PROCESO DE CONSERVACION Y CONTROL DE IDENTIDAD, CALIDAD Y ELABORACION DE EXTRACTO DE LA DROGA VEGETAL Juglans neotropica Diels. PROCESS OF CONSERVATION OF THE SAMPLE AND CONTROL OF IDENTITY, QUALITY AND PREPARATION OF SUMMARY OF PLANT DRUG Juglans neotropica Diels. Jos A. CASTILLO1, Mara ECHAIZ2, Richard GUERRA3, Melissa C. MAYHUIRE4 Laboratorio de farmacognosia, Facultad de Farmacia y Bioqumica. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. RESUMEN El estudio presenta el proceso de conservacin de la droga, desdesu identificacin hasta suposteriorreduccindetamao,yelcontrolycalidaddeladrogavegetalJuglans neotropicaDiels.Esimportantelaidentificacindeladrogayaqueevitalasconfusiones, adulteraciones y sustituciones; as como el proceso de lavado y secado que se realiza con sumocuidadoparaevitareldeteriorodeladroga.Serealizalareduccindeltamaode partculadeladrogaporquelasdrogaspreviamentereducidasposeenmembranas celularesparcialmentedestruidasquefacilitanladisolucindelosconstituyentes celulares en el lquido extractor. Es por ello que se realiza la molienda de las hojas con un morterodelaboratoriohastaunpolvonotanfinoysetamizaenunamallaN30(500 m)paraevitarlacompactacindelospolvosydificultenelpasodelsolvente.Todala droga reducida se almacen en un papel kraft por unas horas para su posterior extraccin. Elcontroldeidentidadycalidadserealizaparaevitarposiblesconfusioneseimpurezas, realizandoasensayosbotnicoscomoelorganolpticoymtodosfsicoqumicos cualitativos. Para este fin se prepar un extracto acuoso al 10% por filtracin y un extracto alcohlicode96elcualsedejmacerarpor7das.Setrabajconelextractoacuosoal 10%determinandosupH,pesoespecfico,ndicederefraccin,gradosBrivyelsreening farmacognstico que es la marcha fitoqumica.Palabrasclave: identificacin, molienda, extraccin, sreening farmacognstico deJuglans neotropica. ABSTRACT The paper presents the process of preservation of the drug, from discovery to further size reduction, and quality control and herbal drug Juglans neotropica Diels. It is important to identifythedrugasitavoidsconfusion,adulterationsandsubstitutions;andtheprocess ofwashinganddryingisdonecarefullytoavoiddeteriorationofthedrug.Particlesize reductionofthedrugisperformedbecausethedrugshavepreviouslyreducedpartially destroyedcellmembranesthatfacilitatethedissolutionofcellularconstituentsinthe liquidextractor.Thatiswhythegrindingoftheleavesisperformedwithalaboratory mortar untilalessfine powderandsievedthroughameshNo.30(500microns)toavoid compactionofthepowdersandhinderthepassageofsolvent.Allreduceddrugwas stored in a Kraft paper for a few hours for subsequent extraction. The identity and quality controlisperformedtoavoidpossibleconfusionandimpurities,aswellasconducting botanicalorganoleptic testsandqualitative physicochemicalmethods.Forthispurposea 10%aqueousextractbyfiltrationandanalcoholicextractof96whichwasallowedto macerate for 7 days was prepared. Worked with 10% aqueous extract by determining the pH,specificgravity,refractiveindex,andthedegreeBrivpharmacognosticsreening phytochemical that is underway. Keywords: identification, milling,mining, sreening pharmacognostic, Juglans neotropica. INTRODUCCION Laproduccindemedicamentosdeorigenvegetalsonmuyimportantesparala recuperacin de la salud, motivo por lo cual es menester el control de identidad y calidad de la droga1.El control de identidad implica el reconocimiento botnico, as como tambin los mtodos fisicoqumicos;loscuales,nosvanapermitircomprobarlaidentidaddeladroga trabajada. Losensayosbotnicoscomprendencaractersticasorganolpticasqueesunestudio preliminardeladroga,basadoenlossentidos,caractersticasmacroscpicas, microscpicasymorfolgicasbasadoenlaidentificacindelasestructurasdelaplanta, examinandoassuscaractersticasmsresaltantes.Ensayosgeneralesfisicoqumicosque comprendereaccionesdecoloracinbasadoenlaidentificacindeconstituyentes qumicosdeladroga,fluorescenciatilparaaquellassustanciasqueemitenluzauna determinadalongituddeonda,producidafluorescenciaymicrosublimaciontilpara aquellas drogas fcilmente subliminales.1 Una vez realizada el control de identidad se proceder a realizar un control de calidad de la droga, esto se va a basar principalmente en las tcnicas obtenidas de las farmacopeas. Cabe mencionar que los mtodos generales de extraccinimplica una separacin de las fracciones de la droga, utilizando solventes adecuados.Entrelosensayosutilizadosparaelcontroldecalidadsonelporcentaje (%)dehumedad quedeterminalacantidad deaguaqueestcontenidoenelmaterialvegetal,elementos extraosquesonaquelloselementosquenoestnincluidosennuestramuestra,poder rotatorioenestapruebafisicoqumicaseutilizaaceitemineralendicederefraccin importante para la determinacin de la esencia y pureza de la droga. Laextraccindedrogasimplicalaseparacindelasfraccionesmedicinalesactivasde tejidosvegetalesoanimalesdeconstituyentesqumicosoinertesutilizandosolventes selectivosenprocedimientosdeextraccinestndar.Losmtodosgeneralesde extraccinson:infusin,digestin,percolacinymaceracin.LaUSPconsiderala maceracinypercolacincomolosprocesosdemayorimportancia.Losparmetros fundamentalesqueinfluyenenlacalidaddeunextractoson:ladrogautilizadacomo materiaprima,elsolventeutilizadoparalaextraccinyelmtododeextraccindel proceso.LaplantaconlaquevamosatrabajareselNogal(Juglansneotropica)estaplantase encuentraenvallesdetierrasprofundas,arenosasydeclimatempladoylluvioso2. Sushojasycortezacontienengrancantidaddetaninosglicosycatequicos,loquehace quetenganmarcadaaccinastringente,lajuglonaademsleconfiereenrgicaaccin antisptica, antiinflamatoria y queratinizante3.Elpresenteestudiotienecomoobjetivoreconocerlaimportanciadelprocesode conservacin de drogas, As como comprobar el control de identidad y calidad de la droga, laelaboracindelextractoacuosoyalcohlicoydecidirquemtododeextraccinesel ms adecuado para el tipo de droga que se va a extraer. MATERIALES Y METODOS: MATERIALES Y EQUIPOS: Droga colectada: Nogal (Juglans neotropica) Estufa Mortero y pilnTamiz N30 Papel kraft Droga pulverizada MicroscopioHornillas electrnicasEstufasMateriales de vidrio Tubos de ensayo Bagueta BeakerAlcohol de 96 Reactivos de precipitacin Molish Antrona Fehling A y B FeCl3 Gelatina Shinoda Dragendorff Mayer Bertrand Sonnenschein Generador de espuma METODOLOGIA: 1.- UBICACIN DE LA ESPECIE PARA EL ESTUDIO FARMACOGNOSTICO El lugar de extraccin de la muestra problema se realiz en el jardn Botnico de la facultad de Farmacia y Bioqumica. 2.- RECOLECCIN DE ACUERDO A FACTORESCLIMTICOS, EDFICOS Y TOPOGRFICOS. El periodo ptimo para la recoleccin de los frutos,a travs de su rangode distribucin natural, est entre los meses de agosto y octubre, cuando los frutos maduros iniciansu cada natural, estos se recolectan directamente del suelo.Semencionatambinqueelnogalrequiereclimaspromediode27Cconextremasen veranode41a46Cytemperaturasmnimaseninviernode10Ca1C.Las precipitacionesdebenserentre760a2010mmanuales,consuelosfrancos,arcillos arenosos bien drenados, con pH entre 6.5 a 7.54. 2.1 CENTRO DE ORIGEN Lima, Per. 2.2 FECHA DE RECOLECCION El mircoles 2 de abril del 2014 2.3 OBSERVACIONES: Lashojas:Soncompuestas,alternadas;de25a40cmdelargo,sinestipulas,con9a17 foliolos de 6 a 10 cm de largo y 2,5 a 4 cm de ancho. Elfruto:Esunanuezdetexturadura,lignificadoyarrugado.Lasemillaeslaparte comestible. Madera: Es de color castao claro. 3.- ESTUDIOS BOTNICOS3.1 CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS: rbolmonoicoquealcanzaalturasde20a30ydimetros de 40a60cm.Copairregular de 6 m de ancho y follaje ferruginoso. La corteza es de color gris oscuro, spero, agrietada longitudinalmente.

Lashojas:Soncompuestas,alternadas,pinnadas,de25a40cm.Delargo,sinestipulas, con9a17foliolosde6a10cmdelargoy2,5a4cmdeancho,bordeaserrado,pice acuminado, haz verde oscuro glabro y envs verde pubescente.

Imagen 1: Juglans neotropica El fruto es una drupa de color pardo a negro, con pednculo corto, epicarpio y mesocarpio soncarnososyelendocarpioesleosoyabreenformaloculicidacuandogermina; contiene una sola semilla.Las floresmasculinas estn dispuestas en amentos pndulos, con estambres numerosos, aparecenenlasramasdelaoanterior;lasfloresfemeninas,deovarionferoconun ovulo, se encuentran en los extremos de las ramas nuevas en grupos de cuatro a nueve. 4.- ESTUDIO FARMACOGNOSTICO 4.1 ELECCION Y PREPARACION DE LA DROGA La planta con la cual se va a trabajar es el Nogal (Juglans neotropica) Luego se procedi a lavar la muestra, para eliminar as cualquier sustancia extraa o ajena a la nuestra. Despus se seleccion las hojas que estaban en un buen estado, descartando as las dems que no cumplan con este requisito. Elsiguientepasofuelaintroduccindelamuestraalaestufaparapoderconseguirsu secado y de esta manera trabajar fcilmente la droga.Imagen 2: Hojas de Juglans neotropica Y por ltimo se realiz la molienda en un mortero de laboratorio. Imagen 3: Hojassecas de Juglans neotropica Imagen 4: Molienda de las hojas secas deJuglans neotropica A la muestra totalmente seca y se tamiz en una malla N30. DIAGRAMA DE FLUJO: TAMIZADO MOLIENDA SECADO SELECCIN LAVADO Imagen 5: Tamizado de las hojas molidas de Juglans neotropica 8.- ELABORACION DEL EXTRACTO ACUOSO Y EL EXTRACTO ALCOHLICO. Se prepar el extracto acuoso al 10%, para ello se pes 4 g de la droga y lo mezclamos con 40 ml de agua. De igual se pes 8g de droga y se mezcl con 80 ml de alcohol de 96 y se ladejmacerandoporvariosdas.Sefiltrelextractoacuosoysedeterminsus caractersticasorganolpticas,suPHconpapelindicador,elpesoespecficopormtododel picnmetro, ndice de refraccin, grados Brix que nos va a permitir saber qu cantidad degramosdeazcarcontieneladrogayelSreeningfarmacognstico(marcha fitoquimica)paraladeteccinpreliminardelosdiferentesconstituyentesqumicos, basados en la extraccin de estos con solventes y en la prueba de coloracin. 9.- METODO FISICOQUIMICO Serealizensayosgeneralesfisicoqumicosparaidentificarlosconstituyesqumicoso metabolitos como carbohidratos, taninos, compuestos fenlicos, flavonoides, antocianina, alcaloides,saponinas,lactonas,glucsidos,etccaractersticosdeladrogaporreacciones de coloracin. Este ensayo se realiz con el extracto acuoso filtrado RESULTADOS. MEDICION DEL PESODE LA DROGA Y REDUCCION DEL TAMAO DE PARTICULAS Despusdelaseleccindelashojasyeltallosinsealesdeataquesdeinsectosy/o hongos ni deteriorados, se procedi a pesarlas en una balanza de dos platillos. Se lav cuidadosamente y se dej secar las hojas por 6 das en una estufa a flujo de aire ya quefacilitalaconservacindelasdrogasvegetales.Sedeterminelporcentajede humedad resultando 63.24%. Seprocediapesarlashojassecadas,luegoseredujoeltamaodelaspartculasenun mortero de laboratorio y se tamiz en una malla N 30 (500 m). ELABORACION DEL EXTRACTO ACUOSO Y EL EXTRACTO ALCOHOLICO AL 10 %. Se prepar el extracto acuoso al 10%, para ello se pes 4 g de la droga y lo mezclamos con 40 ml de agua. De igual se pes 8g de droga y se mezcl con 80 ml de alcohol de 96 y se ladejmacerandoporvariosdas.Sefiltrelextractoacuosoysedeterminsus caractersticasorganolpticas,PH,pesoespecfico,ndicederefraccin,gradosBrixque nos va a permitir saber qu cantidad de gramos de azcar contiene la droga y el Sreening farmacognstico(marchafitoquimica)paraladeteccinpreliminardelosdiferentes DROGAPESO INICIAL (g)PH (TIERRA) HOJA25.767 TALLO16,7 7 DROGAPESO INICIALPESO FINAL HOJAS15.7815.31 Tabla1. Peso de la droga recolectada y el PH de la tierra. TABLA 2. Peso de la droga antes y despus de la molienda. constituyentesqumicos,basadosenlaextraccindeestosconsolventesyenlaprueba de coloracin. PH PESO ESPECIFICO INDICE DE REFRACCION GRADOS BRIVP 5.51.00391.33451.2 METABOLITOREACTIVORESULTADO CARBOHIDRATOMOLISH ANTRONA FEHLING A Y B (++) (++) (++) COMPUESTOS FENLICOS FeCl3(+++) TANINOGELATINA(-) FLAVONOIDES SHINODA (++) CARACTERISTICAS ORGANOLEPTICAS EXTRACTO ACUOSO OLORAMARGO Y ASTRINGENTE COLORSUI GENERIS SABOR MARRON OSCURO Y HOMOGENEO TABLA 3. Caractersticas organolpticas del extracto. TABLA 4. Ensayo fisicoqumico cualitativo general. TABLA 4. Marcha fitoquimica de Juglans neotropica Diels ALCALOIDES DRAGENDORFF MAYER BERTRAND SONNENSCHEIN (++) (++) (+) (+) SAPONINASGENERACION DE ESPUMA(-) DISCUSIONESEn el Sreening fitoquimica de Juglans neotropica se observ la abundancia de compuestos fenlicoscomometabolitossecundarioselcualsehizoconelreactivoFeCl3,coneste mismoreactivoseutilizenSaturejasericea(Panizada)conlacualsedemostrla presenciadecompuestosfenlicoscomometabolitosecundariomsabundante,dato obtenidoenunartculocientfico(Bibliografa5),siguiendolosmismosprocesosparala determinacindecompuestosfenlicos,ascomotambinelSreeningdelosdems metabolitos secundaria en Juglans neotropica. CLONCLUSIONES Sereconocilaimportanciadelprocesodeconservacindedrogas.Secomprobla identidad fitoquimica y calidad de la droga. Se elabor el extracto acuoso y alcohlico por filtracin .Y se decidi la maceracin como el mtodo de extraccin mas adecuado. PROTOCOLO N 2 CONTROL DE IDENTIDA, CALIDADY MTODOS GENERALES DE EXTRACCIN DE DROGAS RESULTADOS 1.- Control de identidad y calidad Droga: Juglans Neotropica ENSAYOSRESULTADOS BOTNICOS Organolpticos OlorAromtico ColorVerde olivceo SaborSui generisMacroscpicos Tallos Delgado y de color marrn. Hojas Compuestas, alternadas e imparipinadas. Flores e inflorescencia Masculinas: color verde amarillento, pednculos con numerosa flores y dispuestas en espiga, estaminadas, con estambres en forma de haz. Femenino: Color verde, en amentos cortos y con pocas flores y en racimos terminales y abundantes. Fruto Drupa de color pardo a negro, redonda a semiesfrica y ligeramente achatada en los extremos. Semilla La nuez es negra presenta forma ovoide, de tamao grande y una consistencia leosa dura FISICOQUMICOS % Humedad63.24 % ndice de refraccin1.3345 METABOLITOREACTIVORESULTADO CARBOHIDRATOMOLISH ANTRONA FEHLING A Y B (++) (++) (++) COMPUESTOS FENLICOS FeCl3(+++) TANINOGELATINA(-) FLAVONOIDES SHINODA (++) ALCALOIDES DRAGENDORFF MAYER BERTRAND SONNENSCHEIN (++) (++) (+) (+) SAPONINAS GENERACION DE ESPUMA (-) CUESTIONARIO 1.- ESTABLECER: SEMEJANZASENTRE LA RECOLECCION DE DROGAS VEGETALES CON FINES INDUSTRIALES Y ESTUDIO FARMACOGNOSTICO Se trabaja con diferentes organos de la planta es por eso que recolectan frutos hojas tallos y otros El objetivo es obtencion del acitivo farmacologico de la droga recolectada en su periodo optimo Al momento de recolectar ambos realizan inihibicion enzimatica DIFERENCIAS ENTRE LA RECOLECCION DE DROGASCON FINES industrialesCON FINES DE ESTd. FARMACOLGICO Alta cantidad de tecnologas Composicin fotoqumica uniforme estructura conocida del activo a extraer procesamiento de obtencin del activo es poraislamiento Poca cantidad de tecnologa Composicin fotoqumica variable Estructura desconocida del activo a extraer Procesamiento de obtencin del activo es por extraccin ESQUEMA DELPROCESO DE OBTENCIONDE UN EXTRACTO ESTANDARIZADO 3.-FACTORES CRTICOS QUE AFECTAN E INFLUYEN EN LA CALIDAD DE LOS PRODUCTOSNATURALES 1.-Factores Climticosy Atmosfricos.-Tales como: Temperatura Humedad Radiacin solar Vientos Estosfactorespermitenobtenerdrogasdealtaobajaconcentracinde activos,porejemplohayplantasqueaunaaltahumedadposeenmayor concentracin de activos que los que estn a bajas humedades 2.-Factores Edficos.- Los factores edficos se relacionan a las condiciones de suelo en donde crece la planta. Estos factores se clasifican en A.-Fsicos Porosidad Grado de aireacin Capacidad de retencin de agua Temperatura B.-QumicosPH del suelo Riqueza en materia orgnica Contenido en minerales 3.-Factores Topogrficos.-Tales como: Relieve Grado de radiacin Condiciones trmicas 4.-Equiposutilizadosparaelprocesodeconcentracinde extractos a escala industrial Entre los principales equipos de concentracin tenemos: 1.-EvaporadoralVaco.-Consiste en reducir la presin del interior de la caldera del evaporador por debajo de la presinatmosfrica, esto permite reducir la temperatura de ebullicin del lquido. 2.- Evaporador Trmico.-Posee un sistemade precalentamiento, se usa para concentrar licores de maz 3.-EvaporadorMltipleEfecto.-Poseeunsistemaconvarios evaporadores, las cuales concentran con mayor eficacia los extractos 5.-Extractonaturalperuanoquefiguraen la farmacopea espaola usp-36 En la Farmacopea Espaola USP-36 figura el extracto natural Peruano de Uncaria tomentosa (Una de Gato) ElExtractoenPolvodeUadeGatosepreparaapartirdeUadeGato medianteextraccinconmezclashidroalcohlicasuotrosdisolventes adecuados. La relacin entre el: Material vegetal y Extracto est entre: 4:1 y 6:1. Contiene No menos de 90,0% y no ms de 110,0% de la Cantidad declarada de alcaloides oxindlicos pentacclicos Como isopteropodina, calculado con respecto a la materia Seca, como la suma de especiofilina, uncarina F, mitrafilina, Isomitrafilina, pteropodina e isopteropodina. Puede Contener sustancias agregadas adecuadas. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS: 1. Villar del F A. Farmacognosia General. Editorial Sntesis. Madrid, Espaa; 1999. 2. Palacios J. Plantas medicinales nativas del Per. 2da ed. Lima: CONCYTEC; 1997. 3. Macbride,J.F.Junglandaceae,floraofPeru.FieldMuseumofNaturalHistory, Botanical Series Collation: 13(2/2): 263-66;1936-81. 4. GonzalesAN.Culturaorgnica.Revistabimestral.EditorialagrosntesisS.A.de C.V.; 2011. 5. PabloE.BonillaRivera,JorgeArroyoA,NancyM.LozanoR.,HamiltonBeltrnS, AlexAlbaG,JurissanAguedoA.,LidiaTincoO.,FrancoRosH.COMPOSICIN QUMICAYACTIVIDADFARMACOLGICADELEXTRACTOETANLICODESatureja sericea (GOYAL). 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