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Este documento pertenece al INECC-CCA citar como: INECC-CCA, (2010). MANUAL DE MÉTODOS ANALITICOS DE LOS COMPUESTOS ORGANICOS PERSISTENTES

PARA LAS MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME. México, p. 222.

NORTH AMERICAN COMMISSION FOR ENVIRONMENTAL COOPERATION (NACEC)

DESARROLLO DE LOS PROTOCOLOS BASE PARA EL PROGRAMA NACIONAL DE

MONITOREO Y EVALUACIÓN (PRONAME)

ANEXO 3 DEL REPORTE FINAL

MANUAL DE MÉTODOS ANALITICOS DE LOS

COMPUESTOS ORGANICOS PERSISTENTES PARA LAS MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME

L A B O R A T O R I O S A B C

QUÍMICA INVESTIGACIÓN Y ANÁLISIS S.A. DE C.V.

Revisión 3.5 Febrero 2012



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CONTENIDO

1.0 INTRODUCCIÓN

2.0 OBJETIVOS

3.0 MÉTODOS ANALÍTICOS

3.0.1 ESTRUCTURA DE LOS MÉTODOS

3.1 PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS (POCs) 3.1.1 Aplicación y Alcances 3.1.2 Resumen 3.1.3 Procedimientos de extracción y purificación de muestras

3.1.3.1 Interferencias generales 3.1.3.2 Seguridad general 3.1.3.3 Matrices

3.1.3.3.1 Aire Ambiente 3.1.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales epicontinentales y subterráneas) 3.1.3.3.3 Suelos 3.1.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales) 3.1.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos animales

3.1.3.3.5.1 Tejidos y Alimentos con Alto Contenido de Grasa (> 2% Grasa)

3.1.3.3.5.1.1 Leche 3.1.3.3.5.1.2 Queso, Yema de Huevo o Huevo

Deshidratado 3.1.3.3.5.1.3 Mantequilla 3.1.3.3.5.1.4 Hígado 3.1.3.3.5.1.5 Tejido graso

3.1.3.3.5.2 Alimentos con bajo contenido de grasa 3.1.3.3.5.2.1 Alta humedad y azucares bajos (>75%

agua < 5% azucares) 3.1.3.3.5.2.1.1 Lechuga, etc. 3.1.3.3.5.2.1.2 Huevo entero

3.1.3.3.5.2.2 Alta humedad, azucares intermedios (>75% agua y 5-15% azucares)

3.1.3.3.5.2.3 Alta humedad azucares altos (>75% agua <15-30% azucares)

3.1.3.3.5.2.4 Alimentos Secos con Baja humedad (≤75 % agua)

3.1.3.3.6 Sangre Humana 3.1.3.3.7 Leche Materna



3

3.1.4 Método de identificación y cuantificación instrumental 3.1.4.1 Aplicación y Alcances 3.1.4.2 Resumen 3.1.4.3 Equipos y Materiales 3.1.4.4 Reactivos y materiales de referencia 3.1.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo 3.1.4.6 Calibración 3.1.4.7 Procedimiento analítico 3.1.4.8 Desempeño del método 3.1.4.9 Tablas y figuras

3.2 BIFENILOS POLICLORADOS (PCBs)

3.2.1 Aplicación y Alcances 3.2.2 Resumen 3.2.3 Procedimientos de extracción y purificación de muestras


3.2.3.3.1 Aire Ambiente 3.2.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales epicontinentales y subterráneas) 3.2.3.3.3 Suelos 3.2.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales) 3.2.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos animales








3.2.3.3.5.2.4 Alimentos secos con baja humedad (≤75 % agua)

3.2.3.3.6 Sangre Humana 3.2.3.3.7 Leche Materna



4

3.2.4 Método de identificación y cuantificación instrumental

3.2.4.1 Aplicación y Alcances 3.2.4.2 Resumen 3.2.4.3 Equipos y Materiales 3.2.4.4 Reactivos y materiales de referencia 3.2.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo 3.2.4.6 Calibración 3.2.4.7 Procedimiento analítico 3.2.4.8 Desempeño del método 3.2.4.9 Tablas y figuras

3.3 HIDROCARBUROS POLIAROMÁTICOS (HPAs), CLORDECON Y PENTACLOROBENCENO

3.3.1 Aplicación y Alcances 3.3.2 Resumen 3.3.3 Procedimientos de extracción y purificación de muestras


3.3.3.3.1Aire Ambiente 3.3.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales epicontinentales y subterráneas) 3.3.3.3.3 Suelos 3.3.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales) 3.3.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos animales








3.3.3.3.5.2.4 Alimentos Secos con Baja humedad (≤75 % agua)

3.3.3.3.6 Sangre Humana



5

3.3.3.3.7 Leche Materna

3.3.4 Método de identificación y cuantificación instrumental 3.3.4.1 Aplicación y Alcances 3.3.4.2 Resumen 3.3.4.3 Equipos y Materiales 3.3.4.4 Reactivos y materiales de referencia 3.3.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo 3.3.4.6 Calibración 3.3.4.7 Procedimiento analítico 3.3.4.8 Desempeño del método 3.3.4.9 Tablas y figuras

3.4 BIFENILOS POLIBROMADOS (PBBs) y BIFENILOS POLIBROMADOS ETER (PBDEs)

3.4.1 Aplicación y Alcances 3.4.2 Resumen 3.4.3 Procedimientos de Extracción y Purificación de muestras


3.4.3.3.1 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales epicontinentales y subterráneas) 3.4.3.3.2 Suelos 3.4.3.3.3 Sedimentos (marinos y epicontinentales) 3.4.3.3.4 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos animales,

3.4.3.3.4.1 Tejidos y alimentos con grasa (≥ 2% Grasa) 3.4.3.3.4.1.1 Leche 3.4.3.3.4.1.2 Queso, Yema de Huevo o Huevo

Deshidratado. 3.4.3.3.4.1.3 Mantequilla 3.4.3.3.4.1.4 Hígado 3.4.3.3.4.1.5 Tejido Graso

3.4.3.3.4.2 Alimentos con Bajo Contenido de Grasa 3.4.3.3.4.2.1 Alta humedad azucares bajos (> 75%

agua < 5% azucares)

3.4.3.3.4.2.1.1 Lechugas, etc. 3.4.3.3.4.2.1.2 Huevo entero

3.4.3.3.4.2.2 Alta humedad azucares intermedios (>75% agua y 5-15% azucares)

3.4.3.3.4.2.3 Alta humedad azucares altos (> 75% agua <

15-30% azucares)

3.4.3.3.4.2.4 Alimentos secos con baja humedad (≤ 75%

agua)

3.4.4 Método de Identificación y Cuantificación Instrumental 3.4.4.1 Aplicación y Alcances 3.4.4.2 Resumen



6

3.4.4.3 Equipos y Materiales 3.4.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia 3.4.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo 3.4.4.6 Calibración 3.4.4.7 Procedimiento Analítico

3.5 ACIDO PERFLUOROCTANICO SULFONICO (PFOS) Y SUS SALES,

3.5.1 Aplicación y Alcances 3.5.2 Resumen 3.5.3 Procedimientos de Extracción y Purificación de muestras


3.5.3.3.1 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales epicontinentales y subterráneas) 3.5.3.3.2 Suelos y Sedimentos 3.5.3.3.3 Alimentos procesados, sin procesar, organismos y tejidos animales

3.5.3.3.3.1 Tejido graso e hígado 3.5.3.3.3.2 Alimentos procesados y sin procesar

3.5.4 Método de identificación y cuantificación instrumental 3.5.4.1 Aplicación y Alcances 3.5.4.2 Resumen 3.5.4.3 Equipos y Materiales 3.5.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia 3.5.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo 3.5.4.6 Calibración 3.5.4.7 Procedimiento Analítico

3.6 METALES Y METALOIDES (Excepto Mercurio)

3.6.1 Aplicación y Alcances 3.6.2 Resumen 3.6.3 Procedimientos de Digestión de muestras


3.6.3.3.1Aire Ambiente 3.6.3.3.2 Aguas superficiales epicontinentales y subterráneas. 3.6.3.3.3 Aguas marinas, estaurinas y de lagunas costeras. 3.6.3.3.4 Suelos 3.6.3.3.5 Sedimentos (marinos y epicontinentales) 3.6.3.3.6 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos animales. 3.6.3.3.7 Sangre Humana 3.6.3.3.8 Leche Materna

3.6.4 Método de identificación y cuantificación instrumental 3.6.4.1 Aplicación y Alcances



7

3.6.4.2 Resumen 3.6.4.3 Equipos y Materiales 3.6.4.4 Reactivos y materiales de referencia 3.6.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo 3.6.4.6 Calibración 3.6.4.7 Procedimiento analítico

3.7 MERCURIO

3.7.1 Aplicación y Alcances 3.7.2 Resumen 3.7.3 Procedimientos de extracción y digestión de muestras


3.7.3.3.1 Aire Ambiente 3.7.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras,

superficiales epicontinentales y subterráneas) 3.7.3.3.3 Suelos 3.7.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales) 3.7.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos

animales 3.7.3.3.6 Sangre Humana 3.7.3.3.7 Leche Materna

3.7.4 Método de identificación y cuantificación instrumental 3.7.4.1 Aplicación y Alcances 3.7.4.2 Resumen 3.7.4.3 Equipos y Materiales 3.7.4.4 Reactivos y materiales de referencia 3.7.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo 3.7.4.6 Calibración 3.7.4.7 Procedimiento analítico



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1.0 INTRODUCCIÓN La problemática de la medición analítica de los Compuestos Orgánicos Persistentes y de los metales y metaloides tóxicos en matrices complejas como son las ambientales, se incrementa cuando se utilizan métodos analíticos no estandarizados, ya que muchos de los métodos publicados en la bibliografía científica no cuentan con los sustentos de validación necesarios o no los publican para que otros técnicos o científicos los puedan utilizar confiablemente. No solo por que no tengan los datos de desempeño completos, sino que en muchas ocasiones tienen defectos en su redacción lo que los hace poco robustos. Un método estandarizado no solo consiste en que haya sido probado y validado por varios laboratorios competentes, sino que sea entendido por todos de la misma forma, en eso consiste la robustez de un método analítico, que tenga un formato uniforme y que todos los que lo lean, entiendan lo mismo. Los métodos analíticos se clasifican en: 1.- Métodos primarios: Son métodos de la más alta calidad metrológica, cuya operación está completamente descrita y entendida en términos de las unidades SI y cuyos resultados son aceptados sin referencia a un patrón de la misma cantidad (Gravimetría, Volumetría, Espectrometría de masas con dilución isotópica, etc.). 2.- Métodos Racionales o No Empíricos: Son métodos estandarizados perfectamente caracterizados para una matriz específica, expresados usualmente en masa o fracción mol y en principio cualquier efecto sistemático debido al sesgo del método o de la matriz debe ser corregido, aunque es mas usual que éstos sean mínimos, normalmente el resultado del mensurando no depende del método utilizado (p.ej. Contenido de Níquel en una aleación). 3.- Método Empíricos: Son métodos en los cuales el resultado del mensurando depende del método utilizado (p. ej. Grasas y Aceites en aguas residuales), normalmente son métodos acordados para propósitos de mediciones comparativas dentro de un particular campo de aplicación, donde el mensurando depende característicamente del método utilizado. En estos métodos no se pueden utilizar correcciones por sesgo del método o de la matriz y los resultados del mensurando se deben referir al método utilizado. En el caso de los análisis del medio ambiente, las variaciones del sustrato y de la matriz tienen efectos significativos y desconocidos (p. ej. No existen 2 aguas residuales industriales o dos suelos o dos residuos peligrosos exactamente iguales), por lo que los métodos analíticos que se utilizan, se consideran en este rubro. Los métodos que se utilizan para la medición de metales, metaloides , Plaguicidas Organoclorados, los Hidrocarburos Poliaromáticos, los Bifenilos Policlorados, los PBDEs y los PFOS son de tipo Racional, por lo que teóricamente, sin importar la técnica que lo conforme, debe dar resultados comparables dentro de las incertidumbres que cada método tenga. Sin embargo, existen factores intrínsecos en cada método como son las columnas analíticas en el caso de las separaciones cromatográficas, la respuesta de los detectores utilizados, los procedimientos de



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extracción y limpieza de las muestras y los procedimientos de calibración que hacen que los resultados analíticos puedan ser muy diferentes. El propósito de la redacción de los métodos analíticos de este manual es precisamente tener en un formato uniforme los métodos para determinar los COPs y los metales y metaloides que se desean analizar en el PRONAME a partir de referencias estandarizadas y validadas, en todos los métodos que se presentan se proporcionan los datos de desempeño y validación como guía para los usuarios y las especificaciones de control de calidad necesarias para proporcionar resultados analíticos confiables y comparables.



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2.0 OBJETIVOS Contar con los métodos analíticos estandarizados y con sus datos homologados de desempeño y control de calidad para determinar las Sustancias Persistentes y Bioacumulables, dentro de los cuales se incluyen a los Compuestos Orgánicos Persistentes en un formato uniforme para que sean utilizados por los integrantes del PRONAME.



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3.0 MÉTODOS ANALÍTICOS En el presente capítulo se presentan los métodos de extracción, purificación y determinación cualitativa y cuantitativa de los analitos abarcados en este proyecto. 3.0.1 ESTRUCTURA DE LOS MÉTODOS Cada uno de los métodos desarrollados en el presente manual, tiene referencias específicas de métodos estandarizados y validados por Instituciones extranjeras o internacionales ampliamente reconocidas, solamente se modificó el formato para hacerlos uniformes y se incluyeron datos sobre el desempeño del método, en algunos casos de otras referencias que lo han utilizado. El formato de los métodos es el siguiente:

3.X.1 Aplicación y Alcances

3.X.1.1 Propósito 3.X.1.2 Analitos 3.X.1.3 Matrices 3.X.1.4 Limitaciones

3.X.2. Resumen 3.X.3 Procedimientos de extracción y purificación de muestras

3.X.3.1 Interferencias generales 3.X.3.2 Seguridad general 3.X.3.3 Matrices

3.X.3.3.1 Aire Ambiente 3.X.3.3.1.1 Equipo y materiales 3.X.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia 3.X.3.3.1.3 Procedimientos de Extracción 3.X.3.3.1.4 Procedimientos de Purificación de Muestras

3.X.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales epicontinentales y subterráneas),

3.X.3.3.2.1 Equipo y materiales 3.X.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia 3.X.3.3.2.3 Procedimientos de Extracción 3.X.3.3.2.4 Procedimientos de Purificación de Muestras

3.X.3.3.3 Suelos 3.X.3.3.3.1 Equipo y materiales 3.X.3.3.3.2 Reactivos y Materiales de Referencia 3.X.3.3.3.3 Procedimientos de Extracción 3.X.3.3.3.4 Procedimientos de Purificación de Muestras

3.X.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales) 3.X.3.3.4.1 Equipo y materiales 3.X.3.3.4.2 Reactivos y Materiales de Referencia



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3.X.3.3.4.3 Procedimientos de Extracción 3.X.3.3.4.4 Procedimientos de Purificación de

3.X.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos animales

3.X.3.3.5.1 Equipo y materiales 3.X.3.3.5.2 Reactivos y Materiales de Referencia 3.X.3.3.5.3 Procedimientos de Extracción 3.X.3.3.5.4 Procedimientos de Purificación de Muestras

3.X.3.3.6 Sangre humana 3.X.3.3.6.1 Equipo y materiales 3.X.3.3.6.2 Reactivos y Materiales de Referencia 3.X.3.3.6.3 Procedimientos de Extracción 3.X.3.3.5.4 Procedimientos de Purificación de Muestras

3.X.3.3.7 Leche Materna. 3.X.3.3.7.1 Equipo y materiales 3.X.3.3.7.2 Reactivos y Materiales de Referencia 3.X.3.3.7.3 Procedimientos de Extracción 3.X.3.3.7.4 Procedimientos de Purificación de Muestras

3.X.4.0 Método de identificación y cuantificación instrumental 3.X.4.1 Aplicación y Alcances

3.X.4.1.1 Matrices 3.X.4.1.2 Limitaciones

3.X.4.2 Resumen 3.X.4.3 Equipo y Materiales 3.X.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia 3.X.4.5 Control de calidad y especificaciones de aceptación y rechazo

3.X.4.5.1 Verificación del Equipo 3.X.4.5.2 Verificación de la calibración inicial 3.X.4.5.3 Verificación de la contaminación de reactivos 3.X.4.5.4 Verificación del lote analítico 3.X.4.5.5 Verificación de las interferencias de matriz 3.X.4.5.6 Verificación de la Estabilidad de la Curva de Calibración 3.X.4.5.7 Verificación de estándares surrogados 3.X.4.5.8 Verificación de estándares internos 3.X.4.5.9 Control de Calidad Estadístico 3.X.4.5.10 Validación de modificaciones del método o de métodos alternos 3.X.4.5.11 Composición del lote analítico (para cada 20 muestras) 3.X.4.5.12 Criterios de aceptación y rechazo

3.X.4.6 Calibración 3.X.4.7 Procedimiento analítico

3.X.4.7.1 Análisis de los extractos de las muestras

3.X.4.7.2 Identificación de los analitos

3.X.4.7.3 Cálculos

3.X.4.8 Desempeño del Método 3.X.4.8.1 Límite de Detección 3.X.4.8.2 Límite Práctico de Cuantificación 3.X.4.8.3 Rango de Trabajo 3.X.4.8.4 Precisión 3.X.4.8.5 Exactitud 3.X.4.8.6 Incertidumbre



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3.X.4.9 Tablas y Figuras

Todos los métodos son basados en desempeño, es decir, pueden ser modificados con la condición de que se alcancen los mismos parámetros de desempeño, este desempeño debe ser evaluado en matrices reales y no con muestras de control de calidad de matriz simple. Las referencias obtenidas que se tradujeron para cada uno de los métodos de extracción fueron las siguientes:

MÉTODOS DE PREPARACIÓN DE MUESTRAS A DESARROLLAR (EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE EXTRACTOS)

MATRICES Metales Mercurio Congéneres de

PCBs HPAs, Clordecon y Pentaclorobenceno

Plaguicidas Organoclorados

PBDEs PFOS

Aire Ambiente EPA IO-2.1 EPA IO-5 EPA TO-4A EPA TO-13A EPA TO-4A - -

Suelos y Sedimentos

EPA 3051A EPA 3051A

EPA 3550C /EPA 3620C /EPA 3660C

EPA 3550C /EPA 3630C

EPA 3550C /EPA 3620C /EPA 3660B

EPA 1614

Perfluorinated Organic Chemical in the European

enviroment. Scientific Report.

Faculty of Science. Univ. of

Amsterdam, Holland

Aguas Marinas

EPA 200.10 EPA 3015-A EPA 3510C /EPA 3620C

EPA 3510C / EPA 3630C


EPA 1614 ISO 25101:2009

Aguas Superficiales epicontinentales

EPA 3015A EPA 3015A EPA 3510C /EPA 3620C

EPA 3510C / EPA 3630C


EPA 1614 ISO 25101:2009

Aguas Estaurinas y de Lagunas Costeras

EPA 200.10 EPA 3015-A EPA 3510C /EPA 3620C

EPA 3510C / EPA 3630C


EPA 1614 ISO 25101:2009

Aguas Subterráneas

EPA 3015A EPA 3015-A EPA 3510C /EPA 3620C

EPA 3510C / EPA 3630C


EPA 1614 ISO 25101:2009

Sangre Humana

NIOSH 8005

Morales I, Reyes R, Alvarado J, Domínguez J, Mijares R (2007) Diagnóstico de la Contaminación de Mercurio en el Personal de una Unidad Odontológica de Caracas, Venezuela. Acta Odontol Venez 45, Nº 3/2007

NIOSH 8004

Ken, Sexton et al, Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Maternal and Umbilical Cord Blood from Pregnant Hispanic Women Living in Brownsville, Texas; Int. J. Environ. Res. Public Health 2011, 8, 3365-

3379; doi:10.3390/ijerph80833

65

Mathur, H. B, et al, Analysis of Pesticide Residues in Blood Samples from Villages of Punjab; India: Centre for Science and Environment, 2005.

- -

Leche Materna

Paulo R. et. al, Multielement Determination in Small Samples of Human Milk by Inductively Coupled Plasma Atomic Emission Spectrometry. Brasil. Biological Trace element research. 1997.

Stewart A. et. al, Measurement of Total Mercury in Biological Specimens by Cold Vapor Atomic Fluorescente Spectrometry.1994 Clinical Chemistry. Vol 40(2). p206-210.

K Norén, et. al, Methylsulfonyl metabolites of PCBs and DDE in human milk in Sweden,1972-

1992. Environ Health Perspect. 1996 vol.104(7). P766-772.

L. Zainieri, et. al, Polyciclyc aromatic hydrocarbons (HPAs) in human milk from Italian women: Influence of cigarette smoking and residential area. Chemosphere 2007. Vol. 67(7). p1265-1274

K Norén, et. al, Methylsulfonyl metabolites of PCBs and DDE in human milk in Sweden,1972-1992. Environ Health Perspect. 1996 vol.104(7). P766-772

- -



14

Vol.23. p57-62.

Alimentos, tejidos y Organismos

Bajo contenido de Grasas

FDA-EAM-4,4-2010 FDA-EAM-4,5-2008 Food and Drug Administration, Pesticides Analytical Manual Method 303

Survey of PFOS and related

fluorochemicals in food. Report number: FD

08/04. Central Science

Laboratory. York UK. 2008

Higado y Tejidos

FDA-EAM-4,4-2010

FDA-EAM-4,5-2008

Food and Drug Administration,

Pesticides Analytical

Manual Method 304

NOAA Technical Memorandum

NOS ORCA 130. nacional Status

and Trenes Prrogam for

Marine Environmetal

Quality. Extraction of

biological Tissues of trace organic analisis Pag. 98-101. US Department of

Commerce. Silver Spring

Maryland. March 1998.

Food and Drug Administration, Pesticides Analytical Manual Method

304

Extraction of Potassium

Perfluorooctanesulfonate or other

anionic fluorochemical

surfactants from liver for analysis

using HPLC-ES/MS. 3M

Environmental Laboratory.

Method FACT-.1.0 1998

Alto contenido de Grasas

FDA-EAM-4,4-2010 FDA-EAM-4,5-2008

Food and Drug Administration, Pesticides Analytical Manual Method 304

Extraction of Potassium

Perfluorooctanesulfonate or other

anionic fluorochemical

surfactants from liver for analysis

using HPLC-ES/MS. 3M

Environmental Laboratory.

Method FACT-.1.0 1998.

A continuación se presentan los esquemas de trabajo que se deben utilizar para el análisis de muestras ambientales para evitar retrabajos:

MÉTODOS DE ANÁLISIS (CUALITATIVOS Y CUANTITATIVOS)

MATRICES Metales Hg Congéneres

de PCBs HPAs

Plaguicidas Organoclorados

PBBEs PFOS

Aire Ambiente EPA IO-3.4 EPA IO-5 EPA 8082A EPA 8270D EPA 8081B - -

Suelo y Sedimentos

EPA 6010C EPA-7474A EPA 8082A EPA 8270D EPA 8081B

EPA 1614/ EPA 527

Perfluorinated Organic

Chemical in the European

enviroment. Scientific

Report. Faculty of Science.

Universidad de Amsterdam

Holland



15

Aguas Marinas EPA 200.10 EPA-7470A EPA 8082A EPA 8270D EPA 8081B

EPA 1614/ EPA 527

ISO 25101:2009

Aguas Superficiales epicontinentales


EPA 1614/ EPA 527

ISO 25101:2009

Aguas Estuarinas y de Lagunas Costeras

EPA 200.10 /EPA 200.13

EPA-7470A EPA 8082A EPA 8270D EPA 8081B

EPA 1614/ EPA 527

ISO 25101:2009

Aguas Subterráneas


EPA 1614/ EPA 527

ISO 25101:2009

Sangre Humana

NIOSH 8005

Morales I, Reyes R, Alvarado J, Domínguez J,

Mijares R (2007) Diagnóstico de la Contaminación de

Mercurio en el Personal de una

Unidad Odontológica de

Caracas, Venezuela. Acta

Odontol Venez 45, Nº 3/2007

NIOSH 8004

Ken, Sexton et al, Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Maternal and Umbilical Cord Blood from Pregnant Hispanic Women Living in Brownsville, Texas; Int. J. Environ. Res. Public Health 2011, 8, 3365-3379; doi:10.3390/ijerph8083365

Mathur, H. B, et al, Analysis of Pesticide Residues in Blood Samples from Villages of Punjab; India: Centre for Science and Environment, 2005. (esta metodología se refiere al “EPA 8081B”)

- -

Leche Materna

Paulo R. et. al, Multielement Determination in Small Samples of Human Milk by Inductively Coupled Plasma Atomic Emission Spectrometry. Brasil. Biological Trace element research. 1997. vol.23. p57-62

Stewart A. et. al, Measurement of Total Mercury in Biological Specimens by Cold Vapor Atomic Fluorescente Spectrometry.1994 Clinical Chemistry. Vol 40(2). p206-

210.

K Norén, et. al, Methylsulfonyl metabolites of PCBs and DDE in human milk in Sweden,1972-1992. Environ Health Perspect. 1996 vol.104(7). P766-772.

L. Zainieri, et. al, Polyciclyc aromatic hydrocarbons (HPAs) in human milk from Italian women: Influence of cigarette smoking and residential area. Chemosphere 2007. Vol. 67(7). p1265-1274

K Norén, et. al, Methylsulfonyl metabolites of PCBs and DDE in human milk in Sweden,1972-1992. Environ Health Perspect. 1996 vol.104(7). P766-772.

- -

Alimentos, organismos y tejidos

FDA-EAM-4,4-2010

FDA-EAM-4,5-2008

Food and Drug Administration, Pesticides Analytical Manual

EPA 1614/ EPA 527

Analysis of Fluorochemicals in Liver Extracts

Using HPLC-Electrospray/MS

3M Environmental

Laboratory. Method FACT-

.1.0 1998.



16



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3.1 PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS (POCs)

El principio de este método se basa en la extracción, purificación y concentración del extracto purificado con objeto de la medición de los plaguicidas clorados presentes en el extracto orgánico purificado de la muestra inyectando una alícuota de 2 µL en un cromatógrafo de gases con un par de columnas capilares y un par de detectores de captura de electrones en paralelo (canales cuantitativo y confirmativo). La identificación de los analitos se realiza por la comparación de sus tiempos de retención y áreas con las de los estándares certificados en las dos columnas diferentes simultáneamente, su cuantificación se realiza por medio del método de estándar externo.

NOTA: Este método está basado en su desempeño, se permite que el laboratorio omita cualquier paso o modifique cualquier procedimiento, suponiendo que todos los requerimientos de desempeño especificados se cumplan. Al laboratorio no se le permite omitir cualquier punto de control de calidad, ni los parámetros que se especifiquen como “NO MODIFICABLES”. Los términos “debe”, “puede” y “deberá” son mencionados a través de los métodos y están destinados a ilustrar la importancia de los procedimientos para producir datos verificables en los rangos de trabajo del método. El término “debe” es usado para indicar que los desarrolladores de este método encontraron ciertos procedimientos esenciales en muestras analizadas exitosamente; de todas maneras, estos procedimientos pueden ser modificados u omitidos si el laboratorio puede demostrar fehacientemente que la calidad de los resultados no resulta afectada.

PARÁMETROS NO MODIFICABLES

Cromatógrafo de Gases (Columnas Capilares).

Detector de Captura de Electrones o Selectivo de Masas siempre que se demuestre que tengan límites de detección equivalentes.

Se debe tener confirmación de identidad en cada muestra que se detecte supuestamente uno de los analitos, esta confirmación puede ser realizada por el método de la columna alternativa o por espectrometría de masas si lo permite la concentración detectada (se deben evaluar los LDM o espectrometría de masas antes de su utilización confirmatoria para asegurar que sean equivalentes a los de ECD).

3.1.1 Aplicación y Alcances

3.1.1.1 Propósito – Este es un método para el análisis de los plaguicidas clorados, principalmente para los considerados como Compuestos Orgánicos Persistentes (COPs), esta diseñado para ser altamente sensible y específico. De acuerdo a la matriz analizada se utilizan diferentes métodos de extracción y purificación para obtener extractos que son analizados en las mismas condiciones instrumentales. 3.1.1.2 Analitos –El método es aplicable a los siguientes analitos:

Aldrin

Clordano

DDT (y metabolitos DDD y DDE)

Dieldrin

Endrin



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α-Endosulfan

β-Endosulfan

Endosulfan sulfato

Heptacloro

Heptacloro epóxido

Hexaclorobenceno

Lindano (ɤ -BCH)

α-BCH

β-BCH

Mirex

Toxafeno Este método puede ser aplicado a otros analitos de la misma familia de plaguicidas organoclorados, se debe validar la aplicación para cada uno de los analitos que quiera ser analizado. 3.1.1.3 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de los plaguicidas organoclorados mencionados en el inciso anterior en las siguientes matrices ambientales:

Aire Ambiente

Suelos

Sedimentos Marinos

Sedimentos Epicontinentales

Aguas Marinas


Aguas Superficiales Epicontinentales

Aguas Subterráneas

Alimentos procesados y sin procesar, Organismos y Tejidos animales

Sangre

Leche Materna 3.1.1.4 Limitaciones – Los límites de detección en las muestras reales dependerán de las

interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que pueden

variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de concentración de las muestras e

interferencias presentes en el extracto purificado).

Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de analistas expertos en el uso de

cromatografía de gases y en la interpretación de sus resultados. Cada analista debe demostrar la

habilidad para generar resultados aceptables con este método.

3.1.2 Resumen

AIRE AMBIENTE

Se utiliza un muestreador alto volumen modificado (Hi-Vol), con un filtro de fibra de vidrio y un cartucho absorbente con espuma de poliuretano (PUF). El muestreo se lleva a cabo a una flujo de ~ 200-280 L/min durante 24 h.



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El filtro y el cartucho PUF se colocan en contenedores limpios y sellados, para luego trasladarse al laboratorio para su análisis. Los plaguicidas se recuperan por extracción Soxhlet con éter al 5% en hexano. El volumen de los extractos se reduce con la técnica Kuderna-Danish (K-D) y se purifican por cromatografía en columna. Los extractos se someten a cromatografía de gases con detector de captura de electrones (GC/ECD) para la detección y cuantificación de plaguicidas. Generalmente se alcanzan límites de detección <1 ng/m3 con un periodo de muestreo de 24 horas.

AGUAS (Marinas, Costeras, Estaurinas, Lagunas Costeras, Superficiales (Epicontinentales y Subterraneas)

Este método esta diseñado para muestras de agua sin contaminación aparente (no aplica para aguas residuales o aguas naturales altamente contaminadas con materia orgánica, principalmente grasas y aceites). Los analitos se extraen en 1 L de muestra a través de una extracción liquido-liquido. El volumen de los extractos se reduce con la técnica Kuderna-Danish (K-D) y se purifican por cromatografía en columna. Los extractos se someten a cromatografía de gases con detector de captura de electrones (GC/ECD) para la detección y cuantificación de plaguicidas. El tiempo total del análisis es de 30 a 50 minutos por muestra, dependiendo de los analitos y las condiciones analíticas que se escojan. Los límites de detección del método se encuentran entre 0.005 a 0.01 µg/L.

SUELOS Y SEDIMENTOS

Aproximadamente de 10 g de muestra se extraen con ayuda un brazo ultrasónico. Distintos procedimientos de limpieza pueden aplicarse al extracto, dependiendo de la naturaleza de las interferencias de la matriz coextraída y de los analitos. Después de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alícuota de 2 µL en el cromatógrafo de gases. Los límites de detección con este método varían de 1 a 10 µg/Kg BS según los diferentes

analitos en matrices libres de interferencias.

ORGANISMOS, TEJIDOS ANIMALES, ALIMENTOS PROCESADOS Y SIN PROCESAR

Una muestra de 20 a 25 g para tejidos, 50 a 100 g en alimentos sólidos y 100 mL de alimentos líquidos se extraen utilizando la técnica de extracción apropiada dependiendo de su contenido de grasa, humedad y azúcares. Los extractos para el análisis de plaguicidas clorados se someten a una limpieza por cromatografía en columna.



20

Después de la limpieza, el extracto concentrado se analiza inyectando una alícuota de 2 µL en el sistema cromatográfico.

SANGRE HUMANA

Una alícuota de sangre es diluida con agua destilada, se añaden una solución saturada de NaCl y se extrae con hexano:acetona el extracto se pasan a través de sulfato de sodio anhidro y se concentra a aproximadamente 1-2mL. Se realiza una limpieza por cromatografía de columna y el extracto es analizado por GC-MS

LECHE MATERNA

Una muestra de 10mL de leche se trata con una resina comercial y acido fórmico, los analitos se extraen. La limpieza de los extractos se lleva a cabo por cromatografía en columna. Los compuestos organoclorados son analizados por GC-MS.

3.1.3 Procedimientos de Extracción y Purificación de muestras

Antes de utilizar cualquier procedimiento de limpieza, el analista debe procesar una

serie de estándares de calibración por medio del procedimiento para validar los patrones

de elusión y la ausencia de interferencias de los reactivos.

3.1.3.1 Interferencias generales Las interferencias del método pueden originarse por la presencia de contaminantes en los solventes, reactivos, material de vidrio o cualquier otro material durante el procesamiento de la muestra (contaminación cruzada) o por la presencia de sustancias diferentes que coeluyen en los tiempos de retención de los analitos de interés (gas acarreador contaminado, partes del GC sucias y la presencia de compuestos coeluidos de la matriz de la muestra). El material de vidrio debe lavarse escrupulosamente. El material de vidrio primeramente debe ser enjuagándo con el último disolvente utilizado, después lávelo con agua caliente y detergente; enjuáguelo con agua corriente y agua desionizada. Escúrralo, séquelo y enjuáguelo con acetona. Después de secarlo, selle el material de vidrio y guárdelo en un ambiente limpio para evitar acumulación de polvo u otros contaminantes. Guarde el material invertido o tapado con papel aluminio. El uso de reactivos y disolventes de alta pureza ayuda a eliminar los problemas de interferencias. Puede ser necesario purificar los disolventes por destilación en material de vidrio. PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan los estabilizadores, lo que puede hacerlo peligroso. También pueden eliminarse conservadores, reduciéndose su vida de anaquel. La cromatografía de gases con la detección selectiva por GC/ECD disminuye el riesgo de interferencias por compuestos orgánicos extraños. Sin embargo, ciertos



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plaguicidas organoclorados (p.ej., toxafeno y clordano) son mezclas complejas de compuestos simples, lo cual puede causar dificultad en cuantificar exactamente una formulación particular en una muestra de componentes múltiples. Puede existir interferencia cuando se analiza una muestra con concentraciones bajas de los analitos después de una muestra con concentraciones altas. Para evitar esto, después de una muestra con concentraciones altas, debe inyectarse una o varias veces hexano para asegurar que se obtengan valores precisos en la siguiente muestra. Pueden existir interferencias de la matriz cuando se extraen contaminantes de la muestra. Las interferencias en la matriz varían considerablemente de fuente a fuente, dependiendo de la muestra colectada. En la mayoría de las muestras es necesario limpiar los extractos de la muestra. En ese caso debe confirmarse una identificación positiva. Es importante que las muestras y los estándares de trabajo se encuentren en el mismo disolvente. El disolvente de trabajo para los estándares debe ser el mismo que el disolvente final utilizado en la preparación de la muestra. De no ser este el caso, puede afectarse la comparación cromatográfica entre los estándares y la muestra. Debe tenerse cuidado al determinar endrin, ya que se ha reportado que puede degradarse en el inyector “splitless”. El analista debe estar preparado para esta posible interferencia. Cantidades variables de plaguicidas comerciales, se adhieren al material de vidrio, por lo que debe disminuirse la manipulación de la muestra y el contacto con superficies de vidrio. El aldrin se oxida rápidamente al contacto con cloro. La eliminación de cloro con tiosulfato de

sodio al hacer la colecta retardará la oxidación de estos compuestos.

PRECAUCIÓN: Un pico de tiempo de retención variable en la ventana de retención de heptacloro ha sido detectado durante el análisis de agua de pozo, corriente o grado reactivo, al parecer está relacionado con el dibutilftalato. La presencia de azufre elemental resultará en picos anchos que interfieren con la detección de

plaguicidas organoclorados de elusión larga. Se sugiere el uso del método de limpieza con

cobre para remover el azufre. La recuperación del endrin aldehído (utilizando el procedimiento

TBA) se reduce drásticamente al utilizar este procedimiento de limpieza, este compuesto debe

determinarse antes de la limpieza del azufre.

Ceras, grasas y otros coextractables de alto peso molecular pueden removerse por el

procedimiento de limpieza de permeación de gel, ya que producen señales de fondo que

aumentan considerablemente el LDM y ensucia el ECD.

Los Bifenilos Policlorados interfieren con la identificación de los plaguicidas. La única forma

de identificar la presencia de plaguicidas en presencia de PCBs es su confirmación por

GC/MS.



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3.1.3.2 Seguridad general La carcinogenidad y toxicidad de los químicos utilizados en este método no han sido determinadas con precisión; de todas maneras, cada sustancia química debe ser tratada como potencial peligro a la salud. La exposición a estas sustancias químicas debe ser reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice monitoreos de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y que dichos resultados estén disponibles para los analistas. Los siguientes plaguicidas han sido clasificados tentativamente como posibles carcinogénicos para animales y humanos: aldrin comercial, clordano, dieldrin, heptacloro, hexaclorobenceno y toxafeno. Los materiales estándar puros y soluciones estándares patrón de estos productos deben manipularse en una campana de extracción o en una caja de guantes. PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan estabilizadores, lo que puede hacerlo peligroso. Este método puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con su uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y un archivo de las normas de seguridad respecto a la exposición y manejo seguro de las sustancias químicas especificadas en este método. Debe tenerse un archivo de referencias de las hojas de información de seguridad el cual debe estar disponible a todo el personal involucrado en estos análisis.

3.1.3.3 Matrices 3.1.3.3.1 Aire Ambiente

3.1.3.3.1.1 Equipo y Materiales La mención de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este método se citan

debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen propósitos ilustrativos.

Su mención no implica ninguna aprobación oficial. Puede obtenerse un desempeño equivalente

usando otros equipos y materiales que no hayan sido especificados en este método, pero la

demostración del desempeño equivalente de otros equipos y materiales es responsabilidad del

laboratorio que utilice este método.

Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método analítico.

Muestreador de altos volúmenes con cartucho PUF – Disponible de General Metal

Works (Modelo PS-1).

Cabeza de Muestreo para contener cartucho de vidrio con tapón PUF – Disponible

de General Metal Works.

Orificio de calibración – Disponible de General Metal Works

Manómetro – Para usarse con el orificio de calibración.



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Sistema de extracción Soxhlet – Incluyendo extractores Soxhlet (250 y 500 mL),

canastillas de calentamiento, transformadores de voltaje variable y fuente de

enfriamiento por agua – para la extracción de los cartuchos de PUF antes y después

del muestreo.

Horno de vacío conectado a un aspirador de agua – Para secar los cartuchos de PUF

extraídos.

Fórceps – Para manipular las muestras con filtros de fibra de cuarzo.

Dado – Para cortar los tapones de PUF.

Aditamentos para la preparación de los extractos, purificación y análisis.

Guantes de poliéster – Para manipular los cartuchos PUF y los filtros.

3.1.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia

Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a menos

que otra cosa se indique.

Espuma de poliuretano – Stock de hojas de 3 pulgadas de ancho tipo poliéter

utilizado para rellenar muebles. Densidad 0.022 g/cm3.

Filtros de fibra de cuarzo – Pallflex 2500 Quast, o equivalentes.

Filtro de fibra de fieltro de 4.9 mg/cm2 y 0.6 mm de ancho. Para colocar cabezas de

muestra para estudios de eficiencia de colección. Pre-extraídos con éter etílico al

5% en hexano.

Hexano – Grado pesticida o destilado en vidrio.

Éter etílico preservado con 2% de etanol – grado destilado en vidrio o equivalente.

Acetona – Grado pesticida o destilado en vidrio.

Alúmina – Grado de actividad IV. Tamiz 100/200.

3.1.3.3.1.3. Procedimientos de Extracción

Preparación de los cartuchos de muestreo (PUF).

El absorbente PUF es una espuma de poliuretano tipo poliéter (densidad No 3014 ó 0.0225

g/cm3). Este tipo de espuma se usa para el relleno de muebles. Es blanca y al contacto con la

luz se torna amarillenta.

Los tapones de PUF son de 6.0 cm de diámetro, cortados cilíndricos de una hoja stock de 3

pulgadas y deben ajustar, con una ligera compresión en el cartucho de vidrio, soportados por la

malla de alambre. Durante el corte el dado se gira a alta velocidad (p.ej., en una prensa para

torno) y se lubrica continuamente con agua.



24

Para la limpieza inicial, el tapón de PUF se coloca en un extractor Soxhlet y se extrae con

acetona de 12-24 horas a ~4 ciclos/hora. Para reusar los cartuchos, puede utilizarse éter etílico

al 5% en hexano como disolvente de limpieza.

La pieza de PUF ya extraída se coloca en un horno de vacío conectado a un aspirador de agua y

se seca a temperatura ambiente a ~2-4 horas (hasta que ya no se detecte el olor del disolvente).

La pieza se coloca en el cartucho muestreador de vidrio usando guantes de poliéster. El módulo

se empaca con papel aluminio previamente lavado con hexano, se coloca en un contenedor

etiquetado y se sella firmemente.

Para poder clasificar al lote como apto para ser utilizado, al menos uno de cada lote de

cartuchos ensamblados debe ser analizado como blanco de laboratorio. Un nivel <10 ng/tapón

para compuestos sencillos se considera aceptable. Para las mezclas de componentes el nivel del

blanco deberá ser < 100 ng/tapón.

Todas las muestras deben ser extraídas como máximo una semana después de su colecta.

Los cartuchos PUF y los filtros de cuarzo se retiran del contenedor sellado usando guantes, se

retira el empaque de aluminio y se colocan los cartuchos en un Soxhlet de extracción de 500

mL. Los cartuchos se extraen de 12 a 24 horas ~4 ciclos por hora con 5% de éter etílico en

hexano. Los cartuchos pueden ser secados y rehusados si se comprueba la ausencia de

interferencias.

Los extractos se concentran a un volumen final de 10 mL con un concentrador Kuderna-Danish

de 500 mL, con ayuda de un baño de agua caliente. Los extractos concentrados se almacenan

bajo refrigeración en viales sellados con tapas de rosca con contratapa de teflón hasta su

análisis o purificación.

3.1.3.3.1.4 Procedimientos de Purificación de Muestras

Si sólo se buscan plaguicidas organoclorados, se recomienda una purificación con alúmina.

Antes de la purificación el extracto se concentra cuidadosamente hasta 1 mL con una corriente

suave de nitrógeno limpio.

Se empaca una columna cromatográfica de vidrio (2 mm de diámetro interno x 15 cm de largo)

con alúmina grado de actividad IV y se lava con 10 mL de n-hexano. El extracto concentrado

se coloca en la columna y se eluye con 10 mL de n-hexano a una velocidad de 0,5 mL/minuto.

El volumen eluído se ajusta a 10 mL y está listo para analizarse.

3.1.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales epicontinentales y subterráneas)

3.1.3.3.2.1 Equipo y Materiales

La mención de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este método se citan







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Kuderna Danish con capacidad de 500 y 1,000 mL con columna de destilación Snyder

y matraces de 5 ó 10 mL Kontes

Embudos de separación de 2 L

Columna cromatográfica Pyrex 30 cm x 22 mm I.D. Con lana de vidrio al fondo y llave

de teflón.

Viales –con tapa de rosca y septa, de 2,0 mL, Agilent o equivalentes

Baño de agua con regulación de temperatura




Cloruro de metileno disolvente de extracción – Grado pesticida o equivalente

Hexano, disolvente de cambio – Grado pesticida o equivalente

Sulfato de sodio anhidro - Granular anhidro (purificado por lavado con cloruro de

metileno seguido por calentamiento a 400 ºC por 4 horas).

Agua – A menos que otra forme se indique, el agua de referencia debe entenderse como

agua grado reactivo tipo I ASTM.

Florisil – Grado PR 60/100 activado a 675 ºC. El Florisil de diferentes lotes o

fuentes puede variar en cuanto a la capacidad de absorción. Se recomienda el uso

del valor de ácido laurico para estandarizar la cantidad de Florisil utilizada. El

procedimiento de referencia determina la absorción de la solución de ácido laurico

en hexano expresada en mg/g de Florisil. La cantidad de Florisil que se va a utilizar

para cada columna se calcula dividiendo 110 entre la proporción y multiplicando

por 20 g.

3.1.3.3.2.3 Procedimiento de Extracción

Todas las muestras deben ser extraídas como máximo una semana después de su colecta.

Retire las muestras del almacenamiento y permita que se establezca el equilibrio con la

temperatura ambiente.

Tomar un volumen de 1 L de la muestra en un matraz de separación de 2 L, Se mide el pH y si

es necesario este debe ser ajustado con acido sulfúrico 1:1 o con hidróxido de sodio 10 N de

modo que el pH quede dentro de un rango de 5 a 9.



26

Posteriormente se adiciona la mezcla de surrogodos (Tetracloro-m-xileno y decaclorobifenilo).

Adicione al matraz 60 mL de cloruro de metileno, agite durante 1 o 2 minutos, permita que las

fases se separen en un lapso de tiempo de 10 minutos.

Drene la fase orgánica en un matraz. Re extraiga la fase acuosa con dos porciones mas de

cloruro de metileno de 60 mL y reúna los extractos orgánicos con el primero.

Si la muestra presenta problemas de emulsión durante la extracción se deberá utilizar

procedimientos mecánicos de separación como filtración, centrifugación, fibra de vidrio u otro

método físico para romper la emulsión.

Posteriormente el extracto se hace pasar por una columna que tenga 10 cm de sulfato de sodio

anhidro y este es transferido a un Kuderna-Danish, se añaden piedras de ebullición y se

concentran los extractos en un baño maria a una temperatura de 60-65 ºC hasta que se tenga un

volumen aparente de 1 mL, permita que se enfrié y posteriormente agregue 10 mL de Hexano y

continúe la concentración hasta un volumen de aproximadamente 5 mL

3.1.3.3.2.4 Procedimiento de Purificación de Muestras

Limpieza en columna de Florisil Prepare una columna de Florisil de 22 mm de ID x 300 mm que contenga 10 cm de Florisil activado sobre este colocar una capa de 1 cm aproximadamente de Na2SO4 anhidro. Humedezca la columna con 40-50 mL de hexano, coloque un concentrador K-D en la parte inferior de la columna para recibir el eluato. Transfiera el extracto de hexano a la columna y eluya con 30 mL del disolvente de elusión al 6% (éter etílico/hexano). Eluya con 30 mL de la disolución de elusión al 15% (éter etílico/hexano). Eluya con 30 mL de la disolución de elusión al 50% (éter etílico/hexano). Adicione una piedras de ebullición y evapore el disolvente en baño maria, cuando se tenga un

volumen aparente de 10 mL retirar el KD de la fuente de calor, esperar a que se enfríe y

terminar de evaporar el disolvente con nitrógeno a un volumen final de 1 mL.

3.1.3.3.3 Suelos











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Equipo Kuderna-Danish (K-D) – Con capacidad de 500 y 1,000 mL con columna de

destilación Snyder y matraces de 5 ó 10 mL Kontes.

Extractor ultrasónico

Columna cromatográfica Pyrex 20 mm I.D. Con lana de vidrio al fondo y llave de

teflón.

NOTA: Los discos de vidrio poroso son difícilmente descontaminados después de

que se han pasado extractos altamente contaminados. Las columnas sin poros pueden ser seleccionadas. Use un pequeño tapón de lana de vidrio Pyrex para retener el absorbente. Lave previamente el tapón de lana con 50 mL de acetona seguido de 50 mL del solvente de elusión antes del empacamiento de columna con absorbentes.

Baño de agua – Calentador, con cobertura con anillos concéntricos, capaz de control la

temperatura (+ 5 ºC). El baño debe utilizarse en una campana.

3.1.3.3.3.2 Reactivos y Materiales de Referencia Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a menos




Acetona grado pesticida o equivalente

Hexano grado pesticida o equivalente

Cloruro de metileno grado pesticida o equivalente

Éter etílico

Sulfato de sodio – Granular anhidro (purificado por lavado con cloruro de metileno

seguido por calentamiento a 400 ºC por 4 horas).

Gránulos de cobre



del valor de ácido láurico para estandarizar la cantidad de Florisil utilizada. El

procedimiento de referencia determina la absorción de la solución de ácido láurico



por 20 g.



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3.1.3.3.3.3 Procedimientos de Extracción Mezcle 10 g de la muestra sólida con 10 g de sulfato de sodio anhidro; o bien con la cantidad

necesaria para tener la muestra como un polvo. Adicionar los estándares surrogados y 100 mL

de la mezcla de cloruro de metileno-acetona 1:1.

Sumergir el brazo del sonicador hasta que se encuentre un centímetro dentro del disolvente y

sonique durante 3 minutos a la potencia recomendada por el fabricante.

Decante el extracto y filtre en papel Whatman No. 41.

Repita la extracción en dos ocasiones mas con 100 mL de la mezcla cloruro de metileno-

acetona 1:1 y reúna los extractos.

Ensamble un concentrador Kuderna Danish (K-D) sujetando un tubo concentrador de 10 mL a

un matraz de evaporación de 500 mL.

Seque el extracto pasándolo a través de una columna de secado que contenga alrededor de 10

cm de sulfato de sodio anhidro. Colecte el extracto seco en un concentrador K-D. Lave el

matraz de extracción y la columna con sulfato de sodio con 100 a 125 mL del solvente de

extracción para completar la cantidad transferida.

Agregue una o dos perlas de ebullición limpias al matraz de evaporación y unir una columna Snyder de tres bolas. Humedezca previamente la columna Snyder agregando aproximadamente 1 mL de cloruro de metileno. Coloque el aparato K-D en un baño

María (60 a 65 C) de manera que el tubo concentrador esté parcialmente sumergido en el agua caliente. Ajustar la posición vertical del aparato y la temperatura del agua requerida para completar la concentración en 15 ó 20 minutos. A un rango adecuado de destilación las bolas de la columna estarán en constante movimiento sin que las campanas se inunden. Cuando el volumen aparente de líquido sea de aproximadamente 1 mL, retirar K-D y dejarlo enfriar por lo menos 10 minutos. Quitar momentáneamente la columna Snyder, agregar 50 mL de hexano y una nueva perla de ebullición, unir nuevamente la columna Snyder y concentrar el extracto a un volumen de 5 mL para llevar a cabo la purificación de la muestra; tape el tubo concentrador y almacene en refrigeración si el procedimiento no se va a llevar a cabo inmediatamente. Si el extracto se va almacenar por más de dos días deberá transferirse a un vial con tapa roscada y película de teflón.

3.1.3.3.3.4 Procedimiento de Purificación de muestras Limpieza en columna de Florisil Prepare una columna de Florisil de 22 mm de ID x 300 mm que contenga 10 cm de Florisil activado sobre este colocar una capa de 1 cm aproximadamente de Na2SO4 anhidro. Humedezca la columna con 40-50 mL de hexano, coloque un concentrador K-D en la parte inferior de la columna para recibir el eluato. Transfiera el extracto de hexano a la columna y eluya con 30 mL del disolvente de elusión al 6% (éter etílico/hexano). Eluya con 30 mL de la disolución de elusión al 15% (éter etílico/hexano).



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Eluya con 30 mL de la disolución de elusión al 50% (éter etílico/hexano). Adicione una piedras de ebullición y evapore el disolvente en baño maria, cuando se tenga un

volumen aparente de 10 mL retirar el KD de la fuente de calor, esperar a que se enfríe y

terminar de evaporar el disolvente con nitrógeno a un volumen final de 10mL.

Limpieza con cobre Al extracto adicionar 2 g de cobre metálico en gránulos (limpio) y agitar vigorosamente durante 1 minuto.

3.1.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales) Ver procedimiento para suelos

3.1.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos animales,

Equipo y Materiales La mención de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este método se citan







Equipo Kuderna-Danish (K-D) – Con capacidad de 500 y 1000 mL con columna de

destilación Snyder y matraces de 5 ó 10 mL Kontes.

Trituradora de alta velocidad – Trituradora waring o equivalente.

Columnas cromatográficas – Con llave de teflón y tapón de lana de vidrio; de 22mm

ID x 30mm.

Embudo de separación – Con capacidad de 2000, 1000 y 500 mililitros y llave de

teflón.

Columna Micro-Snyder – 2 bolas (Kontes Glass Co. No. 621400 o equivalente).

Columna Micro-Vigreaux – Kontes Glass Co. No. K-569251 o equivalente.

Reactivos y Materiales de Referencia





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NOTA: El almacenaje de las soluciones estándar (patrón, compuestas, calibración interna y estándares surrogados) debe ser a 4 oC en contenedores de politetrafluoroetileno (PTFE) en la oscuridad. Cuando se prepara un lote de estándares, se recomienda que las alícuotas del lote deben guardarse en pequeños viales individuales. Todas las soluciones estándares patrón deben reemplazarse después de un año o antes si la rutina de control de calidad indica algún problema. Todas las otras soluciones estándares debe remplazarse después de seis meses o antes si la rutina de control de calidad indica algún problema.

Acetonitrilo CH3CN

Éter de petróleo

Éter etílico

Acetonitrilo saturado con Éter de petróleo– Sature CH3CN con éter de petróleo.

Metanol – USP, grado reactivo o ACS.

Solución de álcali alcohólica al 2% – Disuelva 2 g KOH en metanol y diluya a 100

mL.

Solvente de elusión al 6% – Diluya 60 mL de éter etílico a 1 L con éter de petróleo.

Solvente de elusión al 15% – Diluya 150 mL de éter etílico a 1 L de éter de petróleo.

Solvente de elusión al 50% – Diluya 500 mL de éter etílico a 1 L de éter de petróleo







por 20 g.



3.1.3.3.5.1 TEJIDOS Y ALIMENTOS CON GRASA (≥ 2% GRASA)

3.1.3.3.5.1.1 LECHE Extracción de grasa Coloque 100 mL de leche (diluya leche evaporada 1:1 con agua) en un tubo de centrifuga de 500 mL, adicione 100 mL de metanol, aproximadamente 1 g de oxalato de sodio o de potasio y agite fuertemente. Adicione 50 mL de éter etílico y agite vigorosamente 1 min abriendo el tubo para liberar la presión generada y deje reposar



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3 minutos; después adicione 50 mL de éter de petróleo y agite vigorosamente durante 1 min abriendo el tubo para liberar la presión generada y deje reposar 3 minutos. Centrifugue aproximadamente durante 5 min a 1500 r.p.m. Retire la fase orgánica y colóquela en un embudo de separación de 1 L que contenga de 500 a 600 mL de agua y 30 mL de solución saturada de NaCl. Re extraiga dos veces el residuo acuoso del tubo de centrifuga con porciones de 50 mL de la mezcla éter etílico – éter de petróleo (1:1) agitando vigorosamente, centrifugue y transfiera la fase orgánica en el embudo de separación después de cada extracción. Mezcle muy lentamente los extractos con el agua, drene y deseche la fase acuosa. Vuelva a lavar la fase orgánica en dos ocasiones con 100 mL de agua y deseche la fase acuosa en cada lavado. (Si se forma emulsión adicione 5 mL de la solución saturada de NaCl a la fase orgánica o incluya un lavado con agua). Pase el extracto a través de una columna de Na2SO4 de 50 x 25 mm OD y colecte el eluato en un K-D en el cual previamente colocó una piedra de ebullición. Lave la columna con pequeñas porciones de éter de petróleo y evapore el disolvente a una temperatura de 40 °C en baño maria. Cuando el volumen aparente sea de 1 mL apague el baño, deje enfriar y siga evaporando con nitrógeno hasta la obtención de la grasa (debe registrar el peso de la grasa obtenida).

Partición con acetonitrilo Pese ≤ 3 g de grasa, disuelva con un poco de éter de petróleo y transvase a un embudo de separación de 125 mL, adicione éter de petróleo tal que el volumen total de grasa y éter de petróleo sea de 15 mL, adicione 30 mL de CH3CN saturado con éter de petróleo y agite vigorosamente durante 1 min. Permita la separación de fases y drene el CH3CN en un embudo de separación de 1L que contenga 650 mL de agua, 40 mL de la solución saturada de NaCl y 100 mL de éter de petróleo. El éter de petróleo del embudo de 125 mL reextráigalo 3 veces con porciones de 30 mL de CH3CN saturado en éter de petróleo, en cada extracción, drene el acetonitrilo en el embudo de 1L. Mantenga el embudo en posición horizontal y mezcle vigorosamente durante 30-45 s. Permita la separación de fases y drene la fase acuosa en un segundo embudo de 1 L; adicione 100 mL de éter de petróleo y agite durante 15 segundos, permita la separación de fases. Descarte la fase acuosa y combine el éter de petróleo con el éter de petróleo del embudo original y lave con dos porciones de 100 mL de agua. Descarte las fases acuosas y pase el extracto de éter de petróleo a través de una columna de 50 x 25 mm. OD de Na2SO4 en un concentrador K-D de 500 mL. Enjuague el embudo y después la columna con 3 porciones de 10 mL de éter de petróleo. Reúna los extractos y concéntrelos en un K-D a un volumen aproximado de 10 mL para llevar a cabo el proceso de purificación. Purificación en columna de Florisil Prepare una columna de Florisil de 22 mm de ID x 300 mm que contenga 10 cm de Florisil activado sobre este colocar una capa de 1 cm aproximadamente de Na2SO4 anhidro. Humedezca la columna con 40-50 mL de éter de petróleo, coloque un concentrador K-D en la parte inferior de la columna para recibir el eluato. Transfiera el extracto de éter de petróleo a la columna y permita su paso por la columna con un flujo de 5 mL/min, enjuague los contenedores con dos porciones de 5



32

mL de éter de petróleo y hágalos pasar por la columna, enjuague las paredes de la columna con pequeñas porciones de éter de petróleo y eluya con 200 mL del disolvente de elusión al 6% a 5 mL/min. Eluya con 200 mL de la disolución de elusión al 15% a 5 mL/min Eluya con 200 mL de la disolución de elusión al 50% Adicione una piedras de ebullición y evapore el disolvente en baño maria, cuando se tenga un volumen aparente de 10 mL retirar el KD de la fuente de calor, esperar a que se enfríe y terminar de evaporar el disolvente con nitrógeno a un volumen final de 10 mL.

3.1.3.3.5.1.2 QUESO, YEMA DE HUEVO O HUEVO DESHIDRATADO

Coloque una muestra de 25 a 100 g de queso picado o 25 a 50 g de huevo (para obtener 3 g de grasa), 2 g de oxalato de sodio o potasio y 100 mL de MeOH en un mezclador de alta velocidad y mezcle durante 2 o 3 min (si por experiencia con estos productos se sabe que la emulsión no se romperá durante la centrifugación, adicione 1 mL de agua/2g de la muestra antes del mezclado). Coloque el extracto en un tubo de centrifuga 500 mL (o divida en dos tubos de 250 mL), adicione 50 mL de éter etílico y agite vigorosamente por 1 min dejando reposar. Posteriormente adicione 50 mL de éter etílico y continúe como en 3.1.3.3.5.1.1 a partir de “centrifugue a 5 min aproximadamente a 1500 r.p.m.”

3.1.3.3.5.1.3 MANTEQUILLA

Caliente a aproximadamente 50 °C hasta que se funda y filtre. Continúe a partir de la partición en acetonitrilo como se indica en el punto 3.1.3.3.5.1.1

3.1.3.3.5.1.4 HIGADO

Pese de 25 a 50 g de muestra y triture en un mezclador de alta velocidad (si el contenido de grasa es conocido o puede estimarse, ajuste el tamaño de la muestra de tal forma que el máximo de grasa extraída sea de 3 g). Adicione 100 g de Na2SO4 anhidro y mezcle con espátula hasta la obtención de un polvo homogéneo, retire la muestra de las orillas del vaso de mezclado con una espátula. Adicione 150 mL de éter de petróleo y mezcle a una alta velocidad durante 2 min. Decante el éter de petróleo sobrenadante en un embudo Büchner de 12 cm (con papel filtro) en un matraz kitazato de 500 mL. Reextraiga los residuos contenidos en el vaso de mezclado con dos porciones de 100 mL de éter de petróleo y mezcle durante 2 min en cada ocasión (mezcle 1 min pare la mezcladora, limpie las orillas del vaso con una espátula y continué mezclando durante 1 min mas). Decante el éter de petróleo sobrenadante de los mezclados en el embudo Büchner combinando todos los extractos, enjuague el vaso de mezclado y el Büchner con tres porciones de 25 a 50 mL éter de petróleo. Inmediatamente después del último enjuague, presione el residuo del embudo Büchner con el fondo de un vaso para forzar a salir el éter de petróleo remanente. Reúna los extractos y páselos a través de una columna de 40x25



33

mm OD de Na2SO4 anhidro y colecte el eluato en un concentrador K-D de 500 o 1000 mL. Lave el matraz y la columna con pequeñas porciones de éter de petróleo. Evapore la mayor parte del éter de petróleo en baño maria. Transfiera el extracto a un vaso tarado, usando pequeñas cantidades de éter de petróleo. Evapore el éter de petróleo con nitrógeno en baño maria hasta la obtención de la grasa. Pese y registre el peso de la grasa extraída. Continúe desde la partición en acetonitrilo como se indica en el punto 3.1.3.3.5.1.1

3.1.3.3.5.1.5 TEJIDO GRASO Seguir el procedimiento descrito en 3.1.3.3.5.1.4

3.1.3.3.5.2 ALIMENTOS CON BAJO CONTENIDO DE GRASA

3.1.3.3.5.2.1 Alta humedad y azucares bajos ( > 75% agua < 5%

azucares)

3.1.3.3.5.2.1.1 Lechugas, Biota vegetal.

Pese 100 g de muestra cortada o triturada en un vaso de mezclado, adicione 200 mL de CH3CN y 10

g de Celite, mezcle a alta velocidad. Posteriormente filtre en un embudo Buchner (con papel filtro)

con matraz kitazato de 500 mL. Transfiera el filtrado a un matraz graduado de 250 mL y registre el

volumen (F).

Transferencia de residuos a éter de petróleo

Mida cuidadosamente 100 mL de éter de petróleo y póngalo en un embudo de separación, añada el

filtrado obtenido anteriormente. Agite vigorosamente de 1 a 2 min, adicione 10 mL de la solución

saturada de NaCl y 600 mL de agua. Mantenga el embudo en posición horizontal y mezcle

vigorosamente de 30 o 45 s. Permita la separación de fases y descarte la parte acuosa, lave la fase

orgánica con dos porciones de 100 mL de agua, descarte la fase acuosa y transfiera la fase orgánica a

una probeta de 100 mL registrando el volumen (P).

Adicione aproximadamente 15 g de Na2SO4 anhidro y agite vigorosamente (no permita que el

extracto este en contacto con el Na2SO4 mas de 1 hr o puede resultar perdidas de pesticidas

organoclorados por absorción).

Concentre a 10 mL en baño de agua en un concentrador K-D.

Continúe con la limpieza en columna de florisil como se indica en el punto 3.1.3.3.5.3.1.

3.1.3.3.5.2.1.2 Huevo entero

Si se va a utilizar el cascaron, este debe molerse a una alta velocidad para reducirlo lo mas posible; adicionar yema, clara y mezclar a una velocidad baja durante 5 min o bien hasta que la muestra este homogénea (una baja velocidad de mezclado disminuirá la formación de grumos). Pese ≤ 25 g de la mezcla de huevo y proceda como se indica en 3.1.3.3.5.2.1.1 a partir de la adición de los 200 mL de CH3CN.



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3.1.3.3.5.2.2 Alta humedad, azucares intermedios ( > 75% agua y 5-

15% de azucares)

A 100 g de muestra se le adicionan 200 mL de CH3CN y 50 mL de agua y se mezclan a alta velocidad. Se procede como en 3.1.3.3.5.2.1.1 a partir de la filtración en el embudo Buchner.

3.1.3.3.5.2.3 Alta humedad azucares altos ( > 75% agua < 15-30%

azucares)

A 100 g de muestra adicione 200 mL de CH3CN, 50 mL de agua y mezcle a alta velocidad durante 2 min. Se procede como en 3.1.3.3.5.4.1.1 a partir de la filtración en embudo Buchner.

3.1.3.3.5.2.4 Alimentos secos con baja humedad (≤ 75% agua)

Pesar y moler de 20 a 50 g de muestra y hacerla pasar por un tamiz de malla 20. Colocar de 20 a 25 g de la muestra en el vaso de un mezclador de alta velocidad, adicionar 350 mL de agua al 35% en CH3CN (puede adicionar 10g de Celite para ayudar la filtración) permita que la muestra se humedezca completamente y posteriormente mezcle durante 5 min a alta velocidad y proceda como en 3.1.3.3.5.2.1.1 a partir de la filtración en embudo Buchner.

3.1.3.3.6 Sangre humana


Todo el material debe ser lavado con detergente, enjuagado con agua y finalmente enjuagado con agua destilada y después con hexano.

Rotavapor

Kuderna Danish Con capacidad de 500 y 1,000 mL con columna de destilación Snyder

y matraces de 5 ó 10 mL Kontes

Embudos de separación de 125 mL

Columna de secado – Columna cromatográfica Pyrex 20 cm x 12 mm I.D. Con lana de

vidrio al fondo y llave de teflón.

Viales –con tapa de rosca y septa de 2.0 mL, Agilent #96-000099-00 o equivalentes

Baño de agua con regulación de temperatura

Vasos de precipitados de 50 mL

3.1.3.3.6.2 Reactivos y Materiales de Referencia Los reactivos deben ser grado HPLC, destilados y revisados por cualquier contaminación de

pesticida.



35

Acetona

Éter etílico

Hexano







por 20 g.



3.1.3.3.6.3 Procedimientos de Extracción 5mL de sangre son diluidos con 25mL de agua destilada, se añaden 2mL de una solución saturada de NaCl, se transfieren a un embudo de separación de 125mL y se realizan 3 extracciones con hexano:acetona (1:1) (20mL) agitando el embudo vigorosamente por 2-3 min. Los 3 extractos combinados se pasan a través de sulfato de sodio anhidro y se concentraron a aproximadamente 1-2mL usando un rotavapor con vacío. 3.1.3.3.6.4 Procedimiento de Purificación de muestras El florisil se activa a 130˚C durante toda la noche y se deja enfriar en un desecador antes de usarse. El peso de florisil que se debe usar es predeterminado por calibración usando ácido láurico. 1g de florisil se empaca en una columna cromatográfica de vidrio de 20 cm de largo y 12 mm de diámetro interno, se añade sulfato de sodio anhidro (0,5cm) sobre el florisil y la columna es pre-eluida con hexano. Se transfiere el extracto a la columna, y se eluye con hexano (10mL), 6% éter etílico en hexano (10mL), 15% éter etílico en hexano (10mL), 50% éter etílico en hexano (10mL) y finalmente con éter etílico (10mL). Los extractos se combinan, se evapora el disolvente llevando a sequedad y se reconstituyen en 2 mL de hexano. 3.1.3.3.7 Leche Materna


Baño ultrasónico

Lipidex 5000®. Gel lipofílico utilizado para la separación de ácidos grasos y

esteres. Hidroxialcoxipropil-dextrano

3.1.3.3.7.2 Reactivos y Materiales de Referencia.

Metanol grado HPLC



36

Cloruro de metileno grado HPLC

Cloroformo grado HPLC

Ácido fórmico grado analítico

Agua desionizada

Oxido de Aluminio grado II - III


Se pesa una muestra de leche (10mL) en un matraz con tapón de teflón.

Se adiciona estándar interno y se mezcla cuidadosamente con la leche; posteriormente, se adicionan

10mL de acido fórmico a la mezcla así como 5.0g de Lipidex* 5000; la mezcla se agita bajo una

temperatura de 35ºC durante 2.5 horas, al cabo de las cuales es transferida a una columna de vidrio

(2cm de diámetro interno), el disolvente es drenado y, de manera consecutiva, se lava con 40mL de

metanol al 30% y 40mL de metanol al 50%.

Finalmente se eluye los analitos con 75mL de acetonitrilo.

La fracción de acetonitrilo es concentrada evaporando el disolvente mediante una ligera corriente de

nitrógeno a un volumen aparente de 10 mL.

3.1.3.3.7.4 Procedimiento de Purificación de las muestras

Se empacan 5 g de oxido de aluminio en una columna de vidrio (1cm de diámetro interno), los cuales

son lavados con 10mL de hexano.

Se transfiere cuantitativamente a la columna los 10 mL del extracto cuando esta contiene una mínima

porción de hexano.

Los compuestos organoclorados así como los PCBs son eluídos con 10mL de hexano, mientras que el

β-hexaclorociclohexano (β-HCH) y el dieldrin se eluyen con una fracción adicional de hexano

(20mL).

3.1.4 MÉTODO DE IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN INSTRUMENTAL

3.1.4.1 Aplicación y Alcances

3.1.4.1.1 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de plaguicidas

organoclorados en los extractos purificados de aguas naturales, residuales municipales e industriales, así como suelo, residuos, sedimentos, organismos, tejidos y alimentos, los extractos y su purificación depende de la matriz analizada. Se deben seguir los procedimientos de extracción y purificación adecuados para cada matriz.



37

3.1.4.1.2 Limitaciones – Los límites de detección en las muestras reales dependerán de las

interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en

cuenta que pueden variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de

concentración de las muestras e interferencias presentes en el extracto purificado).

Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de analistas

expertos en el uso de cromatografía de gases y en la interpretación de sus

resultados. Cada analista debe demostrar la habilidad para generar resultados

aceptables con este método.

3.1.4.2 Resumen

El extracto purificado y concentrado se analiza en un Sistema de Cromatografía de Gases con 2

columnas (analítica y confirmativa) mediante un divisor de flujo colocado a la salida del

inyector, la muestra dividida se analiza con 2 detectores de captura de electrones

simultáneamente, en caso de que se detecte algún plaguicida mediante los tiempos de retención

(Tr) coincidentes en las 2 columnas y la equivalencia de áreas de los 2 picos, se cuantifica con

las áreas obtenidas del pico de la columna analítica, en caso de que no exista coincidencia entre

los Tr de las 2 columnas, o que sus áreas sean muy diferentes, entonces se trata de algún pico

interferente y no se reportan los resultados de la columna analítica.

3.1.4.3 Equipos y Materiales Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método analítico.

Todo el material volumétrico utilizado en éste método debe ser clase “A” o estar verificada su

calibración.

3.1.4.3.1 Equipo

Cromatógrafo de gases – Sistema analítico completo con cromatógrafo de gases para inyección split-spltless, inyector automático, 2 detectores de captura de electrones (ECD) para operación simultánea, divisor de flujo 1:1 posterior al inyector, sistema de integración digital y estación de manejo de datos (Agilent 7890 o equivalente).

Columna 1 (columna analítica) DB-35MS de 30 m x 0.25 mm de D.I. x 0.25 µm de espesor de fase o equivalente.

Columna 2 (columna confirmativa) DB-XLB DE 30 m X 0.25 mm D.I. x 0.25 µm de espesor de fase o equivalente.

3.1.4.3.2 Material

Matraces volumétricos clase A de 1, 5 y 10 mL para preparación de estándares y curvas de calibración.



38

Microjeringas de 10, 25, 50, 100 y 500 µL.

3.1.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia

Los reactivos que requiere el método deben ser grado reactivo o plaguicida y deben cumplir

con las especificaciones del Committee on Analytical Reagents of the American Chemical

Society ACS a menos que otra cosa se indique.

3.1.4.4.1 Reactivos

Todos los disolventes utilizados deben ser grado optima, plaguicida, nanogrado o equivalente y debe probarse que estén libres de ésteres del ácido ftálico.

3.1.4.4.1.1 Hexano, C6H14 grado optima, plaguicida o equivalente 3.1.4.4.1.2 Cloruro de Metileno CH2Cl2 grado óptima, plaguicida o equivalente

3.1.4.4.2 Materiales de referencia

Los patrones pueden ser estándares puros o adquirirse como disoluciones certificadas (patrones de referencia).

3.1.4.4.2.1 Disoluciones

Disoluciones patrón.- (10 mg/L) de los plaguicidas, se deben incluir el

decaclorobifenilo y el tetracloro-m-xileno como surrogados.

Disolución Patrón de 0.05 mg/L.- A partir de la disolución de 10 mg/L, tome 25 µL con una microjeringa en un matraz aforado de 5 mL y afore a la marca con hexano y agite para homogenizar. Guarde la disolución en viales de 2 mL.

.

Disolución de verificación de degradación de analitos (DVDA).- Prepare la DVDA en el solvente apropiado a los niveles de concentración listados a continuación. La disolución DVDA debe prepararse cada 6 meses o antes si ésta presenta degradación o concentración.

Compuesto Concentración (mg/L)

Endrin 0.1

4,4’-DDT 0.1

Disoluciones de calibración.- Prepare 5 niveles como mínimo de diferente concentración de las disoluciones estándar para cada analito de interés en matraces volumétricos.

Para cada disolución estándar de calibración, adicione una cantidad conocida de los compuestos a analizar y lleve al aforo con el solvente apropiado. El punto de concentración más bajo de la curva de calibración debe ser 3 a 10 veces mayor que el valor del LDM. Las otras concentraciones corresponden al intervalo esperado de las concentraciones encontradas en las muestras reales o bien estarán definidas por el intervalo lineal del detector.



39

Estándar de calibración de 0.001 mg/L.- En un matraz aforado de 1 mL ponga 20 µL de la solución de 0.05 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta disolución en viales de 2 mL y rotule con etiqueta que contenga método, fecha de preparación, concentración, solvente utilizado, persona que lo preparó

Estándar de calibración de 0.002mg/L En un matraz de 1 mL ponga 40 µL de la solución de 0.05 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta disolución en viales de 2 mL y etiquete.

Estándar de calibración de 0.005 mg/L. En un matraz de 1 mL ponga 100 µL de la solución de 0.05 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde esta disolución en viales de 2 mL y etiquete.

Estándar de calibración de 0.01 mg/L. En un matraz aforado 1 mL ponga 200 µL de la solución de 0.05 mg/L y afore a la marca con hexano y guarde esta disolución en viales de 2 mL y etiquete.

Estándar de calibración de 0.02 mg/L. En un matraz aforado de 1 mL ponga 400 µL de la solución de 0.05 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde la disolución en viales de 2mL y etiquete.

Estándar de calibración de 0.05mg/L A partir de la disolución de 10 mg/L, tome 25 µL con una microjeringa en un matraz aforado de 5 mL y afore a la marca con hexano y agite para homogenizar. Guarde la disolución en viales de 2 mL y etiquete.

3.1.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo

Cada laboratorio que utilice este método está obligado a operar un programa de control de calidad (CC) formal. Los requerimientos mínimos de este programa consisten en una demostración inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con las especificaciones de desempeño del método, además realizar análisis continuos de muestras de control de calidad (MCC) para demostrar la precisión y exactitud continuas y el análisis de blancos. El desempeño del laboratorio debe compararse con los criterios aquí establecidos, con objeto de determinar si los resultados de los análisis cumplen con las especificaciones de desempeño del método. El analista debe hacer una demostración inicial de su habilidad para generar una exactitud y precisión aceptables por este método. Cada vez que se realice una modificación al método o que se cambie el analista responsable de llevar a cabo está determinación, el analista designado debe repetir la validación del método, si el cambio va a afectar el límite de detección del método (LDM), el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o más bajo que el anterior para los analitos de interés.



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No se permite el uso de técnicas determinativas alternativas y cambios que degraden la ejecución del método. Si se utiliza una técnica analítica que no sea la especificada en este método, dicha técnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las de la técnica descrita en este documento para los analitos de interés. Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a este método. Estos registros deben de incluir lo siguiente:

La justificación por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al método para ese analito.

Los nombres, títulos, direcciones y número de teléfono de los analistas que ejecutaron los análisis y modificaciones y el encargado de control de calidad que presenció y verificó los análisis y sus modificaciones.

Los resultados de todas las pruebas de CC del método modificado comparadas con el método original, dichos datos deben de incluir todos los parámetros mencionados en la sección de desempeño del método.

La información escrita en las bitácoras tanto del equipo como del analista, deben incluir los siguientes datos:

a) Identificación de la muestra b) Número del lote analítico en el cual se analizó la muestra c) Fecha del análisis d) Procedimiento cronológico utilizado e) Cantidad de muestra utilizada f) Número de muestras de control de calidad analizadas en el lote g) Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medición h) Registros de bitácoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de

información i) Información cruda reportada por los equipos o por los analistas j) Evidencia de la aceptación o rechazo de los resultados del lote analítico.

3.1.4.5.1 Verificación del equipo

El criterio de resolución es tal que la profundidad del valle entre dos picos adyacentes en la mezcla de verificación de resolución debe ser mayor o igual a 60.0% de la altura del pico más corto. La verificación del detector de ECD se realiza según el instructivo del fabricante. Verificar que el flujo de los gases y condiciones cromatográficas sean las adecuadas, según se menciona posteriormente. Verificación de blanco electrónico: Se realiza una corrida con las condiciones cromatográficas del método, pero sin inyectar nada. Si el cromatograma presenta picos a cualquier tiempo de retención, se purga el sistema poniendo



41

el horno a 300°C durante 15 minutos y se repite el análisis del blanco electrónico. La degradación tanto del DDT como del Endrín en la DVDA debe ser menor al 15% lo cual se calcula como a continuación se indica:

Ecuación 1:

100% xCBA

BADDTnDegradació

Donde: A = Área del DDE B = Área del DDD C = Área del DDT

Ecuación 2:

100% xCBA

BAEndrinnDegradació

Donde: A = Área del Endrin aldehído B = Área del Endrin cetona C = Área del Endrin

Si la degradación del DDT o del endrin es mayor al 15%, se debe proceder a cambiar el inserto de vidrio, limpieza del puerto de inyección, cambio del sello de oro y de la precolumna que se conecta con el inyector y a las dos columnas (30 cm).

3.1.4.5.2.Verificación de la calibración inicial.

La curva de la calibración inicial deberá realizarse inyectando los estándares de calibración preparados y se considera lineal, si el por ciento de la desviación estándar relativa (%RSD) de los factores de calibración (CF) es menor o igual al 20%, los cálculos se realizan con las siguientes ecuaciones:

nanogramoseninyectadamasa

áreadetotalCF

100% xCF

SDCFRSD

Donde: SDCF = Desviación estándar de los factores de calibración CF = Promedio de los factores de calibración

La verificación de la calibración inicial puede también efectuarse mediante la regresión por mínimos cuadrados, en la cual el criterio de aceptación es que el factor de correlación "r2" sea mayor o igual a 0.997.



42

Si los criterios para el % RSD o “r” no se cumplen se procede a la revisión del sistema cromatográfico y la preparación de las disoluciones de calibración. Posteriormente la curva de calibración será vigente, si el análisis de un punto intermedio de la curva no presenta una variación de la concentración mayor al 15% y que será calculada de la siguiente manera.

100% xCT

CTCCDiónconcentracdeDiferencia

Donde: CC = concentración calculada CT = concentración teórica

O si se utiliza el factor de calibración

100% xCF

CFCFvporcentualDiferencia

Donde:

CFv = factor de calibración de cada compuesto en el estándar de verificación.

CF = media del factor de calibración del compuesto de la calibración inicial.

Si el criterio de aceptación para la diferencia porcentual es mayor al 15% se procederá a la revisión del sistema cromatográfico y a la preparación de la solución estándar utilizada.

3.1.4.5.3 Verificación de contaminación de los reactivos.

Los blancos de reactivos no deben presentar ningún tipo de contaminante al tiempo de retención de los plaguicidas medidos, por lo que es importante que los reactivos utilizados cumplan con las especificaciones mencionadas.

Si los resultados de los blancos no cumplen con el criterio mencionado, se debe

localizar la fuente de contaminación, extraer y analizar nuevamente las muestras

asociadas al blanco contaminado.

Use también los blancos de reactivos para verificar la contaminación por arrastre de

muestras con altas concentraciones en análisis secuenciales

3.1.4.5.4 Verificación del lote analítico

Por cada lote analítico de muestras analice al menos una muestra sintética de control de calidad o preferentemente un material de referencia certificado de la misma matriz de las muestras analizadas en el lote analítico, calcule el % de recuperación (%R) de cada analito y surrogados de la muestra control, los cuales deberán estar dentro del rango de 80 a 120 %R. De no ser así se debe revisar la preparación de la muestra control y el sistema cromatográfico.



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Realizar la corrección necesaria y reanalizar la muestra control, si el problema persiste, se deben reanalizar todas las muestras del lote analítico.

3.1.4.5.5 Verificación de interferencias de matriz

La verificación de interferencias por parte de la muestra se lleva a cabo mediante las muestras fortificadas (MF). El laboratorio debe realizar el análisis de muestras fortificadas (MF) y muestras duplicadas (MD), fortifique una muestra por cada lote analítico o preferentemente una muestra de cada tipo de matriz analizada en el lote. Las muestras fortificadas se deben analizar cuando por las características de la muestra se sospeche de interferencias de matriz o cuando sean parte de un plan de aseguramiento de calidad de un proyecto. El efecto de la matriz se evalúa en el recobro del analito en muestras fortificadas.. Calcule el porcentaje de recobro el cual deberá estar dentro del intervalo de 80 a 120 %R. Si los valores no cumplen con lo especificado, el sistema analítico está fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico.

Efecto de la matriz en la precisión del analito – Precisión de la matriz duplicada (MD): Analice una muestra duplicada por cada lote de muestra.

Calcule la diferencia porcentual relativa (DPR) entre la muestra y la duplicada para cada analito con la siguiente ecuación:

21

20021

CC

CCDPR

Donde: C1 = concentración de la primera muestra C2 = concentración de la segunda muestra (muestra duplicada)

La DPR de cada analito obtenido entre la muestra y la duplicada debe ser <20% Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analítico está fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico. Repita el análisis del lote asociado con la muestra y la duplicada que provocó que la prueba del DPR fallara.

3.1.4.5.6 Verificación de la estabilidad de la curva de calibración



44

En cada lote analizado, si más de 20 muestras van a ser analizadas durante el día, verifique la curva de calibración analizando un estándar de concentración media del intervalo de trabajo al principio del lote y después de cada 20 muestras ó 12 horas de análisis continuo.

Calcule el factor de calibración o la concentración para cada plaguicida del

estándar de concentración media, y el por ciento de la diferencia (%D) con la siguiente ecuación:

1001

21x

FC

FCFCporcentualDiferencia

Donde: FC1 = Factor de calibración promedio para cada plaguicida en la curva de calibración, o la concentración nominal de del estándar de verificación. FC2 = Factor de calibración promedio para cada plaguicida en el estándar de concentración media, o la concentración calculada en el estándar de verificación.

El valor obtenido del % de la diferencia (%D) deberá ser menor al 15%, de no

ser así verifique su vigencia, revisé también el sistema cromatográfico y determine la causa de la falla y corrija, de no lograr corregir la falla, recalibre nuevamente el sistema y en le caso de que la falla del estándar de verificación sea en un lote mayor de 20 muestras reanalice las 10 muestras anteriores al estándar de verificación que falló.

3.1.4.5.7 Verificación de estándares surrogados

Evalúe los datos de recobro de los surrogados de las muestras.

Calcule el % de recuperación de los estándares surrugados en blancos, muestras control, muestras adicionadas (si se realizaron), muestras duplicadas (si se realizaron) y muestras reales, con la siguiente ecuación:

100%Re2

1

C

CRcuperaciòn

Donde:

C1=Concentración calculada de surrugados en la muestra. C2=Concentración nominal del surrugado adicionado a la muestra.

El %R debe estar entre el 70 y el 130 % de recuperación de no ser así verifique la preparación de la muestra que fallo y el sistema cromatográfico, determine la causa de la falla y corrija, de no encontrarla, repita la extracción de la muestra y vuelva a analizar si el %R esta fuera del rango de aceptación llene hoja de incidencia y reporte como interferencia de matriz y los resultados obtenidos.



45

Si los valores no cumplen con los especificados, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico.

3.1.4.5.8 Verificación de estándares internos

Compare el área de el o los estándares internos de las muestras con el área promedio de los estándares internos obtenidos de los puntos de calibración, el valor obtenido en el o los estándares internos de la muestra no deben ser menores a 50% ni mayores a 200% del valor promedio obtenido en la curva de calibración para cada estándar interno.

Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analítico está

fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico.

3.1.4.5.9 Control de calidad estadístico

En esta sección se especifica como debe realizarse el control de calidad estadístico obligatorio para este método: 3.1.4.5.9.1 Preparación de la Muestra de Control de Calidad (MCC) – Prepare la MCC de la siguiente forma:

Se deberán preparar las MCC de una fuente externa al laboratorio o ser preparada de una fuente diferente a la utilizada en la curva de calibración. Prepare una disolución a una concentración que se encuentre dentro del rango de trabajo.

NOTA: Se recomienda que el valor de las soluciones de MCC no sea conocido por el analista con el objeto de asegurar la veracidad de la medición

3.1.4.5.9.2 Graficas de control de Exactitud

El laboratorio debe elaborar y mantener actualizadas las gráficas de control de exactitud para cada lote analizado a partir de la demostración inicial de desempeño. Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deberá

graficarse y deberá estar dentro de los límites de control superior e inferior ( 3s)

Si un valor de exactitud es mayor a 3s, deberán rechazarse todos los resultados

del lote analítico, determine las causas y corrija los errores, documente

adecuadamente las incidencias y acciones correctivas, deberá repetirse el análisis

del lote en cuestión.

3.1.4.5.9.3 Graficas de control de Precisión



46

El laboratorio debe elaborar y mantener actualizadas las gráficas de control de precisión para cada lote analizado a partir de la demostración inicial de desempeño

Determine los límites de control de la siguiente forma:

Límite Superior de Control (LSC) = 3.27R Límite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R

Donde:

R = Promedio del DPR

Si un valor de precisión es mayor al LSC, deberán rechazarse todos los resultados del lote analítico, determine las causas del problema y corrija los errores, documente adecuadamente las incidencias y acciones correctivas, deberá repetirse el análisis del lote en cuestión.

3.1.4.5.10 Validación de modificaciones del método o de métodos alternos

Para validar las modificaciones que se efectúen a este método o para la utilización de métodos alternos deberá seguirse el siguiente procedimiento:

Si se realizan modificaciones al presente método, deberán validarse.

Si se utiliza un método alterno cuya fuente sea un método estandarizado por alguna Institución de carácter internacional o reconocida internacionalmente (e. g. ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment Canada, etc.) también deberá ser validado.

Si se utiliza algún método no estandarizado, deberá evidenciarse, además de los parámetros normales de la validación parcial, los parámetros de Robustez, Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante estudios interlaboratorio.

Verifique diariamente el desempeño de todo el sistema analítico utilizando los datos recolectados de análisis de blancos reactivos, solución verificadora del desempeño del laboratorio.

Si hay un coleado excesivo de algún analito a comparación de los cromatogramas del método, éste deberá corregirse. Los problemas de coleado generalmente pueden rastrearse a sitios activos en la columna cromatográfica, problemas en la instalación de la columna o mala operación del detector.

Verifique la precisión con réplicas del análisis. Una pobre precisión

generalmente puede deberse a fugas, especialmente en el puerto de inyección. Si el sistema cromatográfico se está comportando aparentemente bien, pero con baja sensibilidad, puede ser necesario generar una nueva



47

curva o juego de factores de calibración para verificar las respuestas bajas antes de buscar la fuente del problema.

3.1.4.5.11 Composición del lote analítico (para cada 25 muestras ó 12 horas de análisis

continuo) 1 Blanco electrónico 2 Muestra de verificación del Instrumento (DVDA) 3 Muestra de Verificación de la Calibración Continua 4 Blanco de Reactivos 5 Muestra de Control de Calidad 1 (MCC) 6 Muestra real No. 1 7 Muestra real No. 2 8 Muestras reales (hasta 20 o 12 horas de análisis continuo) 9 Muestra fortificada (si se realizo) 10 Muestra fortificada duplicada (si se realizo) 11 Blanco de Reactivos 12 Muestra de Verificación de la Calibración Continua. 13 Siguientes 20 muestras reales

3.1.4.5.12 Criterios de Aceptación y Rechazo

3.1.4.5.12.1 Verificación del Equipo

Punto de verificación Criterio

Equipo libre de interferencias (blanco electrónico)

No deberá presenta picos a cualquier tiempo de retención

Puerto de inyección libre de suciedad y baja degradación

Degradación del DDT y Endrin menor al 15%

3.1.4.5.12.2 Verificación de la Calibración Inicial


Evaluación del % Diferencia de la concentración de la Mezcla de Verificación, punto intermedio de

la curva de calibración. Menor al 15%

3.1.4.5.12.3 Verificación de Contaminación de Reactivos



48


Blanco de reactivos No deben presentar ningún tipo de

contaminante al tiempo de retención de los plaguicidas medidos

3.1.4.5.12.4 Verificación del Proceso Analítico


Muestra de control de calidad % de Recuperación de 70 / 130

Evaluación de estándares Surrogados % de Recuperación de 70 / 130

Evaluación de muestras adicionadas duplicadas % DSR < 20%

3.1.4.5.12.5 Verificación de Interferencias de Matriz


Evaluación de muestras adicionadas % de Recuperación 70 / 130

3.1.4.5.12.6 Estabilidad de la Curva de Calibración


Evaluación de la Estándar de Verificación (Intermedio)

% de diferencia <l 15%

3.1.4.6 Calibración

PRECAUCIÓN: El endrin Y el DDT se degradan fácilmente en el puerto de inyección si

éste o el frente de la columna están sucios. Esto se da como resultado de la acumulación de residuos de alto punto de ebullición que se inyectan con las muestras. Verifique si hay problemas de degradación inyectando el estándar de verificación del sistema. Busque los productos de degradación (DDD, DDE, endrincetona y endrinaldehido). Si la degradación del DDT o del endrin excede el 15 %, tome acciones correctivas antes de proceder con la calibración.

Se necesitan al menos 5 estándares de calibración. Uno debe contener analitos a una concentración cercana, pero superior a la del límite práctico de cuantificación para cada analito; los otros deben estar a concentraciones que cubran el intervalo esperado en las muestras. Por ejemplo, si el LDM es 0.01µg/L y el LPC es de 0.05 µg/L, se espera que la muestra contenga concentraciones mayores de 0.05 µg/L.

Una vez establecidas las condiciones de operación inyecte un volumen adecuado (2 L) de cada



49

estándar de calibración por triplicado y al final realice un promedio de las tres curvas y

agréguelo a la tabla de calibración del método.

Si la DSR de cada plaguicida es 20%, entonces la respuesta del instrumento es considerada lineal y el factor de calibración promedio FC puede utilizarse para la cuantificación de los resultados de las muestras. Si la DSR es mayor que 20%, entonces no puede asumirse linealidad y se debe repetir la curva de calibración.

Si se utiliza regresión lineal por mínimos cuadrados, deberá obtener el factor de

correlación “r2” para cada analito, el cual deberá ser mayor o igual a 0.997 si “r” es menor a este valor, la curva de calibración no es lineal y deberá verificarse la preparación de los estándares de calibración y el sistema cromatográfico y repetir la calibración.

3.1.4.6.1 Calibración por Estándar Interno:

El analista debe seleccionar uno o más estándares internos que sean similares en

comportamiento analítico a los compuestos de interés. El analista debe además demostrar que

la medición del estándar interno no es afectada por el método o interferencias de la matriz.

Prepare los estándares de calibración a un mínimo de cinco concentraciones para cada analito

de interés por adición de volúmenes. Para cada estándar de calibración, adicione una cantidad

conocida constante de uno o más estándares internos y afore con un solvente apropiado. Uno

de los estándares debe estar a una concentración cercana, pero por arriba, del LPC. Las otras

concentraciones deben corresponder al rango de trabajo.

Inyecte cada estándar de calibración. Tabule la altura del pico o el área de respuesta contra la

concentración de cada compuesto y el estándar interno. Calcule el factor de respuesta (RF)

para cada compuesto como sigue:

AisCs

AsCisRF

Donde:

As = Respuesta para el analito que será medido.

Ais = Respuesta del estándar interno.

Cis = Concentración del estándar interno, µg/L.

Cs = Concentración del analito a ser medido, µg/L.

Si el valor RF sobre el rango de trabajo es constante (< 20% RSD), el RF puede usarse para

cálculos. Alternativamente, los resultados pueden usarse para graficar una curva de

calibración de la relación de respuesta, As/Ais contra RF.

3.1.4.7 Procedimiento Analítico

3.1.4.7.1 Análisis de los extractos de las muestras

Condiciones cromatográficas:

Análisis por doble columna DB-35MS y DB-XLB

Gas acarreador Hidrógeno



50

Presión en columna 15 psi Temperatura inicial 140 °C Tiempo inicial 2 min Programa 1 10ºC/min Temperatura final 1 240ºC Programa 2 25ºC/min Temperatura final 2 300ºC Tiempo final 2 5 min Temperatura del inyector 250ºC Temperatura del detector 320ºC Modo splitless 0.3 min Flujo de split 20mL/min Purga de septa 4mL/min

Inyecte un volumen de 2 L del extracto de la muestra o estándar en el cromatógrafo de gases. Registre el volumen final del extracto y el área del pico resultante.

3.1.4.7.2 Identificación de los analitos

Identifique los plaguicidas en la muestra comparando los tiempos de retención de los picos en el cromatograma de muestra con los tiempos de retención de los picos en los cromatogramas de los estándares tanto en la columna analítica como en la columna confirmativa, este paso se debe hacer automáticamente por el Sistema de Manejo de Datos de la Estación de Trabajo del Sistema Cromatográfico, se deben seguir las instrucciones del fabricante del equipo.

En caso de que coincidan los Tr del pico sospechoso en las 2 columnas dentro

de una ventana de tiempo de 5 seg y que las áreas de los picos en las 2 columnas no difiere más del 50%, se puede asumir que el pico del plaguicida está presente en las muestras, en caso contrario, no se trata del plaguicida sospechoso.

Si la respuesta del pico sobrepasa el intervalo de concentración de la curva patrón, diluya el extracto y analice nuevamente.

3.1.4.7.3 Cálculos

3.1.4.7.3.1 AIRE AMBIENTE

El volumen total de la muestra se calcula de las lecturas de flujo periódico

(Magnehelic) con la siguiente ecuación:

1000

...21 T

n

QQQmV n

Donde:



51

V (m) = volumen total de la muestra (m3).

Q1, Q2,., Qn = flujos determinados al inicio, final y puntos intermedios durante el

tiempo muestreado (L/minuto).

n = número de datos promediados.

T= tiempo de muestreado (minutos).

El volumen de muestreado debe convertirse a condiciones estándar (760 mm Hg y

25ºC) con la siguiente ecuación.

at

APmVsV

273

298

760

Donde:

V(s)= volumen total de la muestra a 25ºC y 760 mm Hg (m3).

V(m)= volumen total de flujo a condiciones ambientales (m3).

P(A)= presión ambiental (mm Hg).

t(a)= temperatura ambiental (ºC).

La concentración del compuesto en la muestra se calcula con la siguiente ecuación:

sViV

EVAAC

*

*

Donde:

C(A)= concentración del analito en la muestra (µg/m3).

A = cantidad calculada de material inyectado al cromatógrafo, basada en la curva de

calibración para estándares inyectados (nanogramos).

V(i) = volumen inyectado del extracto (µL).

V(E)= volumen final del extracto (mL).

V(s)= volumen total de la muestra de aire corregido a condiciones estándar (m3).

Determine la concentración de compuestos individuales en la muestra.

Toxafeno – Los cálculos cuantitativos de toxafeno son difíciles, pero una

exactitud razonable puede obtenerse. Para calcular la cantidad de toxafeno en GC/ECD lleve a cabo los siguientes pasos: (a) ajuste el tamaño de la muestra tal que el pico mayor del toxafeno sea del 10 – 70% en la escala completa de desviación (FSD); (b) inyecte un estándar de toxafeno que se estime esta dentro de +10 ng de la muestra; (c) usando la cuantificación de los 5 picos mayores o el área total del patrón de toxafenos.

Para medir el área total, construya la línea de base del estándar de toxafeno entre sus extremos y construya la línea de base bajo la muestra, usando la distancia de los picos a la línea de base en el estándar como una guía. Este procedimiento se hace difícil por el hecho de la altura y amplitud relativa de los picos en la muestra probablemente no será idéntica a los estándares.



52

Una serie de residuos de toxafenos han sido calculados usando el área total de los picos por comparación con el estándar y también usando sólo el área de los últimos cuatro picos, tanto en las muestras como con los estándares. La concordancia entre los resultados obtenidos por los dos métodos justifica el uso del último método para calcular el toxafeno en una muestra donde la porción que elude tempranamente del cromatograma de toxafeno muestra interferencias de otras sustancias tales como DDT.

El clordano técnicamente es una mezcla de al menos 11 componentes mayores y 30 ó más componentes menores. Trans y cis-clordano (alfa y gama), respectivamente, son los dos mayores componentes técnicamente del clordano. Sin embargo, el porcentaje exacto de cada uno en el material técnico no está completamente definido y no es consistente de lote a lote.

El patrón de GC de un residuo de clordano puede diferir considerablemente de aquel de la técnica estándar. Dependiendo del sustrato de la muestra y su historia, los residuos de clordano pueden consistir de casi cualquier combinación de: metabolitos animales y productos de degradación causados por la exposición a factores ambientales tales como agua y luz solar. Cuando los residuos de clordano no se parecen técnicamente al clordano, pero en su lugar se identifica picos consiste principalmente, cuantifique los picos alfa-clordano, gama-clordano y heptacloro separadamente contra los materiales de referencia apropiados y reporte los residuos individuales. Cuando los patrones de GC de los residuos se asemejan a aquellos del clordano técnico, el analista puede cuantificar residuos de clordano comparando el área total del cromatograma del clordano usando los cinco picos mayores o el área total. Si el pico del heptacloro epóxido es relativamente pequeño, incluya esto como parte del área del clordano total por el cálculo de los residuos. Si el heptacloro y/o el heptacloro epóxido están muy fuera de proporción, calcule estos por separado y sustraiga sus áreas del área total para dar un área de clordano corregida.

NOTA: El octacloro epóxido, un metabolito del clordano, puede ser fácilmente confundido con el heptacloro epóxido en una columna GC no polar.

Para medir el área total del cromatograma de clordano, proceda como se indica en la sección de toxafeno. Inyecte una cantidad del estándar de clordano el cual producirá un cromatograma en el cual los picos mayores son aproximadamente del mismo tamaño como aquellos en el cromatograma de la muestra.

Informe los resultados en µg/m

3 a condiciones STD.

Todos los datos de control de calidad obtenido deberán ser informados junto con los

resultados de la muestra.



53

1.1.1. 3.1.4.7.3.2 AGUA

Identifique a los plaguicidas según el procedimiento mencionado anteriormente en la

parte cualitativa del método. Identifique los compuestos en la muestra

multicomponente usando todos los picos que sean característicos para los compuestos

específicos de cromatogramas para estándares individuales. Elija los picos más

sensibles y reproducibles para obtener una suma para fines de cálculo.

Utilice la curva de calibración (factor de calibración) para calcular directamente la

concentración no corregida (Ci) de cada analito en la muestra (por ejemplo factor de

calibración X respuesta).

Calcule la concentración como:

muestradeVolumen

extractofinalVolumenCLgiónConcentrac i/

Ci = concentración obtenida del cromatograma

Hay software en los cuales es posible introducir el factor de corrección para obtener

el resultado expresado en muestra.

Toxafeno – Los cálculos cuantitativos de toxafeno son difíciles, pero una exactitud razonable puede obtenerse. Para calcular la cantidad de toxafeno en GC/ECD lleve a cabo los siguientes pasos: (a) ajuste el tamaño de la muestra tal que el pico mayor del toxafeno sea del 10 – 70% en la escala completa de desviación (FSD); (b) inyecte un estándar de toxafeno que se estime esta dentro de +10 ng de la muestra; (c) usando la cuantificación de los 5 picos mayores o el área total del patrón de toxafenos. Para medir el área total, construya la línea de base del estándar de toxafeno entre sus extremos y construya la línea de base bajo la muestra, usando la distancia de los picos a la línea de base en el estándar como una guía. Este procedimiento se hace difícil por el hecho de la altura y amplitud relativa de los picos en la muestra probablemente no será idéntica a los estándares. Una serie de residuos de toxafenos han sido calculados usando el área total de los picos por comparación con el estándar y también usando sólo el área de los últimos cuatro picos, tanto en las muestras como con los estándares. La concordancia entre los resultados obtenidos por los dos métodos justifica el uso del último método para calcular el toxafeno en una muestra donde la porción que elude tempranamente del cromatograma de toxafeno muestra interferencias de otras sustancias tales como DDT. El clordano técnicamente es una mezcla de al menos 11 componentes mayores y 30 ó más componentes menores. Trans y cis-clordano (alfa y gama), respectivamente, son los dos mayores componentes técnicamente del



54

clordano. Sin embargo, el porcentaje exacto de cada uno en el material técnico no está completamente definido y no es consistente de lote a lote. El patrón de GC de un residuo de clordano puede diferir considerablemente de aquel de la técnica estándar. Dependiendo del sustrato de la muestra y su historia, los residuos de clordano pueden consistir de casi cualquier combinación de: metabolitos animales y productos de degradación causados por la exposición a factores ambientales tales como agua y luz solar. Cuando los residuos de clordano no se parecen técnicamente al clordano, pero en su lugar se identifica picos consiste principalmente, cuantifique los picos alfa-clordano, gama-clordano y heptacloro separadamente contra los materiales de referencia apropiados y reporte los residuos individuales. Cuando los patrones de GC de los residuos se asemejan a aquellos del clordano técnico, el analista puede cuantificar residuos de clordano comparando el área total del cromatograma del clordano usando los cinco picos mayores o el área total. Si el pico del heptacloro epóxido es relativamente pequeño, incluya esto como parte del área del clordano total por el cálculo de los residuos. Si el heptacloro y/o el heptacloro epóxido están muy fuera de proporción, calcule estos por separado y sustraiga sus áreas del área total para dar un área de clordano corregida.



No reporte concentraciones por debajo del límite de detección. Reporte todos los valores obtenidos de CC junto con los resultados del

análisis.

Los resultados deben reportarse con un número apropiado de cifras significativas. La

experiencia indica que tres cifras significativas pueden ser usadas para

concentraciones por arriba de 99 µg/L, dos cifras significativas para concentraciones

entre 1-99 µg/L y una cifra significativa para concentraciones menores a 1 µg/L.

3.1.4.7.3.3 SUELOS Y SEDIMENTOS

Lleve a cabo los cálculos como se indica a continuación:

La concentración se obtiene:



55

muestradePeso

extractofinalVolumenCKggiónConcentrac i/

Ci = concentración obtenida del cromatograma en μg/L

Todos los factores de dilución o concentración deben ser considerados.

No reporte concentraciones por debajo del límite de detección. Reporte todos los valores obtenidos de CC junto con los resultados del análisis. Reporte los resultados del análisis en µg/Kg con tres cifras significativas y aclarando si son en Base Seca o Base Húmeda.

3.1.4.7.3.4 ALIMENTOS PROCESADOS, SIN PROCESAR TEJIDOS,

ORGANISMOS.

3.1.4.7.3.4.1 Cálculos para frutas y vegetales

100**

P

T

FSg

Donde: g = gramos de muestra pasados por columna de florisil S = muestra extraída (g) P = el volumen del extracto de éter de petroleo en mL F = volumen filtrado del extracto de acetonitrilo 100 = mL de éter de petróleo en los cuales los residuos fueron particionados. T = volumen total (mL agua en muestra (buscar en tablas el % humedad del alimento) + mL acetonitrilo añadido - la corrección en mL de la contracción del volumen)

Cuando se adicionan 50 mL de agua al acetonitrilo para la extracción de productos con alto contenido de azúcar (3.1.3.3.5.3.1) el volumen total (T) se incrementa en 45. Para 25 g de huevo y 200 mL de acetonitrilo el valor del volumen total (T) es 215. La concentración final se obtiene:



56

florisilcolumnaxpasadomuestradePeso


Ci = concentración obtenida del cromatograma en μg/L

3.1.4.7.3.4.2 Cálculos para productos con baja humedad o secos Calcule igual que para las frutas y vegetales, excepto T = volumen total (mL de

agua en la muestra + mL de 35% H20-CH3CN adicionado – corrección en mL del volumen de contracción). Si el contenido de agua de la muestra es < 10%, haga caso omiso y use el volumen de la mezcla de extracción como T.

3.1.4.7.3.4.3 Hígado y tejido graso

La concentración final se obtiene:

florisilcolumnaxpasadomuestradePeso


Ci = concentración obtenida del cromatograma en μg

Todos los factores de dilución o concentración deben ser considerados.

Toxafeno – Los cálculos cuantitativos de toxafeno son difíciles, pero una exactitud razonable puede obtenerse. Para calcular la cantidad de toxafeno en GC/ECD lleve a cabo los siguientes pasos: (a) ajuste el tamaño de la muestra tal que el pico mayor del toxafeno sea del 10 – 70% en la escala completa de desviación (FSD); (b) inyecte un estándar de toxafeno que se estime esta dentro de +10 ng de la muestra; (c) usando la cuantificación de los 5 picos mayores o el área total del patrón de toxafenos. Para medir el área total, construya la línea de base del estándar de toxafeno entre sus extremos y construya la línea de base bajo la muestra, usando la distancia de los picos a la línea de base en el estándar como una guía. Este procedimiento se hace difícil por el hecho de la altura y amplitud relativa de los picos en la muestra probablemente no será idéntica a los estándares. Una serie de residuos de toxafenos han sido calculados usando el área total de los picos por comparación con el estándar y también usando sólo el área de los últimos cuatro picos, tanto en las muestras como con los estándares. La concordancia entre los resultados obtenidos por los dos métodos justifica el

originalmtraladePesoextraídagrasaladePeso

ónpurificaciparagrasadePesoflorisilcolumnaxpasadamtraladePeso



57

uso del último método para calcular el toxafeno en una muestra donde la porción que elude tempranamente del cromatograma de toxafeno muestra interferencias de otras sustancias tales como DDT. El clordano técnicamente es una mezcla de al menos 11 componentes mayores y 30 ó más componentes menores. Trans y cis-clordano (alfa y gama), respectivamente, son los dos mayores componentes técnicamente del clordano. Sin embargo, el porcentaje exacto de cada uno en el material técnico no está completamente definido y no es consistente de lote a lote. El patrón de GC de un residuo de clordano puede diferir considerablemente de aquel de la técnica estándar. Dependiendo del sustrato de la muestra y su historia, los residuos de clordano pueden consistir de casi cualquier combinación de: metabolitos animales y productos de degradación causados por la exposición a factores ambientales tales como agua y luz solar. Cuando los residuos de clordano no se parecen técnicamente al clordano, pero en su lugar se identifica picos consiste principalmente, cuantifique los picos alfa-clordano, gama-clordano y heptacloro separadamente contra los materiales de referencia apropiados y reporte los residuos individuales. Cuando los patrones de GC de los residuos se asemejan a aquellos del clordano técnico, el analista puede cuantificar residuos de clordano comparando el área total del cromatograma del clordano usando los cinco picos mayores o el área total. Si el pico del heptacloro epóxido es relativamente pequeño, incluya esto como parte del área del clordano total por el cálculo de los residuos. Si el heptacloro y/o el heptacloro epóxido están muy fuera de proporción, calcule estos por separado y sustraiga sus áreas del área total para dar un área de clordano corregida.



No reporte concentraciones por debajo del límite de detección.

Reporte todos los valores obtenidos de CC junto con los resultados del análisis. Reporte los resultados de análisis en µg/kg con tres cifras significativas.



58

1.1.2. 3.1.4.8 Desempeño del Método

Los datos son los del método de referencia y los de un laboratorio nacional con experiencia.

3.1.4.8.1 Límite de Detección: Ver Tabla 5. 3.1.4.8.2 Límite Práctico de Cuantificación: Ver Tabla 5 3.1.4.8.3 Intervalo de Trabajo: Ver Tabla 5 3.1.4.8.4 Precisión del Método: Ver Tabla 5 3.1.4.8.5 Exactitud del Método: Ver Tabla 5

3.1.4.9 Tablas y Figuras

TABLA.1 LÍMITES DE DETECCIÓN DEL MÉTODO FUENTE EPA 8081

Parámetro Límite de Detección del

Método µg/L Límite de Detección del

Método µg/Kg

Agua Suelo

Aldrin 0.034 2.2

Clordano 0.008 -

4,4’-DDD 0.050 4.2

4,4’-DDE 0.058 2.5

4,4’-DDT 0.081 3.6

Dieldrin 0.044 -

Endrin 0.039 3.6

Endrin aldehído 0.050 1.6

Heptacloro 0.040 2.0

Heptacloro epóxido 0.032 2.1

Toxafeno NA NA

Hexaclorobenceno NA NA

NOTA: El límite de detección del método fue determinado a partir del análisis de 7 replicas de cada matriz procesada a través del método analítico completo.



59

TABLA 2 %R MÉTODO USEPA TO-4

Compuesto Concentración en el

aire, ng/m3

% de recuperación

Aldrin 0.3-3.0 28

4,4’-DDE 0.6-6.0 89

4,4’-DDT 1.8-18 83

Clordano 15-150 73

Clorobifenilos

4,4’ Di-

2,4,5 Tri-

2,4’,5 Tri-

2,2’,5,5’ Tetra-

2.2’.4.5.5’ Penta-

2.2’.4.4’.5.5’ Hexa-

2.0-20

0.2-2.0

0.2-2.0

0.2-2.0

0.2-2.0

0.2-2.0

62

36

86

94

92

86



60

TABLA 3 DATOS DE PRECISIÓN, EXACTITUD Y LÍMITES DE DETECCIÓN

PARA LOS ANALITOS EN AGUA GRADO REACTIVO, AGUA SUBTERRÁNEA Y CORRIENTE

Exactitud y datos de desviación estándar

Agua grado

reactivo

Agua subterránea Agua corriente

Analito LDM (b)

µg/L

Concentración*

µg/L

R(c) SR(d) R SR R SR

Aldrin 0.075 0.15 86 9.5 100 11.0 69 9.0

Aldrin 0.007 0.05 106 20.0 86 16.3 - -

alfa-clordano 0.006 0.06

0.35

95

86

3.5

17.0

83

94

4.4

10.2

85

91

7.1

2.4

gama-clordano 0.012 0.06

0.35

95

86

0.4

18.5

86

95

5.3

14.3

83

91

14.7

6.0

Clordano 0.14 0.17

3.4

NA

NA

8.0

3.6

-

-

-

-

105

95

12.4

9.6

Dieldrin 0.012 0.10

3.6

87

114

17.1

9.1

67

94

10.1

8.6

92

81

15.7

14.0

Endrin 0.063 0.10

3.6

119

99

29.8

6.5

94

100

20.2

11.3

106

85

14.0

12.4

Heptacloro 0.003 0.032

1.2

77

80

10.2

7.4

37

71

6.8

9.8

200

106

22.6

16.8

Heptacloroepóxido 0.004 0.04

1.4

100

115

15.6

6.6

90

103

14.2

6.9

112

81

5.9

15.6

Hexaclorobenceno 0.002 0.003

0.09

104

103

13.5

6.6

91

101

10.9

4.4

100

88

15.6

13.4

Lindano 0.003 0.03

1.2

91

111

6.5

5.0

88

109

7.7

3.4

103

93

8.1

18.4

Cis-nonacloro 0.027 0.06

0.45

110

82

15.2

21.3

101

93

7.2

18.3

9

87

14.3

5.4

Trans-nonacloro 0.011 0.06

0.35

95

86

9.6

21.8

83

94

7.1

17.2

73

86

4.1

5.1

Toxafeno 1.0 10

80

NA

NA

12.6

15.3

-

-

-

-

110

114

9.5

13.5

NA = No aplica. No se analizó por separado un juego de estándares acuosos, y el factor de respuesta para agua grado reactivo se

usó para calcular una recuperación para la matriz de agua corriente.

(a) Datos corregidos por cantidades detectadas en el blanco, representan la media de 5-8 muestras.

(b) MDL = µg/L; calculado de multiplicar la desviación estándar (S) por el valor de la t de Student apropiado para un nivel de

confianza de 99% y un estimado de desviación estándar con n-1 grados de libertad.

(c) R = Porcentaje de recuperación promedio.

(d) SR = Desviación estándar sobre el porcentaje de recuperación.

* Se refiere a las concentraciones usadas para generar R y SR para las matrices de los tres tipos de agua, no para las

determinaciones de MDL.

- No se realizó análisis.



61

TABLA 4 PRECISIÓN Y EXACTITUD DEL MÉTODO EN FUNCIÓN A LA CONCENTRACIÓN

AGUA GRADO REACTIVO

Parámetro Rango de trabajo

(µg/L)

Exactitud como

recuperación X

(µg/L)

Precisión de un

analista SR

(µg/L)

Precisión total

(µg/L)

Hexaclorobenceno (0.01-0.37) 1.028C+0.00 0.108x+0.00 0.227x+0.00

Lindano (0.04-1.39) 1.009C+0.00 0.0577x+0.01 0.142x+0.00

Heptacloro (0.04-1.41) 1.002C+0.02 0.107x+0.01 0.211x+0.02

Aldrin (0.04-1.42) 1.066C+0.00 0.031x+0.02 0.264x+0.00

Heptacloroepóxido (0.04-1.42) 0.952C+0.00 0.032x+0.02 0.129x+0.02

Dieldrin (0.10-7.53) 1.027C+0.00 0.091x+0.01 0.198x+0.02

Endrin (0.10-7.50) 0.958C+0.01 0.116x+0.01 0.136x+0.02

Clordano (0.51-50.90) 1.037C+0.06 0.084x+0.06 0.125x+0.19

Toxafeno (5.63-70.40) 1.087C+0.24 0.131x-0.031 0.269x+0.69



62

TABLA 5 DATOS DE VALIDACIÓN DE UN LABORATORIO MEXICANO

Datos de Laboratorios ABC Química Investigación y Análisis S.A. de C.V.

NOTA: El límite de detección del método fue determinado a partir del análisis de 7 replicas de cada matriz procesada a través del método analítico completo, el LPC se obtuvo multiplicando el LDM * 5, los datos de precisión y exactitud se obtuvieron con 10 réplicas de la concentración media de la curva de calibración.

METODO FUENTE: EPA 8081A-1996 MATRIZ: AGUA

TECNICA: GC/ECD

ug/L ug/L ug/L ug/L ug/L % % %R %R

HEXACLOROBENCENO NE 0.0005 A 0.02 0.00006 0.0003 0.40 20.00 112.48 70-130

HEPTACLORO 0.56 0.0005 A 0.02 0.00005 0.0003 0.45 20.00 95.49 70-130

ALDRIN 0.83 0.0005 A 0.02 0.00007 0.0003 0.49 20.00 121.63 70-130

HEPTACLORO EPOXIDO 0.34 0.0005 A 0.02 0.00006 0.0003 0.50 20.00 100.58 70-130

4-4'-DDE 0.59 0.0005 A 0.02 0.00006 0.0003 0.59 20.00 108.45 70-130

DIELDRIN 0.49 0.0005 A 0.02 0.00008 0.0004 0.47 20.00 99.06 70-130

ENDRIN 0.82 0.0005 A 0.02 0.00008 0.0004 0.56 20.00 95.45 70-130

4-4'-DDD 0.85 0.0005 A 0.02 0.00005 0.0003 0.56 20.00 95.45 70-130

4-4'D-DDT 0.71 0.0005 A 0.02 0.00006 0.0003 0.70 20.00 92.33 70-130

ENDRIN ALDEHIDO 0.36 0.0005 A 0.02 0.0002 0.0008 1.63 20.00 101.65 70-130

CLORDANO 0.58 0.0005 A 0.02 0.0001 0.0005 0.55 20.00 96.89 70-130

TOXAFENO 0.1 0.05 A 1030 0.005 0.025 2.45 20.00 94.35 70-130

VALIDACIÓN DE MÉTODO

INTERVALO DE TRABAJO

DEL MÉTODO ABC

VALIDADO

CRITERIO DE

EXACTITUD

DEL METODO

FUENTE

EXACTITUD

OBTENIDA

LPC

METODO

ABC

PRECISION

OBTENIDA

CRITERIO DE

PRECISION

DEL METODO

FUENTE

PARÁMETRO

LDM

METODO

FUENTE

LDM

OBTENIDO



63

TABLA 6 LÍMITES DE DETECCIÓN Y DE CUANTIFICACIÓN.

COMPUESTO LDM Liquido (µg/L)

LDM Sólido (µg/Kg)

LPC Líquido (µg/L)

LPC Sólido µg/Kg

Aldrin 0.034 2.2 0.255 15.5

Alfa-Clordano 0.037 1.5 0.270 11.2

Gamma- 0.050 4.2 0.350 30.5

4’4’-DDD 0.058 2.5 0.410 15.6

4’4’-DDE 0.081 3.6 0.600 21.5

4’4’-DDT 0.044 NA 0.300 28.5

Dieldrin 0.030 2.1 0.225 15.2

Endrin 0.050 1.6 0.350 10.2

Aldehído de Endrin 0.040 2.0 0.275 14.5

Heptacloro 0.032 2.1 0.240 15.0

Epóxido de heptacloro 0.025 1.7 0.165 11.5

Toxafeno (MR) 0.150 9.5 1.250 90.5

Liquido = Agua reactivo libre de orgánicos Sólido = Arena

MR = respuesta de picos múltiples



64

TABLA 7 PATRONES DE ELUCIÓN Y PROMEDIO DE RECUPERACIÓN DE LOS

PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS CON PARTICIÓN DE SILICA GEL (EXTRACTO DE

RESIDUO LÍQUIDO).

Recuperación promedio +/- SD (RSD) (a,b)

Compuesto Fracción I

Hexano (80 mL)

Fracción II Hexano (50 mL)

Fracción III Cloruro de metileno (15 mL)

Recuperación Total

Heptacloro 90±11 (12) 90±11 (12)

Aldrin 92±9.2 (10) 92±9.2 (10)

Heptacloro epóxido 89±4.1 (4.6) 89±4.1 (4.6)

Alfa-clordano

Gama-clordano 85±7.2 (8.5) 10±9.2 (92) 95±8.0 (8.4)

4,4’-DDE 95±16 (17) 95±16 (17)

Dieldrin 82±4.3 (5.3) 82±4.3 (5.3)

Endrin 65±3.1 (4.7) 65±3.1 (4.7)

4,4’-DDD 33±4.0 (15) 43±16 (37) 76±16(21)

Endrin aldehído C C

4,4’-DDT 88±18 (21) 88±18 (21)

(a) Los valores dados representan el promedio del porcentaje de recuperación de 3

determinaciones replicadas ± una desviación estándar. El número entre paréntesis es la desviación estándar relativa.

(b) Las cantidades adicionadas son 15,000 30,000 y 150,000 ng/2 mL de extracto por columna de los plaguicidas organoclorados y Aroclor 1016/Aroclor 1260, respectivamente.

(c) Imposible de determinar la recuperación debido a las interferencias.



65

3.2 BIFENILOS POLICLORADOS (PCBs)

El principio de este método se basa en la extracción, purificación y concentración del extracto purificado con objeto de la medición de los PCBs presentes en el extracto orgánico purificado de la muestra inyectando una alícuota de 2 µL en un cromatógrafo de gases acoplado a un detector selectivo de masas que trabaja simultáneamente en los modos SIM y SCAN. La identificación de los analitos se realiza por la comparación de los espectros de masas con los de la biblioteca estandarizada de la estación de datos, las abundancias relativas de los iones cualificadotes y con los tiempos de retención de los estándares certificados, su cuantificación se realiza por medio del método de estándar interno.




Detector Selectivo de Masas con capacidad de trabajo simultáneo en modos SIM y SCAN


3.2.1.1 Propósito – Este es un método para el análisis de los Bifenilos Policlorados (PCBs) como congéneres, el número de congéneres que se pueden identificar dependerá de la resolución de la columna cromatográfica y de los materiales de referencia que se tengan, está diseñado para ser altamente sensible y específico. 3.2.1.2 Analitos –El método es aplicable a los siguientes analitos:

PCBs totales

Los congéneres con los que se cuenten materiales de referencia y que puedan ser separados adecuadamente por la columna cromatográfica.

3.2.1.3 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de los PCBs mencionados en el inciso anterior en las siguientes matrices ambientales:

Aire Ambiente

Suelos

Sedimentos Marinos




66

Aguas Marinas



Aguas Subterráneas

Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos animales

Sangre








3.2.2 Resumen

AIRE AMBIENTE

Se utiliza un muestreador alto volumen modificado (Hi-Vol), con un filtro de fibra de vidrio y un cartucho absorbente con espuma de poliuretano (PUF). El muestreo se lleva a cabo a una flujo de ~ 200-280 L/min durante 24 h. El filtro y el cartucho PUF se colocan en contenedores limpios y sellados, para luego trasladarse al laboratorio para su análisis. Los PCBs se recuperan por extracción Soxhlet con éter al 5% en hexano. El volumen de los extractos se reduce con la técnica Kuderna-Danish (K-D) y se someten a una limpieza con ácido sulfúrico diseñado específicamente para este tipo de análisis. Los extractos se someten a cromatografía de gases con detector selectivo de masas (GC/MSD) en el modo SIM y SCAN simultáneamente para la detección y cuantificación de PCBs totales y de los congéneres calibrados. Generalmente se alcanzan límites de detección <1 ng/m3 con un periodo de muestreo de 24 horas.

AGUAS (Marinas, Costeras, Estaurinas, Lagunas Costeras, Superficiales Epicontinentales y Subterraneas)

Este método está diseñado para muestras de agua sin contaminación aparente (no aplica para aguas residuales o aguas naturales altamente contaminadas con materia orgánica, principalmente grasas y aceites). Los analitos se extraen en 1 L de muestra a través de una extracción liquido-liquido. El volumen de los extractos se reduce con la técnica Kuderna-Danish (K-D). Los extractos para el análisis de PCBs se someten a una limpieza ácida con ácido sulfúrico Se inyectan 2 µL de fase orgánica al GC/MSD en modo SIM y SCAN simultáneamente.



67

El tiempo total del análisis es de 30 a 50 minutos por muestra, dependiendo de los analitos y las condiciones analíticas que se escojan. Los límites de detección del método se encuentran entre 0.005 a 0.01 µg/L.

SUELOS Y SEDIMENTOS

Aproximadamente de 10 g de muestra se extraen con cloruro de metileno-acetona (1:1) con ayuda un brazo ultrasónico. Distintos procedimientos de limpieza pueden aplicarse al extracto, dependiendo de la naturaleza de las interferencias de la matriz coextraida y de los analitos. Después de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alícuota de 2 µL en el GC/MSD en modo SIM y SCAN simultáneamente.

Los límites de detección con este método varían de 1 a 10 µg/Kg BS según los

diferentes analitos en matrices libres de interferencias.


Una muestra de 20 a 25 g para tejidos, 50 a 100 g en alimentos sólidos y 100 mL de alimentos líquidos se extrae utilizando la técnica de extracción apropiada. Después de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alícuota de 2 µL en el GC/MSD en modo SIM y SCAN simultáneamente.

SANGRE HUMANA A 5 mL de muestra se agrega metanol y hexano-éter etílico, se mezclan y centrifugan. La fase superior es concentrada con nitrógeno, se agrega hidróxido de potasio metanólico y se reduce el volumen por evaporación. Mientras se enfría se agrega metanol-agua y cuando llega a temperatura ambiente se agrega n-hexano y se agita vigorosamente. La muestra se purifica con una columna cromatográfica.

LECHE MATERNA Una alícuota de 10mL de leche se trata con una resina comercial y acido fórmico, los analitos se extraen . La limpieza de los extractos se lleva a cabo por cromatografía en columna. Los compuestos organoclorados son analizados por GC-MS

3.2.3 Procedimientos de Extracción y Purificación de muestras Antes de utilizar cualquier procedimiento de limpieza, el analista debe procesar una serie de estándares de

calibración por medio del procedimiento para validar los patrones de elusión y la ausencia de interferencias de los

reactivos.

3.2.3.1 Interferencias generales

Las interferencias del método pueden originarse por la presencia de contaminantes en los solventes, reactivos, material de vidrio o cualquier otro material durante el procesamiento de la muestra (contaminación cruzada).



68

El material de vidrio debe lavarse escrupulosamente. Lave el material de vidrio enjuagándolo profusamente con el último disolvente utilizado en él. Después lávelo con agua caliente y detergente y enjuáguelo con agua corriente y grado reactivo. Escúrralo, séquelo y enjuáguelo con acetona. Después de secarlo y enfriarlo, selle el material de vidrio y guárdelo en un ambiente limpio para evitar acumulación de polvo u otros contaminantes. Guarde el material invertido o tapado con papel aluminio.

El uso de reactivos y disolventes de alta pureza ayuda a eliminar los problemas de interferencias. Puede ser necesario purificar los disolventes por destilación en material de vidrio. PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan los estabilizadores, lo que puede hacerlo peligroso. También pueden eliminarse conservadores, reduciéndose su vida de anaquel. Puede existir interferencia cuando se analiza una muestra con concentraciones bajas de los analitos después de una muestra con concentraciones altas. Para evitar esto, después de una muestra con concentraciones altas, debe inyectarse una o varias veces hexano para asegurar que se obtengan valores precisos en la siguiente muestra. Es importante que las muestras y los estándares de trabajo se encuentren en el mismo disolvente. El disolvente de trabajo para los estándares debe ser el mismo que el disolvente final utilizado en la preparación de la muestra. De no ser este el caso, puede afectarse la comparación cromatográfica entre los estándares y la muestra. 3.2.3.2 Seguridad general

La carcinogenidad y toxicidad de los químicos utilizados en este método no ha sido determinadas con precisión; de todas maneras; cada sustancia química debe ser tratada como potencial peligro a la salud. La exposición a estas sustancias químicas debe ser reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice monitoreos de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y que dichos resultados estén disponibles para los analistas. PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan estabilizadores, lo que puede hacerlo peligroso. Este método puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con su uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y un archivo de las normas de seguridad respecto a la exposición y manejo seguro de las sustancias químicas especificadas en este método. Debe tenerse un archivo de referencias de las hojas de información de seguridad el cual debe estar disponible a todo el personal involucrado en estos análisis.

3.2.3.3 Matrices

3.2.3.3.1 Aire Ambiente


VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS



69


3.2.3.3.1.2.1 Reactivos


3.2.3.3.1.2.2 Materiales de referencia

Estándares de calibración de congéneres de PCBs Si los resultados son para determinar congéneres individuales de PCBs, entonces deben preparase estándares para congéneres puros. Los siguientes congéneres son los más comunes y se pueden conseguir como mezclas certificadas. Este procedimiento puede ser apropiado también para otros congéneres.

Compuestos No. CAS # IUPAC

2-Clorobifenilo 2051-60-7 1

2,3-Diclorobifenilo 16605-91-7 5

2,2’,5-Triclorobifenilo 37680-65-2 18


2,2’,3,5’-Tetraclorobifenilo 41464-39-5 44



2,2’3,4,5’-Pentaclorobifenilo 38380-02-8 87

2,2’,4,5,5’-Pentaclorobifenilo 37680-73-2 101

2,3,3’,4’,6-Pentaclorobifenilo 38380-03-9 110

2,2’,3,4,4’,5-Hexaclorobifeilo 35065-28-2 138

2,2’,3,4,5,5’-Hexaclorobifenilo 52712-04-6 141

2,2,3,5,5’,6-Hexaclorobifenilo 52663-63-5 151

2,2’,4,4’,5,5’-Hexaclorobifenilo 35065-27-1 153

2,2’,3,3’,4,4’,5-Heptaclorobifenilo 35065-30-6 170

2,2’,3,4,4’,5,5’-Heptaclorobifenilo 35065-29-3 180

2,2’,3,4,4’,5’,6-Heptaclorobifenilo 52663-69-1 183


2,2’,3,3’,4,4’,5,5’,6-Nonaclorobifenilo 40186-72-9 206

Estándares Internos

Se debe utilizar como estándar interno el decaclorobifenilo, adicionado en cada muestra extraída antes del análisis e incluido en cada estándar inicial de calibración.

Estándares surrogados

Cuando sean determinados los congéneres de PCBs, se utiliza el tetracloro-meta-xileno como un surrogado.




70

VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS


De la extracción se obtiene de 1 a 2 mL de extracto, estos se transfieren a un tubo con tapón de rosca que contiene aproximadamente 5 mL de Ácido Sulfúrico concentrado. Se agita vigorosamente el tubo durante 2 min y posteriormente se centrífuga para separar las fases. Se transfiere cuantitativamente la fase orgánica a un tubo limpio y se concentra con flujo de nitrógeno hasta un volumen menor a 1 mL. Debe tenerse especial cuidado al hacer la transferencia del extracto limpio de no tomar la parte del Ácido (fase inferior) ya que este podría dañar la columna cromatográfica durante el análisis. Con una pipeta pasteur, se transfiere el extracto limpio a un vial de 2 mL y se afora a 1 mL, se cierra el vial y se envía para el análisis cromatográfico.





VER REACTIVOS PARA PLAGUICIDAS CLORADOS Y EN 3.2.3.3.1.2.




VER PROCEDIMIENTO 3.2.3.3.1.4

3.2.3.3.3 Suelos




VER REACTIVOS PARA PLAGUICIDAS CLORADOS Y EN 3.2.3.3.1.2





71


Seguir procedimiento como en 3.2.3.3.1.4 y posteriormente al extracto adicionar 2 g de cobre metálico en gránulos (limpio) y agitar vigorosamente durante 1 minuto.

3.2.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)





3.2.3.3.4.3 Procedimientos de Extracción




3.2.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos animales,

3.2.3.3.5.1 Tejidos y alimentos con grasa (≥ 2% GRASA)

VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)

3.2.3.3.5.1.1 LECHE






3.2.3.3.5.1.4 HIGADO


3.2.3.3.5.1.5 TEJIDO GRASO



72



3.2.3.3.5.2.1 Alta humedad y azucares bajos ( > 75% agua < 5% azucares)

3.2.3.3.5.2.1.1 Lechugas, biota vegetal


3.2.3.3.5.2.1.2 Huevo entero


3.2.3.3.5.2.2 Alta humedad azucares intermedios ( > 75% agua y 5-15% de

azucares)


3.2.3.3.5.2.3 Alta humedad azucares altos ( > 75% agua < 15-30% azucares)







Columna de cromatografía 7 mm ID x 200 mm, de 50 mL con llave.

Columna Micro-Synder

Tubos de ensayo de 16 x 150 mm con tapas de rosca.

Tubos concentradores kuderna de 25 mL

Microjeringas de 10 μL


Los disolventes que requiere el método deben ser grado pesticida, a menos que otra cosa se

indique.

Metanol



73

Hexano

éter etílico

Acetona

Hidróxido de potasio

Silica gel

Sulfato de sodio anhidro

Hidróxido de sodio 2% en metanol


La muestra de sangre se centrifuga para separar el suero, este es aislado y congelado hasta su uso.

En un tubo de ensayo colocar 4 mL de metanol y 5 mL de suero, mezclar durante 4 minutos, agregar

5mL de una mezcla de hexano-éter etílico (1:1) agitar durante 15 minutos y centrifugar por 5 minutos

a 2000 rpm.

Transferir la fase superior a un tubo concentrador Kuderna-Danish y repetir los pasos anteriores dos

veces más combinando los extractos en el concentrador.

Concentrar los extractos a 0,5mL bajo una corriente suave de nitrógeno, agregar 2mL de hidróxido de

potasio metanólico en al concentrador y agregar una piedra de ebullición. Colocar una columna

Micro-Synder, llevar el contenido a ebullición suave y reducir el volumen a 0,3 mL.

NOTA: Si se forma un precipitado, agregar unas gotas de hidróxido de potasio metabólico y calentar suavemente hasta que se disuelva.

Dejar enfriar y agregar 2 mL de una mezcla metanol-agua (1:1), cuando llegue a temperatura

ambiente, agregar 2 mL de n-hexano, tapar y agitar el tubo vigorosamente.


En una columna cromatográfica de 7 mm DI x 200 mm, de 50 mL con llave, colocar un

tapón de fibra de vidrio en el fondo de la columna. Vaciar una suspensión de 3 g de silica gel

en 50 mL de hexano, dejar que la suspensión se asiente y agregar de 5 a 7 g de sulfato de

sodio. Enjuague la columna preparada con 20 mL de hexano. Cuando llegue al nivel de la

cama de sulfato de sodio, agregar la muestra y colocar una probeta graduada debajo de la

columna; cuando el extracto este entre a la fase de sulfato de sodio enjuagar el tubo

concentrador y la columna Micro-Synder con 1 mL de hexano, cuando estos lleguen a la fase

de sulfato de sodio agregar 25 mL de hexano. Colectar el eluyente de la columna en la

probeta graduada. Enjuagar las paredes de la probeta con 2 mL de hexano y concentrar a 1

mL bajo una corriente suave de nitrógeno.




3.2.3.3.7.2 Reactivos y Materiales de Referencia.



74






3.2.4 MÉTODO DE IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN INSTRUMENTAL 3.2.4.1 Aplicación y Alcances

3.2.4.1.1 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de PCBs en los extractos purificados de aguas naturales, residuales municipales e industriales, así como suelo, residuos, sedimentos, organismos, tejidos y alimentos, los extractos y su purificación depende de la matriz analizada, se deben seguir los procedimientos de extracción y purificación adecuados para cada matriz.


interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que

pueden variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de concentración de las

muestras e interferencias presentes en el extracto purificado).

Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de analistas expertos en

el uso de cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas y en la interpretación

de sus resultados. Cada analista debe demostrar la habilidad para generar resultados


3.2.4.2 Resumen

El extracto purificado y concentrado se analiza en un Sistema de Cromatografía de

Gases acoplado a espectrometría de masas con la capacidad de trabajar en los modos

SIM y SCAN simultáneamente, en caso de que se detecte algún PCB mediante los

tiempos de retención (Tr) coincidentes con los de los estándares respectivos y por el

espectro de masas en modo SCAN coincidente con el de la biblioteca estandarizada

del sistema de manejo de datos y con el ion cuantitativo y los 2 iones cualificadores

con sus respectivas áreas proporcionales obtenidas de los estándares de la curva de

calibración en el modo SIM, se cuantifica mediante el método de estándar interno, en

caso de que se cumplan los Tr pero no exista coincidencia entre las proporciones de

los iones cualificadores se debe tomar como tentativa la identificación, en caso de

que no se cumpla con los Tr o con el ion cuantitativo, entonces se trata de algún pico

interferente y no se reportan los resultados como positivos a PCBs.

3.2.4.3 Equipos y Materiales



75

3.2.4.3.1 Equipo

Cromatógrafo de gases – Sistema analítico completo con cromatógrafo de gases con programación de temperatura para técnica de inyección split-splitless con control electrónico de presión (Agilent 7890 o equivalente).

Espectrómetro de masas capaz de realizar barridos de 35 a 500 uma por segundo o menor, usando una fuente de ionización de impacto electrónico con energía de 70 electrón volts. El espectrómetro debe ser capaz de

producir una espectro de masas (al inyectar 1 L de la disolución de decafluorotrifenilfosfina DFTPP), el cual cumpla con los criterios mencionados en la sección de control de calidad (Agilent 5975 o equivalente).

Sistema de manejo de datos el cual se encuentra acoplado al GC/MS, Este sistema debe ser capaz de tener una adquisición y almacenamiento continuo de todos los espectros de masas generados durante el programa cromatográfico y poder analizar en modo SCAN y SIM las señales de los compuestos eluídos de la columna capilar del GC (agilent Chemsation).

Balanza analítica con precisión de 0.0001 g

3.2.4.3.2 Materiales

Columna capilar de sílica fundida HP-5MS (Crosslinked 5% fenil metil

siloxano) de 30 m de longitud, 0.25 mm de diámetro y 0.25 m de película de espesor o equivalente.

Microjeringa de 10 L, marca Hamilton 701N, No. parte 9301-0021 o equivalente.



Matraces volumétricos aforados de 1,5 y 10 mL con tapón esmerilado.

Viales de vidrio con tapa de politetrafluoroetileno (PTFE) de rosca marca Agilent o equivalente.

Insertos de vidrio para puerto de inyección marca Agilent o equivalente.

Septa color gris para bajo flujo, marca Agilent o equivalente.

O-ring de vespel marca Agilent o equivalente.




76

3.2.4.4.1 Reactivos y disoluciones

Hexano, C6H14 grado optima, plaguicida o equivalente

Cloruro de Metileno CH2Cl2 grado óptima, plaguicida o equivalente

3.2.4.4.1.3 Materiales de referencia

Congéneres de PCBs Los patrones pueden ser estándares puros o adquirirse como disoluciones certificadas (patrones de referencia). Si los resultados son para determinar congéneres individuales de PCBs, entonces deben preparase estándares para congéneres puros. Los siguientes congéneres son los más comunes y se pueden conseguir como mezclas certificadas. Este procedimiento puede ser apropiado también para otros congéneres.


2-Clorobifenilo 2051-60-7 1

2,3-Diclorobifenilo 16605-91-7 5






2,2’3,4,5’-Pentaclorobifenilo 38380-02-8 87

2,2’,4,5,5’-Pentaclorobifenilo 37680-73-2 101

2,3,3’,4’,6-Pentaclorobifenilo 38380-03-9 110

2,2’,3,4,4’,5-Hexaclorobifeilo 35065-28-2 138

2,2’,3,4,5,5’-Hexaclorobifenilo 52712-04-6 141

2,2,3,5,5’,6-Hexaclorobifenilo 52663-63-5 151

2,2’,4,4’,5,5’-Hexaclorobifenilo 35065-27-1 153


2,2’,3,4,4’,5,5’-Heptaclorobifenilo 35065-29-3 180

2,2’,3,4,4’,5’,6-Heptaclorobifenilo 52663-69-1 183


2,2’,3,3’,4,4’,5,5’,6-Nonaclorobifenilo 40186-72-9 206

Disolución Patrón Preparar a partir de 3.2.4.4.1.3 una mezcla de congéneres de PCBs en una

concentración de 10 mg/L, se deben incluir el decaclorobifenilo como estándar

interno y el tetracloro-m-xileno como surrogado. El disolvente es hexano..

Disolución intermedia de 1 mg/L A partir de la disolución de 10 mg/L, tome 500 µL con una microjeringa en un matraz aforado de 5 mL y afore a la marca con hexano y agite para homogenizar. Guarde la disolución en viales de 2 mL.



77

Disoluciones de calibración Prepare 5 niveles como mínimo de diferente concentración de las disoluciones estándar para cada analito de interés en matraces volumétricos.

El punto de concentración más bajo de la curva de calibración debe ser 3 a 10 veces mayor que el valor del LDM. Las otras concentraciones corresponden al intervalo esperado de las concentraciones encontradas en las muestras reales o bien estarán definidas por el intervalo lineal del detector.

Estándar de calibración de 0.05 mg/L.- En un matraz aforado de 1 ml ponga 50 µL de la solución de 1 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta disolución en viales de 2 ml y rotule con etiqueta que contenga método, fecha de preparación, concentración, solvente utilizado, persona que lo preparó

Estándar de calibración de 0.1 mg/L.- En un matraz de 1 ml ponga 100 µl de la solución de 1 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta disolución en viales de 2 ml y etiquete.

Estándar de calibración de 0.005 mg/L.-. En un matraz de 1 ml ponga 100 µL de la solución de 0.05 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde esta disolución en viales de 2 ml y etiquete..

Estándar de calibración de 0.25 mg/L.-. En un matraz aforado 1 mL ponga 250 µL de la solución de 1 mg/L y afore a la marca con hexano y guarde esta disolución en viales de 2 mL y etiquete.

Estándar de calibración de 0.5 mg/L.-. En un matraz aforado de 1 ml ponga 500 µL de la solución de 0.05 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde la disolución en viales de 2ml y etiquete.

3.2.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo Cada laboratorio que utilice este método está obligado a operar un programa de control de calidad (CC) formal. Los requerimientos mínimos de este programa consisten en una demostración inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con las especificaciones de desempeño del método, además realizar análisis continuos de muestras de control de calidad (MCC) para demostrar la precisión y exactitud continuas y el análisis de blancos. El desempeño del laboratorio debe compararse con los criterios aquí establecidos, con objeto de determinar si los resultados de los análisis cumplen con las especificaciones de desempeño del método. El analista debe hacer una demostración inicial de su habilidad para generar una exactitud y precisión aceptables por este método.

Cada vez que se realice una modificación al método o que se cambie el analista responsable de llevar a cabo está determinación, el analista designado debe repetir la validación del método, si el cambio va a afectar el límite de detección del método (LDM), el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o más bajo que el anterior para los analitos de interés.

No se permite el uso de técnicas determinativas alternativas y cambios que degraden la ejecución del método. Si se utiliza una técnica analítica que no sea la especificada en este método, dicha técnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las de las técnicas descritas en este documento para el analito de interés.



78

Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a este método. Estos registros deben de incluir lo siguiente:

- La justificación por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al método para ese analito. - Los nombres, títulos, direcciones y número de teléfono de los analistas que ejecutaron los análisis y modificaciones y el encargado de control de calidad que presenció y verificó los análisis y sus modificaciones.

- Los resultados de todas las pruebas de CC del método modificado comparadas con el método original, dichos datos deben de incluir todos los parámetros mencionados en la sección de desempeño del método.

- La información escrita en las bitácoras tanto del equipo como del analista, deben incluir los siguientes datos:

Identificación de la muestra

Número del lote analítico en el cual se analizó la muestra

Fecha del análisis

Procedimiento cronológico utilizado

Cantidad de muestra utilizada

Número de muestras de control de calidad analizadas en el lote

Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medición

Registros de bitácoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de información

Información cruda reportada por los equipos o por los analistas

Evidencia de la aceptación o rechazo de los resultados del lote analítico.


3.2.4.5.1.1 Verificación de la sintonía del espectrómetro de masas (Autotune)

Realice una autosintonía (autotune y DFTPP tune), siguiendo las actividades descritas en el instructivo de la calibración del espectrómetro de masas correspondiente. Esta es una autosintonía (autotune) que hace el instrumento con respecto a una sustancia de referencia llamada Perfluorotributilamina PFTBA

Si no se cumple con las especificaciones siguientes, determine las causas y corrija el problema, de acuerdo al instructivo de mantenimiento preventivo del instrumento, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del sistema GC/MS.

Especificaciones para el autotune

Masa Especificación

69 100%



79

219 30% respecto a la masa 69

502 1% respecto a la mas 69

3.2.4.5.1.2 Verificación del Sistema (sintonía del MS con DFTPP) de acuerdo a las especificaciones el método.

Inyecte 2 L de la disolución de DFTPP según las condiciones instrumentales anexas, y obtenga el espectro de la DFTPP. Verifique que el espectro cumpla con los siguientes criterios

ION MASICO CRITERIO DE ABUNDANCIA RELATIVA DE IONES MASICOS DE LA DFTPP

51 30 A 60% de la masa 198

68 < 2% DE LA MASA 69

70 < 2 % DE LA MASA 69

127 40 A 60 % DE LA MASA 198

197 <1% DE LA MASA 198

198 PICO BASE 100 %

199 5 A 9% DE LA MASA 198

275 10 A 30 % DE LA MASA 198

365 > A 1 % DE LA MASA 198

441 PRESENTE PERO MENOR QUE LA MASA 443

442 > 40% DE LA MASA 198

443 17 A 23 % DE LA MASA 442

Si el espectro obtenido de DFTPP no cumpliera con las condiciones anteriores será necesario que revise los parámetros de sintonía del espectrómetro, repita nuevamente la sintonía (autotune y DFTPP tune) e inyecte nuevamente la disolución de DFTPP.

Verifique que el sistema GC/MS esté libre de contaminación (nivel señal-ruido) Realice un blanco electrónico bajo las condiciones instrumentales del método. El blanco electrónico como su nombre lo dice es una corrida electrónica exclusivamente (sin inyección alguna), y éste debe estar libre de picos o en su defecto éstos deberán ser no mayores a 5 veces el ruido. En caso de no cumplir con lo mencionado en la sección anterior, eleve las temperaturas tanto de la columna a 300 ºC, del puerto de inyección a 280 ºC y del detector a 300 ºC, mantenga el sistema bajo éstas condiciones de temperatura por 30 min y realice



80

nuevamente el blanco electrónico. En caso de persistir el problema lleve a cabo las acciones de limpieza del instrumento mencionadas en el instructivo de mantenimiento preventivo correspondiente.

Verifique que los flujo de gases y condiciones cromatográficas sean las adecuadas, según se menciona posteriormente.

3.2.4.5.1.3 Verificación del Funcionamiento del Sistema GC/MS (SPCCs)

De la misma corrida del punto del DFTTP tune, verifique la degradación del DDT (compuesto incluido en la disolución SPCCs) a DDE y DDD, la suma de las respuestas del DDE y DDD no deben exceder del 20% con respecto a la respuesta del DDT.

La bencidina y el pentaclorofenol deben presentarse en sus respuestas normales (más menos 50%) y como picos bien definidos y sin coleo. Si la degradación es excesiva y/o dan pobre respuesta cromatográfica, revise el puerto de inyección y límpielo, cambie el liner, sello dorado y si es necesario que corte los primeros 5 a 10 cm de la columna capilar en el extremo que conecta al puerto de inyección.

3.2.4.5.2 Verificación de la calibración inicial.



áreadetotalCF

100% xCF

SDCFRSD

Donde: SDCF= Desviación estándar de los factores de calibración CF = Promedio de los factores de calibración La verificación de la calibración inicial puede también efectuarse mediante la regresión por mínimos cuadrados, en la cual el criterio de aceptación es que el factor de correlación "r2" sea mayor o igual a 0.997. Si los criterios para el % RSD o r no se cumplen se procede a la revisión del sistema cromatográfico y la preparación de las disoluciones de calibración.

Posteriormente la curva de calibración será vigente, si el análisis de un punto intermedio de la curva no presenta una variación de la concentración mayor al 15% y que será calculada de la siguiente manera.



81

100% xCT


Donde CC= concentración calculada CT= concentración teórica O si se utiliza el factor de calibración

100% xCF


Donde: CFv= Es el factor de calibración de cada compuesto en el estándar de verificación. CF = Es la media del factor de calibración del compuesto de la calibración inicial. Si el criterio de aceptación para la diferencia porcentual es mayor al 15% se procederá a la revisión del sistema cromatográfico y a la preparación de la solución estándar utilizada.


Los blancos de reactivos no deben presentar ningún tipo de contaminante al tiempo de retención de los analitos, por lo que es importante que los reactivos utilizados cumplan con las especificaciones mencionadas. Si los resultados de los blancos no cumplen con el criterio mencionado, se debe

localizar la fuente de contaminación y extraer y analizar nuevamente las muestras

asociadas al blanco contaminado



3.2.4.5.4 Verificación del lote analítico Por cada lote analítico de muestras analice al menos una muestra sintética de control de calidad o preferentemente un material de referencia certificado de la misma matriz de las muestras analizadas en el lote analítico, calcule el % de recuperación de cada analito y surrogados de la muestra control, los cuales deberán estar dentro del rango de 80 120 %R, de no ser así se debe revisar la preparación de la muestra control y el sistema cromatográfico. Realizar la corrección necesaria y reanalizar la muestra control, si el problema persiste, se deben reanalizar todas las muestras del lote analítico.

3.2.4.5.5 Verificación de interferencias de matriz



82

La verificación de interferencias por parte de la muestra se lleva a cabo mediante las muestras fortificadas (MF). El laboratorio debe realizar el análisis de muestras fortificadas (MF) y muestras duplicadas (MD), fortifique una muestra por cada lote analítico o preferentemente una muestra de cada tipo de matriz analizada en el lote. Las muestras fortificadas se deben analizar cuando por las características de la muestra se sospeche de interferencias de matriz o cuando sean parte de un plan de aseguramiento de calidad de un proyecto. Efecto de la matriz en el recobro del analito – Muestras fortificadas (MF): Analice las muestras fortificadas: Calcule el por ciento de recobro El % de Recobro debe estar dentro 80 a 120 %R Si los valores no cumplen con lo especificado, el sistema analítico está fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico. Efecto de la matriz en la precisión del analito – Precisión de la matriz duplicada (MD): Analice una muestra duplicada por cada lote de muestra.

Calcule la diferencia porcentual relativa (DPR) entre la muestra y la duplicada para cada analito, con la siguiente ecuación:

21

200*21

CC

CCDPR

Donde: C1 Concentración de la primera muestra C2 concentración de la segunda muestra (muestra duplicada) La DPR de cada analito obtenido entre la muestra y la duplicada debe ser:<20% Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analítico está fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico. Repita el análisis del lote asociado con la muestra y la duplicada que provocó que la prueba del DPR fallara.


En cada lote analizado, si más de 20 muestras van a ser analizadas durante el día, verifique la curva de calibración analizando un estándar de



83

concentración media del intervalo de trabajo al principio del lote y después de cada 20 muestras ó 12 horas de análisis continuo. Calcule el factor de calibración o la concentración para cada analito del estándar de concentración media, y el por ciento de la diferencia (%D) con la siguiente ecuación:

1001

21x

FC


Donde: FC1 = Factor de calibración promedio para cada plaguicida en la curva de calibración, o la concentración nominal de del estándar de verificación. FC2 = Factor de calibración promedio para cada plaguicida en el estándar de concentración media, o la concentración calculada en el estándar de verificación. El valor obtenido del % de la diferencia (%D) deberá ser menor al 15%, de no ser así verifique su vigencia, revisé también el sistema cromatográfico y determine la causa de la falla y corrija, de no lograr corregir la falla, recalibre nuevamente el sistema y en le caso de que la falla del estándar de verificación sea en un lote mayor de 20 muestras reanalice las 10 muestras anteriores al estándar de verificación que falló.

3.2.4.5.7 Verificación de estándares surrogados. Evalúe los datos de recobro de los surrogados de las muestras. Calcule el % de recuperación de los estándares surrugados en blancos, muestras control, muestras adicionadas (si se realizaron), muestras duplicadas (si se realizaron) y muestras reales, con la siguiente ecuación:

100%Re2

1 xC

CRcuperación

Donde: C1=Concentración calculada de surrugados en la muestra. C2=Concentración nominal del surrugado adicionado a la muestra. El %R debe estar entre el 70 y el 130 % de recuperación de no ser así verifique la preparación de la muestra que fallo y el sistema cromatográfico, determine la causa de la falla y corrija, de no encontrarla, repita la extracción de la muestra y vuelva a analizar si el %R esta fuera del rango de aceptación llene hoja de incidencia y reporte como interferencia de matriz y los resultados obtenidos.



84

Si los valores no cumplen con los especificados, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico.

3.2.4.5.8 Verificación de estándares internos. Compare el área de el o los estándares internos de las muestras con el área promedio de los estándares internos obtenidos de los puntos de calibración, el valor obtenido en el o los estándares internos de la muestra no deben ser menores a 50% ni mayores a 200% del valor promedio obtenido en la curva de calibración para cada estándar interno. Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analítico está fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico. 3.2.4.5.9 Control de Calidad Estadístico – En esta sección se especifica como debe realizarse el control de calidad estadístico obligatorio para este método:

3.2.4.5.9.1 Preparación de las Muestras de Control de Calidad (MCC) Prepare la MCC de la siguiente forma: Se deberá preparar la MCC de una fuente externa al laboratorio o ser preparada de una fuente diferente a la utilizada en la curva de calibración. Prepare una disolución a una concentración que corresponda al rango de trabajo del método.


3.2.4.5.9.2 Gráficas de Control de Exactitud – El laboratorio debe elaborar y mantener actualizadas las gráficas de control de exactitud para cada lote analizado a partir de la demostración inicial de desempeño.

Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deberá

graficarse y deberá estar dentro de los límites de control superior e inferior (

3s).

Si un valor de exactitud es mayor a 3s, deberán rechazarse todos los

resultados del lote analítico, determine las causas y corrija los errores,

documente adecuadamente las incidencias y acciones correctivas, deberá

repetirse el análisis del lote en cuestión.



85

3.2.4.4.9.3 Gráficas de Control de Precisión – El laboratorio debe elaborar y mantener actualizadas las gráficas de control de precisión para cada lote analizado a partir de la demostración inicial de desempeño Determine los límites de control de la siguiente forma:

Límite Superior de Control (LSC) = 3.27R Límite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R Donde:

R = Promedio del DPR


3.2.4.5.10 Validación de modificaciones del método o de métodos alternos Para validar las modificaciones que se efectúen a este método o para la utilización de métodos alternos deberá seguirse el siguiente procedimiento: Si se realizan modificaciones al presente método, deberán validarse parcialmente. Si se utiliza un método alterno cuya fuente sea un método estandarizado por alguna Institución de carácter internacional o reconocida internacionalmente (e. g. ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment Canada, etc.) también deberá validarse parcialmente. Si se utiliza algún método no estandarizado, deberá evidenciarse, además de los parámetros de validación parcial, los parámetros de Robustez, Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante estudios interlaboratorio. Verifique diariamente el desempeño de todo el sistema analítico utilizando los datos recolectados de análisis de blancos reactivos, solución verificadora del desempeño del laboratorio.


Verifique la precisión con réplicas del análisis. Una pobre precisión generalmente puede deberse a fugas, especialmente en el puerto de inyección. Si el sistema cromatográfico se está comportando aparentemente



86

bien, pero con baja sensibilidad, puede ser necesario generar una nueva curva o juego de factores de calibración para verificar las respuestas bajas antes de buscar la fuente del problema.

3.2.4.5.11 Composición del lote analítico (para cada 25 muestras ó 12 horas de análisis continuo)

1 Calibración con PFTBA (Autotune) 2 Calibración con PFTBA (DFTPP) 3 Análisis de DFTPP (Tuning Standard Mixture) 4 Blanco electrónico 5 Mezcla de Verificación 6 Blanco de Reactivos 7 Muestra de Control de Calidad 1 (MCC) 8 Muestra real No. 1 9 Muestra real No. 2 10 Muestras reales (hasta 20 o 12 horas de análisis continuo) 11 Muestra fortificada (si se realizo) 12 Muestra fortificada duplicada (si se realizo) 13 Muestra de Verificación de la Calibración Continua. 14 Siguientes 20 muestras reales


Verificación del Equipo




Autotune Cumple con especificaciones del

fabricante

DFTTP tune Cumple con abundancias

especificadas en el método


Degradación del DDT menor al 15%, no coleo de Bencidina y PCP

Verificación de la Calibración Inicial






87

Verificación de Contaminación de Reactivos



contaminante al tiempo de retención de los analitos medidos

Verificación del Proceso Analítico





Verificación de Interferencias de Matriz



Estabilidad de la Curva de Calibración



% de diferencia menor al 15%



Una vez establecidas las condiciones de operación inyecte un volumen adecuado (2 L) de cada estándar de

calibración por triplicado y al final realice un promedio de las tres curvas y agréguelo a la tabla de

calibración del método.

Si la DSR de cada PCB es 20%, entonces la respuesta del instrumento es considerada lineal y el factor de calibración promedio FC puede utilizarse para la cuantificación de los resultados de las



88

muestras. Si la DSR es mayor que 20%, entonces no puede asumirse linealidad y se debe repetir la curva de calibración. Si se utiliza regresión lineal por mínimos cuadrados, deberá obtener el factor de correlación “r2” para cada analito, el cual deberá ser mayor o igual a 0.997 si “r” es menor a este valor, la curva de calibración no es lineal y deberá verificarse la preparación de los estándares de calibración y el sistema cromatográfico y repetir la calibración.



comportamiento analítico a los compuestos de interés. El analista debe además

demostrar que la medición del estándar interno no es afectada por el método o

interferencias de la matriz.

Prepare los estándares de calibración a un mínimo de cinco concentraciones para

cada analito de interés por adición de volúmenes. Para cada estándar de calibración,

adicione una cantidad conocida constante de uno o más estándares internos y afore

con un solvente apropiado. Uno de los estándares debe estar a una concentración

cercana, pero por arriba, del LPC. Las otras concentraciones deben corresponder al

rango de trabajo.

Inyecte cada estándar de calibración. Tabule la altura del pico o el área de respuesta

contra la concentración de cada compuesto y el estándar interno. Calcule el factor de

respuesta (RF) para cada compuesto como sigue:

CsAis

CisAsRF

*

*

Donde:





Si el valor RF sobre el rango de trabajo es constante (< 20% RSD), el RF puede

usarse para cálculos. Alternativamente, los resultados pueden usarse para graficar una

curva de calibración de la relación de respuesta, As/Ais contra RF.




Gas acarreador Helio Temperatura inicial 100 °C Tiempo inicial 5 min Programa 1 10ºC/min



89

Temperatura final 1 200ºC Programa 2 15ºC/min Temperatura final 2 300ºC 1 min Temperatura del inyector 250ºC Temperatura del detector 300ºC Modo splitless Flujo de split 50 mL/min Purga de septa 3 mL/min

Adicione un volumen de la mezcla de estándares internos, de manera que la concentración de estos en el vial sea igual a la concentración que se utilizo en la preparación de la curva de calibración. Elabore la secuencia de análisis de acuerdo a lo indicado en el punto de composición del lote analítico. Inicie el análisis.

Inyecte un volumen de 2 L del extracto de la muestra o estándar en el cromatógrafo de gases. Registre el volumen final del extracto. Verifique que se cumple con lo especificado en el inciso de control de calidad y criterios de aceptación y rechazo. Si la respuesta de cualquier ion cuantitativo excede la respuesta del intervalo de calibración, diluya el extracto y reanalice. 3.2.4.7.2 Identificación de los analitos

La determinación cualitativa de cada compuesto determinado por este método está basada en la comparación del tiempo de retención y de los espectros de masas de las muestras, con los tiempos y iones característicos de los espectros de masas de los estándares de referencia en modo SCAN. Los espectros de masas de referencia en modo SIM están definidos por tres iones de mayor intensidad relativa (mayor al 30% de intensidad). Los compuestos son identificados como presentes cuando cumplen con los siguientes criterios:

El tiempo de retención relativo TRR del compuesto detectado es 0.5 unidades del TRR del estándar de referencia. La intensidad relativa de los iones cualificadores en modo SIM se encuentren dentro del 30% de las intensidades relativas de estos iones en el espectro de referencia (ejemplo: para un ion con abundancia del 50% en el espectro de referencia, la abundancia en el espectro de la muestra debe encontrarse en el intervalo de 20% y 80%) Los iones que estén presentes en el espectro de la muestra y que no estén en el espectro del estándar deben ser revisados cuidadosamente, ya que puede tratarse de contaminación de fondo o coelusión de otros compuestos.



90

Si hay iones que estén presentes en el espectro del estándar y no estén presentes en la muestra, debe someterlo a revisión ya que éstos pueden haberse perdido por posibles sustracciones en el momento de limpiar los espectros Para muestras que contienen componentes que no están asociados con los estándares de calibración, realice una búsqueda por librería para obtener una identificación y a partir de los estándares internos, obtener una concentración estimada.

3.2.4.7.3 Cálculos


VER PLAGUICIDAS CLORADOS

1.1.3.

3.2.4.7.3.2 AGUA


3.2.4.7.3.3 SUELOS Y SEDIMENTOS


3.2.4.7.3.4 ALIMENTOS PROCESADOS, SIN PROCESAR, TEJIDOS Y

ALIMENTOS




3.2.4.8.1 Límite de Detección: Ver Tabla 5. 3.2.4.8.2 Límite Práctico de Cuantificación: Ver Tabla 5 3.2.4.8.3 Intervalo de Trabajo: Ver Tabla 5 3.2.4.8.4 Precisión del Método: Ver Tabla 5 3.2.4.8.5 Exactitud del Método: Ver Tabla 5


TABLA 1 CANTIDADES DE MUESTRA SUGERIDAS PARA ANALIZAR VARIAS MATRICES (1)

Matriz de la muestra (2)

Ejemplo Por ciento de

sólidos Fase

Cantidad extraída

Muestras Monofásicas

Acuosa Agua Potable

<1 (3) 1000 mL Agua subterránea

Aguas tratadas

Sólido Suelos seco >20 Solida 10 g

Composta



91

Cenizas

Organica Solventes residuales

<1 Organica 10 g Aceites gastados

Organic polymer

Tejidos Peces — Organica 10 g

Humano adiposo

Muestras Multifásicas

Liquida/Solida

Acuosa/Sólida

Suelos húmedo o sedimentos

1-30 Sólida 10 g

Efluentes no tratados

Lodos municipales digeridos

Lodos tratados secos

Pulpa de papel

Orgánica/sólida Lodos Industriales 1-100 Ambas 10 g

Residuos Aceitosos

Liquida/Liquida

Acuosa/orgánica

Efluentes de proceso

<1 Orgánica 10 g Efluentes no tratados

Residuos líquidos orgánicos

Acuosa/sólida/sólida

Efluentes industriales no tratados >1

Orgánica y sólida

10 g

Residuos industriales

1. La cantidad de muestra a extraer se debe ajustar para proporcionar 10 g de sólidos en base seca o 1 litro acuoso.

2. En general, cuando los PCBs están en contacto con sistemas multifásicos, en el cual una de las fases es acuosa, los PCBs se dispersarán

preferentemente en la fase orgánica debido a la baja solubilidad de los mismos. 3. Las muestras acuosas se deben filtrar después de su adición de surrogados o de haberla fortificado, el filtrado y los sólidos se deben extraer

separadamente y los extractos combinados antes de su purificación y análisis.



92

TABLA 2

CONGENERES ESPECIFICOS QUE SON COMPONENTES MAYORES DE LOS AROCLORES COMUNES

Aroclor

Congénere Número IUPAC

1016 1221 1232 1242 1248 1254 1260

Bifenilo X

2-CB 1 X X X X

2,3-DCB 5 X X X X X

3,4-DCB 12 X X X X

2,4,4'-TCB 28* X X X X X

2,2',3,5'-TCB 44 X X X X X

2,3',4,4'-TCB 66* X X X

2,3,3',4',6-PCB 110 X

2,3',4,4',5-PCB 118* X X

2,2',4,4',5,5'-HCB 153 X

2,2',3,4,4',5'-HCB 138 X

2,2',3,4,4',5,5'-HpCB 180 X

2,2',3,3',4,4',5-HpCB 170 X

*Coelución aparente del 28 con el 31 (2,4',5-triclorobifenilo

* Coelución aparente del 66 con el 95 95 (2,2',3,5',6-pentaclorobifenilo

*Coelución aparente del 118 con el 149 (2,2',3,4',5',6-hexaclorobifenilo

Esta tabla no tiene la intención de ilustrar todos los congéneres que pueden estar presente en un Aroclor dado, solo cuales son los componentes mayores



93

TABLA 3 IDENTIFICACION DE TODOS LOS CONGENERES DE PCBs Y SUS ANALOGOS MARCADOS

CONGENERE No. CAS ANALOGO MARCADO No. CAS

2-MoCB 1 2051-60-7 13C12-2-MoCB2 1L 234432-85-0

3-MoCB 2 2051-61-8

4-MoCB 3 2051-62-9 13C12-4-MoCB2 3L 208263-77-8

2,2'-DiCB 4 13029-08-8 13C12-2,2'-DiCB2 4L 234432-86-1

2,3-DiCB 5 16605-91-7

2,3'-DiCB 6 25569-80-6

2,4-DiCB 7 33284-50-3

2,4'-DiCB3 8 34883-43-7

2,5-DiCB 9 34883-39-1 13C12-2,5-DiCB4 9L 250694-89-4

2,6-DiCB 10 33146-45-1

3,3'-DiCB 11 2050-67-1

3,4-DiCB 12 2974-92-7

3,4'-DiCB 13 2974-90-5

3,5-DiCB 14 34883-41-5

4,4'-DiCB 15 2050-68-2 13C12-4,4'-DiCB2 15L 208263-67-6

2,2',3-TrCB 16 38444-78-9

2,2',4-TrCB 17 37680-66-3

2,2',5-TrCB3 18 37680-65-2

2,2',6-TrCB 19 38444-73-4 13C12-2,2',6-TrCB2 19L 234432-87-2

2,3,3'-TrCB 20 38444-84-7

2,3,4-TrCB 21 55702-46-0

2,3,4'-TrCB 22 38444-85-8

2,3,5-TrCB 23 55720-44-0

2,3,6-TrCB 24 55702-45-9

2,3',4-TrCB 25 55712-37-3

2,3',5-TrCB 26 38444-81-4

2,3',6-TrCB 27 38444-76-7

2,4,4'-TrCB3 28 7012-37-5 13C12-2,4,4'-TriCB5 28L 208263-76-7

2,4,5-TrCB 29 15862-07-4

2,4,6-TrCB 30 35693-92-6

2,4',5-TrCB 31 16606-02-3

2,4',6-TrCB 32 38444-77-8

2',3,4-TrCB 33 38444-86-9

2',3,5-TrCB 34 37680-68-5

3,3',4-TrCB 35 37680-69-6

3,3',5-TrCB 36 38444-87-0

3,4,4'-TrCB 37 38444-90-5 13C12-3,4,4'-TrCB2 37L 208263-79-0

3,4,5-TrCB 38 53555-66-1

3,4',5-TrCB 39 38444-88-1

2,2',3,3'-TeCB 40 38444-93-8

2,2',3,4-TeCB 41 52663-59-9

2,2',3,4'-TeCB 42 36559-22-5

2,2',3,5-TeCB 43 70362-46-8

2,2',3,5'-TeCB3 44 41464-39-5



94

2,2',3,6-TeCB 45 70362-45-7

2,2',3,6'-TeCB 46 41464-47-5

2,2',4,4'-TeCB 47 2437-79-8

2,2',4,5-TeCB 48 70362-47-9

2,2',4,5'-TeCB 49 41464-40-8

2,2',4,6-TeCB 50 62796-65-0

2,2',4,6'-TeCB 51 68194-04-7

2,2',5,5'-TeCB3 52 35693-99-3 13C12-2,2',5,5'-TeCB4 52L 208263-80-3

2,2',5,6'-TeCB 53 41464-41-9

2,2',6,6'-TeCB 54 15968-05-5 13C12-2,2',6,6'-TeCB2 54L 234432-88-3

2,3,3',4'-TeCB 55 74338-24-2

2,3,3',4'-TeCB 56 41464-43-1

2,3,3',5-TeCB 57 70424-67-8

2,3,3',5'-TeCB 58 41464-49-7

2,3,3',6-TeCB 59 74472-33-6

2,3,4,4'-TeCB 60 33025-41-1

2,3,4,5-TeCB 61 33284-53-6

2,3,4,6-TeCB 62 54230-22-7

2,3,4',5-TeCB 63 74472-34-7

2,3,4',6-TeCB 64 52663-58-8

2,3,5,6-TeCB 65 33284-54-7

2,3',4,4'-TeCB3 66 32598-10-0

2,3',4,5-TeCB 67 73575-53-8

2,3',4,5'-TeCB 68 73575-52-7

2,3',4,6-TeCB 69 60233-24-1

2,3',4',5-TeCB 70 32598-11-1

2,3',4',6-TeCB 71 41464-46-4

2,3',5,5'-TeCB 72 41464-42-0

2,3',5',6-TeCB 73 74338-23-1

2,4,4',5-TeCB 74 32690-93-0

2,4,4',6-TeCB 75 32598-12-2

2',3,4,5-TeCB 76 70362-48-0

3,3',4,4'-TeCB3,6 77 32598-13-3 13C12-3,3',4,4'-TeCB2,7 77L 105600-23-5

3,3',4,5-TeCB 78 70362-49-1

3,3',4,5'-TeCB 79 41464-48-6

3,3',5,5'-TeCB 80 33284-52-5

3,4,4',5-TeCB6 81 70362-50-4 13C12-3,4,4',5-TeCB7 81L 208461-24-9

2,2',3,3',4-PeCB 82 52663-62-4

2,2',3,3',5-PeCB 83 60145-20-2

2,2',3,3',6-PeCB 84 52663-60-2

2,2',3,4,4'-PeCB 85 65510-45-4

2,2',3,4,5-PeCB 86 55312-69-1

2,2',3,4,5'-PeCB 87 38380-02-8

2,2',3,4,6-PeCB 88 55215-17-3

2,2',3,4,6'-PeCB 89 73575-57-2

2,2',3,4',5-PeCB 90 68194-07-0

2,2',3,4',6-PeCB 91 68194-05-8

2,2',3,5,5'-PeCB 92 52663-61-3

2,2',3,5,6-PeCB 93 73575-56-1



95

2,2',3,5,6'-PeCB 94 73575-55-0

2,2',3,5',6-PeCB 95 38379-99-6

2,2',3,6,6'-PeCB 96 73575-54-9

2,2',3',4,5-PeCB 97 41464-51-1

2,2',3',4,6-PeCB 98 60233-25-2

2,2',4,4',5-PeCB 99 38380-01-7

2,2',4,4',6-PeCB 100 39485-83-1

2,2',4,5,5'-PeCB3 101 37680-73-2 13C12-2,2',4,5,5'-PeCB4 101L 104130-39-4

2,2',4,5,6'-PeCB 102 68194-06-9

2,2',4,5,'6-PeCB 103 60145-21-3

2,2',4,6,6'-PeCB 104 56558-16-8 13C12-2,2',4,6,6'-PeCB2 104L 234432-89-4

2,3,3',4,4'-PeCB3,6 105 32598-14-4 13C12-2,3,3',4,4'-PeCB7 105L 208263-62-1

2,3,3',4,5-PeCB 106 70424-69-0

2,3,3',4',5-PeCB 107 70424-68-9

2,3,3',4,5'-PeCB 108 70362-41-3

2,3,3',4,6-PeCB 109 74472-35-8

2,3,3',4',6-PeCB 110 38380-03-9

2,3,3',5,5'-PeCB 111 39635-32-0 13C12-2,3,3',5,5'-PeCB5 111 L

235416-29-2

2,3,3',5,6-PeCB 112 74472-36-9

2,3,3',5',6-PeCB 113 68194-10-5

2,3,4,4',5-PeCB6 114 74472-37-0 13C12-2,3,4,4',5-PeCB7 114 L

208263-63-2

2,3,4,4',6-PeCB 115 74472-38-1

2,3,4,5,6-PeCB 116 18259-05-7

2,3,4',5,6-PeCB 117 68194-11-6

2,3',4,4',5-PeCB3,6 118 31508-00-6 13C12-2,3',4,4',5-PeCB7 118 L

104130-40-7

2,3',4,4',6-PeCB 119 56558-17-9

2,3',4,5,5'-PeCB 120 68194-12-7

2,3',4,5,'6-PeCB 121 56558-18-0

2',3,3',4,5-PeCB 122 76842-07-4

2',3,4,4',5-PeCB6 123 65510-44-3 13C12-2',3,4,4',5-PeCB7 123L 208263-64-3

2',3,4,5,5'-PeCB 124 70424-70-3

2',3,4,5,6'-PeCB 125 74472-39-2

3,3',4,4',5-PeCB3,6 126 57465-28-8 13C12-3,3',4,4',5-PeCB2,7 126L 208263-65-4

3,3',4,5,5'-PeCB 127 39635-33-1

2,2',3,3',4,4'-HxCB3 128 38380-07-3

2,2',3,3',4,5-HxCB 129 55215-18-4

2,2',3,3',4,5'-HxCB 130 52663-66-8

2,2',3,3',4,6-HxCB 131 61798-70-7

2,2',3,3',4,6'-HxCB 132 38380-05-1

2,2',3,3',5,5'-HxCB 133 35694-04-3

2,2',3,3',5,6-HxCB 134 52704-70-8

2,2',3,3',5,6'-HxCB 135 52744-13-5

2,2',3,3',6,6'-HxCB 136 38411-22-2

2,2',3,4,4',5-HxCB 137 35694-06-5

2,2',3,4,4',5'-HxCB3 138 35065-28-2 13C12-2,2',3,4,4',5'-HxCB4 138L 208263-66-5

2,2',3,4,4',6-HxCB 139 56030-56-9

2,2',3,4,4',6'-HxCB 140 59291-64-4



96

2,2',3,4,5,5'-HxCB 141 52712-04-6

2,2',3,4,5,6-HxCB 142 41411-61-4

2,2',3,4,5,6'-HxCB 143 68194-15-0

2,2',3,4,5',6-HxCB 144 68194-14-9

2,2',3,4,6,6'-HxCB 145 74472-40-5

2,2',3,4',5,5'-HxCB 146 51908-16-8

2,2',3,4',5,6-HxCB 147 68194-13-8

2,2',3,4',5,6'-HxCB 148 74472-41-6

2,2',3,4',5',6-HxCB 149 38380-04-0

2,2',3,4',6,6'-HxCB 150 68194-08-1

2,2',3,5,5',6-HxCB 151 52663-63-5

2,2',3,5,6,6'-HxCB 152 68194-09-2

2,2',4,4',5,5'-HxCB3 153 35065-27-1

2,2',4,4',5',6-HxCB 154 60145-22-4

2,2',4,4',6,6'-HxCB 155 33979-03-2 13C12-2,2',4,4',6,6'-HxCB2 155L 234432-90-7

2,3,3',4,4',5-HxCB6 156 38380-08-4 13C12-2,3,3',4,4',5-HxCB7 156L 208263-68-7

2,3,3',4,4',5'-HxCB6 157 69782-90-7 13C12-2,3,3',4,4',5'-HxCB7 157L 235416-30-5

2,3,3',4,4',6-HxCB 158 74472-42-7

2,3,3',4,5,5'-HxCB 159 39635-35-3

2,3,3',4,5,6-HxCB 160 41411-62-5

2,3,3',4,5',6-HxCB 161 74472-43-8

2,3,3',4',5,5'-HxCB 162 39635-34-2

2,3,3',4',5,6-HxCB 163 74472-44-9

2,3,3',4',5',6-HxCB 164 74472-45-0

2,3,3',5,5',6-HxCB 165 74472-46-1

2,3,4,4',5,6-HxCB 166 41411-63-6

2,3',4,4',5,5'-HxCB6 167 52663-72-6 13C12-2,3',4,4',5,5'-HxCB7 167L 208263-69-8

2,3',4,4',5',6-HxCB 168 59291-65-5

3,3',4,4',5,5'-HxCB3,6 169 32774-16-6 13C12-3,3',4,4',5,5'-HxCB2,7 169L 208263-70-1

2,2',3,3',4,4',5-HpCB3 170 35065-30-6 13C12-2,2',3,3',4,4',5-HpCB 170L 160901-80-4

2,2'3,3',4,4',6-HpCB 171 52663-71-5

2,2',3,3',4,5,5'-HpCB 172 52663-74-8

2,2',3,3',4,5,6-HpCB 173 68194-16-1

2,2',3,3',4,5,6'-HpCB 174 38411-25-5

2,2',3,3',4,5',6-HpCB 175 40186-70-7

2,2',3,3',4,6,6'-HpCB 176 52663-65-7

2,2',3,3',4',5,6-HpCB 177 52663-70-4

2,2',3,3',5,5',6-HpCB 178 52663-67-9 13C12-2,2',3,3',5,5',6-HpCB5 178L 232919-67-4

2,2',3,3',5,6,6'-HpCB 179 52663-64-6

2,2',3,4,4',5,5'-HpCB3 180 35065-29-3 13C12-2,2',3,4,4',5,5'-HpCB 180L 160901-82-6

2,2',3,4,4',5,6-HpCB 181 74472-47-2

2,2',3,4,4',5,6'-HpCB 182 60145-23-5

2,2',3,4,4',5',6-HpCB 183 52663-69-1

2,2',3,4,4',6,6'-HpCB 184 74472-48-3

2,2',3,4,5,5',6-HpCB 185 52712-05-7

2,2',3,4,5,6,6'-HpCB 186 74472-49-4

2,2',3,4',5,5',6-HpCB3 187 52663-68-0

2,2',3,4',5,6,6'-HpCB 188 74487-85-7 13C12-2,2',3,4',5,6,6'-HpCB2 188L 234432-91-8

2,3,3',4,4',5,5'-HpCB6 189 39635-31-9 13C12-2,3,3',4,4',5,5'-HpCB2,7 189L 208263-73-4



97

2,3,3',4,4',5,6-HpCB 190 41411-64-7

2,3,3',4,4',5',6-HpCB 191 74472-50-7

2,3,3',4,5,5',6-HpCB 192 74472-51-8

2,3,3',4',5,5',6-HpCB 193 69782-91-8

2,2',3,3',4,4',5,5'-OcCB 194 35694-08-7 13C12-2,2',3,3',4,4',5,5'-OcCB4 194L 208263-74-5

2,2',3,3',4,4',5,6-OcCB3 195 52663-78-2

2,2',3,3',4,4',5,6'-OcCB 196 42740-50-1

2,2',3,3',4,4',6,6'-OcCB 197 33091-17-7

2,2',3,3',4,5,5',6-OcCB 198 68194-17-2

2,2',3,3',4,5,5',6'-OcCB 199 52663-75-9

2,2',3,3',4,5,6,6'-OcCB 200 52663-73-7

2,2',3,3',4,5',6,6'-OcCB 201 40186-71-8

2,2',3,3',5,5',6,6'-OcCB 202 2136-99-4 13C12-2,2',3,3',5,5',6,6'-OcCB2 202L 105600-26-8

2,2',3,4,4',5,5',6-OcCB 203 52663-76-0

2,2',3,4,4',5,6,6'-OcCB 204 74472-52-9

2,3,3',4,4',5,5',6-OcCB 205 74472-53-0 13C12-2,3,3',4,4',5,5',6-OcCB2 205L 234446-64-1

2,2',3,3',4,4',5,5',6-NoCB3 206 40186-72-9 13C12-2,2',3,3',4,4',5,5',6-

NoCB2 206L 208263-75-6

2,2',3,3',4,4',5,6,6'-NoCB 207 52663-79-3

2,2',3,3',4,5,5',6,6'-NoCB 208 52663-77-1 13C12-2,2',3,3',4,5,5',6,6'-

NoCB2 208L 234432-92-9

DeCB3 209 2051-24-3 C12-DeCB2 209L 105600-27-9

1. Abreviaciones para los niveles de cloración:

MoCB monoclorobifenilos DiCB diclorobifenilos TrCB triclorobifenilos TeCB tetraclorobifenilos PeCB pentaclorobifenilos HxCB hexaclorobifenilos HpCB heptaclorobifenilos OcCB octaclorobifenilos NoCB nonaclorobifenilos DeCB decaclorobifenilos

2. Congénere marcado que define el Nivel de cloración

3. Congénere de interés para la National Oceanic and Atmospheric Administration (NOAA)

4. Estándar interno marcado

5. Estándar marcado de limpieza

6. Congénere considerado tóxico para la OMS

7. Congénere marcado de los considerados tóxicos por la OMS



98

TABLA 4 COMPOSICIÓN DE CONGÉNERES INDIVIDUALES EN SOLUCIONES DE CALIBRACIÓN

COMERCIALES1

Identificación de la Solución de Accu-Standard

A2 B2 C2 D2 E2

No. de parte de Accu-Standard

M-1668A-1 M-1668A-2 M-1668A-3 M-1668A-4 M-1668A-5

2 7 13 25 1

10 5 17 21 3

9 12 29 69 4

6 18 20 47 15

8 24 46 42 19

14 23 65 64 16

11 28 59 70 37

30 22 40 102 54

27 39 67 97 43

32 53 76 115 44

34 51 80 123 74

26 73 93 134 56

31 48 84 131 77

33 62 101 163 104

36 71 112 180 98

38 68 86 125

35 58 116 110

50 61 107 126

45 55 154 155

52 60 147 138

49 94 140 169

75 100 146 188

41 91 141 189

72 121 164 202

57 90 158 205

63 99 182 208

66 109 174 206

79 117 173 209

78 111 193

81 108

96 118

103 114

95 150

88 145

89 135

92 149

113 139

83 132

119 165

87 168

85 137

82 160

120 128

124 162

106 157

122 184

105 186



99

127 187

152 185

136 181

148 192

151 197

144 199

143 203

142

133

161

153

130

129

166

159

167

156

179

176

178

175

183

177

171

172

191

170

190

200

204

201

198

196

195

194

207

No. Total de congéneres

83 54 29 15 28

1. Congéneres presentes en cada solución estándar se listan en orden de elusión para cada nivel de cloración identificada

por su número IUPAC.



100

TABLA 5 LÍMITES DE DETECCIÓN ESTIMADOS Y LÍMITES PRÁCTICOS DE CUANTIFICACIÓN ESTIMADOS

Congénere No.

IUPAC

Límites de Detección por Matriz

Agua (pg/L) Sólidos (ng/kg) Extractos

(pg/μL)

LDM LPC LDM LPC LPC

1 820 2000 80 200 100

5 110 500 100 500 200

31 1520 5000 150 500 200

52 1910 5000 190 500 200

44 1950 5000 190 500 200

66 1620 5000 160 500 200

81 1770 5000 180 500 200

77 1690 5000 170 500 200

101 2410 10000 240 1000 500

87 1490 5000 150 500 200

110 2430 10000 240 1000 500

118 1930 5000 190 500 200

114 1200 5000 120 500 200

105 1090 2000 110 200 100

126 1360 5000 140 500 200

151 1120 5000 110 500 200

141 930 2000 90 200 100

138 2110 5000 210 500 200

167 1150 5000 110 500 200

156 1320 5000 130 500 200

183 4010 10000 400 1000 500

180 1360 5000 140 500 200

170 1620 5000 160 500 200

206 4510 10000 450 1000 500

LDM = Limite de detección estimado

LPC = Limite Práctico de Cuantificación

USEPA METHOD 1668 MOD.



101

3.3 HIDROCARBUROS POLIAROMÁTICOS (HPAs), CLORDECON Y PENTACLOROBENCENO

El principio de este método se basa en la extracción, purificación y concentración del extracto purificado con objeto de la medición de los HPAs, Clordecone y Pentaclorobenceno presentes en el extracto orgánico purificado de la muestra inyectando una alícuota de 2 µL en un cromatógrafo de gases acoplado a un detector selectivo de masas que trabaja simultáneamente en los modos SIM y SCAN. La identificación de los analitos se realiza por la comparación de los espectros de masas con los de la biblioteca estandarizada de la estación de datos, las abundancias relativas de los iones cualificadores y con los tiempos de retención de los estándares certificados, su cuantificación se realiza por medio del método de estándar interno.




Detector Selectivo de Masas con capacidad de trabajo simultáneo en modos SIM y SCAN.


3.3.1.1 Propósito.- Este método se aplica para la identificación y cuantificación de los 16 HPAs, está diseñado para ser altamente sensible y específico. 3.3.1.2 Analitos.- Los Hidrocarburos Poliaromáticos que pueden ser determinados por este

método son:

Acenafteno

Acenaftileno

Antraceno

Benzo(a)antraceno

Benzo(a)pireno

Benzo(b)fluoranteno

Benzo(ghi)perileno

Benzo(k)fluoranteno

Criseno

Dibenzo(a,h)antraceno

Fenantreno



102

Fluoranteno

Fluoreno

Indeno(1,2,3-cd)pireno

Naftaleno

Pireno

Clordecone

Pentaclorobenceno

3.3.1.3 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de los Hidrocarburos Poliaromáticos mencionados en el inciso anterior en las siguientes matrices ambientales:

Aire Ambiente

Suelos

Sedimentos Marinos


Aguas Marinas



Aguas Subterráneas

Alimentos procesados, sin procesar, organismos y tejidos animales

Sangre








3.3.2 Resumen

AIRE AMBIENTE

Se utiliza un muestreador alto volumen modificado (Hi-Vol), con un filtro de fibra de vidrio y un cartucho absorbente con espuma de poliuretano (PUF). El muestreo se lleva a cabo a una flujo de ~ 200-280 L/min durante 24 h. El filtro y el cartucho PUF se colocan en contenedores limpios y sellados, para luego trasladarse al laboratorio para su análisis. Los HPAs se recuperan por extracción Soxhlet con éter al 5% en hexano. El volumen de los extractos se reduce con la técnica Kuderna-Danish (K-D) y se someten a una limpieza con ácido sulfúrico diseñado específicamente para este tipo de análisis. Los extractos se someten a cromatografía de gases con detector selectivo de masas (GC/MSD) en el modo SIM y SCAN simultáneamente para la detección y cuantificación de HPAs, Clordecone y Pentaclorobenceno.



103

Generalmente se alcanzan límites de detección <1 ng/m3 con un periodo de muestreo de 24 horas.

AGUAS (Marinas, Costeras, Estaurinas, Lagunas Costeras, Superficiales Epicontinentales y Subterráneas)

Este método está diseñado para muestras de agua sin contaminación aparente (no aplica para aguas residuales o aguas naturales altamente contaminadas con materia orgánica, principalmente grasas y aceites). Los analitos se extraen en 1 L de muestra a través de una extracción liquido-liquido. El volumen de los extractos se reduce con la técnica Kuderna-Danish (K-D) y se purifican por cromatografía en columna. Se inyectan 2 µL al GC/MSD en modo SIM/SCAN simultáneamente. El tiempo total del análisis es de 30 a 50 minutos por muestra, dependiendo de los analitos y las condiciones analíticas que se escojan. Los límites de detección del método se encuentran entre 0.005 a 0.01 µg/L.

SUELOS Y SEDIMENTOS

Aproximadamente de 10 g de muestra se extraen con cloruro de metileno-acetona (1:1) con ayuda un brazo ultrasonico. Distintos procedimientos de limpieza pueden aplicarse al extracto, dependiendo de la naturaleza de las interferencias de la matriz coextraida y de los analitos. Después de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alícuota de 2 µL en el GC/MSD en modo SIM y SCAN simultáneamente. .

Los límites de detección con este método varían de 1 a 10 µg/Kg BS según los

diferentes analitos en matrices libres de interferencias.


Una muestra de 10 a 25 g para tejidos, 50 a 100 g en alimentos sólidos y 100 mL de alimentos líquidos se extrae utilizando la técnica de extracción apropiada. Los extractos para el análisis de HPAs, Clordecone y Pentaclorobenceno se someten a una limpieza en columna. Después de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alícuota de 2µL en el GC/MSD en modo SIM y SCAN simultáneamente.

SANGRE HUMANA

La muestra se extrae 3 veces con cloruro de metileno, después se agrega sulfato de sodio y se homogeniza por 3 minutos en cada extracción. Los extractos se combinan, se hacen pasar por una columna con sulfato de sodio y se concentran. Se realiza cambio de disolvente a ciclohexano. La muestra se limpia por columna cromatográfica con silica gel,



104

se evapora el disolvente y se pasa a un vial para su análisis por GC/MS SIM/SCAN simultáneamente.

LECHE MATERNA

Una alícuota de 10g de leche se extrae con una mezcla de metanol, cloruro de sodio y cloroformo. La limpieza de los extractos se lleva a cabo por cromatografía de exclusión molecular. Los compuestos se determinan por GC-MSD en modo SIM y SCAN simultáneamente.

3.3.3 Procedimientos de Extracción y Purificación de muestras Antes de utilizar cualquier procedimiento de limpieza, el analista debe procesar una serie de estándares de

calibración por medio del procedimiento para validar los patrones de elusión y la ausencia de interferencias de los

reactivos.


Las interferencias del método pueden originarse por la presencia de contaminantes en los solventes, reactivos, material de vidrio o cualquier otro material durante el procesamiento de la muestra (contaminación cruzada). El material de vidrio debe lavarse escrupulosamente. Lave el material de vidrio enjuagándolo profundamente con el último disolvente utilizado en él. Después lávelo con agua caliente y detergente y enjuáguelo con agua corriente y grado reactivo. Escúrralo, séquelo y enjuáguelo con acetona. Después de secarlo y enfriarlo, selle el material de vidrio y guárdelo en un ambiente limpio para evitar acumulación de polvo u otros contaminantes. Guarde el material invertido o tapado con papel aluminio.

El uso de reactivos y disolventes de alta pureza ayuda a eliminar los problemas de interferencias. Puede ser necesario purificar los disolventes por destilación en material de vidrio. PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan los estabilizadores, lo que puede hacerlo peligroso. También pueden eliminarse conservadores, reduciéndose su vida de anaquel. Puede existir interferencia cuando se analiza una muestra con concentraciones bajas de los analitos después de una muestra con concentraciones altas. Para evitar esto, después de una muestra con concentraciones altas, debe inyectarse una o varias veces hexano para asegurar que se obtengan valores precisos en la siguiente muestra. Es importante que las muestras y los estándares de trabajo se encuentren en el mismo disolvente. El disolvente de trabajo para los estándares debe ser el mismo que el disolvente final utilizado en la preparación de la muestra. De no ser este el caso, puede afectarse la comparación cromatográfica entre los estándares y la muestra. 3.3.3.2 Seguridad general

La carcinogenidad y toxicidad de los químicos utilizados en este método no ha sido determinadas con precisión; de todas maneras; cada sustancia química debe ser tratada como potencial peligro a la salud. La exposición a estas sustancias químicas debe ser reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice monitoreos de higiene



105

ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y que dichos resultados estén disponibles para los analistas. PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan estabilizadores, lo que puede hacerlo peligroso. Este método puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con su uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y un archivo de las normas de seguridad respecto a la exposición y manejo seguro de las sustancias químicas especificadas en este método. Debe tenerse un archivo de referencias de las hojas de información de seguridad el cual debe estar disponible a todo el personal involucrado en estos análisis.


3.3.3.3.1.1Equipo y Materiales

3.3.3.3.1.1.1 Equipos



3.3.3.3.1.2.1 Reactivos

Silica Gel malla 100/120 (Davison Chemical grado 923 o equivalente), active la sílica gel durante 16 horas a 130ºC antes de su uso.

Ciclohexano grado pesticida o equivalente

Pentano grado pesticida o equivalente



3.3.3.3.1.2.2.1 Estándares de calibración de HPAs, Pentaclorobenceno y Clordecone

Los HPAs son los más comunes y se pueden conseguir como mezclas certificadas. El

pentaclorobenceno y Clordecone se pueden encontrar puro o en disoluciones

certificadas.

Compuesto CAS

Acenafteno 83-32-9

Acenaftileno 208-96-8

Antraceno 120-12-7

Benzo(a)antraceno 56-55-3

Benzo(a)pireno 50-32-8



106

Benzo(b)fluoranteno 200-99-2

Benzo(ghi)perileno 191-24-2

Benzo(k)fluoranteno 207-08-9

Criseno 218-01-9

Dibenzo(a,h)antraceno 53-70-3

Fenantreno 85-07-8

Fluoranteno 206-44-0

Fluoreno 86-73-7

Indeno(1,2,3-cd)pireno 193-39-5

Naftaleno 91-20-3

Pireno 129-00-0

Pentaclorobenceno 608-93-5

Clordecone (Kepone) 143-50-0

Los estándares deben utilizarse para preparar un mínimo de cinco concentraciones por dilución con hexano. Las concentraciones deben corresponder al intervalo esperado de concentraciones que se encontrarán en las muestras reales y deben ajustarse al rango linear del detector.

Estándares internos

Se deben utilizar como estándares internos: Naftaleno-d5, Acenfteno-d10, Fenantreno-d10, Criseno-d12 y Perileno-d12.


Se deben utilizar el como estándar surrogado: p-terfenilo-d14




La silica gel (ácido silícico) es un adsorbente de silica regenerable con propiedades ligeramente ácidas se puede activar con calentamiento o desactivar con la adición de agua.

Al extracto obtenido en la extracción se debe intercambiar el hexano por ciclohexano; para ello en un micro KD agregue 4 mL de ciclohexano y concentre a 1-2 mL (NOTA: No deje que el volumen de ciclohexano disminuya a menos de 1 mL o se perderán los HPAs de bajo peso molecular). Prepare una masa con 10 g de silica gel y cloruro de metileno y colóquelo en la columna, asiente con algunos pequeños golpes el relleno y agregue 1 o 2 cm de sulfato de sodio anhidro en la parte superior de la columna. Pre-eluya la columna con 40 mL de pentano a un flujo de 2 mL/min. Descarte el eluato y justo antes de que quede expuesta la capa de sulfato de sodio, transfiera



107

cuantitativamente el extracto de la muestra a la columna, enjuague el tubo del extracto con 2 mL de ciclohexano. Antes de que quede expuesta la capa de sulfato de sodio, lave la columna con 25 mL de pentano, deseche el eluato. Eluya la columna con 25 mL de cloruro de metileno/pentano (2:3 v/v) y colecte el eluato en un matraz de 50 mL.

Concentre el eluato identificado en el concentrador a 1 mL (NOTA: No deje que el volumen de solvente disminuya a menos de 1 mL o se perderán los HPAs de bajo peso molecular).

3.3.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales

epicontinentales y subterráneas)


VER PARA AIRE AMBIENTE Y PLAGUICIDAS CLORADOS


VER REACTIVOS PARA PLAGUICIDAS CLORADOS Y EN 3.3.3.3.1.2.2




VER PROCEDIMIENTO EN 3.3.3.3.1.4

3.3.3.3.3 Suelos


VER PARA AIRE AMBIENTE Y PLAGUICIDAD CLORADOS


VER REACTIVOS PARA PLAGUICIDAS CLORADOS Y EN 3.3.3.3.1.2.2








108









3.3.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos

animales,


3.3.3.3.5.1.1 LECHE

VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final es de 1 mL)





3.3.3.3.5.1.4 HIGADO Se toman 10 g de muestra y se adicionan de 20 a 50 g de sulfato de sodio anhidro, se mezcla perfectamente hasta que se tenga la apariencia de un polvo uniforme sin la presencia de grumos. El brazo sonicador debe lavarse con agua, metanol y cloruro de metileno por 3 minutos en ese orden. A la muestra se le adiciona 100 mL de cloruro de metileno, colocar la muestra en el brazo sonicador y extraer durante 3 minutos. El extracto de la muestra se decanta y se filtra atraves de un embudo



109

que contiene 10 g de sulfato de sodio (previamente humedecido con cloruro de metileno). La extracción se repite 2 veces mas con alicuatas de 100 mL de cloruro de metileno durante 3 minutos. Los extractos obtenidos se hacen pasar por el embudo con sulfato de sodio y se mezclan. Se lleva a cabo una reduccion de volumen en un matraz KD a un volumen de aproximadamente 2mL a una temperatura de 70ºC, en ese momento se le adiciona 2 mL de hexano, seguir concentrando hasta un volumen aparente de 2 mL. 3.3.3.5.1.4.1 Procedimeinto de purificación de muestras Una columna cromatografica de 30 cm x 1,1 cm ID se enjuaga tres veces con aproximadamente 5 mL de metanol, seguido de 3 enjuagues de aproximadamente 5 mL de cloruro de metileno. Se taponea la punta de la columna con una pequeña cantidad de fibra de vidrio y se adiciona 30 mL de cloruro de metileno posteriormente se adiciona 2 cm de arena calcinada (400ºC por 4 horas). La alumina (oxido de aluminio) grado cromatografico calcinada (400ºC por 4 horas y a 120ºC antes de su uso) es desactivada con agua (10 g de alumina se le adiciona 0.1 mL de agua desionizada y se agita por lo menos 1 hora). Silica 100/200 (170ºC 24 horas antes de su uso) se desactiva con agua a 20 g de silica se le adiciona 1 mL de agua desionizada y se agita por lo menos una hora. Para la preparación de la columna se adiciona lentamente la alumina dando ligeros golpes en la columna de vidrio para asegurar su empacado. A la silica después de su desactivacion se adiciona cloruro de metileno hasta formar una mezcla homonea tipo gel, adicionar lentamente e ir drenando el cloruro de metileno. En la parte superior de la silica se adicionan aproximadamente 2 cm de sulfato de sodio, se eluye el cloruro de metileno y se adicionan los 2 mL del extracto antes de que se seque el sulfato de sodio. Se hace pasar una mezcla de pentano-cloruro de metileno 50:50 v/v (200 mL) y se concentra en KD a un volumen final de 1 mL a 60-65ºC.

3.3.3.3.5.1.5 TEJIDO GRASO VER PROCEDIMIENTO DE 3.3.3.3.5.1.4


3.3.3.3.5.2.1 Alta humedad y azucares bajos ( > 75% agua < 5% azucares)

3.3.3.3.5.2.1.1 Lechugas, biota vegetal, etc.



110


3.3.3.3.5.2.1.2 Huevo entero


3.3.3.3.5.2.2 Alta humedad, azucares intermedios ( > 75% agua y 5-15% de

azucares)


3.3.3.3.5.2.3 Alta humedad azucares altos ( > 75% agua < 15-30% azucares)



VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final

es de 1 mL)


3.3.3.3.6.1 Equipos y Materiales

Columna de cromatografía 7 mm ID x 200 mm, de 50 mL con llave

Tubos concentradores kuderna de 25 mL

Embudo de separación

Vasos de precipitados


Los disolventes que requiere el método deben ser de alta pureza, a menos que otra cosa se

indique.

Silica Gel malla 100/120 (Davison Chemical grado 923 o equivalente), active la sílica gel durante 16 horas a 130ºC antes de su uso.

Diclorometano

Sulfato de sodio

Ciclohexano grado pesticida o equivalente

Pentano grado pesticida o equivalente



111


A 5 mL de sangre se le agrega un anticoagulante y se congela hasta su uso. En un embudo de separación se colocan 5 mL de sangre y se le realizan 3 extracciones con cloruro de metileno. Los extractos se unen homogenizándolos y posteriormente se hacen pasar por una columna que tenga 10 cm de sulfato de sodio anhidro y este es transferido a un Kuderna-Danish, se añaden piedras de ebullición y se concentran los extractos en un baño maria a una temperatura de 60-65 ºC. hasta que se tenga un volumen aparente de 1 mL. Después se añaden 4 mL de ciclohexano seguido de una reducción de volumen de 1-2 mL en el Kuderna-Danish (NOTA: No deje que el volumen de solvente disminuya a menos de 1 mL o se perderán los HPAs de bajo peso molecular).

3.3.3.3.6.4 Procedimientos de Purificación de las Muestras Prepare una masa con 10 g de silica gel y cloruro de metileno y colóquelo en la columna, asiente con algunos pequeños golpes el relleno y agregue 1 o 2 cm de sulfato de sodio anhidro en la parte superior de la columna. Pre-eluya la columna con 40 mL de pentano a un flujo de 2 mL/min. Descarte el eluato y justo antes de que quede expuesta la capa de sulfato de sodio, transfiera cuantitativamente el extracto de la muestra a la columna, enjuague el tubo del extracto con 2 mL de ciclohexano. Antes de que quede expuesta la capa de sulfato de sodio, lave la columna con 25 mL de pentano, deseche el eluato. Eluya la columna con 25 mL de cloruro de metileno/pentano (2:3 v/v) y colecte el eluato en un matraz de 50 mL. Concentre el eluato identificado en el concentrador a 1 mL (NOTA: No deje que el volumen de solvente disminuya a menos de 1 mL o se perderán los HPAs de bajo peso molecular).



Resina Bio-Beads® S-X3. Se utiliza para la separación de polímeros lipofílicos y compuestos hidrofóbicos de bajo peso molecular, mediante cromatografía de permeación en gel.


Cloruro de sodio grado analítico

Sulfato de sodio anhidro grado analítico



112

Agua grado HPLC

Cloruro de metileno grado HPLC


En un embudo de separación se adiciona 10g de leche y la mezcla de estándares internos, se extrae, una vez con 42mL de CHCl3/CH3OH/NaCl al 0.7% 2:1:0.5 (v/v/v) y dos veces con 12 mL de CHCl3. Los extractos obtenidos en cada ocasión son mezclados y tratados con 100mL de una disolución acuosa de NaCl al 0.7%, y posteriormente se pasan por una columna de sulfato de sodio anhidro. La fase orgánica se evapora hasta la obtención de la grasas.

3.3.3.3.7.4 Procedimientos de Purificación de las Muestras

Las grasas son disueltas en 4mL de CH2Cl2 y sometidas a cromatografía de exclusión molecular en una resina Bio-Beads S-X3 utilizando cloruro de metileno como eluyente, a una velocidad de 5mL/min. fracción obtenida se evapora en rotavapor hasta un volumen de 5mL y posteriormente se lleva hasta 100µL bajo una de nitrógeno. El extracto se analiza por GC/MSD SIM y SCAN simultaneo.

3.3.4 MÉTODO DE IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN INSTRUMENTAL 3.3.4.1 Aplicación y Alcances

3.3.4.1.1 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de HPAs, Clordecone y Pentaclorobenceno en los extractos purificados de aguas naturales, residuales municipales e industriales, así como suelo, residuos, sedimentos, organismos, tejidos y alimentos, los extractos y su purificación depende de la matriz analizada, se deben seguir los procedimientos de extracción y purificación adecuados para cada matriz.


interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que

pueden variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de concentración de las

muestras e interferencias presentes en el extracto purificado).

Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de analistas expertos en

el uso de cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas y en la interpretación

de sus resultados. Cada analista debe demostrar la habilidad para generar resultados


3.3.4.2 Resumen El extracto purificado y concentrado se analiza en un Sistema de Cromatografía de Gases acoplado a

espectrometría de masas con la capacidad de trabajar en los modos SIM y SCAN simultáneamente, en caso

de que se detecte algún HAP, Clordecone y Pentaclorobenceno mediante los tiempos de retención (Tr)

coincidentes con los de los estándares respectivos y por el espectro de masas en modo SCAN coincidente con

el de la biblioteca estandarizada del sistema de manejo de datos y con el ion cuantitativo y los 2 iones

cualificadores con sus respectivas áreas proporcionales obtenidas de los estándares de la curva de calibración



113

en el modo SIM, se cuantifica mediante el método de estándar interno, en caso de que se cumplan los Tr pero

no exista coincidencia entre las proporciones de los iones cualificadores se debe tomar como tentativa la

identificación, en caso de que no se cumpla con los Tr o con el ion cuantitativo, entonces se trata de algún

pico interferente y no se reportan los resultados como positivos a HPAs, Pentaclorobenceno o Clordecone.


3.3.4.3.1 Equipo



producir una espectro de masas (al inyectar 1 L de la disolución de decafluorotrifenilfosfina DFTPP), el cual cumpla con los criterios mencionados en la sección de control de calidad (Agilent 5975 o equivalente).

Sistema de manejo de datos el cual se encuentra acoplado al GC/MS, Este sistema debe ser capaz de tener una adquisición y almacenamiento continuo de todos los espectros de masas generados durante el programa cromatográfico y poder analizar en modo SCAN y SIM las señales de los compuestos eluídos de la columna capilar del GC

Balanza analítica con precisión de 0.0001 g. 3.3.4.3.2 Materiales


siloxano) de 30 m de longitud, 0.25 mm de diámetro y 0.25 m de película de espesor o equivalente.









114


O-ring de vespel marca Agilent o equivalente. 3.3.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia


VER PROCEDIMIENTO PARA BIFENILOS POLICLORADOS

3.3.4.4.2 Materiales de referencia Los patrones pueden ser estándares puros o adquirirse como disoluciones certificadas (patrones de referencia). 3.3.4.4.2.1 Disoluciones

Disolución patrón (50 mg/L) A la disolución de los HPAs, Pentaclorobenceno y Clordecone se deben incluir el Naftaleno-d5, Acenfteno-d10, Fenantreno-d10, Criseno-d12 y Perileno-d12. como estándares internos y el p-terfenilo-d14 como estándar surrogado.

Disoluciones de calibración Prepare 5 niveles como mínimo de diferente concentración de las disoluciones estándar para cada analito de interés en matraces volumétricos.

Para cada disolución estándar de calibración, adicione una cantidad conocida de los compuestos a analizar y lleve al aforo con el solvente apropiado. El punto de concentración más bajo de la curva de calibración debe ser 3 a 10 veces mayor que el valor del LDM. Las otras concentraciones corresponden al intervalo esperado de las concentraciones encontradas en las muestras reales o bien estarán definidas por el intervalo lineal del detector.

Estándar de calibración de 0.5 mg/L. En un matraz aforado de 1 ml ponga 10 µL de la solución de mg 50 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta disolución en viales de 2 mL y rotule con etiqueta que contenga método, fecha de preparación, concentración, solvente utilizado, persona que lo preparó.

Estándar de calibración de 1,0 mg/L. En un matraz de 1 mL ponga 20 µL de la solución de 50 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta disolución en viales de 2 ml y ponga etiquetelos.

Estándar de calibración de 2,5 mg/L. En un matraz de 1 mL ponga 50 µL de la solución de 50 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde esta disolución en viales de 2 ml y ponga etiquetelos.

Estándar de calibración de 5 mg/L. En un matraz aforado 1 mL ponga 100 µL de la solución de 50mg/L y afore a la marca con hexano y guarde esta disolución en viales de 2 mL y ponga etiquetelos.



115

Estándar de calibración de 10 mg/L. En un matraz aforado de 1 ml ponga 200 µL de la solución de 50 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde la disolución en viales de 2mL y ponga etiquetelos.


Cada laboratorio que utilice este método está obligado a operar un programa de control de calidad (CC) formal. Los requerimientos mínimos de este programa consisten en una demostración inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con las especificaciones de desempeño del método, además realizar análisis continuos de muestras de control de calidad (MCC) para demostrar la precisión y exactitud continuas y el análisis de blancos. El desempeño del laboratorio debe compararse con los criterios aquí establecidos, con objeto de determinar si los resultados de los análisis cumplen con las especificaciones de desempeño del método. El analista debe hacer una demostración inicial de su habilidad para generar una exactitud y precisión aceptables por este método. Cada vez que se realice una modificación al método o que se cambie el analista responsable de llevar a cabo está determinación, el analista designado debe repetir la validación del método, si el cambio va a afectar el límite de detección del método (LDM), el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o más bajo que el anterior para los analitos de interés. No se permite el uso de técnicas determinativas alternativas y cambios que degraden la ejecución del método. Si se utiliza una técnica analítica que no sea la especificada en este método, dicha técnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las de la técnica descrita en este documento para el analito de interés.

Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a este método. Estos registros deben de incluir lo siguiente:

- La justificación por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al método para ese analito. - Los nombres, títulos, direcciones y número de teléfono de los analistas que ejecutaron los análisis y modificaciones y el encargado de control de calidad que presenció y verificó los análisis y sus modificaciones.

- Los resultados de todas las pruebas de CC del método modificado comparadas con el método original, dichos datos deben de incluir todos los parámetros mencionados en la sección de desempeño del método.

- La información escrita en las bitácoras tanto del equipo como del analista, deben incluir los siguientes datos:



Fecha del análisis






116





3.3.4.5.1 Verificación del equipo El criterio de resolución es tal que la profundidad del valle entre dos picos adyacentes en la mezcla de verificación de resolución debe ser mayor o igual a 60.0% de la altura del pico más corto.


Realice una autosintonía (autotune y DFTPP tune), siguiendo las actividades descritas en el instructivo de la calibración del espectrómetro de masas correspondiente. Esta es una autosintonía (autotune) que hace el instrumento con respecto a una sustancia de referencia llamada Perfluorotributilamina PFTBA Si no se cumple con las especificaciones siguientes, determine las causas y corrija el problema, de acuerdo al instructivo de mantenimiento preventivo del instrumento, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del sistema GC/MS.



69 100%



3.3.4.5.1.2 Verificación del Sistema (sintonía del MS con DFTPP) de acuerdo a las especificaciones el método.

Inyecte 2 L de la disolución de DFTPP según las condiciones instrumentales anexas, y obtenga el espectro de la DFTPP.

Verifique que el espectro cumpla con los siguientes criterios


51 30 A 60% de la masa 198

68 < 2% DE LA MASA 69

70 < 2 % DE LA MASA 69

127 40 A 60 % DE LA MASA 198

197 <1% DE LA MASA 198

198 PICO BASE 100 %



117

199 5 A 9% DE LA MASA 198

275 10 A 30 % DE LA MASA 198

365 > A 1 % DE LA MASA 198


442 > 40% DE LA MASA 198

443 17 A 23 % DE LA MASA 442

Si el espectro obtenido de DFTPP no cumpliera con las condiciones anteriores será necesario que revise los parámetros de sintonía del espectrómetro, repita nuevamente la sintonía (autotune y DFTPP tune ) e inyecte nuevamente la disolución de DFTPP.

Verifique que el sistema GC/MS esté libre de contaminación (nivel señal-ruido) Realice un blanco electrónico bajo las condiciones instrumentales del método. El blanco electrónico como su nombre lo dice es una corrida electrónica exclusivamente (sin inyección alguna), y éste debe estar libre de picos o en su defecto éstos deberán ser no mayores a 5 veces el ruido.

En caso de no cumplir con lo mencionado en la sección anterior, eleve las temperaturas tanto de la columna a 300 ºC, del puerto de inyección a 280 ºC y del detector a 300 ºC, mantenga el sistema bajo éstas condiciones de temperatura por 30 min y realice nuevamente el blanco electrónico. En caso de persistir el problema lleve a cabo las acciones de limpieza del instrumento mencionadas en el instructivo de mantenimiento preventivo correspondiente. Verifique que los flujo de gases y condiciones cromatográficas sean las adecuadas, según se menciona posteriormente. 3.3.4.5.1.3 Verificación del Funcionamiento del Sistema GC/MS (SPCCs) De la misma corrida del punto del DFTTP tune, verifique la degradación del DDT (compuesto incluido en la disolución SPCCs) a DDE y DDD, la suma de las respuestas del DDE y DDD no deben exceder del 20% con respecto a la respuesta del DDT. La bencidina y el pentaclorofenol deben presentarse en sus respuestas normales (más menos 50%) y como picos bien definidos y sin coleo. Si la degradación es excesiva y/o dan pobre respuesta cromatográfica, revise el puerto de inyección y límpielo, cambie el liner, sello dorado y si es necesario que corte los primeros 5 a 10 cm de la columna capilar en el extremo que conecta al puerto de inyección.





118

nanogramoseninyectadaMasa

àreadeTotalCF

100% xCF

SDCFRSD

Donde: SDCF= Desviación estándar de los factores de calibración CF = Promedio de los factores de calibración

La verificación de la calibración inicial puede también efectuarse mediante la regresión por mínimos cuadrados, en la cual el criterio de aceptación es que el factor de correlación "r2" sea mayor o igual a 0.997. Si los criterios para el % RSD o r no se cumplen se procede a la revisión del sistema cromatográfico y la preparación de las disoluciones de calibración. Posteriormente la curva de calibración será vigente, si el análisis de un punto intermedio de la curva no presenta una variación de la concentración mayor al 15% y que será calculada de la siguiente manera.

100% xCT

CTCCDionesconcentracdeDiferencia

Donde CC= concentración calculada CT= concentración teórica


100% xCF


Donde: CFv= Es el factor de calibración de cada compuesto en el estándar de verificación. CF = Es la media del factor de calibración del compuesto de la calibración inicial.


3.3.4.5.3 Verificación de contaminación de los reactivos. Los blancos de reactivos no deben presentar ningún tipo de contaminante al tiempo de retención de los analitos medidos, por lo que es importante que los reactivos utilizados cumplan con las especificaciones mencionadas.

Si los resultados de los blancos no cumplen con el criterio mencionado, se debe localizar la fuente de



119

contaminación y extraer y analizar nuevamente las muestras asociadas al blanco contaminado

Use también los blancos de reactivos para verificar la contaminación por arrastre de muestras con

altas concentraciones en análisis secuenciales

3.3.4.5.4 Verificación del lote analítico Por cada lote analítico de muestras analice al menos una muestra sintética de control de calidad o preferentemente un material de referencia certificado de la misma matriz de las muestras analizadas en el lote analítico, calcule el % de recuperación de cada analito y surrogados de la muestra control, los cuales deberán estar dentro del 80 a 120 %R. De no ser así se debe revisar la preparación de la muestra control y el sistema cromatográfico. Realizar la corrección necesaria y reanalizar la muestra control, si el problema persiste, se deben reanalizar todas las muestras del lote analítico. 3.3.4.5.5 Verificación de interferencias de matriz La verificación de interferencias por parte de la muestra se lleva a cabo mediante las muestras fortificadas (MF). El laboratorio debe realizar el análisis de muestras fortificadas (MF) y muestras duplicadas (MD), fortifique una muestra por cada lote analítico o preferentemente una muestra de cada tipo de matriz analizada en el lote. Las muestras fortificadas se deben analizar cuando por las características de la muestra se sospeche de interferencias de matriz o cuando sean parte de un plan de aseguramiento de calidad de un proyecto. Efecto de la matriz en el recobro del analito – Muestras fortificadas (MF): Analice las muestras fortificadas:

Calcule el por ciento de recobro El % de Recobro debe estar dentro de 70 a 130 %R. Si los valores no cumplen con lo especificado, el sistema analítico está fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico.

Efecto de la matriz en la precisión del analito – Precisión de la matriz duplicada (MD): Analice una muestra duplicada por cada lote de muestra.


20021

21x

CC

CCDPR

Donde: C1= Concentración de la primera muestra C2= Concentración de la segunda muestra (muestra duplicada)

La DPR de cada analito obtenido entre la muestra y la duplicada debe ser: <20%



120

Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analítico está fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico. Repita el análisis del lote asociado con la muestra y la duplicada que provocó que la prueba del DPR fallara.

3.3.4.5.6 Verificación de la estabilidad de la curva de calibración En cada lote analizado, si más de 20 muestras van a ser analizadas durante el día, verifique la curva de calibración analizando un estándar de concentración media del intervalo de trabajo al principio del lote y después de cada 20 muestras ó 12 horas de análisis continuo. Calcule el factor de calibración o la concentración para cada analito del estándar de concentración media, y el por ciento de la diferencia (%D) con la siguiente ecuación:

1001

21x

FC



El valor obtenido del % de la diferencia (%D) deberá ser menor al 15%, de no ser así verifique su vigencia, revisé también el sistema cromatográfico y determine la causa de la falla y corrija, de no lograr corregir la falla, recalibre nuevamente el sistema y en le caso de que la falla del estándar de verificación sea en un lote mayor de 20 muestras reanalice las 10 muestras anteriores al estándar de verificación que falló. 3.3.4.5.7 Verificación de estándares surrogados. Evalúe los datos de recobro de los surrogados de las muestras. Calcule el % de recuperación de los estándares surrugados en blancos, muestras control, muestras adicionadas (si se realizaron), muestras duplicadas (si se realizaron) y muestras reales, con la siguiente ecuación:

100%Re2

1 xC

CRcuperacón

Donde:

C1=Concentración calculada de surrugados en la muestra. C2=Concentración nominal del surrugado adicionado a la muestra. El %R debe estar entre el 70 y el 130 % de recuperación de no ser así verifique la preparación de la muestra que fallo y el sistema cromatográfico, determine la causa de la



121

falla y corrija, de no encontrarla, repita la extracción de la muestra y vuelva a analizar si el %R esta fuera del rango de aceptación llene hoja de incidencia y reporte como interferencia de matriz y los resultados obtenidos. Si los valores no cumplen con los especificados, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico.

3.3.4.5.8 Verificación de estándares internos. Compare el área de el o los estándares internos de las muestras con el área promedio de los estándares internos obtenidos de los puntos de calibración, el valor obtenido en el o los estándares internos de la muestra no deben ser menores a 50% ni mayores a 200% del valor promedio obtenido en la curva de calibración para cada estándar interno. Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analítico está fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico.

3.3.4.5.9 Control de Calidad Estadístico – En esta sección se especifica como debe realizarse el control de calidad estadístico obligatorio para este método:

3.3.4.5.9.1 Preparación de las Muestra de Control de Calidad (MCC) – Prepare las MCC de la siguiente forma: Se deberá preparar la MCC de una fuente diferente a la utilizada en la curva de calibración. Prepare una disolución a una concentración que corresponda al rango de trabajo del método.

.



Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deberá graficarse y

deberá estar dentro de los límites de control superior e inferior ( 3s).

Si un valor de exactitud es mayor a 3s, deberán rechazarse todos los resultados del lote

analítico, determine las causas y corrija los errores, documente adecuadamente las

incidencias y acciones correctivas, deberá repetirse el análisis del lote en cuestión.

3.3.4.5.9.3 Gráficas de Control de Precisión – El laboratorio debe elaborar y mantener actualizadas las gráficas de control de precisión para cada lote analizado a partir de la demostración inicial de desempeño



122



Donde: R = Promedio del DPR


3.3.4.5.10 Validación de modificaciones del método o de métodos alternos. Para validar las modificaciones que se efectúen a este método o para la utilización de métodos alternos deberá seguirse el siguiente procedimiento: Si se realizan modificaciones al presente método, deberán validarse. Si se utiliza un método alterno cuya fuente sea un método estandarizado por alguna Institución de carácter internacional o reconocida internacionalmente (e. g. ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment Canada, etc.) también deberá validarse parcialmente. Si se utiliza algún método no estandarizado, deberá evidenciarse, además de los parámetros de la validación parcial, los parámetros de Robustez, Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante estudios interlaboratorio. Verifique diariamente el desempeño de todo el sistema analítico utilizando los datos recolectados de análisis de blancos reactivos, solución verificadora del desempeño del laboratorio.


Verifique la precisión con réplicas del análisis. Una pobre precisión generalmente puede deberse a fugas, especialmente en el puerto de inyección. Si el sistema cromatográfico se está comportando aparentemente bien, pero con baja sensibilidad, puede ser necesario generar una nueva curva o juego de factores de calibración para verificar las respuestas bajas antes de buscar la fuente del problema. 3.3.4.5.11 Composición del lote analítico (para cada 25 muestras ó 12 horas de análisis continuo)

1 Calibración con PFTBA (Autotune) 2 Calibración con PFTBA (DFTPP)



123

3 análisis de DFTPP (Tuning Standard Mixture) 4 Blanco electrónico 5 Mezcla de Verificación 6 Blanco de Reactivos 7 Muestra de Control de Calidad 1 (MCC) 8 Muestra real No. 1 9 Muestra real No. 2 10 Muestras reales (hasta 20 o 12 horas de análisis continuo) 11 Muestra fortificada (si se realizo) 12 Muestra fortificada duplicada (si se realizo) 13 Muestra de Verificación de la Calibración Continua. 14 Siguientes 20 muestras reales







fabricante
















124














Una vez establecidas las condiciones de operación inyecte un volumen adecuado (2 L) de cada estándar de

calibración por triplicado y al final realice un promedio de las tres curvas y agréguelo a la tabla de

calibración del método.

Si la DSR de cada HAP es 20%, entonces la respuesta del instrumento es considerada lineal y el factor de calibración promedio FC puede utilizarse para la cuantificación de los resultados de las muestras. Si la DSR es mayor que 20%, entonces no puede asumirse linealidad y se debe repetir la curva de calibración. Si se utiliza regresión lineal por mínimos cuadrados, deberá obtener el factor de correlación “r2” para cada analito, el cual deberá ser mayor o igual a 0.997 si “r” es menor a este valor, la curva de calibración no es lineal y deberá verificarse la preparación de los estándares de calibración y el sistema cromatográfico y repetir la calibración.








125

Prepare los estándares de calibración a un mínimo de cinco concentraciones para

cada analito de interés por adición de volúmenes. Para cada estándar de calibración,

adicione una cantidad conocida constante de uno o más estándares internos y afore

con un solvente apropiado. Uno de los estándares debe estar a una concentración

cercana, pero por arriba, del LPC. Las otras concentraciones deben corresponder al

rango de trabajo.




CsAis

CisAsRF

*

*

Donde:





Si el valor RF sobre el rango de trabajo es constante (< 20% RSD), el RF puede

usarse para cálculos. Alternativamente, los resultados pueden usarse para graficar una

curva de calibración de la relación de respuesta, As/Ais contra RF.

3.3.4.7 Procedimiento Analítico 3.3.4.7.1 Análisis de los extractos de las muestras


Gas acarreador Helio Temperatura inicial 50 °C Tiempo inicial 3 min Programa 1 8ºC/min Temperatura final 1 180ºC Programa 2 15ºC/min Temperatura final 2 300ºC 6 minutos Temperatura del inyector 250ºC Temperatura del detector 300ºC Modo splitless 0.3 min Flujo de split 20 mL/min Purga de septa 2 mL/min

Adicione un volumen de la mezcla de estándares internos, de manera que la concentración de estos en el vial sea igual a la concentración que se utilizo en la preparación de la curva de calibración. Elabore la secuencia de análisis de acuerdo a lo indicado en el punto de composición del lote analítico.



126

Inicie el análisis.

Inyecte un volumen de 2 L del extracto de la muestra o estándar en el cromatógrafo de gases. Registre el volumen final del extracto. Verifique que se cumple con lo especificado en el inciso de control de calidad y criterios de aceptación y rechazo. Si la respuesta de cualquier ion cuantitativo excede la respuesta del intervalo de calibración, diluya el extracto y reanalice.


La determinación cualitativa de cada compuesto determinado por este método está basada en la comparación del tiempo de retención y de los espectros de masas de las muestras, con los tiempos y iones característicos de los espectros de masas de los estándares de referencia en modo SCAN. Los espectros de masas de referencia en modo SIM están definidos por tres iones de mayor intensidad relativa (mayor al 30% de intensidad). Los compuestos son identificados como presentes cuando cumplen con los siguientes criterios:

El tiempo de retención relativo TRR del compuesto detectado es 0.5 unidades del TRR del estándar de referencia. La intensidad relativa de los iones cualificadores en modo SIM se encuentren dentro del 30% de las intensidades relativas de estos iones en el espectro de referencia (ejemplo: para un ion con abundancia del 50% en el espectro de referencia, la abundancia en el espectro de la muestra debe encontrarse en el intervalo de 20% y 80%) Los iones que estén presentes en el espectro de la muestra y que no estén en el espectro del estándar deben ser revisados cuidadosamente, ya que puede tratarse de contaminación de fondo o coelusión de otros compuestos. Si hay iones que estén presentes en el espectro del estándar y no estén presentes en la muestra, debe someterlo a revisión ya que éstos pueden haberse perdido por posibles sustracciones en el momento de limpiar los espectros Para muestras que contienen componentes que no están asociados con los estándares de calibración, realice una búsqueda por librería para obtener una identificación y a partir de los estándares internos, obtener una concentración estimada.

3.3.4.7.3 Cálculos

AIRE AMBIENTE

1.1.5. VER PARA PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS AGUA

VER PARA PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS

SUELOS Y SEDIMENTOS



127

1.1.6. VER PARA PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS TEJIDOS, ORGANISMOS, ALIMENTOS PROCESADOS Y SIN PROCESAR

1.1.7. VER PARA PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS

1.1.8. 3.3.4.8 Desempeño del Método Los datos son los del método de referencia y los de un laboratorio nacional con experiencia.

3.3.4.8.1 Límite de Detección: Ver Tablas 3 y 4. 3.3.4.8.2 Límite Práctico de Cuantificación: Ver Tablas 3 y 4 3.3.4.8.3 Intervalo de Trabajo: Ver Tablas 3 y 4 3.3.4.8.4 Precisión del Método: Ver Tablas 3 y 4 3.3.4.8.5 Exactitud del Método: Ver Tablas 3 y 4



128


TABLA 1 MASAS DE LOS IONES PRIMARIOS Y SECUNDARIOS DE LOS

COMPUESTOS ANALIZADOS

Parámetro Ion principal del

espectro de masas

Iones secundarios del espectro de

masas (SIM)

Naftaleno d-5 136 108,54

Naftaleno 128 129,127

Acenafteno d-10 164 162,160

2-Fluorobifenilo 172 171,170

Acenaftileno 152 151,153

Acenafteno 153 154,152

Fluoreno 166 165

Fenantreno d-10 188 187,184

Fenantreno 178 176,179

Antraceno 178 176,179

Fluoranteno 202 200,203

Criseno d-10 240 236,120

Pireno 202 200,203

p-Terfenilo d-14 244 243,245

Benzo (a) antraceno 228 226,229

Criseno 228 226,229

Pireno d-12 264 260,132

Benzo (b) fluoranteno 252 250,253

Benzo (k) fluoranteno 252 250,253

Benzo (a) pireno 252 250,253

Indeno (1, 2, 3cd)pireno 276 138,277

Dibenzo (a, h) perileno 278 276,279

Benzo (g, h, i) perileno 276 138,277



129

TABLA 2

ESTANDARES INTERNOS ASIGNADOS PARA LA CUANTIFICACION DE LOS ANALITOS

NAFTALENO d-5

Naftaleno

FENANTRENO d-10

Fenatreno

Antraceno

Fluorantreno

ACENAFTENO d10

Acenaftileno

Fluoreno

CRISENO d-12

Pireno

p-Terfenilo d-14

Benzo (a) antraceno

Criseno

PIRENO d-12

Benzo (b) fluoranteno

Benzo (k) fluoranteno

Benzo (a) pireno

Indeno (1, 2, 3cd) pireno

Dibenzo (a, h) antraceno

Benzo (g, h, i)perileno



130

TABLA 3 DATOS DE LA VALIDACIÓN DEL MÉTODO EN UN LABORATORIO MEXICANO

EN AGUA



METODO FUENTE: EPA 8270D 1998

TECNICA: HRGC/MS

Unidades µg/L µg/L µg/L µg/L % % %R %R

Naftaleno 1.0 0.1-25 0.025 0.025 0.074 2.18 <20 97.54 70-130

Acenaftileno 1.0 0.1-25 0.017 0.017 0.052 2.64 <20 104.57 70-130

Acenafteno 1.0 0.1-25 0.011 0.011 0.033 3.36 <20 102.18 70-130

Fluoreno 1.0 0.1-25 0.015 0.015 0.046 2.00 <20 104.88 70-130

Fenantreno 1.0 0.1-25 0.014 0.014 0.042 2.78 <20 100.16 70-130

Antraceno 1.0 0.1-25 0.013 0.013 0.038 2.50 <20 97.95 70-130

Fluoranteno 1.0 0.25-25 0.012 0.012 0.036 3.14 <20 95.99 70-130

Pireno 1.0 0.25-25 0.023 0.023 0.069 2.39 <20 101.95 70-130

Benzo(a)antraceno 1.0 0.1-25 0.028 0.028 0.085 4.02 <20 98.29 70-130

Criseno 1.0 0.25-25 0.024 0.024 0.072 3.15 <20 100.19 70-130

Benzo(b)fluoranteno 1.0 0.1-25 0.025 0.025 0.076 2.11 <20 108.34 70-130

Benzo(k)fluoranteno 1.0 0.25-25 0.020 0.020 0.059 2.87 <20 105.45 70-130

Benzo(a)pireno 1.0 0.1-25 0.027 0.027 0.080 1.10 <20 108.44 70-130

Indeno(1,2,3cd)pireno 1.0 0.25-25 0.020 0.020 0.061 3.53 <20 102.01 70-130

Dibenzo(a,h)antraceno 1.0 0.25-25 0.016 0.016 0.047 3.21 <20 107.43 70-130

Benzo(g,h,i)perileno 1.0 0.25-25 0.014 0.014 0.042 2.28 <20 106.53 70-130


LDM

METODO

FUENTE

****

LDM

OBTENIDO

LDM

METODO

ABC

VALIDADO

LPC

METODO

ABC

VALIDADO

PRECISION

OBTENIDA

CRITERIO DE

EXACTITUD

DEL METODO

FUENTE

CRITERIO DE

PRECISION

DEL METODO

FUENTE

EXACTITUD

OBTENIDA

INTERVALO

DE TRABAJO

DEL MÉTODO

ABC

VALIDADO

PARÁMETRO



131

TABLA 4 DATOS DE LA VALIDACIÓN DEL MÉTODO EN UN LABORATORIO MEXICANO

EN AGUA



METODO FUENTE: EPA 8270D 1998 MATRIZ: SUELO

TECNICA: GC/MS

Unidades mg/Kg mg/Kg mg/Kg % % %R %R

Naftaleno 0.02-5 0.0049 0.015 2.18 <20 97.54 70-130

Acenaftileno 0.02-5 0.0035 0.010 2.64 <20 104.57 70-130

Acenafteno 0.02-5 0.0022 0.007 3.36 <20 102.18 70-130

4-Nitrofenol 0.05-5 0.0056 0.017 1.68 <20 107.71 70-130

Fluoreno 0.02-5 0.0031 0.009 2.00 <20 104.88 70-130

Fenantreno 0.02-5 0.0028 0.008 2.78 <20 100.16 70-130

Antraceno 0.02-5 0.0026 0.008 2.50 <20 97.95 70-130

Fluoranteno 0.05-5 0.0024 0.007 3.14 <20 95.99 70-130

Pireno 0.05-5 0.0046 0.014 2.39 <20 101.95 70-130

Bencidina 0.05-5 0.0091 0.027 3.19 <20 100.19 70-130

Benzo(a)antraceno 0.02-5 0.0057 0.017 4.02 <20 98.29 70-130

Criseno 0.05-5 0.0048 0.014 3.15 <20 100.19 70-130

Benzo(b)fluoranteno 0.02-5 0.0050 0.015 2.11 <20 108.34 70-130

Benzo(k)fluoranteno 0.05-5 0.0039 0.012 2.87 <20 105.45 70-130

Benzo(a)pireno 0.02-5 0.0054 0.016 1.10 <20 108.44 70-130

Indeno(1,2,3cd)pireno 0.05-5 0.0041 0.012 3.53 <20 102.01 70-130

Dibenzo(a,h)antraceno 0.05-5 0.0031 0.009 3.21 <20 107.43 70-130

Benzo(g,h,i)perileno 0.05-5 0.0028 0.008 2.28 <20 106.53 70-130


CRITERIO DE

EXACTITUD

DEL METODO

FUENTE

CRITERIO DE

PRECISION

DEL METODO

FUENTE

EXACTITUD

OBTENIDA

INTERVALO

DE TRABAJO

DEL MÉTODO

VALIDADO

PARÁMETRO

LPC

METODO

ABC

VALIDADO

PRECISION

OBTENIDA

LDM

OBTENIDO



132

3.4 BIFENILOS POLIBROMADOS y (PBBs) BIFENILOS POLIBROMADOS ETER (PBDEs)

El principio de este método se basa en la extracción, purificación y concentración del extracto purificado con objeto de la medición de los PBBs y PBDEs presentes en el extracto orgánico purificado de la muestra inyectando una alícuota de 2 µL en un cromatógrafo de gases acoplado a un detector selectivo de masas que trabaja simultáneamente en los modos SIM y SCAN. La identificación de los analitos se realiza por la comparación de los espectros de masas con los de la biblioteca estandarizada de la estación de datos, las abundancias relativas de los iones cualificadores y con los tiempos de retención de los estándares certificados, su cuantificación se realiza por medio del método de estándar interno.




Detector Selectivo de Masas con capacidad de trabajo simultáneo en modos SIM y SCAN

3.4.1 Aplicación y Alcances 3.4.1.1 Propósito – Este es un método para el análisis de los Bifenilos polibromados

(PBBs) y Bifenilos policromados éter (PBDEs) por cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masas (GC/MS).

3.4.1.2 Analitos –El método es aplicable a los siguientes analitos:

PBBs

PBDEs

De estos grupos de compuestos sólo son de interés:

2,2,4,4,5,5-Hexabromobifenil

2,2',4,4'-Tetrabromobifenil éter (PBDE 47)

2,2',4,4',5-Pentabromobifenil éter (PBDE 99)

2,2',4,4',5,5'-Hexabromobifenil éter (PBDE 153)

2,2',4,4',5,6'-Hexabromobifenil éter (PBDE 154)

2,2',3,3',4,5',6-Heptabromobifenil éter (PBDE 175)



133

2,2',3,4,4',5',6-Heptabromobifenil éter (PBDE 183)

3.4.1.3 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de los PBBs y PBDEs mencionados en el inciso anterior en las siguientes matrices ambientales:

Aguas Marinas



Aguas Subterráneas

Suelos

Sedimentos Marinos


Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos animales 3.4.1.4 Limitaciones

Los límites de detección en las muestras reales dependerán de las interferencias presentes en las

mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que pueden variar hasta en magnitudes de 10 a

1,000 veces (factores de concentración de las muestras e interferencias presentes en el extracto

purificado).




3.4.2 Resumen AGUAS (Marinas, Costeras, Estaurinas, Lagunas Costeras, Superficiales Epicontinentales y Subterráneas)

Este método está diseñado para muestras de agua sin contaminación aparente (no aplica para aguas residuales o aguas naturales altamente contaminadas con materia orgánica, principalmente grasas y aceites). Los analitos se extraen en 1 L de muestra a través de una extracción liquido-liquido. El volumen de los extractos se reduce con la técnica Kuderna-Danish (K-D). Los extractos para el análisis de PBBs y PBDEs se someten a una limpieza ácida con ácido sulfúrico Se inyectan 2 µL de fase orgánica al GC/MSD en modo SIM y SCAN simultáneamente. El tiempo total del análisis es de 30 a 50 minutos por muestra, dependiendo de los analitos y las condiciones analíticas que se escojan. Los límites de detección del método se encuentran entre 0.005 a 0.01 µg/L.

SUELOS Y SEDIMENTOS

Aproximadamente de 10 g de muestra se extraen con cloruro de metileno-acetona (1:1) con ayuda un brazo ultrasónico. Distintos procedimientos de limpieza pueden aplicarse al extracto, dependiendo de la naturaleza de las interferencias de la matriz coextraida y de los analitos. Después de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alícuota de 2 µL en el GC/MSD en modo SIM y SCAN simultáneamente.



134

Los límites de detección con este método varían de 1 a 10 µg/Kg BS según los diferentes analitos

en matrices libres de interferencias.


Una muestra de 20 a 25 g para tejidos, 50 a 100 g en alimentos sólidos y 100 mL de alimentos líquidos se extrae utilizando la técnica de extracción apropiada. Después de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alícuota de 2 µL en el GC/MSD en modo SIM y SCAN simultáneamente.


Antes de utilizar cualquier procedimiento de limpieza, el analista debe procesar una

serie de estándares de calibración por medio del procedimiento para validar los patrones

de elusión y la ausencia de interferencias de los reactivos.


Las interferencias del método pueden originarse por la presencia de contaminantes en los solventes, reactivos, material de vidrio o cualquier otro material durante el procesamiento de la muestra (contaminación cruzada). El material de vidrio debe lavarse escrupulosamente. Lave el material de vidrio enjuagándolo profusamente con el último disolvente utilizado en él. Después lávelo con agua caliente y detergente y enjuáguelo con agua corriente y grado reactivo. Escúrralo, séquelo y enjuáguelo con acetona. Después de secarlo y enfriarlo, selle el material de vidrio y guárdelo en un ambiente limpio para evitar acumulación de polvo u otros contaminantes. Guarde el material invertido o tapado con papel aluminio. El uso de reactivos y disolventes de alta pureza ayuda a eliminar los problemas de interferencias. Puede ser necesario purificar los disolventes por destilación en material de vidrio. PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan los estabilizadores, lo que puede hacerlo peligroso. También pueden eliminarse conservadores, reduciéndose su vida de anaquel. Puede existir interferencia cuando se analiza una muestra con concentraciones bajas de los analitos después de una muestra con concentraciones altas. Para evitar esto, después de una muestra con concentraciones altas, debe inyectarse una o varias veces hexano para asegurar que se obtengan valores precisos en la siguiente muestra. Es importante que las muestras y los estándares de trabajo se encuentren en el mismo disolvente. El disolvente de trabajo para los estándares debe ser el mismo que el disolvente final utilizado en la preparación de la muestra. De no ser este el caso, puede afectarse la comparación cromatográfica entre los estándares y la muestra.

3.4.3.2 Seguridad general La carcinogenidad y toxicidad de los químicos utilizados en este método no han sido determinadas con precisión; de todas maneras; cada sustancia química debe ser



135

tratada como potencial peligro a la salud. La exposición a estas sustancias químicas debe ser reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice monitoreos de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y que dichos resultados estén disponibles para los analistas. PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan estabilizadores, lo que puede hacerlo peligroso. Este método puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con su uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y un archivo de las normas de seguridad respecto a la exposición y manejo seguro de las sustancias químicas especificadas en este método. Debe tenerse un archivo de referencias de las hojas de información de seguridad el cual debe estar disponible a todo el personal involucrado en estos análisis.

3.4.3.3 Matrices



VER PARA PCBs


3.4.3.3.1.2.1 Reactivos

VER PARA PCBs


Estándares de calibración

Estándares puros o en disolución certificados de:


2,2,4,4,5,5-Hexabromobifenil 36355-01-8 -

2,2',4,4'-Tetrabromobifenil éter 5436-43-1 PBDE 47

2,2',4,4',5-Pentabromobifenil éter 60348-60-9 PBDE 99

2,2',4,4',5,5'-Hexabromobifenil éter 68631-49-2 PBDE 153


2,2',3,3',4,5',6-Heptabromobifenil éter 446255-22-7 PBDE 175

2,2',3,4,4',5',6-Heptabromobifenil éter 207122-16-5 PBDE 183

Estándares internos

Se debe utilizar como estándar interno el criseno-d12, adicionado en cada muestra extraída antes del análisis e incluido en cada estándar inicial de calibración.



136


Se utiliza el perileno-d12 como un surrogado.


VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs



3.4.3.3.2 Suelos


VER PARA PCBs


VER REACTIVOS PARA PCBs Y EN 3.4.3.3.1.2







VER PARA PCBs


VER REACTIVOS PARA PCBs Y EN 3.4.3.3.1.2







137




3.4.3.3.4.1.1 LECHE



VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs 3.4.3.3.4.1.3 MANTEQUILLA

VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS VER PARA PROCEDIMIENTO PCBs

3.4.3.3.4.1.4 HIGADO


3.4.3.3.4.1.5 TEJIDO GRASO



3.4.3.3.4.2.1 Alta humedad azucares bajos (> 75% agua < 5% azucares)

3.4.3.3.4.2.1.1 Lechugas, biota vegetal, etc.


3.4.3.3.4.2.1.2 Huevo entero


3.4.3.3.4.2.2 Alta humedad azucares intermedios (> 75% agua y 5-15% de azucares)

VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs 3.4.3.3.4.2.3 Alta humedad azucares altos ( > 75% agua < 15-30% azucares)



138

VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs 3.4.3.3.4.2.4 Alimentos secos con baja humedad (≤ 75% agua)




3.4.4.1.1 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de PBBs y PBDEs en

los extractos purificados de aguas naturales, residuales municipales e industriales, así como suelo, residuos, sedimentos, organismos, tejidos y alimentos, los extractos y su purificación depende de la matriz analizada, se deben seguir los procedimientos de extracción y purificación adecuados para cada matriz.


interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta

que pueden variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de

concentración de las muestras e interferencias presentes en el extracto purificado).


expertos en el uso de cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas y

en la interpretación de sus resultados. Cada analista debe demostrar la habilidad para

generar resultados aceptables con este método.

3.4.4.2 Resumen El extracto purificado y concentrado se analiza en un Sistema de Cromatografía de Gases

acoplado a espectrometría de masas con la capacidad de trabajar en los modos SIM y SCAN

simultáneamente, en caso de que se detecte algún PBBs y PBDEs mediante los tiempos de

retención (Tr) coincidentes con los de los estándares respectivos y por el espectro de masas en

modo SCAN coincidente con el de la biblioteca estandarizada del sistema de manejo de datos y

con el ion cuantitativo y los 2 iones cualificadores con sus respectivas áreas proporcionales

obtenidas de los estándares de la curva de calibración en el modo SIM, se cuantifica mediante

el método de estándar interno, en caso de que se cumplan los Tr pero no exista coincidencia

entre las proporciones de los iones cualificadores se debe tomar como tentativa la

identificación, en caso de que no se cumpla con los Tr o con el ion cuantitativo, entonces se

trata de algún pico interferente y no se reportan los resultados como positivos a PBB y PBDEs.


3.4.4.3.1 Equipo



139



producir un espectro de masas (al inyectar 1 L de la disolución de decafluorotrifenilfosfina DFTPP), el cual cumpla con los criterios mencionados en la sección de control de calidad (Agilent 5975 o equivalente).

Sistema de manejo de datos el cual se encuentra acoplado al GC/MS, Este sistema debe ser capaz de tener una adquisición y almacenamiento continuo de todos los espectros de masas generados durante el programa cromatográfico y poder analizar en modo SCAN y SIM las señales de los compuestos eluídos de la columna capilar del GC (agilent Chemsation).

Balanza analítica con precisión de 0.0001 g 3.4.4.3.2 Materiales


siloxano) de 30 m de longitud, 0.25 mm de diámetro y 0,25 m de película de espesor o equivalente.








O-ring de vespel marca Agilent o equivalente.





140

Hexano, C6H14 grado optima, plaguicida o equivalente

Cloruro de Metileno CH2Cl2 grado óptima, plaguicida o equivalente

3.4.4.4.2 Materiales de referencia

Hexabromobifenilo, Tetra, penta, hexa y heptabromobifenilo éter Los patrones pueden ser estándares puros o adquirirse como disoluciones certificadas (patrones de referencia).


2,2,4,4,5,5-Hexabromobifenil 36355-01-8 -

2,2',4,4'-Tetrabromobifenil éter 5436-43-1 PBDE 47

2,2',4,4',5-Pentabromobifenil éter 60348-60-9 PBDE 99



2,2',3,3',4,5',6-Heptabromobifenil éter 446255-22-7 PBDE 175

2,2',3,4,4',5',6-Heptabromobifenil éter 207122-16-5 PBDE 183

Disolución Patrón

Preparar a partir de 3.2.4.4.1.3 una mezcla de Hexabromobifenilo, Tetra, penta, hexa y heptabromobifenilo éter

en una concentración de 10 mg/L, se deben incluir el criseno-d12 como estándar

interno y el perileno-d12 como surrogado. El disolvente es hexano.

Disolución intermedia de 1 mg/L A partir de la disolución de 10 mg/L, tome 500 µL con una microjeringa en un

matraz aforado de 5 mL y afore a la marca con hexano y agite para homogenizar. Guarde la disolución en viales de 2 mL.

Disoluciones de calibración

Prepare 5 niveles como mínimo de diferente concentración de las disoluciones estándar para cada analito de interés en matraces volumétricos.

El punto de concentración más bajo de la curva de calibración debe ser 3 a 10 veces mayor que el valor del LDM. Las otras concentraciones corresponden al intervalo esperado de las concentraciones encontradas en las muestras reales o bien estarán definidas por el intervalo lineal del detector.

Estándar de calibración de 0,05 mg/L. En un matraz aforado de 1 mL ponga 50 µL de la solución de 1 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta disolución en viales de 2 ml y rotule con etiqueta que contenga método, fecha de preparación, concentración, solvente utilizado, persona que lo preparó

Estándar de calibración de 0,1 mg/L. En un matraz de 1 ml ponga 100 µL de la solución de 1 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta disolución en viales de 2 ml y etiquete.



141

Estándar de calibración de 0,2 mg/L. En un matraz de 1 mL ponga 200 µL de la solución de 1 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde esta disolución en viales de 2 ml y etiquete.

Estándar de calibración de 0,5 mg/L. En un matraz aforado 1 mL ponga 500 µL de la solución de 1 mg/L y afore a la marca con hexano y guarde esta disolución en viales de 2 mL y etiquete.


Cada laboratorio que utilice este método está obligado a operar un programa de control de calidad (CC) formal. Los requerimientos mínimos de este programa consisten en una demostración inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con las especificaciones de desempeño del método, además realizar análisis continuos de muestras de control de calidad (MCC) para demostrar la precisión y exactitud continuas y el análisis de blancos. El desempeño del laboratorio debe compararse con los criterios aquí establecidos, con objeto de determinar si los resultados de los análisis cumplen con las especificaciones de desempeño del método. El analista debe hacer una demostración inicial de su habilidad para generar una exactitud y precisión aceptables por este método. Cada vez que se realice una modificación al método o que se cambie el analista responsable de llevar a cabo está determinación, el analista designado debe repetir la validación del método, si el cambio va a afectar el límite de detección del método (LDM), el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o más bajo que el anterior para los analitos de interés. No se permite el uso de técnicas determinativas alternativas y cambios que degraden la ejecución del método. Si se utiliza una técnica analítica que no sea la especificada en este método, dicha técnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las de las técnicas descritas en este documento para el analito de interés. Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a este método. Estos registros deben de incluir lo siguiente:

- La justificación por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al método para ese analito. - Los nombres, títulos, direcciones y número de teléfono de los analistas que ejecutaron los análisis y modificaciones, y el encargado de control de calidad que presenció y verificó los análisis y sus modificaciones. - Los resultados de todas las pruebas de CC del método modificado comparadas con el método original, dichos datos deben de incluir todos los parámetros mencionados en la sección de desempeño del método. - La información escrita en las bitácoras tanto del equipo como del analista, deben incluir los siguientes datos:



142



Fecha del análisis










Realice una autosintonía (autotune y DFTPP tune), siguiendo las actividades descritas en el instructivo de la calibración del espectrómetro de masas correspondiente. Esta es una autosintonía (autotune) que hace el instrumento con respecto a una sustancia de referencia llamada Perfluorotributilamina PFTBA Si no se cumple con las especificaciones siguientes, determine las causas y corrija el problema de acuerdo al instructivo de mantenimiento preventivo del instrumento, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del sistema GC/MS.



69 100%



3.4.4.5.1.2 Verificación del Sistema (sintonía del MS con DFTPP) de

acuerdo a las especificaciones del método.

Inyecte 2 L de la disolución de DFTPP según las condiciones instrumentales anexas, y obtenga el espectro de la DFTPP.

Verifique que el espectro cumpla con los siguientes criterios


51 30 A 60% de la masa 198

68 < 2% DE LA MASA 69

70 < 2 % DE LA MASA 69



143

127 40 A 60 % DE LA MASA 198

197 <1% DE LA MASA 198

198 PICO BASE 100 %

199 5 A 9% DE LA MASA 198

275 10 A 30 % DE LA MASA 198

365 > A 1 % DE LA MASA 198


442 > 40% DE LA MASA 198

443 17 A 23 % DE LA MASA 442

Si el espectro obtenido de DFTPP no cumpliera con las condiciones anteriores será necesario que revise los parámetros de sintonía del espectrómetro, repita nuevamente la sintonía (autotune y DFTPP tune) e inyecte nuevamente la disolución de DFTPP. Verifique que el sistema GC/MS esté libre de contaminación (nivel señal-ruido) Realice un blanco electrónico bajo las condiciones instrumentales del método. El blanco electrónico como su nombre lo dice es una corrida electrónica exclusivamente (sin inyección alguna), y éste debe estar libre de picos o en su defecto éstos deberán ser no mayores a 5 veces el ruido. En caso de no cumplir con lo mencionado en la sección anterior, eleve las temperaturas tanto de la columna a 300 ºC, del puerto de inyección a 280 ºC y del detector a 300 ºC, mantenga el sistema bajo éstas condiciones de temperatura por 30 min y realice nuevamente el blanco electrónico. En caso de persistir el problema lleve a cabo las acciones de limpieza del instrumento mencionadas en el instructivo de mantenimiento preventivo correspondiente. Verifique que los flujo de gases y condiciones cromatográficas sean las adecuadas, según se menciona posteriormente.

3.4.4.5.1.3 Verificación del Funcionamiento del Sistema GC/MS (SPCCs)

De la misma corrida del punto del DFTTP tune, verifique la degradación del DDT (compuesto incluido en la disolución SPCCs) a DDE y DDD, la suma de las respuestas del DDE y DDD no deben exceder del 20% con respecto a la respuesta del DDT. La bencidina y el pentaclorofenol deben presentarse en sus respuestas normales (más menos 50%) y como picos bien definidos y sin coleo. Si la degradación es excesiva y/o dan pobre respuesta cromatográfica, revise el puerto de inyección y límpielo, cambie el liner, sello dorado y si es



144

necesario que corte los primeros 5 a 10 cm de la columna capilar en el extremo que conecta al puerto de inyección.


La curva de la calibración inicial deberá realizarse inyectando los estándares de calibración preparados y se considera lineal; si el por ciento de la desviación estándar relativa (%RSD) de los factores de calibración (CF) es menor o igual al 20%, los cálculos se realizan con las siguientes ecuaciones:


áreadetotalCF

100% xCF

SDCFRSD

Donde: SDCF= Desviación estándar de los factores de calibración CF = Promedio de los factores de calibración

La verificación de la calibración inicial puede también efectuarse mediante la regresión por mínimos cuadrados, en la cual el criterio de aceptación es que el factor de correlación "r2" sea mayor o igual a 0,997. Si los criterios para el % RSD o r no se cumplen se procede a la revisión del sistema cromatográfico y la preparación de las disoluciones de calibración. Posteriormente la curva de calibración será vigente, si el análisis de un punto intermedio de la curva no presenta una variación de la concentración mayor al 15% y que será calculada de la siguiente manera.

100% xCT




100% xCF





145



Los blancos de reactivos no deben presentar ningún tipo de contaminante al tiempo de retención de los analitos medidos, por lo que es importante que los reactivos utilizados cumplan con las especificaciones mencionadas.






3.4.4.5.4 Verificación del lote analítico Por cada lote analítico de muestras analice al menos una muestra sintética de control de calidad o preferentemente un material de referencia certificado de la misma matriz de las muestras analizadas en el lote analítico, calcule el % de recuperación de cada analito y surrogados de la muestra control, los cuales deberán estar dentro del rango de 80 120 %R, de no ser así se debe revisar la preparación de la muestra control y el sistema cromatográfico. Realizar la corrección necesaria y reanalizar la muestra control, si el problema persiste, se deben reanalizar todas las muestras del lote analítico.

3.4.4.5.5 Verificación de interferencias de matriz La verificación de interferencias por parte de la muestra se lleva a cabo mediante las muestras fortificadas (MF). El laboratorio debe realizar el análisis de muestras fortificadas (MF) y muestras duplicadas (MD), fortifique una muestra por cada lote analítico o preferentemente una muestra de cada tipo de matriz analizada en el lote. Las muestras fortificadas se deben analizar cuando por las características de la muestra se sospeche de interferencias de matriz o cuando sean parte de un plan de aseguramiento de calidad de un proyecto. Efecto de la matriz en el recobro del analito – Muestras fortificadas (MF): Analice las muestras fortificadas: Calcule el por ciento de recobro El % de Recobro debe estar dentro 80 a 120 %R Si los valores no cumplen con lo especificado, el sistema analítico está fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico.



146

Efecto de la matriz en la precisión del analito – Precisión de la matriz duplicada (MD): Analice una muestra duplicada por cada lote de muestra. Calcule la diferencia porcentual relativa (DPR) entre la muestra y la duplicada para cada analito, con la siguiente ecuación:

21

200*21

CC

CCDPR

Donde: C1 Concentración de la primera muestra C2 concentración de la segunda muestra (muestra duplicada)

La DPR de cada analito obtenido entre la muestra y la duplicada debe ser:<20% Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analítico está fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico. Repita el análisis del lote asociado con la muestra y la duplicada que provocó que la prueba del DPR fallara.

3.4.4.5.6 Verificación de la estabilidad de la curva de calibración En cada lote analizado, si más de 20 muestras van a ser analizadas durante el día, verifique la curva de calibración analizando un estándar de concentración media del intervalo de trabajo al principio del lote y después de cada 20 muestras ó 12 horas de análisis continuo. Calcule el factor de calibración o la concentración para cada analito del estándar de concentración media, y el por ciento de la diferencia (%D) con la siguiente ecuación:

1001

21x

FC


Donde: FC1 = Factor de calibración promedio para cada plaguicida en la curva de calibración, o la concentración nominal del estándar de verificación. FC2 = Factor de calibración promedio para cada plaguicida en el estándar de concentración media, o la concentración calculada en el estándar de verificación.

El valor obtenido del % de la diferencia (%D) deberá ser menor al 15%, de no ser así verifique su vigencia, revisé también el sistema cromatográfico y determine la causa de la falla y corrija; de no lograr corregir la falla, recalibre nuevamente el sistema y en le caso de que la falla del estándar de



147

verificación sea en un lote mayor de 20 muestras reanalice las 10 muestras anteriores al estándar de verificación que falló.

3.4.4.5.7 Verificación de estándares surrogados. Evalúe los datos de recobro de los surrogados de las muestras. Calcule el % de recuperación de los estándares surrugados en blancos, muestras control, muestras adicionadas (si se realizaron), muestras duplicadas (si se realizaron) y muestras reales, con la siguiente ecuación:

100%Re2

1 xC

CRcuperación

Donde: C1=Concentración calculada de surrugados en la muestra. C2=Concentración nominal del surrugado adicionado a la muestra.

El %R debe estar entre el 70 y el 130 % de recuperación. De no ser así verifique la preparación de la muestra que fallo y el sistema cromatográfico, determine la causa de la falla y corrija; de no encontrarla, repita la extracción de la muestra y vuelva a analizar si el %R esta fuera del rango de aceptación, llene hoja de incidencia y reporte como interferencia de matriz y los resultados obtenidos. Si los valores no cumplen con los especificados, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico.

3.4.4.5.8 Verificación de estándares internos. Compare el área de el o los estándares internos de las muestras con el área promedio de los estándares internos obtenidos de los puntos de calibración, el valor obtenido en el o los estándares internos de la muestra no deben ser menores a 50% ni mayores a 200% del valor promedio obtenido en la curva de calibración para cada estándar interno. Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analítico está fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico. 3.4.4.5.9 Control de Calidad Estadístico – En esta sección se especifica como debe realizarse el control de calidad estadístico obligatorio para este método:

3.4.4.5.9.1 Preparación de las Muestras de Control de Calidad (MCC) – Prepare la MCC de la siguiente forma:



148

Se deberá preparar la MCC de una fuente externa al laboratorio o ser preparada de una fuente diferente a la utilizada en la curva de calibración. Prepare una disolución a una concentración que corresponda al rango de trabajo del método.




graficarse y deberá estar dentro de los límites de control superior e inferior

( 3s).


resultados del lote analítico. Determine las causas y corrija los errores,





Donde: R = Promedio del DPR

Si un valor de precisión es mayor al LSC, deberán rechazarse todos los resultados del lote analítico. Determine las causas del problema y corrija los errores, documente adecuadamente las incidencias y acciones correctivas, deberá repetirse el análisis del lote en cuestión.




149

Para validar las modificaciones que se efectúen a este método o para la utilización de métodos alternos deberá seguirse el siguiente procedimiento: Si se realizan modificaciones al presente método, deberán validarse parcialmente. Si se utiliza un método alterno cuya fuente sea un método estandarizado por alguna Institución de carácter internacional o reconocida internacionalmente (e. g. ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment Canada, etc.) también deberá validarse parcialmente. Si se utiliza algún método no estandarizado, deberá evidenciarse, además de los parámetros de validación parcial, los parámetros de Robustez, Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante estudios interlaboratorio. Verifique diariamente el desempeño de todo el sistema analítico utilizando los datos recolectados de análisis de blancos reactivos, solución verificadora del desempeño del laboratorio.


Verifique la precisión con réplicas del análisis. Una pobre precisión generalmente puede deberse a fugas, especialmente en el puerto de inyección. Si el sistema cromatográfico se está comportando aparentemente bien, pero con baja sensibilidad, puede ser necesario generar una nueva curva o juego de factores de calibración para verificar las respuestas bajas antes de buscar la fuente del problema. 3.4.4.5.11 Composición del lote analítico (para cada 25 muestras ó 12 horas de análisis continuo)

1 Calibración con PFTBA (Autotune) 2 Calibración con PFTBA (DFTPP) 3 Análisis de DFTPP (Tuning Standard Mixture) 4 Blanco electrónico 5 Mezcla de Verificación 6 Blanco de Reactivos 7 Muestra de Control de Calidad 1 (MCC) 8 Muestra real No. 1 9 Muestra real No. 2 10 Muestras reales (hasta 20 o 12 horas de análisis continuo) 11 Muestra fortificada (si se realizo) 12 Muestra fortificada duplicada (si se realizo) 13 Muestra de Verificación de la Calibración Continua. 14 Siguientes 20 muestras reales



150







fabricante







Evaluación del % Diferencial de la concentración de la Mezcla de Verificación, punto intermedio de










Evaluación de muestras adicionadas duplicadas % DPR < 20%




151








Se necesitan al menos 5 estándares de calibración. Uno debe contener analitos a una concentración cercana, pero superior a la del límite práctico de cuantificación para cada analito; los otros deben estar a concentraciones que cubran el intervalo esperado en las muestras. Por ejemplo, si el LDM es 0,01µg/L y el LPC es de 0,05 µg/L, se espera que la muestra contenga concentraciones mayores de 0,05 µg/L.

Una vez establecidas las condiciones de operación inyecte un volumen adecuado (2 L) de

cada estándar de calibración por triplicado y al final realice un promedio de las tres curvas y


Si la DPR de cada analito es 20%, entonces la respuesta del instrumento es considerada lineal y el factor de calibración promedio FC puede utilizarse para la cuantificación de los resultados de las muestras. Si la DSR es mayor que 20%, entonces no puede asumirse linealidad y se debe repetir la curva de calibración. Si se utiliza regresión lineal por mínimos cuadrados, deberá obtener el factor de correlación “r2” para cada analito, el cual deberá ser mayor o igual a 0,997 si “r” es menor a este valor, la curva de calibración no es lineal y deberá verificarse la preparación de los estándares de calibración y el sistema cromatográfico, y repetir la calibración.






Prepare los estándares de calibración a un mínimo de cinco concentraciones para cada

analito de interés por adición de volúmenes. Para cada estándar de calibración, adicione

una cantidad conocida constante de uno o más estándares internos y afore con un

solvente apropiado. Uno de los estándares debe estar a una concentración cercana, pero

por arriba del LPC. Las otras concentraciones deben corresponder al rango de trabajo.



152




CsAis

CisAsRF

*

*

Donde:





Si el valor RF sobre el rango de trabajo es constante (< 20% RSD), el RF puede usarse

para cálculos. Alternativamente, los resultados pueden usarse para graficar una curva de

calibración de la relación de respuesta, As/Ais contra RF.



Condiciones cromatográficas: Gas acarreador Helio Temperatura inicial 150 °C Tiempo inicial 0 min Programa 1 8ºC/min Temperatura final 1 180ºC 0 min Programa 2 15ºC/min Temperatura final 2 320ºC 6 min Temperatura del inyector 250ºC Volumen inyeccion: 2μL Modo splitless Flujo purga septum 2 mL/min Solvent delay 4.4 min Detector: Modo de adquisición: SIM/SCAN Rango de masas: 100-900 Temperatura de la fte: 230 ºC Temperatura cuadrupolo: 150 ºC Grupos SIM Grupo 1 iones 219, 241, 236, 326, 240 y 486. Minuto 0-11,5 Grupo 2 iones 297, 403,8 y 566 Minuto 11-12,4 Grupo 3 iones 260, 264, 264,300,307,9, 468, 483, 628 y 644 Minuto 12,4 a 13 Grupo 4 iones 290, 300, 483,8, 561,7, 644 y 722. Minuto 13 a 19



153

Adicione un volumen de la mezcla de estándares internos, de manera que la concentración de estos en el vial sea igual a la concentración que se utilizo en la preparación de la curva de calibración. Elabore la secuencia de análisis de acuerdo a lo indicado en el punto de composición del lote analítico. Inicie el análisis.

Inyecte un volumen de 2 L del extracto de la muestra o estándar en el cromatógrafo de gases. Registre el volumen final del extracto. Verifique que se cumple con lo especificado en el inciso de control de calidad y criterios de aceptación y rechazo. Si la respuesta de cualquier ion cuantitativo excede la respuesta del intervalo de calibración, diluya el extracto y reanalice.

3.4.4.7.2 Identificación de los analitos La determinación cualitativa de cada compuesto determinado por este método está basada en la comparación del tiempo de retención y de los espectros de masas de las muestras, con los tiempos y iones característicos de los espectros de masas de los estándares de referencia en modo SCAN. Los espectros de masas de referencia en modo SIM están definidos por tres iones de mayor intensidad relativa (mayor al 30% de intensidad). Los compuestos son identificados como presentes cuando cumplen con los siguientes criterios:

El tiempo de retención relativo TRR del compuesto detectado es 0,5 unidades del TRR del estándar de referencia. La intensidad relativa de los iones cualificadores en modo SIM se encuentren dentro del 30% de las intensidades relativas de estos iones en el espectro de referencia (ejemplo: para un ion con abundancia del 50% en el espectro de referencia, la abundancia en el espectro de la muestra debe encontrarse en el intervalo de 20% y 80%) Los iones que estén presentes en el espectro de la muestra y que no estén en el espectro del estándar deben ser revisados cuidadosamente, ya que puede tratarse de contaminación de fondo o coelusión de otros compuestos. Si hay iones que estén presentes en el espectro del estándar y no estén presentes en la muestra, debe someterlo a revisión ya que éstos pueden haberse perdido por posibles sustracciones en el momento de limpiar los espectros Para muestras que contienen componentes que no están asociados con los estándares de calibración, realice una búsqueda por librería para obtener una identificación y a partir de los estándares internos obtener una concentración estimada.



154

3.4.4.7.3 Cálculos

3.4.4.7.3.1 AGUA

VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs 3.4.4.7.3.2 SUELOS Y SEDIMENTOS



ALIMENTOS




155

3.5 Acido Perfluoroctanico sulfónico (PFOS) y sus sales

El principio de este método se basa en la extracción, purificación y concentración de los PFOS, sus sales presentes en el extracto orgánico de la muestra con objeto de la medición, inyectando una alícuota de 10 µL en un cromatógrafo de líquidos acoplado a un detector selectivo de masas. La identificación de los analitos se realiza por la comparación de los espectros de masas con los estándares, las abundancias relativas de los iones cualificadores y con los tiempos de retención de los estándares certificados.



LC/MS


3.5.1.1 Propósito – Este es un método para el análisis del Acido Perfluoroctanico Sulfónico (PFOS), sus sales por cromatografía de líquidos acoplado a espectrometría de masas (LC/MS).

3.5.1.2 Analitos –El método es aplicable a los siguientes analitos:

PFOS

3.5.1.3 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de los PBBs y PBDEs mencionados en el inciso anterior en las siguientes matrices ambientales:

Aguas Marinas



Aguas Subterráneas

Suelos

Sedimentos Marinos


Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos animales

3.5.1.4 Limitaciones – Los límites de detección en las muestras reales dependerán de

las interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que pueden





156


cromatografía de gases de alta resolución y en la interpretación de sus resultados. Cada analista debe

demostrar la habilidad para generar resultados aceptables con este método usando los procedimientos

establecidos en el Manual de Control de Calidad.

3.5.2 Resumen AGUAS (Marinas, Costeras, Estaurinas, Lagunas Costeras, Superficiales Epicontinentales y Subterráneas)

Una muestra de agua es extraída por extracción en fase sólida (SPE) y posteriormente analizada por LC/MS

SUELOS Y SEDIMENTOS

Una muestra de suelo es tratada con NaOH y HCl en metanol y extraída con metanol y finalmente se realiza una segunda extracción con Carbono grafitado no poroso.


Se pesa una cantidad de muestra a la cual se le adiciona un reactivo de par iónico y se extrae con acetato de etilo. Se evapora a sequedad y se reconstituye con acetonitrilo y se pasa para su análisis por LC/MS.


3.5.3.1 Interferencias generales Las interferencias del método pueden originarse por la presencia de contaminantes en los solventes, reactivos, material de vidrio o cualquier otro material durante el procesamiento de la muestra (contaminación cruzada). Interferencias de matriz pueden ser causadas por contaminantes co-extraídos de las muestras. La ausencia de interferencias de matriz varía considerablemente, dependiendo de la naturaleza de la muestra. En aguas subterráneas las interferencias son mínimas, pero en aguas de desechos, aguas de mar, suelos, sedimentos, tejidos y alimentos puede existir interferencias de matriz. El material de los recipientes que contienen la muestra no deben ser de ningún plástico polifluorado incluyendo el politetrafluoroetileno (PTFE) y materiales fluoroeslastomeros; todos estos materiales no deben ser usados durante el muestreo, almacenamiento o procesamiento de la muestra. Todo el material utilizado debe ser enjuagado con agua y metanol. Es importante que las muestras y los estándares de trabajo se encuentren en el mismo disolvente. El disolvente de trabajo para los estándares debe ser el mismo que el disolvente final utilizado en la preparación de la muestra. De no ser este el caso, puede afectarse la comparación cromatográfica entre los estándares y la muestra.



157

3.5.3.2 Seguridad general La carcinogenidad y toxicidad de los químicos utilizados en este método no ha sido determinadas con precisión; de todas maneras; cada sustancia química debe ser tratada como potencial peligro a la salud. La exposición a estas sustancias químicas debe ser reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice monitoreos de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y que dichos resultados estén disponibles para los analistas.

PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan estabilizadores, lo que puede hacerlo peligroso.

Este método puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con su uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y un archivo de las normas de seguridad respecto a la exposición y manejo seguro de las sustancias químicas especificadas en este método. Debe tenerse un archivo de referencias de las hojas de información de seguridad el cual debe estar disponible a todo el personal involucrado en estos análisis.

3.5.3.3 Matrices










Cartuchos de extracción en fase sólida: Oasis-WAX 100-200 mg

Oasis-HLB 60-200 mg ambos de Waters

Sistema de vació

Contenedores de 500 mL

Viales de polipropileno o polietileno que no contengan materiales

de fluoropolimeros





158

3.5.3.3.1.2.1 Reactivos

Acido acético

Hidróxido de amonio al 25%.

Acetato de amonio

Metanol



Buffer de acetato 0.025 M pH 4: Mezclar 0,5 mL de ácido acético con 349,5 mL de

agua. Disolver 0.116 g de acetato de amonio en 60 mL de agua. Mezclar 200 mL del

acido acético diluido con 50 mL de la disolución de acetato de amonio.

Disolución de Amoniaco 0.1% en metanol: Mezclar 0,4 mL de amoniaco al 25% con

99,6 mL de metanol.



Compuesto No. CAS

PFOS 1763-23-1

3.5.3.3.1.3 Procedimiento de Extracción La muestra debe encontrarse a 4 ºC y debe analizarse dentro de las 2 semanas posteriores a su

muestreo; de no ser así, la muestra debe de mantenerse en congelación desde el muestreo hasta

su procesamiento.

Primero se realiza el acondicionamiento del cartucho SPE:

Se acondiciona el cartucho haciéndole pasar 4 mL de la disolución de amoniaco/metanol y

finalmente 4 mL de agua. El cartucho nunca debe quedar seco, para ello cerrar a la llave

cuando el nivel del agua se encuentre por arriba de la cama del adsorbente, de esta manera se

mantendrá activado.

Haga pasar por el cartucho 500 mL de la muestra a un flujo de 3-6 mL/min. Para las muestras

que contengan más de 500 mg/L de materia suspendida solo utilizar 100 mL. Para eliminar el

agua atrapada en el adsorbente hacer pasar 30 segundos vacío; si no fue suficiente repetir en

periodos de 30 segundos pero no debe de hacerlo mas de 2 minutos pues puede resultar en

perdida de los analitos. Adicione 4 mL del buffer de acetato y seque el cartucho desechando el

líquido eluído.

Para eluir los PFOS haga pasar por el cartucho 4 mL de metanol seguido de 4 mL de 0,1% de

amoniaco/MeOH a un flujo de una gota por segundo. Colectar el eluato y concentrarlo con

nitrógeno a 500 µL.


No Aplica



159

3.5.3.3.2 Suelos y Sedimentos









Fase sólida de carbono grafitado no poroso: Supelcelan ENVI-Carb

120/400 de Supelco

Contenedores de 500 mL

Tubos de centrifuga de polipropileno

Tubos para centrifuga Eppendorf de 1.7 mL

Viales de polipropileno o polietileno que no contengan materiales de

fluoropolimeros.

Matraces volumétricos de 500 mL.



3.5.3.3.2.2.1 Reactivos

Metanol (CH3OH)

Hidróxido de sodio (NaOH)

Acido acético glacial (CH3COOH)

Acetato de amonio (CH3COO NH4)

Acido Clorhídrico concentrado (HCl)

Metanol



NaOH 200 mM en metanol: Pesar 4 g de NaOH disolver en MeOH en un matraz

volumétrico de 500 mL y llevar al aforo con MeOH.

HCl 2 M en metanol: Tomar 88 mL de HCl concentrado y colocarlos en un matraz

aforado de 500 mL y con cuidado llevar al aforo con metanol.



160

Acetato de amonio 4 mM: Pesar 0.0576 g de acetato de amonio, disolverlos en 100

mL de agua y llevar al aforo con agua en un matraz volumétrico de 200 mL.



Compuesto No. CAS

PFOS 1763-23-1


El suelo o sedimento debe encontrarse en congelación hasta el momento de su procesamiento. Descongelar el suelo o sedimento, pesar 2.5 g colocándolos en un tubo de centrifuga de polipropileno y adicionar 1 mL de NaOH 200 mM en metanol dejando remojar por 30 minutos. Adicionar 100 µL de HCl 2M en 9 mL de metanol, tapar el tubo (la tapa debe ser de polipropileno) y agitar durante 15 minutos. Centrifugar a 2000 rpm durante 5 min y transferir el sobrenadante a otro tubo de polipropileno. Al tubo que contiene la fase sólida adicionar 9 mL de metanol y repetir el procedimiento de agitación y centrifugación. Repetir nuevamente la extracción. Unir los tres extractos de las tres extracciones y concentrar a aproximadamente 1 mL. En un tubo de centrifuga Eppendorf de 1,7 mL adicionar 25 mg de ENVI-Carb y 50 µL de acido acético glacial y adicionar el mL de extracto obtenido en la parte de concentración. Tapar, agitar en vortex y centrifugar a 10000 rpm durante 10 minutos. Pasar 0,5 mL del sobrenadante del tubo Eppendorf a. un vial de polipropileno y adicionar 0,5 mL de acetato de amonio 4 mM. La muestra esta lista para su análisis por LC/MS


No Aplica

3.5.3.3.3 Alimentos procesados, sin procesar, organismos y tejidos animales

3.5.3.3.3.1 Tejido graso e hígado

3.5.3.3.3.1.1 Equipo y Materiales

La mención de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este método

se citan debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen

propósitos ilustrativos. Su mención no implica ninguna aprobación oficial. Puede

obtenerse un desempeño equivalente usando otros equipos y materiales que no hayan

sido especificados en este método, pero la demostración del desempeño equivalente de

otros equipos y materiales es responsabilidad del laboratorio que utilice este método.



161


Viales 40 mL

Mezclador de alta velocidad con vaso de polietileno o polipropileno


Microjeringas de 10 y 50 µL.

Filtros para jeringa de nylon de 0,2μm. 25mm

Jeringas de plástico de 3 mL

Matraz volumétrico de 1L


fluoropolimeros

3.5.3.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia

Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a

menos que otra cosa se indique.

3.5.3.3.3.1.2.1 Reactivos

Sulfato acido de Tetrabutilamonio (TBA)

Hidróxido de sodio (NaOH)

Carbonato de sodio (NaCO3)

Bicarbonato de sodio (NaHCO3)

Metanol

Acetato de etilo (CH3COOCH2CH3)



NaOH 10 N: Pesar 200g de NaOH en un vaso de precipitados de 500 mL, agregar

250mL de agua desionizada, agitar hasta disolver los sólidos. Pasar a un matraz

aforado de 500 mL y llevar al aforo con agua. Debe almacenarse en una botella de

polietileno con capacidad de 500 mL.

NaOH 1 N: Colocar 10mL de la disolución 10N preparada anteriormente en un

matraz volumétrico de 100mL y llevar al aforo con agua desionizada Debe

almacenarse en una botella de polietileno con capacidad de 125mL



162

Tetrabutilamonio hidrogenosulfato (TBA) 0.5M: Pesar 169g de TBA en un matraz volumétrico de 1L y disolver con 500mL de agua, ajustar el pH a 10 utilizando aproximadamente 64mL de la disolución de NaOH 10N; llevar al aforo con agua desionizada El último mililitro de NaOH debe agregarse cuidadosamente ya que el pH cambia abruptamente.

Esta disolución debe almacenarse en una botella de polietileno con capacidad de 1L. La disolución de TBA requiere ser revisada justo antes de su uso para asegurar pH=10. Si requiere ajuste, se utiliza la disolución de NaOH 1N.

Disolución amortiguadora de Carbonato de sodio/Bicarbonato de Sodio (Na2CO3/NaHCO3) 0,25M: Pesar aproximadamente 26,5g de carbonato de sodio y 21g de bicarbonato de sodio; y colocarlos en un matraz volumétrico de 1L, llevar a la marca de aforo con agua desionizada. Almacenar en una botella de polietileno con capacidad de 1L.

3.5.3.3.3.1.2.2 Materiales de referencia


Compuesto No. CAS

PFOS 1763-23-1

3.5.3.3.3.1.3 Procedimiento de Extracción

Pesar 1 g de la muestra en un vaso de mezcla de alta velocidad, adicionar 2,5 mL de

agua y moler la muestra durante dos minutos hasta que sea homogénea; pasar a un vial

de polietileno raspando las paredes del vaso con una espátula y/o adicionando 2,5 mL

mas de agua al vaso. Tapar y agitar en vortex durante 15 segundos.

En otro tubo de centrifuga colocar 1 mL de la mezcla homogénea, 1 mL de TBA 0.5

M, 2 mL del buffer 0,25 M de carbonato de sodio/bicarbonato de sodio y 5 mL de

acetato de etilo. Tapar muestra y agitar durante 20 minutos en vortex. Posteriormente

centrifugar a 3500 rpm hasta la separación de fases. Pasar 4 mL de la fase orgánica a

un tubo de centrifuga limpio. Posteriormente se evapora el disolvente con nitrógeno

hasta sequedad.

Adicionar 1 mL de MeOH, agitar 30 segundos en vortex y filtrar sobre un filtro de

nylon de 0,2 µm colocándola en un vial de polipropileno. La muestra esta lista para su

análisis en LC/MS

3.5.3.3.3.1.4 Procedimiento de Purificación de Muestras

No Aplica

3.5.3.3.3.2 Alimentos procesados y sin procesar

3.5.3.3.3.2.1 Equipo y Materiales



163

La mención de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este método se

citan debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen propósitos

ilustrativos. Su mención no implica ninguna aprobación oficial. Puede obtenerse un

desempeño equivalente usando otros equipos y materiales que no hayan sido

especificados en este método, pero la demostración del desempeño equivalente de otros

equipos y materiales es responsabilidad del laboratorio que utilice este método.


Agitador mecánico

Mezclador de alta velocidad con vaso de polietileno o polipropileno


Cartuchos de extracción en fase sólida de intercambio aniónico débil

Microjeringas de 10 y 50 µL.

Filtros para jeringa de nylon de 0,2μm. 25mm

Jeringas de plástico de 3 mL

Matraz volumétrico de 1L


fluoropolimeros

3.5.3.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia

Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a

menos que otra cosa se indique.

3.5.3.3.3.2.2.1 Reactivos

Hidróxido de potasio (KOH)

Metanol

Acetato de amonio (CH3COO NH4)

Hidróxido de amonio (NH4OH)



KOH 0.01 M: Pesar 0.2805 g de KOH en un vaso de precipitados de 500 mL,

agregar 250mL de agua desionizada, agitar hasta disolver los sólidos. Pasar a un



164

matraz aforado de 500 mL y llevar al aforo con agua. Debe almacenarse en una

botella de polietileno con capacidad de 500 mL.

Acetato de amonio 25 mM - pH 4. Pesar 0,36 g de acetato de amonio, disolverlos en

100 mL de agua y llevar al aforo con agua en un matraz volumétrico de 200 mL.

Metanol básico (0.1% NH4OH): En un matraz volumétrico de 250 mL se colocan

aproximadamente 200 mL de metanol y se agrega 0.25 mL de hidróxido de amonio

con una microjeringa y se lleva al aforro con metanol.

Disolución amortiguadora de Carbonato de sodio/Bicarbonato de Sodio (Na2CO3/NaHCO3) 0,25M: Pesar aproximadamente 26,5g de carbonato de sodio y 21g de bicarbonato de sodio; colocarlos en un matraz volumétrico de 1L, llevar a la marca de aforo con agua desionizada. Almacenar en una botella de polietileno con capacidad de 1L.

3.5.3.3.3.2.2.2 Materiales de referencia


Compuesto No. CAS

PFOS 1763-23-1

3.5.3.3.3.2.3 Procedimiento de Extracción

En un vaso de alta velocidad se colocan 10 g de muestra y se adicionan 20 mL de metanol y se homogeniza. Adicionar 20 mL de metanol y mezclar nuevamente. La muestra se somete a agitación vigorosa durante toda la noche (16 horas). Posteriormente las muestras son centrifugadas a 5000 rpm durante 15 minutos. Las muestras de leche y huevo se someten a calentamiento (70º) durante 2 horas para inducir la precipitación de las proteínas. Se colecta el extracto metanólico y se evapora a sequedad con nitrógeno a 80 ºC y se reconstituye con 25 mL de KOH 0,01 M; se sonica durante 10 minutos y se centrifuga a 5000 rpm 15 minutos. Transferir la fase líquida con mucho cuidado a un tubo limpio de polipropileno. Se acondiciona el cartucho de intercambio aniónico de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Se hace pasar el extracto liquido por gravedad (si es requerido se utiliza vacío). Se lava el cartucho con dos porciones de 6 mL de acetato de amonio 25 mM, pH 4,5. La elusión se lleva a cabo con 4 mL de la disolución de metanol básico colectando. Al extracto obtenido de la elusión se evapora el disolvente con nitrógeno en un baño de agua a 30 ºC y justo antes de que llegue a sequedad se reconstituye con 400 µL de metanol.



165

3.5.3.3.3.2.4 Procedimiento de Purificación de Muestras

No Aplica



3.5.4.1.1 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de PFOS y sus sales en los extractos purificados de aguas naturales, residuales municipales e industriales, así como suelos, sedimentos, organismos, tejidos y alimentos, los extractos y su purificación depende de la matriz analizada; se deben seguir los procedimientos de extracción y purificación adecuados para cada matriz.


interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en

cuenta que pueden variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de

concentración de las muestras e interferencias presentes en el extracto

purificado).


expertos en el uso de cromatografía de líquidos acoplada a espectrometría de

masas y en la interpretación de sus resultados. Cada analista debe demostrar la


3.5.4.2 Resumen

Este método describe el análisis de PFOS y sus sales de extractos por HPLC-

electrospray/espectrometría de masas. La cuantificación se lleva a cabo monitoreando el ion

característico de PFOS M/Z 499.


3.5.4.3.1 Equipo

Cromatógrafo de líquidos (HPLC)–electrospray/MS con controlador de temperatura en el compartimiento de columna y todos los accesorios necesarios incluyendo gases, inyector, automuestreador, etc. Debe tener una interfase de Ionización por electrospray acoplado a un detector de masas.

Balanza analítica con precisión de 0,0001 g 3.5.4.3.2 Materiales

2.0 Columna Thermo Keystone Betasil C18 HPLC Column 4.6 x 150mm 5µm



166





Viales de polipropileno o bien silanizados.


3.5.4.4.1.1 Reactivos

Acetonitrilo. Grado HPLC

Acetato de amonio

Metanol. Grado HPLC

Acetato de amonio 2 mM: Pesar 0.0288 g de acetato de amonio, disolverlos en 100 mL de agua y llevar al aforo con agua en un matraz volumétrico de 200 mL.

3.5.4.4.1.2 Material de referencia


Compuesto No. CAS

PFOS 1763-23-1

Disolución Patrón de 100 mg/L

Pesar 0.01 mg del STD de PFOS en un matraz aforado de 100 mL, disolver y llevar

al aforo con metanol. Guardar en frasco de polipropileno.

Disolución intermedia de 10 mg/L

A partir de la disolución patrón tomar 100 µL en un matraz aforado de 1 mL y llevar al aforo con metanol.


Prepare 5 niveles como mínimo de diferente concentración de las disoluciones estándar para cada analito de interés en matraces volumétricos.

El punto de concentración más bajo de la curva de calibración debe ser 3 a 10 veces mayor que el valor del LDM. Las otras concentraciones corresponden



167

al intervalo esperado de las concentraciones encontradas en las muestras reales o bien estarán definidas por el intervalo lineal del detector.

Estándar de calibración de 1 mg/L. En un matraz aforado de 1 mL ponga 100 µL de la solución de 10 mg/L y afore a la marca con metanol.

Estándar de calibración de 0,5 mg/L. En un matraz de 1 mL ponga 50 µL de la solución de 10 mg/L y afore a la marca con metanol.

Estándar de calibración de 0,25 mg/L. En un matraz de 1 ml ponga 25 µL de la solución de 10 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde esta disolución en viales de 2 ml y etiquete.

Estándar de calibración de 0,1 mg/L. En un matraz aforado 1 mL ponga 100 µL de la solución de 1 mg/L y afore a la marca con metanol.

Estándar de calibración de 0,05 mg/L. En un matraz aforado de 1 mL ponga 50 µL de la solución de 1 mg/L y afore a la marca con metanol.

3.5.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo Cada laboratorio que utilice este método está obligado a operar un programa de control de calidad (CC) formal. Los requerimientos mínimos de este programa consisten en una demostración inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con las especificaciones de desempeño del método, además realizar análisis continuos de muestras de control de calidad (MCC) para demostrar la precisión y exactitud continuas y el análisis de blancos. El desempeño del laboratorio debe compararse con los criterios aquí establecidos, con objeto de determinar si los resultados de los análisis cumplen con las especificaciones de desempeño del método. El analista debe hacer una demostración inicial de su habilidad para generar una exactitud y precisión aceptables por este método. Cada vez que se realice una modificación al método o que se cambie el analista responsable de llevar a cabo está determinación, el analista designado debe repetir la validación del método, si el cambio va a afectar el límite de detección del método (LDM), el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o más bajo que el anterior para los analitos de interés. No se permite el uso de técnicas determinativas alternativas y cambios que degraden la ejecución del método. Si se utiliza una técnica analítica que no sea la especificada en este método, dicha técnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las de las técnicas descritas en este documento para el analito de interés. Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a este método. Estos registros deben de incluir lo siguiente:

- La justificación por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al método para ese analito.



168

- Los nombres, títulos, direcciones y número de teléfono de los analistas que ejecutaron los análisis y modificaciones y el encargado de control de calidad que presenció y verificó los análisis y sus modificaciones. - Los resultados de todas las pruebas de CC del método modificado comparadas con el método original, dichos datos deben de incluir todos los parámetros mencionados en la sección de desempeño del método. - La información escrita en las bitácoras tanto del equipo como del analista, deben incluir los siguientes datos:



Fecha del análisis









La verificación del equipo debe realizarse de acuerdo a las instrucciones del fabricante. En general:

Verificar que se tiene fase móvil necesaria en los reservorios.

Estabilizar el sistema con la columna por al menos 10 min.

Abrir la alimentación de nitrógeno




áreadetotalCF

100% xCF

SDCFRSD

Donde:



169

SDCF= Desviación estándar de los factores de calibración CF = Promedio de los factores de calibración

La verificación de la calibración inicial puede también efectuarse mediante la regresión por mínimos cuadrados, en la cual el criterio de aceptación es que el factor de correlación "r2" sea mayor o igual a 0.997. Si los criterios para el % RSD o r no se cumplen se procede a la revisión del sistema cromatográfico y la preparación de las disoluciones de calibración.

Posteriormente la curva de calibración será vigente, si el análisis de un punto intermedio de la curva no presenta una variación de la concentración mayor al 15% y que será calculada de la siguiente manera.

100% xCT




100% xCF





Los blancos de reactivos no deben presentar ningún tipo de contaminante al tiempo de retención de los analitos, por lo que es importante que los reactivos utilizados cumplan con las especificaciones mencionadas.






3.5.4.5.4 Verificación del lote analítico



170

Por cada lote analítico de muestras analice al menos una muestra sintética de control de calidad o preferentemente un material de referencia certificado de la misma matriz de las muestras analizadas en el lote analítico, calcule el % de recuperación del analito de la muestra control, los cuales deberán estar dentro del rango de 80 120 %R, de no ser así se debe revisar la preparación de la muestra control y el sistema cromatográfico. Realizar la corrección necesaria y reanalizar la muestra control, si el problema persiste, se deben reanalizar todas las muestras del lote analítico.

3.5.4.5.5 Verificación de interferencias de matriz La verificación de interferencias por parte de la muestra se lleva a cabo mediante las muestras fortificadas (MF). El laboratorio debe realizar el análisis de muestras fortificadas (MF) y muestras duplicadas (MD), fortifique una muestra por cada lote analítico o preferentemente una muestra de cada tipo de matriz analizada en el lote. Las muestras fortificadas se deben analizar cuando por las características de la muestra se sospeche de interferencias de matriz o cuando sean parte de un plan de aseguramiento de calidad de un proyecto. Efecto de la matriz en el recobro del analito – Muestras fortificadas (MF): Analice las muestras fortificadas: Calcule el por ciento de recobro El % de Recobro debe estar dentro 80 a 120 %R Si los valores no cumplen con lo especificado, el sistema analítico está fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico. Efecto de la matriz en la precisión del analito – Precisión de la matriz duplicada (MD): Analice una muestra duplicada por cada lote de muestra.


21

200*21

CC

CCDPR

Donde: C1 Concentración de la primera muestra C2 concentración de la segunda muestra (muestra duplicada)

La DPR de cada analito obtenido entre la muestra y la duplicada debe ser:<20%



171

Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analítico está fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico. Repita el análisis del lote asociado con la muestra y la duplicada que provocó que la prueba del DPR fallara.


En cada lote analizado, si más de 10 muestras van a ser analizadas durante el día, verifique la curva de calibración analizando un estándar de concentración media del intervalo de trabajo al principio del lote y después de cada 10 muestras. Calcule el factor de calibración o la concentración para cada analito del estándar de concentración media, y el por ciento de la diferencia (%D) con la siguiente ecuación:

1001

21x

FC



El valor obtenido del % de la diferencia (%D) deberá ser menor al 15%, de no ser así verifique su vigencia, revisé también el sistema cromatográfico y determine la causa de la falla y corrija, de no lograr corregir la falla, recalibre nuevamente el sistema.

3.5.4.5.7 Verificación de estándares surrogados. NO APLICA

3.5.4.5.8 Verificación de estándares internos. NO APLICA 3.4.4.5.9 Control de Calidad Estadístico – En esta sección se especifica como debe realizarse el control de calidad estadístico obligatorio para este método:

3.5.4.5.9.1 Preparación de las Muestras de Control de Calidad (MCC) Prepare la MCC de la siguiente forma:



172

Se deberá preparar la MCC de una fuente externa al laboratorio o ser preparada de una fuente diferente a la utilizada en la curva de calibración. Prepare una disolución a una concentración que corresponda al rango de trabajo del método.




graficarse y deberá estar dentro de los límites de control superior e inferior (

3s).


resultados del lote analítico, determine las causas y corrija los errores,




Límite Superior de Control (LSC) = 3.27R Límite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R Donde: R = Promedio del DPR





173

Para validar las modificaciones que se efectúen a este método o para la utilización de métodos alternos deberá seguirse el siguiente procedimiento: Si se realizan modificaciones al presente método, deberán validarse parcialmente. Si se utiliza un método alterno cuya fuente sea un método estandarizado por alguna Institución de carácter internacional o reconocida internacionalmente (e. g. ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment Canada, etc.) también deberá validarse parcialmente. Si se utiliza algún método no estandarizado, deberá evidenciarse, además de los parámetros de validación parcial, los parámetros de Robustez, Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante estudios interlaboratorio. Verifique diariamente el desempeño de todo el sistema analítico utilizando los datos recolectados de análisis de blancos reactivos, solución verificadora del desempeño del laboratorio.


Verifique la precisión con réplicas del análisis. Una pobre precisión generalmente puede deberse a fugas, especialmente en el puerto de inyección. Si el sistema cromatográfico se está comportando aparentemente bien, pero con baja sensibilidad, puede ser necesario generar una nueva curva o juego de factores de calibración para verificar las respuestas bajas antes de buscar la fuente del problema.

3.5.4.5.11 Composición del lote analítico (para cada 10 muestras)

1 Blanco electrónico 2 Mezcla de Verificación 3 Blanco de Reactivos 4 Muestra de Control de Calidad 1 (MCC) 5 Muestra real No. 1 6 Muestra real No. 2 7 Muestra fortificada 8 Muestra fortificada duplicada (si se realizo) 9 Muestra real 5 a 10 10 Muestra de Verificación de la Calibración Continua.





174


























175

Se necesitan al menos 5 estándares de calibración. Uno debe contener analitos a una concentración cercana, pero superior a la del límite práctico de cuantificación para cada analito; los otros deben estar a concentraciones que cubran el intervalo esperado en las muestras. Por ejemplo, si el LDM es 0.01µg/L y el LPC es de 0.05 µg/L, se espera que la muestra contenga concentraciones mayores de 0.05 µg/L. Una vez establecidas las condiciones de operación inyecte un volumen adecuado de cada

estándar de calibración por triplicado y al final realice un promedio de las tres curvas y


Si la DSR de cada analito es 20%, entonces la respuesta del instrumento es considerada lineal y el factor de calibración promedio FC puede utilizarse para la cuantificación de los resultados de las muestras. Si la DSR es mayor que 20%, entonces no puede asumirse linealidad y se debe repetir la curva de calibración. Si se utiliza regresión lineal por mínimos cuadrados, deberá obtener el factor de correlación “r2” para cada analito, el cual deberá ser mayor o igual a 0.997 si “r” es menor a este valor, la curva de calibración no es lineal y deberá verificarse la preparación de los estándares de calibración y el sistema cromatográfico y repetir la calibración.


3.5.4.7.1 Análisis de los extractos de las muestras Condiciones cromatográficas:

Temperatura columna 40 °C Fase móvil A Acetato de amonio 2 mM Fase móvil B Metanol Gradiente:

Tiempo (min) % FM B % FM A

0 45 55

7.5 90 10

11 90 10

11.5 45 55

Volumen inyección 10 µL Flujo 3 mL/min MS Ionización ESI negativo Modo MS SIM Voltaje del capilar 3 kV Temperatura de la fuente 150 ºC Temperatura desolvatacion 350 ºC Flujo del gas 140 L/min Flujo del gas desolvatacion 460 L/min m/z monitoreada 499



176

Elabore la secuencia de análisis de acuerdo a lo indicado en el punto de composición del lote analítico. Inicie el análisis.

Inyecte un volumen de10 L del extracto de la muestra o estándar en el cromatógrafo de gases. Registre el volumen final del extracto. Verifique que se cumple con lo especificado en el inciso de control de calidad y criterios de aceptación y rechazo. Si la respuesta de cualquier ion cuantitativo excede la respuesta del intervalo de calibración, diluya el extracto y reanalice.


La determinación cuantitativa del PFOS se basa en que la curva de calibración esta hecha con los valores obtenidos de las áreas del ion cuantificador vs concentración, por lo que las muestras que presenten picos al tiempo de retención del analito se les realiza la búsqueda del ion cuantificador y si esta presente el ion se obtiene su concentración con base en la ecuación obtenida de la regresión lineal de la curva de calibración.

3.5.4.7.3 Cálculos

3.5.4.7.3.1 AGUA

Calcule la concentración como:

muestradeVolumen

extractofinalVolumenCLgiónConcentrac i/

Donde


Hay software en los cuales es posible introducir el factor de corrección para obtener el

resultado expresado en muestra.

3.5.4.7.3.3 SUELOS Y SEDIMENTOS Calcule la concentración como:

muestradePeso


Donde




177




ALIMENTOS

muestradePeso


Donde






178

3.6 METALES Y METALOIDES (EXCEPTO MERCURIO)

El principio de este método se basa en la digestión ácida de las muestras y el análisis por Espectroscopía de Emisión Atómica con Plasma Inductivamente Acoplado (ICP/AES)



Espectrómetro de Emisión Atómica con Plasma Inductivamente Acoplado (ICP/AES)


3.6.1.1 Propósito: La espectroscopía de Emisión Atómica con Plasma Inductivamente Acoplado (ICP/AES) es aplicable para la determinación de concentraciones de µg/L para un gran número de elementos (metálicos y no metálicos). Se requiere una digestión ácida previa al análisis y filtración para analizar los metales totales a analizar. De acuerdo a la matriz analizada se utilizan diferentes métodos de digestión para solubilizar los metales en las muestras antes de su análisis instrumental. 3.6.1.2 Analitos: El método es aplicable a los siguientes analitos: Ag, As, Ba, Be, Cd, Ca, Cr, Cu, Co, Fe, Ni, Mg, Mn, Mo, Pb, Na, Ni, Se, Sb, Tl, V y Zn. Este método puede ser aplicado a otros elementos, se debe validar la aplicación para cada uno de los analitos que quiera ser analizado. Este método no puede ser utilizado para la determinación de Mercurio . 3.6.1.3 Matrices: Este método es aplicable para el análisis de metales en las siguientes matrices ambientales:

Aire Ambiente

Suelos

Sedimentos Marinos





179


Aguas Subterráneas


Sangre

Leche Materna 3.6.1.4 Limitaciones: Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de analistas

expertos en el uso de ICP/AES y en la interpretación de sus resultados. Cada analista debe demostrar

la habilidad para generar resultados aceptables con este método.

3.6.2 Resumen Una porción homogenizada de una muestra líquida o sólida es pesada con exactitud para su procesamiento. Para un análisis de elementos totales, los analitos son solubilizados o digeridos utilizando el método de preparación de muestras apropiado, quedando esta lista para ser analizada por ICP-AES utilizando un instrumento secuencial de plasma axial, dicho instrumento mide espectros de emisión característicos por espectrometría óptica. Los espectros son dispersados por una rejilla de difracción y las intensidades de las líneas de emisión son monitoreadas por dispositivos fotosensitivos.

AIRE AMBIENTE

Se determina la concentración de partículas suspendidas totales en el aire ambiente, por medio de un muestreador de alto volumen adecuadamente localizado, que succiona a través de un filtro una cantidad entre 1 600 y 2 400 m3 de aire ambiente, a un flujo entre 1,13 y 1,70 m3/min durante un período de muestreo de 24 hrs. La velocidad de flujo del aire ambiente y la geometría del muestreador son tales que favorecen la recolección de partículas hasta de 50 micrómetros (µm) de diámetro aerodinámico, dependiendo de la velocidad del viento y su dirección. Los filtros usados deben tener una eficiencia de recolección mínima del 99 % para partículas de 0.3 µm. El filtro se pesa en el laboratorio bajo condiciones de humedad y temperatura controladas, antes y después de su uso, para determinar su ganancia neta de peso (masa). El volumen total de aire muestreado, corregido a las condiciones de referencia, se determina a partir del flujo de aire ambiente medido y del tiempo de muestreo. La concentración de partículas suspendidas totales en el aire ambiente se calcula dividiendo la masa de las partículas recolectadas entre el volumen de aire muestreado y se expresa en microgramos por metro cúbico patrón (µg/ m3 ptn), corregidos a las condiciones de referencia. En muestras tomadas a temperaturas y presiones barométricas que difieren significativamente de las condiciones de referencia, las concentraciones corregidas pueden variar de las concentraciones reales (µg/ m3 real), sobre todo a elevadas altitudes. Las concentraciones reales de partículas pueden ser calculadas a partir de las concentraciones corregidas, utilizando las temperaturas y presiones que se hayan presentado durante el período de muestreo.

El filtro es dividido en tiras y se digiere una de ellas por el método de microondas, se afora a un volumen conocido y de analiza por ICP/AES para metales y metaloides..

AGUAS (Superficiales, Epicontinentales y Subterráneas)



180

Una alícuota representativa de 45 mL de muestra acuosa es digerida en microondas con 4 mL de ácido nítrico concentrado y 1 mL de ácido clorhídrico concentrado; en vasos de digestión de teflón (PFA o TFM compuestos) s durante 20 minutos. Posteriormente al proceso de digestión, la muestra es enfriada, filtrada y colocada en un tubo limpio para su posterior análisis por ICP/AES.

AGUAS MARINAS, ESTAURINA Y SALMUERAS

Este método es usado para preconcentrar elementos traza usando una resina quelatante de iminodiacetato funcionalizada. Seguida de una solubilización ácida, la muestra es buffereada y pasada por la columna quelatante; los grupos metálicos I y II, al igual que los aniones, son separados selectivamente para el análisis por elusión con acetato de amonio a pH 5,5. Los analitos son subsecuentemente eluídos en una matriz simplificada que consiste en ácido nítrico 0,75 M.

SUELO Y SEDIMENTOS

Una alícuota representativa de 1,0 g de muestra se digiere en microondas con 9 mL de ácido nítrico concentrado y 1,0 mL de ácido clorhídrico concentrado, para matrices complejas no pese más de 1,0 g de muestra adicione 9 mL de ácido nítrico concentrado y 3 mL de ácido fluorhídrico en vasos de digestión de teflón (PFA o TFM compuestos) durante 10 min. Posteriormente al proceso de digestión, la muestra es enfriada, filtrada y colocada en un tubo limpio para su posterior análisis por ICP/AES.


Una alícuota representativa de 0.25 - 1,0 g de muestra se digiere en microondas con 8 mL de ácido nítrico concentrad y añadir 1 mL de H202 al 30% en vasos de digestión de teflón (PFA o TFM compuestos) durante 10 min. Posteriormente al proceso de digestión, la muestra es enfriada, filtrada y colocada en un tubo limpio para su posterior análisis por ICP/AES.

SANGRE HUMANA

La muestra se digiere con HNO3:HClO4:H2SO4 (3:1:1), se reduce su volumen a 1 mL y se deja enfriar. Las muestras son analizadas por ICP/AES.

LECHE HUMANA

Una alícuota representativa de leche se mezcla ácido nítrico, se calienta,, una vez fría se adicionan ácido perclórico concentrado y nuevamente se somete la mezcla a calentamiento. Se añade H202 al 30% y se calienta a 70ºC, finalmente se lleva a un volumen de 10mL con agua doblemente destilada y agua desionizada. La determinación de los metales en la muestra se realiza mediante ICP/AES.

3.6.3 Procedimientos de Digestión de muestras




181

Solventes, reactivos, material de vidrio, etc. pudieran causar interferencias. Todo lo mencionado anteriormente debe demostrarse que no aportan interferencia alguna. La digestión de muestras con alto contenido de orgánicos puede generar presiones altas debido a los gases generados durante la digestión. Lo anterior pudiera causar desfogue en los liners teniendo el riesgo de perdida de los analitos. Muchas muestras pueden disolverse con este método; sin embargo cuando la muestra contiene sólidos suspendidos tales como compuestos refractarios (como dióxido de silicio, dióxido de titanio, alumina y otros óxidos) estos pudieran secuestrar analitos target. Los enlaces con estos elementos pueden considerarse como “no móviles” en el ambiente por lo que son excluidos de la mayoría de los mecanismos de transporte de contaminantes acuosos. Muestras altamente reactivas o contaminadas pudieran requerir dilución antes de su análisis. Muestras altamente reactivas pueden requerir pre-digestión para minimizar reacciones vigorosas En la preparación de muestras para aire ambiente puede presentarse la pérdida de partículas volátiles. Las partículas volátiles recogidas en el filtro pueden perderse durante el muestreo subsecuente o durante el envío posterior, durante el almacenamiento del filtro antes de pesarse o después del muestreo. Aunque tales pérdidas son en gran medida inevitables, para reducir el error, el filtro se debe pesar tan pronto como sea posible después del muestreo. Partículas artificiales. Se pueden llegar a formar partículas a partir de los gases ácidos de la muestra de aire y el material alcalino del filtro, lo cual incrementaría la concentración real de partículas suspendidas totales. De ocurrir esto, generalmente se presenta al inicio del período de muestreo y es una función del pH del filtro y la presencia de los gases ácidos. Este efecto cobra importancia cuando se presentan partículas de peso relativamente pequeño. Los filtros de fibra de vidrio son relativamente estables ante los cambios de la humedad relativa, pero las partículas colectadas pueden ser higroscópicas. El procedimiento de acondicionamiento de humedad puede minimizar, pero no eliminar completamente el error debido a ésta.

3.6.3.2 Seguridad general

La carcinogenidad y toxicidad de los químicos utilizados en este método no ha sido determinadas con precisión; de todas maneras; cada sustancia química debe ser tratada como potencial peligro a la salud. La exposición a estas sustancias químicas debe ser reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice monitoreos de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y que dichos resultados estén disponibles para los analistas.

La acidificación de las muestras que contienen materiales reactivos puede ocasionar

la liberación de gases tóxicos, como cianuros o sulfuros. La acidificación debe

realizarse en una campana de extracción.

Los ácidos y bases concentradas causan severas quemaduras e irritaciones en la piel. Debe utilizarse

ropa protectora tal como: Batas, guantes y lentes de seguridad cuando se manejan estos productos



182

químicos.


3.6.3.3 Matrices

3.6.3.3.1 Aire Ambiente


Solo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso común en el laboratorio analítico.

3.6.3.3.1.1.1 Equipo

Muestreador de aire de alto volumen (HV)

Filtros de medio o super alta eficiencia de recolección para partículas muy pequeñas ( tamaño submicrometro)

Cámara ambiental de acondicionamiento para filtros: La temperatura controlada debe ser entre 15 y 30ºC con un máximo de ± 3ºC de variación durante el período de equilibrio. La humedad debe controlarse en un nivel menor del 50% de humedad relativa constante dentro de ± 5%.

Balanza analítica: La sensibilidad de la balanza analítica debe ser de 0.01 mg. La cámara de pesado debe estar diseñada para que pueda ser introducido un filtro sin doblar

Unidad luminosa de inspección. La fuente de luz debe ser similar a la de un visor de películas de rayos X para la inspección de los filtros.

Se debe disponer de un foliador para numerar los filtros antes de que se coloquen en la cámara de acondicionamiento ambiental, en caso de no estar numerados por el fabricante.

La unidad de microondas marca CEM modelo MARS-5, MARSX o equivalente

que proporcione una energía de 1600 W, que pueda programarse dentro de + 10 W

de la energía requerida. Y que cuente con sensor de temperatura y presión y un

controlador de microondas.

El sistema requiere de vasos de digestión de teflón PFA marca CEM modelo ACV,

HP 500 de 100 mL de capacidad o vasos marsxpress de 75 mL de capacidad o

equivalentes, capaces de resistir presiones de 500 psi y una temperatura máxima de

210ºC.



183

Una tornamesa giratoria es empleada para asegurar la distribución homogénea de la

radiación dentro de la unidad.

PRECAUCIONES: Deben utilizarse las recomendaciones de operación del modelo y del fabricante del equipo de microondas. Las especificaciones de este método y requerimientos del análisis deben consultarse con las especificaciones del manual del equipo.

3.6.3.3.1.1.2 Materiales:

Probetas graduadas de 50 o 100 mL de capacidad o equivalente.

Papel filtro, cuantitativo Whatman No. 41 o equivalente.

Embudos para filtración de polipropileno.

Matraz Erlenmeyer de 125 mL


A menos que otra cosa se indique, los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS

grado reactivo

Agua Reactivo – A menos que otra forma se indique, el agua utilizada debe ser agua grado reactivo tipo II ASTM.

Ácido nítrico concentrado, HNO3 J.T. Baker R04 o equivalente.

Ácido Clorhídrico concentrado, HCl J.T. Baker R02 o equivalente.

Acido Fluorhídrico concentrado, HF SIGMA-ALDRICH o equivalente

3.6.3.3.1.3 Procedimiento de digestión de Muestra

3.6.3.3.1.3.1 preparación del filtro previo su muestreo Se debe inspeccionar a contra luz cada filtro para detectar posibles orificios u otras imperfecciones; deben descartarse los filtros con imperfecciones evidentes. Deben foliarse cada filtro en dos orillas opuestas de la cara que no va a ser expuesta, todo esto antes de someter los filtros al proceso de estabilización. Se debe poner el cuarto de balazas a las condiciones de humedad relativa y temperatura que se registren en la camara de acondicionamiento. Los filtros son colocados en la camara de acondicionamiento registrando temperatura y humedad. Acondicionar los filtros en la camara ambiental con una temperatura controlada de 15 a 30 ºC con un máximo de variación de ± 3ºC de variación y con una humedad relativa de 50% ± 5% por 24 horas. Pasado el tiempo poner el cuarto de balanzas a las condiciones de temperatura y humedad relativa de la camara y pesar cada uno de los filtros registrando su peso (Gi). Guardarlos individualmente en sobres.



184

3.6.3.3.1.3.2 Preparación del filtro después del muestreo.

Permita que el filtro alcance el equilibrio a condiciones ambientales por lo menos 24 horas. Inmediatamente después del acondicionamiento, pese el filtro llevando la fracción al miligramo más cercano y registrar el peso neto del filtro (Gf) junto con el número del filtro.

Determine el peso neto de partículas retenidas en el filtro por diferencia entre el peso final y el peso inicial del filtro.

3.6.3.3.1.3.3 Digestión de las muestras

Corte el filtro en 12 tiras de 2.5 cm x 20 cm (20 x 25 cm) usando guantes de vinilo y un molde prehecho de plexiglas duro o acrílico lavado con ácido antes de cada uso y una navaja. Enrolle cada tira del filtro e introdúzcala con cuidado al liner y agregue 15 mL de HNO3 3M (el ácido debe cubrir totalmente el filtro enrollado), ponga el liner de microondas y agregue 31 mL de agua reactivo, tape el liner y péselo con una exactitud de 0,01 g. Digiera a W durante 23 min. (es importante digerir los 12 tubos) si se usan menos tubos es necesario ajustar la potencia del horno para que sea equivalente (ver instructivo específico de cada equipo para realizar su calibración).

Al terminar la digestión, enfríe los vasos digestores, pese los vasos y la diferencia entre el peso inicial y el final no debe ser mayor a 0,1 g, si es mayor repita la digestión ya que existió alguna fuga en el vaso digestor.

Retire el tubo de centrífuga y agregue 10 mL de agua reactivo, tape el tubo y agite en vortex por 3 minutos, por medio de una jeringa de nylon o teflón tome 10 mL del digerido en un tubo nuevo de plástico y la muestra se entrega para análisis por ICP/AES.

3.6.3.3.2 Aguas superficiales epicontinentales y subterráneas



Todo el material volumétrico utilizado en éste método debe ser clase “A” o estar verificada su calibración.

3.6.3.3.2.1.1 Equipo




185







210ºC.




Balanza analítica con precisión de 0,1 mg. 3.6.3.3.2.1.2 Materiales:




Matraz Erlenmeyer de 125 mL.



grado reactivo




Ácido Fluorhídrico concentrado, HF SIGMA-ALDRICH o equivalente.

3.6.3.3.2.3 Digestión de las muestras

3.6.3.3.2.3.1 Lavado de vasos

Agregar 25 mL de agua desionizada a cada uno de los vasos de digestión; adicione 3 mL de ácido nítrico concentrado a cada uno de los vasos, tape el vaso. Deposite los vasos en el carrusel del microondas Lave de acuerdo al programa

ETAPA POTENCIA % RAMPA PSI TEMP. MANT.



186

1

1 a 3 vasos 300 W

100 10:00 100 200ºC 5:00 4 a 6 vasos 600 W

7 a 14 vasos 1200 W

Permita que los vasos se enfríen al menos 5 minutos en la unidad de microondas. Destape cuidadosamente y enjuague con agua desionizada.

3.6.3.3.2.3.2 Digestión ácida por microondas

Mida una alícuota de 45 mL de muestra homogénea, esta alícuota es depositada dentro de los vasos de digestión. En el proceso un blanco de reactivos es tratado en la misma manera que las muestras junto con muestras duplicadas. Adicione 4 mL de HNO3 y 1 mL de HCl a cada vaso, tape el vaso. Deposite los vasos en el carrusel del microondas.

NOTA: Durante el proceso pueden ser liberados óxidos de nitrógeno, por lo cual debe asegurarse que el sistema de ventilación funcione apropiadamente.

La distribución de los vasos en el carrusel debe estar siempre en equilibrio. El propósito de los blancos de muestra es para darle un balance a la energía seleccionada. El programa de microondas para la secuencia de las muestras debe de ir a 160°C ± 5ºC en 10 min y permitir un ascenso lento de 160°C a 170°C durante los siguientes 10 min.

ETAPA POTENCIA % RAMPA PSI ºC MAN

1 1 a 3 vasos 300 W 4 a 6 vasos 600 W

7 a 14 vasos 1200 W 100 10:00 250 160 0:00

2 1 a 3 vasos 300 W 4 a 6 vasos 600 W

7 a 14 vasos 1200 W 100 10:00 250 170 00:00

-Al final del programa del microondas permita que los vasos se enfríen al menos 5 min en la unidad antes de remover el carrusel, para evitar posibles daños en el sistema de ventilación de los vasos. Asegúrese que están frías para evitar pérdidas de mercurio.

NOTA: Las muestras pueden enfriarse fuera de la unidad, si se desea que el enfriado sea más rápido se puede meter en refrigeración.



187

Complete la preparación de la muestra destapando cuidadosamente cada vaso dentro de la campana de extracción. Lleve la muestra a un volumen final de 50 mL, si la muestra digerida contiene partículas las cuales puedan obstruir el nebulizador, pase la muestra a través de filtros Whatman No. 41 ó equivalente y transfiérala a un tubo previamente etiquetado..

3.6.3.3.3 Aguas marinas, estaurinas y lagunas costeras


3.6.3.3.3.1.1 Equipo

Balanzas – Balanza analítica, con presición de ± 0,1 mg, balanza de platillos principales con presición de ± 0,01g.

Parrilla de calentamiento.

Centrífuga.

Horno de secado – capaz de mantener 105 ± 5 ºC.

pHímetro – resolución de ± 0,1 unidades de pH.

Sistema de Preconcentración – no debe tener partes metálicas donde tenga contacto con el analito

Columna. Resina quelante de iminodiacetato con macroporos

Sistema de bombeo de eluyente (P1

Bombas auxiliares – de bombeo con pistón (P2), acarreadora (P3) y peristáltica (P4).

Válvulas de Control – Inert Double Snack, neumática de cuatro vías.

3.6.3.3.3.1.2 Materiales

Pipeta automática –capaz de dar volúmenes de 10 a 2500 μL, con un surtidor libre de metal y puntas desechables.

Vasos de precipitado de 250 mL

Vidrios de reloj


Debido a la alta sensibilidad del método, todos los reactivos deben ser de ultra alta pureza y agua ASTM tipo I a menos que se especifique lo contrario.

Ácido acético glacial.

Hidróxido de amonio (20%).

Buffer de acetato de amonio 1M, pH 5,5 – añadir 58mL de ácido acético glacial a 600mL de agua tipo ASTM. Agregar 65mL de hidróxido de amonio al 20% y mezclar. Revisar el pH de la disolución . Ajustar el pH en 5,5 ± 0,1 con pequeños volúmenes de acido acético o hidróxido de amonio si es necesario. Enfriar y diluir a 1L con agua ASTM.



188

Buffer de acetato de amonio 2M, pH 5,5 – preparar igual al punto anterior, usando 116 mL de ácido acético glacial y 130 mL de hidróxido de amonio al 20%, y diluirlo a 1L con agua ASTM.

NOTA: Las soluciones buffer de acetato de amonio pueden ser purificadas más adelante haciéndolas pasar a través de una columna quelatante a un flujo de 5 mL/min.

Ácido nítrico concentrado.

Ácido oxálico hidratado 0,2 M

3.6.3.3.3.3 Digestión de las Muestras

A 100mL de muestra, agregar 2mL (1-1) de ácido nítrico. Colocarlo en la parrilla para evaporar la solución. La parrilla debe estar colocada en una campana y dejar evaporar a una temperatura no mayor a 85ºC. El vaso debe ser cubierto con un vidrio de reloj para evitar la contaminación de la muestra con el ambiente de la campana. Reducir el volumen de la alícuota de la muestra a 20 mL.

NOTA: Para un calentamiento apropiado, ajustar el control de temperatura de la parrilla de forma tal que un vaso descubierto que contenga 50mL de agua puesto en el centro de la parrilla pueda ser mantenido a una temperatura de aproximadamente pero no mayor a 85ºC (Una vez que se coloca el vaso cubierto con el vidrio de reloj la temperatura aumentará a aproximadamente 95ºC)

Dejar enfriar el vaso, y transferir cuantitativamente la muestra a un matraz volumétrico de 100mL y diluir al volumen con agua, tapar y mezclar. Permitir a cualquier material no disuelto reposar toda la noche o centrifugar una porción de la muestra (si después de centrifugar o dejar reposar toda la noche, la muestra contiene sólidos suspendidos, una porción de la muestra debe ser filtrada antes del análisis. Tener cuidado en la filtración para evitar cualquier tipo de contaminación). Debido a los efectos de varias matrices en la estabilidad de las muestras diluidas, todos los análisis deben ser realizados tan pronto como sea posible después de la preparación completa.

Antes de usar el sistema de preconcentración debe ser limpiado y descontaminado usando ácido oxálico 0,2M. Colocar aproximadamente 500mL de ácido oxálico 0,2M en los contenedores de la solución eluyente y correr la muestra con ácido oxálico 0,2M usando la bomba de la muestra a un flujo de 3 – 5mL/min. Con el sistema de preconcentración desconectado del ICP-MS, usar el programa de secuencia como se muestra en la tabla siguiente para limpiar el sistema completo con ácido oxálico. Repetir la limpieza 3 veces. Programa de Secuencia de Bombeo de Eluyente para la Preconcentración de Elementos Traza.

Tiempo (min)

Flujo (mL/min)

Eluyente Válvula A,

B Válvula C



189

0,0 4,0 1M Acetato de Amonio Abierta Abierta

4,5 4,0 1,25M Ácido Nítrico Abierta Abierta

5,1 1,0 1,25M Ácido Nítrico Cerrada Abierta

5,5 1,0 1,25M Ácido Nítrico Cerrada Cerrada


8,0 4,0 1M Acetato de Amonio Cerrada Abierta


11,0 4,0 1M Acetato de Amonio Cerrada Abierta

12.5 0.0 Cerrada Abierta

Repetir la secuencia usando ácido nítrico 1,25M, y después usando agua ASTM en lugar del ácido oxálico 0,2M. Enjuague los recipientes con agua ASTM, llénelos con los reactivos designados y corra la secuencia de la tabla anterior. Inicie el ICP-MS y reconecte el sistema de preconcentración. Con las válvulas A y B cerradas y la válvula C abierta, corra la muestra hacia los desechos con la bomba (P4) por 4 minutos a un flujo de 4mL/min. Encienda la bomba acarreadora (P3) y bombeé ácido nítrico 1% al nebulizador del ICP-MS a un flujo de 0,8 – 1,0mL/min. Encienda la bomba del buffer de acetato de amonio 2M (P2) a un flujo de 1,0mL/min. La preconcentración de la muestra puede ser corrida a través de una secuencia de bombeo de eluyente como en la tabla anterior. El tiempo exacto de esta secuencia debe ser modificada de acuerdo al volumen interno y al hardware. Inyección de la muestra – con las válvulas A, B y C abiertas, correr la muestra hacia la columna usando acetato de amonio 1M por 4,5min a 4,0mL/min. Los analitos son retenidos en la columna mientras que la mayor parte de la matriz es llevada a los desechos, Elusión de los analitos – cierre las válvulas A y B y comience la elusión de los analitos b bombeando ácido nítrico 1,25M a través de la columna a 4,0mL/min; cierre la válvula C y bombeé los analitos eluídos al ICP-MS a 1,0mL/min, e inicie el software. Reacondicionamiento de la columna – abra la válvula C para dirigir el eluyente de la columna hacia los residuos, y bombeé ácido nítrico 1,25 M, acetato de amonio 1 M, ácido nítrico 1,25 M y acetato de amonio 1 M alternadamente a través de la columna a 4,0 mL/min. Durante este proceso, la siguiente muestra puede ser cargada usando la bomba P4. Repetir la secuencia para cada muestra a ser analizada. Al final de las corridas analíticas, dejar la columna llena del buffer de acetato de amonio 1M hasta el siguiente uso.

NOTA: Las muestras que hayan sido concentradas de más, deben ser diluidas con HNO3 al 1% y reanalizadas.

3.6.3.3.4 Suelos



190

3.6.3.3.4.1 Equipo y Materiales Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método analítico. Todo el material volumétrico utilizado en éste método debe ser clase “A” o estar verificada su calibración.

3.6.3.3.4.1.1 Equipo








210ºC.




Balanza analítica con precisión de 0,1 mg.





Matraz Erlenmeyer de 125 mL. 3.6.3.3.4.2 Reactivos y Materiales de Referencia A menos que otra cosa se indique, los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS

grado reactivo





191


Ácido Fluorhídrico concentrado, HF SIGMA-ALDRICH o equivalente.

Peroxido de Hidrogeno (H2O2)


3.6.3.3.4.3.1 Lavado de vasos

Agregar 25 mL de agua desionizada a cada uno de los vasos de digestión., adicione 3 mL de ácido nítrico concentrado a cada uno de los vasos, tape el vaso. Deposite los vasos en el carrusel del microondas Lave de acuerdo al programa


1

1 a 3 vasos 300 W

100 10:00 100 200ºC 5:00 4 a 6 vasos 600 W

7 a 14 vasos 1200 W

Permita que los vasos se enfríen al menos 5 minutos en la unidad de microondas y destape cuidadosamente y enjuague con agua desionizada.

3.6.3.3.4.3.2 Digestión ácida por microondas

Mezcle bien la muestra, pese aproximadamente 0,5 g en un vaso de digestión,

adicione 9 mL de ácido nítrico concentrado y 1 mL de ácido clorhídrico

concentrado. Si ocurre una reacción vigorosa espere a que la reacción se detenga

antes de cerrar los vasos. Cierre los vasos y deposítelos en el carrusel del

microondas.

PRECAUCIÓN: Pueden liberarse óxidos de nitrógeno, verifique que el sistema de

ventilación funcione adecuadamente. La digestión puede ocasionar una reacción

vigorosa. Si esto ocurre espere a que los vasos se enfríen antes de taparlos.

PRECAUCIÓN: Cuando la digestión de muestras contienen volátiles o

componentes orgánicos que se oxiden fácilmente, use inicialmente no más de 0,10

g de muestra y observe la reacción antes de tapar los vasos. Si ocurre una reacción

vigorosa espere a que la reacción cese antes de tapar los vasos. Si no ocurre una

reacción aparente, puede usar un peso de muestra de 0,25 g.

La distribución de los vasos en el carrusel debe estar siempre en equilibrio. El

propósito de los blancos de muestras es para darle un balance a la energía

seleccionada.

El programa de microondas debe ser de acuerdo a las recomendaciones del

fabricante. La secuencia de las muestras debe ir de 175ºC 4ºC en 5 minutos y

mantener esta temperatura por 5 minutos.

ETAPA POTENCIA % RAMPA PSI ºC MAN



192

1

1 a 3 Vasos 300 W 4 a 6 Vasos 600 W

7 a 14 vasos 1200 W

100

05:00 250

175

5:00

Al final del programa del microondas permita que los vasos se enfríen al menos

por 5 minutos en la unidad antes de remover el carrusel, para evitar posibles daños

en el sistema de ventilación de los vasos. Las muestras pueden enfriarse fuera de

la unidad, si desea que el enfriado sea más rápido puede meterlos a refrigeración.

Asegúrese que este frío para no perder mercurio.

Complete la preparación de las muestras destapando cuidadosamente cada vaso

dentro de la campana de extracción. Lleve la muestra a un volumen final de 50

mL, si la muestra digerida contienen partículas las cuales pueden obstruir el

nebulizador, pase la muestra a través de filtro Whatman No. 41 y transfiera a un

matraz Erlenmeyer.


VER PROCEDIMIENTO PARA SUELOS


Equipo y Materiales


Reactivos y Materiales de Referencia


Digestión de las muestras

Lavado de vasos Agregar 25 mL de agua desionizada a cada uno de los vasos de digestión., adicione 3 mL de ácido nítrico concentrado a cada uno de los vasos, tape el vaso. Deposite los vasos en el carrusel del microondas Lave de acuerdo al programa


1

1 a 3 vasos 300 W

100 10:00 100 200ºC 5:00 4 a 6 vasos 600 W

7 a 14 vasos 1200 W

Permita que los vasos se enfríen al menos 5 minutos en la unidad de microondas y destape cuidadosamente y enjuague con agua desionizada.

Digestión ácida por microondas



193

Es necesario considerar el contenido energético de la muestra, pues dependiendo de

ello se decide la cantidad a pesar. De 0.5 a 1g de muestra se pesa en un vaso de

digestión, adicione 8 mL de ácido nítrico concentrado debe adicionarlo escurriendo

por las paredes gota a gota hasta que ya no ocurran reacciones violentas. Algunos

alimentos especialmente los que contienen alto contenido de azucares pueden

reaccionar con el acido nítrico durante varios minutos Si ocurre una reacción

vigorosa coloque los vasos en una campana de extracción y espere a que la

reacción se detenga.

Adicione 1 mL de H2O2. Cierre los vasos y deposítelos en el carrusel del

microondas.

PRECAUCIÓN: Pueden liberarse óxidos de nitrógeno, verifique que el sistema de

ventilación funcione adecuadamente. La digestión puede ocasionar una reacción

vigorosa. Si esto ocurre espere a que los vasos se enfríen antes de taparlos.

La distribución de los vasos en el carrusel debe estar siempre en equilibrio. El

propósito de los blancos de muestras es para darle un balance a la energía

seleccionada.

El programa de microondas debe ser de acuerdo a las recomendaciones del

fabricante. La secuencia de las muestras debe ir de 175ºC 4ºC en 5 minutos y

mantener esta temperatura por 5 minutos.

POTENCIA RAMPA CONTROL PRESION TEMPERATURA DURANTE

1200 W

25 min

800 PSI

200 ºC

15 min

Al final del programa del microondas permita que los vasos se enfríen al menos

por 5 minutos en la unidad antes de remover el carrusel, para evitar posibles daños

en el sistema de ventilación de los vasos. Las muestras pueden enfriarse fuera de

la unidad, si desea que el enfriado sea más rápido puede meterlos a refrigeración.

Asegúrese que este frío para no perder mercurio.

Complete la preparación de las muestras destapando cuidadosamente cada vaso

dentro de la campana de extracción. Lleve la muestra a un volumen final de 25

mL, si la muestra digerida contienen partículas las cuales pueden obstruir el

nebulizador, pase la muestra a través de filtro Whatman No. 41 y transfiera a un

tubo para su análisis por ICP/AES.




Balanza analítica

Parrilla de calentamiento

Vaso de pp de 125 mL

Vidrio de reloj



194

Pipeta de 5 y 10 mL

Matraces volumétricos de 5, 10 y 1000 mL.


Los disolventes que requiere el método deben ser de alta pureza, a menos que otra cosa se

indique.

Ácido Nítrico conc.

Ácido Preclórico conc.

Ácido sulfúrico conc.

Agua Desinoizada


Al momento de la toma de muestra se le debe adicionar un anticoagulante como el heparin. Se congela hasta el momento de tratamiento. En un vaso de pp colocar 10 g de sangre, agregar 10 mL de HNO3:HClO4:H2SO4 (3:1:1) y calentar a 110ºC por 2 horas en parrilla. Incrementar la temperatura a 250ºC hasta reducir el volumen a 1 mL, dejar enfriar y llevar a un volumen final de 10 mL con agua desionizada; en este momento la muestra esta lista para su análisis por ICP/AES.


3.6.3.3.8.1 Equipo y Materiales Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método analítico. 3.6.3.3.8.2 Reactivos y Materiales de Referencia

Agua desionizada

Agua doblemente destilada

Ácido nítrico concentrado SUPRAPUR o equivalente

Ácido perclórico concentrado SUPRAPUR o equivalente

Peroxido de hidrogeno SUPRAPUR o equivalente 3.6.3.3.8.3 Digestión de las muestras Una alícuota de 2mL de leche se pesa con exactitud y se mezcla con 7mL de ácido nítrico, se calienta a 110ºC hasta alcanzar un volumen de 1mL. Una vez que la muestra se ha enfriado, se adicionan 2mL de ácido perclórico concentrado y nuevamente se somete la mezcla a calentamiento hasta que el líquido se torna café oscuro.



195

Se deja enfriar la muestra, posteriormente se añaden 2mL de peroxido de hidrogeno al 30%. La mezcla se calienta a 70ºC hasta que esta se aclara y llega a un volumen de 1mL aproximadamente. Cuando se ha enfriado la mezcla, esta se transfiere cuantitativamente a un tubo de ensayo calibrado y se lleva a un volumen de 10mL con agua doblemente destilada y agua desionizada. La determinación de los metales en la muestra se realiza mediante ICP/AES.



3.6.4.1.1 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de metales exceptuando mercurio en los extractos digeridos de aguas naturales, residuales municipales e industriales, así como suelo, residuos, sedimentos, organismos, tejidos y alimentos, los extractos y su purificación depende de la matriz analizada, se deben seguir los procedimientos de digestión adecuados para cada matriz. 3.6.4.1.2 Limitaciones –Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión

de analistas expertos en el uso de ICP/AES y en la interpretación de sus resultados. Cada

analista debe demostrar la habilidad para generar resultados aceptables con este método.

3.6.4.2 Resumen .Para un análisis de elementos totales, los analitos son solubilizados o digeridos utilizando el método de preparación de muestras apropiado, quedando esta lista para ser analizada por ICP-AES utilizando un instrumento de plasma axial, dicho instrumento mide espectros de emisión característicos por espectrometría óptica. Los espectros son dispersados por una rejilla de difracción y las intensidades de las líneas de emisión son monitoreadas por dispositivos fotosensitivos.


Sólo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso común en el laboratorio analítico.


calibración.

3.6.4.3.1 Equipo

Espectrómetro de emisión de plasma acoplado inductivamente; controlado

totalmente a través de una computadora, con capacidad de realizar corrección de

fondo, con generador de radiofrecuencia de 27,12 MHz a una potencia de 2,0 KW,

de autosintonía con cristal controlado, Thermo ICP 6500 o equivalente con

automuestreador.

Balanza analítica con sensibilidad de 0.1 mg, para el pesado de sólidos, preparación

de estándares y reactivos.



196


Pipetas volumétricas de diferentes capacidades.

Material de laboratorio – Todo el material de laboratorio (vidrio, cuarzo,

polietileno, PTFE, FEP, etc.) debe estar suficientemente limpio para cubrir los

objetivos del método. Existen varios procedimientos para la limpieza del material

incluyendo el lavado con detergente, enjuague con agua de la llave, remojarlos por

4 horas o mas en 20% (v/v) de ácido nítrico o una mezcla de nítrico – clorhídrico,

lavar con agua y almacenar en lugar limpio.

Matraces volumétricos de 10, 25, 50 y 100 mL, probetas graduadas, embudos.


A menos que se indique otro grado, los reactivos que se requieren en el método deben ser tipo ACS

(American Chemical Society) grado reactivo analítico.

3.6.4.4.1 Reactivos

Agua – A menos que otra cosa se indique, el agua de referencia debe cumplir con las siguientes características:

Resistividad: megohm-cm a 25°C: 0.2 Mínima

Conductividad: S/cm a 25°C: 5.0 Máxima pH: 5.0 a 8.0 Purificada por desionización

Ácido clorhídrico concentrado (HCl) libre de los elementos a analizar (puede ser

grado Suprapur o equivalente).

Ácido nítrico concentrado (HNO3) libre de los elementos a analizar (puede ser


Ácido nítrico al 5%:

3.6.4.4.2 Materiales de referencia Los patrones pueden ser estándares puros o adquirirse como disoluciones certificadas (patrones de referencia). Mezcla Analítica con trazabilidad a NIST para ICP “ICP SOLUTION STOCK” SOLUCION

A Marca High-Purity o equivalente, que contenga los siguientes elementos en una

concentración de 1000 mg/L ± 0,5% en HNO3 al 4% + Tr HF : Arsénico, Aluminio,

Antimonio, Bario, Berilio, Boro, Bismuto, Cadmio, Cromo, Cobalto, Cobre, Hierro, Plomo,

Litio, Manganeso, Níquel, Selenio, Silicio, Estroncio, Talio, Vanadio y Zinc y una

concentración de 1000 g/mL ± 0,5% en HNO3 para Calcio, Magnesio, Potasio y Sodio.

Disoluciones Patrón



197

Diluya la Solución Stock 1:10 con ácido nítrico al 5% para tener 100 mg/L de los analitos.


Elabore una curva de calibración con ácido nítrico al 5% con varios niveles de

concentración, las concentraciones deben de estar de acuerdo al intervalo de trabajo

requerido, utilice los patrón mencionados en el inciso anterior para tener presentes

todos los analitos de interés en disolución. A continuación se indican las

concentraciones necesarias para la curva de calibración:

Conc. Inicial

mg/L

Vol. estándar

(mL)

Vol de Aforo

(mL)

Conc. Final**

mg/L

10 0,5 250 0,02

10 2,0 250 0,08

10 5,0 250 0,2

100 1,0 250 0,4

100 5 250 2,0

100 10 250 4,0

100 25 250 10,0

*La concentración final de K, Ca, Mg y Na es el valor obtenido multiplicado por 10 ya que la concentración inicial de estos

elementos es 10000 mg/L


Cada laboratorio que utilice este método está obligado a operar un programa de control de calidad (CC) formal. Los requerimientos mínimos de este programa consisten en una demostración inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con las especificaciones de desempeño del método, además realizar análisis continuos de muestras de control de calidad (MCC) para demostrar la precisión y exactitud continuas y el análisis de blancos. El desempeño del laboratorio debe compararse con los criterios aquí establecidos, con objeto de determinar si los resultados de los análisis cumplen con las especificaciones de desempeño del método. El analista debe hacer una demostración inicial de su habilidad para generar una exactitud y precisión aceptables por este método.

Cada vez que se realice una modificación al método o que se cambie el analista responsable de llevar a cabo está determinación, el analista designado debe repetir la validación del método, si el cambio va a afectar el límite de detección del método (LDM), el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o más bajo que el anterior para los analitos de interés. No se permite el uso de técnicas determinativas alternativas y cambios que degraden la ejecución del método. Si se utiliza una técnica analítica que no sea la especificada en este método, dicha técnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las de la técnica descritas en este documento para el analito de interés. Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a este método. Estos registros deben de incluir lo siguiente:



198

- La justificación por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al método para ese analito. - Los nombres, títulos, direcciones y número de teléfono de los analistas que ejecutaron los análisis y modificaciones y el encargado de control de calidad que presenció y verificó los análisis y sus modificaciones. - Los resultados de todas las pruebas de CC del método modificado comparadas con el método original, dichos datos deben de incluir todos los parámetros mencionados en la sección de desempeño del método. - La información escrita en las bitácoras tanto del equipo como del analista, deben incluir los siguientes datos:

Identificación de la muestra Número del lote analítico en el cual se analizó la muestra Fecha del análisis Procedimiento cronológico utilizado Cantidad de muestra utilizada Número de muestras de control de calidad analizadas en el lote Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medición Registros de bitácoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de

información Información cruda reportada por los equipos o por los analistas Evidencia de la aceptación o rechazo de los resultados del lote analítico.

3.6.4.5.1 Verificación del equipo Verifique que el equipo se encuentra en óptimas condiciones operativas, para lo cual debe

encender y permitir que se estabilice térmicamente por 30 min. Y realizar la verificación

correspondiente de acuerdo a los instructivos de verificación de la calibración de acuerdo

al equipo a utilizar.

3.6.4.5.2 Verificación de la calibración inicial La calibración inicial debe tener un blanco y 4 estándares mínimo y debe cumplir con un coeficiente de correlación >= 0.997. Enseguida se analiza un estándar para verificar la estandarización y este debe de ser el punto medio de dicha estandarización y se debe de tener un por ciento de recobro de 90-110%.

3.6.4.5.3 Verificación de contaminación de reactivos

Blanco de reactivos (BR) – Prepare un blanco de reactivos a la misma concentración de

ácido que las muestras para analizar, procese el blanco de reactivos al igual que las

muestras y verifique que el blanco de reactivos sea menor al Límite de detección del

método (LDM). En caso de no cumplir, verifique los reactivos, prepare nuevamente el

blanco de reactivos y reprocese el lote analítico con los nuevos reactivos.

3.6.4.5.4 Verificación del Lote Analítico



199

La verificación del proceso analítico se realiza a través del análisis de la muestra de control de calidad (MCC), La MCC debe provenir de una fuente externa, diferente a los estándares de calibración, preparada con las mismas mezclas de ácidos que los estándares de calibración y llevada a través de todo el proceso de digestión y análisis que las muestras. La MCC debe tener un porcentaje de recuperación de 80-120% .

3.6.4.5.5 Verificación de interferencias de matriz Se utilizan muestras adicionadas y adicionadas duplicadas. La muestra adicionada se incluye en el lote analítico, el criterio de aceptación es de 75-125% de recobro, en caso de no cumplir, reanalice nuevamente, si persiste el problema reporte como interferencia de matriz.

3.6.4.5.6 Verificación de la estabilidad de la Curva de Calibración. Utilice el punto medio de las disoluciones con que se estandarizó el método para verificar la estabilidad de la estandarización. Esta disolución debe ser analizada cada 10 muestras y al final de la corrida. El criterio de aceptación es de 90-110 % de recobro. sí no es así, se corrige el problema y se reanalizan las muestras a partir de la siguiente después del última verificación de la estabilidad de la estandarización

3.6.4.5.7 Verificación de estándares surrogados No aplica 3.6.4.5.8 Verificación de estándares internos

No aplica

3.6.4.5.9 Control de Calidad Estadístico – En esta sección se especifica como debe realizarse el control de calidad estadístico obligatorio para este método:

Se deberán preparar la MCC de una fuente externa al laboratorio o ser preparada de una fuente diferente a la utilizada en la curva de calibración, las concentración debe corresponder al rango de trabajo del método.


3.6.4.5.9.1 Gráficas de Control de Exactitud – El laboratorio debe elaborar y mantener actualizadas las gráficas de control de exactitud para cada lote analizado a partir de la demostración inicial de desempeño. Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deberá graficarse

y deberá estar dentro de los límites de control superior e inferior ( 3s).

Si un valor de exactitud es mayor a 3s, deberán rechazarse todos los resultados del



200

lote analítico, determine las causas y corrija los errores, documente adecuadamente las

incidencias y acciones correctiva y deberá repetirse el análisis del lote en cuestión.

3.6.4.5.9.2 Gráficas de Control de Precisión – El laboratorio debe elaborar y mantener actualizadas las gráficas de control de precisión para cada lote analizado a partir de la demostración inicial de desempeño




3.6.4.5.10 Validación de modificaciones del método o de métodos alternos – Para validar las modificaciones que se efectúen a este método o para la utilización de métodos alternos deberá seguirse el siguiente procedimiento:

Si se realizan modificaciones al presente método, deberán revalidarse.

Si se utiliza un método alterno cuya fuente sea un método estandarizado por alguna Institución de carácter internacional o reconocida internacionalmente (e. g. ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment Canada, etc.) siga el mismo procedimiento de validación presentado. Si se utiliza algún método no estandarizado, deberá evidenciarse, además de los parámetros mencionados en este método, los parámetros de Robustez, Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante estudios interlaboratorio.

Verifique diariamente el desempeño de todo el sistema analítico utilizando los datos recolectados de análisis de blancos reactivos, solución verificadora del desempeño del laboratorio. 3.6.4.5.11 Composición del lote analítico

1.- Blanco de calibración 2.- Estandarización 3.- Verificación de la calibración 3.- Blanco de Reactivos 4.- Muestra de Control de Calidad (MCC) 5.- Muestra real No. 1 6.- Muestra duplicada



201

7.- Muestra fortificada 8.- Muestras reales (5) 9.- Muestra de Verificación de la Calibración Continua


Para el seguimiento de las especificaciones de aceptación y rechazo consultar las siguientes tablas:

Verificación del equipo:


Lo que el fabricante recomiende Ver instructivo de de equipo correspondiente

Verificación de la estandarización


Correlación >0.997

Verificación de la calibración


CCV ± 10%

Verificación de contaminación de reactivos


Blanco de reactivos < limite de detección

Verificación del proceso analítico


Muestra de control de calidad +- 20 %R

Verificación de interferencias de matriz


Muestras adicionadas +- 20 %

Verificación de la estabilidad de la estandarización


Estándar de verificación continua +- 10 %


Dado que cada instrumento y modelo tienen diferentes especificaciones, siga las

instrucciones del fabricante para su calibración, ver instructivo de equipo

correspondiente.



202

La calibración del equipo se realiza conforme a las instrucciones del fabricante, sobre cada una de las

longitudes de onda de cada elemento a analizar.

La estandarización diaria se prepara con un blanco así como un mínimo de 4 estándares, esta curva se

verifica con el estándar de verificación continúa de la curva de calibración, que debe ser de una

concentración equivalente al punto medio de la curva. El porcentaje de recuperación debe ser de 90-

110%.


Si se utiliza regresión lineal por mínimos cuadrados, deberá obtener el factor de correlación “r2” para cada analito, el cual deberá ser mayor o igual a 0.997 si “r” es menor a este valor, la curva de calibración no es lineal y deberá verificarse la preparación de los estándares de calibración, el ICP/AES y repetir la calibración.


3.6.4.7.1 Análisis de los extractos de las muestras.

Antes de la estandarización diaria del instrumento, inspeccione el sistema de introducción

incluyendo el nebulizador, antorcha, tubo central de la antorcha por posible incrustación de

sales, suciedad que restrinjan el flujo de la disolución y afecten el desempeño del

instrumento. Limpie el instrumento cada vez que sea necesario.

El instrumento debe estabilizarse por alrededor de 30 minutos antes de la calibración y

análisis y lleve a cabo la calibración óptica.

Para la operación de rutina diaria siga las instrucciones de encendido, análisis, apagado del

equipo que se indica en el instructivo de operación del equipo a utilizar. Estandarice el

equipo usando la curva de calibración.

Después de cumplir con los requerimientos iniciales de este método, analice las muestras

bajo las mismas condiciones de operación de la rutina de calibración con un enjuague entre

cada una de las muestras y blancos.

Condiciones instrumentales:

RF power: 1100-1500 watts

Flujo de enfriamiento: 15-19 L/min

Flujo de nebulizacion: 0.6-1.5 L

Velocidad de bomba: 1-1.8 mL/min

3.6.4.7.2 Identificación de las Analitos

La determinación cualitativa de cada elemento de este método está basada en la intensidad

de la señal captada por el detector a la longuitud de onda seleccionada para cada elemento.

3.6.4.7.3 Cálculos



203


El volumen total de la muestra se calcula de las lecturas de flujo periódico

(Magnehelic) con la siguiente ecuación:

1000

...21 T

n

QQQmV n

Donde:

V(m)= Volumen total de la muestra (m3).

Q1,Q2,.,Qn= Flujos determinados al inicio, final y puntos intermedios durante el tiempo

muestreado (L/minuto).

n= Número de datos promediados.

T= Tiempo de muestreado (minutos).

El volumen de muestreado debe convertirse a condiciones estándar (760 mm Hg y

25ºC) con la siguiente ecuación.

at

APmVsV

273

298

760

Donde:

V(s)= Volumen total de la muestra a 25ºC y 760 mm Hg (m3).

V(m)= Volumen total de flujo a condiciones ambientales (m3).

P(A)= Presión ambiental (mm Hg).

t(a)= Temperatura ambiental (ºC).

La concentración del elemento en la muestra se calcula con la siguiente ecuación:

sViV

EVAAC

*

*

Donde:

C(A)= Concentración del analito en la muestra (µg/m3).

A= Cantidad calculada de material analizado, basada en la curva de calibración para

estándares analizados (nanogramos).

V(i)= Volumen inyectado del extracto (µL).

V(E)= Volumen final del extracto (mL).

V(s)= Volumen total de la muestra de aire corregido a condiciones estándar (m3).

Determine la concentración de compuestos individuales en la muestra. Informe los resultados en µg/m

3a condiciones STD.

Todos los datos de control de calidad obtenido deberán ser informados junto con los

resultados de la muestra.

2.1.1. 3.6.4.7.3.2 AGUA



204

Utilice la curva de calibración para calcular directamente la concentración de cada

analito en la muestra; este valor debe ser afectado por el factor de preparación de

muestra:

concentración = Conc. obtenida en equipo * FC

mtravolmL

aforovolmL

..45

..50

No reporte concentraciones por debajo del límite de detección. Reporte todos los valores obtenidos de CC junto con los resultados del análisis. Los resultados deben reportarse con un número apropiado de cifras significativas. La

experiencia indica que tres cifras significativas pueden ser usadas para concentraciones

por arriba de 99 µg/L, dos cifras significativas para concentraciones entre 1-99 µg/L y

una cifra significativa para concentraciones menores a 1 µg/L.

3.6.4.7.3.3 SUELOS Calcule la concentración utilizando la siguiente ecuación:

P

VC

kg

g *

Donde:

C= Concentración en el extracto digerido (µg/L)

V= Volumen del extracto digerido (L)

P= Peso de la muestra digerida

Reporte los resultados del análisis en µg/Kg con tres cifras significativas y aclarando si son en Base Seca o Base Húmeda. Si reporta en base seca debe considerar el valor de la humedad para obtener el resultado.

3.6.4.7.3.4 SEDIMENTOS (MARINOS Y EPICONTINENTALES)

VER CALCULOS PARA SUELOS

3.6.4.7.3.5 ALIMENTOS PROCESADOS, SIN PROCESAR, TEJIDOS, ORGANISMOS,

P

VC

kg

g *

C= Concentración en el extracto digerido (µg/L)

V= Volumen del extracto digerido (L)

P= Peso de la muestra digerida

Todos los factores de dilución o concentración deben ser considerados. No reporte concentraciones por debajo del límite de detección.



205

Reporte todos los valores obtenidos de CC junto con los resultados del análisis. Reporte los resultados de análisis en µg/kg con tres cifras significativas.



3.6.4.8.1 Límite de Detección: Ver Tablas 3 y 4. 3.6.4.8.2 Límite Práctico de Cuantificación: Ver Tablas 3 y 4 3.6.4.8.3 Intervalo de Trabajo: Ver Tablas 3 y 4 3.6.4.8.4 Precisión del Método: Ver Tablas 3 y 4 3.6.4.8.5 Exactitud del Método: Ver Tablas 3 y 4

2.1.3. 3.6.4.9 Tablas y Figuras

TABLA 1 LONGITUDES DE ONDA UTILIZADAS RECOMENDADAS Y LIMITES DE DETECCION

INSTRUMENTALES ESTIMADOS (según EPA 6010C 2000)

ELEMENTO

2.1.4. SIMBOLO

LONG. ONDA

LDI ESTIMADOS**

g/L

Plata Ag 328,07 4,7

Arsénico As 193,70 35

Bario Ba 455,40 0,87

Berilio Be 313,04 0.18

Cadmio Cd 226,50 2.3

Níquel Ni 231,60 x 2 10

Plomo Pb 220,35 28

Selenio Se 196,03 50

Talio Tl 190,86 27

Vanadio V 292,40 5,0 1) Las longitudes de onda (nm) listadas son las recomendadas para obtener una adecuada sensibilidad, Cuando es (x 2) es de segundo orden. Otras longitudes de onda pueden ser utilizadas (en caso de interferencias). 2) Los límites de detección instrumental estimados muestran una guía sobre los límites del instrumento, los límites de detección del método son dependientes del tipo de matriz de las muestras. 3) Altamente dependiente de las condiciones y posición del plasma.



206

TABLA 2 FACTORES DE CORRECCIÓN INTERELEMENTO.

INTEREFERNCIA POR FIERRO

Metal Factor de Corrección

Ag 0,000540

As 0,000663

Cd 0,000029

Cr 0,0007340

Pb 0,0003940

Se 0,0024000

INTERFERENCIA POR ALUMINIO

Metal Factor de Corrección

As 0,0005

Pb 0,0004

Se 0,0012

Nota: Los datos anteriores son proporcionados por el fabricante del instrumento



207

TABLA 3 PRECISIÓN Y EXACTITUD INSTRUMENTAL PARA SOLUCIONES ACUOSAS.

Elemento Concentración

Media (mg/L)

N b DSR b Precisión c

(%)

As 14,7 7 6,4 99

Ba 3,66 7 3,1 99

Be 3,78 8 5,8 102

Cd 3,61 8 7,0 97

Pb 14,4 7 5,9 97

Ni 3,70 7 5,7 100

Se 15,3 8 7,5 104

Ag 3,69 6 9,1 100

Tl 15,1 7 8,5 102

V 3,51 8 6,6 95

Los valores son independientes de la preparación de las muestras. (b)= Numero de mediciones para la media y la desviación estándar relativa. (c)= La precisión esta expresada como el porcentaje del valor nominal para cada analito en soluciones acidificada de multielementos. NOTA: Pruebas realizadas por varios laboratorios.



208

TABLA 4 PRECISIÓN Y EXACTITUD PARA ICP

Elemento Valor

(g/L)

Conc. Media

(g/L)

DSR (%)

A (%)

Valor

(g/L)

Conc. Media

(g/L)

DSR (%)

B (%)

Valor

(g/L)

Conc. Media

(g/L)

DSR (%)

C (%)

Be 750 733 6,2 98 20 20 9.8 100 180 176 5,2 98

V 750 749 1,8 100 70 69 2,9 99 170 169 1,1 99

As 200 208 7,5 104 22 19 23 86 60 63 17 105

Cd 50 48 12 96 2,5 2,9 16 116 14 13 16 93

Ni 250 245 5,8 98 30 28 11 93 60 55 14 92

Pb 250 236 16 94 24 30 32 125 80 80 14 100

Zn 200 201 5,6 100 16 19 45 119 80 82 9,4 102

Se 40 32 21,9 80 6 8,5 42 142 10 8.5 8,3 85

A= Precisión de muestra No. 1 B= Precisión de muestra No. 2 C= Precisión de muestra No. 3 DSR= Desviación estándar relativa La precisión es expresada como la concentración media dividida entre el valor verdadero de la concentración 100 veces.

NOTA: Pruebas realizadas por varios laboratorios.



209

3.7 MERCURIO

Existen 2 técnicas analíticas para analizar mercurio en muestras ambientales, la Espectrofotometría de Absorción Atómica con Vapor frío y la Espectrofotometría de Fluorescencia Atómica con Vapor Frío, la primera es una técnica utilizable para matrices de aguas, suelos, sedimentos, organismos y alimentos, la segunda es una técnica utilizable en aire ambiente principalmente, la ventaja es que es un método de medición directa y es muy sensible (en el orden de ng/m3), en la actualidad se han desarrollado equipos automáticos que además pueden medir cantidades traza de mercurio en todas las matrices sin procesamiento de muestra alguno, lo que representa grandes ventajas al elevar considerablemente la sensibilidad y eliminar las interferencias y pérdidas del analito por el procesamiento de las muestras. En este documento se presentan los métodos de AAEVP para todas las matrices de interés excepto aire ambiente, en esta matriz la medición se deberá realizar por medición directa con un equipo EFAVP para aire ambiente, este método aún no está estandarizado por lo que quien lo realice deberá validarlo. No se debe utilizar ICP/AES para analizar mercurio por las bajas sensibilidades que tiene esta técnica para este analito (en el orden de mg/kg).



Ninguno


3.7.1.1 Propósito: La espectrometría de absorción atómica con vapor frío (AAEVF) es aplicable para la determinación de concentraciones de µg/kg para mercurio en matrices sólidas y líquidas. Se requiere una digestión ácida previa al análisis y filtración para analizar los metales totales a analizar. De acuerdo a la matriz analizada se utilizan diferentes métodos de digestión para solubilizar los metales en las muestras antes de su análisis instrumental. 3.7.1.2 Analitos –El método es aplicable a los siguientes analitos:



210

Metal # CAS

Mercurio 7439-97-6

3.7.1.3 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de metales en las siguientes matrices ambientales:

Suelos

Sedimentos Marinos


Aguas Marinas



Aguas Subterráneas


Sangre

Leche Materna 3.7.1.4 Limitaciones – Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de

analistas expertos en el uso de AAEVF en la interpretación de sus resultados. Cada analista debe

demostrar la habilidad para generar resultados aceptables con este método.

3.7.2 Resumen

Una porción bien homogenizada de una muestra líquida o sólida es pesada con exactitud para su procesamiento. Para el análisis de Mercurio total, la muestra es solubilizada o digerida utilizando el método de preparación de muestras apropiado, quedando esta lista para ser analizada por AAEVF utilizando un espectrofotómetro de absorción atómica con el aditamento para procesar muestras por vapor frío.

3.7.3 Procedimientos de Digestión de muestras

3.7.3.1 Interferencia Generales

3.7.3.1.1 Se ha reportado interferencias de cobre; sin embargo concentraciones de cobre de 10 mg/L no tiene efectos en el recobro de mercurio sobre muestras adicionadas.

3.7.3.1.2 Aguas marinas o muestras con alto contenido de cloro requiere la adición de

permanganato ya que durante la oxidación los cloruros pasan a cloro libre el cual también absorbe radiación a 253.7 nm.

3.7.3.1.3 Algunos compuestos orgánicos volátiles pueden absorbe a la misma longitud de

onda causando interferencias.

3.7.3.2 Seguridad general La carcinogenidad y toxicidad de los químicos utilizados en este método no ha sido determinadas con precisión; de todas maneras; cada sustancia química debe ser tratada como potencial peligro a la salud. La exposición a estas sustancias químicas debe ser



211

reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice monitoreos de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y que dichos resultados estén disponibles para los analistas. La acidificación de las muestras que contienen materiales reactivos puede ocasionar la liberación de

gases tóxicos, como cianuros o sulfuros. La acidificación debe realizarse en una campana de

extracción.

Los ácidos y bases concentradas causan severas quemaduras e irritaciones en la piel. Debe utilizarse

ropa protectora tal como: Batas, guantes y lentes de seguridad cuando se manejan estos productos

químicos.




Solo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso común en el laboratorio analítico.

3.7.3.3.1.1.1 Equipo

Bombas y sistema de medición de flujo.

Congelador para el almacenamiento de muestras de partículas de Hg a -40 ºC

Balanza analítica: La sensibilidad de la balanza analítica debe ser de 0.01 mg. La cámara de pesado debe estar diseñada para que pueda ser introducido un filtro sin doblar








210ºC.





212

Portafiltros de teflón de 47 mm de entrada cerrada para fase-vapor Hg y entrada

abierta para fase-partículas






Matraz Erlenmeyer de 125 mL

Filtros de fibra de vidrio 47 mm

Termómetro de inmersión



grado reactivo


Acetona



Acido Fluorhídrico concentrado, HF SIGMA-ALDRICH o equivalente

BrCl

Cloruro de estaño II dihidratado (SnCl2 )

Mercurio elemental, liquido de alta pureza.

3.7.3.3.1.3 Procedimiento de digestión de Muestra

3.7.3.3.1.3.1 preparación del filtro previo su muestreo Los filtros de fibra de vidrio se deben calentar en la mufla a 500 ºC por durante una hora. Se deben dejar enfriar y se guardan en un recipiente



213

de teflón (50 mm de diámetro) el cual se debe sellar con cinta teflón. Se guarda en triple bolsa y se guarda hasta que se utilicen. 3.7.3.3.1.3.2 Digestión de las muestras

En un vaso digestor se coloca el filtro que previamente fue cortado en cuatro con 20 mL de HNO3 al 10%, el vaso digestor es colocado en el carrusel del digestor. Las condiciones del digestor son las siguientes: 160ºC a 70 PSI durante 20 minutos. Permita que se enfríen. Lleve el vaso digestor a una campana de extracción y adicione cuidadosamente 0.5 mL de BrCl, esto para oxidar el mercurio en solución a Hg2+

. Tape el vaso mezclando el contenido y permita que reaccione al menos 1 hora.



VER EN METALES Y METALOIDES





3.7.3.3.3 Suelos









3.7.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos animales,




214













El sistema requiere de vasos de digestión de teflón PFA marca CEM modelo

ACV, HP 500 de 100 mL de capacidad o vasos marsxpress de 75 mL de capacidad

o equivalentes, capaces de resistir presiones de 500 psi y una temperatura máxima

de 210ºC.


Los disolventes que requiere el método deben ser de alta pureza, a menos que otra cosa

se indique.

Ácido Nítrico

Peróxido de hidrógeno


Las muestras de sangre se colectaron en tubos de ensayo previamente heparinizados y se

mantienen en congelación hasta su procesamiento..

Las muestras se preparan en un tubo de digestión donde se colocan 0,5 mL de sangre, 5

mL de ácido nítrico concentrado y 1 mL de peróxido de hidrógeno. Se procede a realizar

una digestión asistida por microondas. El tubo se coloca en el microondas y se procesa

de acuerdo a la siguiente secuencia.

Paso 1 2 3 4

T (ºC) 160 190 100 100

TM*(min) 5 1 1 1

T (min) 5 10 10 10



215

*Tiempo de mantenimiento

Terminado el tiempo se deja enfriar, se diluye a 10 mL y se transvasa para su análisis.



Liners de teflón con capacidad de 22mL


Ácido nítrico

Ácido sulfúrico

Ácido clorhídrico

Bromato de Potasio

Bromuro de Potasio

Disolución Stock de cloruro de bromo.- 0.2mol/L en 10mol/L de ácido clorhídrico. Se prepara disolviendo 11g de bromato de potasio y 15g de bromuro de potasio en 180mL de agua y posteriormente se agregan 800mL de ácido clorhídrico concentrado. Las sales de potasio son pre-tratadas mediante el calentamiento en un horno a 200ºC durante 1 hora, a fin de remover cualquier contaminación debida a mercurio. Una vez fría, la solución es diluida a 1L con agua y almacenada en la oscuridad.

Disolución de trabajo.- 0.002mol/L de cloruro de bromo en 0.1mol/L de ácido clorhídrico. Se deriva de la solución stock realizando una dilución 1:100 con agua.


Se coloca la muestra de leche dentro de un liner de teflón de 22mL, se añade una mezcla de ácido sulfúrico y ácido nítrico 70:30 (v/v), se cierra el liner y se coloca en un horno a 70ºC durante mínimo 16 horas. La cantidad de muestra en ácido corresponde a 1g/5mL. Para enfriar la muestra, se coloca el liner en un congelador durante 2 horas, de acuerdo al volumen de muestra que se obtenga, se agrega el mismo volumen de la disolución de cloruro de bromo para convertir el mercurio en Hg2+.Se deja reposar la muestra durante 2 horas a temperatura ambiente.



3.7.4.1.1 Matrices – Este método es aplicable para el análisis mercurio en los extractos digeridos de aguas naturales, residuales municipales e industriales, así



216

como suelo, residuos, sedimentos, organismos, tejidos y alimentos, los extractos y su purificación depende de la matriz analizada, se deben seguir los procedimientos de digestión adecuados para cada matriz. 3.7.4.1.2 Limitaciones –Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión

de analistas expertos en el uso de AAEVF y en la interpretación de sus resultados. Cada

analista debe demostrar la habilidad para generar resultados aceptables con este método.

3.7.4.2 Resumen .Para un análisis de elementos totales, los analitos son solubilizados o digeridos utilizando el método

de preparación de muestras apropiado, quedando esta lista para ser analizada por AAEVF en dicho

instrumento el mercurio es convertido a su estado basal con una solución de cloruro estañoso en

H2SO4. El vapor de mercurio metálico es removido de la solución por burbujeo y llevado por un flujo

de nitrógeno al espectrofotómetro de absorción atómica, la lectura de absorbancia de la muestra es

comparada con la de una curva de calibración analizada en las mismas condiciones que la muestra.

El análisis cuantitativo se basa en la determinación de la radiación a 253.7 nm de vapor de mercurio.


Sólo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso común en el laboratorio analítico.


calibración.

3.7.4.3.1 Equipo

Espectrómetro de Absorción atómica por vapor frío (AAEVF)

Balanza analítica con sensibilidad de 0.1 mg, para el pesado de sólidos, preparación

de estándares y reactivos.


Pipetas volumétricas de diferentes capacidades.

Material de laboratorio – Todo el material de laboratorio (vidrio, cuarzo,

polietileno, PTFE, FEP, etc.) debe estar suficientemente limpio para cubrir los

objetivos del método. Existen varios procedimientos para la limpieza del material

incluyendo el lavado con detergente, enjuague con agua de la llave, remojarlos por

4 horas o mas en 20% (v/v) de ácido nítrico o una mezcla de nítrico – clorhídrico,

lavar con agua y almacenar en lugar limpio.

Matraces volumétricos de 10, 25, 50 y 100 mL, probetas graduadas, embudos.


A menos que se indique otro grado, los reactivos que se requieren en el método deben ser tipo ACS

(American Chemical Society) grado reactivo analítico.



217

3.7.4.4.1 Reactivos

Agua – A menos que otra cosa se indique, el agua de referencia debe cumplir con las siguientes características: Resistividad: megohm-cm a 25°C: 0.2 Mínima

Conductividad: S/cm a 25°C: 5.0 Máxima pH: 5.0 a 8.0 Purificada por desionización

Ácido clorhídrico concentrado (HCl) libre de los elementos a analizar (puede ser


Ácido nítrico concentrado (HNO3) libre de los elementos a analizar (puede ser


Acido nítrico al 5%:

3.7.4.4.2 Materiales de referencia Los patrones pueden ser estándares puros o adquirirse como disoluciones certificadas (patrones de referencia).

Estándar certificado de mercurio de 1000 mg/L Hg


Elabore una curva de calibración con ácido nítrico al 5% con varios niveles de

concentración, las concentraciones deben de estar de acuerdo al intervalo de trabajo

requerido, utilice los patrón mencionados en el inciso anterior. 0.0, 1.0, 2.0, 5.0,

10.0 y 20.0 ug/L


Cada laboratorio que utilice este método está obligado a operar un programa de control de calidad (CC) formal. Los requerimientos mínimos de este programa consisten en una demostración inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con las especificaciones de desempeño del método, además realizar análisis continuos de muestras de control de calidad (MCC) para demostrar la precisión y exactitud continuas y el análisis de blancos. El desempeño del laboratorio debe compararse con los criterios aquí establecidos, con objeto de determinar si los resultados de los análisis cumplen con las especificaciones de desempeño del método. El analista debe hacer una demostración inicial de su habilidad para generar una exactitud y precisión aceptables por este método.

Cada vez que se realice una modificación al método o que se cambie el analista responsable de llevar a cabo está determinación, el analista designado debe repetir la validación del método, si el cambio va a afectar el límite de detección del método (LDM), el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o más bajo que el anterior para los analitos de interés. No se permite el uso de técnicas determinativas alternativas y cambios que degraden la ejecución del método. Si se utiliza una técnica analítica que no sea la especificada en este



218

método, dicha técnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las de la técnica descritas en este documento para el analito de interés. Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a este método. Estos registros deben de incluir lo siguiente:

- La justificación por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al método para ese analito. - Los nombres, títulos, direcciones y número de teléfono de los analistas que ejecutaron los análisis y modificaciones y el encargado de control de calidad que presenció y verificó los análisis y sus modificaciones. - Los resultados de todas las pruebas de CC del método modificado comparadas con el método original, dichos datos deben de incluir todos los parámetros mencionados en la sección de desempeño del método. - La información escrita en las bitácoras tanto del equipo como del analista, deben incluir los siguientes datos:

Identificación de la muestra Número del lote analítico en el cual se analizó la muestra Fecha del análisis Procedimiento cronológico utilizado Cantidad de muestra utilizada Número de muestras de control de calidad analizadas en el lote Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medición Registros de bitácoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de

información Información cruda reportada por los equipos o por los analistas Evidencia de la aceptación o rechazo de los resultados del lote analítico.

3.7.4.5.1 Verificación del equipo Verifique que la succión en los capilares de la muestra y del cloruro estañoso sea la adecuada (sin interrupciones) y que la bomba peristáltica gire adecuadamente. Verifique que el equipo se encuentra en óptimas condiciones operativas, para lo cual debe encender y permitir que se estabilice térmicamente por 30 min. Y realizar la verificación correspondiente de acuerdo a los instructivos de verificación de la calibración de acuerdo al equipo a utilizar.

3.7.4.5.2 Verificación de la calibración inicial Se realiza la lectura de los estándares de calibración, aceptando un 10% de RSD. El coeficiente de correlación debe ser >= 0.995 con un blanco y al menos 4 estándares.

3.7.4.5.3 Verificación de contaminación de reactivos

Blanco de reactivos (BR) – Prepare un blanco de reactivos a la misma concentración de

ácido que las muestras para analizar, procese el blanco de reactivos al igual que las



219

muestras y verifique que el blanco de reactivos sea menor al Límite de detección del

método (LDM). En caso de no cumplir, verifique los reactivos, prepare nuevamente el

blanco de reactivos y reprocese el lote analítico con los nuevos reactivos.

3.7.4.5.4 Verificación del Lote Analítico La verificación del proceso analítico se realiza a través del análisis de la muestra de control de calidad (MCC), La MCC debe provenir de una fuente externa, diferente a los estándares de calibración, preparada con las mismas mezclas de ácidos que los estándares de calibración y llevada a través de todo el proceso de digestión y análisis que las muestras. La MCC debe tener un porcentaje de recuperación de 80-120% .

3.7.4.5.5 Verificación de interferencias de matriz Se utilizan muestras adicionadas. La muestra adicionada se incluye en el lote analítico, el criterio de aceptación es de 75-125% de recobro, en caso de no cumplir, reanalice nuevamente, si persiste el problema reporte como interferencia de matriz.

3.7.4.5.6 Verificación de la estabilidad de la Curva de Calibración. Si más de 25 muestras van a ser analizadas durante el día, la curva estándar de trabajo debe verificarse con un estándar de referencia o un estándar de concentración media del rango de trabajo después de cada 25 muestras y un blanco de verificación. Este valor de la muestra debe tener un recobro del 80-120%, de no ser así entonces las 25 muestras previas deben volver a analizarse. El blanco de verificación debe estar por debajo del Límite de detección del método.

3.7.4.5.7 Verificación de estándares surrogados No aplica 3.7.4.5.8 Verificación de estándares internos No aplica 3.7.4.5.9 Control de Calidad Estadístico – En esta sección se especifica como debe realizarse el control de calidad estadístico obligatorio para este método: Se deberán preparar la MCC de una fuente externa al laboratorio o ser preparada de una fuente diferente a la utilizada en la curva de calibración, las concentración debe corresponder al rango de trabajo del método.




220

3.7.4.5.9.1 Gráficas de Control de Exactitud – El laboratorio debe elaborar y mantener actualizadas las gráficas de control de exactitud para cada lote analizado a partir de la demostración inicial de desempeño. Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deberá graficarse y

deberá estar dentro de los límites de control superior e inferior ( 3s).

Si un valor de exactitud es mayor a 3s, deberán rechazarse todos los resultados del lote

analítico, determine las causas y corrija los errores, documente adecuadamente las

incidencias y acciones correctiva y deberá repetirse el análisis del lote en cuestión.




3.7.4.5.10 Validación de modificaciones del método o de métodos alternos – Para validar las modificaciones que se efectúen a este método o para la utilización de métodos alternos deberá seguirse el siguiente procedimiento:

- Si se realizan modificaciones al presente método, deberán revalidarse.

- Si se utiliza un método alterno cuya fuente sea un método estandarizado por alguna Institución de carácter internacional o reconocida internacionalmente (e. g. ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment Canada, etc.) siga el mismo procedimiento de validación presentado. - Si se utiliza algún método no estandarizado, deberá evidenciarse, además de los parámetros mencionados en este método, los parámetros de Robustez, Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante estudios interlaboratorio.

Verifique diariamente el desempeño de todo el sistema analítico utilizando los datos recolectados de análisis de blancos reactivos, solución verificadora del desempeño del laboratorio.



221

3.7.4.5.11 Composición del lote analítico

1.- Blanco de calibración 2.- Estandarización 3.- Verificación de la calibración 4.- MCC 5.- Blanco de Reactivos. 6.- Muestra 1 7.- Muestra duplicada 8- Muestra adicionada 9.- Muestra 2 a 25 10.- Estándar de verificación de la estabilización de calibración 11.- Blanco de chequeo.


Para el seguimiento de las especificaciones de aceptación y rechazo consultar las siguientes tablas:

Verificación del equipo:


Lo que el fabricante recomiende Ver instructivo de de equipo correspondiente

Verificación de la calibración inicial


Estándar de verificación de la calibración inicial 80 – 120 % Recobro

Verificación de contaminación de reactivos


Blanco de reactivos < limite de detección

Verificación del proceso analítico


Muestra de control de calidad 80 – 120 % Recobro

Verificación de interferencias de matriz


Muestras adicionadas 75 – 125 % Recobro

Verificación de la estabilidad de la curva de calibración


Estándar de verificación continua 80 – 120 % Recobro



222

3.7.4.6 Calibración La estandarización diaria se prepara con un blanco así como un mínimo de 4 estándares, esta curva se

verifica con el estándar de verificación continúa de la curva de calibración, que debe ser de una

concentración equivalente al punto medio de la curva. El porcentaje de recuperación debe ser de 90-

110%.


Si se utiliza regresión lineal por mínimos cuadrados, deberá obtener el factor de correlación “r2” para cada analito, el cual deberá ser mayor o igual a 0.997 si “r” es menor a este valor, la curva de calibración no es lineal y deberá verificarse la preparación de los estándares de calibración, el ICP/AES y repetir la calibración. 3.7.4.7 Procedimiento Analítico

3.7.4.7.1 Análisis de los extractos de las muestras para aire ambiente

Los extractos para el análisis de aire ambiente se deben analizar en un espectrómetro de

fluorescencia atómica por vapor frío (CVAFS) siguiendo los lineamentos que se establecen

en el EPA Compendium Method IO-5.

3.7.4.7.2 Análisis de los extractos de las muestras para todas las demás matrices

Los extractos son analizados en el AAEVF referido en 3.7.4.3

3.7.4.7.3 Cálculos

2.1.5.

3.7.4.7.3.1 AGUA


3.7.4.7.3.2 SUELOS

VER EN METALES Y METALOIDES 3.7.4.7.3.3 SEDIMENTOS (MARINOS Y EPICONTINENTALES)


3.7.4.7.3.4 ALIMENTOS PROCESADOS, SIN PROCESAR, TEJIDOS,

ORGANISMOS


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