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Intérêts de limmunofluoresence et des méthodes moléculaires pour le diagnostic de pneumocystose.
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Intérêts de l’immunofluoresence Intérêts de l’immunofluoresence et des méthodes moléculaires et des méthodes moléculaires
pour le diagnostic de pour le diagnostic de pneumocystosepneumocystose
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- MGG- calcofluor- Gomori-Grocott- bleu de toluidine
En particulier avec les prélèvements « pauvres » : expectorations ou patients non sidéens
Méthodes par Méthodes par colorationcoloration
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ImmunofluorescenImmunofluorescencece
Lim, Lim, Applied microbiologyApplied microbiology , 1974 , 1974
- 108 ech patients immunodéprimés clinique/radio suggérant PCP- crachats induits ou aspirations tracheales- IFD : Ac obtenus chez le lapin
Clinique et/ou radioNbre patients avec IFD
+ - total
Très en faveur de PCP
25 10 35
Suggestifs de PCP 8 25 3
Négatifs (contrôles) 3 47 50
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ImmunofluorescenImmunofluorescencece
Lim, Lim, Applied microbiologyApplied microbiology , 1974 , 1974
Histologie(methenamine-silver sur
biopsie)
Nbre patients avec IFD
+ - total
+ 9 0 9
- 2 4 6
total 11 4 15
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ImmunofluorescenImmunofluorescencece
Lim, Lim, Applied microbiologyApplied microbiology , 1974 , 1974
bonne spécificité de la technique : pas de confusion possible gain de sensibilité p/t à la méthode de référence de l’époque ? (anapath.)
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ImmunofluorescenImmunofluorescencece
Milder, Milder, J. Clin. Microbiol.J. Clin. Microbiol. , 1980 , 1980
- rats immunodéprimés par injections sc de cortisone 2/semaines.- sacrifice de 4 rats toutes les semaines
* biopsie de poumon : Gomori-Grocott* LBA : Giemsa et IFI (Ac obtenus chez le lapin)
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ImmunofluorescenImmunofluorescencece
Milder, Milder, J. Clin. Microbiol.J. Clin. Microbiol. , 1980 , 1980
0
1
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3
4
1 2 3 4 5 6 7
Semaines
No
mb
re r
ats
po
sit
ifs
IFI
Giemsa
histologie
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ImmunofluorescenImmunofluorescencece
Milder, Milder, J. Clin. Microbiol.J. Clin. Microbiol. , 1980 , 1980
au moins aussi sensible que l’histologie pour le diagnostic très précoce de l’infection. sensibilité très supérieure au Giemsa sur LBA pas de problème de spécificité.
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ImmunofluorescenImmunofluorescencece
Procop, Procop, J. Clin. Microbiol J. Clin. Microbiol 20042004
- 313 échantillons examinés (LBA ++). Diff-Quick, Gomori-Grocott, Calcofluor, Merifluor White® (IFD)- echantillon considéré + si positif avec 2 techniques au moins.
techniquetechnique SensibilitéSensibilité SpécificitéSpécificité VPPVPP VPNVPN
Diff-Quick 48.4 99.6 96.9 88.0
Calcofluor 73.8 99.6 98.0 93.4
Gomori 76.9 99.2 96.2 94.2
IFD 90.8 94.7 81.9 97.5
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ImmunofluorescenImmunofluorescencece
NgJ. Clin Microbiol, 1990
182 ech(VIH ou « à risque »)
IFI : 90 %DQ : 73 %Gomori : 72%Bleu toluidine : 71 %
NgJ. Clin Microbiol, 1990
163 ech(VIH ou « à risque »)
IFD : 97 %DQ : 90 %
Halford, Cytopathology, 1994
384 echIFD : 86 %Gomori-Grocott : 66 %
Wolfson, J. Clin Microbiol, 1990
148 ech double aveugle
IFD : 100%Giemsa : 65%
Aslanzadeh, Infection, 1996
168 echIFD : 100%CW : 57%
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ImmunofluorescenImmunofluorescencece
Elvin, BMJ, 1988 (abstract)
25 LBA VIH+
43 IS VIH+
IFI : 19 +Gomori-Grocott : 17+
IF > Gomori
Rigole, Pathol. Biol. 1997 (abstract)
100 LBA IDIFD : 72 +Gomori-Grocott : 68 +
Tuncer, Scand J Infect Dis. 1998 (abstract)
30 IS ID IF : 8 +Giemsa et Gomori : 4 +
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ImmunofluorescenImmunofluorescencece
Lautenschlager, J Clin Microbiol, 1996
553 LBA IDIF : 86%Gomori-grocott : 81%
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Aslanzadeh, Infection, 1996 : - 168 prélèvements respiratoires dont 58% VIH- IFD : 19+ dont 12 crachats, 1 crachat induit et 6 LBA
(100%) CFW : 11+ dont 6 crachats et 5 LBA (57%)
Gain de sensibilité avec l’IF notamment pour les expectorations.
ImmunofluorescenImmunofluorescencece
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Cruciani Eur Respir J. 2002- méta analyse : comparaison de l’analyse d’un crachat
induit par rapport au LBA (« gold standard ») chez les VIH+.
- colorations : 43 % colorations : 43 % IF : 67 % (p<0.001)IF : 67 % (p<0.001)
L’IF est nettement plus sensible pour les crachats induits (VIH+).
ImmunofluorescenImmunofluorescencece
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ImmunofluorescenImmunofluorescencece
Kovacs, Kovacs, N. Engl. J. Med. N. Engl. J. Med. 1988 (abstract)1988 (abstract)
- 49 crachats induits de patients présentant une PCP (confirmée a posteriori compte tenu des colorations, la clinique, l’évolution sous traitement)
IFI : 92 %Bleu de toluidine : 80 %Diff-Quick : 76 %
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ImmunofluorescenImmunofluorescencece
NgJ. Clin Microbiol, 1990
182 ech(VIH ou « à risque »)
IFI : 90 %DQ : 73 %Gomori : 72%Bleu toluidine : 71 %
Evaluation des FP avec l’IFI : 15 patients + uniquement avec IFI
3 patients PCP certaine (réponse au tt anti-Pj) 6 patients indéterminés 6 ont autre cause et n’ont pas été traités pour Pj
Evaluation des FN avec toutes les méthodes : 77 patients – 57 Vrais négatifs 10 patients indéterminés 10 Faux négatifs (réponse au tt anti-Pj)
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ImmunofluorescenImmunofluorescencece
NgJ. Clin Microbiol, 1990
182 ech(VIH ou « à risque »)
IFI : 90 %DQ : 73 %Gomori : 72%Bleu toluidine : 71 %
MéthodeMéthode SensibilitSensibilitéé
SpécificitSpécificité é VPPVPP VPNVPN
DQ 72 100 100 69
GMS 75 100 100 72
TBO 74 100 100 71
IFI 80 90 93 74
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ImmunofluorescenImmunofluorescencece
NgJ. Clin Microbiol, 1990
163 ech(VIH ou « à risque »)
IFD : 97 %DQ : 90 %
MéthodeMéthode SensibilitSensibilitéé
SpécificitSpécificité é VPPVPP VPNVPN
DQ 70-100 100-100 100-100 65-100
IFD 72-100 100-96 100-92 69-100
(Crachats induits – LBA)
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ImmunofluorescenImmunofluorescencece
difficulté de conclure en l’absence de « gold standard »
IF : bonne sensibilité, a priori supérieure à celle des techniques de coloration classique. Permet de « rattraper » certains cas. Intéressant en particulier pour les expectorationns
deux techniques sont indispensables. FN de toutes les techniques FP de l’IF
décrite comme plus rapide d’execution (p/t Gomori) et surtout plus rapide et plus simple à lire.
pas de problème de spécificité : Spécificité des Ac monoclonaux, et reconnaissance « facile » des kystes ?
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ImmunofluorescenImmunofluorescencece
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Une capacité de détection supérieure …Une capacité de détection supérieure …
Dilution des LBA : comparaison capacité de détection x 100 p/t Gomori (Ribes, J Clin Microbiol, 1997 )x 1000 p/t IFD (Leigh et all, J Clin Pathol, 1993)
PCRPCR
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Brancart,J Microbiol Methods 2005 (abstract)
53 LBAGiemsa et IFD : 8+PCR : 24+
Arcenas, Diag Microbiol Infect Dis (abstract) 2006
Gain de sensibilité de 21% Spécificité.
RibesJ Clin Microbiol, 1997
129 ech
Gomori : 37+PCR : 60+
Caliendo, J Clin Microbiol, 1998
232 ech
Crachats induits : IF : 64 % PCR : 96 %
Leibovitz, J Clin Microbiol, 1995
284 ech
Crachats induits : Giemsa et GMS : 28 % PCR : 85 %
PCRPCR
Une capacité de détection supérieure …Une capacité de détection supérieure …
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Khan, J Infect, 2000 (abstract)
46 echIF : 2+PCR : 11+ nPCR : 21+
TamburriniJ Med Microbiol, 1993 (abstract)
52 LBAIFD : 81%PCR : 100%
PCRPCR
Une capacité de détection supérieure …Une capacité de détection supérieure …
![Page 24: Intérêts de limmunofluoresence et des méthodes moléculaires pour le diagnostic de pneumocystose.](https://reader035.fdocuments.us/reader035/viewer/2022062511/551d9d8c497959293b8c1c3e/html5/thumbnails/24.jpg)
Caliendo, J Clin Microbiol, 1998
232 ech
LBA : IF et PCR : 100 %
Leibovitz, J Clin Microbiol, 1995
284 ech
LBA : Giemsa et GMS : 82 % PCR : 86 %
PCRPCR
Une capacité de détection supérieure …Une capacité de détection supérieure …
… … pas toujours … pas toujours …
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Un certain nombre de Faux Neg de la PCR sont post-traitement.
Leigh et all, J Clin Pathol, 1993
Mauvaise extraction de l’ADN
Toutes les methodes ne se valent pas …(Lu, J Clin Microbiol, 1995)sensibilité de 6 méthodes PCR : 100%, 100%, 57%, 60%, 33%, 23%
PCRPCR
Pourquoi PCR pas toujours à 100 % ?Pourquoi PCR pas toujours à 100 % ?
![Page 26: Intérêts de limmunofluoresence et des méthodes moléculaires pour le diagnostic de pneumocystose.](https://reader035.fdocuments.us/reader035/viewer/2022062511/551d9d8c497959293b8c1c3e/html5/thumbnails/26.jpg)
Olsson, Clin Microbiol Infect, 2001
91 ech
IF : sens 60% spé 97% VPP 88% VPN 86%PCR : sens 96% spe 59% VPP 52% VPN 100%
PCRPCR
Une trop grande sensibilité ??Une trop grande sensibilité ??
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PCRPCR
Il existe un portage sain … Il existe un portage sain …
Chez l’immunodéprimé : 18% (Maskell, Thorax, 2003)
Chez l’immunocompétent : 12 à 20%(Maskell, Thorax, 2003 ; Medrano, Emerg Infect Dis, 2005 ;Sing, J Clin Microbiol, 2000)
Pas toujours retrouvé : 0%(Nevez, Clin Infect Dis, 2005 ; Weig, J Clin Microbiol, 1997)
![Page 28: Intérêts de limmunofluoresence et des méthodes moléculaires pour le diagnostic de pneumocystose.](https://reader035.fdocuments.us/reader035/viewer/2022062511/551d9d8c497959293b8c1c3e/html5/thumbnails/28.jpg)
PCRPCR
Comment distinguer le portage de l’infection par P. jiroveci ?Comment distinguer le portage de l’infection par P. jiroveci ?
Flori, J Med Microbiol, 2004
173 LBA de patients présentant des signes évoquant PCP« Gold standard » : clinique, épreuve thérapeutique …
sensibilité spécificité VPP VPN
Giemsa Gomori
60 100 100 92
PCR RT PCR
100 85 21 100
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PCRPCR
Comment distinguer le portage de l’infection par P. jiroveci ?Comment distinguer le portage de l’infection par P. jiroveci ?
Flori, J Med Microbiol, 2004
Détermination de la concentration en ADN dans l’échantillon :
La PCR en temps réel, en permettant la quantification de l’ADN de l’échantillon pourrait permettre un diagnostic biologique fiable .
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PCRPCR
Les méthodes moléculaires ne sont pas à l’heure actuelle de bonnes méthodes pour le diagnostic de la PCP : trop de faux positifs dus à une trop grande capacité de détection. autres utilisation possible : épidémio, screening des patients pouvant bénéficier d’une prophylaxie, suivi de l’efficacité du tt …