- LPS

+ LP

S

0.50

0.75

1.00

1.25

1.50

Tratamento

DO

595

nm

Figura 7. Determinação da viabilidade celular, por ensaio de MTT, do cultivo

de células dendríticas estimulados, ou não, com lipopolissacarídeo (LPS).

Figura 9. Taxa de fagocitose das esferas – FITC por células dendríticas

cultivadas em diferentes tratamentos.

Est – Estufa; Sk – Agitação.

37o C E

st

37o C S

k0o C

60o C

Negat

ivo

0

25

50

75

100

Tratamentos

% d

e F

ago

cito

se

0 h

24 h

48 h

72 h

0.0

0.5

1.0 CD normaisDsDIIredPCDna 3.1/RHO

Tempo de cultivo

DO

595

nm

Figura 11. Determinação da viabilidade celular, por ensaio de MTT, de células

dendríticas transfectadas com DsDIIred ou pcDNA3.1/RHOct em diferentes

tempos de cultivo.

0.0

0.5

1.0normaleffectene 1:25effectene 1:12,5effectene 1:10

24h de cultivo

DO

595

nm

Figura 12. Determinação da viabilidade celular, por ensaio de MTT, de células

dendríticas transfectadas com DsDIIred em diferentes concentrações do

reagente de transfecção effectene.

Figura 3. Clonagem do fragmento RHOct no vetor pcDNA 3.1+.

Observamos um gel de agarose 1% corado com brometo de etídeo contendo

padrão 100 pares de base (1); fragmento RHOct (2) purificado da digestão de

PCR2.1/RHOct com BamHI; plasmídeo pcDNA 3.1+ (3) digerido com BamHI;

produtos da amplificação por PCR do plasmídeo pcDNA 3.1/RHOct usando os

primers RHOctF e RHOctR (4), RHOctF e BGHR (5); produtos da digestão com

BamHI do plasmídeo pcDNA 3.1+/RHOct.

1 2 3 4 5 6

1 2 3 4 5 6 7

Figura 2. Clonagem do fragmento RHOct no vetor PCR2.1 topo.

Evidencia-se um gel de agarose 1% corado com brometo de etídeo;

Observamos o padrão de 100 pares de base (1), reações de PCR realizadas

com os plasmídeos pBlueScript/SmAST03 (2) e PCR2.1/RHOct (3-6) usando

os primers RHOctF e RHOctR (2 e 3), M13R e M13U (4), RHOctF e M13U (5),

RHOctR e M13R (6) e os produtos da digestão do plasmídeo PCR2.1/RHOct

com a enzima de restrição BamHI (7).

Figura 8. Fagocitose apresentada por células dendríticas cultivadas na

presença de esferas de látex conjugadas a isotiocianato de fluoresceína

(FITC).

Observa-se, em microscopia de confocal, (A) Célula dendrítica em luz

transmitida no aumento de ........ X. (B) Fluorescência das esferas – FITC em

consequência da incidência do laser a ........ nm. (C) Imagem sobreposta de A

e B, a fluorescência das esferas – FITC coincide com a região citoplasmática

da célula dendrítica.

A B

C

Figura 10. Célula dendrítica cultivada após transfecção com plasmídeo

DsDIIred.

Observa-se, em microscopia de confocal, uma célula dendrítica (A) em luz

transmitida no aumento de ......X. (B) Fluorescência emitida pela proteína

RFP em consequência da incidência do laser a ....... nm. (C) Imagem

sobreposta de A e B, a fluorescência da RFP coincide com a região

citoplasmática da célula dendrítica.

C

A B