Inf. Escherichia Coli
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8/12/2019 Inf. Escherichia Coli
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INTRODUCCION
El consumo de F&H frescas es parte integral de una dieta sana. Estas se encuentran
expuestas a contaminación por microorganismos patógenos antes, durante y después de
su cosecha. En la precosecha son de interés la tierra, el agua de riego, la presencia de
materia fecal animal o humana, el tipo de abono utilizado, el aire y las personas que
cuidan de la tierra de cultivo. En la poscosecha destacan la maquinaria y equipo, los
recipientes, animales domésticos o silvestres, los trabajadores, el polvo de la atmósfera ylos vehículos1. En los países en vías de desarrollo el avance económico para aliviar la
pobreza se apoya muchas veces en el sector agrícola. Este a su vez necesita garantizar que
los productos sean de alta calidad sanitaria para su consumo. De ahí la necesidad de
capacitación especializada y generación de información relevante sobre los peligros
microbiológicos como condición para ajustarse a las normas que establecen organismos
internacionales [Codex Alimentarius de la Organización para la Agricultura y la
Alimentación y la Organización Mundial de la Salud (FAO/WHO)].
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I. OBJETIVOS
1. Determinar la bacteria Escherichia Coli en una muestra de apio.
2. Comprobar si esta muestra está en el límite permisible de acuerdo a la
Resolución Ministerial.
II. FUNDAMENTO TEORICO
ESCHERICHIA COLI
La Escherichia coli también conocida por la abreviación de su nombre, E. coli, es quizás elorganismo procariota más estudiado por el ser humano. Se trata de un entero
bacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales, y por ende en
las aguas negras, pero se lo puede encontrar en todos lados, dado que es un organismo
ubicuo.
Esta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso
digestivo, además de producir las vitaminas By K. Es un bacilo que reacciona
negativamente a la tinción de Gram (gramnegativo), es anaerobio facultativo, móvil
por flagelos periticos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz
de fermentar la glucosa y la lactosa.
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AGAR MULLER HILTON
Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba de sensibilidad
a los antimicrobianos. Además es útil con el agregado de sangre para el cultivo y
aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.
El Clinical and LaboratoryStandardsInstitute (CLSI), ex
NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards (NCCLS), recomendó su uso en forma
rutinaria para la realización del antibiograma en medio sólido, debido a una serie de
factores que se detallan a continuación: presenta buena reproducibilidad lote a lote en las
pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y
tetraciclina es bajo, la mayoría de los patógenos crece satisfactoriamente y una gran
cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo.
Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es útil para realizar las pruebas desensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos.
Resultados
Consultar en la sección “prueba de sensibilidad a los antimicrobianos”, la metodología
apropiada.
Notas:
1-Los lotes de agar MuellerHinton Britania cumplen con las normas descriptas en el
documento M6 - P del NCCLS: ¨Evaluatingproductionlots of dehydratedMuellerHinton
agar¨. Esto es muy importante pues algunos lotes pueden variar significativamente y si las
bacterias no crecen adecuadamente, las zonas de inhibición en las pruebas de difusión son
generalmente más grandes, quedan fuera de los límites de control de calidad y pueden
dar resultados erróneos.
2-Los medios que contienen cantidades excesivas de timidina o timina pueden revertir el
efecto inhibitorio de las sulfonamidas y trimetoprima, produciendo así zonas de inhibición
más pequeñas y por lo tanto informes de falsa resistencia. Para evaluar el contenido de
timidina del lote de agar MuellerHinton, se prueba la cepa de control de calidad:
Enterococcusfaecalis ATCC 29212 frente a discos de TMS. En un medio satisfactorio, se
produce una zona clara de inhibición de 20 mm o más.
3-Otro aspecto de cuidado en el control de calidad en el agar MuellerHinton es que las
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variaciones en cationes divalentes principalmente calcio y magnesio pueden afectar los
resultados con tetraciclina, polimixina y aminoglucósidos cuando se ensayan cepas de
Pseudomonasspp. Por tal motivo, se deben cumplir los límites de control de calidad
publicados por el NCCLS.
4-Los resultados deben ser cuidadosamente observados con todos los organismos de
control para evitar datos aberrantes debido al medio de cultivo. Para aquellas cepas que
fallan de crecer satisfactoriamente sobre Agar MuellerHinton no suplementado, se agrega
sangre desfibrinada de carnero al agar fundido y enfriado, a una concentración final al 5%
(v/v).
Para el control de precisión y exactitud del agar de MuellerHinton se usan las siguientes
cepas control:
S. aureus ATCC 25923
E. coli ATCC 25922
P. aeruginosa ATCC 27853
E. faecalis ATCC 29212
Para evaluar el desempeño de inhibidores de beta lactamasa, se utiliza la cepa control:
E. coli ATCC 35218
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IV. PARTE EXPERIMENTAL
1. Preparar 500ml de una solución salina 0.7 %
2. Pesar 10g de la muestra de apio. Colocar en una bolsa ziploc y adicionar 90ml de la
solución salina.3. Reducir la concentración de la muestra, llevando 1ml de esta en 9ml de solución
salina.
4. Nuevamente reducir la concentración levando 0.1 ml en 1 ml de solución salina.
5. Calentar en baño María el agar CITRATO en 250 ml de agua hasta fusión.
6. Colocar 1ml del inocuo (muestra) en una placa Petri e inmediatamente adicionar
entre 15- 20 ml del agar fundido.
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7. Homogenizar y dejar enfriar
8. Colocar en el incubador a 37°C por 48 horas y observar los resultados.
9. Hacer el experimento por duplicado y colocar la segunda incubación a 25°C.
V. RESULTADOS
No se detectó Salmonella ni E. coli en la muestra de apio, sin embargo E. coli estuvo
presente en un porcentaje de los materiales asociados, principalmente en guantes.
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XIV. FRUTAS, HORTALIZAS, FRUTOS SECOS Y OTROS VEGETALES
XIV.3. Frutas y hortalizas frescas semiprocesadas (lavadas, desinfectadas, peladas
y/o cortadas) refrigeradas y/o congeladas.
Agente Microbiano Límite por g
m M
Escherichia Coli 10 102
INFORME DE ENSAYO
ANALISIS: MICROBIOLÓGICO DE APIO
LUGAR: LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
FECHA DE MUESTREO: 20/05/14
FECHA DE EJECUCIÓN: 23/05/14
RESULTADOS MICROBIOLÓGICOS
ENSAYOS / MANIPULADORAPIO
(Hortalizas frescas)LIMITE PERMISIBLE
(*) DECTECIÓN
Escherichia Coli - 10 – 102
(*)RM 591-2008 MINSA, “Criterios Microbiológicos de Calidad Sanitaria e Inocuidad de los Alimentos y
Bebidas de Consumo Humanos“
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VI. CONCLUSIONES
1. No se llegó a determinar colonias en la muestra de apio por el agar incorrectoque trajo el grupo N° 1
VII. RECOMENDACIONES
1. Se recomienda al grupo responsable de traer el agar incorrecto (GRUPO N°1)
investigar con profundidad, para no tener percances en la identificación de
bacterias que es el objetivo principal.
2.
Se recomienda usar el Agar MuellerHinton para la identificación de E. Coli.
3. Trabajar en un ambiente lo más estéril posible, flameando el área de trabajo.
4. Operar en la siembra y lectura con las implementaciones de seguridad (gorro,
guantes y mascarillas).
5. Desechar como residuo sólido todo lo que se haya utilizado en la siembra y
lectura del agente microbiano (bolsa ziploc y los implementos de seguridad);esterilizar todo el material de vidrio utilizado.
VIII. FUENTES REFERENCIALES
1. http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/muellerhintonagar.htm
2. http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/embagar.htm
3. http://es.wikipedia.org/wiki/escherichia-coli