Inseminacin artificial en Alpacas Jorge Reyna B

Inseminacin artificial en Alpacas

Jorge Reyna B.Sc (Hons), Msc (Sydney Uni)

http://www.elitealpacabreedingsystems.com/library/ArtificialInsem.pdfIntroduccin

Desde 1988, cuando ocurrieron las primeras importaciones de la alpaca de Chile, La manada nacional australiana ha estado aumentando rpidamente. La estadstica demuestra un crecimiento rpido a partir del 51.953 a las 60.814 (el 17%) a partir 2003 a 2004 (Alpacas australiano La asociacin, 2005), y alpacas se est manteniendo Nuevo Gales del Sur, Victoria y Australia occidental. La industria de la alpaca en este pas sigue siendo una actividad alternativa, pero atractiva en trminos econmicos, y tiene el potencial para el desarrollo a largo plazo. Al contrario de las condiciones que prevalecen en los Andes, Australia tiene condiciones ambientales excelentes para la alpaca que cra en trminos de pastos naturales y tiempo suave. Hay instituciones y recursos econmicos eso se puede utilizar para la investigacin y la generacin de nuevas tecnologas. Con un plan estratgico de la investigacin, ser posible hacer la industria ms provechosa y atraer a ms gente para invertir en la crianza de la alpaca.

Las granjas de la alpaca en Australia se sitan en la regin agrcola excelente y hay el potencial de criar animales en las reas marginales, debido a su capacidad de tolerar condiciones speras y variaciones drsticas de la temperatura, para alimentar en los pastos que no son utilizados por los ganados o las ovejas, para tolerar altos niveles de la deshidratacin y del inanition, y para tener un efecto menos erosivo 0n el suelo debido a sus cojines el elstico de fibra.Alpacas tambin tiene el potencial de ser utilizado para la produccin de carne en Australia como en Per, debido a su nivel bajo del nivel gordo (5-6%) y bueno de la protena (21-24%) que es superior a sa en la carne de vaca (corte 2001). Al largo plazo, cuando la poblacin hace ms grande, ser ganado alternativo viable.

Australia como lder en la industria de las ovejas tiene la experiencia, la infraestructura, las instituciones, y las tecnologas reproductivas asistidas requeridas para la mejora gentica de las manadas de la alpaca. Con el desarrollo de la inseminacin artificial, tcnicas de la transferencia del embrin, produccin in vitro de los embriones (IVP) y inauguracin de un programa de mejora gentico para los alpacas, ser posible desarrollar una casta de la alpaca australiana fina adicional comparable a la alpaca guardada por los incas antes de la conquista en relativamente pocos aos. Esto aumentar la produccin y la productividad de la manada y aumentar nuestras exportaciones y ganancias en el mercado internacional.

MEJORA GENTICA DE ALPACAS

La mejora gentica en alpacas es lenta en comparacin con los ganados y las ovejas debido a la fisiologa reproductiva anormal de la especie, que se limita extrapolacin de tecnologas reproductivas de otros animales domsticos. Una de las primeras limitaciones es que los varones alcanzan pubertad en 1 - 3 aos y el prepucio adhiere al pene del blano, haciendo la protuberancia del pene imposible (Pinares y otros. 1985; Fernandez Baca 1993). Esta adherencia se ha encontrado para ser dependiente en concentraciones de la testosterona. Se ha divulgado que en los animales jvenes (1-2 aos) libres de adherencias, ese las concentraciones de la testosterona era animales en relacin con altos sin la separacin del prepucio (Nunez 1994). Hay un potencial de avanzar pubertad en varones con el uso de la testosterona, que necesita ser estudiada, y tambin de ver si un programa apropiado de la nutricin puede avanzar el lanzamiento de las adherencias del pene del blano, y con esa pubertad y produccin de la esperma. Esto ser muy til para maximizar el uso de los padres de la lite, pues permitir el comenzar de la actividad reproductiva del varn en una edad temprana.

Una segunda limitacin se relaciona con la longitud larga del gestational (11.5 meses) (Hafez 2000), que limita el nmero de crias de un detalle hembra a 8-10 de su vida reproductiva entera. En este caso, el desarrollo multi de la ovulacin y el programa de la transferencia del embrin (MOET) en alpacas podran ser deseable para maximizar el uso de las hembras de la lite y mejorar la manada del lado maternal tambin. Un protocolo de la transferencia del embrin consiste en el uso de las hormonas (FSH, hCG y/o LH) para inducir el crecimiento folicular de folculos simultneos produciendo ovulaciones mltiples, y de tal modo dando la posibilidad de fertilizar oocytes y de producir embriones de una hembra particularmente valiosa. Este animal usado al superovulate se llama un donante. Sobre el superovulation, los embriones obtenidos se transfieren en hembras con el valor gentico bajo que llevar el embarazo. As es posible conseguir a varios el descendiente a partir de una hembra en una tentativa. Llaman los receptores y deben ser animales las hembras que llevan los embriones sanos con la buena conformacin y ningunas malformaciones reproductivas. La investigacin en protocolos, la coleccin del embrin y la transferencia superovulatory se ha conducido en los camellos (Xing-Xu y otros. 1994; Skidmore 2004), alpacas (Palomino 1997; Gomez y otros. 2002; Vaughan 2002) y llamas (Wilson y Chapman 1985; Correa 1992; Bourke y otros. 1995; Correa y otros. 1997; Taylor y otros. 2000). En el rea del vitrification de embriones la investigacin se ha hecho solamente sobre las llamas (Aller y otros. 2002; Von Baer y otros. 2002), sino un protocolo satisfactorio para congelar embriones todava no ha estado descrito. El problema principal en esta investigacin est obteniendo una gran cantidad de embriones que se asignarn a diversos protocolos que congelan. Sera probablemente posible recoger ovarios de mataderos en Per y poner en un sistema in vitro de la fertilizacin (IVF) para obtener una gran cantidad de embriones que se utilizarn en varios protocolos que congelan para encontrar el grado ptimo que producir embriones ms viables despus de ser congelado y el ser deshelado. La produccin in vitro de embriones es un rea de la novela en camelids y se ha probado en llamas solamente (Del Campo y otros. 1994; Del Campo y otros. 1994; Ratto y otros. 2004). Algunos los investigadores consideran el punto de vista que hay muchos inmviles de tcnicas bsicas de convertirse primero antes de ir para las costosas que no tendrn un uso prctico en un futro prximo.

Otra inconveniencia que afecta la mejora gentica en alpacas es relacionado con la eficacia reproductiva de la manada. No hay parmetros reproductivos para seleccionar a varones aparte de caractersticas phenotypical como altura, peso, la conformacin, la composicin del pao grueso y suave, el tamao testicular, la libido y el nmero limitado de los descendientes obtenidos por el acoplamiento natural. Se ha demostrado en la otra especie domstica esa mayor es la presin de la seleccin para la produccin menos es la capacidad reproductiva de los descendientes. Los animales destinados convertirse en padres podan tener una concentracin baja y pobres de la esperma el motility de la esperma y cuando los utilizan para mejorar las manadas podra causar problemas serios en sus descendientes transmitiendo los genes para la fertilidad baja. En las condiciones que prevalecen en los Andes, la prdida temprana del embrin puede afectar el hasta 60% (Huanca y otros. 2004) de la manada y debido al momento especfico del ao para los acoplamientos, generalmente a partir de diciembre a marcha, es solamente posible tener uno cria per annum. Esto afecta el nmero de los animales disponibles para reemplazo. En el embrin temprano de Australia se ha divulgado la prdida, pero no hay estudio oficial. Por otra parte, ste no es tal problema aqu que la hembra tiene otra oportunidad de acoplar y de producir un cria.

Resumiendo, la pubertad en 1-3 aos, la presencia de las adherencias del pene-prepucio, la longitud larga del gestational, el nmero limitado del descendiente de una hembra particular y la eficacia reproductiva baja hace un programa de mejora gentico en alpacas lento. se es porqu las tcnicas tienen gusto de la inseminacin artificial, transferencia del embrin y la produccin in vitro de los embriones (IVP) se recomienda altamente para alcanzar un aumento gentico ms rpido en la manada.

VENTAJAS DE LA INSEMINACIN ARTIFICIALHay varias ventajas del programa de la inseminacin artificial (AI) en alpacas. Uno los principales es la posibilidad de uso extenso de los padres de la lite de mejorar el funcionamiento de la manada nacional que facilita la prueba de progenie. Adems, el AI permitir que el cruzamiento cambie un rasgo de la produccin, la voluntad acelera la introduccin de la nueva gentica, reduce el riesgo de separarse transmitido sexual y de otras enfermedades (piojos, JD), y elimina la necesidad del transporte de animales, reduciendo la necesidad de acoplamientos mviles.

Finalmente proporcionar una herramienta til para investigar la fisiologa reproductiva como transporte de la esperma en la zona femenina, y capacitation y poca de la ovulacin en lo referente al depsito de la esperma en la zona.

CARACTERSTICAS DE LA ESPERMA DE LA ALPACA

Como prembulo, es conveniente describir brevemente el proceso exclamatorio en alpacas. Esta especie tiene una fisiologa reproductiva peculiar con respecto a sa observada en otros animales del campo domsticos. La cpula toma hasta 40 los minutos y las contracciones urethral se distribuyen uniformemente a travs de proceso exclamatorio (Lichtenwalner y otros. 1995). En el pasado fue postulado que los alpacas ejaculate en fracciones como los verracos pero l es bien sabido actualmente que el proceso de la eyaculacin es constante (Chipana 1997). Si el varn es frtil y se ha utilizado racional, mayor es la poca del copulation ms la probabilidad all es de encontrar la esperma en el ejaculate (bravo 2001).

El plasma seminal en alpacas es gelatinosa (San Martin y otros. 1968; Garnica y otros. 1993; Pastor 1993; Bravo y otros. 1999; Davalos y Olazabal 2002) y l sostiene la esperma hasta que ocurre la ovulacin, poste-cpula de generalmente 24-30 H. (Bravo y otros. 1999) (cuadro 1). La funcin del plasma seminal gelatinosa sigue siendo desconocido, pero podra ser un medio que protege la esperma hasta que ocurre la ovulacin, que es generalmente 24-30 h despus de copulation (bravo y Sumar 1989). Otra funcin del plasma seminal gelatinosa que ha sido se sugiere como medio para sellar la cerviz para evitar que la esperma fluya.

Figure 1: Alpaca sperm is highly viscous, which makes it difficult to obtain a

homogenous sample when it is mixed with extender for artificial insemination

and/or freezing procedures.detrs del tero a la vagina. La funcin ms interesante del el plasma seminal en los alpacas divulgados recientemente est como inductor de la ovulacin. Sesenta por ciento de las hembras tratadas con una dosis de i.m. de 0.8 - 1.0 ml de plasma seminal ovulated. El mecanismo implicado es desconocido, pero puede implicar a protena que tiene una accin de GnRH o de la LH que estimule el folculo ovulatory al ovulate (Sapana y otros. 2002).

El volumen del ejaculate divulgado era 0.8 a 3.1 ml (Bravo y otros. 1997; Bravo y otros. 2000; Flores y otros. 2002). En nuestros ensayos prcticos preliminares el promedio era 2.57 ml (gama 1 a 6 ml). Ejaculates recogido por el mannequin y la vagina artificial (sistema de pesos americano) contiene espuma en superior debido a la penetracin constante del pene permitiendo el aire sobre la esperma (cuadro 2). Una cantidad grande de espuma en la tapa del ejaculate poda rendir un ml adicional de esperma sobre una hora o dos.

El color predominante de la esperma vara de blanco levemente lechoso a cremoso y depende de la concentracin de la esperma contenida (Fernandez-Baca 1970; Garnica y otros. 1993; Flores y otros. 2002; Vaughan 2003). En nuestros ensayos prcticos recogimos la esperma que miraba el blanco cristalino (2 x 106 la esperma ml), cremoso levemente lechoso (74 - 80 x 106 la esperma ml) y lechoso (170 - 220 x 106 la esperma ml). Cuanto concentrada la esperma es, ms lechosa la muestra es. Nuestras gamas eran variables en el acuerdo con las gamas divulgadas por otros investigadores (Garnica y otros. 1993; Garnica y otros. 1995; Bravo y otros. 1997; Chipana 1997; Flores y otros. 2002; Vaughan 2003).

Cuadro 2: El tubo de la oleccin que demuestra un volumen inusualmente alto de ejaculate (6 ml), levemente lechoso con espuma en la tapa (contenida 17 x 106 sperm/ml) recogida en la primera tentativa de Wiston, varn del Hacienda del La, Marulan - NSW.

En relacin con a la caracterizacin morphometric de las esperma-cabezas de la alpaca, adentro alpacas al alto grado del polimorfismo de la esperma en y entre animales se ha encontrado (Buendia y otros. 2001). Es posible clasificar la esperma de la alpaca segn el tamao de la cabeza en las categoras siguientes: pyriform, cortocircuito, normal, redondo o largo (cuadro 3). En la otra especie esto se ha identificado como caracterstica que puede ser til en la prediccin de la fertilidad. La investigacin adicional necesita ser conducida para aclarar si la morfologa de la esperma es importante para fertilidad en alpacas.

LIMITACIONES ACTUALES DE LA INSEMINACIN ARTIFICIAL EN ALPACAS

Hay varias limitaciones al uso del AI en alpacas; uno del ms importante es que una tcnica confiable para recoger el semen necesita ser desarrollada. Se parece que el uso de un maniqui y de una vagina artificial (sistema de pesos americano) es la mejor tcnica hasta ahora, pero el ejaculate vara dentro del mismo animal y entre los animales tambin. Otra limitacin se relaciona con la longitud del copulation, que va a partir 17 a 43 minutos en los ensayos prcticos conducidos en nuestro laboratorio. Esta poca extendida de los medios del copulation debes mantener una temperatura constante del sistema de pesos americano para dar las condiciones que el animal necesita producir un bueno ejaculate. La temperatura del tubo de la coleccin es importante tan bien como la esperma permanecer all hasta el final de la cpula. ste debe ser 37 el C en todas las veces, como 1C para arriba o abajo puede daar o an matar a la esperma. El dispositivo usado en alpacas para recoger el semen no es justo un artificial vagina (Sistema de pesos americano), segn lo utilizado por todos los investigadores de la alpaca en el pasado. El concepto necesit ser el

cuadro 3: Esperma de la alpaca debajo del microscopio. Es posible visualizar normal, redondo, el pyriform y las cabezas largas. Dilusin 1/20

cambiado dar resultados mejores. El dispositivo tiene 3 porciones: vagina artificial, cerviz o cuello uterino, y cuerpo y cuernos finalmente uterinos. Es decir es una zona reproductiva artificial que de ahora en adelante nombraremos AART (zona reproductiva artificial de la alpaca). La investigacin futura necesita subir con un diseo que mejor simule la zona reproductiva femenina verdadera para estimular al varn producir un bueno ejaculate.

Los problemas relacionados con el semen de la alpaca son su carcter mucoid nico, y motility bajo del concentracin de los spermatozoa y bajo en el ejaculate (McEvoy y otros. 1992; Bravo y Johnson 1994; Vaughan 2002). Otros problemas que deben mencionarte son la carencia de las tcnicas para almacenar el semen en la forma enfriada o congelada que discutiremos despus, la frecuencia del uso del varn y la caracterstica de la ovulacin inducida en la hembra. Mirar alrededor la frecuencia del uso de los varones, algunos papeles se ha publicado en el pasado usando un grupo pequeo de animales en Per, pero las recomendaciones pueden no ser tiles para nuestros propsitos. Generalmente hablando, los animales en los Andes tienen condicin baja del cuerpo, debido a la alimentacin exclusiva en los pastos naturales de la calidad predominante baja. Hay casi ciertamente los componentes genticos y alimenticios que definirn la frecuencia del uso de los varones, y hay muchos de investigacin de ser conducido en esta rea bajo condiciones australianas.

La ovulacin inducida observada en alpacas, como en los otros camelids, puede estar una edicin cuando se est utilizando la inseminacin artificial. El tiempo que la ovulacin ocurre en alpacas se ha estudiado antes (San Martin y otros. 1968) y se ha divulgado para ocurrir 24 h despus de acoplar natural bajo condiciones el prevalecer en los Andes. Hay otros informes sobre llamas y camellos pero stos se pueden tomar como referencias solamente. Se ha descrito antes en otras especies que se consideran los ovulators espontneos (las vacas y las ovejas), de que la poca de la ovulacin es influenciada altamente por varios factores como la estacin y el photoperiod, casta, edad, la presencia del espoln (en el caso de la oveja), las diferencias entre las multitudes, la condicin del cuerpo y los protocolos de la sincronizacin utilizaron. Ser necesario realizar un estudio bajo condiciones australianas para determinar la poca de la ovulacin en los alpacas que consideran el acoplamiento, los tratamientos de GnRH y del hCG, y poca naturales del ao tambin, para medir el tiempo la inseminacin con la ovulacin y de tal modo consigue tarifas mejores del embarazo. El ultrasonido de Transrectal se puede utilizar para este propsito como no invasor tcnica que permite la visualizacin de los ovarios y de otras estructuras, determinando la poca de la ovulacin por la desaparicin del folculo dominante, segn lo descrito en la oveja (Reyna 2005).

El transporte de la esperma en la zona reproductiva femenina se ha estudiado antes. Divulga disponible confirman que los spermatozoa alcanzan el sitio de la fertilizacin 6 h despus de que copulation en alpacas y permanecen all para hasta 30 h hasta que ocurre la ovulacin y la esperma alcanza el oocyte y ocurre el fecundation. Esto significa que la esperma est adaptada bien para sobrevivir hasta 30 h en la zona femenina. Puede ser un efecto del capacitation en el tero que hace que la esperma sigue siendo potencialmente frtil. Esto se poda relacionar con la consistencia gelatinosa del semen. Sera interesante estudiar este fenmeno porque podra ser una llave a mejorar fertilidad en la inseminacin artificial.

Resumiendo, la carencia de una tcnica confiable para recoger muestras de la calidad constantemente buena, el perodo largo del copulation, las caractersticas nicas de la esperma de la alpaca con respecto a viscosidad, motility bajo y concentracin baja, y la naturaleza de la ovulacin inducida en alpacas, hace difcil el desarrollo de herramientas biotechnological como inseminacin artificial para mejorar las manadas. Debido a las diferencias de otras especies domsticas no es deplorable posible extrapolar tecnologas actuales a los alpacas, que hace la investigacin en este campo muy desafiadora.

TCNICAS DE LA COLECCIN DEL SEMEN EN ALPACAS: Varias tcnicas se han utilizado en el pasado para recoger el semen de alpacas. Una de las primeras tcnicas usadas era condones del intravaginal (Mogrovejo 1952). El problema con esta tcnica era que no consideraba que el depsito de la esperma en alpacas es intrauterino. Copulation de un varn con una hembra que tiene un condn no dur ms de 5 minutos y el ejaculate era incompleto. Una segunda tcnica usada era electroejaculation (Fernandez-Baca 1970), pero el problema era que el semen fue contaminado generalmente con la orina, que afecta motility y puede matar a la esperma, y era agotadora para los animales y podra comprometer la vida reproductiva futura si no conducida cuidadosamente. Otra tcnica descrita era el uso de la aspiracin de la esperma de la cpula del poste de la vagina (PCSAV) (pastor 1993). Esta tcnica fue descrita como simple y econmico utilizar para obtener ejaculates de alpacas para estudiar la fisiologa del semen, pero el problema era que la muestra fue mezclada con vaginal secreciones que pueden alterar caractersticas del semen. No hay deplorable otros informes sobre la tcnica. Finalmente, la tcnica ms ltima descrita es el uso de un mannequin (hembra simulada) y de una zona reproductiva artificial (AART), que se ha divulgado para ser eficaz recoger muestras de la calidad del semen (Aller y otros. 1997; Chipana 1997; Perez 1997; Bravo 2001; Davalos y Olazabal 2002; Vaughan 2002; Huanca y otros. 2004). El problema con la calidad de la esperma obtenida por esta tcnica ms ltima es que vara en y entre los varones, hacindola dura obtener una muestra de la calidad constantemente buena necesitada para probar diverso congelar protocola. No hay explicacin para este problema, pero podra ser relacionado con el diseo del AART y de la necesidad de mejorarla para simular mejor la anatoma de la zona reproductiva de la alpaca. Por otra parte, es no slo importante seleccionar los animales para la aceptacin del mannequin, libido y tamao testicular, es tambin necesario evaluar consistencia en la produccin del semen. Estudios en el rea de congelar de la necesidad de la esperma que una tcnica confiable de la coleccin que garantiza la disposicin de razonable ejaculates del proceso experimental.

Los ensayos prcticos demostraron que el entrenamiento del varn a acoplarse con el mannequin es un procedimiento simple. Los animales que no haban sido utilizados para acoplar servicio durante algn tiempo eran afilados en el mannequin que se acoplaba y produjeron ejaculate en la primera tentativa. En cambio, los animales que haban sido utilizados regularmente para los acoplamientos naturales eran renuentes, y ellos necesitaron estmulos audio-visuales bajo la forma de hembra verdadera que era acoplada por un varn cerca cerca. Fue observado con frecuencia que algunos varones tenan dificultades que encontraban la entrada de la vagina. Otros eran incmodos al acoplar al mannequin, manifestado por un movimiento y a veces un retiro constantes del pene y estando parado para arriba por algunos segundos. Fue notado que algunos animales fueron asustados del mannequin y separados. Adems, fue encontrado que la altura trasera del mannequin era un pedacito bajo para algunos animales, y un pedazo de madera fue utilizado para aumentarlo y para dar el animal de fcil acceso al AART (cuadro 4).

Los experimentos anteriores conducidos en nuestro laboratorio sealan a la necesidad de modificar al mannequin, y especialmente al AART, para hacer el animal ms cmodo con el proceso de acoplamiento y obtener una calidad mejor del semen. Los primeros ensayos prcticos demostraron que el mannequin necesita ser reconstruido, usando un material ms suave y probablemente modificando la forma tambin. Para algunos animales toma tiempo para encontrar la entrada de la vagina y requieren a un operador conducir el pene. Otros animales encuentran la vagina, pero pueden sentirse incmodos, retirar el pene y estirar sus piernas, y despus volverse otra vez. Se parece ser una cuestin de entrenamiento tambin, pero es importante tener un diseo que simule a hembra en la posicin del copulation (cuadro 5). Tambin, el aislamiento externo se parece ser escaso cuando la coleccin se realiza al aire libre, pues el AART va de 45C al principio de la coleccin a 37C en los primeros 5 minutos, a 36.5C en 10 minutos, a 36C en 15 minutos y a 35C en 20 minutos. La manta elctrica que cubre el tubo de la coleccin se parece ser eficaz en mantener la temperatura dentro, guardando la temperatura inicial de 40C despus de 45 minutos, pero cuando fue utilizado al aire libre el 3C. perdido tubo que recoga. El nuevo diseo se ha construido y es doble aislado (interno y externo) para evitar la gota de la temperatura (cuadro 6). Sera deseable guardar el tubo de la coleccin en 37C, pues las temperaturas encima o debajo de esto afectarn el

cuadro 4: Monty que acoplaba Consuelo, un mannequin se convirti por el Dr. Jane Vaughan en el perno prisionero de la alpaca de Belbourie, parque de Wilton, NSW.

Cuadro 5: Un acoplamiento natural, inspiracin para el nuevo mannequin que est probando en nuestro laboratorio.

Cuadro 6: PC el nuevo mannequin en la postura adoptada por la hembra en el acoplamiento verdadero. La PC se ha hecho con un marco de madera y un alambre. Tiene interno aislamiento (fibra - cristal) y aislamiento externo (espuma de alta densidad) para evitar la prdida de temperatura durante el procedimiento de la coleccin.

La piel se hace con la alfombra de las lanas y es fcil de quitar para la limpieza conveniente. calidad de la esperma. Otra fuente de la prdida de temperatura del AART poda ser la vlvula del metal. Sera interesante substituir que parte por una parte plstica o la cubre con el aislamiento tambin.

El AART necesita ser modificado. Repaso de la anatoma de la hembra zona reproductiva fue encontrado que la longitud total de la zona es 28-30 centmetro entre las labias y los cuernos uterinos. La longitud del pene est entre 35-40 centmetro (Hafez 2000). Esto significa que el depsito del semen puede ocurrir en el extremo del cuerno uterino. La longitud actual del AART es solamente 25 centmetros que significa que el pene est alcanzando el tubo de cristal de la coleccin (cuadro 7). sta podra ser una causa de la variabilidad de ejaculates en el AART y podra ser ms obvia cuando la libido no es alta, causando calidad pobre del semen en coleccin. Por otra parte, la simulacin de la cerviz se est utilizando que es 4 centmetros de largo, cuando la literatura lo describe como 2-3 centmetros de largo. Las revisiones anatmicas de la zona reproductiva de la alpaca femenina describen la cerviz como teniendo 2 los dobleces anulares o espirales irregulares, y es muy importante estimular el pene correctamente para intentar imitar esta caracterstica anatmica. La idea es simular tan de cerca como sea posible la zona reproductiva del femenino para conseguir una muestra que sea igual que cuando ocurre el acoplamiento natural. Es probablemente una cuestin de mejorar el diseo de AART, o podra ser el caso que es a caracterstica normal de la especie para ejaculate la buena y mala esperma de la calidad independientemente del diseo de AART usado. Probablemente hay los animales que exhibir ms consistencia en la produccin del semen que otras. Esto necesita ser clarificada.

Cuadro 7: Zona reproductiva artificial de la alpaca actual (AART). El trazador de lneas est demostrando en blanco, con el tubo que recoge en el extremo. El aparato entero se envuelve con una manta elctrica para mantenerla caliente durante la poca de la coleccin, y se cabe dentro del mannequin.

Nuestro laboratorio est trabajando actualmente en el diseo del trazador de lneas. Tenemos 3 tipos que se probarn: el primer es recto todo alrededor con un dimetro de 4 centmetros, el segundo tiene dimetro variable (4 a 1.5 centmetros) con una imitacin de los anillos de la cerviz, y finalmente el pasado es recto todo alrededor en 1.5 centmetros de dimetro con una imitacin de los anillos de la cerviz. El ltex se est utilizando para los trazadores de lneas para el sistema de pesos americano en toros y los espolones para las dcadas pero el problema es que puede ser txico para la esperma. En el caso de estas especies, debido al patrn exclamatorio corto la esperma apenas siempre entrar en contacto con el ltex, as que no es un problema. En los alpacas, debido al proceso exclamatorio largo, la esperma estar en contacto con el ltex por ms de 20 minutos, y sta causar la muerte de la esperma o de la calidad reducida. El producto alternativo que se parece ser seguro para la esperma es grado mdico del silicn lquido (Prosil 8). Este producto viene en dos partes, A y B, que son necesarias mezclar por peso 100:50 respectivamente. La consistencia es mismo lquido y es necesario pintar los moldes con la mezcla, pero toma demasiado largo para secarse y encontramos que es necesaria poner en un horno en 120 C acelera el proceso que cura. Diez a doce capas para obtener el grueso deseable son requerido. La textura del trazador de lneas hecho por el silicn es muy lisa, extremadamente elstico y pegajoso que se siente como piel verdadera.

Resumiendo, varias tcnicas para recoger la esperma de alpacas han sido probada en el pasado y el uso de un mannequin cabido con el AART se parece ser la mejor tcnica hasta ahora. Todava hay algunas modificaciones al trabajo encendido para encontrar el mejor diseo que estar tan cerca como sea posible a la hembra verdadera. Dado estas condiciones y entrenamiento apropiado, estamos esperando tener consistencia en ejaculates obtenido de nuestros animales de experimento.

ALMACENAJE LQUIDO DE LA ESPERMA:El almacenaje lquido de la esperma es una tcnica que reduce muerte de la esperma y la degeneracin, se puede considerar como inactivacin reversible de la esperma, y se ha convertido con xito en la otra especie domstica como toros, espolones y verracos. Esto se poda alcanzar usando bajas temperaturas adentro la conjuncin con los suplementos que reducen o arrestan el metabolismo de la esperma y de tal modo prolongan su vida frtil. En comparacin con esperma congelado-deshelada, la esperma lquida del almacenaje requiere nmeros ms bajos de la esperma por la dosis del AI (Vaughan 2003). Con independencia de diluyente, de ndice de la dilusin, de temperatura o de otras condiciones del almacenaje que la esperma deteriora mientras que la duracin del almacenaje aumenta (Maxwell y Salamon 1993). Los cambios ocurrieron durante el almacenaje de la esperma, incluyendo la reduccin del motility, la reduccin de la integridad de la DNA, y los cambios morfolgicos y bioqumicos que afectan fertilidad y pueden causar el embrin mortalidad. Varios suplementos usados en los camelids y la otra especie domstica fueron examinados en un intento por prolongar la almacenaje-vida del semen de la alpaca en 4C, pero los mejores resultados indican que el motility era el 50% en 24 h y despus declinado hasta el 45% en 48 h (bravo 2001; Vaughan 2002). Hay muchos inmviles de trabajo de ser hecho en esta rea, considerando la dilusin, la temperatura del almacenaje y la longitud del almacenaje.

El almacenaje lquido de la esperma de la alpaca ser un acercamiento prctico interesante, reduciendo acoplamientos y la tensin mviles para los animales, y dando la posibilidad de maximizar el uso de uno ejaculate segn la concentracin de la esperma y el motility de la muestra.

EL CONGELAR DE LA ESPERMA:La esperma que congela ofrece las muchas ventajas del almacenamiento de larga duracin y flexibilidad del uso (Vaughan 2003). Evaluacin y seleccin genticas los programas hacen la prueba de progenie posible y son as una herramienta de gran alcance a alcanzar un funcionamiento mejor de la produccin y de la productividad de la manada nacional.

Sin embargo, uno de los problemas principales del uso del semen congelado es se durante congelar y los procedimientos el deshelar un alto porcentaje de clulas mueren como resultado de dao a la estructura de la membrana (Quinn y White, 1966). El resto de la esperma, que sobrevivi el sistema de congelacin, viabilidad perdida y demostr debilitacin de la funcin (Watson 2000). Lesin durante procedimientos que congelan es debido a la formacin de los cristales de hielo intracelulares, que interrumpen los organelles intracelulares (Watson 2000). Por consiguiente, la fertilidad despus de que el AI con frozenthawed la esperma sea ms pobre que con la esperma fresca, y sta pueden ser compensadas para usando un mayor nmero de la esperma en la dosis de la inseminacin (Watson 1995). En alpacas, como nosotros mencionamos antes, la concentracin baja de la esperma y el motility bajo en su ejaculate hace ms duro alcanzar tarifas de fertilidad comerciales sobre la inseminacin con la esperma congelado-deshelada. Desafortunadamente, podemos encontrar adentro el futuro que hay los varones excelentes que no sern convenientes para congelar de la esperma debido a la concentracin baja y al motility bajo del ejaculate. Estos animales pueden potencialmente ser utilizados para la produccin in vitro de embriones como a la cantidad reducida de esperma viva se requiere fertilizar un grupo grande de oocytes.

Sobre la coleccin de la esperma en los alpacas, debido a la naturaleza viscosa de las muestras es necesario utilizar las enzimas hidrolticas como el Trypsin o el Collagenase (bravo y otros. 2000) o utilizar el revolvimiento mecnico (Vaughan 2003) para licuefacer la esperma y facilitarla el mezclarse con el suplemento. El suplemento se requiere para proteger la esperma contra choque fro durante procedimientos que congelan. Un bueno el suplemento tiene las funciones siguientes:

Proporciona los alimentos como fuente de la energa.

Protege contra el efecto daoso de refrescarse rpido.

Asegura el pH ser mantenido (almacenador intermediario).

Mantiene la presin osmtica y el balance de electrlito.

Inhibe crecimiento bacteriano.

Aumentos el volumen del ejaculate.

Protege las clulas de la esperma durante congelar.

Hay diversos tipos de compuestos cryoprotectant como el glicerol, el glicol de etileno y el metanol. Estos compuestos pueden penetrar el citoplasma de la clula. El mecanismo de la accin de estos compuestos es descrito por a depresin del punto de congelacin. La mayor parte de los protocolos de la preservacin de la esperma utilizaron el glicerol, que fue utilizado por primera vez en 1949 por Polge y otros. Para proteger la esperma contra choque fro, la yema de huevo y un surfactant se utiliza, y se ha demostrado que la adicin del surfactant mejora poste-deshiela fertilidad en la otra especie domstica.

En el momento que, un protocolo acertado para congelar y esperma de la alpaca el deshelar todava no se ha descrito y el motility despus de deshelar va abajo a 20-40% (Bravo y otros. 2002; Valdivia y otros. 2003; Vaughan 2003). Probablemente uno de los problemas principales ser la naturaleza viscosa de la esperma de la alpaca, hacindolo duro alcanzar una mezcla homognea. Los estudios bioqumicos de la esperma seran deseable, para desarrollar un suplemento que dar un motility mejor despus el deshelar y de las tarifas de tal modo mejor de fertilidad para el AI. Sera deseable congelar la esperma epididymal de alpacas, como tiene no contiene ninguna plasma seminal para estudiar si las tarifas de la supervivencia son mejores. Si las tarifas de la supervivencia son mejores con la esperma epididymal podra indicar que el problema es el plasma seminal que las marcas l difcilmente para obtener una mezcla homognea con el suplemento y exponen la esperma al fro choque. INSEMINACIN ARTIFICIAL: Antes de que la inseminacin artificial (AI) l sea necesaria sincronizar la ovulacin en las hembras. Es importante mencionar que los alpacas son ovulators inducidos que significa que el estmulo de la cpula es necesario producir la hormona luteinising (LH) responsable de la ovulacin. Alpacas femeninos y llamas presentes perodos de la receptividad de hasta 36 das con los perodos cortos de la no-receptividad que pueden durar 2 das (Hafez 2000). La variabilidad de la receptividad sexual puede ser atribuible al grado de madurez folicular y a la produccin del oestradiol, segn lo observado en la otra especie domstica. Cuando la hembra es receptiva, la cpula causar el lanzamiento de la LH y la ovulacin ocurrir 30 h ms adelante (Bourke y otros. 1995; Bravo y otros. 1996). La receptividad sexual en la hembra no es siempre indicativa de la presencia de un folculo ovulatory que contiene un oocyte con el alto potencial y la capacidad de desarrollo del embrin normal (Bravo y otros de la fertilizacin. 1991). Esto es muy importante considerar en los programas de la inseminacin donde inducen a las hembras al ovulate con GnRH (Bourke y otros. 1995), hCG (Adn y otros. 1989), LH (Taylor y otros. 2000) o plasma seminal (Sapana y otros. 2002). Es posible que estamos induciendo la ovulacin en un folculo que todava no ha terminado su desarrollo ni ha comenzado posiblemente a regresar, y los resultados pueden ser viabilidad baja del oocyte y tarifas de fertilidad de tal modo bajas. No haba relacin significativa entre el dimetro del folculo y la poca del poste de la ovulacin que se acoplaban (Adams y otros. 1990), que indica eso incluso los folculos no maduros pueden el ovulate al mismo tiempo que los folculos maduros en el acoplamiento natural y probablemente sobre el uso hormonal. Se parece que hay una necesidad de determinar la poca ptima para los alpacas de acoplamiento segn dimetro del folculo. Probablemente un tratamiento con progesterona o progestgenos ser necesario inhibir crecimiento folicular y entonces a la hora del retiro de progestgenos todos los animales tendrn una onda folicular sincronizada y ser posible predecir el tiempo en que un folculo maduro estar presente. Esto significa que con la induccin de la ovulacin por las hormonas exgenas los oocytes lanzados sern ms competitivos y ste puede aumentar tarifas de fertilidad sobre el acoplamiento natural o la inseminacin artificial.

La inseminacin artificial en camelids del americano del sur se ha descrito antes va el recto o la laparoscopia (Calderon y otros. 1968; Fernandez-Baca 1993; Bravo y otros. 1996; Perez 1997; Aller 1998; Huanca y otros. 2004). La inseminacin artificial va el recto se realiza que introduce el lado de la mano izquierda y, sobre encontrar y estabilizar la cerviz, una pipeta se introduce en la vagina y a travs de la cerviz. Entonces, cuando se alcanza el tero, una jeringuilla que contiene la esperma est conectada en la extremidad del final de la pipeta y la esperma es el depsito ed en ambos cuernos uterinos (Bravo y otros. 1996).

Esto es una tcnica simple, pero requiere prctica y paciencia de ser convertido. Las segundas aplicaciones de la tcnica la laparoscopia del tcnica y los animales necesitan ser dados un sedativo. Entonces los animales se colocan en una horquilla con la cabeza abajo en el ngulo 60. Entonces dos incisiones de la piel se hacen craneales a la ubre en 2 centmetros del linea alba. Una cnula trocar pyramidal se inserta a la izquierda que ser substituida por el telescopio y una segunda cnula trocar se inserta a travs de la incisin derecha que es substituida por un frceps que agarra. Sobre encontrar el folculo dominante (folculo ovulatory), el frceps que agarra se substituye por una pipeta de la inseminacin que contenga la esperma en una jeringuilla en el otro extremo. Finalmente, la esperma se deposita en el cuerno uterino ipsilateral al ovario que contiene el folculo ovulatory (Bravo y otros. 1996). Las tarifas de fertilidad en alpacas sobre la inseminacin artificial transcervical que usa la esperma fresca varan a partir del 40 hasta el 67% (Bravo y otros. 1996; Bravo y otros. 1999; Huanca y otros. 2004), y en el caso de tarifas de fertilidad congelado-desheladas de la esperma vara a partir del 26 hasta el 37% (Apaza y otros. 2000; Bravo y otros. 2000). Ms investigacin necesita ser conducida para encontrar la dosis ptima y la poca de la inseminacin de rendir un embarazo mejor clasifica, pero es tambin importante considerar el protocolo y las hormonas de la sincronizacin usados para inducir la ovulacin pues stos podran afectar transporte de la esperma y capacidad del oocyte. El futuro all es muchos inmviles de investigacin de ser conducido para desarrollar la inseminacin artificial en alpacas. Primero ser necesario probar al nuevo mannequin que se ha construido para cerciorarse de que mantiene la temperatura del AART y da a varn la oportunidad de expresar por completo su comportamiento de acoplamiento y de tal modo obtener una buena calidad ejaculate. Con este fin el diseo del AART es crucial, pues es la manera que el pene ser estimulado para producir una buena calidad ejaculate. Asegurando la coleccin de un bueno ejaculate en trminos de concentracin de la esperma y el motility es el punto de partida para desarrollar un protocolo para enfriarse/la esperma de la alpaca de la helada. Es importante probar los suplementos, las pocas y las temperaturas de la esperma procesando, as como el empaquetado y la adicin de los suplementos de la novela como las enzimas y los antioxidantes que mejorarn la viabilidad de la esperma sobre deshelar. Los protocolos para la sincronizacin de la onda y de la induccin foliculares de la ovulacin necesitan ser revisados con el objetivo de encontrar la mejor respuesta ovrica, segn lo representado por el nmero de los oocytes viables que se fertilizarn sobre la inseminacin artificial. Finalmente, las tcnicas para depositar la esperma en el cuerno y la dosis uterinos de la esperma necesitan ser estudiadas ms lejos para conseguir tarifas de fertilidad ms altas.

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