HPV – Cervical Project and Protocols in Gabon

Durban, South Africa

Dr N. Berthet et Dr I.H. Koumakpayi

CERVICAL CANCER IN GABON, CENTRAL AFRICA: WHICH STRATEGIES FOR A BETTER

MEDICAL CARE?

Pamela Moussavou, Hervé Koumakpayi, Dieudonné Nkoghe, Antoine Gessain,

Eric Leroy, Ernest Belembaogo and Nicolas Berthet

Centre International de Recherches Médicales de Franceville, Franceville, Gabon Institut de Cancérologie de Libreville, Libreville, Gabon Institut Pasteur, Paris, France Centre National de la Recherche Scientifique, Paris, France UMR MIVEGEC, Institut de Recherche pour le Développement (IRD), Montpellier, France

Source: Mark Schiffman et al Cancer Res 2010

BR

HR

ALPHA GAMMA

BETA

Type: souche présentant une différence de séquence nucléotidique du gène L1 de 10 % par rapport à tout les type de HPV connu

150 types de HPV identifiés

40 types de HPV infectent la sphère génitale

3

Introduction

Tableau: Classification épidémiologique et phylogénique des types HPV

Toutes ces données sont basées sur les études menées dans les pays développés

Classification phylogénétique

Classification épidémiologique

High-risk

Low-risk

High-risk

16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 82, 26, 53,

66

70

Low-risk

73 6, 11, 40, 42, 43, 44, 54, 61, 72, 81,

4

Introduction

human Papillomavirus

Petit virus épithéliotropes

non-enveloppé, une capside icosaédrique

Un double brin d’ADN circulaire de 8kb

Huit (8) protéines: Early (E) et Late (L)

Biologie du virus

5

Introduction

6

Transmission par contact direct peau à peau ou muqueuse à muqueuse

La persistance de l’infection au Papillomavirus humain (HPV) de Haut-risque (HR-HPV)

90% Régression

Evolution, 10 à 20 ans

Evolution vers une infection HR dans 3 à 10% des cas

Co-facteurs: -Type viral -Terrain immunologique -Comportement sexuel -Utilisation de contraceptif -Tabagisme

Introduction

Epidemiological data on cervical cancer

Epidemiological data on cervical cancer

Epidemiological data on cervical cancer in Gabon women

Epidemiological data on cervical cancer in Gabon women

11

Epidémiologie moléculaire

Moyens de prévention

Deux vaccins ont une AMM en France:

– le vaccin quadrivalent [HPV 6, 11, 16, 18] Gardasil®, AMM le 20 septembre 2006;

– le vaccin bivalent [HPV 16, 18] Cervarix®, AMM le 20 septembre 2007.

Il n’y a pas de recommandation pour ces vaccins au Gabon.

Pays Souches dominantes

Maroc HPV 16 (13,7%) HPV 18 (8,9%) HPV 31 (3,2%)

Afrique du sud HPV 83 (2,6%) HPV 53 (2,2%) HPV 16 (2,0%)

Zimbabwe HPV 58 (5,0%) HPV 16 (4,7%) HPV 70 (2,7%)

Congo HPV 68 HPV 35 HPV 51

Gabon HPV 53 (12%) HPV 58 (11%) HPV 16 (10%)

France HPV 16 (3,6%) HPV 53 (1,4%) HPV 6 (1,0%)

Espagne HPV 16 (17,8 %) HPV 31 (12,8%) HPV 52 (12,4%)

Japon HPV 52 HPV 16 HPV 51

USA HPV 16 HPV 52 HPV 53

Rational

Rational

Problématique Peu d’études en Afrique centrale

Méthodologies divers : PCR conventionnel, qPCR, cyto/histopathologie

Taille et qualité de l’échantillonnage

Peu d’information sur la variabilité moléculaire des souches circulant au Gabon et en Afrique centrale

Les vaccins disponible ciblent 2 et 4 souches spécifiques

Aucune recommandation sur la vaccination au Gabon

Développement d’une plateforme de diagnostic des HPV (Transfert

technologique)

Mise en place de campagnes de dépistage dans différentes populations du Gabon

(urbaines, rurales et forestières reculées)

Caractérisation des génotypes qui circule dans la population gabonaise et vivant

au niveau du basin du Congo

Intégration de cette plateforme dans un réseau global au niveau des principaux

instituts de recherche situés en Afrique Central et francophone.

Objectives

CIRMF : Dr N. Berthet (50%), Expert Technique International – co-coordination

P. Moussavou, PhD student (100%) – screening HPV

A. Nkili, M2 student (100%) – analyse bioinformatique

Dr D. Knoghe, chef de service URAM – coordination des campagnes de dépistage

Institut de Cancérologie de Libreville : Dr I.H. Koumakpayi (50%) - Mise en place des dépistages et dépistage

Pr E. Belembaogo

Hôpital Universitaire d'Angondje : Service de Gynécologie Obstétrique Pr Jean-François Meye et Dr Jacques Albert Bang

HIA OBO (Hôpital des Instructions des Armées - Omar Bongo Ondimba) : Pr Jerome Miloundja (ORL)

Dr Corinne Engohan (Anatomie et Cytologie Pathologique)

HUCL (Hôpital Universitaire Central de Libreville) : Dr Nathalie Ambounda

Personnes impliquées

Organization of screening campaigns in Gabon

HPV Project design

Ethic

Committee

and Health

Authority

Other

Involved

Persons

Population Urban – Rural –

Remote Forest

Screening

campaigns

Investigations

cytological,

virological and

biological

Samples Bloods and Cervical

smears

16

Prélèvement d’échantillon

Le prélèvement des cellules du col de l'utérus à l’aide du kit de prélèvement

ThinPrepMD ( flacon de 20 ml)

16 ml Analyse anatomo-pathologie Biomnis

2 ml Analyse de biologie moléculaire Institut Pasteur

Analyse morphologique des modifications épithéliales liées

aux HPV

Détection d’un panel de 24 types 18 HPV-HR 6 HPV-LR

Méthodologie

• Réalisation des frottis cervicaux lors des campagnes de dépistage

• Conservation sur place puis transfert dans les différents laboratoires impliqués

- Analyses biologiques de base

- Analyse cytologique dans un laboratoire privé

- Investigations virologiques

• Investigations virologiques

- Recherche des principaux génotypes d’HPV

- Détermination de la séquence du génome

Méthodologie : Aspect généraux

• Investigations virologiques

- Recherche de 24 génotypes d’HPVs (18 Haut Risque et 6 Bas Risque) avec le kit Papillocheck.

- Système de détection se basant sur une association d’une PCR ciblée sur le gène L1 et d’une puce à

ADN pour la révélation des amplicons.

Séquençage des génomes HPV

- Séquençage à haut-débit pour déterminer la ou les séquences des génomes HPV présent dans les

échantillons. Plateformes HTS (MiSeq) et analyses bioinformatique disponible au CIRMF.

- Sélection des frottis à séquencer par HTS en priorité avec en fonction des résultats des analyses

cytologiques (cancer et de lésions HSIL, LHSIL et ASCUS).

Détermination séquences des génomes d’HPV.

Recherche d’autres génotypes non recherchés avec le kit PC.

Méthodologie : Investigations virologiques

• Période : 2014-2015,

• 4000 à 5000 femmes

Méthodologie : Nombre attendus

Données sociodémographiques

Résultats des analyses d’anatomo-pathologie

Résultat de génotypage par le kit Papillocheck

En cours…

Résultats

• Développement de différents aspects techniques pour

l’investigation virologique :

(i) Plateforme de diagnostic basée sur la trousse commerciale Papillocheck (ICL)

(ii) Développement et validation d’outils spécifiques (qPCR) sur les principaux

génotypes qui auront été mis en évidence (CIRMF-ICL)

(iii) Plateformes de séquençage et analyse bioinformatique pour investigation

virologique plus poussée (CIRMF)

• Mise en commun des compétences de chaque institut

• Suggestion d’intégration dans le réseau francophone des HPV

(i) Création un ou deux centres de références au niveau des différentes sous-région

du réseau

(ii) Mise en commun des techniques, d’un transfert de technologies et protocoles

entre partenaires

Conclusions (I)

• Encourager le génotypage du HPV dans les lésions

précancéreuses et cancéreuses du col de l’Utérus en Afrique

Francophone;

• Harmoniser les méthodologies afin de pouvoir comparer les

études

• Emettre des recommandations au terme des études.

Conclusions et Suggestions (II)