ISO/IDF- Metoder i det Mikrobiologiske Laboratorium
Transcript of ISO/IDF- Metoder i det Mikrobiologiske Laboratorium
www.eurofins.com
ISO/IDF- Metoder i det Mikrobiologiske
Laboratorium
Susanne Nielsen
Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
MEJERITEKNISK SELSKAB D. 28. MAJ 2015
2Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Source presentation EDR:
Source modification date: 09/06/2009
Hvad er IDF
Standardisering af Mikrobiologiske Metoder
Udvikling af en Analyse Standard
Igangværende og måske kommende projekter
Hvorfor Standardisering
MEJERITEKNISK SELSKAB D. 28. MAJ 2015
3Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Source presentation EDR:
Source modification date: 09/06/2009
FIL-IDF: Federation Internationale de Laiterie- International Dairy Federation
Uafhængig, non-profit, non- politisk Forening
Grundlagt i 1903 i Bruxelles i forbindelse med den første Internationale Mejeri Kongres
Arbejdsområder:
Animal health and welfare
Dairy Science and Technology
Economics, Policies and Marketing
Environment
Farm Management
Food Standards
Hygiene and Safety
Methods of Analysis and Sampling
Nutrition
4Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
IDF er organiseret i National Kommitéer
Den Danske National Komité’s formål
•er omdrejningspunktet for nationale input til IDF
•viderebringer resultatet af arbejdet i FIL-IDF Danmark
•nominerer repræsentanter til IDF's stående komitéer
•virker til at fremme IDF inden for mejeriindustrien
•er ansvarlig for at formidle det nationale bidrag til IDF's finansiering (via
Mejeriforeningen)
Sekræter for den danske kommitè: Sanne Bastholm Rasmussen [email protected]
PT er 46 lande medlemmer og repræsenteret ved en National Komité
F.eks. Zimbabwe, Mongoliet og Norge
Under National Komitéen er en række arbejdsgrupper
5Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
IDF’s organisation
Science and Programme
Coordination Committee
SPCC
Methods Standards Steering
Group
MSSG
Food Standards Steering
Group
FSSG
SCHMMHarmonization
of
Microbiological
Methods
SCAMDMAnalytical
Methods for
Dairy
Microorganisms
PG D07
Lb
casei/paracasei
PG D06
QUA LAB
Flowcytometri
6Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Standardisering og harmonisering af Mikrobiologiske Metoder
FIL-IDF
ISO
CEN
7Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Udvikling af en Analyse Standard
Stage 0: Undersøgelse af et emne, f.eks en ny analyse teknik, som endnu ikke er
klar til de næste trin
Stage 1: New Work Item (NWI)
Forslag til ny metode sendes typisk fra en National komité til IDF
Forslaget skal indeholde en Working Draft eller min. en klar beskrivelse OG forslag
til Projektleder
NWI accepteres efter afstemning
Krav: Min. 50% af medlemslandene skal svare på afstemningen og min. 50% af
svarene skal være positive
Stage 2: Udabejdelse af Committee Draft (CD) og fremsendelse til kommentering
bland Projektgruppens medlemmer og SC
Bearbejdning af kommentarer, udarbejdelse af rapport med indkomne kommentarer
og PL ‘s svar på kommentarer, planlægning af et ‘Interlaboratory study’ til
fastlæggelse af præcisionsdata
Stage 2 slutter når resultaterne fra dette studie er godkendt af PG og SC
8Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Interlaboratory Study 2007 ISO 22964 Detection of Cronobacter
spp.
67 prøver
CSB
CB- 44°C
CB- 41,5°C
mLST
ESIA
mDFI
ESPM
mDFI
ESIA
ESIA
ESPM
ESPM
mDFI
ESIA
mDFI
ESPM
804 resultater
x 12
laboratorier
9648
resultater !
9Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
I 2013 ny ILS med Standardens endelige media
Milk based Infant Formula
Soy based Infant Formula
Lactose
Starch
Environmental Samples
10Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Stage 3:
EN Draft International Standard (DIS) udarbejdes på engelsk og evt. fransk
DIS sendes til National Komitéer for godkendelse
IDF og ISO udarbejder rapporter der inkluderer alle indkomne kommentarer
Stage 3 afsluttes med at PL sender den godkendte og afsluttede DIS (nu FDIS)
sammen med kommentarer og svar til IDF’s og ISO’s sekretariat
Stage 4:
Iht. ISO procedurer skal FDIS til afstemning internt i ISO før udgivelse
Der afgives ja/nej stemme og kun stavefejl/trykfejl kan rettes
IDF godkender DIS versioner til direkte udgivelse
Stage 5:
Standarden gennemgåes en sidste gang for trykfejl etc. hvorefter den udgives.
Projektgruppen nedlægges herefter
Review:
Senest 3 år efter udgivelse skal Standarden revurderes og herefter hvert 5. år
11Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
12Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Igangværende projekter
2 Stående komitéer:
SCAMDM: Analytical Methods for Dairy Microorganisms- de gode bakterier
SCHMM: Harmonization of Microbiological Methods- de onde bakterier
13Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Project D06
PL : S Casani (DK)
Quantification of Lactic acid bacteria by Flow Cytometry
Project D07
PL : G Fischer (DE)
and A Galat (FR)
Enumeration of Lactobacillus casei/paracasei in fermented milks and
starter cultures
SCAMDM Igangværende Projekter
NWI
Project D08
PL : TBD Quantification of LAB (Lactic acid bacteria) by use of qPCR or v-qPCR
PL Report
Project D09
PL : T Odamaki (JP) Revision of ISO 29981 | IDF 220 – Enumeration of bifidobacteria
PL Report
14Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Forslag til revision af ISO 22981/IDF 220 Enumeration of presumptive
Bifidobacteria
Our results suggested that the suspension conditions including diluents, retention time and shaking had much impact on enumeration of bifidobacteria. We found that in
comparison to ISO 29981|IDF 220 method, lower temperature for suspension without retention and shaking with a rotary blender using Mitsuoka’s buffer, a diluent devised and reported by Professor Mitsuoka who received IDF Elie Metchnikoff Prize 2007,
could provide stable and adequate counts for enumeration of bifidobacteria.
- Brug Mitsuoka’s buffer i stedet for Ringers
- Temperatur under opløsning skal være 35°C
- Brug blender til opløsning
‘Til næste gang’:
- Lav sammenligning mellem Mitsuoka’s buffer og MRD
istedet for Ringers (som ingen bruger)
- Start med -2 fortynding for at få bedre opløsning
istedet for at bruge en blender
15Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
SCHMM Igangværende Projekter
Project H03 IDF representative: H Joosten (CH)
ISO/TS 22964 | IDF/RM 210. (revision to horizontal IS) New title: Detection of Cronobacter spp.) – CEN TC275 WG6 TAG 14 (Revision of EN ISO 22964)
Project H17 IDF representative & PG co-convenor:
B Gerten
ISO/TC 34/SC 9-WG 16 - Yeasts and moulds (Revision of EN ISO 21527-1/-2)
Ask SC5/IDF delegates about the possible change in ISO 6611 of YGC to DRBC Decide to perform the revision with these recommendations: Base the revision on previous ISO 7954 from SC9 or ISO 6611 from SC5, and update all parts such media performance, if we take ISO 6611 we can harmonize with SC5. choose between DRBC or YGC, choose between surface inoculation or pour plate, maintain a general assay with YGC/DRBC and put an annex for DG18 and products for aw between 0.95 and 0.6 For product below aw<0.6, Management? No real media For WG3, data of validation are enough or not to establish this standard.
Ny standard senest Oktober 2016
16Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Project – new (tbd) IDF representative: TBD
ISO/TC 34/SC 9-WG 20 – Confirmation of Bacillus cereus (Revision of EN ISO 7932)
Project – new (tbd) IDF representative: TBD
ISO/TC 34/SC 9-WG 26 – Detection of Clostridium botulinum toxins
Den selektive opformering udgår
17Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Does ISO/TC34/SC9 agree with following WG 20 proposal:
- To not include additional tests for differentiation of Bacillus
thuringiensis from presumptive B. cereus in the revision of ISO
7932;
- To not include additional tests for confirmation of B. cereus sensu
stricto;
- To investigate possible additional tests to identify pathogenicity of
presumptive B. cereus colonies.
Proposed recommendations to be approved by ISO/TC 34/SC 9
To revise EN ISO 7932:2004 by adding in the confirmation stage PCR
detection of 2 specific genes, as optional tests on isolated colonies:
- Cytk1, specific of the new B. cytotoxicus species, an emerging and
virulent pathogen from the B. cereus group;
- Cereulide genes, harboured by emetic toxin producing strains of B.
cereus (sensu lato).
Benefits and limitations of such additional tests should be added in the
standard.
18Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Problem: Tilstedeværelsen af visse Mælkesyrebakterier og Bifidobakterier
hæmmer væksten af Enterobacteriaceae, Cronobacter spp., Salmonella spp
Improvement of enrichment procedure for Enterobacteriaceae (incl. Salmonella and
Cronobacter).
• Previous work with an alternative buffer (tricine)
addition of iron citrate and application of a higher initial pH was unsuccessful.
• Poor recovery was associated with strong acidification (final pH often below <5)
• A new pre-enrichment broth is proposed based on BPW with a six-fold increased
phosphate buffer strength (“xsBPW”)
• Study of growth kinetics of Salmonella and Cronobacter in xsBPW shows major
improvement.
• LOD50 values below 1 cell per 25 g sample were obtained with the most
demanding matrices
• Cost xsBPW similar to that of “double strength BPW”
• Variability of growth potential among different Enterobacteriaceae raises concern
about current validation requirements
19Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Revideret standard forventes ved udgang 2016
Væsentligste ændringer:
Inkubationstider, herunder mulighed for inkubation af hel Fraser i 24 timer i
stedet for 48, såfremt fokus er Listeria monocytogenes
Konfirmerings og identifikations trin
Præcisionsdata fra ILS fremgår af standarden
20Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Hvorfor er standardiserede analysemetoder en god idé?
- Et analyseresultat er en funktion af forekomst og fordeling af den givne parameter,
den anvendte metode og metodens usikkerhed
- Et mikrobiologisk kriterie bør altid bestå af en fastsat værdi og en analysemetode
BEK om mælkeprodukter m.v. Nr. 2 af 04/01/2013
21Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Case: Bestemmelse af L. delbrueckii subsp. bulgaricus i fermenteret produkt.
Metode: ISO 7889/IDF 117:2003
Problem: Udover L. delbrueckii subsp. bulgaricus indeholdt produkt også L. acidophilus
L. acidophilus vokser udmærket i substratet og kolonier ligner
Løsning: Udfør MALDI-TOF identifikation på 5-10 kolonier
Resultat: Alle kolonier (20 ialt) blev identificeret som L. rhamnosus!
MALDI-TOF resultat blev efterfølgende konfirmeret ved 16S seq
22Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Case: E. coli
23Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Case: Aerobe sporedannere
Problem: Kunde hævder vi finder væsentligt færre sporedannere end de selv og
deres kunde gør i udvalgte produkter
3 metoder:
Metode Forbe-
handling
Udsæd Substrat Inkubations
tid
Inkubations
temp.
FVST
2007
80°C/
10 min
overflade Blodagar 6 døgn 30
NMKL
189
80°C/
10 min
overflade Blodagar 8 døgn 30
‘Tysk-
metode’
80°C/
10 min
overflade TSA 3 døgn 30
24Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Analyseresultater metode sammenligning
Prøve
Aerobe mesofile sporedannere/g
FVST 2007 NMKL 189 ‘Tysk metode’
1 270 230 420
2 270 300 390
3 370 520 530
4 380 150 560
5 200 220 310
6 440 370 770
25Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
Tilsyneladende overensstemmende resultater- men stadigvæk for lavt- nu på alle metoder
Prøve pH i 10% opl. Aerobe sporer cfu/g,
FVST 2007
10 g prøve 1a + 90 g SPO 4,36 310
10 g prøve 1a + 90 g BPW 6,66 4600
10 g prøve 1b + 90 g SPO 4,36 190
10 g prøve 1b + 90 g BPW 6,66 3600
10 g prøve 1c + 90 g SPO 4,36 150
10 g prøve 1c + 90 g BPW 6,66 3800
10 g prøve 2 + 90 g SPO 5,36 7400
10 g prøve 2 + 90 g BPW 6,56 6300
26Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
27Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
ISO-IDF metoder er referencemetoder
Brug kun alternative metoder der er valideret iht. ISO 16140 eller tilsvarende
overfor referencemetoden
Når du udarbejder specifikationer for dine produkter:
Referer til analysestandard
Vær specifik vedr.
- Prøveudtagning- repræsentativ, kun overflade, kun indre etc.
- Prøveforberedelse
Vær bevidst om de kritiske step i metoden
28Title: Presentation title Document name: Powerpoint template.ppt EDR: Document owner: Author Last modified on: 09/06/2009
TAK FOR OPMÆRKSOMHEDEN