Cours equation henri michaelis menten briggs haldane constante catalytique vmax km lineweaver Burk...
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13/3/2015 CoursequationhenrimichaelismentenbriggshaldaneconstantecatalytiquevmaxkmlineweaverBurkDixonHanesWoolfEnzymologieEnseigne
http://biochimej.univangers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/2Cours2/1Cours2.html 1/13
L'quation de Henri - Michaelis - Menten / L'quation de Briggs - Haldane
8Jaime
1.L'enregistrementdelacintiquedelaractionenzymatique
2.Vitessed'apparitionduproduit
3.Lamesuredelavitesseinitialedelaractionenzymatique
4.Conditionsdeconcentrationsensubstratpourlesmesuresdecintiquesenzymatiques:[S0]>>[E0]
5.L'hypothseduquasiquilibre:l'quationdeHenri,MichaelisetMenten(1913)
6.L'hypothsedel'tatstationnairedelaconcentrationducomplexeES:l'quationdeBriggsHaldane(1925)
7.Lasignificationdesparamtrescintiques:a.Laconstantedevitessek2ouconstantecatalytiquekcatb.Laconstantedevitessek2c.LavitessemaximaledelaractionVmaxd.LaconstantededissociationKSetlaconstantedeMichaelisKMe.Lerapport(kcat/KM)ouconstantedespcificit
8.Lesreprsentationsgraphiques
1. L'enregistrement de la cintique de la raction enzymatique
L'enzymologieestunedisciplinequiparatbiensouventthoriqueet,eneffet,desmodlessontdveloppspourrendrecomptedelacomplexitetdeladiversitdesractionsenzymatiques.
Cependant,lesquationsquisontmanipuless'appliquentl'analysededonnesexprimentales:lesvaleurs des vitesses d'une raction enzymatique mesuresdansdiversesconditions(deconcentrationsdesubstrat,enprsencedemolculesquiaugmententoudiminuentlavitesse,diffrentspH,...).
Lacintique d'une raction enzymatiqueestlavariationenfonctiondutempsdelaconcentrationdemolcules(substratsetproduitsdelaraction).
L'enregistrementdecettecintiqueimpliquequecesmolculespossdentdespropritsphysicochimiquesquipermettentdelesdtecterdemanirequantitative:
mesuredel'absorbance(relation de Beer-Lambert)mesuredel'missiondefluorescencecomptagedunombrededsintgrations aprs marquage radioactif...
2. Vitesse globale d'apparition du produit
Considronslemcanismeleplussimplepourdcrire:
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lafixationdusubstratsurl'enzymelibrelaformationducomplexe ES non covalent(complexede Michaelis - Menten).laformationduproduitPavecrelarguagedel'enzymelibre
E+Sk1
k1
ESk2
k2
E+P
Pardfinitionlavitessedelaractionestlavariationdelaconcentrationdusubstratoucelleduproduitenfonctiondutemps.
Lesignemoinsindiquequel'entitdisparat.
v=
d[S]=dt
d[P]dt
Audbutdelaractionenzymatique,iln'yaquelesubstratetpasdeproduit.
Ilestprfrable,dupointdevuedelaprcision,demesurer la vitesse d'apparition du produitquecelledeladisparitiondusubstrat.Eneffet,onmesureplusprcismentunefaibleaugmentationdelaconcentrationduproduit(puisquel'onpartdezro),qu'unefaiblediminutiondelaconcentrationdusubstrat(quiest"norme"audbutdelaraction).
L'quationdelavitesseglobalelielaconcentrationduproduitestlasommedesvitessesdeformationetdedisparitionduproduit:
v=
d[P]=dt
(k2.[ES])(k2.[E][P])
3. La mesure de la vitesse initiale de la raction enzymatique
RappelonsqueHenri, Michaelis et Mentenontdveloppleurthorieunepoque(1913)ol'onnedisposaitpasdemoyensdecalculsusceptiblesd'approcherfacilementlessolutionsdecettequationdiffrentielle.
Poursimplifierl'quationglobale,ilestncessairedefaireunepremireapproximation(toutfaitjustifie):onconsidrequ'ilexisteuntempssuffisammentcourtpendantlequellaquantit,donclaconcentration,duproduit form est ngligeable.Remarque :ngligeablenesignifiepasnulle,sinononn'auraitaucunsignaldtctpourenregistrerlacintique.
Puisqueleterme[P]estngligeable,leterme(k-2 . [E] [P]) l'estaussi.Remarque :celnesignifiepasquelaconstantedevitessek-2estnulleoungligeable(onnesaitrienpriorisursavaleur).
L'quationdelavitesseglobaledeformationduproduitestsimplifie:
vi=
d[P]=dt
k2 . [ES](rel.1)
Dupointdevueexprimental:
ontracelatangente l'origine delacintique:cettetangentecorrespondlaportion dela cintique que l'on estime linaire.Cetteestimationvisuelledpenddel'exprimentateur.lapentedelatangentel'originedelacintique(d[P]/dt)s'appellelavitesse initiale dela raction enzymatique,vi.
http://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/2Cours2/2FIGURES/22TraceVitInit.htmhttp://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/1COURS1/111Cours.html#ComplexeES
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4. Conditions de concentrations en substrat pour les mesures de cintiques enzymatiques : [S0] >>[E0]
Uneconditionsupplmentairepouraboutirl'quationdeHenri, Michaelis et Mentenestd'effectuerdesmesuresdecintiquesavecuneconcentrationinitialedusubstrat[S0]beaucoupplus grandequelaconcentrationinitialedel'enzyme[E0]etce,pourtouteslesconcentrationsensubstrattudies.
Ainsi,avantlaractionenzymatique,lemilieuractionnelcontientuneconcentrationinitialeconnuedesubstrat[S0]etondclanchelaractionenajoutantl'enzymeuneconcentrationinitialeconnue[E0].
Maisdsl'additiondel'enzyme,lemilieuractionnelcontient:
l'enzymelibre(quin'apasragiaveclesubstrat)uneconcentrationinconnue[E]lesubstratlibreuneconcentrationinconnue[S]lecomplexeenzymesubstratuneconcentrationinconnue[ES]etleproduitdontlaconcentration[P](dterminetousmoments)estngligeablepuisquel'onenregistrelacintiqueenconditiondevitesse initiale
Encequiconcernelesubstrat,laloideconservationdesespcesmolculairess'crit:
[S0]=[S]+[ES]+[P]
Laconcentrationduproduittantngligeable: [S0]=[S]+[ES]
Puisque:[S0]>>[E0],laconcentrationmaximaleducomplexeenzymesubstrat[ES]estlimiteparlaconcentrationinitialedel'enzyme:
[ES]max=[E0]
Enconsquence: [S0]>>[ES]
Finalement,onpeutconsidrertousmomentsdelaractionquel'ona:
[S0]#[S](rel.2)
5. L'hypothse du quasi quilibre : l'quation de Henri, Michaelis et Menten (1913)
Voir une traduction de leur article original (1913)
Henri V. (1903) "Lois gnrales de l'action des diastases" Hermann, ParisMichaelis L. & Menten M. L. (1913) "Die Kinetik der Invertinwirkung" Biochem. Z. 49, 333 - 369
http://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/2Cours2/3OriginalMMpaper.pdf
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Maud Menten(18791960)
Leonor Michaelis(18751949)
Cesauteursontfaitl'hypothsequedsl'additiondel'enzyme,ils'tablitunquilibre rapide entre les formes libres de l'enzyme et dusubstrat(EetS)et le complexe enzyme-substrat(ES),appelcomplexedeMichaelisMenten:
E+Sk1
k1
ES
OndfinitlaconstantededissociationKS(constantemacroscopique)quilielaconcentrationdescompossimpliqusdanscetquilibre:
[E].[S]=[ES]
k1=k1
KS
Cequipermetd'exprimerlaconcentrationde[ES]quiestinconnuetoutmomentdelaraction: [ES]=
[E].[S]KS
Quipeuttreexprimeenfonctionde[S0](rel.2): [ES]=[E].[S0](rel.3)KS
Lesrelations(1)et(3)permettentd'crire: vi=(k2.[E])
.
[S0]()(rel.4)KS
Pourl'enzyme,laloideconservationdesespcesmolculairess'crit:
[E0]=
[E]+[ES]
Enremplaant[ES]parsonexpressionenfonctionde[E](rel.3):
[E0]=
[E]+[E].[S0]()KS[S0]
http://en.wikipedia.org/wiki/Maud_Mentenhttp://bip.cnrs-mrs.fr/bip10/jbiosci.htm
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===> [E0]=
[E]. (1+)KS
===> [E]=
[E0][S0](1+)KS
Enremplaant[E]parcettenouvelleexpressiondanslarelation(4):
vi=
(k2.[E0]).
[S0]()KS[S0](1+)KS
EnmultipliantnumrateuretdnominateurparKS:vi=
(k2.[E0]).
[S0]()KS+[S0]
Quandlaconcentrationinitialedusubstratesttrsgrande,c'estdirequand[S0]>>KS,leterme
[S0]()
KS+[S0]tendvers1.
Lavitesseinitialemesurepourcetteconcentrationinitialedesubstrattendversunevaleurmaximale:Vmax=k2.[E0]
OnaboutitlarelationdeHenriMichaelisetMenten:
vi=Vmax.[S0]()KS+[S0]
Termecatalytique(asymptote)fonctiondesaturation(hyperbole)
6. L'hypothse de l'tat stationnaire de la concentration du complexe ES : l'quation de Briggs -Haldane (1925)Cesauteursontdveloppunequationplusgnrale.Ilsontmontrqu'ilnes'tablitpasforcmentunquilibrerapidepourtouteslesenzymesentrelesformeslibresdel'enzymeetdusubstrat(EetS)etlecomplexeenzymesubstrat(ES).
Aprsuncertaindlai,appeltatpr-stationnaire,c'estlaconcentrationducomplexeESquiestconstante:cetteconcentrationestditel'tat stationnaire.
E+Sk1
k1
ESk2
k2
E+P
Celsignifiequesi[ES]=constante,lesvitessesglobales:
http://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/2Cours2/2FIGURES/4ComplementsTHEORIE/11evolSEPES.htm
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deformationducomplexeESpartirdusubstratetpartirduproduit:(k1.[E].[S0])+(k2.[E][P])
dedisparitionducomplexeESpourreformerlesubstratouformerleproduit:(k1.[ES])+(k2.[ES])
sontgales.
Onavuquesilesmesuresdecintiquessontfaitesenconditiondevitesseinitiale,leterme(k2.[E][P])estngligeable.Enconsquence,l'galitdesvitessesdeformationetdedisparitions'crit:k1.[E].[S0]=(k1+k2)[ES]
===> [E].[S0]=k1+k2().[ES](rel.5)k1
Laloideconservationdesespcesmolculairesappliquel'enzymepermetd'crire: [E]=
[E0][ES]
Enremplaant[E]parcettenouvelleexpressiondanslarelation(5):
([E0][ES]).[S0]=
k1+k2().[ES](rel.6)k1
Ondfinitunenouvelleconstantemacroscopique,laconstante de Michaelis-Menten :
k1+k2KM=
k1
Larelation(6)s'crit:([E0].[S0])([ES].[S0])=
KM.[ES]
===>[ES].(KM+[S0])=
[E0].[S0]
===> [ES]=[S0][E0].()KM+[S0]
Enmultipliantlesdeuxtermesdel'galitpark2:
k2.[ES]=[S0](k2.[E0]).()KM+[S0]
Puisque:
vi=k2.[ES](rel.1)
Vmax=k2.[E0]
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OnaboutitlarelationdeBriggs -Haldane:
vi=Vmax.
[S0]()KM+[S0]
Terme
catalytique(asymptote)
fonctiondesaturation(hyperbole)
7. La signification des paramtres cintiques
a. La constante de vitesse k2 ou constante catalytique kcat
k2estuneconstantedevitessedupremierordre(ractionmonomolculaire)dontl'unitest:s-1.C'estdoncl'inversed'untempsouunefrquence:lafrquencelaquellel'enzymeaccomplitl'actecatalytique(ou"turn-over").
C'estlaraisonpourlaquellecetteconstanteestappeleconstante catalytiqueoukcat.
L'unitofficielled'activitenzymatiqueestlekatal(kat):c'estlaquantitd'enzymequicatalyselatransformationde1moledesubstratparseconde.
b. La constante de vitesse k-2
Laconstantedevitessek-2traduitlapossibilitphysiqued'unemmeenzymecatalyserlaractionrverse.Cen'estpassystmatiquementlecas.
Exemplesd'enzymesquicatalysentuneractiondanslesdeuxsens:
Lathermolysine(EC 3.4.24.27)estunemetalloprotasequicatalysel'hydrolyse de laliaison peptidiqueimpliquantdesacidesaminshydrophobes:Leu/Ile/Phe/Trp/TyretVal.Lacoupuresefaitavantcesacidesamins.Elleestaussiutilisepoursonaptitudecatalyserlaractionrverse:laformationdelaliaisonpeptidique.Cycle de Calvin:laphosphorylationparl'ATPdu3phosphoglycrateen1,3diphosphoglycrateparla3phosphoglycratekinase(47kDa).Cetteenzymecatalyselaractionrversedanslaglycolyse.Lesenzymesquicatalysentlesractionsauvoisinagedel'quilibredanslaglycolysesontlesmmesdanslanoglucognse.
Al'inverse,silaractionesttrsexergonique(Gglucose6phosphate+ADP
glucose-6-phosphatase EC 3.1.3.9
glucose6phosphate+H2O>glucose+Pi
http://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/7RelStructFonction/2Biochimie/3MetabolismGlucose/3Neoglucogenese/1Neoglucogenese.htmhttp://www.expasy.org/uniprot/P19367http://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/Zsuite/3BiochMetab/4Glycolyse/1Glycolyse.htmhttp://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/1VELATPOxRedNAD/1VELATP.htm/111VELATP.htmlhttp://www.uniprot.org/uniprot/P00800http://www.expasy.org/uniprot/P35575http://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/1COURS1/111Cours.html#MecaCatalDetailhttp://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/Zsuite/2Photosynthese/7CycleCALVIN/1CycleCALVIN.htmhttp://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/7RelStructFonction/6Proteases/2Proteases/1Proteases.htm
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phosphofructokinaseE.C. 2.7.1.11
fructose6phosphate+ATP>fructose1,6
bisphosphate+ADP
fructose-1,6-bisphosphatase EC 3.1.3.11
fructose1,6bisphosphate+H2O>fructose6
phosphate+Pi
pyruvate kinaseE.C. 2.7.1.40
phosphonolpyruvate+ADP>pyruvate+ATP
pyruvatecarboxylaseEC 6.4.1.1
PEPcarboxykinase EC 4.1.1.32
pyruvate+HCO3+ATP>oxaloactate+ADP+Pi
oxaloactate+GTP>phosphonolpyruvate+GDP
+CO2
c. La vitesse maximale de la raction Vmax
Lavitessemaximaled'uneractionenzymatiqueestunevitesse initiale thorique:c'estl'asymptotedel'hyperboleobtenuelorsquel'onreporte:vi=f([S0]),quel'onappellelacourbede saturation.
Ellenepeutdonctrephysiquementmesurepuisqu'ellecorresponduneconcentrationdesubstratinfinie.Savaleurnepeuttrequ'approche:
dansunpremiertempsparlamesured'activitenprsencedeconcentrationstrsgrandesdesubstrat([S0]>>KM).dansunsecondtemps,parextrapolationdesdonneesexprimentalesuneconcentrationinfiniel'aidedereprsentationsgraphiquescommecelle,parexemple,ditedesdouble inverseoureprsentationdeLineweaver & Burk.Ilexisted'autresreprsentationsquipermettentdetracerunedroiteaulieud'unehyperbole.
Remarque 1 : onappellecourbedesaturationlareprsentationvi=f([S0])parcequepluslaconcentrationinitialedusubstratestleve,plusilyademolculesd'enzymequifixentunemolculedesubstrat:l'enzymeestsatureparlesubstrat.
Remarque 2 : quellequesoitlaconcentrationdusubstrat,[S0]>>[E0].Enconsqeunce,mmesiellen'estpassaturante,laconcentrationdusubstratesttoujoursenexcs.
Remarque 3 :Vmaxpeuttrecalculel'aidedelarelation:Vmax=kcat.[E0].Cependant,ilfautconnatrelavaleurdekcatquinepeuttredterminequesil'onaestimunevaleurde...Vmax!
d. La constante de dissociation KS et la constante de Michaelis KM
danslarelationdeHenri - Michaelis et Menten,laconstanteest:
k1KS=k1
danslarelationdeBriggs - Haldane,laconstanteest:
k1+kcatKM=
http://www.expasy.org/uniprot/P09467http://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/2Cours2/ParametresCINET/1LinewBurk.htmhttp://www.expasy.org/uniprot/P0A796http://www.expasy.org/uniprot/P30613http://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/2Cours2/ParametresCINET/1LinewBurk.htmhttp://www.expasy.org/uniprot/P94448http://www.expasy.org/uniprot/P35558
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http://biochimej.univangers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/2Cours2/1Cours2.html 9/13
k1
Cettediffrencetraduitdeuxmcanismestrsdiffrents:
Dansl'hypothse du quasi-quilibre,lavaleurdelaconstantedevitessekcatesttrsinfrieurek1.LecomplexeESsedissociedoncplusfrquemmentenrelarguantlesubstratlibrequ'ilnesubitl'actecatalytique.
L'affinitestl'aptitudequ'ontdeuxmolculess'associeretKSestuneconstantededissociationdoncl'inversed'uneconstanted'association.Enconsquence,KStraduitvritablement l'affinitd'uneenzymepourunsubstrat.
Voir un complment sur le quasi-quilibre
Dansl'hypothse de l'tat stationnaire,lecomplexeESsedissocieaussisouventenEetSqu'ilesttransformenproduit.
k1etkcatsontdesconstantesdevitessedupremierordre(ractionmonomolculaire)dontl'unitest:s1k1estuneconstantedevitessedusecondordre(ractionbimolculaire)dontlesunitssont:[mol.L1.s1]ou[M.s1]Enconsquence,lesunitsdeKMsont:(s1+s1)/(M.s1)=(s1)/(M.s1)=M
KMestdonclaconcentration en substratpourlaquellelavitesseinitialemesureestgalelamoitidelavitesseinitialemaximaleVmax.
Voir un complment sur l'tat pr - stationnaire
e. Le rapport (kcat / KM) ou constante de spcificit
1er cas:uneenzymequifixerait"facilement"unsubstratmmepourdefaiblesconcentrations(KMfaible)pourraitcatalysertrslentementlaraction(kcatfaible).
2me cas:inversement,uneenzymequineseraitsaturequ'defortesconcentrationsdesubstrat(KMlev)pourraitaccomplirtrssouventl'actecatalytique(kcatleve).
Onvoitdoncquel'unoul'autredecesdeuxparamtresnepermettentpasdecaractriserl'efficacitrelled'uneenzyme.Ilfautlafoisunefixationdusubstratdefaiblesconcentrationsetunecatalysefrquente:c'estdonclerapport (kcat / KM)quirefltel'efficacitd'uneenzymecatalyseruneraction*.
Onremarquequelavaleurmaximaledurapport(kcat/KM):
kcat=KM
kcatk1.()k1+kcat
estobtenuequand:kcat=1k1+kcat
http://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/2Cours2/2FIGURES/4ComplementsTHEORIE/444QuasiEquil.htmhttp://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/2Cours2/2FIGURES/4ComplementsTHEORIE/22EtatPREstation.htm
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Lalimitedurapport(kcat/KM)estdonclaconstantedevitessed'association[enzymesubstrat],k1.
Laconstantek1aellemmepourlimitelavitesse de diffusion des macromolculesdanslemilieuractionnel(108109M.s1).C'estlecas,parexemple,delatriose phosphate isomrasedelaglycolyse.
Enzyme KM (M) kcat (s-1) kcat / KM (M-1. s-1)
Chymotrypsine 1.5102 0.14 9.3
Pepsine 3.0104 0.50 1.7103
Tyrosyl-tRNA synthtase 9.0104 7.6 8.4103
Ribonuclase 7.9103 7.9102 1.0105
Anhydrasecarbonique 2.6102 4.0105 1.5107
Fumarase 5.0106 8.0102 1.6108
*Pourtenircomptedel'ajustement de la conformation de l'enzymeinduitparlafixationdusubstrat,certainsauteursexprimentlaconstantedespcificitdelafaonsuivante:K1.k2,soitleproduitdelaconstantedevitessedudeuximeordre(fixationdusubstratetformationdeES)parlaprobabilitque,unefoisfix,lesubstratleresteetformeleproduit.
Johnson K.A. (2008) "Role of induced fit in enzyme specificity: a molecular forward/reverse switch"J Biol Chem. 283, 26297-26301
8. Les reprsentations graphiques
Ilestvidentqu'au21mesicle,lesprogrammesdecalculspermettentd'analyserdirectementlesdonnesenenzymologie.Cependant,lesreprsentationsgraphiquessontimportantesdupointdevuedidactique.Ellessontfacilesfaireavecuncrayon,unergleetunefeuilledepapier.
Leprincipedecesreprsentationsgraphiquesestdetransformerl'quationdeBriggs -Haldane(oudeHenri, Michaelis et Menten),pour1ouplusieurs substrats,enprsenceounond'inhibiteurs,afind'obtenirl'quationd'unedroite.
a. ReprsentationdeHans Lineweaver & Dean Burk(1934)ditedesdoublesinverses.
Lineweaver & Burk (1934) "The Determination of Enzyme Dissociation Constants" J. Am. Chem. Soc.56, 658 - 666
vi
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2546551/http://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/7RelStructFonction/2Biochimie/1SyntheseProteines/1SyntheseProt.htm#AARNtSynthhttp://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/Zsuite/1Respiration/Z999suite/2CycleKREBS/1CycleKrebs.htmhttp://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja01318a036http://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/Zsuite/3BiochMetab/4Glycolyse/1Glycolyse.htm#TrioPIsasehttp://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/1COURS1/111Cours.html#ComplexeEShttp://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/2Cours2/ParametresCINET/1LinewBurk.htmhttp://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/3CoursINHIBITEURS/1CoursInhibition.htmhttp://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/4DeuxSUBSTRATS/1Cours2SUBSTRATS.htmhttp://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/7RelStructFonction/6Proteases/2Proteases/1Proteases.htmhttp://persos.estat.com/statistiques/audience/20900984735
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L'quationdeBriggs - Haldane(oudeHenri, Michaeliset Menten)s'crit:
=Vmax
[S0]KM+[S0]
Eninversant:
Vmax=vi
KM+[S0][S0]
Soit:
Vmax=vi
KM+11
Etendivisantlesdeuxmembresdel'galitparVmax:
1=vi
KM+1Vmax
Onobtientl'quationd'unedroite:1=vi
KM11.+Vmax[S0]Vmax
Sil'onreprsente:1=vi
1f()[S0]
KMOnobtientunedroite de pente:Vmax
1dontl'ordonne l'origineest:Vmax
1etlepoint d'intersection avec l'axe des abcissesest:KM
avantage:lesvariablesreportessurlesaxessont indpendantes.
inconvnient:ladviationparrapportlalinaritestplusprononcequepourlesautresreprsentationssurtoutpourlesfaiblesconcentrationsensubstrat.
b. ReprsentationdeGeorge Eadie & Baren Hofstee:vi=f(vi/[S0])
vivi=KM.+Vmax[S0]
avantage:lespointsdugraphiqueontunpoidsquivalentquellequesoitlagammedeconcentrationsoudevitessesinitiales.
inconvnient:lesvariablesreportessurlesaxesne sont pas indpendantes.Touteerreurexprimentalessurladterminationdeviestreportesurl'axedesabcisses.
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13/3/2015 CoursequationhenrimichaelismentenbriggshaldaneconstantecatalytiquevmaxkmlineweaverBurkDixonHanesWoolfEnzymologieEnseigne
http://biochimej.univangers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/2Cours2/1Cours2.html 12/13
CettereprsentationestaussiappelereprsentationdeWoolfEadieAugustinssonHofstee.
c. ReprsentationdeCharles Hanes & Barnet Woolf :[S0]/vi=f([S0])
Inconvnient:lesvariablesreportessurlesaxesnesont pas indpendantes.
[S0][S0]KM=+viVmaxVmax
d. ReprsentationdeGeorge Eadie & George Scatchard:vi/[S0]=f(vi)
Inconvnient:lesvariablesreportessurlesaxesnesont pas indpendantes.
viviVmax=+[S0]KMKM
e. ReprsentationdeRobertEisenthal & Athel Cornish-Bowden :graphelinairedirect(1974)
L'axedesabcissescorrespondKMetl'axedesordonnescorrespondVmax.
onreportelavaleur"ngative"dechaqueconcentrationensubstratsurl'axedesabcissesonreportelavaleurcorrespondantedechaquevitesseinitialemesuresurl'axedesordonnesontracelesdroitespassantparcescouplesdevaleurs
LeurpointdeconcourranceapourcoordonnesKMetVmax,respectivement.
Source :Eisenthal & Cornish-Bowden (1974)
"The direct linear plot. A new graphical procedure for estimatingenzyme kinetic parameters" Biochem. J. 13, 715 - 720
avantage:permetdedterminerlesmeilleuresvaleursestimesdesparamtrescintiques.
inconvnient:pastrsadaptedanslecasdeplusieurssubstrats.
f. ReprsentationdeDixon (enprsenced'inhibiteurs):1/vi=f([I0])pourchaqueconcentrationensubstrat.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1166335/http://biochimej.univ-angers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/3CoursINHIBITEURS/1CoursInhibition.htm
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13/3/2015 CoursequationhenrimichaelismentenbriggshaldaneconstantecatalytiquevmaxkmlineweaverBurkDixonHanesWoolfEnzymologieEnseigne
http://biochimej.univangers.fr/Page2/COURS/4EnzymologieLicence/2Cours2/1Cours2.html 13/13
Elleestutilisequandl'interactionentrel'enzymeetl'inhibiteurestplus complexequ'uneinhibitioncomptitiveouuneinhibitionnoncomptitiveclassiques.
Dixon, M. (1953) "The determination of enzyme inhibitor constants" Biochem J. 55, 170 - 171
http://biochimej.univ-angers.fr/FluxRss.xmlhttp://validator.w3.org/check?uri=refererhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1269152/