Журнальный клуб: 2 ОАПБ руководитель д.м.н. Тетруашвили Н.К.

ДОКЛАДЧИК: асп. БУЛАТОВА Ю.С. Кристаллы мочевой кислоты индуцируют воспаление в плаценте и нарушают функцию трофобласта через интерлейкин-1 ассоциированный механизм: взаимосвязь с задержкой роста плода

IF=5.287 (2015 Journal Citation Reports)

Актуальность исследования

• Доказана роль воспалительного процесса в реализации многих осложнений беременности: преждевременных родов, задержки роста плода, преэклампсии

• Описано не только воспаление, обусловленное инфекционными агентами, но и асептическое воспаление, в результате воздействия так называемых DAMPS или аларминов, одним из которых является мочевая кислота

• Мочевая кислота, накапливаясь в периферической крови беременной, является индуктором воспалительных реакций и триггером патологий гестации

DAMPs – Damage Associated Molecular Patterns ПФАП – Провоспалительные Факторы, Ассоциированные с Повреждением

Воспалительные ПФАП индуцируют образование инфламмасомы и секрецию IL-1β, IL-18

Shao et al. 2016/ NLRP3 inflammasome and inhibitors

Воспалительные ПФАП индуцируют образование инфламмасомы и секрецию IL-1β, IL-18

Shao et al. 2016/ NLRP3 inflammasome and inhibitors

Цель исследования: • Исследовать воздействие кристаллов мочевой кислоты

на воспалительный ответ в плаценте, нарушение ее функций и формирование задержки роста плода

Исследование состояло из 2 этапов: I. Экспериментальная модель– введение мочевой кислоты и исследование воспалительных изменений в плаценте при ЗРП у крыс (проведено в Канаде) • Крысы линии Спрэгли Доули одного помета возраста 5 месяцев • 12 часовой день/ночь цикл при 20°С и неограниченном доступе к воде/еде • В опыт взяты 6/6 контрольных и опытных животных на 13 (из 21) день датированной

беременности • Опытным животным каждые 12 часов с 17 по 21 день беременности

интраперитонеально вводили мочевую кислоту в ФБ 100, 250 и 500 µг/кг • Контрольным животным вводили ФБ (фосфатный буфер) или оксанат калия (блокатор

уриказы) • В экстрактах плаценты определяли цитокины (IL-1β, TNFα, IL-6) (ELISA), на срезах

плаценты методом иммуногистохимии определяли IL-1β и CD68+ клетки, измеряли массу новорожденных крысят, определяли 5 процентиль.

• Для статистического анализа и выявления различий между группами применяли one-way ANOVA

Повышение уровня провоспалительных цитокинов в плаценте крыс при интраперитонеальном введении

мочевой кислоты

Синдром задержки развития плода у крыс при интраперитонеальном введении мочевой кислоты

Контроль Мочевая кислота

CD68+

Уровень интерлейкина-1β в плаценте крыс при интраперитонеальном введении мочевой кислоты

• II. Исследование плацент (n=9), полученных в результате родов путем планового кесарева сечения при неосложненной беременности (Великобритания (Манчестер), США (Йельский Университет)

• Экспланты плацент (в трех повторах) культивировали 4 дня при 37°С , 5% СО2 и обрабатывали

мочевой кислотой 100µг/мл 24-48 часов • 24 часа - 4% формалин, парафин, 5µм срезы, Гематоксилин+иммуногистохимия • Лизаты фрагментов культивированных эксплантов плаценты использовали для определения уровня цитокинов (ELISA, вестерн блот) • Методом центрифугирования в градиенте плотности выделяли клетки первичной культуры

цитотрофобласта (цитокератин7+) и анализировали прижизненно методом иммуноцитохимии после инкубации с 100µг/мл 24-48 часов

Активация каспазы-1 при инкубации эксплантов плаценты с мочевой кислотой

Увеличение уровней: Интерлейкина -1β в 18 раз Интерлейкина – 6 в 143 раза Интерлейкина – 10 Интерлейкина – 17 Интерферона – γ ФНО-α Уровни интерлейкина – 8, гранулоцитарно-макрофагального ксф не подверглись изменениям

Инкубация клеток плаценты с мочевой кислотой в течение 48 часов

Апоптоз клеток цитотрофобласта под воздействием кристаллов мочевой кислоты и IL-1

Выводы: - Кристаллы мочевой кислоты вызывают воспаление и дисфункцию плаценты, что приводит к задержке роста плода. - эффекты кристаллов мочевой кислоты реализуются через

интерлейкин-1 ассоциированный механизм и индуцируя воспаление и апоптоз.

- данная работа показывает, что введения провосполительного фактора, ассоциированного с повреждением, приводит к плацентарным нарушениям и задержке роста плода

0

200000

400000

600000

800000

1000000

6 9 12 15 33

Инт

енси

внос

ть, о

тн.е

д.

Неделя гестации

норма

привычный выкидыш

угроза

VDAC1

0

200000

400000

600000

800000

1000000

1200000

1400000

1600000

6 9 12 15 33

Неделя гестации

TFAM

Содержание митохондриальных DAMPs в экзосомах из плазмы крови беременных женщин 6-33 недель

гестации

Исследование выполнено в лаборатории митохондриальной медицыны, Руководитель к.б.н. Высоких М.Ю.

Благодарю за внимание