Laboratory Chemicals-FUJIFILM Wako Chemicals U.S.A ......1 ˘ ˘ 1 * ˘ *˝ 1 ˘˜˘ 1 + ˝ + ˙ 9˜...
Transcript of Laboratory Chemicals-FUJIFILM Wako Chemicals U.S.A ......1 ˘ ˘ 1 * ˘ *˝ 1 ˘˜˘ 1 + ˝ + ˙ 9˜...
�������� �����
� �����
���� �� �� ����� ���� ���������
��� ������� ��������
�� ������� � ���� ���� �������� ���
������������������������� ������� ���� ��� �� ������� ��� ��������� ��������� �� �
��������� �� ������������ ������������ ��� � ��������� �� �������� �����
���� ������ ��������� ������ ���������� ��� ��� ���! �� ����� ������
�� ������ ��� ���� ��� ������ ������� �� ���� ����� ��� �� ������ �����
������ ������ ����� ��� ������ ���� ����� ����� �������� ���� �����!
"# $�����%& ������� '��( $�������� )�� ������� �������� ��� ���(
��������� �������� ��� � *�������� �������� �� ������������ ������� �� � ����
����� ���������� ��� � ���� ����! +� ��� ������ ��� ������ ������
�������� �� ������������ ������� (��� ���� ���������� �� ���� � ������������
������� ���� ������� ������ ������� �������� ����� ������������ ������� ���
������� �� �������� ����� �� (���� �������� ���� ������������ ���� (���
������������������ "#� �� ��� ������ �� ������������ ������� ��� �������
��,��!
������� �� ���� ��������� �� �������� �����!
� %�� ��� ��� ������ ��� �� � ������ �������� (����� ������������� ������
���!
� %�� ��� ��� ������ ��� ������ ������ �������� �� ��� (����� - ����!
��� ������� ����� ��� ���� ��� � ��!"������
$��������� ����� #���� ����
������� $����� .���� - �/ � 0 ��� ����� ��� �� #���� �� �12�
3������ .���� 02��45 �/
� 1 �������
$�����������
6�� �����
������������
#���� �� 1�02������ �������
������� .������
�������� 022��
05 �/
� 0 ������
$�����������
6�� �����
������������
#���� �� 1�02������ �������
�������� ��� ��� �������� ���� �� ��� ���#���� ��� ������� $����� .���� �� �12�! #���� ��� 3������ .����
02�� ��� ��� ������� .������ �������� 022�� �� 1�02� ����� �������!
%�� ��� �� ������ ���� ��� ���������� ���� ���� ��� ��������� %�� ����������
���� �� ������� �� ��� ������!
��������� ������� ������� ����#���� $
0� %.# �� ����������
1� '������������������ ���� ������� ������ ������� �������� ���
'������������������ ������� ������� ��������
%& �"!��� $
0� &�������������
1� ������ �����
-� %������� ���������
� �����
'� (������� ��� �� � � �����))���
)� ��*� ��+�� �� � � ,����),��� �- ������.�
,� (��� �������
�� /������ ���
0� (��� ������1��� ��*� ���) �2���
�� ������1��� ��*� ��) �2�
��� 3����1������� � ���� �4�5������6 (�7� ��� 11 � ���86 � � � � 4���'��
�- ������.�
�� 9� :� � :� ���� �5���� �.�� 1 ���� ������1��� ��*� ��� � �
����*�� 1 � ��� ������ � 1 �+ �� � ���� � �� �+ �� �����
���� 9� �� *��� � �1���� ���� ��)�2���� ��������1� ��*� �� ���
1 �� :��� ��*�� � � ����*�� 1 � �� ���
Manufacturer Code No.
BM EQUIPMENT Co., LTD BM-15 Sumitomo Bakelite Co., Ltd. 631-27511 Eppendorf 0030108116 Eppendorf 0030120086 Thermo Fisher Scientific 90410
���� � �� ��� ��� � ������������ ���
��������� �� ������������ �� ������������ ����/���� ����� ����� ����6 ����� �����6 �� ����� ���� ����� �
��1���� � ������ ;� ��!�� � :���6 :���� ������ :��� ��"�� ��
�"������� ��� � ���� ������1��� ��*�6 ������� ���6 �� �� 5�6 ��� *�
�� � 1 ��� ���� � ��� �������� 1 ��� �������� ��
� ����� � ���������
Washing Suspending Exosome Capture Beads 300
EVs-binding beads (300 L)
Dispense 100 into each of two new 1.5 mL microtubes
Exosome Capture Beads
100 of ccell culture supernatant or body fluid 10,000 g supernatant
EVs Isolation with Exosome Capture Beads (1 hour, room temperature)
Flow Cytometric analysis of Exosomes
100 L EVs-binding beads
Fluorescence labeled Anti-Exosome surface antigen antibody
Fluorescence labeled Isotype control antibody
Staining EVs with Fluorescence labeled antibody (1 hour, room temperature)
Washing Suspending Exosome Capture Beads 300
1 Exosome Binding Enhancer (100 )
� �����
������������ ������� �� �� �����
���� �� ��� ������ �� ����� �� ���� ���� ������� �� ��� ��� ����
������� �������� �� ���� ������ ����� � ����� ��� �� �� ����
��� ��� ��� ����� ���� ������ ��� ����� ����� ��� �� ��� ������
��� ������� �� ������� �� �������� �� ��� ������� ��� ���� ��
����� ��� ��
�� ��� ���� �� ���� ������� ��� ��
�� ������ ����� ���� � �������� ��������!�
�! "����� ����� �� �������� ������� ��������� ������ � ����
����� �� ����� ���� �������� ������������� #������� �������� ���
���� ������ ����� ��� ������������� #�������������� $%&�
������������� #�������������� $%& �� ������ �� ���������������
��� ���� �� ' �� ��(�((( � � ��� �) ������ �� �� �� ��������
�#��������
!� *��#��� ��� ���� ������� ���� �
+� �������� ��� ���� ������� ���� �� +(( � � ��� , ����� �� -� ��
�� �#� ����� �� �������
-� ������� ��� �������� ��� ��� +� ��� � �. �����
,� �������� -� �� ��!(( � � ��� !( ����� �� -� �� �� �#� ��� ����
�������
/� ������� ��� �������� ��� ��� ,� ��� � �. �����
0� �������� /� �� �(�((( � � ��� +( ����� �� -� �� �� �#� ��� �����
�1��
)� ������� ��� �������� ��� ��� 0� ��� � �. �����+�� �������� �
�����������
�+ �(�((( � � �������� �� �� �������� ������� � (�!� ������ ��
�� �#� ��� ����� �1� �� �������
�� ��� ���� �� ����� ��� ���� � �����
�� �������� ��� �� �� �� ��!((� � ��� !( ����� �� -� �� �� �#� ���
���� �������
!� ������� ��� �������� ��� ��� �� ��� � �. �����
+� �������� !� �� �(�((( � � ��� +( ����� �� -� �� �� �#� ��� �����
�1��
-� ������� ��� �������� ��� ��� +� ��� � �. ������ �������� �
�����������
�� ��� ���� �� ���� �����
���� ������� � ��� ���� ��� � ������� ��� ��������� ���.��
�1� �� ����� � ����� %����� ��� ���� ��� � �� ����� �����
������� � ������ � � �� �� � ��#���� *���� ��� ������� �� ����� ���
�(�(((� � ���� ��� � �������� ��� ���� ��� � �� �� �������
� ������ � ��� � 2 �� �(�((( � � ���� ��� � �������� ���
���������� "����� ����� 1�#���!( �3� �� ��� ��� ' �((4� ��� 5��
1&!(-�� �� ,( 2 �� �%&�
�� �������� ��� �� �� �� ��!((� � ��� !( ����� �� -� �� �� �#� ���
���� �������
!� ������� ��� �������� ��� ��� �� ��� � �. �����
+� �������� !� �� �(�((( � � ��� +( ����� �� -� �� �� �#� ��� �����
�1��
-� ������� ��� �������� ��� ��� +� ��� � �. ������ �������� �
���� ����� �����������
,� ��� �6 2 �� �%& �� 1�#���!( ��((4��
/� ��� ��� � 2 �� ������� � � ���� ����� ����������� ���
��� -� �� 1�#���!( ��((4� ��� ��� ,� �� ���
� �����
�� �������� ��� ��������� ������ ��� ���� �� �� ��� ����� �� �
��������� ��������� �� ��� ��������� � ���������� �������
!� "�� �� �# � $%& �� ��� ��������� ������ ��� ���� �� '��� ��� ����
��(�� ��������
)� �������� �� ���
��� "�� �� �# � $%& �� ��� ��������� ������ ��� ���� )� '��� ��� ����
��(�� ��������
��� �������� �� ���
��� "�� �� �# � $%& �� ��� ��������� ������ ��� ���� ��� '��� ���
���� ��(�� ��������
�*� �������� ��� ��������� ������ ��� ���� ��� ���� ��� ����� �
������ +����� ���� � �#�� ��������� ������� ������ �
�!��"����� �� #���� ������� �� �#��� �� ���
$ ������ �� �� � ����������� %�� ����
$��� �� ��� ������� �� ������� �,���������� �������� ��� ������� '���
-,����� ������ %����� .���/ ��� �������� ����� �� � ��������� ���� �
��0 �# ������������� �+� �� ��� �� ��� +���� ��������� &����1� ��
��(����/ ������ �������� ��� ����� � -,����� ������ %����/ ���
������ �����/ ��� ����� � -,����� %������ -������� ������/ ���
��� ����� � &� �'��������� ��� ��� '������ �� ���������� '���
��� ����'��� ��+�� ��
� �����
����� �� ������ � ������ ����
�� ��� ��� � � � ����� ������ ����� �� ��� � � ���� ���� � ��� �
�� � ���������� ���� �� ��� � !���� ������ "��!��# �� ���
��$��� !����� � %���� ������� %�� ���� ������ � ��� �� �
���������� ���� ��� ����� � ����� ������ ����� �� ���� ���� � ���#
�� ��� �� � !���� ������� �� ���������
&� ��� '��� � �� ��������� � ��� ��� � ��������������
�����
'� (������ %���� ) ����� �� �� ������� �� �� ���� ����� !����
������ " *� ���� �������� ��������� � ��� � ������ �� �� ��
����!�� ����� ����
�� +� ����� '�� � %���� ) ����� �� �� ��� ���� '� � ��� ����
�������������� ���� � ���� &��
�� ,���� ��� ��� � �������������� ���� ��� ���� �� �� � ���� �� ����
���# �� ���� �� �� �� � ��� � ������ �� �� �� � ������� -��!� ���
������ � �� ���� ��� � ��� � � ������ �� �� �� ������ � ���
.� ��� '��� � �� ��������� � ��� ��� � �������������� ����
��� ���� .� �� !���� �� �� � ��������
/� (��� ��� ��� ��� � �������������� ���� ��� ���� /�# �� ���� �� ��
�� � ��� � ������ �� �� �� � ������� -��!� ��� ������ � �� ����
��� � ��� � � ������ �� �� �� ������ � ���
0� ��� ���� � ����� � � ���������� � ������������
������ � ��� ��� � �������������� ���� ��� ���� /� �� !���� ��
�� � ��������
1� ��� �� � %���� ������� %�� ���� ������ � ��� ���� �������2
������� ���� ��� ���� 0� �� !���� �� �� � ��������
��� 3� �� ��� ��� � �������������� ���� ��� ���� 1� � �� ������ ����
�� � ��� ���� !������� ��� ����� �!�� &� ���������
�� ���� ���� ����� �� ���� �� ��� ���� ���# ��� ������ ����� � ���
���� ����� ����� �� ��� � ��� ���� 4 ���� ����� �� � ��� ���
� ������ �� ��� ����������� ������� ������� %,� �� ���
%���� ) ����� �� ���
-��������� ���� ����� $ "(' 5���� �# 67�# )�� $ .&'2��./�
��� (��� ��� ��� ��� � �������������� ���� ��� ���� ���# �� ���� �� ��
�� � ��� � ������ �� �� �� � ������� -��!� ��� ������ � �� ����
��� � ��� � � ������ �� �� �� ������ � ���
�&� ��� '��� � �� ��������� �� !���� �� �� ' ��������
�'� (��� ��� ��� ��� � �������������� ���� ��� ���� �&�# �� ���� �� ��
�� � ��� � ������ �� �� �� � ������� -��!� ��� ������ � �� ����
��� � ��� � � ������ �� �� �� ������ � ���
��� -��� � ����� �&�2�'� � ���
��� ��� '��� � �� ��������� �� !���� �� �� ' ��������
� ����������� ����
� �����
��������� � ����� ������ � ���� � �������� �� ���� ���
1.5 mL microcentrifuge tube
1
Spin-down
Magnetic stand, place for 1min.
Vortex
Magnetic stand, place for 1min.
Remove sup.
Remove sup.
Spin-down
Vortex
Incubate at R.T. for 1h ( vortexing every 20 min)
Spin-down
Magnetic stand, place for 1min.
Remove sup.
Magnetic stand, place for 1min.
Remove sup.
Vortex
Spin-down
EVs- binding beads
+ 300 L WB (+Enhancer ) + 30 L Exosome Capture Beads
+ 300 L WB (+Enhancer)
+ 300 L WB (+Enhancer)
+ 300 L WB (+Enhancer)
+ 100 L 10,000 sup. or buffer- exchanged plasma
+ 1 L Exosome Binding Enhancer (100 )
�� ������������� � ����� ������ � ���� �
���� �� ��� ������� �� ��������� ������ � ���� �� !���
� ���������� �� �� ������" �� ���������� �� �� ��� ������� �����
������ ������" �� � ���������� �� �� ����"�� ������ ������"�#
$���� ��� ������� �� � ��� % �������� ���� �#& �' ��������������
��� �� ��� � ��� ���� ������� #���� ��� ������� �� � � �� ��������
� ����� ������ � ���� � !� �� �� � ��� % ��������� �������
��� ����� �� �(��� �� ����������� � ��� ��������� �� ���� �� ��
���� �������#
�� )������� ����' �� ����������� � ��� ���� ��� �� �!� ��! �#& �'
�������������� �����&#
�& ���� ��� ������� �� � � �� �������� � ����� ������
� ���� � !� �� �� � ��� % ��������� ������� ��� ����� ��
�(��� �� ����������� � ��� �������� �� ��� ������� �� �#
����� � * !��� ��� ������� % !� ��������� �� + ���������
�������� ����' �� ����������� � ��� ��������� ���� ���
�� ��� ��! �#& �' �������������� ����#�
%� ,�� � ���������� �� �� ��� ������� ����� ������ ��������� ��
� ���������� �� �� ����"�� ������ ��������� ���� ��� ��� �� �#& �'
�������������� ���� ���� ���� �� �� ����� �� ��� & ���������+#
�+ -�����.���� �� ������" ������������ �� �������" �� �����
���� ������� ��"# /� ��� ����� ����������� �� ��� �����������
���� ��� ��� ���� �� �������� !��� ��� ��������0�
���������� ����� ��� ���� �� ������" ��� ��� � � ��+ �� ��#
� �����
�� ����� �� �� � �������������� ���� ��� ���� �� �� ��� �� ��������
��� �� ��� ��� ��������� �� ����� ����� �� ���������
�� �� � ���� ���� �� ���! �� �� ���� ��" �� ����� ����! �� ��
���� ���� ����! �� ��� �� ��� �� � #����� ����! ��� ��� ��
�� ������ �� �� ����������� ���!��� ������� $%� ��! ��
$���� � &������ '��!��
(��� ��!�! ���� ���� ) *+� ,������" -./" &�!� ) 0��1��0�
2� +��� !��� �� �� � �������������� ���� ��� ���� ��" ��! ��� �����
�� �� �� ������� ����! ��� ������ (� ��� �� ����������� �����
���������� �� ������� ���!� ��! ������������
�� /!! ����� �� �� ��������� ��! ������ �� ��� � �����!���
0� +��� !��� �� �� � �������������� ���� ��� ���� ��" ��! ��� �����
�� �� �� ������� ����! ��� ������ (� ��� �� ����������� �����
���������� �� ������� ���!� ��! ������������
�� (����� ����� ��10� ������
3� /!! ����� �� �� ��������� ��! ������ �� ��� � �����!���3�
�3 4� ���������� ���� � �� $���� � &������ '��!� ��� ��
�����! �� �� ���� 3� �����!��� �� �� ���� ���� ���� ���!�
������ �!5��� �� ����������� � ���� �� �� ����������
6� /����7� �� $���� � &������ '��!� �� ���� ���� �����6" �" �
�6 �� �����7��� �� $���� � &������ '��!� �� ���� ���� ����"
�� ���� �� #��� �����" ���� �� �������� �� ��� $���� �
&������ '��!� ��� ��� ���������! ��� �� ���� !�����
�� ����! �� ������! ��������! ���� 8#+� ��! ��!� ��������! ����
8++�" ��! ��� �� ���� �� ������������ ��������� �� �� $���� �
&������ '��!� ��������! ����!� �� �����
Gating no aggregation fraction
Fluorescence IntensityForward Scattered (SS)
Sid
e S
catter
ed (S
S)
Cou
nt
���� � ������ �� �������� � ���������� ����� ����� ��� �������
�� #��������� �� $���� � &������ '��!� ��� ���� �������� ������
�� ���� ���� ����� �������� �� !������� �� ����������� ��
$���� � &������ '��!�� 8#������ � � (���! '���� �������1
���� 4��� 4���" ��� &��� +������� +��� &��" &�!� ) 02�1��20
�����
� ������ ����� �� ����� �"��� ���!� ����!� �� ���1���������!
8����!� ���������
� �����
� ������� �� ����������� ����� �������������� ������ ���
1.5 mL microcentrifuge tube
+ Fluorescence labeled antibodies (e.g. anti CD63 -PE)
Vortex
Spin-down
Magnetic stand, place for 1min.
Remove sup.
Magnetic stand, place for 1min.
Remove sup.
Vortex
Spin-down 1
Flow Cytometry Analysis
+ 100 L EVs-binding beads
+ 300 L WB (+Enhancer)
+ 300 L WB (+Enhancer)
Incubate at R.T. for 1h ( vortexing every 20 min)
������ ��������
���� ��� ������ ��� �����
������� !"��#���$" % ����� &������ '� �(
� ���
��!���� � � ���
������� ��( �#���$" % ����� %)&(* '�
+*�� "���� &�, �-./�� ���
��!� 0��� "( ! ����� +�1� �� ��/ � ���
�� �!00�� "��� (�� � ���
������
��� 2�3 4��5�� $�3 .��6 .�3 "���� 4�3 ���5�1� $�3 &��� ��3
����� '�3 (���� 4� �� 7��� 8�99* ����� �������1��� ��5��
��� 5� ������� �� 5��5�� #������� � �������� ���������:: (�� 8�# � ; !!�!0
�������� �����
� �����
���� �� �� ������������
������
�� ������� � ���� ���� �������� ���
������
���������������������������������
����������������������� ������������
��������������������������� ����
���� ��������������������������
�������
�������������������������������
���������������������������������
�� �!"�#��������������������������
���$�%���������$�%�������������
��������������������������������
������������������������������
�� ��
� ��$�%�������������
� �����������&#�����������������
�������
� ������������������������������
���������������
�������
����� �������� �����
����� � � � � � �
������ ������� ����� � ����� ����� �
������� ����������� ! ���"� ����� ���� "�����
������ �������
��������������! ����� ����� ���� "�����
�������������
������ ������� ��������"�������!"����������
�����������#�$ ������ ������� �������������������"
��������!"������������������������
�������'(#�����
�������������
� ��
�# $�������%��
"# ���������������������)����&�����
#��
� ��
�# ��������
"# *#+�� ���
�# �����
# �� ��,����� % "&�'�!!&��
!# "�-���(���� % )"�'�!)*�������%��
� ����� �
�� ��������
�� �����
�� ��� ������������
�� �� ������
��� ������� ������������������������ �� � ���� ��
��������
�� ��� ��������������������������
�������� ������ ���� ��� �������
��������������������������
� ��
BM-15631-27511
Eppendorf 0030108116 Eppendorf 0030120086 Thermo Fisher Scientific 90410
�� ���������� ���������
���������
�������������������
������������������������������
����� ��������������������������
�������������������������������
�����������������
������
Exosome Capture Beads 300
20 1
300 L
1.5 mL 100
Exosome Capture Beads
100 10,000 g
Exosome Capture Beads 20 1
100 L
Exosome Capture Beads
1 Exosome Binding Enhancer (100 )
� ����� �
�� ��
�� �������
�������������������������������
��������������������������������
���������������� ������������
����������������������������
�������������������
���������
�� ��������������������
�� �����������������������������
����� ���������������������
����������������� � ���������������
������� ������������������
���
�� ����������
�� ��������� � ���� ����������������
�� �������� �������
�� ����� � �����������������������
�� �������� �������
�� ������ � ��������������������������
����
�� �������� ������������������� � � ������
���
�� ������������������������������
������ ���������������������
����������������
�� ���������� � �����������������������
�� �������� �������
�� ������ � ��������������������������
����
�� �������� ������������������ � ���������
�������������
������������������� ������������
������� ������� �� �������� ���������������
��������������������������� ����
�!!���������"#� ������ � ������������
������ � �!� ������ � �����������������
������� ��"#$���#%������� ���&��� � ' "��������
�� �!����������
�� ���������� � �����������������������
�� �������� �������
�� ������ � ��������������������������
����
�� �������� ����������������� � ���������
�������
�� �( �!��������"#$���#%������&������
�� � �!�������� � � ���������������� ���
"#$���#%������&���������
�� ���"#$���#%������&�� �������� �����������
����������������
� ����� �
�� ���������#��� ������������� ������������
�����
�� �����������
��� ���������#��� ������������� ������������
�����
��� �����������
��� ���������#��� ������������� ������������
�����
��� ������� � ������ � ����������������
�������
����������������
�� ��������
����������� � ����� �� �����������$������
����������������� ������� �����
������������������������ �������
���������������� � ����� �� �������������
�������������� ������! ��" �#���������������
����� ��������� ���������������
���$�����
� ����� �
� � ���������������������
�� �� ������� ��� ������ � ������������ ��� ������
����������������� ����� � � �������
������ �� �� � � � �����������������������
�������� �����������
�� �� ��� ������ ����������������� �����
��
�� ������ ������ ������������������������
��������������������
�� ������������ ����������� ������ ���������
� �������������� ��� ������ �������
�� ��� ��� ������ ���� ����������������
��������������������������� ����
������������������
�� ��� ��� ������ ���� ������������ ������
���������������
� ��� ��� ������ ��������������������
��������������� ���������������
�������
!� �� ��������� ���� ������ �� ��� � � �����
��� ��� ��������� ���������������
�
"� !�� ��������� ���� ���������� �� �� � � � ���
������������������������
��� "�� ��������� ������� �����������
���������������������� � "�� ��� ����
�� ���� �������������������������
�� ����������������� �����������
������������ ������� ���������
������ ������������������������
����
�� ������� #$%�&'�!"���#��(��
���)��� ��
��� ���� ��� ������ ��������������������
�������������������������������
������
��� ����������������� ��� ������ ������� �
�����������
��� ���� ��� ������ ��������������������
��������������� ���������������
�������
��� ������������� �������
��� �������������������� ���������������
������������
� ����� �
��������������� ���
1.5 mL
1
1
1
1 20 40 1
1
1
+ 300 L WB (+Enhancer ) + 30 L Exosome Capture Beads
+ 300 L WB (+Enhancer)
+ 300 L WB (+Enhancer)
+ 300 L WB (+Enhancer)
+ 100 L 10,000 g
+ 1 L Exosome Binding Enhancer (100 )
�� ��������
�������������������������������
���$���#���������������%�$$�&���
������������������ ������ ����� �
���������������#����� �����������
���� ����'��� ������������������
� ���� ������������ �������!����
�
�� ������� ��� ������ ���� �����������
� ������"#����
�� ������������ ����������� �'��
���$���� ������������ �������
������ �����������'�������!�
��� �������������� ����������
�������� ������ ���������"#�����
�� ���������$���#���������������%�$
$�&��������������������������
�� ��������%�������������������
����������������� �����������
������ � ��� ��������������������
�
� ����� �
�� ��� ��� ��������������� �������������
��������������������� ��� ��� ���
��������� ����� ����������������
����
�� ���������������� � ��������
� �������� ������������������
��������������������������
���������� ���������� �������
���������
� ��� ��� ��������������������������
�������������������������������
������
�� ������������������ ����� �������
�� ��� ��� ��������������������������
�������������������������������
������
�� ����������� �������
�� ������������������ ����� ���������
�� ���������� �!���������� ����
����������������� ��
�� ������ �!������������ �� ���
�� ������ �!���������������� ����
���������������������"����������
������������#��$���#�������
���������������� ��
(FS)
(SS
)
� � ������������������������
�� � ��%�&������ ��������������
�!������������������ ��� �� �! "�##��
$��%&#%�'�' ('&# ( )'� *+#, -'�� �#��+�'� ��� -� �������
�������"��
��� '�����#��$����� �'�����
���� ��
� ����� �
��������������� ���
1.5 mL
+ ( : CD63-PE)
1 20 40 1
1
1
1
+ 100 L
+ 300 L WB (+Enhancer)
+ 300 L WB (+Enhancer)
������
������ � � � �
������� �� ���������(�))�*
+�)%�,-�����
���
������� ���
���������� ���������(�))�*��������
����� � � ����
����
������� ��������� ! !��" ��
������� ��.����� ��
������
��#�! $�% &�'(! � ��% �!�) ��% �!*���#� &�% �!'(!+� ��% �,�-�#� ��%
����'� .�% �� �,��� &� �/ 0�/�*�,� 1�22� /�3�" �44!/!�*�+�'� ,��(�
4�� �(� !'�"��!�/ �4 (! ("* ���!4!� �5���6�""�"�� 3�'!6"�'�77 �6! 1�� � 8 ��
�9�.��