C. SAUNIER 2 BIOPHYSICIENS version 2014-2015...

C. SAUNIER 2 BIOPHYSICIENS version 2014-2015

ETSL 95 rue du dessous des berges 75013 Paris

BTS BIOPHYSICIENS

ETSL

2014-2015

TRAVAUX PRATIQUES de BIOCHIMIE PRESENTATION GENERALE C. SAUNIER


TP de BIOCHIMIE : Présentation /9

Table des matières

1. Introduction .................................................................................................................................. 3 2. Séances ........................................................................................................................................... 3

3. Entrée en laboratoire ................................................................................................................ 3 4. Les travaux pratiques ................................................................................................................ 4 4.1 Le déroulement de la séance .......................................................................................................... 4 4.2 Le rapport de TP ................................................................................................................................. 4 4.3 Le carnet de laboratoire ................................................................................................................... 5 4.4 Le graphe ............................................................................................................................................... 5 4.5 La correction ........................................................................................................................................ 6

5. Modèle de TP ................................................................................................................................ 6 LISTE des TRAVAUX PRATIQUES de BIOCHIMIE ................................................................... 7



1. Introduction Les Travaux Pratiques de Biochimie sont en alternance avec les Travaux Pratiques de Techniques Analytiques Séparatives et Spectrales (TASS) de M. Godin. Ce sont des séances de 4h30 au cours desquelles vous serez amenés à rendre un compte rendu écrit de TP à la fin de la séance. Nous appliquerons les mêmes règles de sécurité et d’attitude dans le laboratoire qu’en TP TASS. Chaque séance sera constituée du TP proprement dit, mais pourra être complétée par des moments d’exercices ou d’interrogations.

2. Séances Leur nombre total sur l’année est de 9 séances divisées en plusieurs parties :

• une série de dosages par gammes d’étalonnage ; • une série de dosages enzymatiques ; • un contrôle de TP (BTS blanc) ; • une correction du BTS blanc et un rappel sur les TP ; • éventuellement une séance de révisions en commun avec le TP TASS pour tous les

appareils de mesure susceptibles d’être utilisés pendant le BTS. Vous trouverez la liste non exhaustive des séances en page 7 de ce chapitre.

3. Entrée en laboratoire Pour des mesures de sécurité :

1. vous devez venir au laboratoire sans manteau ou blouson, sans écharpe et sans bonnet ;

2. la capuche de sweat-shirt ou autre doit être rentrée dans la blouse ; 3. les chaussures avec les lacets doivent être attachées et dès qu’il commencera à faire

chaud et beau, il est déconseillé de venir en TP en sandalettes ou en pieds nus ; 4. enfin, vous devez laisser un maximum de choses dans votre casier : ne gardez avec

vous que le carnet de laboratoire, les feuilles de compte rendu préparées, trousse, règle et matériel personnel.

En conclusion, vu le manque de place et le nombre d’étudiants dans la même salle, l’entrée au laboratoire s’effectuera avec le strict minimum ; dans le cas de non respect des règles élémentaires de sécurité, des sanctions pourront être appliquées.



4. Les travaux pratiques

4.1 Le déroulement de la séance L’entrée au laboratoire : dès votre entrée dans le labo, vous devrez :

! vérifier votre casier de verrerie personnel1 et signaler à l’enseignant le moindre problème (manque, casse) ;

! sortir la verrerie nécessaire à la réalisation de votre TP et la laisser sur votre paillasse ;

! sortir votre matériel scolaire et vos feuilles de compte rendu préparées préalablement et mettre votre sac à l’entrée du laboratoire sous les étuves ;

! déposer éventuellement sur le bureau vos feuilles de compte rendu préparées. Pendant la séance : vous êtes libres de mener vos dosages comme vous le voulez. Au début de chaque séance, le matériel spécifique, comme le spectrophotomètre vous sera attribué par l’enseignant. La fin de la séance : quand vous aurez fini de doser, vous devrez

1. laver votre verrerie une fois à l’eau du robinet et enlever le marqueur ; 2. faire vérifier l’état de votre casier par l’enseignant ; 3. rédiger votre rapport que vous devez remettre à l’enseignant avant de quitter la salle.

Remarques : - les sorties pendant la séance sont autorisées mais il faut préalablement avoir signalé

à l’enseignant votre intention de quitter la salle : pour des règles de sécurité, l’enseignant doit connaître en permanence le nombre d’élèves présents dans la salle. Il est évident, pour les mêmes raisons, que vous devez également signaler votre retour au laboratoire ;

- les sorties définitives du laboratoire ne sont, elles, pas autorisées sans l’accord de l’enseignant et ne pourront intervenir, sauf en cas de problèmes particuliers, que dans un délai de 30 minutes avant l’heure finale.

4.2 Le rapport de TP Il devra être rendu à la fin de chaque séance de TP. La rédaction de ce document devra suivre les règles des Bonnes Pratiques de Laboratoire qui vous sont résumées dans les sous chapitres suivants. Le rapport de TP devra se composer des éléments suivants :

! une copie double blanche sur laquelle en première page seront indiqués : - en haut à gauche, vos nom et prénom avec votre paraphe, votre numéro d’inconnue ; - en haut à droite, la date du jour du TP ; - en position centrale, le titre du TP ; - en dessous du titre, les résultats de vos dosages selon les méthodes utilisées, selon les

unités et le nombre de chiffres significatifs demandés ; ! les feuilles de compte rendu à trous dûment remplies ; ! les feuilles de papier millimétré ou autre sur lesquelles les graphes

apparaîtront ;

1 Ce casier vous sera attribué le jour du premier TP de Biochimie ou TASS ; il vous servira tout au long de l’année pour tous les TP qui auront lieu dans le laboratoire du sous sol.



! la ou les feuilles originales de carnet de laboratoire de votre séance ; leur pagination étant indépendante du reste du rapport.

Le rapport doit comporter également les formules littérales de calcul avec les unités, puis une application numérique. Tout calcul non justifié sera considéré comme faux. Enfin, tous les rapports seront finalisés par une conclusion générale.

4.3 Le carnet de laboratoire Rappel : le carnet de laboratoire doit être rédigé de telle sorte que n’importe qui puisse refaire vos manipulations les yeux fermés, voire même sans comprendre ce dont il s’agit. Il doit être écrit avec une encre noire ou bleue permettant la photocopie et le calque carbone ; le rouge étant réservé pour la correction. Pour cela, vous devez respecter certains critères dans votre rédaction.

1. votre carnet de laboratoire est rédigé sur place, au fur et à mesure que vous réalisez vos gestes et vos manipulations ;

2. il est indépendant de tout autre document ; il aura donc une pagination séparée, toujours de la façon suivante n / N ;

3. en haut à gauche, vos nom, prénom, paraphe, numéro d’inconnue ; 4. en haut à droite, la date et dessous la pagination ; 5. en haut au centre, le titre de votre TP ; 6. l’information où on peut trouver le protocole de votre manipulation ; 7. les informations supplémentaires que vous donne l’enseignant lors du début du TP,

comme une autre prise d’essai ou un titre d’étalon ; 8. les éventuelles dilutions à effectuer avec le protocole suivi, le matériel utilisé ; 9. les réactifs et solutions avec leur titre si celui-ci est connu ; 10. les règles de sécurité pour le maniement des solutions et leur rejet ; 11. le matériel utilisé pour l’ensemble de la manipulation, c'est-à-dire le type et la

tolérance, comme pipette jaugée 2T de 10 ml ± 0,02 ml, macrocuves plastiques de TO 1cm ;

12. les résultats obtenus avec des informations pertinentes comme la couleur obtenue, la longueur d’onde de travail, la teneur du blanc réactif ;

13. en fin de carnet de laboratoire, s’il reste de la place sur votre page, vous devez barrer d’une grande diagonale le restant de la page et signer le document.

Le carnet de laboratoire fera l’objet d’une note à part entière dans votre note de rapport.

4.4 Le graphe Le graphe doit être en regard de vos résultats transcrits dans vos feuilles de compte rendu en mode portrait. Il ne doit comporter aucun trait de crayon papier, être en encre bleue ou noire, le rouge étant réservé à la correction de l’enseignant. C’est un document à part entière sur lequel doivent également figurés les éléments suivants :

! nom, prénom en haut à gauche ; ! pagination en haut à droite ; ! titre correct ;



! les axes doivent être marqués et l’échelle choisie doit être simple et facile de lecture ;

! 9 informations capitales résumées dans une étiquette fournie telles que : - le nom du spectrophotomètre utilisé ; - la longueur d’onde de travail ; - le type de cuves utilisées comme macrocuves plastiques de TO 1 cm ; - le numéro d’inconnue et une éventuelle dilution ; - la prise d’essai de l’inconnue ; - le titre exact théorique de la solution étalon ; - la composition du blanc réactif ; - le coefficient de régression linéaire r si la représentation graphique est une droite.

4.5 La correction Dans la mesure du possible, les rapports seront corrigés et remis aux étudiants la semaine suivant le TP, ceci afin de permettre à ces derniers : - d’avoir le temps de regarder la correction et de comprendre les éventuelles erreurs ; - de poser toutes les questions qui paraissent indispensables pour réussir au mieux le

TP suivant et d’éliminer ainsi le maximum d’erreurs. La notation tiendra compte de plusieurs éléments :

! la présentation selon, le respect des règles de rédaction du rapport et la propreté de ce rapport (rappel : le blanc et le crayon de papier sont à proscrire ; les ratures doivent être propres et signées) ;

! le carnet de laboratoire et le respect des règles de sa rédaction ; ! les pourcentages d’erreur calculés selon une VCV donnée par la technicienne

et selon des grilles de notation (selon la difficulté du dosage, cette grille est différente) ;

! les réponses aux questions préliminaires, les modes opératoires, les conclusions rédigées ;

! le passage au tableau lorsque celui-ci sera demandé ; ! les calculs pour l’obtention des résultats ; ! un malus en cas d’absence de numéro d’inconnue ; ! en malus aussi, une erreur grave pour la continuité du TP pour les autres ⇒ - 10 points sur la note finale pour toute la classe et - 2 points pour celui qui se dénonce.

5. Modèle de TP Chaque séance de TP se présentera selon le modèle suivant : - en introduction, une courte synthèse relative au thème du TP ; - éventuellement, une présentation à trous du TP qui sera le plus souvent en plusieurs

parties ; - des questions préliminaires facilitant la compréhension du TP ; ces questions pourront

alors être traitées en exercice en début de séance ; - des protocoles à suivre toujours écrits selon la même tournure de phrase ; - éventuellement, des tableaux de modes opératoires pré - remplis ; - des emplacements libres pour les réponses ; si toutefois, la place était insuffisante

pour répondre sur le compte rendu, les démonstrations seront écrites sur des feuilles à part.



LISTE des TRAVAUX PRATIQUES de BIOCHIMIE2 TP 1 Le FER : dosage colorimétrique par gamme d’étalonnage TP 2 Les PROTEINES : dosages colorimétriques d’une solution de protéines par gammes d’étalonnage, méthodes aux réactifs de Biuret, de Bradford et de Folin Lowry TP 3 Les PHOSPHATES URINAIRES et SANGUINS : dosage des phosphates urinaires et sanguins par la méthode de Briggs

Dosage du CHOLESTEROL dans un SERUM par méthode colorimétrique enzymatique TP 4 DOSAGES de la BETAGALACTOSIDASE : dosages de l’ONP par gamme d’étalonnage, dosage enzymatique de l’ONPG et détermination de la concentration catalytique de la BETAGALACTOSIDASE TP 5 INTERROGATION L’ACIDE URIQUE : dosage enzymatique UV TP 6 Les ACIDES AMINES : dosages enzymatiques UV de l’acide aspartique, de l’asparagine et de l’acide glutamique provenant d’un produit alimentaire TP 7 Les SUCRES : dosages enzymatiques UV de glucose libre, de fructose et de saccharose contenus dans un jus de fruit TP 8 REVISIONS : dosages de PROTEINES par gammes d’étalonnage, dosages du GLUCOSE par méthodes enzymatiques colorimétrique et UV et détermination de la concentration catalytique de la GAMMAGT TP 9 CCF BLANC de Travaux Pratiques TP 10 CORRECTION du CCF de TP

2 Cette liste n’est pas exhaustive et peut être amenée à changer au cours de l’année.



Étuves

ENTRÉE

CHAINE HPLC

CPG

Varian 450 GC

(informatisé sous WIN

XP)

SPECTRO-FLUORIMÉTRE

SHIMADZU 1505 (informatisé sous WIN 98)

Balances

UVIKON (informatisé sous WIN

XP)

Bureau

Inconnues et réactifs « frais »

ORDINATEURS

SPECTRO-FLUORIMÉTRE SHIMADZU 1505

Réactifs sous hotte

Camspec M550

(informatisé sous WIN

XP)

Shimadzu 5 (informati-

sé sous WIN 98)

Shimadzu 4 (informati-

sé sous WIN 98)

Trébuchet

Libra S22 - WIN XP

N° 1

Pipetmen et cônes, eau distillée

SHIMADZU n° 3

SHIMADZU n° 2

N° 2

Libra S22

N° 3 sous WIN XP



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