CATECOLAMINAS EN

ORINAS

Lic. T. M. Carlos N. Ortega Tumay

H.N.E.R.M.-ESSALUD

FEOCROMOCITOMA

Es una neoplasia neuroendocrina de las células cromafines que

biosintetizan, almacenan, metabolizan y secretan

concentraciones elevadas de

catecolaminas.

PREVALENCIA

La incidencia es de 2 a 8 casos por millón de

habitantes.

Es mas frecuente entre la cuarta y quinta década

de la vida.

La prevalencia en la población hipertensa es

de 0.2 – 0.4 %.

La frecuencia del feocromocitoma es de 75%

intradrenal y el 9.0-23% desarrolla en tejido

extrarrenal y se denomina paraganglioma.

ETIOLOGÍA

Manifestaciones clínicas

La hipertensión arterial elevada sostenida es el síntoma mas común .

Presenta la triada sintomática cefalea, diaforesis y palpitaciones

Nerviosismo y ansiedad.

Rubor y tremor.

Dolor toraccico.

Nauseas y vomitos

Polidipsia y vertigos.

METODOS PARA DOSAJE DE

METANEFRINAS

Cromatografía de intercambio iónico

Determinación de Metanefrinas urinarias

Fundamento: Las metanefrinas contenidas en la muestra son retenidas por una resina de intercambio catiónico. Una vez eliminada las interferencias por lavado, se eluyen las metanefrinas y se cuantifican espectrofotométricamente

como vanillina después de una oxidación con periodato en medio alcalino.

Reactivos:

1.-Buffer Bis-tris 0,4 mol/l

2.-Reactivo 2 Amoniaco 4 mol/L

3.-Microcolumnas de 2x20 de intercambio catiónico equilibradas

4.-Reactivo B, periodato de sodio 0,12 mol/l

5.-Reactivo C, metabisulfito de sodio 0,67 mol/l

6.-Patron de Normetanefrina 100 mg/L.

Equipos y materiales necesarios:

Baño de María de agua hirviente

Espectrofotómetro para lectura a 360 nm.

Pipetas automáticas 50, 100 y 200 ul

Tubos de Vidrio Pírex de 15 x 150

Tubos de Vidrio de 13 x 100

Tubos de vidrio 12 x 75

Punteras celestes y amarillas

Agua destilada

Requisitos de la Muestra:

Orina de 24 horas

Previa dieta : 3 días antes no ingerir carotenos,

chocolates, café ni te no tomar aldomet.

Conservar la orina acidificada a pH < 3,0.

Estable a 4º por 15 días y a -20º por 30 días.

Centrifugar o filtrar antes de la determinación.

Procedimiento 1.-Pipetear en un tubo de ensayo pyrex de 15 x 150, 5 ml del espécimen.

2.-Ajustar el pH del espécimen entre 0,7 y 0,9 con acido clorhídrico

concentrado.

3.-Incubar en un baño de agua hirviente por 20 minutos.

4.-Enfriar con agua corriente.

5.-Añadir 5 ml de Buffer tris 0,4 mol/L.

Corrida de la cromatografía

6.-Destapar la micro columna, romper la lengüeta inferior y bajar el filtro

hasta el nivel de la resinar evitando comprimirla. Dejando pasar todo el

sobrenadante. Desechar el eluido. (Nota 1).

7.-Verter el contenido de la muestra tratada y desechar el eluido.

8.-Lavar el tubo con 3 ml de agua destilada y verterlo en la micro columna y

desechar el eluido.

9.-Añadir a la columna agua destilada 10 ml y desechar el eluido.

10.-Añadir a la columna el reactivo 2 Amoniaco y recoger el eluido.

10.-Agitar bien el eluido.

Colorimetría: Pipetear en tubos de ensayo

B. RVO. B. PATRON PATRON B. MX. MX.

Eluido - - - 2 ml 2 ml

Patron - 0,1 ml 0,1 ml - -

Rvo. 2 2 ml 1,9 ml 1,9 ml - -

Rvo. C - 0,05 ml - 0,05 ml -

Agitar bien y añadir

Rvo. B 0,05 ml 0,05 ml 0,05 ml 0,05 ml 0,05 ml

Agitar bien y dejar reaccionar durante 2 minutos a temperatura

ambiente 20° a 30°

Rvo. C 0,05 ml 0,05 ml 0,05 ml 0,05 ml 0,05 ml

Agitar bien y leer la absorbancia a 360 nm la rxn esteble por 60 min

Cálculos:

Luego de simplificar la concentración de volúmenes usados en la formula

al final obtenemos:

Ao Muestra - Ao Bco. Muestra x 7,65 = mg/L

Ao Patrón - Ao Bco. Patrón

Finalmente la Cantidad de Metanefrinas en la orina de 24 horas se calcula

de la siguiente formula:

Metanefrina en mg/l x Vol. De orina 24 hrs. en Litros= mg. Metan./24 Hrs

Valores de Referencia:

Hasta 1 mg de metenefrina / 24 horas

Análisis del Método

Soporte : columna de plástico de 20 cm

Fase estacionaria: partículas resina ionizadas.

Fase Móvil: El Buffer tris, agua y amoniaco.

Revelador: Por espectrometría. Se forma vanillina

en el eluido como producto de la oxidación de las metanefrinas con el periodato en medio alcalino y se mide a 360

CORTISOL LIBRE URINARIO

Lic. T. M. Carlos N. Ortega Tumay

H.N.E.R.M.-ESSALUD

GENERALIDADES

El cortisol se secreta por la corteza adrenal, junto con la aldosterona y las

hormonas sexuales.

Sigue un ritmo circadiano determinado por la ACTH hipofisaria, que a su

vez regula la secreción de glucocorticoides.

Los más altos se presentan aproximadamente de 6 a 8 a.m y los más bajos

alrededor de la media noche.

La secreción cuantitativa de glucocorticoides puede evaluarse mediante

el cortisol libre urinario cuando existe una sospecha de

hipercortisolismo. Evalúa la fracción activa no unida a proteínas.

La alteración del ritmo circadiano del cortisol plasmático y el aumento de

la eliminación de cortisol son marcadores de enfermedad del eje hipotá-

hipófiso-adrenal.

Para descartar hipercortisolismo es necesario realizar tres determinaciones.

Entre un 8-15 % de pacientes con Síndrome de Cushing sus valores son

normales

METODOS PARA DOSAJE DE CLU

Cortisol Urinario

Electroquimioluminiscencia.

Mx. Orina de 24 Horas.

Valores Referenciales: 12-103 ug/24 Horas

Pacientes con Valores de 120-300 debe hacerse diagnostico diferencial

con pseudo-Cushing.

>300 diagnostico de sindrome de Cushing.

Nota: interferencias proteinas >10 g/dl.

Cortisol libre urinario

RIA

Mx orina de 24 horas

Valores referenciales de 10-90 ug/ 24 hrs

El CLU no varia con la edad, es independiente del peso

El 1% de cortisol es secretado por la orina