. 2. Departamento de Pediatra, Grow School,Universidad de Maastricht (Holanda).

Recientemente hemos descrito que la ceramida generada atravs de la esfingomielinasa neutra desempea un papel cru-cial en la vasoconstriccin pulmonar hipxica (Cogolludo et al.,2009). En el presente estudio hemos analizado su papel en lasensibilidad de diversos territorios vasculares de pollo a cam-bios en la presin parcial de oxgeno. Para ello se estudiaron lasrespuestas inducidas por normoxia (21% O2) e hipoxia (0% O2)en los lados artico (aDA) y pulmonar (pDA) del ductus arterio-so y en las arterias pulmonares (AP) y corioalantoideas (AC) deembriones de pollo (20 das de gestacin y 2 das tras eclosin).La exposicin a normoxia produjo una contraccin de los pDA,pero no de los aDA. Por el contrario, las AP y AC mostraron unarespuesta vasoconstrictora en condiciones de hipoxia. Las res-puestas vasoconstrictoras inducidas por normoxia (en pDA) ehipoxia (en AP y AC) se inhibieron en presencia de un inhibidor

de la esfingomielinasa neutra (GW-4869 10 mM) y de un anti-cuerpo frente a ceramida (xxx). En concordancia con estos re-sultados, los niveles intracelulares de ceramida aumentaron enpDA expuestos a normoxia y en AP y AC expuestas a hipoxia.La administracin de esfingomielinasa de Bacillus cereusrelajlos aDA y contrajo los dems vasos, mimetizando los efectosde la normoxia en pDA y aDA y de la hipoxia en AP y AC. Estu-dios de expresin por PCR cuantitativa revelaron la presenciade la esfingomielinasa neutra tipo 2 (gen SMPD3) en todos lostejidos, sin que existieran diferencias significativas entre ellos.Nuestros datos indican un papel central de la ceramida genera-da por la esfingomielinasa neutra en las respuestas vasocons-

trictoras observadas en tejidos vasculares sensibles a cambiosen la presin parcial de oxgeno.

Financiado por SAF2010-22066-C02-02.

O.28. La adipoquina visfatina deteriora la relaja-cin dependiente de endotelio en microva-sos humanos y de rata mediante su activi-dad nicotinamida fosforribosil transferasa.

Vallejo S, Tanya Romacho, Angulo J, Villalobos LA, Leivas A,Rodrguez-Gallego S, Bermejo E, Carraro R, Snchez-Ferrer CF,Peir C. Departamento de Farmacologa. Facultad de Medicina.

Universidad Autnoma de Madrid.La visfatina, tambin conocida como PBEF (pre-B cell colony-enhancing factor) o Nampt (nicotinamida fosforibosil transfe-rasa), es una nueva adipoquina secretada principalmente porel tejido adiposo, cuyos niveles se encuentran elevados en des-

rdenes metablicos tales como obesidad y diabetes mellitus.Se ha comprobado que los niveles circulantes de visfatina secorrelacionan positivamente con dao vascular y disfuncin

endotelial. Por ello, en este trabajo se ha investigado la capaci-dad de la visfatina para deteriorar la reactividad vascular en mi-crovasos mesentricos de ratas Sprague-Dawley machos y enmuestras de epiplon humano procedentes de pacientes some-tidos a ciruga abdominal no urgente y no sptica. La preincu-bacin de los microvasos de rata con visfatina (50 y 100 ng/ml)no modific la respuesta contrctil a noradrenalina (1pmol/La 30 umol/L), analizada mediante un migrafo para vasos depequeo calibre. Sin embargo, la visfatina (10 a 100 pmol/ml)deterior de manera concentracin-dependiente la relajacinproducida por acetilcolina (ACh; 100 pmol/l a 3 mol/l), sininterferir en la relajacin endotelio-independiente producidapor el nitroprusiato sdico (1 nmol/l a 3 umol/l). En cultivos

de clulas endoteliales procedentes de vena de cordn umbi-lical humano (HUVEC), la visfatina (10 a 100 ng/ml) estimul demanera concentracin- dependiente la actividad nicotinamidaadenina dinucletido fosfato (NADPH) oxidasa, que fue deter-minada por quimioluminiscencia. La relajacin producida porACh, deteriorada por la visfatina (50 ng/ml), se recuper con elinhibidor de la actividad NADPH oxidasa Apocinina (10 mol/l).Asimismo, el inhibidor de Nampt APO886 (10 nmol/l) previnola estimulacin de la NADPH oxidasa endotelial y el deteriorode la relajacin producidos por la visfatina, mientras que unanticuerpo bloqueante del receptor de insulina no tuvo nin-gn efecto. En concordancia con estos resultados, el producto

de la actividad Nampt, el mononucletido de nicotinamida(100 nmol/l a 1 mmol/l) estimul la actividad NADPH oxidasaendotelial y deterior de manera concentracin-dependientela vasodilatacin producida por ACh (10 nmol/l a 1 mmol/l).En microvasos humanos mesentricos que fueron contradospreviamente con 35 mmol/l KCl, la vasodilatacin endotelio-dependiente producida por bradiquinina (1 noml/ a 3 mol/)se deterior anlogamente por visfatina y fue asimismo res-taurada por APO886. En conclusin, nuestros datos indicanque la adipoquina visfatina deteriora la relajacin endotelio-dependiente a travs de un mecanismo que implica estimu-lacin de la actividad NADPH oxidasa, y que est basado en

su actividad enzimtica Nampt. Asimismo, proponemos quela visfatina puede tener un papel potencial en el desarrollode disfuncin endotelial asociada a la obesidad o al sndromemetablico.

O.29. La brilacin auricular potencia los efectosde la estimulacin b-adrenrgica sobre lascorrientes de K+auriculares humanas.

Ricardo Caballero, Marta G. de la Fuente, Ricardo Gmez, Ire-ne Amors,Adriana Barana, Pablo Dolz, Lourdes Osuna, JuanTamargo, Eva Delpn.Departamento de Farmacologa. Facultad de Medicina. Univer-

sidad Complutense de Madrid.

Dado que la estimulacin b-adrenrgica favorece la gnesis yel mantenimiento de la fibrilacin auricular crnica (FAC), he-mos analizado los efectos producidos por isoproterenol (Iso,


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2011Vol. 1 No. 1:2

doi: 10:3823/601

1 nM), un agonista de receptores b-adrenrgicos sobre la co-rriente transitoria de salida (Ito), los componentes ultrarrpido(IKur) y lento (IKs) de la corriente rectificadora tarda, y sobre la

corriente con rectificacin interna (IK1). Las corrientes se regis-traron utilizando la tcnica depatch-clampen miocitos disocia-dos enzimticamente a partir de muestras de las orejuelas delas aurculas derecha (AD) e izquierda (AI) de pacientes en ritmosinusal (RS) y con FAC sometidos a ciruga cardiaca. En miocitosde pacientes en RS, el Iso apenas inhiba la I to (14.73.3% a+30 mV). La inhibicin de la Itoproducida por Iso en miocitosprocedentes de pacientes con FAC aumentaba significativa-mente alcanzando un 28.72.6% en la AD y un 41.16.4% enla AI (P

Libro de resúmenes: Sesiones orales Farmadrid XX

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