LE MILIEU A LA LYSINE DE TAYLOR (LDC)

Peptone 5 gExtrait de viande 5 g L-Lysine 10 gGlucose 0,5 gPyridoxal phosphate 0,005 gPourpre de Bromocrésol 0,01 gRouge de crésol 0,005 g ED qsp 1 L

Composition

Source N

Source de C

Indicateurs de pHviolet pH basique ou neutre, jaune pH acide

pH = 6,8 à 7

Source de C, N

Vitamine PP , coenzyme des décarboxylases

Acide aminé indispensable à la recherche de la LDC

Ensemencement

1- Introduire une goutte de suspension dans le milieu.2- Agiter.

3- Si le tube n’est pas plein, recouvrir d’un peu d’huile de vaseline.4- Incuber 24 heures à 37°C

LE MILIEU UREE INDOLE

Tryptophane 0,3 gUrée 2 g Phosphate monopotassique 0,1 gPhosphate bipotassique 0,1 gChlorure de sodium 0,5 gEthanol à 95° 1 mLRouge de phénol à 1% 0,25 mL ED qsp 100

mL

Composition Acide aminé nécessaire à la recherche de la TDA et de la tryptophanase

Source de P

Indicateurs de pHrouge pH basique ou neutre, jaune pH acidepH = 7

Molécule azotée nécessaire pour la recherche de l’uréase

Ensemencement

1- Introduire 1 ou plusieurs colonies identiques dans le milieu.2- Agiter.3- Incuber 24 heures à 37°C.

Solubilisation du tryptophane

Sels minéraux

Lecture des milieux

Milieu LDC

1ère lecture possible

Alcalinisation du milieu par formation d’un composé basique issu de la décarboxylation de la lysine par la LDC, la cadavérine : LDC +

2nde lecture possible

Le milieu est devenu jaune le pH est acide par formation de composés acides issus de la fermentation du glucose par les bactéries. Il n’y a pas réalcalinisation du milieu : LDC -

Milieu urée-indole

Recherche de l’uréase: lecture directe

1ère lecture possible

Alcalinisation du milieu par formation d’un composé basique issu de l’hydrolyse de l’urée : UREASE +

Le rouge de phénol reste orangé pH neutre l’urée n’est pas hydrolysée, absence de l’enzyme chez les bactéries : UREASE -

2nde lecture possible

Recherche de la TDA et de l’indole

10 gouttes du milieu

Reste de la culture

2 gouttes de FeCl3

2 gouttes de réactif de Kovacs

Pas de modification du milieu : TDA -

Formation d’un précipité marron présence d’acide indole pyruvique : TDA +

Présence d’un anneau orangé en surface absence d’indole : INDOLE -

Présence d’un anneau rouge en surface formation d’indole à partir du Trp sous l’action de la tryptophanase : INDOLE +