Laporan Finishing Praktikum Biokimia 3

8/19/2019 Laporan Finishing Praktikum Biokimia 3

1/28

LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA

Reaksi Uji Protein

DISUSUN OLEH KELOMPOK E4

100601116! Djati "#$an K#s#%o

100601116& 'at(i%a( A))a(ra

1006011166 Kiki A*#%e$a

100601116+ E$,ira P#tri A

1000601116- Anita Sara( H

100601116. /ina N#r(aija(

ASISTEN KELOMPOK

Ina A%a$ia

LABORATORIUM 'ARMASI TERPADU UNIT B

PRO/RAM STUDI 'ARMASI

'AKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PEN/ETAHUAN ALAM

UNI2ERSITAS ISLAM BANDUN/

BANDUN/

!01!


2/28


3/28

arutan protein yang digunakan dalam praktikum ini adalah larutan albumin.

2lbumin adalah protein yang dapat larut dalam air serta dapat terkoagulasi oleh panas.

2lbumin terdapat dalam serum darah dan putih telur 3Poedjiadi/ 144&5.

Protein yaitu sebagai struktural pada sel maupun jaringan dan organ/

sebagaien0im suatu biokatalis/ sebagai pengemban atau pembawa senyawa atau 0at

ketikamelalui biomembran sel dan sebagai 0at pengatur.protein merupakan suatu 0at

makanan yang sangat penting bagi tubuh karena0at ini berfungsi sebagai sumber energi

dalam tubuh serta sebagai 0at pembangun dnpengatur. Protein adalah polimer dari asam

amino yang dihubungkan dengan ikatan peptida. Molekul protein mengandung unsur6

umsur C/ #/ / "/ P/ 7/ dan terkadangmengandung unsur logam seperti besi dan tembaga

38inarno/ 144$5.

Protein merupakan suatu polipeptida dengan BM yang sangat ber(ariasi dari '999

sampai lebih dari satu juta karena molekul protein yang besar/ protein sangatmudah

mengalami perubahan fisis dan akti(itas biologisnya. Banyak agensia yangmenyebabkan

perubahan sifat alamiah dari protein seperti panas/ asam/ basa/ sol(enorganik/ garam/

logam berat/ radiasi sinar radioaktif 37udarmadji/ 144)5

7elain itu protein juga merupakan makromolekul yang paling berlimpah didalam

sel dan menyusun lebih dari setengah berat kering pada hampir semuaorganisme. Protein

merupakan instrumen yang mengekspresikan informasi genetik.

Protein mempunyai fungsi unik bagi tubuh/ antara lain menyediakan bahan6bahan

yang penting peranannya untuk pertumbuhan dan memelihara jaringan tubuh/mengatur

kelangsungan proses di dalam tubuh/ dan memberi tenaga jika keperluannyatidak dapat

dipenuhi oleh karbohidrat dan lemak.7truktur asam amino digambarkan sebagai berikut:

3ehninger/ 144'5.

Klasifikasi Protein

Berdasarkan kelarutannya :

a. Protein fibrosa : tidak larut dalam pelarut biasa namun larut dalam asam dan basa.


4/28

b. Protein globular : larut dalam air/ larutan asam/ basa/ bahkan garam.

Berdasarkan komplekan strukturnya :

a. Protein sederhana : hidrolisisnya menghasilkan asam amino. contoh : albumin/

globular.

b. Protein konjugasi : memilik gugus bukan protein yaitu gugus prostetik. contoh : neuro

protein/ kromoprotein. 37umardjo 1445

Jenis- jenis protein :

+olagen/ protein struktur yang diperlukan untuk membentuk kulit/ tulang/dan ikatan tisu.

2ntibodi/ protein system pertahanan yang melindungi badan dari pada serangan penyakit.

*ismutase supero;ide/ protein yang membersihkan darah kita. (ulbumin/ protein

simpanan yang memelihara badan. #emoglobin/ protein yang berfungsi membawa

sebagai pembawa oksigen.


5/28

&. 7truktur +uartener terbentuk dari beberapa bentuk tersier/ dengan kata lain multi

subunit. =nteraksi intermolekul antar sub unit protein ini membentuk struktur

keempat>kuartener.

?ungsi dan Peranan Protein Protein memegang peranan penting dalam berbagai

proses biologi. Peran6peran tersebut antara lain:

1. +atalisis en0imatik hampir semua reaksi kimia dalam sistem biologi

dikatalisis oleh en0im danhampir semua en0im adalah protein.

$.


6/28

uji biuret/ pengendapan oleh garam/pengendapan oleh logam dan alkohol.

7erta uji koagulasi dan denaturasi protein.

I23 A$at an Ba(an

2lat :

1.


7/28

. Aeagen millon

4. Aeagen uji biuret

19. arutan albumin

11. Buffer asetat 1M

1$. Buffer asetat p# &/@ 3 1 M 5

1%. 2sam klorida 9/1 M

1&. til alcohol 4'D

1'. "atrium hidroksida 9/1 M

1). #Cl 9/1 M

1@. "a# 9/1 M

23 Prose#r

Uji biuret

1. % ml larutan protein ditempatkan pada tabung reaksi

$. 1 ml larutan natrium hidroksida $/' " ditambahkan dan di aduk

%. 7etetes larutan tembaga sulfat 9/91M ditambahkan dan diaduk

&. Eika tidak timbul warna/ setetes atau $ tetes larutan tembaga sulfat ditambahkan.

Pengendapan dengan logam

1. % ml larutan protein ditempatkan pada tabung reaksi

$. ' tetes #gCl 9/$ M ditambahkan

%. Percoban diulangi dengan cara pb asetat 9/$ M ditambahkan


8/28

Pengendapan dengan garam

1. 19 ml larutan protein dijenuhkan dengan ammonium sulfat dilakukan dengan

cara:

Pertama sedikit garam ditambahkan kedalam larutan protein aduk hingga larut

kemudian sedikit ammonium sulfat ditambahkan hal ini dilakukan sampai sedikit

garam tertinggal tidak terlarut.

$. arutan disaring setelah jenuh

%. +elarutan endapan di dalam air di uji

&. ndapan diuji dengan reagen millon

'. arutan di filtrate dengan uji biuret

Pengendapan dengan alcohol

1.


9/28

Denaturasi protein

1. % tabung reaksi disiapkan


10/28

2I3 Hasi$ en7a%atan

No Per$ak#an Hasi$ en7a%atan /a%5ar (asi$

ero5aan

1 Uji biuret% ml larutan protein 1 ml natrium

hidroksida 1 tetes larutan tembaga

sulfat 1 atau $ tetes larutan

tembaga sulfat sampai timbul warna


11/28

juga di bawah

permukaan jadi

endapan pada pb

lebih banyak

dibandingkan

dengan #gCl

Pengendapan dengan garam

arutan albumin garam

ammonium sulfat uji kelarutan

uji endapan dengan reagen millon


12/28


13/28

6 Uji endapan dengan reagen

millon

dan endapan

ndapan mengapng

dan terjadi

perubahan warna

pada endapan

menjadi merah bata

6 *enaturasi protein

*imasukan 4 ml albumin kedalam %

tabung reaksi :

6


14/28

amino diikat pada atom karbon yang sama. Masing6masing berbeda satu dengan yang

lain pada gugus A6nya/ yang ber(ariasi dalam struktur/ukuran/ muatan listrik/ dan

kelarutan dalam air. Beberapa asam amino mempunyai reaksi yang spesifik pada gugus

A6nya/ sehingga dari reaksi tersebut dapat diketahui komponen asam amino suatu protein.

Pada praktikum Biokimia F Aeaksi Uji ProteinG ini akan dipelajari cara identifikasi

protein dengan memanfaatkan ikatan yang khas pada protein/ yaitu ikatan peptida dan

juga akan diamati pengaruh perubahan fisik seperti suhu/ p#/ dan 0at60at kimia terhadap

struktur protein.

Uji biuret:

2sam amino adalah sembarang senyawa organik yang memiliki gugus fungsional

karboksil 36C#5 dan amina 3biasanya 6"#$5. *alam biokimia seringkali

pengertiannya dipersempit: keduanya terikat pada satu atom karbon 3C5 yang sama

3disebut atom C HalfaH atau I5. ugus karboksil memberikan sifat asam dan gugus amina

memberikan sifat basa. *alam bentuk larutan/ asam amino bersifat amfoterik . Uji biuret

adalah salah satu cara pengujian yang memberikan hasil positif pada senyawa6senyawa

yang memiliki ikatan peptida. leh karena itu/ uji Biuret ini sering digunakan untuk

menunjukkan adanya senyawa protein. Pengujiannya dapat dilakukan dengan cara

berikut. arutan yang mengandung protein ditetesi larutan "a#/ kemudian diberi

beberapa tetes larutan Cu7& encer.


15/28

*alam larutan encer/ denaturasi yang dipengaruhi oleh p# dan suhu sangat

dekat hubungannya dengan proses denaturasi yang jarang halnya yang dapat

digunakan dengan panas saja.

%. =on ogam

+edua p# dan kekuatan ion larutan menetukan beban sepenuhnya molekul

protein dan kerentanan mereka terhadap denaturasi panas

&. ula dan Polyols

ula dan polyols dapat menunjukan pengaruh stabilitas panas pada protein

makanan.

'. 7ifat Protein

Penambahan bahan kimia seperti Urea/ uadinin/ +lorida dan detergen tidak

bemuatan ion dapat mengubah struktur dan mempengaruhi jalannya panas

Pada uji biuret/ baik pada larutan protein gelatin dan albumin yang diujikan memberikan

hasil positif/ ditandai dengan terbentuknya warna ungu pada permukaan larutan setelah

ditambah "a# dan Cu7&. Uji biuret hanya akan memberikan hasil positif pada

protein yang memiliki ikatan peptida/ artinya jika hanya terdiri dari satu asam amino saja

3contoh: lisin/ alanin/ (alin5/ uji biuret akan memberikan hasil negatif. arutan albumin

memiliki rumus bangunan yang kompleks dan mengikat dua atau lebih asam amino

esensial/ sehingga terbentuk ikatan peptida. 2lbumin merupakan protein globular yang

terdiri atas rantai polipeptida yang berlipat5.Eadi/ dengan adanya ikatan peptida

3polipeptida5 inilah/ hasil uji biuret pada albumin positif. Pada uji Biuret/ maksud

ditambahkannya "a# dalam larutan uji adalah untuk mengkondisikan suasana basa/

sehingga Cu dapat bereaksi dengan larutan protein. "a# mencegah endapan Cu3#5$/

memecah ikatan protein sehingga terbentuk urea/ sebagai katalisator Aeaksi

menghasilkan warna (iolet pada permukaan larutan protein yang menandakan

terbentuknya senyawa kompleks Cu dengan gugus 6C dan 6"# pada asam amino dalam

protein. Biuret merupakan senyawa dengan dua ikatan peptida yang berbentuk pada


16/28

pemanasan dua molekul urea dan mempunyai struktur mirip dengan struktur peptida dari

protein sehingga ion Cu$ dari pereaksi biuret dalam suasana basa akan bereaksi dengan

polipeptida atau ikatan6ikatan peptida yang menyusun protein membentuk senyawa

kompleks berwarna ungu

Pada uji biuret/ semua protein yang diujikan memberikan hasil positif. Biuret bereaksi

dengan membentuk senyawa kompleks Cu dengan gugus 6C dan 6"# pada asam amino

dalam protein.

p# larutan protein diatas titik isolistriknya 3p# isolistrik pada albumin telur

adalah &/'' ! &/495/ namun p# yang diatas titik isolistrik menjadikan protein bersifat

negatif. leh karena itu putih telur dapat digunakan sebagai antidotum atau penawar

racun apabila orang keracunan logam. *enaturasi protein ini dapat disebabkan oleh suhu

yang tinggi 3akibat pemanasan5 keasaman 3perubahan p# yang ekstrim5/ pengaruh dari

logam/ dan karena adanya pengaruh goncangan. Pengaruh goncangan pada percobaan ini

adalah dua larutan yang dicampur dan dikocok. *alam hal ini pengocokan adalah proses

pengguncangan. 7edangkan penambahan "a# pada percobaan ini dapat mengendapkan

larutan albumin selain ity sebagi uji identifikasi protein pada albumin telur. Penambahan

Cu7o& yang berlebih pada larutan albumin akan merusak dan dapat menyebabkan protein

sulit untuk diamati.

Pengendapan Logam

Pada uji pengendapan logam dihasilkan endapan berwarna putih dan larutan

keruh. ndapan yang terbentuk merupakan endapan yang berasal dari protein yang diuji/

endapan ini terjadi karena adanya reaksi logam Pb dngan protein. ogam Pb ini

merupakan logam yang mengandung ion positif. *imana salah satu sifat dari logam yang

mengandung ion positif dapan menghasilkan endapan jika direaksikan dengan protein.7ama halnya dengan #g yang juga merupakan logam yang mengandung ion

positif yang juga dapat menghasilkan endapan jika direaksikan dengan protrein dasar

reaksi pengendapan oleh logam berat adalah penetralan muatan. *imana pengendapan

akan terjadi bila protein berada dalam bentuk isoelektrik yang bermuatan negatif/ dengan

adanya muatan positif dari logam berat akan terjadi reaksi netralisasi dari protein dan


17/28

dihasilakan garam proitein yang mengendap. ndapan ini akan melarut kembali dengan

penambahan alkali yang sifat pengendapan ini adalah re(ersibel.

Pada percobaan pengendapan dengan logam yaitu $ tabung yang berisi larutan

albumin/ pada tabung pertama ditambahkan #gCl$ dan tabung kedua ditambahkan

Pb7&/ penambahan larutan #gCl$ dan Pb7& pada larutan albumin secara bersamaan/

supaya dapat dibandingkan larutan mana yang lebih cepat bereaksi dan yang lebih

bereaksi adalah larutan albumin yang ditambahkan #gCl$. 8arna albumin yang

ditambahkan #gCl$ yaitu putih/ sedangkan pada albumin yang ditambahkan Pb7&

berwarna putih keruh. 8arna semula laruta albumin yaitu putih kental.

*ari percobaan diatas/ larutan protein albumin yang ditambahkan #g7& lebih

cepat bereaksi dibandingkan Pb7&. arutan protein yang ditambahkan #g7& lebih

cepat bereaksi karena apabila protein direaksikan dengan logam akan terjadi ikatan lebih

kuat dan itu yang menyebabkan terjadi reaksi lebih cepat/ sehingga akan mempengaruhi

logam berat terhadap larutan protein. *an hal ini juga terjadi karena tetapan disosiasi

#gCl$ lebih besar daripada Pb7&. Pada saat ditambahkan ke dalam larutan protein/

#gCl$ akan terionisasi dan lebih banyak dalam bentuk #g$ sehingga protein lebih cepat

bereaksi dengan #g$ tersebut dan menghasilkan endapan dalam jumlah yang lebih

banyak ketimbang pengendapan oleh logam Pb7& yang memiliki tetapan disosiasi lebih

kecil dari #g.

=katan yang amat kuat dari reaksi protein yang ditambahkan dengan #gCl$ akan

memutuskan ikatan jembatan garam/ sehingga akan terjadi denaturasi/ secara bersama

gugus !C# dan gugus !"#$ yang terdapat pada protein dapat bereaksi dengan ion

logam berat dan dapat membentuk senyawa kelat. =on6ion yang dapat membentuk

endapan logam dengan protein antara lain adalah 2g/ Ca/ Jn/ #g/ ?e/ Cu/ Co/ Mn/ dan

Pb. 7elain gugus !C# dan gugus !"#$/ gugus !A pada molekul asam amino tertentudapat pula mengadakan reaksi dengan ion atau senyawa lain. ugus !7# pada molekul

akan bereaksi dengan dengan ion #g. Eumlah endapan yang dihasilakan dipengaruhi oleh

kereaktifan logam berat yang ditambahkan. ogam #g lebih reaktif daripada logam Pb

karena merupakan logam transisi pada sistem periodik.


18/28

Persamaan Aeaksi :

Pen7enaan en7an Lo7a%

"#% "#%

"#%

A ! C# ! C6 #g$ A ! C# ! C ! #g ! C ! C# !A

"#% "#%

"#%

A ! C# ! C6 Pb$ A ! C# ! C ! Pb ! C ! C# ! A

Pengendapan Garam

Untuk percobaan pada uji pengendapan dengan garam itu hasil yang diperoleh

yaitu endapan yang bewarna merah. ndapan ini menunjukkan atau merupakan hasil dari

garam6garam organik dalam persentase tinggi yang dapat mempengaruhi sifat kelarutan

protein. Pengendapan yang dikarenakan penambahan ammonium sulfat menyebabkan

terjadi dehidrasi protein atau sering dikenal dengan kehilangan air sehingga proses

dehidratasi ini molekul protein yang mempunyai kelarutan paling kecil akan mudah

mengendap. #asil pencampuran antara serbuk ammonium sulfat dengan protein

menghasilkan endapan dan filtrate/ untuk endapan dilakukan uji millon dan menghasilkan

larutan dengan endapan merah/ hal ini dikarenakan karena pereaksi millon adalah larutan

merkuro dan merkuri nitrat dalam asam nitrit. 2pabila pereaksi ini ditambahkan pada

larutan protein/ akan menghasilkan endapan putih yang dapat menjadi merah pada

pemanasan. Pada dasarnya reaksi ini positif untuk fenol6fenol dikarenakan terbentuknya

senyawa merkuri dengan gugus hidroksifenil yang bewarna/ protein yang mengandung

tirosin akan memberikan uji positif.


19/28

melarut dalam air atau pelarutnya dan mendesak protein keluar/ kembali dalam bentuk

solidnya sehingga terbentuklah protein yang terendapkan. *an endapan putih tersebut

juga di saring menggunakan kertas saring/ kemudian masing6masing hasil saring dari

protein tersebut 3albumin5 dilarutkan menggunakan air/ dilarutkan menggunakan reagen

Millon. Pada endapan garam yang dilarutkan dengan air yaitu semua endapan larut/

karena sifat garam yang hidrofobik/ jadi saat garam dilarutkan pada air/ garam akan

menyerap air sehingga garam mudah larut dalam air. Bila garam netral yang ditambahkan

berkonsentrasi tinggi/ maka protein akan mengendap. Pengendapan terus terjadi karena

kemampuan ion garam untuk mengdehidrasi sehingga terjadi kompetisi antara garam

anorganik dengan molekul protein untuk mengikat air. +arena garam anorganik lebih

menarik air maka jumlah air yang tersedia untuk molekul protein akan berkurang.

Pada hasil endapan albumin yang ditambahkan amonium sulfat dilarutkan dengan

reagen millon yaitu endapan tidak larut pada reagen millon dan endapannya berwarna

orange/ padahal mulanya endapan tersebut berwarna putih. Prinsip reagen millon itu

sendiri bembentukan garam merkuri dari tirosin yang ternitrasi.


20/28

dihasilkan pengendapa hal ini disebabkan karena konsentrasi garam kecil sehingga

pengendapan tidak sempurna.

Pengendapan Alkohol

% tabung reaksi yang masing6masing diisi dengan larutan albumin/ pada tabung

pertama yang berisi larutan albumin ditambahkan dengan Buffer aetat p# &/@ 31 M5/

setelah ditambahkan Buffer asetat p# &/@ 31 M5 pada larutan albumin tidak reaksi apa6

apa pada larutan/ yaitu larutan tetap berwarna putih keruh. +emudian pada larutan

tersebut ditambahkan juga larutan etil alkohl 4' D/ dan reaksi yang didapat pada larutan

tersebut adalah terdapat % lapisan pada larutan yaitu pada lapisan atas berwarna jernih/

lapisan tengah berwarna putih keruh/ dan lapisan bawah berwarna keruh. Pada p# buffer

asetat &/@ dan p# albumin &/'6&/ hal inilah yang membuat ikatannya lebih cepat/

sehingga akan membentuk endapan lebih banyak.

Pada tabung yang kedua berisi larutan albumin ditambahkan dengan #Cl 9/1 M/

reaksi yang di dapat setelah penambahan #Cl pada larutan albumin yaitu warnanya tetap

putih keruh. +emudian pada larutan tersebut juga ditambahkan larutan etil alcohol 4' D/

reaksi yang didapat pada larutan tersebut adalah warna larutan putih keruh dan terdapat $

cincin putih ditenggah6tengah larutan/ cincin pertama agak lebih tipis sedangkan cincin

kedua agak lebih putih keruh.


21/28

berikatan dengan gugus Cl6 dan gugus negatif yang ada pada larutan sehingga terbentuk

endapan pada suasana asam. 7ebaliknya/ protein tidak terendapkan oleh alkohol pada

suasana basa karena p# nya terlampau jauh dari titik isoelektrik protein. Protein juga

disebut amfoter karena pada ujung rantai protein terdapat gugus asam amino dan

karboksilat/ sehingga mudah larut tetapi susah larut dalam lemak.

Pada uji pengendapan oleh alkohol/ hanya tabung6tabung yang mengandung asam

3ber6p# rendah5 yang menunjukkan pengendapan protein. Pada protein/ ujung C asam

amino yang terbuka dapat bereaksi dengan alkohol dalam suasana asam membentuk

senyawa protein ester. Pembentukan ester ini ditunjukkan oleh adanya endapan yang

terbentuk. Protein akan terdenaturasi atau mengendap bila berada pada titik isolistriknya/

yaitu p# dimana jumlah muatan positif sama dengan jumlah muatan negatifnya. Pada uji

denaturasi/ protein yang dilarutkan dalam buffer asetat p# &/@ menunjukkan adanya

endapan. Protein yang dilarutkan dalam #Cl maupun "a#/ keduanya tidak

menunjukkan adanya pengendapan/ namun setelah ditambahkan buffer asetat dengan

(olume berlebih/ protein pun mengendap hal ini menunjukkan bahwa protein albumin

mengendap pada titik isolistriknya/ yaitu sekitar p# &/@.

Uji koagulasi

+oagulasi merupakan proses destabilisasi muatan partikel koloid/ suspended solid

halus dengan penambahan koagulan disertai dengan pengadukan cepat untuk

mendispersikan bahan kimia secara merata. *alam suatu suspensi/ koloid tidak

mengendap 3bersifat stabil5 dan terpelihara dalam keadaan terdispersi/ karena mempunyai

gaya elektrostatis yang diperolehnya dari ionisasi bagian permukaan serta adsorpsi ion6

ion dari larutan sekitar. Pada dasarnya koloid terbagi dua/ yakni koloid hidrofilik yang

bersifat mudah larut dalam air 3 soluble5 dan koloid hidrofobik yang bersifat sukar larut

dalam air 3insoluble5.

?aktor6faktor yang mempengaruhi proses koagulasi antara lain:

1. +ualitas air meliputi gas6gas terlarut/ warna/ kekeruhan/ rasa/ bau/ dan kesadahanK


22/28

$. Eumlah dan karakteristik koloidK

%. *erajat keasaman air 3p#5K

&. Pengadukan cepat/ dan kecepatan paddleK

'.


23/28

Pada uji koagulasi/ endapan albumin yang terjadi setelah penambahan asam

asetat/ bila direaksikan dengan pereaksi millon memberikan hasil positif. #al ini

menunjukkan bahwa endapan tersebut masih bersifat sebagai protein/ hanya saja telah

terjadi perrubahan struktur tersier ataupun kwartener sehingga protein tersebut

mengendap. Perubahan struktur tesier albumin ini tidak dapat diubah kembali ke bentuk

semula/ ini bisa dilihat dari tidak larutnya endapan albumin itu dalam air.

Protein dan asam amino memberikan reaksi yang bersifat khas/ bukan hanya bagi

gugus amino dan gugus karboksil bebas/ tetapi juga bagi gugus A yang terkandung di

dalamnya. Protein dapat bereaksi dengan pereaksi6pereaksi lain seperti juga asam amino

yang menjadi penyusunnya. Protein dapat mengendap atau terdenaturasi oleh logam

berat/ garam6garam anorganik/ rusaknya struktur tersier dan kwartener/ serta karena

berada pada titik isolistriknya.

Denaturasi Protein

*enaturasi protein dapat diartikan sebagai suatu perubahan terhadap struktur

sekunder/ tersier/ dan kuarterner molekul protein tanpa terjadinya pemecahan ikatan6

ikatan ko(alen. *enaturasi terjadi karena terpecahnya ikatan hidrogen/ interaksi

hidrifobik/ ikatan garam/ dan terbentuknya lipatan molekul protein. Pada pengujian

denaturasi protein ini yaitu : % tabung rekasi yang berisi 4 m larutan albumin masing6

masing pada tabung pertama yang berisi larutan albumin ditambahkan dengan 1 m #Cl

9/1 M/ setelah ditambahkan 1 m #Cl 9/1 M pada larutan albumin/ yaitu larutan tetap

berwarna putih keruh. +emudian larutan tersebut dipanaskan/ setelah dipanaskan terjadi

reaksi yaitu pada larutan terdapat endapan berwarna putih 7etelah larutan tersebutdidinginkan lalu ditambahkan dengan Buffer asetat p# &/@ 31 M5/ dan reaksi yang terjadi

yaitu terdapat endapan putih padat. Pada hal ini terjadi proses denaturasi karena terjadi

endapan. Pada p# buffer &/' dan p# albumin &/' hal inilah yang membuat ikatan lebih

cepat/ dan membentuk endapan lebih banyak.


24/28

Pada tabung yang kedua berisi larutan albumin ditambahkan dengan "a# 9/1

M/ reaksi yang di dapat setelah penambahan "a# pada larutan albumin yaitu warnanya

tetap putih keruh. +emudian larutan tersebut dipanaskan selama/ setelah dipanaskan

terjadi reaksi yaitu pada larutan terdapat $ lapisan/ lapisan atas berwarna bening kuning

dan lapisan bawah berwarna putih susu padat. 7etelah larutan tersebut didinginkan lalu

ditambahkan dengan Buffer asetat p# &/@ 31 M5 dan reaksi yang terjadi yaitu terdapat

endapan dan gelembung. Pada larutan ini juga lebih larut saat diaduk. *ibandingkan

larutan albumin pada tabung yang pertama.

Pada tabung yang ketiga berisi larutan albumin ditambahkan dengan Buffer asetat

p# &/' 31 M5/ reaksi yang didapat setelah penambahan Buffer asetat yaitu pada larutan

albumin tetap berwarna putih keruh. +emudian pada larutan tersebut juga di panaskan

selama dan reaksi yang terjadi pada larutan terebut adalah seluruh bagian larutan terdapat

endapan putih.

ndapan yang paling banyak dihasilkan oleh #Cl/ dan yang paling sedikit pada

"a#. Buffer asetat menghasilkan endapan karena memiliki p# &/@ yang sama dengan

p# albumin yaitu &/'6&/4. setiap protein mempunyai isoelektrik yang berbeda6beda.


25/28

mengalami gangguan. *enaturasi yang umum ditemukan adalah proses presipitasi dan

koagulasi protein seperti asam amino/ protein yang larut dalam air akan membentuk ion

yang mempunyai muatan positif dan negatif. *alam suasana asam molekul protein akan

membentuk muatan positif/ sedangkan dalam suasana basa akan membentuk ion negatif .

pada titik isoelektrik protein mempunyai muatan psitif dan negatif yang sama/ sehingga

tidak bergerak kearah elektroda positif maupun negatif/ apabila ditempatkan diantara dua

elektroda tersebut.

Protein akan terdenaturasi atau mengendap bila berada pada titik isoelektriknya/

yaitu p# dimana jumlah muatan positif sama dengan jumlah muatan negatifnya.

Pemanasan yang berlangsung selama 1' menit/ pada ketiga tabung yang masing6masing

berisi albumin dan pereaksinya berguna untuk mengacaukan ikatan hidrogen dan

interaksi hidrofobik non polar/ hal ini terjadi karena suhu tinggi dapat meningkatkan

energikinetik dan menyebabkan molekul penyusun protein bergerak sangat cepat

sehingga mengacaukan ikatan molekul tersebut.

Pada uji denaturasi/ protein yang dilarutkan dalam buffer asetat p# &/@ 3 tabung %5

dan dipanaskan selama 1' menit menunjukkan adanya banyak endapan. Proteinyang

ditambahkan #Cl 9/1 M 3 tabung 15 dan dipanaskan selama 1' menit/ masih

menghasilkan endapan karena dengan penambahan #Cl 9/1 M larutan jadi memilikip# 1/

masih mendekati titik isoelektrik albumin/ sehingga albumin dapat mengendap atau

terdenaturasi. Protein yang ditambahkan "a# 9/1 M 3 tabung $5 dan dipanaskan selama

1' menit/ tidak menghasilkan endapan karena pada penambahan "a# 9/1 M/ p#

larutan jadi memiliki p# 1%/ sangat jauh dari titik isoelektrik albumin/ sehingga albumin

tidak mengendap. 7etelah ditambahkan buffer asetat p# &/@ dengan (olume berlebih pada

tabung 1 dan $/ terjadi perubahan. ndapan yang terdapat pada tabung yang 1 menjadi

lebih banyak berisi endapan/ sedangkan pada tabung $ yang semula tidak ada endapan/

dengan penambahan buffer asetat ini protein pun mengendap. Penambahan buffer asetat

dengan (olume yang berlebih akan membentuk dan merubah albumin kepada titik

isoelektriknya yaitu p# &/@ hal ini menunjukkan bahwa proteinalbumin mengendap pada

titik isoelektriknya/ yaitu sekitar p# &/@.


26/28

Perubahan kimia pada denaturasi yaitu ditandai dengan adanya pemutusan ikatan ikatan

pada protein.

2III3 Kesi%#$an

1. Protein terendapkan oleh logam berat seperti Pb dan

#g. *an yang lebih cepat bereaksi adalah larutan yang ditambahkan #g/ karena tetapan

disosiasi #gCl$ lebih besar daripada Pb7&.

$. 2lbumin yang mempunyai p# &/'6&/4 yang ditambah

larutan penyangga 3buffer5 p# &/@ akan banyak menghasilkan endapan/ karena p#

tersebut merupakan titik isolistrik protein sehingga endapan yang terbentuk merupakan

jumlah yang paling maksimal.

%. Pada uji biuret/ pada larutan albumin menunjukkan

hasil positif/ ditandai dengan terbentuknya warna ungu pada permukaan larutansetelah

ditambahkan "a# dan Cu7&.

&. Pada uji Biuret/ maksud ditambahkannya "a# dalam

larutan uji adalah untuk mengkondisikan suasana basa/ sehingga Cu dapat bereaksi

dengan larutan protein. Aeaksi menghasilkan warna (iolet pada permukaan larutan

protein yang menandakan terbentuknya senyawa kompleks Cu dengan gugus 6C dan 6"# pada

asam amino dalam protein.

'. Pada larutan albumin yang memiliki struktur lebih

komplek daripada gelatin/ makapada saat uji pengendapan dengan garam amonium sulfat/

endapan yang terbentuk lebih banyak. protein albumin mengandung tirosin sebagai salah

satu asam amino penyusunnya/ karena hasil reaksinya dengan reagent Millon positif/

ditandai endapan berwarna kuning kemerahan.

). Pada denaturasi/ yang dirusak adalah ikatan hidrogen

dan ikatan tiol/ proses denaturasi ini kadang6kadang dapat berlangsung secara re(ersible.


27/28

@. Pada koagulasi/ yang dirusak adalah ikatan peptida dan

perubahan protein irre(ersibel akibat dari pengaruh pemanasan. Eika suatu en0im

terkoagulasi/ makaen0im tersebut tidak dapat berfungsi lagi.

. ?aktor6faktor yang menyebabkan denaturasi protein/

seperti :

a. 7uhu yang tinggi.

b. Pengaruh p#.

c. Pengaruh 0at60at kimia tertentu


28/28

I83 Da9tar P#staka

?eseenden dan ?essenden. 144@. Dasar-Dasar Kimia Organik . Binarupa 2ksara.

Eakarta

#art/#/ 14% Organic !hemistr"-A #hort !ourse/ edisi ke '/ #oughton Miffin Company/

Boston

Poedjiadi/ 2nna dan 7uprianti/

Laporan Finishing Praktikum Biokimia 3

Documents

Transcript of Laporan Finishing Praktikum Biokimia 3