Biologia Cardiovascular

Resumo: 02.001

Bone marrow mesenchymal stromal cells rescue cardiac function in streptozotocin-induced diabetic rats

Autores

1MONNERAT-CAHLI, G.

2, TRENTIN-SONADA, M.

2, CARNEIRO-RAMOS, M.

3, COUTINHO,

D. 1, GUERRA, B.

1, CASTRO-SILVA, M.

1, SILVA, D. G.

1, NASCIMENTO, J. H. M.

1,4,

CAMPOS-DE-CARVALHO, A. C. 1, MEDEI, E.

1 IBCCF - UFRJ,

2 CCNH - UFABC,

3 Department

of Morphology, Institute of Biological Sciences - UFMG, 4 INC - INC

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, INCT-INBEB

Resumo Introdução Cardiac complications are one of the main causes of death in diabetes. Several studies have shown anti-diabetic effects of bone marrow mesenchymal stromal cells (MSC). However, the effect in the cardiovascular function and the mechanisms remains unclear. Objetivos In the present study, we investigated whether MSC-transplantation can revert cardiac dysfunction in streptozotocin-induced diabetic rats and the immunoregulatory effects of MSC were examined. Código de Experimentação Animal 26 Código de Experimentação Humana Métodos Wistar rats were divided in three groups: Non-diabetic (C), Diabetic (DM) and Diabetic-Treated (DMT) with 5x106 MSC 4 weeks after establishment of diabetes. Four weeks after MSC-therapy, systemic metabolic parameters, immunological profile and cardiac function were assessed. Resultados MMSC-transplantation was able to revert the hyperglycemia (in: Mean±SEM) (C: 88.7±4.5; DM: 392.1±30.6*; DMT: 180.6 ± 30.2; *P Conclusão The results indicate that MSC-therapy was able to rescue cardiac impairment induced by diabetes, normalize cardiac AMPK subunit expression and activity, decrease corticosterone and glycemia and exert local (cardiac) and systemic immunoregulation.

Palavras-chaves: Diabetes, Fisiologia Cardiovascular, Células Tronco, Cardiomiopatia Diabética, Terapia Celular

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Resumo: 02.002

Beneficial effects of a novel A2A adenosine receptor agonist in rats with monocrotaline-induced pulmonary hypertension

Autores 1LEAL, C. M.

1, LEAL, D. M.

1, MAIA, R. D. C.

1, FRAGA, C. A. M.

1, BARREIRO, E. J. D. L.

1,

SUDO, R. T. 1, SUDO, G. Z.

1 Programa de desenvolvimento de fármacos - UFRJ

Apoio Financeiro: CNPq,CAPES, FAPERJ, INCT, PRONEX

Resumo Introdução Pulmonary arterial hypertension (PAH) is characterized by increased pulmonary vascular resistance associated with endothelial injury of pulmonary arteries, vascular remodeling, right ventricular hypertrophy and increased right ventricular pressure. Objetivos The present work investigated the effects of LASSBio-1027, a novel N-acylhydrazone derivative with potent vasodilatory activity mediated by activation of A2A adenosine receptor in models of HAP. Código de Experimentação Animal DFBCICB 013 Código de Experimentação Humana Métodos The protocols used in the present study were approved by the Animal Care and Use Committee at Universidade Federal do Rio de Janeiro. The experimental groups, (n=6) randomly distributed received an intraperitoneal (i.p.) injection of monocrotaline (MCT) (60 mg/kg) for PAH induction. Treatment with vehicle (DMSO) or LASSBio-1027 (20 mg/kg, i.p. or 50 mg/kg, p.o.) were started from day 15 to day 28 after exposure to a single-dose of MCT. The following parameters were analyzed: right ventricular systolic pressure (RVSP), right ventricle weight (RV), relation between right ventricle weight and body weight (RV/BW). In addition, endothelial dysfunction of pulmonary artery was evaluated by the observation of acetylcholine-induced relaxation. The last day of treatment a transthoracic echocardiography was performed to determine pulmonary acceleration time (PAT) and wall thickness of the right ventricle in the groups treated with the derivative at the dose of 50 mg/kg, p.o. Resultados The RVSP (mmHg) increased from 25.3 ± 1.9 (control) to 59.0 ± 6.1 (MCT, p < 0.05) and partially restored to 24.8 ± 1.2 after treatment with LASSBio-1027. The wall thickness of the right ventricle increased from (mm) 0.56 ± 0.04 (control) to 3.26 ± 2.2 (MCT p < 0.05) and restored to 0.64 ± 0.1 in MCT + LASSBio-1027 group. Conclusão LASSBio-1027 reduced cardiac hypertrophy, ventricular dysfunction and vascular reactivity in monocrotaline-induced PAH

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in rats suggesting a new perspective for the treatment of PAH.

Palavras-chaves: pulmonary hypertension, LASSBio-1027, adenosine

Resumo: 02.003

Tratamento com Losartan melhora a função endotelial e reduz a pressão arterial da prole de ratas diabéticas.

Autores

1de QUEIROZ, D. B.

1, RAMOS-ALVES, F. E.

1, SANTOS-ROCHA, J.

1, SILVA, O. A.

1, de SÁ,

F.G. 1, MOREIRA, H.S.

1, DUARTE, G.P.

1, XAVIER, F. E.

1 Departamento de Fisiologia e

Farmacologia - UFPE

Apoio Financeiro: CNPq/CAPES

Resumo Introdução Estudos prévios realizados em nosso laboratório demonstram um papel chave dos prostanóides derivados da COX-2 na patogênese da disfunção endotelial em ratos adultos que foram expostos ao diabetes materno na vida intrauterina. A Angiotensina II, através dos receptores AT1, está envolvida na patogênese de várias doenças cardiovasculares mediando muitas ações pró-inflatórias na parede do vaso, incluindo uma maior produção de prostanóides derivados da COX-2. Objetivos Este estudo analisou o envolvimento da Angiotensina II, via receptor AT1, na patogênese da hipertensão e no aumento da participação de prostanóides vasoconstrictores derivados da COX-2 em artérias mesentéricas de resistência (AMR) da prole de ratas diabéticas. Código de Experimentação Animal 23076.031785/2012-26 Código de Experimentação Humana Métodos Os procedimentos apresentados aqui foram aprovados pela Comissão de Ética em Experimentação Animal da UFPE (Processo número: 23076.031785/2012-26). Foram utilizados ratos Wistar machos adultos com 6 e 12 meses de idade (6M e 12M, respectivamente) provenientes de ratas controle (CON) ou diabéticas (STZ) pela injeção de estreptozotocina. Os animais foram divididos em 4 grupos: dois grupos não-tratados (CON e STZ) e dois grupos tratados com losartan 15 mg/kg/dia durante 12 semanas (CONLos e STZLos). A pressão arterial foi medida pelo método direto, através da canulação da artéria carótida. O relaxamento à acetilcolina (ACh) e a contração à noradrenalina (NA) foram analisados em AMR de ambos os grupos. As respostas à ACh e à NA foram analisadas na ausência e na presença de indometacina (inibidor da COX, 1 e 2). A análise estatística dos resultados foi realizada por análise de variância (ANOVA), uma e duas vias.

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Resultados Os animais do grupo STZ (6M e 12M) apresentaram níveis elevados de pressão arterial média comparado aos seus respectivos controles: (6M, CON 105±3 vs. STZ 131±3, P <0,05). Conclusão Os resultados sugerem que na prole de ratas diabéticas a ativação do receptor AT1 pela Angiotensina II pode estar envolvida na patogênese da hipertensão, assim como no aumento da participação dos prostanóides vasoconstritores derivados da COX-2 no relaxamento à ACh e na contração à NA em AMR.

Palavras-chaves: Angiotensina II, Ciclooxigenase-2, Diabetes gestacional, Disfunção endotelial, Programação fetal

Resumo: 02.004

Tratamento com LASSBio-294 melhora disfunção diastólica em ratos espontaneamente hipertensos infartados

Autores

1da SILVA, J. S.

3, DEBOM, R. C.

2, FRAGA, C. A. M.

2, BARREIRO, E. J.

1, SUDO, R. T.

1,

ZAPATA-SUDO, G. 1 Programa de Desenvolvimento de Fármaco - UFRJ,

2 Faculdade de Farmácia -

UFRJ, 3 Cristália - Cristália

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPQ, PRONEX, INCT, CAPES, CRISTALIA

Resumo Introdução Disfunção diastólica tem sido observada tanto na hipertensão arterial quanto após o infarto do miocárdio (IM). Objetivos Tratamento crônico de LASSBio-294, uma substância N-acilhidrazona, com efeito inotrópico positivo foi avaliado em ratos espontaneamente hipertensos submetidos ao IM. Código de Experimentação Animal DFBCICB049 Código de Experimentação Humana Métodos Os protocolos foram aprovados pelo Comitê de Ética e Uso de Animais da Universidade Federal do Rio de Janeiro/049. Ratos Wistar Kyoto e espontaneamente hipertensos machos (SHR, 12-14 semanas) sob anestesia com sevoflurano foram submetidos à ligadura da artéria coronária descendente anterior. Os grupos experimentais foram: falso-operado (Sham) e

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infartado (IM) e tratados ou não com LASSBio-294 (20 mg/kg, v.o.) durante 8 semanas. Ao final do tratamento, os diferentes grupos foram submetidos ao teste de esforço em esteira ergométrica e alguns parâmetros avaliados: 1. pressão arterial média; 2. pressão intraventricular (pressão diastólica ventricular esquerda final (PDVEF) e pressão sistólica ventricular esquerda (PSVE)); dP/dt máxima e mínima. A hipertrofia cardíaca foi determinada através da relação peso do coração e peso do animal enquanto a fibrose cardíaca foi avaliada através de análise histológica. Resultados No teste de esforço houve redução da distância percorrida do grupo IM comparado ao Sham de 237,7 ± 58,3 m para 23,4 ± 2,3 m (p <0,05). Conclusão SHR infartados tratados com LASSBio-294 por via oral impediu o desenvolvimento da intolerância ao exercício, a hipertrofia e a fibrose cardíaca e como consequência preveniu o desenvolvimento da disfunção diastólica esquerda bem como reduziu a pressão arterial média dos animais

Palavras-chaves: Infarto do miocárdio, Disfunção diastólica, LASSBio-294, Ratos espontaneamente hipertenso, Fibrose cardíaca

Resumo: 02.005

Efeitos do tratamento com losartan ou espironolactona sobre o remodelamento vascular induzido pela hiperativação dos receptores beta-adrenérgicos em aorta de ratos.

Autores 1CLERICI, S. P.

1, VICTÓRIO, J. A.

3, BESSA, K.

2, ROSSONI, L. V.

1, DAVEL, A. P. C.

1 Biologia

Estrutural e Funcional - UNICAMP, 2 Fisiologia e Biofísica - USP,

3 Engenharia Mecânica - UFRN

Apoio Financeiro: CNPq

Resumo Introdução A ativação dos receptores beta-adrenérgicos (beta-AR) pode aumentar os níveis circulantes de angiotensina II e aldosterona e, via ativação de receptor AT1 e MR, respectivamente, ambos podem causar efeitos hipertróficos e fibróticos na vasculatura, além de um desbalanço na deposição/degradação de matriz extracelular por meio da ativação de MAP kinases (MAPK) e metaloproteinases (MMP). Já foi descrito que a hiperativação dos beta-AR via tratamento com isoproterenol (ISO) altera a função vascular, porém, não se sabe se modula a estrutura de artérias. Objetivos Avaliar os efeitos do tratamento com ISO sobre parâmetros estruturais da aorta de ratos, as vias de sinalização associadas e um possível papel modulador dos antagonistas de receptor AT1 e MR, losartan (LOS) ou espironolactona (ESP), respectivamente. Código de Experimentação Animal 2440-1

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Código de Experimentação Humana Métodos Ratos Wistar (n= 50; 300-400g) foram divididos em 4 grupos tratados por 7 dias: Controle (CT); ISO (0,3 mg/kg/dia s.c); co-tratado com ISO+LOS (IL; 40 mg/kg/dia v.o.) e ISO+ESP (IE; 200 mg/kg/dia v.o.). Após os tratamentos, os ratos foram anestesiados e canulados para medida da pressão arterial média (PAM) e então a aorta foi perfundida com formalina em pressão igual à sua PAM. Cortes transversais (5µm) corados com hematoxilina-eosina foram obtidos. As áreas interna (Ai) e externa (Ae), os diâmetros interno (Di) e externo (De), a área de secção transversal (AST), a espessura da parede (EP) e a razão EP/Di foram obtidos em microscópio óptico (5X) e analisados no software Image J. Calculou-se a tensão circunferencial da parede (CWT= PAMxDi/2). Em homogenato de aortas, avaliou-se via Western-blot a expressão proteica das MAPKs ERK 1/2 e P38, de MMP-2 e de seu inibidor tecidual TIMP-2, normalizados pela expressão da alfa -actina. Os dados estão expressos como média±EPM. ANOVA 1-via: *P < 0,05 vs. CT; +P < 0,05 vs. ISO. Resultados O ISO não alterou a PAM (CT: 93±1 vs. ISO: 94±2 mmHg), mas LOS a reduziu em IL (IL: 67±3+ mmHg), enquanto ESP não alterou este parâmetro. A aorta do grupo ISO apresentou aumento de Ai (CT: 1,7±0,06 vs. ISO: 2,2±0,08* mm2), Ae (CT: 2,3±0,06 vs. ISO: 2,7±0,09* mm2), Di (CT: 1,5±0,03 vs. ISO: 1,7±0,05* mm2) e De (CT: 1,8±0,02 vs. ISO: 2,0±0,04 mm2*) em relação ao CT. O co-tratamento com LOS não modificou esses parâmetros. Já a ESP reduziu Ai (IE: 1,9±0,04+ mm2) e Ae (IE: 2,5±0,06+ mm2) em comparação ao ISO. A CWT do ISO foi aumentada (CT: 1,01±0,35 vs. ISO: 1,16±0,35* 104dynes/cm) e normalizada apenas em IL (IL: 0,8±0,5+ 104dynes/cm). Não houve alteração significativa nos valores de AST, EP e EP/Di entre os grupos estudados. O ISO aumentou a expressão de ERK1/2 (+31%), P38 (+39%) e da razão MMP-2/TIMP-2 (+79%), em relação ao CT. IL apresentou redução da expressão proteica apenas de ERK 1/2, enquanto que em IE a expressão de ERK 1/2, P38 e MMP-2/TIMP-2 foi normalizada. Conclusão Os dados sugerem que a hiperativação beta-AR causa um remodelamento eutrófico para fora da aorta e aumenta a CWT. O co-tratamento com LOS reverteu este aumento, provavelmente devido a um efeito hipotensor no grupo ISO. Já a ESP reverteu as alterações de área induzidas pelo ISO, associado com uma normalização da expressão das MAPKs ERK 1/2 e P38 e da MMP-2 ativa na aorta.

Palavras-chaves: hiperativação beta-adrenérgica, isoproterenol, remodemalento vascular

Resumo: 02.006

SUPLEMENTAÇÃO COM TAURINA RECUPERA A FUNÇÃO ENDOTELIAL DE RATOS SUBMETIDOS À RESTRIÇÃO PROTÉICA PÓS-DESMAME: PAPEL DAS VIAS PRÓ E ANTIOXIDANTES

Autores 1MAIA, A. R.

1, BATISTA, T. M.

1, CARNEIRO, E. M.

1, DAVEL, A. P.

1 Biologia Estrutural e

Funcional - UNICAMP

Apoio Financeiro: CAPES, FAPESP

Resumo Introdução A exposição à desnutrição durante estágios iniciais de desenvolvimento, como o período intrauterino, pode levar à disfunção endotelial e prejuízo do balanço entre produção e eliminação das espécies reativas do oxigênio (ROS). Já a taurina apresenta propriedades vasodilatadoras e antioxidantes, sendo portanto um alvo terapêutico. Objetivos O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da restrição protéica pós-desmame e da concomitante suplementação com taurina sobre a pressão arterial e a função endotelial aórtica, bem como os mecanismos envolvidos, com ênfase nas vias pró e antioxidantes. Código de Experimentação Animal 2653-1 Código de Experimentação Humana Métodos (CEUA/UNICAMP protocolo 2653-1) Ratos Wistar foram divididos logo após o desmame em quatro grupos: controle, com dieta contendo 14% de proteínas (C, n=10), restrito, com dieta isocalórica de 6% de proteínas (R, n=10), e os mesmos grupos dietéticos suplementados com taurina 2,5% na água de beber (CT, n=10 e RT, n=10). Após 90 dias os ratos anestesiados tiveram a carótida canulada para registros hemodinâmicos. O sangue foi coletado para medida plasmática de nitrito/nitrato (NO x - ) e a aorta torácica foi isolada para ensaios de reatividade vascular, expressão protéica pela técnica de Western Blotting e medida de ROS pela quantificação da fluorescência ao dihidroetídio (DHE). Valor de p Resultados O grupo R apresentou redução do peso corporal final (C=412±19 vs. R=177±6 g*), elevação da pressão arterial sistólica (PAS: C=116±3 vs. R=142±2 mmHg*), diastólica (PAD, C=65±4 vs. R=88±5 mmHg*) e média (PAM: C=84±3 vs. R=110±4 mmHg*), redução da potência de relaxamento à acetilcolina (ACh, 10 -9 a 10 -5 M) na aorta (pD 2 : C=7,80±0,08 vs. R=7,41±0,12 -Log M*), que foi recuperada pela incubação com superóxido dismutase (SOD, pD 2 : R=6,84±0,28 vs. R+SOD=7,80±0,23 -Log M*) ou apocinina (pD 2 : R=6,84±0,28 vs. R+Apo=7,67±0,20 -Log M*), além de aumento de ROS neste tecido (C=100±4 vs. R=125±6 %C*). A expressão aórtica de EC-SOD foi diminuída (C=1,00±0,10 vs. R=0,71±0,05 unidades arbitrárias, U.A.*) enquanto p47-phox (C=0,66±0,08 vs. R=1,10±0,11 U.A.*) e Mn-SOD (C=0,80±0,07 vs. R=1,07±0,08 U.A.*) estavam aumentadas em R. A suplementação com taurina preveniu parcialmente apenas o aumento de PAS (R=142±2 vs. RT=128±3 mmHg*) e melhorou o ganho de peso corporal do grupo RT (R=177±6 vs. RT= 235±13 g*). RT apresentou aumento do relaxamento à acetilcolina (pD 2 : R=7,41±0,12 vs. RT=7,78±0,10 -Log M *), redução da fluorescência ao DHE (R=125±6 vs. RT=91±8 %C*), aumento da expressão de EC-SOD (R=0,71±0,05 vs. RT=1,10±0,13 U.A.*) e redução de p47-phox (R=1,10±0,11 vs. RT=0,78±0,12 U.A.*) em comparação ao grupo R, sendo que estes parâmetros em RT foram similares aos observados em C e CT. A taurina aumentou os níveis plasmáticos de NO x - apenas em RT (CT=14±1 vs. RT= 54 ±4 &muM*). A expressão proteica de de eNOS, CuZn-SOD, GP91-phox e glutationa peroxidase não diferiu entre os grupos avaliados. Conclusão Os dados indicam que a restrição protéica pós-desmame leva à disfunção endotelial e estresse oxidativo vascular associado a uma maior atividade da NADPH oxidase e à deficiência de EC-SOD. A taurina normalizou a resposta de relaxamento à ACh, a geração de ROS e a expressão de p47-phox e de EC-SOD na aorta dos ratos RT, que tiveram aumento do NO x - circulante enfatizando que a suplementação com este aminoácido apresenta efeitos antioxidantes que levam a benefícios da função vascular em animais desnutridos.

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Palavras-chaves: desnutrição , disfunção endotelial, NADPH oxidase, superóxido dismutase, taurina

Resumo: 02.007

AVALIAÇÃO DAS PROPRIEDADES ESTRUTURAIS, MECÂNICAS E FUNCIONAIS EM ARTÉRIAS MESENTÉRICAS DE RESISTÊNCIA DE RATOS ESPONTANEAMENTE HIPERTENSOS (SHR) ANTES E APÓS O DESENVOLVIMENTO DA HIPERTENSÃO ARTERIAL.

Autores 1JEUKEN, R. M.

1, ROSSONI, L. V.

1 Fisiologia e Biofísica - ICB - USP

Apoio Financeiro: FAPESP e CNPq

Resumo Introdução Alterações funcionais, estruturais e mecânicas das artérias de resistência (AR) estão presentes na hipertensão arterial (HA). Porém, pouco se sabe sobre ajustes temporais dessas alterações em AR ao longo do desenvolvimento da HA. Objetivos Avaliar as alterações estruturais, mecânicas e de função endotelial em artérias (aa.) mesentéricas de resistência (AMR) de SHR antes e após o desenvolvimento da HA. Código de Experimentação Animal nº 171/ fl. 138/l. 02 CEUA/ICB-USP Código de Experimentação Humana Métodos O projeto foi aprovado pela CEUA/ICB – USP (nº171/fl.138/l.02). Ratos WKY (normotensos) e SHR, jovens (J-6 semanas de vida, 90 a 140g) e adultos (A-6 meses de vida, 300 a 390g), foram divididos em 4 grupos: WKYJ (N=8), SHRJ (N=6), WKYA (N=8) e SHRA (N=12). Um dia antes dos experimentos, aferiu-se a pressão arterial sistólica (PAS) por pletismografia de cauda. Em seguida, os ratos foram anestesiados, mortos e 3os ramos das AMR foram dissecados e montados em miógrafo de pressão (Pr) e estabilizados por 1h em solução de Krebs (KB), à Pr de 70 mmHg. Em seguida o KB foi trocado por uma solução sem CaCl2 e com EGTA 10 mM e após 15 min foi realizada curva de Pr (3-160 mmHg) para avaliar os parâmetros estruturais, diâmetro luminal (L) e razão parede/lúmen (P/L), e o parâmetro mecânico β, representativo da rigidez de parede. Para avaliar a vasodilatação dependente e independente do endotélio, AMR foram montadas em miógrafo de arame para AR, estabilizadas por 30min em KB e após avaliação da contração em resposta ao KCl (120 mM), curvas concentração-resposta à acetilcolina (ACh, 10-10-10-5 M) ou ao nitroprussiato de sódio (NPS, 10-9-10-4 M) foram realizadas em preparações pré-contraídas à noradrenalina (10-5 M). Os resultados estão expressos como média±EPM. A análise estatística foi feita com Anova 1 ou 2 vias (p < 0,05 * vs WKY). Resultados

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SHRA apresentaram aumento da PAS em relação aos WKYA (SHRA: 188±4,4* vs WKYA: 126±2,1 mmHg), enquanto esta não diferiu entre os J (SHRJ: 121±1,9 vs WKYJ: 111±2,3 mmHg). O L aumentou com a elevação da Pr, mas foi reduzido em AMR de SHR, tanto J como A, quando comparado aos respectivos WKY (Pr 160 mmHg: SHRJ: 188±5,6* vs WKYJ: 237±8,7 e SHRA: 282±7,4* vs WKYA: 354±6,4 µm). A P/L diminui com o aumento da Pr; porém, apresentou-se elevada em AMR de SHR J e A quando comparada ao WKY (Pr 160 mmHg: SHRJ: 0,12±0,003* vs WKYJ: 0,07±0,007 e SHRA: 0,09±0,007* vs WKYA: 0,06±0,005). O valor de β foi maior em AMR de SHR J e A quando comparado ao WKY (SHRJ: 11,6±2,7* vs WKYJ: 5,8±1,9 e SHRA: 6,8±0,5* vs WKYA: 4,7±0,2). O relaxamento à ACh foi semelhante entre as AMR dos grupos J (Rmax: SHRJ: 93,8±3,2 vs WKYJ: 92,3±4,3%); porém, as AMR dos SHRA apresentaram uma curva bifásica com contrações em resposta à ACh a partir de 10-7 M quando comparada aos WKY (Rmax: SHRA: 54,6±17,0* vs WKYA: 96,7±0,2%). O relaxamento ao NPS não diferiu entre os grupos. Conclusão Os resultados indicam que os SHRJ, apesar de não apresentarem HA, já apresentam alterações estruturais e mecânicas em AMR como as observadas nos SHRA, enquanto que a disfunção na vasodilatação dependente do endotélio ainda não foi observada nesses animais. Esses achados sugerem que remodelamento vascular e rigidez de parede em AMR de SHRJ não são suficientes para desencadear HA enquanto essas artérias mantiverem a função endotelial preservada.

Palavras-chaves: Artérias de Resistência, Hipertensão Arterial, Reatividade Vascular, Remodelamento Vascular, SHR

Resumo: 02.008

STRUCTURAL GLYCOBIOLOGY OF COAGULATION CASCADE MODULATION BY HEPARIN

Autores 1POL-FACHIN, L.

1, VERLI, H.

1 Centro de Biotecnologia - UFRGS

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES and FAPERGS

Resumo Introdução Antithrombin (AT), a member of the serpin protease inhibitors family, is a glycoprotein that co-exists in two isoforms, α and β, which differ in their amount of glycosylation and affinity for glycosaminoglycans (GAG), a group of sulphated polysaccharides, as heparin. AT is activated when bound to GAGs, becoming capable to inhibit coagulation cascade serine proteases like thrombin and fXa. Such enzymes form ternary complexes with heparin and AT, being subsequently inhibited by two distinct mechanisms of action: (1) a bridge (template) mechanism, in which long-chain heparins concomitantly bind both serpin and protease, and (2) conformational activation mechanism, in which heparin binds uniquely to AT, altering its conformation to improve its reactivity with coagulation proteases. In addition, heparin binding itself was also observed to modulate the catalytic activity of both fIIa and fXa. Objetivos Considering the lack of structural information regarding the effect of glycosylation over the structure and flexibility of AT, as well as in heparin-AT recognition, and that the molecular basis of the allosteric inhibition of fIIa and fXa, promoted by such glycosaminoglycan, is not fully understood, the current work intends to characterize the molecular recognition of heparin by such proteins in their isolated forms and in AT-proteases-GAG complexes. Código de Experimentação Animal

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Código de Experimentação Humana Métodos This work employed molecular dynamics simulations, using the GROMACS simulation suite and GROMOS96 force field for 0.1 μs, added by Löwdin HF/6-31G** derived atomic charges for carbohydrate residues. Resultados The obtained results indicate that heparin binds differently on AT glycoforms due to an interference of Asn135-linked glycan, which is related to α and β-AT diverse affinities for such GAG and activation dynamics. As well, distinct arrangements of the polysaccharide on the surface of thrombin and fXa may be related to their diverse susceptibilities to heparin mechanisms of action, as heparin orientation observed on the surface of fIIa, but not fXa, allows for an adequate long chain heparin binding to AT in ternary complexes. In this context, heparin was observed to allosterically inhibit thrombin and fXa by promoting changes in the proteases catalytic triad conformation, but to activate AT by promoting intramolecular rearrengements on its secondary structure elements. In both cases, the signal transmission pathways associated with such activity changes were traced by the present work for the first time. Also, simulations of AT-proteases-heparin complexes provided new insights into thrombin and fXa inhibition. Conclusão Glycosylation plays a central role on the differential activation of α and β-AT by heparin. As well, GAGs orientation on the surface of thrombin and fXa determine the mechanism of their modulation by heparin.

Palavras-chaves: antithrombin, coagulation, glycosylation, hemostasis, molecular dynamics

Resumo: 02.009

ANTAGONISMO DO RECEPTOR MR MELHORA A BIODISPONIBILIDADE DE ÓXIDO NÍTRICO E A RESPOSTA CONTRÁTIL EM AORTA DE RATOS TRATADOS COM ISOPROTERENOL.

Autores 1VICTÓRIO, J. A.

2, ROSSONI, L. V.

1, DAVEL, A. P. C.

1 Biologia Estrutural e Funcional -

UNICAMP, 2 Fisiologia e Biofísica - USP

Apoio Financeiro: FAPESP

Resumo Introdução A hiperativação dos receptores β-adrenérgicos (β–AR) pode induzir a síntese e liberação de angiotensina II e aldosterona. E, esses hormônios, via ativação do receptor AT1 e MR, respectivamente, causam disfunção endotelial e estresse oxidativo em diferentes artérias.

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Objetivos Avaliar a possível participação do receptor AT1 e MR no aumento da contratilidade à fenilefrina (Fe), estresse oxidativo e prejuízo da biodisponibilidade de óxido nítrico (NO) causadas pelo tratamento com isoproterenol (ISO) em aorta de ratos. Código de Experimentação Animal 2609-1 Código de Experimentação Humana Métodos

(Protocolo CEUA n° 2609-1) Ratos Wistar (≅350 g, n=60) foram tratados com ISO (0,3 mg/Kg/dia, s.c.) ou veículo (CT) e co-tratados ou não com o antagonista do receptor AT1, losartan (LOS; 40 mg/Kg/dia, v.o.) ou com o antagonista do receptor MR, espironolactona (ESP; 200 mg/Kg/dia, v.o.) por 7 dias. Em anéis de aorta torácica isolada, realizou-se curva concentração-resposta (CCR) à Fe e alguns anéis foram incubados com o inibidor da NO sintase (NOS), o L-NAME (100 μM), com o varredor de ânion superóxido, a superóxido dismutase (SOD; 150 U/mL) ou com o substrato da NOS para formação de NO, a L-arginina (L-Arg, 5 mM) por 30 minutos antes da CCR à Fe. A produção de NO e de espécies reativas de oxigênio (EROs) foi realizada pela quantificação da fluorescência emitida pelo DAF-2 (8 μM) e DHE (2 μM), respectivamente. Via Western-blot avaliamos a expressão proteica da: isoforma endotelial da NOS (eNOS), fosforilação da eNOS em Ser1177 (Ser1177p-eNOS) e Thr495 (Thr495p-eNOS) e das isoformas 1, 2 e 3 da SOD. Estatística: ANOVA 2-

vias; ∗p≤0,05. Resultados O tratamento com ISO aumentou a resposta máxima (Rmáx) à Fe quando comparado ao grupo CT (CT= 6,8±0,4 vs. ISO=

8,8±0,5∗ mN/mm) e LOS não alterou este padrão de resposta (LOS= 6,4±0,5 vs. ISO+LOS= 8,3±0,2∗ mN/mm). Já o co-tratamento com ESP preveniu esse aumento (ESP= 6,6±0,2 vs. ISO+ESP= 6,3±0,3 mN/mm). O L-NAME aumentou a Rmáx de todos os grupos, abolindo as diferenças entre eles. Já as incubações com SOD ou L-Arg reduziram a Rmáx à Fe

na aorta do grupo ISO (ISO/SOD= 7,0±0,2∗ mN/mm vs. ISO; ISO/L-Arg= 6,6±0,4∗ mN/mm vs. ISO), normalizando-a, sem modificar esta resposta nos grupos CT, ESP e ISO+ESP. O tratamento com ISO causou redução da biodisponibilidade de NO (−60%) e um aumento de EROs (+44%) em aorta e o co-tratamento com ESP foi capaz de prevenir este efeito. A incubação de alguns cortes de aorta com DHE+L-NAME resultou na redução da fluorescência ao DHE no grupo ISO (−33%), mas não em CT, ESP e ISO+ESP. A expressão proteica das SODs 1, 2 e 3 e da Thr495p-eNOS em aorta não foram alteradas entre os grupos. Já a expressão de eNOS total foi significativamente aumentada no grupo ISO (+30%), enquanto a Ser1177p-eNOS foi reduzida (−57%) em comparação ao CT. O co-tratamento com ESP não foi capaz de alterar essa resposta. Conclusão Os resultados sugerem que o tratamento com ISO resulta em aumento da resposta contrátil à Fe associado a estresse oxidativo e redução da biodisponibilidade de NO causados por um desacoplamento da eNOS. Estes efeitos foram prevenidos pela administração de ESP, indicando que a ativação do receptor MR participa das alterações vasculares induzidas pela hiperativação dos β-AR.

Palavras-chaves: Ânion superóxido, Espironolactona, Isoproterenol, Óxido nítrico, Reatividade vascular

Resumo: 02.010

ESTUDO DE ASSOCIAÇÃO DO POLIMORFISMO 4G/5G DO GENE PAI-1 (INIBIDOR DO ATIVADOR DE PLASMINOGÊNIO) COM ACIDENTE VASCULAR ENCEFÁLICO ISQUÊMICO (AVEi) NA REGIÃO DE BELO HORIZONTE.

Autores 1JORGE, C. C. A.

1, ECCARD, B. O. A.

1, SANDRIM, V. C.

1, FERNANDES, K. S. S.

1

Biomarcadores - IEP Santa Casa BH

Apoio Financeiro: Santa Casa de BH, FAPEMIG, CNPq e CAPES

Resumo Introdução O AVEi é um déficit neurológico causado por isquemia no sistema nervoso central. O polimorfismo 4G/5G é um polimorfismo do tipo, inserção/deleção que se encontra na posição -675 da região promotora do gene PAI-1 ou inibidor de ativação do plasminogênio do tipo 1. Essa glicoproteína inibe os ativadores de plasminogênio tecidual (tPA) e do tipo uroquinase (uPA), favorecendo a presença de coágulo de fibrina. Alguns estudos sugerem que o polimorfismo 4G/5G é capaz de modular as concentraçõesde PAI-1 no plasma, o que por sua vez, tem sido associado a doenças cardiovasculares e a complicações tromboembólicas. No entanto, há controvérsias sobre sua associação com a susceptibilidade e etiologia do AVEi. Objetivos O trabalho objetiva determinar, se existe associação do polimorfismo 4G/5G com os pacientes portadores de AVEi crônico da região da grande Belo Horizonte quando comparados a indivíduos saudáveis. Além disso, será avaliado se o polimorfismo também está correlacionado à severidade e aos subtipos ou etiologias do AVEi. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana 126/2009 Métodos O trabalho foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa desta instituição (processo 0104.0.003.000-09/aprovado doc. 126/2009). As amostras de sangue venoso de voluntários do ambulatório de neurologia do Centro de Especialidades Médicas foram coletadas em tubos contendo EDTA. Os grupos controle (n=103) e AVEi (n=153) foram equilibrados por idade (25-85 anos), sexo, raça e fatores de risco (hipertensão, diabetes e tabagismo). O grupo AVEi foi classificado de acordo com a severidade da doença, escala de Rankin modificada (mRI) ( 2, n=58) e de acordo com subtipos: aterotrombótico (n=39), cardioembólico (n=35), lacunar (n=37) e criptogênico (n=18). O DNA foi extraído por “Mini Salting-Out” e a genotipagem do polimorfismo foi realizada por PCR-dissociação em alta resolução (HRM). Análise por tabelas de contingência foi usada para comparações das variáveis nominais (sexo, raça, hipertensão, diabetes e tabagismo). Teste T de “Student” foi usado para variáveis contínuas. As distribuições das frequências genotípicas e alélicas entre os grupos foram avaliadas com teste qui-quadrado (X2) e quanto ao equilíbrio de Hardy-Weinberg. As análises foram realizadas pelo programa prisma 3.0. Resultados Não encontramos diferenças significativas nas frequências genotípicas e alélicas entre pacientes (4G/4G, n=32; 4G/5G, n=69; 5G/5G, n=52; alelo 4G, n=133; alelo 5G, n=173) e indivíduos saudáveis (4G/4G, n=18; 4G/5G, n=46; 5G/5G, n=39; alelo 4G, n=82; alelo 5G, n=124; P>0,05). Não foram encontradas diferenças na distribuição dos genótipos e dos alelos relacionadas à severidade (genótipos p=0,67 e alelos p=0,36) e aos subtipos (genótipos p= 0,52 e alelos p=0,47) de AVEi. Conclusão

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Os resultados sugerem que o polimorfismo 4G/5G do PAI-1 não está relacionado com o risco de AVEi, bem como com à severidade e aos subtipos de AVEi.

Palavras-chaves: Acidente vascular encefálico isquêmico, AVEi, Inibidor do ativador de plasminogênio, PAI-1, Polimorfismo 4G/5G do gene PAI-1

Resumo: 02.011

N-acylhydrazone derivative recovered right ventricular hypertrophy and pulmonary vascular remodeling in monocrotaline-injected rats.

Autores

1ALENCAR, A. K. N. D.

1, PEREIRA, S. L.

1, MAIA, R.

2, FERRAZ, E. B.

1, TESCH, R.

2,

NASCIMENTO, J. H. M. 3, SANT’ANNA, C. M. R. D.

1, FRAGA, C. A. M.

1, BARREIRO, E. J.

1,

SUDO, R. T. 1, ZAPATA-SUDO, G.

1 Programa de Desenvolvimento de Fármacos - ICB - UFRJ,

2

Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho - UFRJ, 3 Departamento de Química - ICE - UFRRJ

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, CAPES, INCT, PRONEX

Resumo Introdução Pulmonary arterial hypertension (PAH) is characterized by enhanced pulmonary vascular resistance and pulmonary vascular remodeling, right ventricular hypertrophy, and increased right ventricular systolic pressure. Objetivos This work investigated the effects of a new N-acylhydrazone derivative, (E)-N'-(3,4-dimethoxybenzylidene)-4-methoxybenzohydrazide (LASSBio-1386), in rats with monocrotaline (MCT)-induced PAH. Código de Experimentação Animal DFBCICB059 Código de Experimentação Humana Métodos Male Wistar rats (200 - 250 g) received a single monocrotaline i.p. injection (60 mg/kg) for PAH induction. Experimental groups were: control, MCT + vehicle (DMSO), MCT + LASSBio-1386 (50 mg/kg p.o.). The animals were treated with vehicle or LASSBio-1386 for 14 days after the onset of disease (n = 6 per group). The following parameters were analyzed: right ventricular systolic pressure (RVSP) and relation between right ventricle and body weight (RV/BW). Transthoracic echocardiography was performed to determine RV wall thickness, pulmonary artery diameter and pulmonary acceleration time (PAT). For pulmonary vascular morphometry, images of terminal arterioles were captured (magnification X40) and arterial area was measured. Ten vessels of comparable size per rat were measured from six rats per group. Percent wall

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thickness was calculated by the following formula: wall thickness (%) = [areaext - areaint/areaext] X 100. Pulmonary artery rings had acetylcholine-induced relaxation determined using isometric tension recording. All data were expressed as mean ± standard error of the mean (SEM). For the comparison of groups, analysis of variance (ANOVA) followed by Newman-Keuls’ test was used and differences were considered significant when P was < 0.05. The protocols used in the present study were approved by Animal Care and Use Committee at Universidade Federal do Rio de Janeiro under DFBCICB059. Resultados The RVSP (mmHg) increased from 26.0 ± 2.0 (control) to 49.5 ± 5.0 (MCT + vehicle; P < 0.05). RV/BW (mg/g) increased from 0.66 ± 0.02 (control) to 1.63 ± 0.16 (MCT + vehicle; P < 0.05). RV wall thickness (cm) increased from 0.10 ± 0.02 (control) to 0.15 ± 0.09 (MCT + vehicle group; P Conclusão LASSBio-1386 effectively reversed right ventricular hypertrophy and pulmonary vascular remodeling in rats with MCT-induced PAH.

Palavras-chaves: pulmonary arterial hypertension, N-acylhydrazone derivative, vascular remodeling, hemodynamics, echocardiography

Resumo: 02.012

O papel do tecido adiposo perivascular no aumento da contratilidade à fenilefrina em aorta de ratos tratados com isoproterenol

Autores 1SILVA, N. S.

1, VICTÓRIO, J. A.

1, DAVEL, A. P.

1 Departamento de Biologia Estrutural e

Funcional - UNICAMP


Resumo Introdução O tratamento de animais com doses diárias de isoproterenol (ISO), um agonista β-adrenérgico (β-AR) não seletivo, é usado como um modelo para estudo dos efeitos da hiperativação β-AR. Dentre os efeitos vasculares ocasionados por este destaca-se o desenvolvimento de disfunção endotelial e aumento da contratilidade à fenilefrina (Fe) em aneis de aorta de ratos, e, dados do nosso grupo de pesquisa sugerem que a administração in vivo de espironolactona (ESP), um antagonista do receptor MR, reverte estas alterações. Sabe-se que o tecido adiposo perivascular (PVAT) fisiologicamente libera fatores de ação anti-contrátil. Mas, em situações patológicas, pode haver um aumento da síntese de aldosterona e/ou glicocorticoides pelo PVAT, e estes via ativação do receptor MR nas células de músculo liso vascular podem induzir uma sinalização que culmina em estresse oxidativo e disfunção endotelial. Objetivos Avaliar o papel do PVAT na modulação da contratilidade da aorta de ratos tratados com ISO, com ênfase no envolvimento da ativação do receptor MR. Código de Experimentação Animal

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2953-1 Código de Experimentação Humana Métodos Protocolo CEUA: 2953-1. Ratos Wistar (~350 g; n=30) foram tratados com ISO (0,3 mg/kg/dia, s.c.) ou veículo (grupo controle, CT) e co-tratados ou não com ESP (200 mg/kg/dia, v.o.) por 7 dias. Foi realizada a reatividade em anéis de aorta torácica isolada: com PVAT e endotélio (PVAT+/E+); sem PVAT e com endotélio (PVAT-/E+); com PVAT e sem endotélio (PVAT+/E-) ou sem PVAT e endotélio (PVAT-/E-). Nestes anéis realizou-se curvas concentração-resposta à acetilcolina (ACh, 10-9 a 10-5 M), à Fe (10-9 a 10-5 M) e ao nitroprussiato de sódio (NPS; 10-10 – 10-6 M). Os dados estão expressos

como médiaEPM. Estatística: *p Resultados A presença de PVAT não influenciou o relaxamento da ACh e este relaxamento foi abolido (≤10%) nos anéis E-, independente do PVAT. Já o relaxamento induzido por NPS não foi influenciado nem pelo PVAT nem pelo endotélio em todos os grupos experimentais avaliados. Os anéis de aorta PVAT-/E+ do grupo CT apresentaram aumento da sensibilidade (LogEC50) (PVAT+/E+= -6,66 ± 0,05 vs. *PVAT-/E+= -6,90 ± 0,07) e da resposta máxima (Rmax) à Fe (PVAT+/E+= 72,4 ± 5,7 vs. *PVAT-/E+= 96,1 ± 2,5 % da contração ao KCl 75mM) em comparação aos anéis PVAT+/E+ do mesmo grupo, indicando o efeito anti-contrátil do PVAT. Entretanto, aorta PVAT-E+ do grupo ISO houve aumento apenas da sensibilidade (PVAT+/E+= -6,70 ± 0,04 vs. *PVAT-/E+= -7,07 ± 0,05); e não da Rmax à Fe neste grupo em comparação aos aneis PVAT+E+ (PVAT+/E+= 93,4 ± 4,2 vs. PVAT-/E+= 92,9 ± 2,5 % da contração ao KCl 75mM). Já quando os animais foram co-tratados com ISO e ESP, o efeito anti-contrátil do PVAT foi reestabelecido de maneira que, os anéis de aorta deste grupo apresentaram resposta contrátil à Fe (LogEC50 e Rmax) similar ao CT. A remoção do endotélio aumentou a resposta contrátil à Fe de anéis com ou sem PVAT em todos os grupos estudados, abolindo as diferenças entre eles. Conclusão Os dados até o momento sugerem que a hiperativação dos receptores β-AR pode aumentar a secreção um fator ativador do receptor MR pelo PVAT, que poderia contribuir para o aumento da resposta contrátil vascular neste modelo experimental de maneira dependente do endotélio.

Palavras-chaves: PVAT, contratilidade , fenilefrina, tratados, isoproterenol

Resumo: 02.013

THE SCARB1 SNP rs5888 DECREASES ADIPOSITY INDEXES IN WOMEN: A STUDY IN A LARGE BRAZILIAN POPULATION

Autores

1ZAGO, V. H. D. S.

1, PARRA, E. S.

1, SCHERRER, D. Z.

1, PANZOLDO, N. B.

1, VIRGÍNIO, V. W.

D. M. 1, VENDRAME, F.

2, NUNES, V. S.

2, NAKANDAKARE, E. R.

2, QUINTÃO, E. C. R.

1,

FARIA, E. C. D. 1 Patologia Clínica - Unicamp,

2 Clínica Médica - USP

Apoio Financeiro: FAPESP (06/60585-9), CNPq (481863/2011-7)

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Resumo Introdução Scavenger receptor class B type I (SR-BI) is a well-described receptor for high-density lipoproteins (HDL), but little is known about its function and regulation in adipose tissue. SCARB1 gene encodes SR-BI, and the single nucleotide polymorphism (SNP) rs5888 was previously related to variations on plasma lipids and lipoproteins in different populations, but no information on its effects on adiposity is available in humans. Objetivos This study was developed to detect the association of rs5888 SNP with adiposity clinical markers and plasma lipids in a representative large Brazilian population sample. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana 038/2011 Métodos Five-hundred and ninety normolipidemic and asymptomatic volunteers who underwent health checkups in primary care centers in Campinas/São Paulo were recruited to participate in a population study (Fapesp # 2006/60585-9), approved by the local ethics committee (#038/2011). The participants are from both sexes (F=56%; M=44%), aged from 20 to 75 years, and have body mass index (BMI) ranging from 15 to 30 Kg/m2. The genomic DNA was extracted from peripheral blood cells and the SNP detected in the OpenArray® Real Time PCR Platform (Applied Biosystems). Serum Cholesterol, Triglycerides, HDL-C and LDL-C (mg/dL) were determined by enzymatic methods in an automated system (Hitachi, Roche). Anthropometric measurements as body weight, height, BMI, waist and hips circumference were taken, and body adiposity index (BAI) calculated. The genotypic frequency and comparative analyses between the alleles were obtained in the SPSS 17.0 software. Resultados The frequencies of the genotypes in the total population were: CC, 42%; CT, 44%, TT, 14%. We compared the groups according to the absence (CC group, n=245) or the presence (CT+TT group, n=342) of the minor allele T. No significant differences were found regarding lipids and lipoproteins, but in the presence of the T allele a significant decrease in the waist circumference to height ratio (CC, 0.47±0.06; CT+TT, 0.45±0.06; p=0.02) and in the BAI (CC, 27±5; CT+TT, 26±5; p=0.01) were observed. This differences are due to the significant reductions found in females (n=329; CC, n=144; CT+TT, n=185): waist (CC, 75±10; CT+TT, 73±10; p=0.016), hips circumference (CC, 96±9; CT+TT, 93±10; p=0.028) and BAI (CC, 30±4; CT+TT, 28±5; p=0.008). Conclusão The SNP rs5888 of SCARB1 gene had a beneficial impact on adiposity in all the female participants, suggesting a role of adipose tissue SR-BI in regulation of body adiposity.

Palavras-chaves: Adipose tissue, Scavenger receptor class B type I, Single nucleotide polymorphism

Resumo: 02.014

ASSOCIAÇÃO INVERSA ENTRE A CAPACIDADE ANTIOXIDANTE DA HDL E A ATEROSCLEROSE SUBCLÍNICA

Autores

1PANZOLDO, N. B.

1, VIEIRA, I. C.

1, GOMES, É. I. L.

1, ALEXANDRE, F.

1, PARRA, E. S.

1,

ZAGO, V. H. D. S. 1, COLLETES, J. H. G.



1,

FARIA, E. C. D. 1 Patologia Clínica - UNICAMP,

2 Clínica Médica - USP

Apoio Financeiro: FAPESP (06/60585-9), FAPESP (2012/01645-2), CNPq (481863/2011-7)

Resumo Introdução A lipoproteína de alta densidade (HDL) é considerada ateroprotetora por suas diversas propriedades funcionais. Estudos demonstraram que a sua propriedade de promover o efluxo de colesterol celular pode ser inversamente associada à espessura íntimo-medial de carótidas (cIMT), independentemente do colesterol da HDL. Objetivos Caracterizar e relacionar a capacidade antioxidante da HDL com sua composição química em indivíduos com aumento ou redução de concentrações plasmáticas de HDL-colesterol (C), e também associá-la à cIMT, um marcador de aterosclerose subclínica, nos dois grupos. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana 1260/2010 Métodos Vinte voluntários, assintomáticos, de ambos os sexos (M=6/F=14), com idades entre 20 e 70 anos foram classificados em 2 grupos: Hiperalfalipoproteinêmicos (Hiper, HDL-C≥ 68mg/dL, n=10) e Hipoalfalipoproteinêmicos (Hipo, HDL-C < 40mg/dL, n=10). A HDL plasmática foi isolada por ultracentrifugação em gradiente de densidade. Colesterol total (CT), colesterol livre (CL), triglicérides (TG), fosfolípides (FL) e ApoA-I foram determinados por métodos enzimático-colorimétricos convencionais; colesteril éster (CE) foi calculado [(CT – CL)*1,67)] (J Lipid Res. 22:339, 1981). A capacidade da HDL de proteger a LDL contra oxidação foi avaliada em ensaio cinético (Arterioscler Thromb Vasc Biol. 27:1843, 2007). cIMT foi determinada por ultrassonografia Doppler. Teste de Mann-Whitney foi utilizado para as comparações e para as correlações o de Spearman. Aprovação Comitê de Ética em Pesquisa da Faculdade de Ciências Médicas da Unicamp, processo # 1260/2010. Resultados A HDL Hiper é mais rica do que a Hipo em ApoA-I (50% da massa contra 40% em Hipo, p=0,035) e mais pobre em CL (3% contra 4% em Hipo, p=0,023). A capacidade da HDL de proteger a LDL contra a oxidação foi semelhante entre Hiper e Hipo (inibição de 36 ± 21 e 46 ± 32 %, respectivamente, p=0,579) e se correlacionou positivamente com CL em ambos (r=0,68, p=0,03, Hiper e r=0,82, p=0,004, Hipo). O cIMT foi similar entre os grupos (p=0,315) mas em Hiper a capacidade antioxidante se correlacionou forte e inversamente com o cIMT (r=-0,78, p=0,008). Conclusão Neste estudo, a associação ateroprotetora entre a capacidade antioxidante da HDL com o cIMT em Hiper pode estar

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relacionada a seu maior conteúdo em ApoA-I mas não a seu conteúdo em colesterol. A investigação desta ateroproteção continua em nosso laboratório através de medidas de outras propriedades funcionais da HDL, como a do efluxo de colesterol celular, e de fatores que as modulam.

Palavras-chaves: aterosclerose subclínica, capacidade antioxidante, lipoproteína de alta densidade

Resumo: 02.015

Efeito em curto prazo da introdução e suspensão de niacina sobre perfil lipídico, atividade inflamatória e função endotelial em pacientes com HDL baixo.

Autores 1FIGUEIREDO, V. N.

2, VENDRAME, F.

1, COLONTONI, B.

1, QUINAGLIA, T.

2, FARIA, E. C. D.

1, SPOSITO, A. C.

1 Clínica Médica - UNICAMP,

2 Patologia Clínica - UNICAMP

Apoio Financeiro: FAPESP e CNPq

Resumo Introdução A niacina promove suas ações metabólicas, vasomotoras e anti-inflamatórias via uma plêiade de receptores, em particular o GPR109A presente nos adipócitos, em leucócitos e em células de langerhans. Nas células endoteliais, a niacina promove a liberação de óxido nítrico (NO) promovendo vasoditalação. Além disso, por meio da ativação da ciclooxigenase-1 promove a formação de prostaglandina D2 (PGD2) e, assim, induz vasodilatação cutânea e sistêmica. O laropipranto reduz o rubor facial, principal efeito colateral da niacina, inibindo a função vasodilatadora das PGD2. Objetivos Avaliar comparativamente a resposta em curto prazo do tratamento com a niacina com (NL) ou sem (N) a adição de laropripanto sobre o efeito vasodilatador. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana 845/2011 Métodos Dezoito pacientes com HDL baixo foram selecionados em Unidades Básicas de Saúde da cidade de Campinas, SP, Brasil. Todos os pacientes receberam ambas as medicações 1g/dia por 7 dias intercalado por um período de washout de igual duração. Coletas de sangue e hiperemia reativa da artéria braquial (FMD) foram realizadas na admissão, após tratamentos e após washout (CEP no:845/2011). Resultados Em ambos os grupos tratados com niacina houve aumento da concentração do HDL colesterol (N +9% p=0,01 e NL +6%

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p=0,01) e redução do tamanho da HDL (N -5% p=0,001 e NL -6% p=0,001). Após washout a concentração e tamanho da HDL retornaram ao valor basal. Apesar da variação do tamanho da HDL após ambos os tratamentos com niacina, não houve variação significante da atividade da proteína de transferência de esteres de colesterol (N, p=0,62 e NL p=0,08). Houve redução do triglicérides em ambos os grupos (N -20% p=0,028 e NL -19% p=0,04). Em ambos os grupos houve aumento significante da FMD (N +37,5% e NL +33,3%; p < 0,01 intragrupo e p > 0,05 intergrupo), da bilirrubina total (N +23% p=0,04 e NL +21% p=0,01) e da bilirrubina direta (N +200% p=0,001 e NL +183% p=0,0001).Houve também redução da proteína C-reativa em ambos os grupos (p < 0,0001). Não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos com relação à variação do HDL colesterol, tamanho da HDL, bilirrubinas, pressão arterial sistêmica ou FMD. Conclusão O efeito endotelial e pelo menos parte do efeito fenotípico da niacina pode ser observado em somente uma semana de tratamento e o uso concomitante de laropipranto não influencia esse efeito.

Palavras-chaves: aterosclerose, função endotelial, HDL-colesterol, niacina

Resumo: 02.016

ESTIMATIVA DA VARIAÇÃO DO POTENCIAL TRANSMEMBRANA EM MIÓCITOS VENTRICULARES ESTIMULADOS COM CAMPO ELÉTRICO EXTERNO: COMPARAÇÃO ENTRE MODELOS ELETROMAGNÉTICOS

Autores 1MILAN, H.

1, OSHIYAMA, N.

2, BASSANI, R.

1, BASSANI, J.

1 Departamento de Engenharia

Biomédica - DEB/UNICAMP, 2 Centro de Engenharia Biomédica - CEB/UNICAMP

Apoio Financeiro: CAPES/CNPq (302996/2011-7)/FAPESP (2011/19805-3).

Resumo Introdução Campos elétricos externos ( E ) são aplicados ao coração visando excitação celular ou reversão de arritmias cardíacas. Para que ocorra excitação da célula cardíaca, é necessário que o E induza, numa área crítica da membrana, uma variação limiar do potencial transmembrana ( ΔV L ), que pode ser estimada por meio de modelos eletromagnéticos. No entanto, os valores de ΔV estimados com modelos numéricos e analíticos (que consideram a forma geométrica real da célula e a aproximam por uma forma regular, respectivamente) podem diferir em até 20%. Neste estudo, ΔV L foi estimada a partir de valores experimentais de E limiar e das dimensões celulares, e medida em miócitos por patch-clamp. Objetivos Estimar valores de ΔV L com modelo eletromagnético analítico, que descreve a célula como um esferóide prolato (EP), e modelos numéricos bidimensional (2D) e tridimensional (3D), usando o método dos elementos finitos (MEF), e compará-los com os valores medidos experimentalmente. Código de Experimentação Animal Prot. 2942-1(K) Código de Experimentação Humana

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Métodos O protocolo de uso de animais foi aprovado pela CEUA/IB/UNICAMP (Prot. 2942-1(K)). Miócitos ventriculares esquerdos foram isolados enzimaticamente de ratos Wistar ( Rattus norvegicus ) machos adultos (5 meses; ~350 g). Foram definidos 6 grupos (8 células cada) com relação ao ângulo entre o eixo maior da célula e a direção de E : 0º-15º, 15º-30º, 30-45º, 45º-60º, 60º-75 e 75º-90º. A partir da imagem do miócito, via uma câmara CCD acoplada ao microscópio, foram medidas suas dimensões, as quais foram utilizadas para modelamento da geometria 2D e 3D da célula com o programa Autodesk Inventor Professional 2013. Para a aproximação 3D, considerou-se constante a área de secção longitudinal ao longo do eixo z, cujo comprimento foi assumido como 14 μm. As malhas 2D e 3D e as simulações numéricas foram feitas com os programas Gmsh 2.6.2 e ElmerGui 7.0, respectivamente. A modelagem analítica foi feita com MATLAB 7.1. Os valores experimentais de ΔV L foram determinados no mesmo tipo celular por whole-cell current clamp . Os valores foram comparados com os testes de Kruskal-Wallis e Dunn. Resultados O valor estimado de ΔV L variou com o método (p 0,05). Conclusão Por gerarem estimativas de ΔV L comparáveis aos valores determinados experimentalmente, os modelos MEF 3D e EP parecem ser adequados para estimativa desta variável em miócitos ventriculares de ratos adultos. Neste caso, não haveria vantagens em se utilizar MEF 3D para calcular ΔV L , já que EP resulta em estimativas semelhantes e é mais simples do ponto de vista computacional.

Palavras-chaves: Método dos elementos Finitos, Miócitos ventriculares, Modelo analítico, Modelos eletromagnéticos, Potencial transmembrana

Resumo: 02.017

EFEITO DA PERFUSÃO DE LACTATO SOBRE A EXPRESSÃO GÊNICA DE INTERMEDIÁRIOS DO METABOLISMO ENERGÉTICO E SEU EFEITO NA ATIVIDADE CONTRÁTIL DE CORAÇÕES DE RATOS

Autores 1GABRIEL-COSTA, D.

1, CUNHA, T. F.

1, PAIXÃO, N. A.

1, BECHARA, L. R. G.

2, BARRETO-

CHAVES, M. L. 1, BRUM, P. C.

1 Biodinâmica do movimento - USP,

2 ICB Anatomia - USP


Resumo Introdução O lactato é uma importante fonte energética para o coração que oxida 100% do substrato captado. Recentemente, demonstrou-se em linhagem de células musculares esqueléticas (L6), que o mesmo também regulava a expressão de genes ligados à biogênese mitocondrial e de intermediários do seu metabolismo. Porém, o mesmo efeito até o momento não foi investigado no músculo cardíaco.

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Objetivos O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da perfusão de lactato sobre a expressão gênica de intermediários do metabolismo energético cardíaco e sobre a atividade contrátil em corações de ratos Wistar normais. Código de Experimentação Animal 2011/55 Código de Experimentação Humana Métodos Esse estudo está de acordo com o “Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (National Institute of health)” e foi aprovado pelo comitê de ética da Universidade de São Paulo (#2011/55). Utilizando o modelo de Langendorff, as soluções de Krebs Henseleit (KH) ou KH + lactato (20mM) foram perfundidas em corações de ratos machos hígidos (250-300g) durante diferentes tempos (0, 30, 60 e 120 min), onde as medidas de pressão de perfusão (PP), pressão desenvolvida, frequência cardíaca, + dP/dt máx, - dP/dt máx foram avaliadas. Ao final da perfusão o ventrículo esquerdo foi dissecado e

congelado para posterior análise. A quantificação das expressões gênicas de PPAR, PGC1-alfa;, COXIV, MCT1, MCT4 e LDH foram feitas por RT-PCR em tempo real. Os valores dos genes-alvo foram corrigidos por um gene controle (ciclofilina) e os resultados foram normalizados em relação ao grupo controle arbitrariamente definido como uma unidade (perfusão sem lactato). Resultados Não houve mudança significativa (P > 0,05) no pH do pefusato durante toda a duração do experimento quando amostras controle foram comparadas às tratadas; 0 min: 7.7 ± 0.1 vs. 7.4 ± 0.0; 30 min: 7.7 ± 0.1 vs. 7.6 ± 0.; 60 min: 7.6 ± 0.1 vs. 7.7 ± 0.0; 120 min: 7.8 ± 0.0 vs. 7.6 ± 0.1 controle vs. lactato, respectivamente. A concentração de lactato no tecido do grupo lactato em relação ao grupo controle foi significativamente maior (P < 0.05) em 120min de perfusão (controle: 1,2 ± 1,2 mM vs. lactato: 4,8 ± 0,7 mM). Como era previsto houve um aumento significativo na expressão de todos os RNAm avaliados, com exceção da COXIV, sendo essa elevação mais expressiva após 120 min de perfusão (PPARdelta; 2,3 vezes, PGC1-alfa; 4,5 vezes, MCT1 8,0 vezes, MCT4 4,0 vezes e LDH 13,7 vezes). Não houve modificação da contratilidade cardíaca durante a perfusão (P > 0,05). No entanto, a PP reduziu significativamente após 60 min de perfusão (controle: 73,6 ± 9,1 mmHg e lactato: 27,9 ± 5,4 mmHg, P < 0,05) e se estabilizou após 120 min (controle: 74,2 ± 10,3 mmHg e lactato 27,8 ± 6,8 mmHg). Conclusão Como previsto, no coração, o lactato é um modulador da expressão de genes envolvidos no aumento da densidade mitocondrial e de seus intermediários metabólicos. A sua perfusão teve pouco efeito na contratilidade muscular cardíaca e não houve influência da acidificação do meio na função contrátil. No entanto, lactato promoveu vasodilatação das artérias coronárianas. Esses resultados demonstram que em alta concentração, o lactato é um modulador da bioenergética do coração e facilita a oxigenação cardíaca. Esses dados podem servir como base para futuros estudos que avaliem um possível efeito cardioprotetor do lactato na doença cardíaca isquêmica e em eventos isquêmicos agudos, bem como, participar do remodelamento energético que ocorre com o treinamento físico.

Palavras-chaves: Biogênese mitocondrial, Contratilidade cardíaca, Expressão gênica, Lactato, Langendorff

Resumo: 02.018

BIOFILME COMO CARACTERÍSTICA DE PATOGENICIDADE EM AGENTES DE CANDIDEMIA NOSOCOMIAL

Autores 1SANTOS, F. A. G.

1, LEITE, M. C.

1, SÁ, S. R.

1, NEVES, R. P.

1, LIMA-NETO, R. G.

1, MACÊDO,

D. P. C. 1 MICOLOGIA MÉDICA - UFPE


Resumo Introdução A frequência de infecções hematogênicas por leveduras do gênero Candida (candidemia) tem aumentado consideravelmente, especialmente em Unidades de Terapia Intensiva (UTI), estando associadas a quase 80% de todas as infecções fúngicas nosocomiais. Além disso, o aumento na prevalência destas infecções envolve vários fatores de risco: uso de antibióticos, terapia imunossupressora, nutrição parenteral e uso de dispositivos invasivos. A formação de estruturas multicelulares resistentes denominadas biofilmes na superfície destes dispositivos contribui para estabelecimento e disseminação da infecção fúngica. Objetivos Realizar o diagnóstico micológico das amostras clínicas; identificar os isolados de Candida por taxonomia clássica e avaliar como fator de virulência a capacidade de formação de biofilmes dos isolados. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana CAAE 01847812.0.0000.5208 Métodos Após aprovação pelo Comitê de Ética em Pesquisa com seres humanos do Centro de Ciências da Saúde da UFPE (Plataforma Brasil-CAAE 01847812.0.0000.5208) foram realizadas coletas de sangue venoso em pacientes de ambos os sexos e com idade entre 22 e 82 anos, internados em UTIs de Hospitais públicos da cidade de Recife, segundo solicitação médica. Após a obtenção das amostras, foi realizado exame direto do sangue a fresco e/ou corado com Giemsa. Concomitantemente, as amostras clínicas foram semeadas em duplicata em ágar Sabouraud (Difco) adicionado de 50 mg/L de cloranfenicol contido em placas de Petri, mantidas à temperatura de 30ºC e 37ºC por até 15 dias. Após o surgimento das colônias, estas foram purificadas e identificadas. A caracterização fenotípica foi realizada segundo critérios morfológicos (lâminas contendo fragmentos da cultura crescidas em meio ágar Sabouraud e corados com lactofenol blue ), bioquímicos (produção de urease e ácido) e fisiológicos (assimilação de fontes de carbono e nitrogênio e potencial fermentativo). Para avaliação da capacidade de formação de biofilme, os isolados mantidos em ágar Sabouraud a 35ºC por 24 horas foram suspensos em salina, com concentração final de 106 UFC/mL. Desta suspensão, 20µl foram inoculados em 180µl de Sabouraud líquido contido nos poços de microplacas, mantidas a 35ºC por 24h, sem agitação. Após o tempo de incubação, o conteúdo foi aspirado, os poços lavados com água destilada e sobre estes, adicionado safranina para avaliação de acordo com a intensidade da coloração. Resultados No período de agosto de 2012 a março de 2013 foram analisados 26 episódios de candidemia identificados pelo isolamento de espécies de Candida em hemocultura, de 20 pacientes internados em hospitais públicos terciários da cidade do Recife. Quanto à etiologia, Candida parapsilosis foi a espécie mais frequentemente isolada (11 casos), seguido por C. albicans (7 casos), C. glabrata (2 casos), C. tropicalis (2 casos), C. guilliermondi (2 casos), C. krusei (1 caso) e C. famata (1 caso). Quanto à produção de biofilme, as amostras demonstraram graus variáveis, com 12 expressando fraca intensidade, 5 intensidade moderada, 6 forte e 3 isolados não apresentaram capacidade de formação de biofilme. Dos

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isolados com forte capacidade de formar estes agregados resistentes, destacam-se as espécies C. albicans e C. parapsilosis . Estes dados corroboram com a literatura, que afirma ser C. parapsilosis mais apta a desenvolver tais estruturas. Conclusão O conhecimento de espécies emergentes de Candida na candidemia nosocomial além de sua capacidade em produzir biofilmes, viabiliza o diagnóstico e a conduta terapêutica junto aos pacientes.

Palavras-chaves: biofilme, candidemia, patogenicidade

Resumo: 02.019

ABSTINÊNCIA AO ETANOL ATIVA O SISTEMA RENINA ANGIOTENSINA SISTÊMICO, INDUZ ESTRESSE OXIDATIVO E ALTERA A FUNÇÃO VASCULAR

Autores

1GONZAGA, N. A.

4, MECAWI, A. S.

4, ANTUNES-RODRIGUES, J.

3, PADOVAN, C. M.

5,

MARTINIS, B. S. D. 2, TIRAPELLI, C. R.

1 Farmacologia - FMRP-USP,

2 Enfermagem Psiquiátrica e

Ciências Humanas - EERP-USP, 3 Psicologia e Educação - FFCLRP-USP,

4 Fisiologia - FMRP-USP,

5

Química - FFCLRP-USP


Resumo Introdução A Abstinência ao Etanol (AE) é uma complicação de curta duração desenvolvida após a interrupção parcial ou total do consumo crônico de etanol. Objetivos Investigar os efeitos da abstinência ao etanol sobre o sistema renina-angiotensina-aldosterona (SRAA) e a função vascular Código de Experimentação Animal 11.1.1212.53.5 Código de Experimentação Humana Métodos Ratos Wistar (250g) foram divididos em 3 grupos: Controle (CTR): os animais receberam água ad libitum por 23 dias; Etanol (EtOH): o tratamento crônico com etanol foi iniciado com uma solução de etanol 3% (vol./vol.), sendo gradualmente aumentada a cada três dias para 6% (4º dia) e 9% (7º dia em diante), mantendo-se esta concentração até o 21° dia; Abstinência ao Etanol (AE): os animais foram tratados da mesma maneira que o grupo EtOH até o 20º dia, neste dia a

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solução de etanol 9% foi retirada e retornada no dia seguinte (21º dia) por apenas 2h; após o término deste período, os animais receberam água até o dia do teste (23º dia), garantindo assim, o quadro de abstinência por 48h. Para avaliar o comportamento, os animais foram testados no Labirinto em Cruz Elevado. Os níveis de plasmáticos de (a): a) etanol foram determinados por cromatografia gasosa; b) corticosterona (CORT), angiotensina I e II (ANGI e II), vasopressina (AVP) e peptídeo natriurético atrial (ANP) por radioimunoensaio; c) aldosterona (ALDO), renina (REN) e espécies reativas de oxigênio ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) por ELISA; d) atividade da NAD(P)H em aorta e leito mesentérico pelo método de lucigenina; d) de sódio (Na+) e potássio (K+) por fotometria de chama; e) osmolalidade foi medida pelo abaixamento do ponto de congelamento da água. Foi realizado reatividade vascular em aorta isolada para avaliar as respostas para angiotensina II (ANGII), fenilefrina, cloreto de potássio, acetilcolina e nitroprussiato de sódio (NPS). Diferenças estatísticas foram calculadas por ANOVA seguida de Bonferroni; foi considerado p Resultados A etanolemia (mg/dL) média no grupo AE foi 3±0,2 (n=10) e 154±14 (n=10) no grupo EtOH. Houve diminuição significativa da porcentagem de entrada (%FA=19,8±5,4) e tempo dispendido nos braços abertos (%TA=5,2±2,0; n=7) do grupo AE comparado com o CTR (%FA=35,7±3,6; %TA=21,5±5,9; n=7). Houve aumento da corticosterona (µg/µL) e da ANGII (pg/mL) no grupo AE (CORT=5,2±1,0; n=7; ANGII=58,5±6,3; n=11) comparado com o CTR (CORT=3,4±0,7; n=7; ANGII=24,2±2,5; n=13). Houve aumento de TBARS (nmol/mL) no grupo AE (52,1±5,8; n=10) comparado com o CTR (26,8±2,6; n=9). Houve aumento da atividade da NAD(P)H no grupo AE (431,7±78,6; n=7) comparada com o controle (231,6±29,8; n=7). Houve redução da contração induzida pela ANGII em anéis de aorta sem endotélio (0,42±0,04g;n=4) quando comparado com o CTR (0,72±0,11g;n=5); o mesmo perfil de resposta foi observado para a fenilefrina e para o cloreto de potássio. Houve aumento da % de relaxamento induzido pelo NPS no grupo AE (134,5±3,6%; n=8) comparado com o CTR (119,8±2,6%;n=11). Não houve diferença significativa na concentração de Na+, K+, AVP, ANP, renina, aldosterona, ANGI no plasma e ANGI e II no leito mesentérico entre os grupos avaliados. Conclusão Nossos resultados mostram que a abstinência ao etanol induz ansiedade, estimula o SRAA sistêmico, induz estresse oxidativo e altera a função vascular independente de endotélio.

Palavras-chaves: Abstinência ao etanol, Sistema renina-angiotensina-aldosterona, Estresse oxidativo, Reatividade vascular

Resumo: 02.020

Retículo sarcoplasmático e canais de Ca2+ tipo-L possuem papel na regulação da atividade inotrópica do vaso dorsal do T.molitor

Autores 1FIM NETO, A.

1, OLIVEIRA, P. X.

1, BASSANI, J. W. M.

1 Departamento de Engenharia Biomédica

- Unicamp

Apoio Financeiro: CNPq (163911/2012-6, 302996/2011-7)

Resumo Introdução O coração do inseto (vaso dorsal) do Tenebrio molitor (Linnaues, 1758) é um modelo para pesquisa e ensino de fisiologia. Em trabalho anterior em nosso laboratório, foi demonstrada influência do aumento da concentração externa de Ca

2+ ([Ca

2+

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] o na atividade inotrópica. Em mamíferos, tanto a entrada de Ca 2+

via canais de Ca 2+

tipo-L quanto a liberação do íon do retículo sarcoplasmático (RS) constituem fatores determinantes do efeito inotrópico positivo do aumento de [Ca

2+ ] o . No

inseto estes aspectos ainda não estão minimamente esclarecidos. Objetivos Estudar a influência redução da carga de Ca 2+ do RS e do bloqueio dos canais de Ca 2+ tipo-L, na atividade inotrópica do vaso dorsal do inseto T. molitor na presença de diferentes [Ca 2+ ] o/sub>.

Código de Experimentação Animal

Código de Experimentação Humana

Métodos

Foram utilizados besouros adultos, de ambos os sexos, mantidos em colônias no Centro de Engenharia Biomédica da UNICAMP e alimentados com dieta à base de cereais. Embora a lei

brasileira não requeira parecer da Comissão de Ética para estudo experimental com invertebrados, todos os cuidados foram tomados para evitar sofrimento aos animais e/ou uso no número

exagerado de insetos. Após decapitação, o abdômen ventral foi aberto e dele retirados órgãos e glândulas para expor o vaso dorsal. A preparação biológica foi colocada em uma câmara de

perfusão em um sistema de microscopia para ampliação e focalização da imagem em uma câmera CCD que, por meio de uma placa de aquisição, foi conectada a um computador. Vídeos

do vaso dorsal foram gravados para processamento posterior em Matlab 6.5 para medição do diâmetro luminal, redução do diâmetro luminal, diâmetro diastólico e porcentagem da redução

do diâmetro luminal em relação ao diâmetro diastólico. Uma gratícula com marcações micrométricas foi utilizada para calibração. Foram feitas duas intervenções inotrópicas: a) a preparação

foi perfundida com solução fisiológica com [Ca 2+ ] o de 4 mM, sob estimulação a 1,0 Hz, e foram gravados dois vídeos, um sem e outro na presença de 10

mM de cafeína no líquido de perfusão; b) a preparação, estimulada a 1,5 Hz, foi perfundida com soluções fisiológicas de 0,5 e 8,0 mM de [Ca 2+ ] o . Em

seguida, foi aplicado 1 µM de verapamil em ambas soluções. Foram gravados dois vídeos para o grupo controle (0,5 e 8,0 mM de [Ca 2+ ] o e dois para o

grupo tratado com verapamil. Foram utilizados o teste-t de student e a análise de variância bifatorial para teste de significância.

Resultados

A incubação do coração com cafeína, que depleta a carga de Ca 2+ do RS, produziu um efeito inotrópico negativo, diminuindo a redução do diâmetro sistólico luminal de

56,32 ± 4,85 para 35,05 ± 3,86 % (n = 7, p < 0,05). Verapamil produziu um efeito inotrópico negativo (n = 7, p < 0,05), diminuindo a redução do diâmetro sistólico de 37,00 ± 5,15 para 28,71

± 3,41 % em 0,5 mM de [Ca 2+ ] o ,e de 55,00 ± 4,84 para 39,57 ± 4,72 % em 8,0 mM de [Ca 2+ ] o .

Conclusão

Como acontece em mamíferos, este estudo sugere que tanto o RS quanto os canais de Ca 2+ tipo-L estejam envolvidos na regulação da atividade inotrópica do vaso dorsal.

Palavras-chaves: Atividade inotrópica, Tenebrio molitor, Vaso dorsal

Resumo: 02.021

AVALIAÇÃO DA VASODILATAÇÃO DEPENDENTE DO ENDOTÉLIO EM ANÉIS DE AORTA E VEIA CAVA DE RATOS SUBMETIDOS AO INFARTO DO MIOCÁRDIO.

Autores 1PERAZZA, L. R.

1, COUTO, G. K.

1, ROSSONI, L. V.

1 Fisiologia e Biofísica - ICB, USP

Apoio Financeiro: CNPq e FAPESP

Resumo Introdução A disfunção endotelial, caracterizada por um desequilíbrio na liberação de fatores contráteis (EDCF) e vasodilatadores (EDRF) derivados do endotélio, foi identificada tanto no leito arterial quanto no venoso em diversas doenças cardiovasculares. Tal disfunção foi descrita como um processo progressivo e dependente do tempo no leito arterial de ratos com infarto do miocárdio (IM). No entanto, ainda há muito a ser esclarecido sobre as repercussões do IM no cenário endotelial tanto no leito arterial quanto no venoso. Objetivos Avaliar a função vasodilatadora dependente do endotélio na aorta (AO) e veia cava inferior (VCI) de ratos pós-IM. Código de Experimentação Animal 114/07/CEUA Código de Experimentação Humana Métodos O projeto foi aprovado no comitê de ética em experimentação animal do ICB/USP como inclusão ao certificado 114/07/CEUA em 08.01.2013. Ratos Wistar, com 8 semanas de idade, foram submetidos à cirurgia de indução do infarto por meio da ligadura de artéria coronária descendente anterior (IM, N: 20) ou à cirurgia fictícia (SHAM, N: 20). Após 4 semanas, os animais foram anestesiados para realização do cateterismo a fim de avaliar a hemodinâmica tanto arterial quanto ventricular esquerda (VE), utilizando parâmetros tais como: Pressão arterial sistólica (PAS), pressão sistólica do VE (PSVE), primeira derivada de pressão pelo tempo positiva (dP/dt+) e pressão diastólica final do VE (PDfVE). Em seguida, os animais foram mortos para retirada da AO, VCI, coração, pulmão (PU), fígado (F) e tíbia. A área de infarto (AI) foi mensurada pela planimetria do VE, a hipertrofia do ventrículo direito (VD) e VE, bem como congestão pulmonar e hepática pós-IM foram avaliadas pela razão dos pesos úmidos desses órgãos pelo comprimento da tíbia. Anéis de AO e VCI foram montados em um banho de órgãos e curvas concentração-resposta à acetilcolina (ACh, 10 -9 –10 -5 M) e ao nitroprussiato de sódio (NPS, 10 -11 –10 -5 M) foram realizadas em anéis pré-contraídos com U46619. Os resultados estão apresentados como média ± erro padrão (EPM). Análise estatística utilizada: teste-t de Student ou ANOVA duas vias quando apropriado (p Resultados A AI correspondeu a 39 ± 0,94% do VE 4 semanas pós-IM. A PAS, PSVE e dP/dt+ estavam reduzidas 4 semanas pós-IM (PAS: SHAM 135 ± 1,50 vs. IM 115 ± 2,36* mmHg; PSVE: SHAM 151 ± 2,27 vs. IM 132 ± 2,48* mmHg; dP/dt+: SHAM 8427 ± 379 vs. IM 6654 ± 287* mmHg/s); enquanto a PDfVE estava aumentada pós-IM (SHAM 6,40 ± 0,33 vs. IM 15,54 ± 1,90* mmHg). A razão VD/tíbia apresentou-se aumentada pós-IM (SHAM 5,6 ± 0,2 vs. IM 10,2 ± 1,2* mg/mm), assim como, PU/tíbia (SHAM 38,7 ± 1,6 vs. IM 68,0 ± 5,8* mg/mm). Porém, as razões VE/tíbia e F/tíbia não diferiram entre os grupos estudados. Em conjunto, esses dados confirmam a disfunção do VE 4 semanas pós-IM. Em anéis de AO, o relaxamento dependente do endotélio induzido pela ACh foi aumentado no grupo pós-IM (Rmax: SHAM 56,57 ± 3,03 vs. IM 73,56 ± 3,32* %). Por sua vez, os anéis de VCI apresentaram uma redução na vasodilatação à ACh pós-IM (Rmax: SHAM 94,01 ± 2,69 vs. IM 83,79 ± 3,38*, %). O relaxamento independente do endotélio induzido pelo NPS não diferiu entre os grupos, tanto em anéis de AO como de VCI. Conclusão O IM modificou diferencialmente a função endotelial na dependência do leito vascular avaliado. Assim, 4 semanas pós-IM resultou no aumento da resposta vasodilatadora dependente do endotélio em AO, bem como em disfunção endotelial em VCI.

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Palavras-chaves: Endotélio, Infarto do Miocárdio, Veia, Artéria, Acetilcolina

Resumo: 02.022

Ausência de associação do polimorfismo do gene da ECA com a modulação autonômica da frequência cardíaca em pacientes com doença arterial coronariana.

Autores

2,1KUNZ, V. C.

3, VERLENGIA, R.

1, REBELO, A. C. S.

1, TAMBURUS, N. Y.

3, SALVIATI, M. R.

3, LOPES, R. D. P.

1, SILVA, E. D.

1 Fisioterapia - UFSCAR,

2 Pesquisa - UNASP-EC,

3 Faculdade de

Ciências da Saúde - UNIMEP


Resumo Introdução A influência de fatores genéticos sobre a modulação autonômica da frequência cardíaca (FC) ainda são pouco compreendidos. Objetivos O objetivo do estudo foi avaliar a possível influência do polimorfismo I/D do gene da enzima conversora de angiotensina (ECA) na modulação autonômica da FC em pacientes com doença arterial coronariana (DAC). Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana 04/09 Métodos Participaram do estudo 83 pacientes (56±7 anos) com DAC, divididos de acordo com os genótipos para a variante I/D do gene da ECA (DD, n=30; ID, n=40 e II, n=13). As principais medidas foram pressão arterial (PA), FC e os índices da variabilidade da FC (VFC), alta e baixa frequência (AF e BF) em unidades normalizadas (un) e razão BF/AF, analisadas a partir da captação da FC e dos intervalos RR (iRR), em repouso na posição supina, durante 15 min. Testes estatísticos aplicados: ANOVA com nível de significância de 5%. Resultados As frequências genotípicas para DD, ID e II foram de 36%, 48% e 16% respectivamente. Não houve diferenças para as variáveis de FC (DD=70±11, ID=69±4 e II=72±10), PA sistólica (DD=127±13, ID=124±11 e II=125±11) e PA diastólica (DD=80±5, ID=81±7 e II=80±9) entre os genótipos. O mesmo ocorreu com o índice representativo do predomínio simpático que é a banda de BFun (DD=65±19, ID=64±18 e II=67±20), para a banda representativa do componente vagal que é AFun (DD=34±19, ID= 36±18, II=32±20) e razão do balanço simpato-vagal que é BF/AF (DD=2,67±1,77, ID=2,78±2,79 e II=2,97±1,71) (p > 0,05).

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Conclusão Diante do exposto, os resultados do presente estudo mostram que não há relação entre o polimorfismo I/D do gene da ECA com a FC, PA e os índices da VFC em pacientes com DAC. É possível que os fatores de maior influência sobre a VFC sejam os fatores de risco relacionados ao estilo de vida e ao desenvolvimento da DAC.

Palavras-chaves: doença arterial coronariana, variabilidade da frequência cardíaca, gene da ECA

Resumo: 02.023

CONTRIBUIÇÃO DOS SOROS DE PACIENTES CHAGÁSICOS CRÔNICOS NA GÊNESE DE ARRITMIAS QUANDO PRESENTES EM UM AMBIENTE COM AUMENTADA DISPERSÃO TRANSMURAL DA REPOLARIZAÇÃO

Autores

2VIDAL, M. A.

2, MACIEL, L.

3, PEDROSA, R. C.


2, CAMPOS-DE-

CARVALHO, A. C. 2, CABRAL-DA-SILVA, M. C.

2, MEDEI, E.

2 Instituto de Biofísica Carlos

Chagas Filho - UFRJ, 3 Hospital Universitario Clementino Fraga Filho - HUCFF

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq e CAPES

Resumo Introdução A presença de anticorpos funcionais capazes de ativar receptores β1-adrenérgicos e muscarínicos acoplados a proteínas G em pacientes chagásicos crônicos (PChC) foi descrita. Objetivos Observar o efeito dos soros dos PChC na eletrogênese cardíaca, quando colocados no modelo farmacológico (E-4031) da Síndrome do QT longo do tipo 2 (SQTL-2). Comparar a incidência de arritmias destes soros tanto em corações sadios como no modelo da SQTL-2. Código de Experimentação Animal 54/13 Código de Experimentação Humana Métodos Foram utilizados coelhos machos da linhagem Nova Zelândia, entre 3-4 meses e pesando entre 1,2 – 2,0 kg. Processo N° 54/13 do comitê de ética em experimentação animal do CCS da UFRJ. A SQTL-2 foi induzida mediante perfusão do bloqueador da corrente IKr, E-4031 (5 µM) ao longo do experimento. Foram utilizados os soros de 52 PChC, previamente, funcionalmente caracterizados como tendo efeito: muscarínico (Soros-M; n=10), adrenérgico (Soros-β1; n=15) e ambos,

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muscarínico e adrenérgico (Soros-Mβ; n=17). Os soros sem atividade na bioeletrogênese foram denominados de soros não-reativos (Soros-NR; n=10). Foi analisado o efeito de cada um dos soros no modelo farmacológico da SQTL-2 visando estudar a incidências de arritmias. Resultados A incidência de arritmias pelos soros dos PChC no coração sadio e na SQTL-2 foi respectivamente: soros-β1: 0% vs. 75%, soros-M: 50% vs. 78% e os soros-Mβ: 67% vs. 64%. Já os soros-NR não induziram arritmias. Conclusão Os soros-β1 em um coração sadio não apresentam eventos arrítmicos, entretanto, quando presentes em um modelo da SQTL-2 induziram arritmias em 75% dos casos. Um ambiente de maior dispersão transmural da repolarização, também, favoreceu uma maior incidência de arritmias na presencia dos soros-M. Todavia, os soros-Mβ apresentaram incidência semelhante de arritmias em ambos os casos. Estes achados preliminares sugerem que, para os soros dos PChC induzir arritmias ou aumentar a incidência destas, é necessário da presença de um microambiente conspícuo.

Palavras-chaves: Eletrofisiologia Cardíaca, Anticorpos, Doença de Chagas, Arritmias, Morte Subita

Resumo: 02.024

EFFECTS OF INTRAGASTRIC ADMINISTRATION OF LYCHNOPHORA TRICHOCARPHA (ARNICA) ON RENAL EXCRETION IN HYPERTENSIVE RATS

Autores

1ELEUTÉRIO, S. P.

1, ALZAMORA, A. C.

2, GUIMARÃES, D. A. S.

1, OLIVEIRA, L. B.

1

Departamento de Ciencias Biológicas - UFOP, 2 Departamento de Farmácia/Escola de Farmácia -

UFOP

Apoio Financeiro: FAPEMIG- REDE TOXIFAR

Resumo Introdução Lychnophora trichocarpha , also known as "arnica", is commonly used by the population because of its analgesic and anti-inflammatory effects. It has been shown that in, unanesthetized, free movingly, renovascular hypertensive rats an antihypertensive effect of arnica (750 mg/kg) 24 hours after its intragastric (ig) administration. It would be possible that this antihypertensive effect could be depending on an action of arnica on renal system, increasing urinary volume, therefore, reducing volume body, which may contribute to a reduction on blood pressure. Objetivos It was investigated if the antihypertensive effect of arnica would be due to an increase on renal excretion. Código de Experimentação Animal 2010/51 Código de Experimentação Humana

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Não se aplica Métodos Wistar rats (~180 g, n = 7/group, CEUA: 2010/51) were anesthetized (mixture of ketamine 80 mg/kg and xylazine 7 mg / kg) and underwent to surgery for the development of renovascular hypertension (two-kidney, one clip: 2K1C) or sham surgery (sham). After 28 days, the animals were placed in metabolic cages for the experiments. The animals were given ig administration of arnica extract (A, 750 mg/kg) or vehicle (V, DMSO: Tween 80: water, 1:1:8) and after 24 hours, urine volume and water intake were measured. ANOVA was used to analyze the results (p Resultados 24 h water intake and urinary volume were not different between normotensive and hypertensive rats. Pretreatment with ig arnica did not affect 24 h water intake (sham/A: 22 ± 4 vs sham/V: 28 ± 4; 2K1C/A: 25 ± 5 vs 2K1C/V: 33 ± 3 mL/24 h) or urinary volume (sham/A: 9 ± 1vs sham/V: 13 ± 2; 2K1C/A: 13 ± 4 vs 2K1C/V: 16 ± 3 mL/24 h) in sham or 2K1C rats. Hypertensive rats showed a higher sodium (Na+, 2k1C: 1.3 ± 0.1 vs sham: 1.0 ± 0.1 mEq/24 h) and potassium (K+, 2k1C: 3.4 ± 0.2 vs sham: 2.4 ± 0.3 mEq/24 h) excretion than normotensive rats. Treatment with arnica did not affect Na+ (0.7 ± 1.4 mEq/24 h) or K+ (1.9 ± 0.3 mEq/24 h) excretion in normotensive rats, while normalize these renal parameters in 2K1C rats (Na+: 0.8 ± 0.1; K+: 2.3 ± 0.3 mEq/24 h). Conclusão In conclusion, in renovascular hypertensive rats, the results showed that treatment with arnica normalize sodium and potassium excretion which could contribute to the antihypertensive effect of ig arnica or be a consequence of the reduction on blood pressure. Besides, the reduction on blood pressure after ig arnica is not due to an increase on urinary volume.

Palavras-chaves: Hypertension, Arnica, Lychnophora trichocarpha, Wistar

Resumo: 02.025

EXERCÍCIO FÍSICO DIMINUI A ATIVIDADE DA ENZIMA ADENOSINA DESAMINASE EM PLAQUETAS DE PACIENTES COM SÍNDROME METABÓLICA

Autores

1DALENOGARE, D. P.

1, MARTINS, C. C.

1, CARDOSO, A. M.

1, PENILSON, L. P.

1, ABDALLA,

F. H. 1, REICHERT, K. P.

1, LEMOS, J. G.

1, VIEIRA, F. B.

2, BAGATINI, M. D.

1, MORSCH, V. M.

1, SCHETINGER, M. R. C.

1 Departamento de Química - UFSM,

2 Curso de Enfermagem - UFFS

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERGS

Resumo Introdução A Síndrome Metabólica (SMet) é constituída por um conjunto de fatores de riscos para doenças cardiovasculares, como hipertensão, obesidade abdonimal, hiperglicemia e dislipidemia. A associação desses fatores de riscos propicia a ocorrência de eventos pró-trombóticos, como a aterosclerose. Nesse sentido, a regulação da função plaquetária torna-se de grande importância. A plaqueta é controlada por uma grande diversidade de moléculas, como a adenosina, a qual tem efeito cardioprotetor por inibir a agregação plaquetária. O nível desse nucleosídeo e o seu efeito sobre as plaquetas são

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regulados pela enzima adenosina desaminase (ADA). Essa enzima está ancorada na membrana celular das plaquetas e atua formando inosina a partir da adenosina. Aliado a isso, sabe-se que o exercício físico apresenta efeito benéfico sobre a SMet, reduzindo os riscos cardiovasculares, mas pouco se sabe sobre o seu efeito na função plaquetária e na regulação dos processos trombóticos (Int J Epidemiol 32:600-6, 2003). Objetivos Este trabalho tem como objetivo verificar o efeito do exercício físico sobre a atividade da enzima ADA, a qual regula o nível da adenosina cardioprotetora, em plaquetas de pacientes portadores de SMet. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana 0098.0.243.000-10 Métodos Vinte e cinco pacientes com SMet e vinte e cinco pacientes controles foram selecionados para o estudo. Os sujeitos apresentavam idade entre 45 e 65 anos, de ambos os sexos e todos assinaram o termo de consentimento. O protoloco do estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Federal de Santa Maria, conforme número 0098.0.243.000-10. Os portadores de SMet foram submetidos a um plano de exercícios físico durante 15 semanas, abrangendo resistência aeróbica e hipertrofia muscular. As amostras sanguíneas do grupo SMet foram coletadas antes e ao final do plano de exercícios. As plaquetas foram separadas de acordo com Pilla et al. (Platelets 7:225–30, 1996) e a atividade plaquetária da ADA foi determinada conforme Giusti (Enzyme 12:417–25, 1971). Os dados foram estatisticamente analisados utilizando ANOVA de uma via. Diferenças foram consideradas significativas quando P <0.05. Resultados Foi observado um significativo aumento na atividade a enzima ADA no grupo SMet (2,65 ± 0,75 U/L) (n=25) antes do plano de exercícios, quando comparado ao grupo controle (n=25) (1,6 ± 0,3 U/L) (P Conclusão Os dados obtidos neste estudo sugerem que o exercício físico pode ser um tratamento efetivo para a SMet, pois além de reduzir os riscos cardiovasculares clássicos dessa patologia, como a obesidade abdominal, atua regulando a ação plaquetária, uma vez que normaliza a atividade da enzima ADA e, assim, impede o aumento da degradação da adenosina, a qual pode exercer os seus efeitos cardioprotetores, que ocorre na SMet.

Palavras-chaves: Adenosina Desaminase, Adenosina, Exercício Físico, Plaquetas, Síndrome Metabólica

Resumo: 02.026

PARTICIPAÇÃO DA ANGIOTENSINA II NO ESTRESSE OXIDATIVO, ALTERAÇÃO DA REATIVIDADE VASCULAR E NAS ALTERAÇÕES NEURO-HUMORAIS INDUZIDAS PELO CONSUMO CRÔNICO DE ETANOL.

Autores 1PASSAGLIA, P.

3, MECAWI, A. S.


4, COELHO, E. B.

2,1,

TIRAPELLI, C. R. 1 Programa de Toxicologia - FCFRP/USP,

2 Farmacologia - FMRP/USP,

3

Fisiologia - FMRP/USP, 4 Clínica Médica - FMRP/USP


Resumo Introdução A disfunção cardiovascular induzida pelo consumo crônico de etanol esta associada à formação de espécies reativas de oxigênio (ERO). A angiotensina II (ANGII) via receptores AT1, é um importante formador de ERO no sistema cardiovascular. Objetivos Avaliar a participação dos receptores AT1 nas disfunções cardiovasculares induzidas pelo consumo crônico de etanol. Código de Experimentação Animal 11.1.1103.53.1 Código de Experimentação Humana Métodos Ratos Wistar (200-250g) foram divididos em quatro grupos: Controle (C): recebeu água “ad libitum”; Etanol (E): recebeu solução de etanol 20% (vol./vol.); Controle+Losartan (C+L): recebeu água “ad libitum” e losartan (10 mg/kg) diariamente por gavagem; Etanol+Losartan (E+L): recebeu solução de etanol 20% e losartan. Foram realizadas as dosagens para determinar os níveis plasmáticos e teciduais (aorta e leito mesentérico) de angiotensina (ANG) I e ANG II, atividade plasmática da renina, níveis plasmáticos de ocitocina (OT), peptídeo natriurético atrial (ANP), osmolaridade, sódio, nitrato e TBARS. A artéria aorta torácica foi isolada e foram obtidas curvas concentração-resposta para fenilefrina, acetilcolina e nitroprussiato de sódio (NPS). Produção de ERO foi avaliada na aorta e leito mesentérico pelo método da quimioluminescência da lucigenina. Os protocolos foram aprovados pela CEUA do Campus da USP de Ribeirão Preto Resultados O tratamento com etanol induziu aumento da atividade plasmática (pg/ml/hr) da renina (C:5,89±1,0; n=6; E:14,25±1,5, n=7) e dos níveis plasmáticos (pg/ml) de ANGI (C:358±32,8; n=14; E:2.959±0,3, n=6) e ANGII (C:40,1±6,5; n=13; E:437,2±60,1, n=8), sendo que tais efeitos não foram prevenidos pela administração de losartan. Não houve alteração dos níveis teciduais de ANGI e ANGII em aorta ou leito mesentérico de rato. O etanol promoveu aumento dos níveis plasmáticos (nmol/ml) de TBARS (C:16,5±1,1, n=9; E:30,1±3,7, n=9) e o tratamento com losartan preveniu essa resposta. O etanol induziu redução dos níveis plasmáticos (mmol/l) de nitrato (C:42,4±0,7, n=6; E:36,5±1,7, n=6) e o tratamento com losartan preveniu essa reposta. O consumo crônico de etanol aumentou a resposta vasoconstritora induzida pela fenilefrina em anéis de aorta com (C: 1,0±0,1g; n=5 E: 1,4±0,1g, n=5) e sem endotélio (C:1,4±0,2g, n=9; E:2,4±0,1g, n=8). O tratamento com losartan preveniu o aumento da resposta contrátil à fenilefrina induzida pelo etanol. O consumo de etanol induziu aumento da produção de ERO na aorta e leito mesentérico sendo essa resposta prevenida pelo losartan. O tratamento com etanol não alterou a resposta de relaxamento induzida pela acetilcolina (C:93,9±8,7%, n=5; E:80,7±10,4%, n=6) ou NPS (C:119,6±2,2%, n=12; E:126,8±14,4%, n=6) em aorta de ratos. O tratamento com etanol não alterou a osmolaridade (C:286,9±1,3mOsm, n=9; E:287,2±3,3mOsm, n=8) ou os níveis de sódio (C:150,9±3,9mEq/L, n=9; E:146,4±3,9mEq/L, n=9). Nos animais tratados cronicamente com etanol houve redução plasmática de OT (C:1,6±0,2pg/mL, n=9; E: 0,90±0,1pg/mL, n=8) e aumento do nível plasmático de ANP (C:22,6±2,7pg/mL, n=6; E: 51,9±6,1pg/mL, n=8). O losartan não preveniu estes efeitos induzidos pelo etanol. Conclusão

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O consumo crônico de etanol ativa o SRA sistêmico, induz estresse oxidativo sistêmico e vascular, altera a reatividade vascular e reduz os níveis plasmáticos de NO. A alteração da reatividade vascular, o aumento do estresse oxidativo sistêmico e a redução dos níveis de nitrato são efeitos mediados pela ANGII uma vez que o tratamento com losartan preveniu essas respostas.

Palavras-chaves: Alteração Vascular, Angiotensina II, Etanol, Estresse Oxidativo, Sistema Renina Angiotensina

Resumo: 02.027

ALTERAÇÕES ESTRUTURAIS EM ARTÉRIAS DE RESISTÊNCIA E NA PRESSÃO ARTERIAL DE RATOS SUBMETIDOS À OBESIDADE NEUROENDÓCRINA

Autores

1,3RODRIGUES, K. M. S.

2, LAHLOU, S.

3, ROSSONI, L. V.

1 Instituto de Biofísica Carlos Chagas

Filho - UFRJ, 2 Departamento de Fisiologia e Farmacologia - UFC,

3 Departamento de Fisiologia e

Biofísica, Instituto de Ciências Biomédicas - USP

Apoio Financeiro: FUNCAP; CNPq; FAPES

Resumo Introdução A obesidade (Ob) é uma doença crônica de alta prevalência em todo mundo, no Brasil sabe-se que ela atinge mais de 15% da população. A Ob é um grave fator de risco para inúmeras comorbidades, incluindo a hipertensão arterial e a disfunção vascular. Além disso, pesquisas mostram que essa doença está relacionada a um remodelamento vascular em humanos e/ou em modelos de obesidade em artérias de grande e médio calibre. Objetivos Investigar as possíveis mudanças ocasionadas pela Ob neuroendócrina sob os parâmetros hemodinâmicos arteriais e estruturais de artéria mesentérica de resistência (AMR) de ratos. Código de Experimentação Animal 192/143/02/CEUA Código de Experimentação Humana Métodos Após aprovação na comissão de ética para uso de animais – ICB/USP (registro 192; folha 143; livro 2), ratos Wistar foram divididos em grupos: controle (CT, salina, s.c., n = 4-11) e obeso pela administração de glutamato monossódico (MSG: 4 mg/g, s.c., n = 6-11) do segundo ao sexto dia de nascimento. Seis meses após os tratamentos, os animais foram anestesiados com ketamina e xilazina (90 e 10 mg/kg, respectivamente, i.p.) e submetidos à canulação da artéria femoral esquerda; 24h depois do procedimento, avaliou-se a pressão arterial média (PAM) e a frequência cardíaca (FC). Após nova indução anestésica, os animais tiveram o peso corporal e o comprimento naso-anal mensurados. Em seguida, submetidos à canulação da artéria mesentérica superior (AMS), remoção e perfusão do leito vascular mesentérico (LVM) com solução

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Krebs-Henseleit (KB), 37ºC, pH 7,4, gaseificado com mistura carbogênica, com fluxo constante de 2 mL/min. Após estabilização, a solução de KB foi trocada por outra sem adição de CaCl 2 (KB 0Ca 2+ ) e uma curva de fluxo foi realizada (0,5-8 mL/min). Nessa preparação foram avaliadas as variações de pressão de perfusão média (PPM, mmHg). Para avaliação do diâmetro luminal, as AMR (3º ramos AMS) foram montadas no miógrafo de pressão. A preparação foi estabilizada por 1h em KB a 70 mmHg; em seguida, uma curva de pressão (3-140 mmHg) em KB 0Ca 2+ foi realizada e o diâmetro interno (Di μm) foi avaliado. Por fim, o tecido adiposo visceral também foi pesado para determinação da Ob. Os dados foram expressos como média ± EPM, submetidos à ANOVA 2 vias e teste t quando apropriado (p Resultados MSG induziu Ob verificada pelo aumento do índice de Lee (CT: 29,1±0,4 vs. MSG: 31,9±0,4*) e da deposição de gordura retroperitoneal (CT: 1,66±0,1 vs. MSG: 3,80±0,4* g/100g) e periepididimal (CT: 2,12±0,1 vs. MSG: 3,74±0,2* g/100g). MSG elevou a PAM (CT: 108±2,1 vs. MSG: 119±3,6* mmHg) e a FC (CT: 319 ±4,6 vs. MSG: 367±9,2* bpm) quando comparado ao CT. O LVM dos animais MSG exibiu uma maior PPM no fluxo basal de 2 mL/min em KB (CT: 10±0,9 vs. MSG: 14±0,4* mmHg). O aumento do fluxo elevou a PPM no LVM tanto nos MSG quanto nos CT; porém o LVM dos MSG apresentou uma maior PPM quando comparado ao CT (fluxo de 8 mL/min, CT: 36±1,9 vs. MSG:42±1,9* mmHg), assim como apresentou aumento da resistência vascular do LVM (fluxo de 0,5 mL/min, CT: 8,7±1,6 vs. MSG: 13±1,6 mmHg/mL/min). O aumento da pressão intraluminal elevou o Di nas AMR dos grupos; porém, as AMR dos MSG tiveram os Di reduzidos quando comparado ao CT (80 mmHg, CT: 256±18,2 vs. MSG: 187±16* μm). Conclusão Esses dados demonstram que a obesidade neuroendócrina induz um remodelamento vascular para dentro em AMR de ratos, o que corroboraria as alterações na hemodinâmica arterial e na resistência vascular do leito mesentérico.

Palavras-chaves: Estrutura Vascular, Obesidade Neuroendócrina, Pressão Arterial, Pressão de Perfusão

Resumo: 02.028

REDUÇÃO DA ATIVIDADE DA CATALASE E AUMENTO DAS SUBSTÂNCIAS REATIVAS AO ÁCIDO TIOBARBITÚRICO (TBARS) NO RVLM E HIPOTÁLAMO DE RATOS COM HIPERTENSÃO RENOVASCULAR.

Autores

1JUNIOR, J. G. F.

1, ZACARIAS, A. C.

1, DINIZ, M. F.

2, SANTOS, R. A. S.

2, CAMPAGNOLE-

SANTOS, M. J. 1,3

, BEZERRA, F. S. 1,3

, ISOLDI, M. C. 1,3

, ALZAMORA, A. C. 1,3

, SOUSA, L. E. 1

Departamento de Ciências Biológicas - UFOP, 2 Departamento de Fisiologia e Biofísica - UFMG,

3

Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas - UFOP

Apoio Financeiro: INCT-Nano-Biofarmacêutica; CNPq; FAPEMIG; Rede Toxifar, PRONEX;

NUPEB/UFOP e PROPP/UFOP.

Resumo Introdução Evidências mostram que no encéfalo, em especial nos núcleos responsáveis pelo controle da função cardiovascular, animais hipertensos podem apresentar redução de enzimas antioxidantes (Chan et al. Free Radical Bio & Med. 40:2032, 2006) e aumento das espécies reativas de oxigênio (Hirooka. Auton Neurosc Basic and Clinic. 142:21, 2008).

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Objetivos Verificar a atividade da catalase (CAT) e das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) no bulbo ventrolateral rostral (RVLM) e ventral (CVLM) e, no hipotálamo (HIP) de ratos com hipertensão renovascular, modelo 2R1C de Goldblatt (1934). Código de Experimentação Animal número 2012/20 Código de Experimentação Humana Métodos Ratos Fischer, machos, com 6 semanas, peso médio de 170 gramas, foram submetidos às cirurgias 2R1C (animais com hipertensão renovascular; n=5) e fictícia (SHAM – animais normotensos; n=5). Quatro semanas após as cirurgias, o encéfalo foi removido e as áreas RVLM, CVLM e HIP foram isoladas e armazenadas a -80°C. O conteúdo de proteína total das amostras foi verificado pelo método de Bradford (1976). A atividade da CAT foi mensurada a partir da capacidade de conversão do peróxido de hidrogênio em água e oxigênio molecular a uma absorbância de 240nm (Aebi, 1984). As TBARS foram mensuradas através do malondialdeído, e foram quantificadas através do aquecimento das amostras com o ácido tiobarbitúrico, sendo que a absorbância do sobrenadante foi mensurada a 532nm (Draper e Hadley, 1990). A hipertensão foi confirmada através da mensuração indireta da prssão arteria média (pletismografia de cauda) e do peso úmido relativo dos rins esquerdo (que deveria ser significativamente menor ao do rim direito) e direito. O trabalho teve aprovação da Comissão de Ética no Uso de Animais da UFOP (protocolo n°.2012/20). Resultados Nossos resultados mostram que os animais 2R1C (n=5) apresentaram redução (p > 0,05) da atividade da CAT no RVLM (0,783±0,07U/mg/ptn) e HIP (0,572±0,19 U/mg/ptn) em comparação com grupo SHAM (n=5) (1,364±0,2U/mg ptn e 1,289±0,1U/mg ptn, respectivamente). E foi observado aumento da atividade (p < 0,05) da TBARS do grupo 2R1C (n=5) no RVLM (0,446±U/mg/ptn) e HIP (1,925±0,5U/mg/ptn) em comparação com animais SHAM (n=5) (0,183±0,04U/mg/ptn e 0,414±0,04U/mg/ptn, respectivamente). Contudo, não observamos diferença significativa nas atividades da CAT e TBARS no CVLM. Conclusão Nossos dados mostraram que animais com hipertensão renovascular apresentam redução da atividade da CAT no RVLM e HIP e aumento da TBARS, sugerindo que o estresse oxidativo nessas áreas centrais participem no desenvolvimento e manutenção da hipertensão renovascular.

Palavras-chaves: Ácido Tiobarbitúrico, Catalase, Hipertensão, Hipotálamo, RVLM

Resumo: 02.029

A insuficiência cardíaca estabelecida em ratos Wistar adultos desnutridos cronicamente está associada a dessensibilização adrenérgica: estudo do efeito do tratamento com propranolol.

Autores 1MENDES, L. V. P.

1, SILVA, G. S. C. D.

2, PINTO, L. M. O.


2,

VIEYRA, A. 1, CUNHA, V. D. M. N.

1, MORCILLO, L. D. S. L.

1 Farmacologia e Química Medicinal

- ICB - UFRJ, 2 Biofísica - IBCCF - UFRJ

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ

Resumo Introdução Sabe-se que a desnutrição infantil é capaz de gerar doenças cardiovasculares que se manifestam de forma silenciosa na idade adulta. No Brasil um modelo experimental de estudo foi proposto na década de 90, mimetizando os hábitos alimentares da população do nordeste na época. Tal modelo tem sido usado em nosso trabalho para provocar desnutrição em animais no seu desenvolvimento infantil e para que se observe os danos cardiovasculares e seus mecanismos moleculares na população adulta. Objetivos A desnutrição promovida pela dieta básica regional submetida ao rato do desmame a vida adulta (DBR-CR) modifica a hemodinâmica cardíaca sugerindo a instalação da insuficiência cardíaca (IC). O objetivo deste trabalho foi avaliar a sinalização beta adrenérgica e determinar o efeito do propranolol como cardioprotetor. Código de Experimentação Animal DFBCICB030 Código de Experimentação Humana não se aplica Métodos Após o desmame, 40 ratos Wistar foram randomicamente divididos em quatro grupos: controle (ratos alimentados com dieta convencional); controle propranolol (Cp, ratos controles tratados com propranolol por gavagem na dose de 30mg/Kg); DBR–CR e DBR-CRp (ratos desnutridos tratados com propranolol). Após o sacrifício (13 semanas), os corações foram divididos para os ensaios de Langendorff (n=5 para cada grupo) e bioquímicos (n=5 para cada grupo). Todos os procedimentos foram aprovados pelo comitê de ética de uso de animais experimentais da Universidade Federal do Rio de Janeiro (DFCICB030). Resultados A pressão ventricular esquerda máxima (PDmáx) do grupo DBR-CR reduziu comparado ao controle (70&plusmn11 vs 127&plusmn12mmHg); bem como o índice de contratilidade (+dP/dTmax) (283&plusmn18 vs 470&plusmn55 mmHg/s) e o índice de relaxamento (-dP/dTmáx) (366&plusmn28 vs 531&plusmn7 mmHg/s). O tratamento com propranolol reduziu a PDmáx em 20% no Cp e se manteve no grupo DBR-CR. O mesmo foi observado para a +dP/dTmáx e –dP/dTMax. O Efeito maximo do isoproterenol no grupo DBR-CR reduziu (143 &plusmn15 vs 184 &plusmn11) e na curva de Frank-Starling houve deslocamento para a esquerda e a capacitância reduziu-se em 27%. A avaliação bioquímica demonstrou: (1) diminuição da razão entre atividade e expressão da proteína cinase A (PKA) no grupo DBR-CR; (2) diminuição de 65% da atividade da proteína cinase C (PKC) dependente de DAG, com diminuição da expressão da PKCalfa (isoforma protetora da IC) e aumento da expressão de PKCepsilon (envolvida no desenvolvimento da IC); (4) aumento da expressão do trocador Na+/Ca2+ (40%). Conclusão A redução da contratilidade e da complacência, observada pela curva de Frank-Starling e a dimuição da resposta ao isoproterenol confirmam a instalação da IC no grupo DBR-CR. Esse evento está associado a dessensibilização da via beta adrenérgica observada pela diminuição da atividade e expressão de PKA. A redução da atividade da PKC e a diminuição da expressão do trocador Na+/Ca2+ corroboram para a observação do desequilíbrio da homeostasia intracelular de Ca2+,

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que concorre para o quadro de IC no rato adulto.

Palavras-chaves: coração, desnutrição, insuficiência cardíaca, propranolol, sinalização adrenérgica

Resumo: 02.030

Relação entre o sistema colinérgico e o estrógeno em um modelo de hipofunção colinérgica

Autores

1GAVIOLI, M.

1, PARREIRA, A. B.

1, ALMEIDA, P. W. M.

1, GUIMARAES, D. A. S.

1, ROCHA-

RESENDE, C. 1, LARA, A.

1, MELO, M. B.

2, RESENDE, R.

1, GRACE, S.

1, GUATIMOSIM, S.

1

Fisiologia e Biofísica - UFMG, 2 Bioquímica e Imunologia - UFMG

Apoio Financeiro: CNPq , Capes, FAPEMIG

Resumo Introdução Mulheres na pré-menopausa apresentam menor incidência de doenças cardiovasculares do que homens com a mesma idade (Laborde-Hinojosa e cols. 2000). Essa diferença é abolida no período da pós-menopausa, sugerindo a importância dos hormônios ovarianos, principalmente o estrógeno, como uma substância com propriedade cardioprotetora. Estudos mostram que o estrógeno pode modular diretamente a função do sistema nervoso autônomo. Objetivos Desta forma o objetivo deste trabalho é investigarmos a relação entre o sistema colinérgico e o estrógeno através do uso de camundongos fêmeas que apresentam hipofunção colinérgica (VAChT KDHOM) com ênfase no coração Código de Experimentação Animal CEUA 16-2011 Código de Experimentação Humana Métodos Camundongos fêmeas VAChT KDHOM com idade de 6 meses foram submetidas a ecocardiografia. Para análise do transiente de Ca2+, cardiomiócitos foram isolados e incubados com Flúor-4AM. A técnica de PCR em tempo real foi realizada para análise da expressão de marcadores de stress cardíaco e receptores de estrógeno. Para verificar a funcionalidade dos receptores de estrógeno estimulamos as células com estrógeno (10 nmol/L) e medimos a alteração da fluorescência através de uma sonda sensível ao óxido nítrico (DAF-FM). Em parte dos experimentos, as fêmeas foram tratadas com piridostigmina (1mg/kg) e as células com vesamicol (5µmol/L) Resultados Camundongos fêmeas VAChT KDHOM aos 6 meses apresentam redução na fração de ejeção (12%) e encurtamento (14%) em relação ao grupo WT, além de um aumento no diâmetro dos cardiomiócitos (WT 10.8 ± 0.219 vs VAChT 12.5 ±

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0.177 µM ). Através da microscopia confocal realizamos a medida do transiente de Ca2+ e encontramos um aumento de 48% da fluorescência no grupo VAChT em relação ao WT. Através do PCR em tempo real observamos que as VAChT KDHOM apresentam aumento na expressão de marcadores de estresse cardíaco, ANP e &beta-MHC e dos receptores de estrógeno &alpha, &beta e GPR30. Através do esfregaço vaginal constatamos um ciclo estral irregular nas fêmeas VAChT, com predomínio nas fases de proestro e estro, além de apresentarem aumento no peso do útero. Utilizando a sonda DAF-FM, medimos a funcionalidade dos receptores de estrógeno nos cardiomiócitos incubados com estrógeno e não observamos diferença na resposta entre os grupos WT e VAChT. O tratamento de camundongos VAChT fêmeas com piridostigmina, uma droga que aumenta a disponibilidade de ACh levou a uma redução do peso do útero no grupo VAChT em 40%. Cardiomiócitos do grupo WT, quando incubadas com vesamicol, o inibidor do VAChT, apresentaram um aumento na expressão dos receptores de estrógeno Conclusão Os resultados mostram que a hipofunção colinérgica promoveu alteração do ciclo estral, alteração nos receptores de estrógeno e no peso do útero e que o aumento da disponibilidade de ACh é capaz de reverter parte destas alterações. Desta forma, nossos resultados indicam que existe um importante cross-talk entre o estrógeno e a via colinérgica com importante conseqüência para o funcionamento cardíaco

Palavras-chaves: Cardiomiócitos, Hipofunção colinérgica, estrógeno

Resumo: 02.031

CONSUMO CRÔNICO DE ETANOL INDUZ ESTRESSE OXIDATIVO E AUMENTA EXPRESSÃO DA NOX1 E MAPKs EM AORTA DE RATOS.

Autores 1MARCHI, K. C.

1, TIRAPELLI, C. R.

1 Departamento de Farmacologia - USP,

2 Departamento de

Enfermagem Psiquiátrica e Ciências Humanas - USP


Resumo Introdução O consumo crônico de etanol acarreta alterações significativas das funções cardíaca e circulatória, figurando como um importante fator de risco no desenvolvimento de doenças cardiovasculares, como a hipertensão arterial. O passo inicial para a disfunção cardiovascular associada ao etanol envolve o aumento da produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) pela enzima NAD(P)H oxidase, redução da biodisponibilidade do óxido nítrico (NO) e ativação das Proteínas Quinase Ativadas por Mitógenos (MAPKs). Objetivos Avaliar a participação da NAD(P)H nos efeitos cardiovasculares induzidos pelo consumo crônico de etanol através de sua inibição pela apocinina (APO). Código de Experimentação Animal 11.1.1648.53.8

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Código de Experimentação Humana Métodos Os protocolos realizados foram aprovados pelo comitê de ética local (11.1.1648.53.8). Ratos Wistar (250g) foram divididos: Controle (C): injeção intraperitoneal (i.p.) de salina 0,9%; Controle+APO (CA): APO (10mg/kg/dia; i.p.); Etanol (E): etanol a 20% e injeção i.p. de salina; Grupo Etanol+APO (EA): etanol a 20% e APO (10mg/kg/dia; i.p.). A expressão protéica da Nox1, p47phox, MAPKs (totais e fosforiladas) foram avaliadas por Western Blotting, sendo os valores normalizados pelos correspondentes de β - actina. Níveis de ânions superóxido (O2-) em aorta foram detectados pelo método de quimiluminescência da lucigenina. A atividade antioxidante total foi avaliada por espectrofotometria. Os resultados estão expressos em média ± EPM. ANOVA, seguida pelo pós-teste de Newman-Keuls foram realizados para detectar as diferenças entre os valores em estudo. P Resultados O tratamento crônico com etanol promoveu aumento da expressão (unidades arbitrárias) da Nox1 (E=1,66± 0,16; n=4) e JNK (total) (E=1,17±0,25; n=4) em relação ao grupo Controle (Nox1=0,63±0,10; n=4; JNK=0,49±0,08; n=5), sendo que o tratamento com APO preveniu essas respostas (Nox1=0,64±0,32; n=4; JNK=0,58±0,13; n=5). Os animais dos grupos Etanol, Controle+APO e Etanol+APO apresentaram diminuição na fosforilação da ERK1/2 (E=0,36±0,03; CA=0,40±0,08, EA=0,31±0,07; n=4) em relação ao grupo Controle (C=0,67±0,05; n=4). Não foram encontradas diferenças na expressão das outras MAPKs e da subunidade p47 phox. Os níveis de O2- (URL/mg proteína) foram maiores no grupo Etanol (244,8±13,4; n=6) quando comparado ao Controle (120,7±20,5;n=7). Este aumento foi prevenido pela APO (157,1±36,8; n=5). A capacidade antioxidante total plasmática (µmol/L) apresentou aumento no grupo Etanol (5,87±0,2;n=9) comparado ao Controle (4,46 ±0,2;n=10), sendo esta resposta acentuada nos grupos tratados com APO (A=7,43 ±0,2; n=10, EA=9,66 ±0,5; n=9). Conclusão Consumo crônico de etanol induz estresse oxidativo vascular e aumenta a expressão da Nox1 e JNK em tecido aórtico, sendo estas respostas mediadas pela enzima NAD(P)H oxidase.

Palavras-chaves: ETANOL, ESTRESSE OXIDATIVO, NOX1, MAPKs, AORTA

Resumo: 02.032

INFLUÊNCIA DA RESTRIÇÃO CRÔNICA DE CLORETO DE SÓDIO EM MODELO ANIMAL DE DISLIPIDEMIA E HIPERTENSÃO ARTERIAL

Autores

1FUSCO, F. B.

1, GOMES, D. J.

1, ROCHA, J. C.

2, FURUKAWA, L. N.

2, HEIMANN, J. C.

5,

JERICÓ, M. M. 3, TEODORO, W. R.

3, VELOSA, A. P.

3, SANTOS, A.

4, CAPELOZZI, V. L.

4,

BISPO, K. C. S. 1, PASSARELLI, M.



1,

CATANOZI, S. 1 Laboratório de Lípides - FMUSP,

2 Laboratório de Hipertensão Experimental -

FMUSP, 3 Laboratório de Matriz Extracelular - FMUSP,

4 Patologia - FMUSP,

5 Veterinária - UAM


Resumo Introdução A restrição alimentar acentuada de cloreto de sódio prejudica o perfil de lípides plasmáticos e a sensibilidade à insulina, favorecendo a aterosclerose em modelos animais dislipidêmicos. A hiperlipidemia e a ativação do sistema renina-angiotensina-aldosterona, isolados ou conjuntamente, estimulam a aterogênese, embora não existam estudos sobre o perfil lipídico e o desenvolvimento de aterosclerose em modelo animal de hiperlipidemia e hipertensão arterial sistêmica (HAS). Objetivos Determinar o perfil de lípides plasmáticos em camundongos hipertensos e hiperlipidêmicos alimentados cronicamente com dieta pobre em cloreto de sódio e tratados com inibidor do receptor AT-1. Código de Experimentação Animal CAPPesq (#341/10) Código de Experimentação Humana Métodos Camundongos C57BL6J knockout para o receptor de LDL foram alimentados, a partir do desmame, com ração hipossódica (0,15%NaCl) ou normossódica (1,27%NaCl). Ao completarem 2,5 meses de idade, foi realizada inserção de clipe na artéria renal para indução de hipertensão renovascular, assim como o início do tratamento com fármacos anti-hipertensivos (losartana- 20mg/Kg/dia ou hidralazina- 15mg/Kg/dia, na água). Formaram-se seis grupos experimentais: Normossódico (NS), Hipossódico (HS), Hipossódico+Losartana (HS+Los), Hipossódico+Hidralazina (HS+Hid), Hipossódico SHAM (HS SHAM), e Normossódico SHAM (NS SHAM). As concentrações plasmáticas (mg/dL) de triglicérides (TG), colesterol (CT), ácidos graxos livres (AGL;mmol/L) foram determinadas antes da administração das respectivas dietas e ao final do protocolo experimental. A excreção urinária de sódio (UNa; mEq/24hs), pressão arterial (PA;mmHg) e peso corpóreo(g) foram mensurados aos 5 meses de idade. Projeto aprovado pela CAPPesq (# 341/10). As comparações foram feitas por teste t de Student ou ANOVA de um fator com pós-teste de Newman-Keuls. Resultados O peso corporal foi semelhante entre os grupos experimentais. A excreção urinária de sódio foi menor nos grupos com dieta hipossódica em comparação aos com dieta normossódica (NS=0,077±0,047; NS SHAM=0,043±0,015; HS=0,027±0,018; HS SHAM=0,024±0,008; HS+Los=0,027±0,008; HS+Hid=0,020±0,009). CT e TG foram maiores no grupo HS em comparação ao NS (721±190 e 224±34 vs 544±60 e 126±72, respectivamente; n=8; p < 0,05). Não houve diferença na concentração de AGL. Os mesmos resultados foram observados comparando-se o grupo HS SHAM e NS SHAM (CT=644±108 e TG=265±66; n=8 vs CT=506±32 e TG=165±15; n=7, respectivamente; p < 0,05). CT foi semelhante entre os grupos com dieta hipossódica. A PA foi menor no grupo HS (107±3) em comparação ao NS (131±4; p < 0,05) e foi reduzida ainda mais nos grupos HS+LOS (59±4; n=7; p < 0,05), HS+Hid (65±6;n=8; p < 0,05). TG e AGL foram menores no grupo HS+Los (145±93 e 1,01±0,26, respectivamente) em relação aos grupos HS (224±34 e 1,74±0,47);HS+Los (241±73 e 1,84±0,52); HS+Hid (265±66 e 1,64±0,77); p < 0,05. Conclusão A despeito do seu efeito hipotensor, neste modelo experimental, a dieta hipossódica aumentou as concentrações dos lípides plasmáticos. Considerando-se o papel da angiotensina II, a menor trigliceridemia dos animais tratados com losartana poderia decorrer do antagonismo aos receptores AT1, o que pode beneficiar a sensibilidade à insulina. A redução dos TG e AGL plasmáticos com o tratamento com losartana, provavelmente, não está diretamente associada à redução da pressão arterial visto que no grupo tratado com hidralazina também houve diminuição da PA, porém sem melhoria dos TG.

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Palavras-chaves: Aterosclerose, Cloreto de Sódio, Hipercolesterolemia, Hipertensão, Hipertrigliceridemia

Resumo: 02.033

N-acetilcisteína reduz peroxidação lipídica, produtos de glicação avançada e o estresse de retículo endoplasmático induzido em macrófagos pela albumina isolada de modelo de doença renal crônica.

Autores

1MACHADO, J. T.

1, IBORRA, R. T.

1, FUSCO, F. B.


2, SHIMIZU, M. H.

M. 2, SEGURO, A. C.

1, CATANOZI, S.

1, PASSARELLI, M.

1 Clínica Médica/LIM-10 - FMUSP,

2

LIM-12 - FMUSP


Resumo Introdução Estresse oxidativo (EO), produtos de glicação avançada (AGE) e toxinas urêmicas contribuem para a elevada manifestação de aterosclerose na doença renal crônica (DRC). AGE e EO induzem o estresse do retículo endoplasmático o que prejudica a remoção de colesterol celular. Estudos prévios de nosso grupo demonstraram que a albumina isolada de ratos com DRC reduz o efluxo de colesterol de macrófagos mediado por HDL. Objetivos O objetivo deste estudo foi avaliar a influência do tratamento com N-acetilcisteína (NAC) em ratos com DRC sobre a concentração plasmática de produtos de peroxidação lipídica (TBARS) e AGE, bem como sobre a indução de estresse de retículo endoplasmático em macrófagos tratados com albumina sérica isolada desses animais. Código de Experimentação Animal 0857/07 Código de Experimentação Humana Métodos Protocolo aprovado pelo Comitê de Ética e Pesquisa do HCFMUSP (0857/07). Peso (g), concentração plasmática (mg/dL) de ureia, creatinina, colesterol total (CT), triglicérides (TG) e glicose, excreção de proteína urinária (mg/24h), TBARS (nmoL/mL), pentosidina e AGEs totais (UA de fluorescência) foram determinados no período basal e após 60 dias de indução da DRC por nefrectomia direita e isquemia parcial de 2/3 do rim esquerdo em ratos Wistar machos com 2 meses de idade e em ratos controles falso-operados tratados com NAC (C; n=31, DRC; n=74) ou não (C+NAC; n=20, DRC+NAC; n=32 ). A pressão arterial (PA;mmHg) foi aferida somente no grupo DRC e DRC+NAC no período final (DRC, n=6; DRC+NAC, n=6). Albumina sérica foi isolada por FPLC e purificada por extração alcoólica. Macrófagos J774 foram incubados com 1mg/mL de pool de albumina isolada dos quatro grupos experimentais, por 18 h. O conteúdo de marcadores do estresse do RE (proteína dissulfeto isomerase, PDI e Grp94) foi determinado por imunoblot. A comparação entre os grupos foi feita por teste t de Student ou ANOVA de um fator com pós-teste de Newman-Keuls.

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Resultados Ao final do estudo, o peso corporal foi 10% menor no grupo DRC em comparação ao grupo C (p=0,006). Esta alteração foi prevenida pelo tratamento com NAC. PA foi maior no grupo DRC (130±3) em comparação ao grupo DRC+NAC (109±3; p=0,0004). Ureia, creatinina, CT, TG, proteinúria, AGE total, pentosidina e TBARS foram maiores nos grupos DRC (122±8; 0,9±0,07; 151±6; 83±4; 46±2,5; 32620±673; 16700±1370; 6,6±0,5, respectivamente) e DRC+NAC (91,4±5; 0,6±0,02; 126±7,5; 73±6; 51±3,5; 24720±1114; 10080±748; 4,5±0,5, respectivamente) em comparação, respectivamente, a C (41±0,9; 0,4±0,03; 76±2,7; 51,5±3; 14±0,9; 21750±960; 5314±129; 2±0,2, respectivamente) (p Conclusão A NAC reduz a peroxidação lipídica e a concentração plasmática de AGE, o que se vincula ao menor insulto de estresse de retículo endoplasmático promovido pela albumina-DRC. Os efeitos da NAC podem contribuir para atenuar os efeitos deletérios da albumina-DRC sobre o acúmulo de lípides em macrófagos e o desenvolvimento da aterosclerose na DRC.

Palavras-chaves: Albumina , Doença Renal Crônica, metabolismo de lípides, peroxidação lipidica, produtos de glicação avançada

Resumo: 02.034

ESTRESSE AGUDO DE RESTRIÇÃO PROMOVE EFEITO ANSIOGÊNICO E INDUZ DISFUNÇÃO ENDOTELIAL EM RATOS

Autores

1CARDA, A. P. P.

1, GONZAGA, N. D. A.

1, MECAWI, A. D. S.


1,

PADOVAN, C. M. 1, TIRAPELLI, C. R.

1 Departamento de Enfermagem Psiquiátrica e Ciências

Humanas - USP


Resumo Introdução O estresse físico, assim como o psicológico, contribui para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares como, por exemplo, a hipertensão arterial. Objetivos Avaliar os efeitos vasculares associados ao estresse agudo de restrição forçada (EARF) e os mecanismos envolvidos nessa resposta. Código de Experimentação Animal 11.1.1267.53.4 Código de Experimentação Humana

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Métodos Ratos Wistar adultos (50 dias) foram estressados 24 horas antes dos experimentos por um período de 2 horas ou não foram estressados. As respostas para nitroprussiato de sódio (NPS), acetilcolina (ACh), fenilefrina (PhE), serotonina (5-HT), KCl e L-NAME foram avaliadas em anéis isolados de aorta torácica com endotélio (E+) e/ou sem endotélio (E-). Curva concentração-resposta para PhE foi obtida na presença da indometacina (INDO- inibidor não seletivo das enzimas COX-1/2). O RNAm para NOS1, NOS2 e NOS3 foi avaliado em aorta por PCR em tempo real. Os níveis plasmáticos de TBARS e corticosterona foram avaliados. O teste do Labirinto em Cruz Elevado (LCE) foi realizado nos animais dos dois grupos Resultados Em aortas E+ o EARF promoveu aumento significativo (P Conclusão O EARF promove efeito ansiogênico e altera a reatividade vascular por um mecanismo que envolve prostanóides endoteliais. O EARF aumenta o estresse oxidativo sistêmico.

Palavras-chaves: estresse, reatividade vascular, ansiedade, disfunção endotelial

Resumo: 02.035

CAMUNDONGOS COM REDUÇÃO NA LIBERAÇÃO DE ACETILCOLINA APRESENTAM ALTERAÇÕES EM PROCESSO INFLAMATÓRIO CARDÍACO CAUSADO PELA INFECÇÃO POR T.cruzi

Autores

1LARA, A.

1, ALCÂNTARA, T.

2, BARROSO, A.

2, BRANT, F.

1, GUIMARÃES, D.

2, FONSECA,

E. 2, RESENDE, R. R.

2, GOMES, E.

2, MACHADO, F. S.

1, GUATIMOSIM, S.

1 Fisiologia e

Biofísica - UFMG, 2 Bioquímica e Imunologia - UFMG,

3 Biotecnologia - UFPB

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPEMIG

Resumo Introdução Recentemente foi descrito o papel anti-inflamatório da acetilcolina (ACh). Similar ao seu papel de neurotransmissor, a ACh é um mediador do Sistema Imune, agindo negativamente em processos pró-inflamatórios. Objetivos Com intuito de avaliar o papel da ACh no processo inflamatório cardíaco, camundongos VAChT KDHOM, que apresentam aproximadamente 65% de redução na expressão do transportador vesicular de ACh (VAChT) e consequente redução na liberação de ACh, foram infectados com Trypanosoma cruzi. Código de Experimentação Animal

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89/2010 Código de Experimentação Humana Métodos Camundongos WT e VAChT KDHOM com 12 semanas foram infectados com 50 tripomastigotas da cepa Colombiana via intraperitoneal. A contagem dos parasitas circulantes foi feita através do sangue da veia caudal e o parasitismo e a expressão de FOXP-3 no coração através de qPCR. A dosagem de citocinas do tecido cardíaco foi realizada por ELISA. Cultura de macrófagos infectados com T.cruzi foi feita para avaliação da atividade tripanocida dessas células. Os resultados foram expressos pela média ± erro padrão. As análises foram realizadas através do teste t student ou ANOVA two-away seguido do pós-teste de Bonferroni. A significância foi estabelecida para um p < 0.05. Resultados Apesar de não ter sido observada diferença significativa na parasitemia (WT=520.2±128.8; VAChT KDHOM=368.3±63.8 parasitas/µL), o parasitismo cardíaco foi maior (~50%) nos camundongos VAChT KDHOM aos 35 dias pós infecção (dpi), sendo similar ao dos camundongos WT aos 40 e 55dpi. Dosagens de citocinas pró e anti-inflamatórias no coração dos camundongos WT e VAChT KDHOM foram feitas aos 20, 35, 40 e 55 dpi e expressas em ng/mL. Não houve diferença na produção basal de citocinas entre os grupos controles. Os níveis de TNF-α (WT=0.625±0.16; VAChT KDHOM=2.00±0.26), IL-6 (WT=1.598±0.32; VAChT KDHOM=3.20±0.14), IL-12 (WT=2.05±0.73; VAChT KDHOM=3.69±0.37) e IFN-γ (WT=0.682±0.13; VAChT KDHOM =2.273±0.35) mantiveram-se elevados nos corações dos camundongos VAChT KDHOM aos 55dpi, enquanto que os mesmos decairam nos corações dos camundongos WT infectados. Contrariamente, os níveis de produção da IL-10 decairam após 40 dpi nos corações de camundongos VAChT KDHOM (WT=0.815±0.17; VAChT KDHOM=0.872±0.07). Já a produção de TGF-β, mesmo com a queda entre 40 e 55 dpi, continuou maior nos corações dos camundongos VAChT KDHOM quando comparados aos WT (WT=1.61±0.37; VAChT KDHOM=5.12±0.67). A expressão basal de RNAm para o gene que codifica FOXP-3 foi cinco vezes maior no coração dos camundongos VAChT KDHOM quando comparados aos WT, comportamento semelhante foi observado durante a infecção. Cultura de macrófagos de camundongos VAChT KDHOM infectados com T. cruzi teve menor contagem de tripomastigotas no sobrenadante quando comparada a de macrófagos WT (WT=866.7±36.55; VAChT KDHOM=161.7±66.48 (parasitasx103/mL). Conclusão Aumento nos níveis de citocinas pró-inflamatórias e na expressão de FOXP-3 no coração e a atividade tripanocida aumentada nos macrófagos de camundongos VAChT KDHOM, indicam um papel importante da ACh na modulação da resposta inflamatória na Doença de Chagas.

Palavras-chaves: Acetilcolina, Coração, Inflamação, VAChT

Resumo: 02.036

EFEITOS DA EXPOSIÇÃO AO CHUMBO POR 7 DIAS SOBRE A VASODILATAÇÃO DE ARTÉRIAS PULMONARES EM RATOS.

Autores 1COVRE, E. P.

1, FIORIM, J.

1, FURIERI, L. B.

1, dos Santos, L

1 Fisiologia - UFES

Apoio Financeiro: CNPq, FAPES, UFES

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Resumo Introdução O chumbo é um metal pesado, considerado um importante poluente ambiental e de alto risco para a saúde pública. Evidências indicam que mesmo sob-baixas concentrações, este metal pode promover alterações vasculares sistêmicas. Recentemente temos iniciado estudos dos seus efeitos sobre a função vascular pulmonar. Objetivos Analisar o efeito da exposição por sete dias ao acetato de chumbo em baixa concentração sobre a função vascular pulmonar, pelo estudo “in vitro” da reatividade vascular e modulação endotelial. Código de Experimentação Animal CEUA/UFES 018/11 Código de Experimentação Humana Métodos Utilizamos ratos wistar (250-300g – protocolo CEUA/UFES 018/11) expostos por sete dias ao acetato de chumbo i.m. (dose inicial de 4 µg/100g e subsequentes de 0,55 µg/100g/dia) ou a solução salina. Após, os animais tinham seu bloco cardiopulmonar retirado e, com auxilio de um microscópio, ramos de resistência (3ª ordem) da artéria pulmonar eram dissecados e seccionados em segmentos de aproximadamente 2 mm, montados em câmara com miógrafo, para o estudo da reatividade vascular. Foram avaliadas as respostas contráteis ao cloreto de potássio (KCl, 80 mM); e a vasodilatação dependente e independente do endotélio foi analizada respectivamente por curva dose-resposta à acetilcolina (ACh 10-13-10-3 M) e ao nitroprussiato de sódio (NPS, 10-13-10-3 M) após pré-contração com 5-HT (10-3 M). A resposta à acetilcolina também foi realizada após incubação por 30 minutos ao Tetraetilamonio (TEA, 10-3M), indometacina (10-5M) ou ao L-NG-nitroarginine-methyl-ester (L-NAME, 10-4M). Os resultados estão expressos como média ± EPM da resposta máxima, e P Resultados Houve um prejuízo na contração ao KCl (1,88±0,30 vs. 3,19±0,33 mN/mm) e redução na resposta vasodilatadora NPS (52,2±4,7 vs. 73,1±8,1%) nos animais expostos ao chumbo, sem diferença na vasodilatação endotélio-dependente (ACh 34,9±5,6 vs 38,9±3,5%). Enquanto a incubação com L-NAME bloqueou o relaxamento à ACh em ambos os grupos, o TEA reduziu o relaxamento no grupo chumbo (9,3±3,7% vs. 26,5±4,3%) sem qualquer efeito no controle (23,9±3,8 vs. 25,2±3,2%). A incubação com indometacina não modificou a vasodilatação no controle (21,2±6,2 vs. 25,2±3,2%), porém também reduziu o relaxamento (16,3±5,6 vs. 25,2±3,2%) no grupo chumbo, embora sem alcançar níveis estatisticamente significantes. Conclusão Os dados sugerem que o chumbo foi capaz de provocar alterações tanto em relação à resposta constritora quanto vasodilatadora na musculatura lisa vascular pulmonar, além de alterar o padrão de modulação endotelial, com maior participação de hiperpolarização via canais para potássio e provavelmente prostaciclina, mantendo a resposta vasodilatadora endotélio-dependente.

Palavras-chaves: chumbo, artéria pulmonar, reatividade vascular

Resumo: 02.037

Avaliação do bloqueio agudo do receptor AT1 e da reatividade vascular na pressão arterial em um modelo experimental de dislipidemia.

Autores 1AMÉRICO, A. L. V.

1, AGUIAR, V. O.

1, NETO, G. B.

1, FARAH, V. M. A.

1, FIORINO, P.

1

Fisiologia Cardiovascular e Renal - UPM

Apoio Financeiro: Mackpesquisa

Resumo Introdução A obesidade é considerada um dos mais importantes problemas de saúde pública, sendo a quinta maior causa de morte do mundo. O aumento da obesidade na infância e na adolescência é ainda um problema mais grave. A associação da obesidade com alterações metabólicas, como a dislipidemia, e a hipertensão, são importantes fatores de risco para lesão vascular e o desenvolvimento de doenças cardiovasculares. Objetivos O objetivo do trabalho foi avaliar a reatividade vascular, e a contribuição da angiotensina II (ANGII), na hipertensão arterial observada em ratos submetidos a uma dieta hiperlipídica do desmame até a fase adulta, durante 8 semanas. Código de Experimentação Animal Processo CEUA N° 077/03/2011 Código de Experimentação Humana Métodos Foram utilizados ratos Wistar machos recém–desmamados (21 dias de idade), pesando entre 50-60g, divididos em dois grupos (n=6/grupo): grupo controle (GDP) e grupo hiperlipídico (GHL), onde o grupo GDP recebeu ração comercial e o grupo GHL uma ração enriquecida em lipídeos (30%). Após anestesia com cloridrato de Ketamina (80mg/Kg) e Xylazina (12mg/Kg), os animais foram cateterizados na artéria e veia femorais e, após 24 horas, foi realizada o registro da pressão arterial média (PAM) (15 minutos), seguida da infusão dos agentes vasoativos fenilefrina (Fe:0,5, 1 e 2 µg/ml) e nitroprussiato de sódio (Np:5, 10 e 20 µg/ml), para avaliação das respostas pressoras e depressoras, respectivamente. Após foi realizada a inibição farmacológica da ANG II, através da infusão, em dose única, de Losartan (10mg/Kg), bloqueador do seu receptor AT1. Os valores da pressão arterial foram obtidos, digitalizados e processados pelo programa WinDaq (DataQ Instruments). Resultados A PAM aumentou significantemente no GHL (118 ± 2, mmHg) quando comparado ao GDP (105 ± 3, mmHg), sem alteração da frequência cardíaca. As respostas pressoras e depressoras não foram significativamente diferentes entre os grupos estudados. A administração do Losartan levou a uma queda da PAM significantemente maior no grupo GHL (-10±3, mmHg) quando comparada ao GDP (-4±3, mmHg). Conclusão Nossos resultados mostraram que o consumo da dieta hiperlipídica, do desmame até a fase adulta, 8 semanas, não alterou

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a responsividade vascular a Fe e ao Np, sugerindo integridade vascular. Entretanto, a resposta aumentada ao Losartan, sugere a participação da ANGII no aumento da pressão arterial observada neste modelo.

Palavras-chaves: Dieta hiperlipídica, Dislipidemia, Hipertensão arterial

Resumo: 02.038

DIPEPTIDYL PEPTIDASE IV (DPPIV) CORRELATES WITH CARDIAC DYSFUNCTION IN CONGESTIVE HEART FAILURE

Autores

1SALLES, T. A.

2, dos SANTOS, L.

1, JUNIOR, D. F. A.

1, BARRETO, A. L. T.

3, ANTONIO, E. L.

3,

TUCCI, P. J. F. 1, PEREIRA, A. C.

1, GIRARDI, A. C. C.

1 Laboratório de Genética e Cardiologia

Molecular - InCor, 2 Ciências Fisiológicas - UFES,

3 Fisiologia - UNIFESP

Apoio Financeiro: FAPESP and CNPq

Resumo Introdução Objetivos The present study aimed to test the hypothesis that the activity and/or expression of DPPIV, an enzyme that inactivates cardiorenal protective peptides including glucagon-like peptide-1 (GLP-1) and brain natriuretic peptide (BNP), would be associated with poorer outcomes in heart failure (HF). Código de Experimentação Animal SDC 3055/07/130 Código de Experimentação Humana CAPPesq nº0248/10 Métodos Experimental HF was induced in male Wistar rats (200–250 g) by left ventricular (LV) myocardial injury after radiofrequency catheter ablation. Rats were divided in three groups: Sham, HF and HF+DPPIV inhibitor (Sitagliptin 40mg/kg/day). Six weeks after surgery, animals were individually housed in metabolic cages during 3 days for assessment of renal function. Plasma and heart DPPIV activity/expression were measured spectrophotometrically and by immunoblotting respectively. For evaluation of cardiac function a pressure-volume catheter was positioned into the LV cavity. Histological analysis was performed for morphometric parameters. Plasma DPPIV activity was also measured in patients (n = 190) with heart failure. For comparisons between two groups an unpaired t-test was used. If more than two groups were compared, results were analyzed by ANOVA followed by Bonferroni’s post-hoc tests Resultados

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Plasma DPPIV activity and abundance were increased in animals with HF compared to Sham. Additionally, plasma DPPIV activity positively correlated with ventricular end diastolic volume (R² =0.517; p < 0.001) and lung/body weight (R² =0.492; p < 0.01). A negative correlation between plasma DPPIV activity and ejection fraction was also observed (R² =0.602; p < 0.001). Interestingly, HF animals also exhibited an increase of expression and activity of DPPIV in heart tissue, especially in endothelial cells. Six-week treatment with the DPPIV inhibitor Sitagliptin attenuated cardiac dysfunction, mitigated cardiac hypertrophy, interstitial fibrosis, scar thickness, lung congestion, left ventricular end diastolic volume and prevented decreases of cardiac ejection fraction. Sitagliptin also raised the plasma levels of active GLP-1, increased activation of cardioprotective signaling pathways including PKA, and Akt, and reduced the levels of apoptosis compared to non-treated HF rats. Despite the higher circulating total BNP, renal PKG activity was lower in HF rats compared with sham and Sitagliptin-treated rats, suggesting a decrease in active/total BNP ratio. Renal function did not differ between groups, but glomerular filtration rate was modestly, but significantly increased by Sitagliptin compared to HF. Plasma DPPIV activity in patients was also increased compared to healthy subjects and a negative correlation was found with ejection fraction (R² =0.20; p=0.009). Conclusão Taken together, our results demonstrate that circulating DPPIV activity correlates with poorer cardiovascular outcomes in human and experimental HF. Moreover, our data demonstrate that long-term DPPIV inhibition mitigates the development and/or progression of HF in rats.

Palavras-chaves: Dipeptidil Peptidase IV, Extracellular Volume, Heart Failure, Incretins, Natriuretic Peptides

Resumo: 02.039

PROGRESSÃO DA FUNÇÃO CARDÍACA E ALTERAÇÕES MOLECULARES EM CARDIOMIÓCITOS VENTRICULARES DE MODELO MURINO DE HIPOFUNÇÃO COLINÉRGICA

Autores

1GUIMARÃES, D. A.

2, LARA, A. A.

5, GOMES, E. R. M.

4, ROCHA, N.

2, SZAWKA, R. E.

2,

MELO, M. B. 3, GUATIMOSIM, C.

6, PRADO, V. F.

2, GUATIMOSIM, S.

1, GOMEZ, M. V.

1 PÓS-

GRADUAÇÃO - IEP-SANTA CASA BH, 2 FISIOLOGIA E BIOFÍSICA - UFMG,

3 MORFOLOGIA

- UFMG, 4 CENABIO - UFRJ,

5 BIOTECNOLOGIA - UFPB,

6 Anatomy & Cell Biology - Robarts

Research

Apoio Financeiro: CAPES, CNPQ, FAPEMIG, FIRCA-NIH

Resumo Introdução A noradrenalina (NE) e a acetilcolina (ACh) respectivamente, são os neurotransmissores das inervações cardíacas simpáticas e parassimpáticas. Em conjunto, essas inervações formam o sistema nervoso autonômico capaz de controlar a frequência cardíaca e a força de contração mantendo assim a homeostase do coração. O desequilíbrio neste sistema é conhecido como desbalanço autonômico e está presente em diferentes cardiomiopatias como hipertensão, insuficiência cardíaca e diabetes. Objetivos Investigar a progressão da função cardíaca de camundongos com redução na expressão do transportador vesicular de

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acetilcolina (VAChT knockdown). Em um segundo plano iremos investigar a presença de possíveis alterações moleculares e celulares nos cardiomiócitos ventriculares desses camundongos. Código de Experimentação Animal 16/2011 Código de Experimentação Humana Métodos Todos os experimentos foram realizados com camundongos machos VAChT KD Homozigotos (KDHOMO) e seus respectivos controles (WT) em diferentes idades (3, 6 e 15 meses). Para avaliar a função cardíaca os animais foram submetidos à análise de ecocardiografia. A dosagem de catecolaminas foi realizada através da técnica de HPLC. A produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) foi avaliada através de microscopia confocal com utilização da sonda MitoSOX. A avaliação da expressão gênica foi feita através da técnica de PCR em tempo real. Para análise estatística foi utilizada teste t Student com significância estabelecida para valores de p Resultados Os resultados de ecocardiografia mostram que a fração de encurtamento (FS) apresenta-se menor nos animais KDHOMO com três meses de idade (WT 20,6% ±1,2 vs KDHOMO 16,1% ±1,2 n=7). Temporalmente, observou-se um aumento da FS nos KDHOMO com seis meses de idade quando comparados aos seus controles (WT 20,3% ±1,1 vs KDHOMO 27,9% ±2,1 n=7). Aos 15 meses de idade animais KDHOMO não apresentam diferença significativa da FS quando comparados aos seus controles. Animais KDHOMO com seis e 15 meses apresentam aumento nos níveis de noradrenalina cardíaca (WT 14,2 pg/mL ± 1,4 vs KDHOMO 25,5 pg/mL ± 3,5 n=4) e (WT 15,3 pg/mL ± 1,4 vs KDHOMO 20,2 pg/mL ± 1,3 n=5), respectivamente. Animais KDHOMO com seis e 15 meses apresentaram aumento significativo de ROS no cardiomiócito (WT 1,00 u.a ±0,04 vs KDHOMO 1,61 u.a ±0,09 n=60) e (WT 1,00 u.a ±0,02 vs KDHOMO 1,31 u.a ±0,03 n=60), respectivamente. Os animais KDHOMO com seis meses apresentam aumento na expressão dos marcadores de estresse cardíaco ANP, BNP e βMHC Conclusão Os resultados mostram que os animais KDHOMO apresentam um remodelamento da função contrátil distinto do observado em animais WT com o envelhecimento. Esse resultado pode ser atribuído, pelo menos em parte, ao aumento nos níveis de noradrenalina, sugerindo um importante papel da maquinaria colinérgico no controle dos níveis de noradrenalina cardíaca.

Palavras-chaves: ESTIMULAÇÃO ADRENÉRGICA, FUNÇÃO CARDÍACA, NORADRENALINA, SINALIZAÇÃO DE CÁLCIO, VAChT

Resumo: 02.040

Ventricular regeneration and function in the adult rat after post-natal cardiac injury

Autores

1ZOGBI, C.

1, CARVALHO, A. E. T. S. D.

1, CACERES, V.

1, NAKAMUTA, J. S.

2, ROCHITTE, A.

C. 1, KRIEGER, J. E.

1 Laboratório de Genética e Cardiologia Molecular - InCor - FMUSP,

2 Setor de

Ressonância Magnética - InCor - FMUSP

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Resumo Introdução Embryonic cardiac development is associated with cardiomyocytes proliferation which is supposed to diminish or even stop in terminally differentiated post-natal cardiomyocytes. Thus, cardiac injury is replaced by fibrosis and scarring. Nonetheless, recent evidence shows that the neonatal mice hold a brief and robust capacity of heart regeneration after apex resection. Objetivos The aim of this study was to determine neonatal rat regenerative potential after myocardial apex resection and to evaluate whether heart function is preserved in the adult. Código de Experimentação Animal 3793/12/049 Código de Experimentação Humana Métodos Neonatal wistar rats (Capepesq: 3793/12/049, 1-day-old and 7-day-old rats) were submitted to heart apex resection. Removed area was quantified through magnetic resonance imaging before and after surgery. After 21 days post-operation hearts were collected and neoformed apex tissue was evaluated through histologic analysis. Perfusion analysis was performed by SPECT scanner 21 days post-surgery and in adults in both groups and in sham-operated groups. Hemodynamic analyses under basal and stress conditions were performed in all groups using a MicroTip pressure-volume catheter. Resultados First, we reproduced the mice data and observed similar robust regenerative response in 1-day-old vs. 7-day-old apex resection rats. We were able to precisely quantify the apex resection by MRI (18% and 16% for 1-day-old and 7-day-old rats, respectively). Histological analyses 21 days after surgery demonstrated that neoformed area in 1-day-old rats were cardiac Troponin I cells in higher amount compared to 7-day-old rats, which presented major repair through collagen deposition. We also demonstrated the sustained capacity of these neoformed cells in maintaining cardiac perfusion and ventricular performance in adults through hemodynamic analysis, which showed that under basal conditions there was no difference between sham, 1-day-old and 7-day-old groups. In contrast, under hemodynamic stress, only the 1-day-old group was able to preserve cardiac function such as Stroke Volume (Sham: -25.8 ± 3.7; 1-day-old: -14.3 ± 11.5; 7-day-old: -36.4 ± 5.6%; P Conclusão Taken together our results showed that neonatal rats at postnatal day 1 are capable of cardiac regeneration allows preservation of cardiac function under hemodynamic stress in the adult, even though there is a deficit in cardiac tissue perfusion.

Palavras-chaves: apex resection, hemodynamics, neonatal rat, regeneration, heart

Resumo: 02.041

Maquinaria colinérgica e a manutenção da fisiologia do cardiomiócito

Autores 1ROCHA-RESENDE, C

1, LADEIRA, M. S.

2, RESENDE, R. R.

1, GUATIMOSIM, S.

1 Fisiologia e

Biofísica - UFMG, 2 Bioquímica e Imunologia - UFMG

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPEMIG, NIH (Fogarty International Award)

Resumo Introdução Recentemente, nosso grupo demonstrou que todos os componentes da maquinaria de síntese e de liberação de acetilcolina, sendo eles ChAT (colina acetiltransferase), VAChT (transportador vesicular de acetilcolina), CHT-1 (transportador de colina de alta afinidade), AChE (acetilcolinesterase) e AChR-M2 (receptor muscarínico do tipo 2) estão presentes no cardiomiócito e que essa maquinaria colinérgica previne o remodelamento induzido pela estimulação adrenérgica in vitro . Objetivos Tendo em vista o papel da acetilcolina na manutenção da função cardíaca, nosso objetivo foi avaliar a consequência da inibição de componentes da maquinaria colinérgica do cardiomiócito. Código de Experimentação Animal 016/11 Código de Experimentação Humana Métodos Cardiomiócitos de ratos Wistar neonatais (1-2 dias) foram isolados de acordo com os procedimentos estabelecidos pelo Comitê de Ética Animal da UFMG. Uma sequência de siRNA complementar ao RNA mensageiro do gene do VAChT e da AChE foi utilizada. Vesamicol (5μM), inibidor do VAChT, e Hemicholinium-3 (10μM), inibidor do CHT-1, foram utilizados nesses experimentos. Resultados Nos cardiomiócitos incubados com vesamicol e hemicholinium-3 foi observado um aumento de 3,7 e de 2,3 vezes na expressão da cadeia pesada de miosina, um marcador hipertrófico. Além disso, a área celular das células cardíacas tratadas com vesamicol e hemicholinium-3 apresentou aumento de 16% e de 30%, respectivamente. Foi realizado o silenciamento do VAChT em cardiomiócitos neonatais. A redução de 81% nos níveis dessa proteína resultou em um aumento de 6 vezes na expressão da cadeia pesada de miosina e também no aumento de 29% na área celular do grupo silenciado. Num outro grupo experimental, foi realizado o silenciamento da AChE, enzima que degrada a acetilcolina. Constatou-se que a redução de 82% nos níveis do RNA mensageiro do gene codificador da AChE causou uma redução de 32% na expressão da cadeia pesada de miosina. Além disso, foi observada uma redução de 73% nos níveis do RNAm do VAChT. Conclusão Em conjunto, nossos resultados demonstram que tanto a inibição quanto o silenciamento do VAChT levam ao remodelamento da célula cardíaca e que o aumento na disponibilidade de acetilcolina devido a redução nos níveis da AChE tem o efeito oposto, indicando que a maquinaria colinérgica do cardiomiócito desempenha um importante papel na

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manutenção fisiologia celular.

Palavras-chaves: acetilcolina, cardiomiócito, hipertrofia, VAChT

Resumo: 02.042

Exercise training mediates anti-catabolic but not anabolic effects in rats’ skeletal muscle during the transition from cardiac hypertrophy to heart failure

Autores

1,2SOUZA, R. W. A.

1, PIEDADE, W.P

1, SOUZA, P.A.T

1, SOARES, L.C

3, CAMPOS, D.H.S

3,

CICOGNA, A.C 1, PAI, M. D.

1 Department of Morphology - Unesp,

2 Department of Anatomy, Cell

Biology and Physiology and Biophysics - Unicamp, 3 Department of Internal Medicine - Unesp

Apoio Financeiro: Fapesp

Resumo Introdução In heart failure (HF) muscle wasting and exercise intolerance are often observed. Despite the convincing anabolic effect of aerobic exercise training (ET) in HF, a direct effect of ET on the regulators of skeletal muscle mass has not well been described. Objetivos The aim of the present study was to elucidate, whether ET prescribed during the transition from cardiac hypertrophy to HF attenuates the atrophy components expression responsible for the muscle mass reduction. We also tested the hypothesis that ET would prevent the skeletal muscle atrophy through hypertrophy pathway overexpression. Código de Experimentação Animal 198-CEUA Código de Experimentação Humana Métodos We employed ascending aortic stenosis (AS) to induce HF in Wistar male rats by a stainless-steel clip. Sham-operated animals were used as controls. Eighteen weeks after surgery, when AS animals presented ventricular dysfunction, detected by echocardiogram, rats were randomized to 10 weeks of supervised exercise training (ASET) or to a control sedentary group (AS). Plantaris cross-sectional area (CSA) was assessed by myosin ATPase staining. mRNA and protein expression levels of atrophy members (TNF-α, ubiquitin proteossome system (UPS) components, Foxo1 and myostatin), hypertrophy members (IGF-I and Akt) and a anti-proteolytic component (PGC1α) were evaluated by real-time PCR and Western blot, respectively. Resultados

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After twenty eight weeks of experiment AS group compared with Sham presented cachexia and an increase of TNF-α and its downstreams NFkB, MAFbx, MuRF1, Foxo1 and myostatin expression. However, in the ASET group the myopathy was significantly attenuated, concomitantly with a decrease in atrophy promoters. Interestingly there was not an increase in hypertrophy components levels (IGF-I and Akt), but increased PGC1α mRNA/protein levels was observed. Conclusão Collectively, our data provide evidence that ET during the transition from cardiac hypertrophy to HF effectively prevented the myopathy possibly through counteracting TNF-α, UPS, Foxo1 and myostatin overexpression, not by IGF-I/Akt overexpression, but through anti-proteolytic genes activity as PGC1α. Thus, we suggest that the attenuation of skeletal muscle wasting in HF by ET is not restricted to an increase of anabolic state, but a reduction of catabolic properties through activation of components that inhibits muscle degradation systems.

Palavras-chaves: Exercise Training, Heart Failure, Skeletal Muscle

Resumo: 02.043

EFFECTS OF METHYLMERCURY AND SELENIUM ON ELECTRICAL PARAMETERS OF RAT HEART

Autores 1SANTOS, M. C. P.

1, SOTTANI, T. B. B.

1, MEDEI, E. H.


1 IBCCF -

UFRJ

Apoio Financeiro: CAPES; CNPq/INPeTAM

Resumo Introdução Methylmercury (MeHg) is an organic derivative of mercury found in high levels in aquatic environment of the Amazon region. Human contamination occurs mainly by consumption of contaminated fish. There are numerous reports of cardiotoxic effects of MeHg, such as increased risk of coronary heart disease and myocardial infarction. In contrast, selenium (Se), an essential trace mineral, is also found in high levels in fish of the Amazon region. Se is a component of selenoproteins, that act to prevent cell damage by free radicals. Objetivos To investigate the effects of MeHg and Se on electrocardiographic parameters, myocardial susceptibility of reperfusion arrhythmias and action potential of ventricular cardiomyocytes from rats. Código de Experimentação Animal CCS/UFRJ/IBCCF-109 Código de Experimentação Humana Métodos

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The study protocol was approved by the Institutional Ethical Committee for Animal Experimentation (IBCCF-109). Male Wistar rats (200-300g) were divided into 4 groups treated daily by gavage, for 28 days: Ctrl (vehicle; n=9); MeHg (3 mg/kg/day of CH3HgCl; n=9); Se (200 µg/kg/day of Na2O3Se; n=8); MeHg/Se (3 mg/kg/day of CH3HgCl plus 200 µg/kg/day of Na2O3Se; n=10). We recorded electrocardiograms (ECG) for analysis of RR and QT intervals. The QT interval was corrected by the Bazett’s equation (QTc = QT/RR½). After treatment period, the animals were sacrificed and their hearts excised. For ischemia and reperfusion protocol, hearts were cannulated into a modified Langendorff’s system and perfused with Krebs-Henseleit buffer (KHB), saturated with 95% O2 plus 5% CO2, with constant flow (10 ml/min) and temperature (37°C). The initial diastolic blood pressure was adjusted to 10 mmHg. The protocol was 15 min. of perfusion of KHB for stabilization, followed by a 15 min. record of baseline parameters, 30 min. of global ischemia and 60 min. of reperfusion. Reperfusion arrhythmias were classified and quantified at the first 30 min. of reperfusion. To record action potentials (AP) of the left ventricle (LV) we used the intracellular microelectrode technique. We analyzed resting potential (RP), amplitude (APA), action potential duration at 30% and 90% of the repolarization (APD30 and APD90) and triangulation (APD90-APD30). For statistical analysis we used the One Way and Two Way ANOVA with Bonferroni post-test. P Resultados MeHg (150,6 ± 2,7 ms) and MeHg/Se (137,1 ± 1, 9 ms) showed increased duration of QTc interval vs Ctrl (125,5 ± 1,27 ms). However, the QTc of MeHg/Se was lower than MeHg. At the reperfusion period MeHg showed higher number of premature ventricular beats (Ctrl: 38,4 ± 5,1; Se: 28,8 ± 10,8; MeHg: 73,5 ± 5,8; MeHg/Se: 28,0 ± 4,6) and ventricular tachycardias (Ctrl: 8,9 ± 3,6; Se: 2,9 ± 0,9; MeHg: 37,8 ± 10,5; MeHg/Se: 6,1 ± 2,3) vs all others groups. PR and APA presented no difference among the groups, however, MeHg increased triangulation, APD30 and APD90 vs Ctrl. Se was effective in preventing these changes, except at APD30. Conclusão Our study suggests that MeHg promotes cardiac electrical changes that can be partially prevented by concomitant treatment with Se. However, more studies are needed to elucidate the mechanisms of these changes.

Palavras-chaves: methylmercury, selenium, electrical parameters, heart

Resumo: 02.044

Therapeutic potential of combined treatment with stem cells and phosphodiesterase-5 inhibitor in monocrotaline-induced pulmonary arterial hypertension in rats

Autores

1,1,1,1FERRAZ, A. P.

1,1,1,1, FERRAZ E.B.

1,1,1,1, RAMOS, E. A.

1,1,1,1, CABRAL-DA-SILVA, M. C

1,1,1,1, CAMPOS DE CARVALHO, A. C

1,1,1,1, NASCIMENTO, J. H. M.


Chagas Filho - UFRJ

Apoio Financeiro: FAPERJ/DECIT/CNPq/SESDEC, CAPES

Resumo Introdução Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a disease characterized by adverse pulmonary vascular remodeling leading to increased arterial resistance, hypertension and right heart failure. PAH can be experimentally induced by monocrotaline

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(MCT) administration, which cause pulmonary vascular injury and the development of severe PAH in rats. The use of phosphodiesterase-5 inhibitors (IPDE-5) is one of the current therapies for HAP, but has limited beneficial effects for the patients. Stem cell therapy is currently a promising strategy for regeneration of injured tissues Objetivos Our objective is to evaluate the therapeutic effect of combined treatment with IPDE-5 and bone marrow-derived mononuclear cells (BMMC) in the PAH induced by MCT in rats Código de Experimentação Animal CCS/IBCCF 010 Código de Experimentação Humana Métodos 25 male Wistar (Rattus norvegicus) rats weighting 200g were randomized in 5 groups: control (CTL), monocrotaline (MCT), MCT plus IPDE-5 (IPDE-5), MCT plus BMMC (BMMC) and MCT plus IPDE-5 plus BMMC (IPDE-5+BMMC). PAH was induced by one dose of MCT (60 mg/kg, i.p.). Two weeks after MCT injection, BMMC (1x10^7, i.v.) were injected and IPDE-5 (25mg/kg/day) was administered orally for 14 days. At end of treatment, were evaluated: echocardiogram parameters (TAc: flow acceleration time, VTI: velocity time integral, and area of the RV and LV in diastole); right ventricular systolic pressure (RVSP), body and heart weights. Results are expressed as mean ± SEM, with p Resultados Survival rate was decreased in MCT (60% survival; p Conclusão The combined treatment with IPDE-5 plus BMMC attenuated the pulmonary arterial resistance and decreased hypertrophy of rats with monocrotaline-induced pulmonary arterial hypertension

Palavras-chaves: monocrotaline, bone marrow-derived mononuclear , phosphodiesterase-5 inhibitor, pulmonary arterial hypertension, stem cells

Resumo: 02.045

ALTERAÇÕES NA VIA SINALIZADA POR PROTEÍNA Gq EM ANIMAIS NOCAUTE PARA O RECEPTOR MAS

Autores

1PARREIRA, A. B.

1, SANTOS, R. A. S.

1, MELO, M.

3, GUIMARAES, D. A.

2, RESENDE, R.

1,

SCALZO JÚNIOR,S.R.A 1, GUATIMOSIM,S.

1 Fisiologia e Farmacologia - UFMG,

2 Bioquímica -

UFMG, 3 Medicina e Biomedicina - IEP-Santa Casa

Apoio Financeiro: FAPEMIG,CAPES,CNPq

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Resumo Introdução O Sistema Renina-angiotensina (SRA) desempenha um papel fundamental na regulação das funções cardiovasculares, além de estar envolvido na patogênese de várias doenças cardíacas. O eixo Ang 1-7/receptor Mas é uma importante via cardioprotetora deste sistema e animas com deleção gênica deste receptor tem contribuído muito para o esclarecimento das funções do SRA. Objetivos Esclarecer os mecanismos que levam a alterações nos parâmetros de função cardíaca frente ao tratamento com fenilefrina em camundongos com deleção gênica do receptor da Angiotensina-(1-7) (Mas-KO) comparados com camundongos selvagens (WT). Código de Experimentação Animal 68/2009 Código de Experimentação Humana Métodos Número do protocolo CETEA: 68/2009. Neste estudo foram utilizados camundongos FVBN machos selvagens (WT) e nocaute para o receptor Mas (Mas-KO) com idade entre 12-14 semanas submetidos a um tratamento com fenilefrina (10mg/Kg) durante 14 dias.Para análise da morfologia e da função cardíaca in vivo foi utilizado o exame ecocardiográfico transtorácico. Para realização da medida do transiente de Ca2+, os cardiomiócitos foram incubados com uma sonda fluorescente sensível ao Ca2+ (flúor 4/AM- 5µmol/L). A expressão de proteína RGS2 foi realizada através de Western blot e o RNAm da mesma foi obtido através de PCR em tempo real. Através da técnica de imunoflurescêcia verficamos a translocação nuclear da GRK5 mediante incubação com fenilefrina (1µm) durante 20 minutos. Foi utilizado o teste one way ANOVA. O nível de significância foi estabelecido para um *p <0.05 Resultados O número de óbitos dos animais Mas-KO tratados com fenilefrina é de 8% e 34% nos animais WT . No fim dos 14 dias de tratamento, houve um aumento significativo (p Conclusão Camundongos Mas-KO apresentam um aumento na expressão da RGS2. Em conjunto nossos resultados indicam uma menor sensibilidade da via regulada por proteína Gq nestes animais. Os 14 dias de tratamento, levam a uma diminuição na expressão do RNAm para a proteína RGS2 nas células ventriculares de camundongos Mas-KO tornando-os mais responsivos à fenilefrina.

Palavras-chaves: Cardiomiócitos, Fenilefrina, Função cardíaca

Resumo: 02.046

A ASSOCIAÇÃO DE DERIVADOS N-ACILIDRAZÔNICOS LASSBio-294 e LASSBio-897 MELHORAM AS COMPLICAÇÕES CAUSADAS PELO INFARTO DO MIOCÁRDIO EM RATOS ESPONTANEAMENTE HIPERTENSOS

Autores

1FRAZÃO, T. N.

2, SILVA, J. S.

3, MAIA, R. C.

2,3, FRAGA, C. A. M.

3, BARREIRO, E. J. L.

2,

ZAPATA-SUDO, G. 1,2

, SUDO, R. T. 1 Programa de Ciências Cirurgicas - Faculdade de Medicina -

UFRJ, 2 Programa de Desenvolvimento de Fármacos, ICB - UFRJ,

3 Laboratório de Avaliação e

Síntese de Substâncias Bioativas - UFRJ

Apoio Financeiro: FAPERJ, Capes, CNPQ/INCT, FUJB

Resumo Introdução Trabalho anterior mostrou propriedades cardioprotetoras dos derivados N-acilidrazônicos LASSBio-294 e LASSBio-897 em ratos espontaneamente hipertensos (SHR) submetidos ao infarto do miocárdio (IM). Objetivos Investigar as alterações cardiovasculares resultante da associação do LASSBio-294 com LASSBio-897 em modelo de IM em ratos SHR. Código de Experimentação Animal DFBCICB049 Código de Experimentação Humana Métodos Os protocolos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética de Uso de Animais do CCS/UFRJ (DFBCICB049). Os SHR (12-14 semanas) foram divididos em grupos falso-operado (FO) e infartado (IM), tratados com associação de LASSBio-294 e LASSBio-897 (20 mg/kg v.o.) durante 8 semanas. Os resultados da associação foram comparados à aqueles previamente obtidos com uso isolado de LASSBio-294 e LASSBio-897. Após oito semanas do IM induzido pela oclusão da artéria coronária descendente anterior os seguintes parâmetros foram avaliados: pressões sistólica (PS), diastólica (PD) e média (PM), pressão sistólica do VE (PSVE), pressão VE diastólica final (PVEDF) e as suas derivadas máximas +dP/dt e -dP/dt. Os resultados foram expressos como média±EPM. A comparação entre diferentes grupos foi realizada por meio da ANOVA, seguido do teste de Newman-Keuls’ e as diferenças foram consideradas significativas para P < 0,05. Resultados Relativo ao grupo SHR FO, o IM não alterou a PS, PD, PM, PSVE, PVEDF, +dP/dt, FC e o duplo produto OS x FC. Tratamento com LASSBio-294 e associação com LASSBio-897 nos animais IM reduziu a PS de 204,9±7,6 (n= 9) para 120,7±11,8 (n= 5) e 116,4±6,0 (n= 4) mmHg, respectivamente. A PS não foi modificada após tratamento com LASSBio-897. PD foi reduzida pelo LASSBio-294 ou com sua associação ao LASSBio-897 de 146±5,9 mmHg (n= 9) para 77,8±18,8 (n= 5) e 90,9±4,0 (n= 4) mmHg, respectivamente. Tratamento com LASSBio-897 (132,4±11,5 mm Hg, n= 4) inão mudou a PD. Desta forma, a PM foi reduzida pelo LASSBio-294 ou com a associação com LASSBio-897, porém, não com LASSBio-897. A PSVE diminuiu de 177±11,2 (n= 9) para 133,8±19,2 (n= 5) e 116,3±3,7 (n= 4) mmHg pelo tratamento com LASSBio-294 ou associado ao LASSBio-897, respectivamente. A PSVE não foi modificada pelo LASSBio-897. Comparado ao grupo SHR FO, o IM aumentou (P < 0,05) a PVEDF de 11,0±1,6 (n= 6) para 26,9±3,6 (n= 11) mmHg o que reduzido pelo LASSBio-294 ou associado ao LASSBio-897 para 10,6±6,5 (n= 4) e 6,10±1,97 (n= 4) mm Hg, respectivamente. O LASSBio-897 também reduziu para 18,5±4,4 (n= 5) mm Hg. Tratamento com LASSBio-294, LASSBio-897 ou a associação

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reduziu a +dP/dt de 11933±829 (n= 9) mmHg/s para 8956±231 (n= 4), 6289±546 (n= 5) e 7331±266 (n= 4) mm Hg/s, respectivamente. Comparado ao SHR FO, o IM reduziu a -dP/dt de -6920±867 (n= 10) para -2795±923,7 (n= 6) mmHg/s). Aumento da -dP/dt foi observada após tratamento com LASSBio-294, LASSBio-897 ou a associação para -6350±1541 (n= 4), -4812±294 (n= 5) e -5096±305,4 (n= 4), respectivamente. A FC e o duplo produto PS x FC não foram alterados pelo LASSBio-897. Porém, foi reduzido pelo LASSBio-294 e em associação com LASSBio-897. Conclusão O LASSBio-294, LASSBio-897 e as suas associações são promissores na prevenção de disfunção cardíaca do animal SHR induzida pelo IM.

Palavras-chaves: Infarto do miocárdio, LASSBio-294, LASSBio-897

Resumo: 02.047

Alterações Morfológicas em aortas de camundongos LDL-/- submetidos à Restrição Alimentar

Autores

1MONTEIRO, L. H.

1, MELO, E. D. S.

1, AZEVEDO, F. R.

1, JURADO, M. C.

2, GUTIERREZ, P. S.

3, SOUZA, H. P.

3, SORIANO, F. G.

1, CARAMELLI, B.

1 Cardiopneumologia - Unidade Clinica de

Medicina Interdisciplinar em Cardiologia - InCor/HCFMUSP, 2 Patologia Clinica - InCor/HCFMUSP,

3 Clinica Medica - Laboratório de Investigação Médica - 51 - FMUSP


Resumo Introdução A alimentação interfere diretamente sobre o metabolismo dos seres vivos, podendo assim, contribuir para promoção ou prevenção da doença aterosclerótica. Objetivos Investigar as alterações morfológicas em aortas de camundongos LDLr-/- submetidos à restrição alimentar e sua relação com os fatores de risco cardiovascular. Código de Experimentação Animal 430/11 Código de Experimentação Humana Métodos Número da aprovação do projeto (protocolo:430/11) no comitê de ética em experimentação animal da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. Camundongos com 6 semanas de idade, pesando 25±3g, homozigotos para a ausência do gene do receptor de LDL (LDLr-/-), foram divididos em 4 grupos que receberam, diariamente, por 15 semanas,

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5g das respectivas dietas: Aterogênico (AT) - rica em colesterol, ácidos graxos saturados e pobre em fibras; DASH - pobre em gorduras saturadas, totais, colesterol e sódio e rica em fibras, cálcio, magnésio e potássio; Jejum Intermitente (JI) - ração padrão suplementada com micronutrientes em dias alternados e Controle (Cont)- ração padrão todos os dias. Ao final os animais foram anestesiados e sacrificados, analisou-se macroscopicamente (dissecções do coração, aorta ascendente e arco aórtico) e microscopicamente pelo método de Hematoxilina e Eosina a espessura das placas ateroscleróticas nas aortas dos camundongos. Resultados Foram realizadas as dissecções do coração, aorta ascendente e arco aórtico dos grupos DASH (N=5), AT (N=5), JI (N=5) e Controle (N=5) com a utilização de um microscópio óptico. A área da placa aterosclerótica de cada animal foi expressa como a média das placas medidas em 6 cortes de 10µm de espessura, com 80µm de distância entre os cortes. Observamos que houve diferença (p Conclusão Neste modelo animal, o jejum intermitente parece apresentar um perfil menos aterogênico traduzido pela menor área da lesão aterosclerótica.

Palavras-chaves: aortas, aterosclerose, camundongos LDL -/-, Jejum intermitente

Resumo: 02.048

O potencial arritmogênico do antimoniato de sódio pentavalente está associado à diminuição da corrente de potássio IKr

Autores 2ARANTES, P. C.

1, CARVALHO, A. C. A.



Chagas Filho - UFRJ


Resumo Introdução O antimoniato de sódio pentavalente (ASP) é a droga de escolha no tratamento da leishmaniose há mais de 50 anos. Porém, na dose terapêutica o ASP causa graves alterações cardiovasculares e arritmias severas, como torsades de pointes, que podem culminar em morte súbita. Objetivos Investigar o mecanismo pró-arrítmicos do ASP em corações de cobaias tratadas com ASP. Código de Experimentação Animal IBCCF 018 Código de Experimentação Humana

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Métodos O protocolo experimental foi aprovado no comitê de ética em experimentação animal (IBCCF 018). Cobaias ( Cavia porcellus ) machos pesando cerca de 250 g foram tratados com ASP (20 mg/kg/dia, i.m.) por 15 dias (ASP, N = 5) ou com veículo (Controle, N = 3). Cardiomiócitos ventriculares foram dissociados com uso de colagenase e as correntes iônicas foram registradas utilizando a técnica de patch clamp, na configuração whole-cell. A corrente repolarizante IK total foi ativada por pulsos despolarizantes (de -60 mV para potenciais entre -50 a +50 mV, duração de 2,5 s), com pré-pulso para -40 mV para inativar INa e 1 μM de nicardipina para bloquear ICa,l . A corrente IK total foi decomposta nos seus componentes

IKs e IKr utilizando-se os bloqueadores de IKr (E4031, 5 μM) e IKs (Cromanol, 30 μM), respectivamente. As amplitudes das correntes foram normalizadas pela capacitância das células. Os resultados são expressos como média ± E.P.M. Utilizou-se ANOVA bivariada para a comparação entre os grupos. A significância estatística foi p <0,05. Resultados Não foi observada diferença entre grupos na capacitância celular (Controle: 129.8 ± 10.07 pF, N = 12; ASP: 126.0 ± 8.96 pF, N = 22). Nos potenciais de membrana de 20, 30, 40 e 50 mV, a densidade da corrente IK total foi menor no grupo ASP (20 mV: controle 4.78 ± 0.54 pA/pF; ASP 3.34 ± 0.27 pA/pF, p IKr foi menor no grupo ASP em relação ao controle (40 mV: 0.99 ± 0.11 vs. 1.82 ± 0.49 pA/pF; 50 mV: 1.42 ± 0.18 vs. 2.20 ± 0.60 pA/p, p IKs (50 mV: controle = 7.31 ± 0.60 pA/pF; ASP = 6.53 ± 0.45 pA/pF, p > 0,05). Conclusão Nossos resultados sugerem que o potencial arritmogênico do uso crônico de ASP está relacionado ao retardo na repolarização cardíaca causado pela diminuição da densidade da corrente repolarizante IKr .

Palavras-chaves: antimoniato de sódio pentavalente , arritmogênese, repolarização cardíaca , corrente de potasssio

Resumo: 02.049

CELL SURFACE EXTERNALIZATION OF PROTEIN DISULFIDE ISOMERASE IS INDEPENDENT OF CLASSICAL SECRETORY PATHWAY IN VASCULAR CELLS.

Autores 1,2

ARAUJO, T. L. S. 2,1

, CLARO, M. Z. 1, OLIVEIRA, P. V. S.

1,2, LAURINDO, F. R. M.

1 Biologia

Vascular - InCor FMUSP, 2 Cardiologia - FMUSP

Apoio Financeiro: FAPESP, INCT-Redoxoma

Resumo Introdução Protein disulfide isomerase (PDI), a major redox chaperone from the endoplasmic reticulum (ER) lumen, is also present at cell surface and extracellular compartments (=epi/pericellular or epcPDI ). EpcPDI regulates thiol redox state of membrane/secreted proteins linked to thrombosis, platelet function, cell adhesion, viral infection and, in vascular cells, oxidant production and vessel remodeling. While epcPDI has mechanistical importance and is a potential therapeutic target in these events, the route of PDI externalization is yet unknown.

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Objetivos Here, we investigate PDI externalization route in vascular smooth muscle (VSMC) and human umbilical vein endothelial (HUVEC) cells, with a particular focus on the classical secretory pathway. Código de Experimentação Animal 1089/09 Comissão de Ética HCFMUSP Código de Experimentação Humana Não se aplica Métodos The work was approved by Ethics Committee – HCFMUSP, protocol number 1089/09. Detection of epcPDI in VSMC and HUVEC was performed by biotinylation of surface proteins using EZ-Link sulfo-NHS (N-hydroxysuccinimido)-biotin, followed by binding to streptavidin-coated magnetic beads. Samples are subjected to SDS/PAGE and western blotting developed with LiCor/Odyssey system, quantified by densitometry. We also performed confocal microscopy of non-permeabilized cells. Data are mean ± SEM (n=3) of results compared with controls without treatments. Statistical comparisons were performed through ANOVA and Student–Newman Keuls test using GraphPad Prism 4 (GraphPad software, Inc). Resultados We detected for the first time epcPDI in VSMC, both at baseline and at increased levels after calcium ionophore A23187. PDI interaction with cell surface is apparently not electrostatic, since sodium carbonate washing did not remove epcPDI. Brefeldin A (BFA), which blocks ER-Golgi-cell surface vesicular proteins transport, enhanced basal epcPDI expression and did not prevent stimulatory A23187 effects. Also, BFA promoted a patchy pattern of intracellular and epcPDI expression. Analogous results occurred in presence of the Golgi inhibitor monensin. Methylamine, an inhibitor of endo/exocytosis, and the actin disrupting agent cytochalasin D also did not inhibit PDI externalization. In HUVECs all treatments promoted similar effects in epcPDI expression Cell surface biotinylation showed that BFA in HUVEC (75,6 ± 4,67%) and VSMC (110 ± 4,62%) did not alter significantly quantity of epcPDI. Similar effects was observed using monensin in HUVEC (87,3 ± 11,1%) and VSMC (112,3 ± 4,33%). All such compounds were tested at distinct concentrations that promoted no cytotoxicity, as evaluated with propidium iodide and annexin V by flow cytometry. Conclusão These data suggest that PDI externalization in vascular cells is a dynamically regulated process and occurs by routes that are independent of classical secretory pathway. Better understanding of such mechanisms may allow therapeutic modulation of epcPDI-dependent processes.

Palavras-chaves: Protein Disulfide Isomerase, Protein Trafficking, Unconventional Secretory Pathway, Vascular Cell Types, Vascular Remodeling

Resumo: 02.050

RAPAMYCIN ACTIVATES TGF RECEPTOR INDEPENDLY OF ITS LIGANTS: IMPLICATION IN ENDOTHELIAL DYSFUNCTION.

Autores 1,2,3

MIYAKAWA, A. A. 1, GIRAO-SILVA, T.

1, KRIEGER, J. E.

2,3, EDELMAN, E. R.

1,2,3,

MIYAKAWA, A. A. 1 Laboratório de Genética e Cardiologia Molecular - LIM 13 - InCor - FMUSP,

2

Division of Health Science and Technology - MIT, 3 Cardiovascular - BWH

Apoio Financeiro: FAPESP, NIH

Resumo Introdução Deployment of drug-eluting stent (DES) dramatically reduced restenosis but very late stent thrombosis has increased if compared to bare-metal stents. Rapamycin, drug used in the first generation of DES, has a well recognized antiproliferative action: it binds to FKBP12 in the cytosol and the complex rapamycin-FKBP12 inhibit mTOR pathway and induces cell cycle arrest. More recently, it has been demonstrated that rapamycin has thrombogenic potential by enhancing the expression of plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) but the mechanism underlying this process is not yet elucidated. Interestingly, FKBP12 is bounded to TGF receptor-type I (TGFRI) and thus protecting its spontaneous activation. We hypothesize that rapamycin can shifts off FKBP12 from the TGFRI promoting its activation in the absence of TGFβ Objetivos To test the hypothesis that rapamycin can activate TGF receptor independently of its ligant and induces thrombogenicity by increasing PAI-1 expression. Código de Experimentação Animal MIT protocol: 0409-032-12 Código de Experimentação Humana Métodos Endothelial cells (HUVEC – human umbilical vein endothelial cells) were treated with rapamycin (10nM) and/or TGF receptor inhibitor (TGFRIi) 100nM) for 24 hours. Cells were lysed for gene or protein expression and culture media was collected for TGFβ detection by ELISA and analysis of 60 cytokines factors with RayBio® protein array kit. Mice (C57/BL6, 20-30g) were injected intraperitonially with rapamycin (4mg/kg/day) and/or TGRFRi (25mg/kg/day) for 3 days (MIT Comitee of Animal Care Protocol Approval: 0409-032-12). Coronary artery carotid was collected for analysis of PAI-1 by immunofluorescence. In vivo vascular thrombogenicity was evaluated by photochemical thrombosis experiment. Data are presented as mean ± standard error. Resultados Rapamycin induced Smads phosphorylation (Smad1, Smad2 and Smad5). TGFRIi was efficient to block Smad2 but not Smad1/5 phosphorylation (pSmad2/Smad2 - Ctrl: 0.55±0.05, rapamycin (R): 0.82±0.01, TGFRIi: 0.48±0.04, R + TGFRIi: 0.30±0.05; p-Smad1-5/Smad1-5 - Ctrl: 0.29±0.03, rapamycin (R): 0.91±0.06, TGFRIi: 0.29±0.05, R + TGFRIi: 1.09±0.04). Rapamycin did not induced TGFβ secretion (Ctrl: 868.6±76.3, R: 824.9±68.9) indicating that Smad activation is independent of TGFβ As expected, rapamycin reduced cell proliferation and decreased phosphorylation of p70S6K which is activated mTOR. Interestingly, TGFRIi did not interfered with cell cycle arrest or p-p70S6K diminishment induced by rapamycin (BrdU incorporation (%) - Ctrl: 99.73±5.56, R: 75.95±1.71, TGFRIi: 99.42±6.93, R + TGFRIi: 75.19±4.33) indicating TGF pathway do not participate in cell proliferation inhibition. On the other hand, the PAI-1 up-regulation by rapamycin is abrogated in the presence of TGFRIi (Ctrl: 0.60±0.08, R: 1.02±0.11, TGFRIi: 0.42±0.07, R + TGFRIi:0.63±0.13). In vivo experiments demonstrated that carotid arteries of rapamycin-treated mice are more thrombogenic and this is prevented by TGFRIi treatment (time of occlusion (min) - Ctrl: 91.83±16.81, R: 56.83±10.23, TGFRIi: 127.0±25.13, R + TGFRIi: 110.4±18.08). Conclusão Taken together, rapamycin activates TGF receptor independently of its ligant TGFβ and promotes PAI-1 expression. The

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thrombogenicity induced by rapamycin is due to activation of TGF pathway (Smads) and it is independent of the cell proliferation arrest.

Palavras-chaves: endothelial dysfunction, PAI-1, Rapamicin

Resumo: 02.051

SIGNALING PATHWAYS ACTIVATED IN VIVO BY MINERALOCORTICOID RECEPTOR AND ANGIOTENSIN-(1-7) IN VENTRICULAR MYOCYTES.

Autores

1ALMEIDA, P. W. M.

2, LIMA, R. F.

1, SANTIAGO, N. M.

1, GAVIOLI, M.

1, MITRAUD, L.

1,

NOCCHI, E. 1, MELO, M. B.

1, CAMPAGNOLE-SANTOS, M. J.

1, SANTOS, R. A. S.

1,

GUATIMOSIM, S. 1 Department of Physiology and Biophysics - UFMG,

2 Department of Physiology

and Pharmacology - UFC

Apoio Financeiro: CNPq, FAPEMIG, CAPES

Resumo Introdução Mineralocorticoids have been implicated in the pathogenesis of cardiac diseases. In contraposition, Angiotensin (Ang)-(1-7) has been shown to attenuate cardiac dysfunction induced by excessive mineralocorticoid receptor (MR) activation in vivo, suggesting possible interactions between these two signaling pathways in the heart. Objetivos Here, we investigated the signaling pathways induced by DOCA-salt treatment in transgenic (TG) rats with chronic increase of plasmatic Ang-(1-7) rats treated or not with deoxycorticosterone acetate (DOCA). Código de Experimentação Animal 68/2009 Código de Experimentação Humana Métodos After six weeks of DOCA-salt, rats presented increased blood pressure and cardiac ejection fraction when compared to SD rats. Marked cardiac hypertrophy was also observed at six weeks of DOCA-salt treatment. In contrast, DOCA-TG rats did not develop cardiac hypertrophy or changes in ventricular function. We also examined intracellular Ca2+ levels in freshly isolated Fluo-4-AM loaded cell Resultados The amplitude of the [Ca2+]i transient was reduced in SD-DOCA cardiomyocytes, when compared to cells from SD rats.

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This difference was partly explained by reduced SERCA2 and phospholambam phosphorilation at Thr17 found in these cells. In contrast, TG-DOCA cardiomyocytes presented enhanced Ca2+ transien, increased SERCA2 and PLN Thr17 phosphorylation. Western-blot analyses also revealed a significant increase in ERK phosphorylation, as well as increased PP1 and PKC&alpha expression levels in cardiomyocytes from SD-DOCA. All these changes were prevented in TG rats. Under these conditions, both pressoric and direct effects of DOCA in the heart can contribute to the cardiac remodeling observed in vivo, raising the question of whether protection in TG rats was a result of reduced blood pressure in these rats. Therefore, we also investigated whether beneficial effects of Ang-(1-7) against DOCA-salt hypertension were independent from the attenuation of blood pressure. Here, similar blood pressure was imposed by treating SD-DOCA rats with hydralazine (SD-DOCA hydralazine). Cardiac hypertrophy, and significant alterations in PP1, SERCA, PLN Thr17 phosphorylation, ERK and PKC&alpha levels were observed in hearts from SD-DOCA hydralazine when compared to TG-DOCA rats. Conclusão In conclusion, our data show that Ang-(1-7) protects the heart against mineralocorticoid activation by activating specific signaling pathways in cardiomyocytes and these changes are independent from DOCA induced-pressoric effects.

Palavras-chaves: Angiotensin , Calcium , Cardiomyocyte, Mineralocorticoid receptor

Resumo: 02.052

EFEITO DA ALTERNAGINA-C, UMA PROTEÍNA EXTRAÍDA DO VENENO DA SERPENTE URUTU, NA CONTRATILIDADE CARDÍACA DE TRAÍRA (HOPLIAS MALABARICUS): DADOS PRELIMINARES

Autores 1MONTEIRO, D. A.

1, ARAUJO, H. S. S. D.

1, KALININ, A. L.

1, RANTIN, F. T.

1 Departamento de

Ciências Fisiológicas - UFSCar

Apoio Financeiro: FAPESP (Proc. 2012/10993-4)

Resumo Introdução A alternagina-C (ALT-C), uma proteína tipo desintegrina extraída do veneno da serpente brasileira urutu ( Bothrops alternatus ), exibe a peculiar e promissora atividade de regeneração de tecidos lesados ao induzir uma revascularização. Tal molécula, portanto, possui potencial para ser utilizada na indústria farmacêutica, como coadjuvante em terapias pró-angiogênicas. As doenças cardiovasculares como infarto agudo do miocárdio, isquemias crônicas e doenças coronarianas são responsáveis pela maior causa de mortalidade em todo mundo e a descoberta de moléculas capazes de estimular angiogênese tem causado crescente interesse na aplicação terapêutica. Objetivos O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da ALT-C sobre os mecanismos envolvidos no acoplamento excitação-contração do miocárdio isolado de traíra, Hoplias malabaricus . Código de Experimentação Animal parecer no. 049/2012 - CEUA/UFSCar

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Código de Experimentação Humana Métodos Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais da UFSCar (parecer no. 049/2012). Exemplares adultos de ambos os sexos, foram divididos em 2 grupos experimentais: grupo controle (Ct, n = 9) que recebeu injeção de salina e grupo alternagina-C (ALT-C, n = 8) que recebeu ALT-C na concentração de 0,5 mg/kg de massa corpórea. Tanto a salina quanto a ALT-C (0,2 mL) foram administradas por meio da canulação da artéria do 3º arco branquial. Após 7 dias, os peixes foram sacrificados para a remoção do coração e preparo de tiras ventriculares para o registro, in vitro , da força de contração isométrica (Fc – mN/mm2), dos parâmetros tempo-dependentes (tempos para o pico máximo de tensão – TPT, para 50% de relaxamento – THR e para 90% do relaxamento – TH90, em ms) e das taxas de contração (dFc/dTMax - mN/mm2/ms) e relaxamento (-dFc/dTMin - mN/mm2/ms). Os registros foram obtidos a uma frequencia de estimulação sub-fisiológica de 0,2 Hz (12 bpm) durante 40 minutos. Os dados foram analisados com teste t-Student para identificar diferenças entre os grupos Ct e ALT-C e análise de variância Anova One-way complementada pelo pós-teste de Tukey para a identificação de alterações dentro de um mesmo grupo experimental ao longo do tempo. Resultados A ALT-C causou um aumento significativo (p Conclusão A ALT-C atua modulando positivamente o acoplamento excitação-contração dos miócitos, tornando a cinética de contração e relaxamento mais rápida, exibindo um efeito inotrópico e cronotrópico positivos.

Palavras-chaves: alternagina-C, força de contração, peixe

Resumo: 02.053

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE CARDIOPROTETORA INDUZIDA POR FATORES HUMORAIS COM PESO MOLECULAR < 3 kDa, LIBERADOS DURANTE O PRECONDICIONAMENTO ISQUÊMICO

Autores 2,1

OLIVEIRA, D. F. D. 2,1

, CACIANO, A. R. 1, CUNHA, N. R.

2,1, MACIEL, L.

2,1, NASCIMENTO, J.

H. M. 2 IBCCF - UFRJ

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPERJ

Resumo Introdução O precondicionamento isquêmico (PCI) é um mecanismo endógeno de proteção contra injúrias de isquemia e reperfusão. Assim, é importante elucidar os mecanismos do PCI para explorar sua possível utilização farmacológica. Objetivos

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Avaliar a cardioproteção induzida pela fração Código de Experimentação Animal IBCCF007 Código de Experimentação Humana Métodos O estudo foi aprovado pela comissão de avaliação do uso de animais em pesquisa institucional (IBCCF007). Corações de ratos Wistar ( Rattus novergicus ) machos foram perfundidos com solução de Krebs-Henseleit (KHB) em sistema de coração isolado com fluxo constante de 10 ml/min. Um balão de látex foi inserido no ventrículo esquerdo e conectado a um transdutor de pressão para registro da pressão intraventricular, para medida da pressão diastólica final (PDFVE) e pressão desenvolvida (PDVE = pressão sistólica - PDFVE). Os grupos experimentais (n=5 em cada grupo): Controle: submetidos a 30 min. de isquemia e 60 min. de reperfusão (I/R); PCI: submetidos a 3 ciclos de 5 min. de isquemia e 5 min. de reperfusão, antes do I/R; RECEP: perfusão do efluente coletado durante o PCI, por 15 min antes da I/R; 1 de adenosina), 10 nM naloxone (antagonista de receptor opióide; ou bloqueadores de canais de K + sensíveis a ATP, sarcolemais (10 μM gliburide) e mitocondriais (100 μM 5HD). Ao final da reperfusão, os corações foram seccionados e incubados com trifeniltetrazólio (1%), para determinação planimétrica da área de infarto (AI). Resultados Os grupos PCI, RECEP e <3kDa. Conclusão O PCI e a transferência do efluente coronariano ou de sua fração com peso molecular 1 de adenosina e de opióides, e dos canais de potássio sensíveis a ATP, sarcolemais e mitocondriais.

Palavras-chaves: Cardioproteção, Fracionamento, Isquemia/reperfusão

Resumo: 02.054

CRP3 sensibiliza células de músculo liso venoso à apoptose quando induzida em segmentos venosos arterializados sob estresse mecânico aumentado

Autores 1MENEGON, A. S.

1, MANTUAN, P. R.

1, BARAUNA, V. G.

1, CAMPOS, L. C. G.

1, KRIEGER, J.

E. 1 Laboratório de Genética e Cardiologia Molecular - InCor

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq, CAPES, Fundação Zerbini

Resumo Introdução A CRP3 é constituída por 2 domínios LIMs e sequências repetidas de glicina o que lhe permite participar de interações

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proteína-proteína, remodelamento do citoesqueleto, regulação transcricional, proliferação e diferenciação celular na miogênese. Além disso, a CRP3 tem sido descrita como uma nova molécula pro-apoptótica que pode ser importante durante o complexo processo de remo remodelamento vascular. Nós demonstramos que a CRP3 é expressa apenas em células musculares lisas vasculares (VSMCs) arteriais e que o aumento de stretch, mas não shear stress, aumenta a expressão de CRP3 em VSMCs de segmentos venosos arterializados. Objetivos Testar a hipótese que a CRP3 sensibiliza VSMCs a apoptose. Código de Experimentação Animal 0824/09 Código de Experimentação Humana Métodos : VSMCs foram obtidas de veia jugular e artéria aorta de rato Wistar, utilizando o método explante. Para a produção de estiramento foi utilizado o sistema Flexercell Tension Plus. VSMCs foram submetidas, in vitro, ao estímulo mecânico de 10% de stretch com freqüência de 1Hz, por 24hs. Para a indução da apoptose as VSMCs foram tratadas com a droga pro-apoptótica ceramida nas concentrações de 50, 75 e 100µM por 24h. Para detecção da apoptose, as células foram marcadas com iodeto de propídio (PI) para ensaio de ciclo celular ou com anexina V – FITC e PI e imediatamente após foram avaliadas por citometria de fluxo (FACSCAlibur – BD) através do software CellQuest Pro. Resultados Ensaios de citometria de fluxo demonstraram que SMCs de aorta de rato wild type (wt) foram mais sensíveis a apoptose quando comparadas com VSMCs de aorta de rato knockout (ko) para CRP3 após tratamento com ceramida (% células

mortas: ctrl wt 7,5±1,7; DMSO wt 7,9±2,5; ceramida 50M wt 9,6±1,0; ceramida 75M wt 23,5±3,8; ceramida 100M wt

54,9±4,8 e ctrl ko 2,6±0,2; DMSO ko 2,7±0,2; ceramida 50M ko 2,7±0,3; ceramida 75M ko 7,2±2,2; ceramida 100M ko 16,4±6,2, p Conclusão Nossos dados sugerem que a CRP3, endógena em VSMCs de artéria aorta ou induzida pelo stretch em VSMCs de veia jugular, aumenta a sensibilidade destas células a apoptose. Considerando os efeitos pleiotrópicos da CRP3 sobre VSMCs submetidas a diferentes níveis de estresse mecânico, especulamos que ela pode se tornar um importante alvo terapêutico para modulação do processo de remodelamento vascular especialmente para aumentar durabilidade de enxertos venosos como conduto ao fluxo sanguíneo arterial.

Palavras-chaves: Apoptose, CRP3, SMCs, stretch

Resumo: 02.055

EFEITO DA SUPLEMENTAÇÃO COM CREATINA SOBRE A FUNÇÃO ENDOTELIAL MICROVASCULAR SISTÊMICA E ELEMENTOS DO SANGUE

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Autores 1,1,1,1

MORAES, R. D. 1,1,1,1

, GUIMARÃES, B. D. S. P. L. 1, BEZERRA, D. V. B.

1,1,1,1, TIBIRIÇÁ, O.

E. 1 Departamento de Fisiologia e Farmacodinâmica do Instituto Oswaldo Cruz - FIOCRUZ

Apoio Financeiro: Faperj

Resumo Introdução A suplementação com creatina (S-Cr) contribui para melhorias na capacidade anaeróbica alática e indução da síntese protéica no músculo esquelético. Apesar de evidenciada sua ação anti-oxidante e anti-inflamatória sobre o endotélio vascular, nenhum estudo até o presente investigou os efeitos deste procedimento sobre a reatividade microvascular e suas influencias na perfusão tecidual. Objetivos Neste sentido, o presente estudo pretende investigar os efeitos da S-Cr sobre a reatividade microvascular dependente de endotélio e a densidade capilar sistêmica. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana 02471512.4.0000.5272 Métodos Após aprovação do CEP do Instituto Nacional do Coração (parecer 53301), quarenta indivíduos entre 20 e 40 anos, tiveram a reatividade microvascular e a densidade capilar cutânea (DCC) avaliadas em repouso e após hiperemia reativa pós-oclusiva (HRPO), através das tecnologias de fluxometria Laser Speckle e de video-microscopia intravital e os elementos do sangue analisados antes e após uma semana de suplementação com 20g diárias de creatina. Resultados A S-Cr não alterou a reatividade microvascular ou a homocisteinemia, porém, elevou significativamente (p Conclusão Os resultados sugerem que a S-Cr aumente os níveis de energia celular reduzindo o catabolismo de purinas e reduza a resistência arteriolar contribuindo para elevação do fluxo sanguíneo tecidual provavelmente associado ao efeito osmótico da creatina que pode contribuir para turgência e eventualmente para lise celular.

Palavras-chaves: suplementação com creatina, reatividade microvascular, densidade capilar

Resumo: 02.056

Alterações eletrofisiológicas cardíacas durante a fase hipodinâmica da sepse, em busca de

novas perspectivas.

Autores 1,3

PINHO-DA-SILVA, L. 3, PINHO, J. F.

1, CRUZ, J. S.

1 Fisiologia e Biofísica - UFMG,

2 Fisiologia e

Biofísica - UFMG, 3 Bioquímica e Imunologia - UFMG

Apoio Financeiro: FAPEMIG, CAPES e CNPq.

Resumo Introdução Sepse é definida como a resposta inflamatória sistêmica proveniente de uma infecção grave de difícil controle que apresenta altas taxas de morbidade e mortalidade. O que chama atenção é que a maioria dos pacientes com sepse morrem de hipotensão refratária e colapso cardiovascular, pois as medidas farmacológicas de rotina com o uso de antibióticos, antiinflamatórios, assim como medidas de reposição da volêmica não têm sido eficazes em reduzir o elevado número de mortes. Isto pode ser atribuído em parte à falta de consenso sobre os mecanismos envolvidos na alteração cardiovascular durante a sepse, principalmente sobre modificações na função dos canais iônicos presentes no miocárdio. Objetivos O trabalho em questão propõe investigar as bases eletrofisiológicas envolvidas na fase hipodinâmica da sepse cuja maior característica é a falência cardíaca. Pretende-se também, avaliar a influência da terapia antibiótica nos parâmetros eletrofisiológicos durante a sepse. Desta maneira, criando perspectivas para o entendimento da disfunção cardíaca na fase critica da sepse. Código de Experimentação Animal 137/2012 Código de Experimentação Humana Métodos Camundongos Balb C, com idade de 8 a 12 semanas, foram submetidos a uma ligação e perfuração cecal, CLP (Sepse), ou apenas tiveram o seu ceco ligado (Sham), tratados ou não com antibiótico (ertapeném sódico 30mg/Kg na 6ª e 18ª h da cirurgia). Após 24 hs da cirurgia os animais foram sacrificados e os miócitos cardíacos, do ventrículo esquerdo, isoladas por digestão enzimática e submetidos a técnica de “patch–clamp” na modalidade current-clamp para a medida dos potenciais de ação ventriculares. A análise dos dados foi feita usando o softwares Sigma Plot 8.0, Pulse Fit e Prisma 4. Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal (CETEA) da Universidade Federal de Minas Gerais (número de protocolo 137/12). Resultados A análise dos parâmetros utilizados para avaliação dos potenciais de ação ventriculares revelaram que os animais sepse apresentam diminuição no tempo para subida em ms de 0,83±0,06, nos animais sépticos, (n=9) para 1,63±0,3, nos animais sham, (n=14); p=0,048, e no tempo para a descida de 21,54±1,74 (Sepse n=11) para 29,63±2,89 (Sham n=14); p=0,035. A terapia antibiótica apresenta influência positiva sobre o tempo para subida (ms); 21,54±1,76 Sepse sem antibiótico (n=11) x 34,48±4,52 Sepse com antibiótico (n=4); p=0,005 e o tempo para a descida (ms). Não foram observadas modificações no potencial de repouso e da amplitude do pico entre os grupos. Conclusão Conclusão: Conclui-se que as alterações no tempo de subida e descida dos PAs durante a sepse, possam estar associados a modificações na função de canais para Na+, K+ e Ca2+ ventriculares.

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Palavras-chaves: Sepse, Canais iônicos, Cardiomiócito, Eletrofisiolofia

Resumo: 02.057

Effects of exercise training during the transition from cardiac hypertrophy to heart failure on cardiac microRNA profile

Autores

1,2SOUZA, R.W.A.

1, CUNHA, J. P.

1, DAL-PAI, M.

1, CARVALHO, R.F.

1 Department of

Morphology - Unesp, 2 Department of Anatomy, Cell Biology and Physiology and Biophysics -

Unicamp


Resumo Introdução MicroRNAs (miRNAs) are a class of small noncoding RNAs that have gained status as important regulators of post-transcriptional gene expression during development and in certain diseases such as heart failure (HF). Although there is a consensus that adjuvant therapies for cardiovascular disease are able to increase patients' quality of life and survival rates a non-pharmacological therapy, exercise training (ET) can reduces a number of cardiovascular risk factors and has been recognized as an important and safe strategy for preventing and treating HF. Objetivos We evaluate the effects of ET prescribed during the transition from cardiac hypertrophy to HF on cardiac micro-RNA profile. Código de Experimentação Animal 198-CEUA Código de Experimentação Humana Métodos We employed ascending aortic stenosis (AS) to induce HF in Wistar male rats (n=10) by a stainless-steel clip. Sham-operated animals (n=5) were used as controls. Eighteen weeks after surgery, when AS animals presented ventricular dysfunction, detected by echocardiogram, rats were randomized to 10 weeks of supervised exercise training (ASET, n=5) or to a control sedentary group (AS, n=5). At the end of the experiment, HF was evaluated by clinical data and the cardiac remodeling by morphologic and functional data obtained by echocardiogram. The expression levels of 373 miRNAs from left ventricles were measured by real-time quantitative PCR using TaqMan Rodent microRNA Array (cards A + B) on an ABI ViiA7 Sequence Detection System and the mean relative quantity (RQ) was calculated and miRNAs differentially expressed between groups were defined as those with>1.5-fold change and P Resultados At the end of the experiment (28th wks), exercise training attenuated the clinical and pathological signs of HF. It also

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attenuated cardiac remodeling with maintenance of systolic and diastolic function. Moreover, miRNAs analysis revealed that twenty-seven miRNAs were deregulated in AS (16 overexpressed, 11 downregulated) and thirty-seven in ASET groups (29 overexpressed, 22 downregulated) with fourteen miRNAs similarly deregulated in both groups. To explore the relevance of the miRNA deregulation, the prediction of miRNAs targets were analyzed using the miRNA Data Integration Portal (mirDIP). Notably, we detected that ET during the transition from cardiac hypertrophy to HF promoted an increased expression of the miRNAs rno-miR-132 (1.9-fold) and rno-miR-212 (4-fold), reported as important regulators of the cardiac muscle growth. Conclusão Taken together, our findings uncover the potential contribution of exercise training in attenuate cardiac dysfunction during HF probably through miRNAs that regulates gene networks involved in this syndrome and reinforces the importance of this intervention as a non-pharmacological tool for heart failure therapy.

Palavras-chaves: Exercise Training, Heart Failure, microRNA

Resumo: 02.058

BLOQUEIO DA ATIVAÇÃO DO RECEPTOR AT1 PELO SHEAR SHEAR POTENCIALIZA A PRODUÇÃO DE ÓXIDO NÍTRICO VIA ERK1/2 E CA2+ EM CÉLULAS ENDOTELIAIS

Autores

1,2SANTOS, L. D.

1, BARAUNA, V. G.

1, KAERIYAMA, R.

1, CAMPOS, L. C. G.

1, MANTUAM, P.

R. 2, KRIEGER, M.

1, KRIEGER, J. E.

1 Lab. de Genética e Cardiologia Molecular - Incor/FM-USP,

2

Departamento de Bioquímica - UNICAMP

Apoio Financeiro: CAPES, CNPq

Resumo Introdução Forcas mecanicas são essenciais para a manutenção da homeostase do sistema cardiovascular. Entretanto, ainda não são conhecidos todos os sensores dessas forcas ou as vias pelos quais elas exercem seus efeitos benéficos sobre a fisiologia cardiovascular. Objetivos Nesse trabalho objetivamos entender os efeitos da ativação do receptor AT1 pelo Shear Stress em células endoteliais. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana 235/11 Métodos . Para tal, células endoteliais extraídas de veia safena humana foram submetidas ao shear stress de 15 dynes/cm2 por 10

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min. Avaliação das vias de sinalização foram observadas por western blotting e as vias de interesse estudadas pelo bloqueio com Candesartan (bloqueio do reeptor AT1) ou Bapta-AM (quelante de Ca2+) ou U0126 (inibidor de MEK1/2). A produção de óxido nítrico liberada no meio de cultura foi feita no NO Analyzer (Sievers). Resultados Shear Stress induz a ativação da ERK1/2 (estatico, 100 ± 15%; SS, 165 ± 9%; p Conclusão Dessa maneira, o presente estudo demonstra que o shear stress pode ativar o receptor AT1 independente de seu ligante angiotensina II. Além disso, o bloqueio do receptor AT1 pelo agonista inverso Candesartan é capaz de potencializar os efeitos benéfico do Shear Stress como a produção de oxido nítrico. A relevância fisiológica desses achados ainda requer novos estudos entretanto, esses dados nos ajudam a explicar as diferenças entre os perfis terapêuticos dos diferentes bloqueadores do receptor AT1 na terapia cardiovascular.

Palavras-chaves: Forçã Mecanica, Receptor AT1, Biologia Vascular, Sinalização Celular

Resumo: 02.059

Título: Ação cardioprotetora do extrato bruto de Ilex paraguariensis A.St. Hill (Aquafoliaceae) e da quercetina durante a isquemia e reperfusão em miocárdio de ratos Wistar (Rattus novergicus, Rodentia) .

Autores 1,1

HELENA, E. S. 1,1

, WALLY, C. M. 1,1

, STEIN, R. 1,1

, REZENDE, J. A. 1, GONÇALVES, C. A. N.

1

Instituto de Ciências Biológicas - FURG

Apoio Financeiro: CNPQ

Resumo Introdução A Ilex paraguariensis (Ip) é comumente usada no sul do Brasil para a preparação de bebidas, como o "chimarrão". Objetivos Este estudo avaliou os efeitos do extrato bruto da Ip e de um de seus compostos o flavonóide quercetina , em modelo experimental de isquemia e reperfusão I/R in vivo em miocárdio de Rattus norvegicus . Código de Experimentação Animal CEUA da FURG parecer n° P051/2011 Código de Experimentação Humana Métodos

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O trabalho foi aprovado pelo Comitê de ética em experimentação animal- CEUA da FURG parecer n° P051/2011. Os ratos foram divididos em seis grupos 1) controle (operados porém sem indução de I/R), 2) grupo I/R, 3) erva-mate (tratados por gavagem com extrato bruto de erva-mate- (EIp) 3h antes de serem operados porém sem indução de I/R), 4) EIp+I/R (associação destes tratamentos), 5) quercetina (QE) (tratados por gavagem com quercetina 3h antes de serem operados mas sem indução de I/R) e 6) QE+I/R(associação destes tratamentos); Os animais (n= 10/grupo) foram divididos para analises de estresse oxidativo (n=5) e para medir a área de risco/infarto (n=5). Áreas de risco e infarto,foram determinadas em fatias do coração por coloração com azul de evans e cloreto de trifenil tetrazólio (TTC). Foram feitas análises de estresse oxidativo: geração de espécies reativas de oxigênio (ERO), expressa em unidades arbitrárias, pelo método de desacetilação do diacetato de diclorodiidrofluorescina; peroxidação lipídica (LPO) , expressa pela concentração de malondialdeído (MDA) pela reação do MDA; e capacidade antioxidante contra radicais peroxil (ACAP), expressa em unidades arbitrárias pela reação de decomposição térmica do ABAP (2, 2´-azobis 2 metilpropionamidina).A preparação do extrato foi feita em soxhlet. Para a indução da isquemia e reperfusão os animais foram anestesiados com Tiopental sódico – 40mg/Kg e Xilazina – 20mg/Kg, traqueostomizados para aporte respitatório, e após toracotomia e exteriorização do coração um fio de sutura ocluiu a artéria coronária descendente anterior esquerda conduzindo-se 15 minutos de isquemia seguidos por 15 minutos de reperfusão. Os dados obtidos foram testados quanto à normalidade – teste de Kolmogorov-Smirnof e homocedasticidade – teste de Levene seguidos por análise de variância de uma via e teste a posteriori de Tukey HSD, com nível de significância de 5%, p Resultados No grupo I/R a área de risco e infarto observada foi respectivamente, 44 mm2 ±1,96 e 42 mm2 ±2,13. Houve efeito cardioprotetor pela redução significativa da área de risco dos animais EIp+I/R (30 mm2 ± 1,47, redução de 26%) e nos animais QE+I/R (29 mm2 ± 1,87, redução de 27%). Também na área de infarto houve redução significativa nos animais EIp+I/R (27 mm2 ± 1,87, redução de 25%) e nos animais QE+I/R (26 mm2 ± 1,77, redução de 29%). A avaliação das ERO não mostrou diferença nos animais submetidos a I/R e aqueles dos grupos EIp+I/R e QE+I/R (p > 0,05). Entretanto a capacidade antioxidante foi significativamente maior nos animais dos grupos EIp+I/R e QE+I/R respectivamente 0,174 e 0,126 em relação ao grupo I/R (0,067) ; Consequentemente os níveis de peroxidação lipídica foram estatisticamente menores nos animais dos grupos EIp+I/R e QE+I/R respectivamente 0,043 e 0,035 em relação ao grupo I/R (0,095). Conclusão A redução nas áreas de risco e de infarto nos leva a sugerir que mecanismos antioxidantes estejam sendo desencadeados tanto pelo extrato bruto de I. paraguariensis como pela quercetina, como demonstrado pela maior capacidade antioxidante contra radicais peroxil e redução do dano lipídico. Estes resultados corroboram com a importância etnofarmacológica dos componentes da erva-mate I. paraguariensis para a proteção do sistema cardiovascular agudamente durante eventos isquêmicos.

Palavras-chaves: Cardiovascular, Ilex Paraguariensis, Isquemia, Quercetina, Reperfusâo

Resumo: 02.060

EFEITOS DA EXPOSIÇÃO AGUDA AO CHUMBO: TÉCNICA DE LANGENDORFF E REATIVIDADE PRESSÓRICA.

Autores 1NUNES, K. Z.

1,2, FURIERI, L. B.

1, SIMÕES, M. R.

1, VASSALO, D. V.

1,1, FIORESI, M.

1 Ciências

Fisiológicas - UFES, 2 Enfermagem - UFES

Apoio Financeiro: CNPq, CAPES, FAPES/FACITEC.

Resumo Introdução A intoxicação com o chumbo (Pb) tem sido relacionado à diversas disfunções no sistema cardiovascular. Foi demonstrado em animais experimentais que a exposição aguda a este metal é capaz de provocar aumento da pressão arterial sistólica (PAS) (Plos One. 6: 4, 2011) além de promover aumento da pressão sistólica do ventrículo esquerdo (PSVE), da pressão sistólica do ventrículo direito (PSVD) e produzir efeitos inotrópico e lusitrópico positivos no músculo cardíaco tanto in vivo quanto in vitro (Braz. J. Med. Biol. Res. 46: 2, 2013). Entretanto, as ações do chumbo no sistema cardiovascular na fase inicial de exposição, ainda são pouco esclarecidas. Objetivos Investigar os efeitos da exposição aguda ao acetato de chumbo sobre a reatividade pressórica à fenilefrina e a função ventricular esquerda de corações isolados de ratos. Código de Experimentação Animal 007/2007 Código de Experimentação Humana Métodos Foram utilizados ratos Wistar (Rattus novergicus albinus), machos, com peso entre 280 e 350 gramas (g) e idade aproximada de 12 semanas. Os protocolos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa com Animais Experimentais do CEUA / EMESCAM regulamentados pelas portarias: 059/2006 de 10 outubro de 2006 e 003/2007 de 04 junho de 2007. Para avaliação da reatividade pressórica à fenilefrina foram administradas doses crescentes deste fármaco (0,03 a 100 μg/Kg, in bolus, em um volume de 5 μL/100g) para a obtenção de uma curva dose-resposta antes e após 1 hora do tratamento agudo com o acetato de chumbo (320 μg/Kg, i.v.). Na avaliação dos parâmetros contráteis do ventrículo esquerdo (VE) perfundidos pela técnica de Langendorff, o protocolo experimental foi realizado antes e após 30 e 60 minutos de perfusão com solução contendo 8 µM de acetato de chumbo. A dose de 320 μg/Kg, i.v., foi selecionada para produzir uma concentração sanguínea próxima de 8 µM (Braz. J. Med. Biol. Res. 46: 2, 2013). Foram utilizados ANOVA 1 ou 2 vias, seguida de post hoc de Tukey ou Bonferroni, respectivamente. Os valores de p < 0,05 foram considerados significantes. Resultados A exposição aguda ao chumbo resultou em redução da reatividade pressórica na curva da PAS (sensibilidade - Ct: -2,93 ± 0,08 versus Pb: -1,58 ± 0,51) e na pressão arterial diastólica (PAD) (sensibilidade - Ct: -3,53 ± 0,18 versus Pb: -2,86 ± 0,20) após 1 hora de exposição. Na avaliação dos parâmetros contráteis do VE foi observado redução na pressão sistólica isovolumétrica do ventrículo esquerdo (PSIVE) (146 ± 18 mmHg antes da adição do Pb para 86,6 ± 7,7 mmHg, após 60 min de exposição). Do mesmo modo as derivadas temporais (dP/dt máx e a dP/dt mín) do VE sofreram redução. A dP/dt máx reduziu de 1899 ± 318 mmHg/s, antes do metal, para 1208 ± 102 mmHg/s, após 1 h de exposição ao Pb. A dP/dt mín, ao mesmo tempo, teve seus valores diminuídos de -2292 ± 374 mmHg/s para -1372 ± 133 mmHg/s. Conclusão O presente estudo demonstrou que a administração aguda ao chumbo foi capaz de reduzir a reatividade pressórica à fenilefrina e de diminuir a PSIVE e as derivadas temporais. Estes achados sugerem que este metal, mesmo em baixas concentrações e na fase inicial de exposição, é capaz de causar prejuízos importantes ao sistema cardiovascular.

Palavras-chaves: chumbo, pressão arterial, sistema cardiovascular

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Resumo: 02.061

Ativação seletiva do controle de qualidade mitocondrial minimiza a progressão da insuficiência cardíaca induzida por infarto do miocárdio

Autores

1GOMES, K. M. S.

1, CAMPOS, J. C.

3, QUELICONI, B.

2, LIMA, V. M.

4, DOURADO, P. M. M.

5,

MATTOS, K. C. 3, KOWALTOWSKI, A.

5, BRUM, P. C.

1, FERREIRA, J. C. B.

1 Anatomia - ICB

III, 2 Anatomia - ICB III,

3 Bioquimica - IQ,

4 Faculdade de Medicina - InCor,

5 Biodinâmica - EEFE

Apoio Financeiro: FAPESP 2012/02654-5 2 2012/05765-2.

Resumo Introdução A formação e o acúmulo de aldeídos decorrentes do estresse oxidativo são extremamente cardiotóxicos e contribuem para o aparecimento das doenças cardiovasculares. O 4-hidroxi-2-nonenal (4-HNE), um aldeído originado a partir da oxidação de fosfolipídios presentes na membrana interna da mitocôndria, apresenta grande poder deletério ao coração. A enzima mitocondrial aldeído desidrogenase 2 (ALDH-2) é uma das principais responsáveis pela eliminação do 4-HNE e manutenção do controle de qualidade mitocondrial. Demonstramos recentemente que a ativação desta enzima utilizando Alda-1, um agonista seletivo da ALDH2 desenvolvido pelo grupo, previne danos cardíacos oriundos do processo agudo de isquemia/reperfusão. Objetivos Com o intuito de melhor entender o papel da ALDH2 na insuficiência cardíaca (IC), bem como seu impacto na bioenergética mitocondrial, tratamos ratos com IC de etiologia isquêmica com Alda-1. Código de Experimentação Animal CEUA-nº 036 na fl.127 do livro 02 Código de Experimentação Humana Métodos Foram utilizados ratos Wistar machos com 3 meses de idade (250 gramas) divididos em 3 grupos: Sham; IC e IC tratado com Alda-1 por um período de 6 semanas (10mg/kg/dia). As análises bioquímicas foram realizadas na área cardíaca livre de infarto. Os dados estão apresentados em média±epm (porcentagem do grupo Sham) Resultados Os animais com IC apresentaram um prejuízo no controle de qualidade mitocondrial, caracterizado pelo acúmulo de proteínas carboniladas (143±15%) e maior formação de adutos de 4-HNE (123±11%) comparados ao grupo Sham. Essas alterações foram acompanhadas pela redução da respiração mitocondrial (77±13%), maior abertura dos poros mitocondriais (179±3%) e exacerbada liberação de peróxido de hidrogênio mitocondrial (391±133%), contribuindo sobremaneira para a redução da fração de encurtamento cardíaca (42±3,1%) em relação ao grupo Sham. O tratamento com Alda-1 foi capaz de aumentar a atividade da ALDH2 (249±71%) e reduzir os níveis de proteínas carboniladas (111±11%) e adutos de 4-HNE (98±4%) para valores próximos do grupo Sham. Ainda, a Alda-1 foi capaz de restaurar a respiração mitocondrial (106±13%) e a abertura dos poros mitocondriais (101±2%), diminuindo parcialmente da liberação

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de peróxido de hidrogênio mitocondrial (184±53%). Por fim, o tratamento sustentado com Alda-1 foi capaz de melhorar, pelo menos em parte, a fração de encurtamento ventricular (59±5%) comparado ao grupo Sham. Conclusão Dessa forma, nossos achados pré-clínicos indicam que o ativador da ALDH2 (Alda-1) tem um importante papel na restauração do controle de qualidade mitocondrial na IC, caracterizado pela melhora na bioenergética mitocondrial associada ao menor estresse oxidativo, contribuindo sobremaneira para a regressão da fisiopatologia da IC.

Palavras-chaves: Disfunção mitocondrial, Infarto do Miocárdio, ALDH2, Alda-1

Resumo: 02.062

Análise da expressão gênica de chaperonas redox da família da dissulfeto isomerase proteica na Síndrome de Marfan

Autores 1PEREIRA, T. V.

1, SANTOS, T. M.

1, GUIDO, M. C.

1, LAURINDO, F. R. M.

1 Laboratório de

Biologia Vascular - InCor/HC-FMUSP

Apoio Financeiro: Fundação Zerbini

Resumo Introdução Manifestações cardiovasculares na Síndrome de Marfan (SM) são as principais responsáveis pela morbi-mortalidade da doença. No entanto, os mecanismos celulares e moleculares envolvidos na gênese do fenótipo vascular característico ainda não estão esclarecidos. A SM decorre de mutação na fibrilina-1 (proteína da matriz elástica), cujo processamento ocorre no retículo endoplasmático (RE). Estudos preliminares do laboratório demonstram importante interação física entre fibrilina-1 e a oxiredutase/chaperona PDI (dissulfeto isomerase proteica, isoforma PDIA1) do RE. Dados em andamento no grupo indicam que: 1) A expressão da PDIA1 aumenta muito entre 3 e 6 meses de idade nos animais com SM (camundongos portadores de um alelo mutante para fibrilina-1), coincidindo com o agravamento da doença vascular; 2) Estudos funcionais, utilizando fibroblastos embrionários extraídos de animais controle ou com SM, demonstraram que o silenciamento da PDI aumenta a taxa de secreção da fibrilina-1, sugerindo que a PDI atua como um fator de retenção da fibrilina-1 no RE. Estes resultados indicam, portanto, uma importância da PDI no processamento da fibrilina-1 no RE e sugerem que outras proteínas da família da PDI também podem estar envolvidas neste processamento, podendo estar superexpressas e interferir na fisiopatologia das alterações vasculares na SM. Pergunta ampla do projeto: o processamento sub-celular da fibrilina-1 mutante por PDIs promove alterações fenotípicas celulares? Objetivos Investigar, em modelo celular e em tecido de camundongos wild-type e com SM, possíveis alterações na expressão de proteínas da família da PDI e associadas a ela. Código de Experimentação Animal 165/10 Código de Experimentação Humana

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Métodos Comparou-se a expressão de mRNA de proteínas da família da PDI em tecido (pulmão) e em cultura de fibroblastos embrionários (MEF) de 16 camundongos da linhagem C129/sv, wild-type (WT) ou com a mutação mgΔloxpneo (SM) para a fibrilina-1. Os pulmões foram coletados de animais com 6 meses de idade, coincidindo com fase de agravamento da doença. Para a extração de mRNA, após homogeneização com N2 líquido, utilizou-se o reagente Trizol (Invitrogen) seguindo as especificações do fabricante. Os MEF foram cultivados a 37ºC (5% de CO2) por 48 horas. O mRNA foi isolado utilizando o kit Oligotex Direct mRNA purification, Qiagen. A conversão para cDNA (150ng) foi realizada por incubação com 25ng/lL OligodT(12-18), 500μM (cada) dNTP, 5μM dithiothreitol e SuperScript II (Invitrogen) a 42ºC por 50 min, acompanhada no termociclador Applied Biosystems (modelo 2720). A quantificação do mRNA foi feita pelo método de Curva Padrão Relativa por PCR em tempo real, com utilização do corante SYBR Green e tendo como controle endógeno a gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH). Os dados foram expressos em média ± erro padrão e o teste não paramétrico de Mann-Whitney foi utilizado para análise entre os grupos, com nível de significância P Resultados Foram realizadas no total 25 corridas de PCR em tempo real para as proteínas PDIA1, Hsp90ab1, Erp46, Hsp90b1, Hspa5, Erp72, Erp29, Erp57, Erp18, Tmx1, Tmx2 e P5, em material extraído de MEFs (n=3). Dentre estas, as chaperonas PDI, Erp18, Erp29, Erp44, Erp46, Erp57 e Tmx1 foram expressas e apresentaram resultados consistentes e reproduzíveis. A Erp57 mostrou um aumento significativo (p=0,002)de 91,75% do SM em relação ao grupo Controle e a Erp46 uma redução (p=0,0018) de 24,4% em relação ao Controle. Outras chaperonas do retículo ou citosol não evidenciaram diferenças significativas nas condições estudadas. Em amostras de tecido pulmonar coletadas de camundongos SM e controle aos 6 meses de idade, comparadas ao rim e coração como normalizadores para a curva, mostrou expressão de PDIA1 significativamente aumentada de 64,28% em relação ao Controle, com Erp46 e Erp57 sem alterações significativas (p=0,473 e p=0,332 respectivamente). Conclusão O processamento sub-celular da fibrilina-1 mutante determina alteração na expressão de proteínas da família da PDI, tendo o potencial de influenciar o fenótipo da doença por mecanismos que incluem resposta ao estresse do RE e/ou sobrecarga dessas chaperonas. As alterações na expressão de Erp57 e Erp46 merecem uma investigação mais aprofundada por outros métodos.

Palavras-chaves: dissulfeto isomerase proteica, Síndrome de Marfan, fibrilina-1, estresse do retículo endoplasmático, estresse oxidativo

Resumo: 02.063

PARTICIPAÇÃO DA ENZIMA GUANILATO CICLASE NO EFEITO VASORRELAXANTE DA FRAÇÃO AQUOSA DO EXTRATO ETANÓLICO DE Terminalia fagifolia Mart. & Zucc. EM AORTA ISOLADA DE RATO

Autores

1NUNES, A. F.

1, SILVA, N. C. B.

1, OLIVEIRA, I. S.

1, VIANA, A. F. S. C.

1, ARCANJO, D. D. R.

1,

NUNES, P. H. M. 1, OLIVEIRA, A. P.

1, OLIVEIRA, R. D. C. M.

1 Núcleo de Pesquisas em Plantas

Medicinais - UFPI

Apoio Financeiro: UFPI/CAPES/CNPq

Resumo Introdução Terminalia fagifolia Mart. & Zucc. (Combretaceae) é uma planta do cerrado brasileiro, conhecida como “capitão-do-mato” e “mirindiba”, usada popularmente no tratamento de afta, tumores e distúrbios gastrintestinais. Estudos anteriores com a fração aquosa (Tf-FAQ) do extrato etanólico da casca do caule dessa espécie (Tf-EtOH) mostraram efeito relaxante dependente de endotélio em artéria aorta isolada de rato, com participação comprovada da enzima NO-sintase. Objetivos Investigar a participação da enzima guanilato ciclase no efeito vasorrelaxante induzido pela fração Tf-FAQ, em artéria aorta isolada de rato. Código de Experimentação Animal CEEA/UFPI, n° 008/12 Código de Experimentação Humana Métodos Os protocolos foram aprovados pelo Comitê de Ética em Experimentação com Animais (CEEA/UFPI, n° 008/12). Utilizaram-se ratos Wistar machos (250-300 g), oriundos do Biotério Setorial do NPPM/UFPI, mantidos sob condições controle de temperatura (22 ± 1ºC) e ciclo claro-escuro de 12 h, com livre acesso à alimentação e água. Após eutanásia, a artéria aorta torácica foi seccionada em anéis (2-3 mm) livres de tecido conectivo e adiposo, que foram incubados a 37◦C em solução de Krebs Normal (pH 7,4) aerados com carbogênio (95% O2, 5% CO2), suspensos por linhas de algodão e fixados a transdutores de força acoplados a um sistema de aquisição (AQCAD/AVS Projetos), para registro das tensões isométricas. Após estabilização (1,0 gf, 1h), verificou-se a integridade do endotélio vascular, pela adição de acetilcolina (1 µM) sobre o componente tônico sustentado da contração induzida com fenilefrina (FEN, 1 μM), considerando sua ausência (E-) em relaxamento inferior a 10% e sua presença (E+) quando superior a 50%. Em um segundo momento, incubou-se o 1H-[1,2,4]Oxadiazolo[4,3-a]quinoxalin-1-one (ODQ, 10 μM) em anéis E+, e após 30 minutos, induziu-se outra contração com FEN e na fase tônica desta adicionou-se cumulativamente Tf-FAQ (0,1–750 μg/mL). Os resultados foram expressos como média ± E.P.M. da CE50, concentração que promove 50% da resposta máxima, obtida por regressão não-linear. Para comparações entre médias, foi usado o teste t de Student não-pareado, considerando significantes valores de *p Resultados O efeito vasodilatador induzido pela Tf-FAQ em anéis de aorta pré-bloqueados com ODQ foi atenuado significativamente em relação ao grupo E+ sem bloqueio, que também se mostrou superior à resposta no grupo E- (E+ ODQ: CE50= 171,25 ± 21,03 μg/mL, n=5; E+: CE50= 131,65 ± 38,03 μg/mL, n=7; E-: CE50= 235,62± 27,03 μg/mL, n=5), sugerindo a participação da enzima guanilato ciclase no efeito vasorrelaxante evidenciado. Conclusão Os resultados obtidos indicam que há participação da enzima guanilato ciclase no efeito vasorrelaxante dependente de endotélio induzido pela fração Tf-FAQ do extrato etanólico da casca do caule de T. fagifolia, em aorta isolada de rato. No entanto, estudos adicionais são necessários para avaliar o envolvimento de outros possíveis mecanismos endoteliais neste efeito.

Palavras-chaves: Aorta isolada de rato, Efeito Vasorrelaxante, Guanilato ciclase, Terminalia fagifolia

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Resumo: 02.064

A INFLUÊNCIA DO EXERCÍCIO FÍSICO E DA SUPLEMENTAÇÃO COM ÁCIDO LIPÓICO SOBRE A PRESSÃO ARTERIAL SISTÊMICA E BIOQUÍMICA SANGUÍNEA DE RATOS WISTAR

Autores 2TOMÉ, F.

2, SAES, F. P.

2, GONÇALVES, C. A. N.

2 INSTITUTO DE CIÊNCIA BIOLÓGICAS -

FURG

Apoio Financeiro: : Bolsa FURG (F.T.),Bolsa CAPES (F.P.S).

Resumo Introdução O exercício físico (EF) é reconhecido para prevenção de doenças cardiovasculares, modificando perfis de risco (hipertensão e níveis de lipídios plasmáticos) (Basic. Res. Cardiol. 107: 260, 2012; Science Signaling, 112: 21, 2001). Igualmente é corrente a utilização de substâncias para complementar a alimentação, como o ácido lipóico (AL),composto tiol antioxidante (Annales de Cardiologie et d'Angéiologie, 57: 161, 2008.). Objetivos Analisamos a influência do EF (moderada intensidade) e do AL sobre a pressão arterial (PA), freqüência cardíaca (FC) e bioquímica sanguínea de ratos Wistar (glicemia, colesterol total e frações, triglicerídeos, mg/dL). Código de Experimentação Animal CEUA nº P059/2011 Código de Experimentação Humana Métodos O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Animal (CEUA nº P059/2011) da Universidade Federal do Rio Grande–FURG. Foram utilizados 80 ratos machos, 2-3 meses , de 200-300g, divididos em quatro grupos: controle (C), exercício (EX), ácido lipóico (AL) e exercício+ácido lipóico (EAL). Foi realizado 9 semanas de adaptação progressiva à natação (5% do peso corporal) e 8 semanas de treinamento. A suplementação com AL (60mg/Kg/dia, 5 dias/semana) da 10ª à 17ª semana. Foram verificadas a PA (mmHg) e FC (bpm) antes e após a adaptação e após treinamento (0, 9, 17 semanas) em um pletismógrafo de cauda. Ao final os animais foram eutanasiados e amostras de sangue coletadas para análises bioquímicas (kits comerciais, determinadas por espectrofotometria). Valores expressos em média±desvio padrão. As variáveis foram analisadas por ANOVA de uma via (distribuição normal por Shapiro-Wilks) ou teste de Kruskal-Wallis (distribuição assimétrica). Taxa de erro alfa de 5% (P=0,05). Resultados: O EF, em 9 e 17 semanas, causou uma redução na FC de 8,4 e 9,6% respectivamente (p Resultados O EF, em 9 e 17 semanas, causou uma redução na FC de 8,4 e 9,6% respectivamente (p Conclusão

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Os resultados denotam redução na FC no grupo EX (p

Palavras-chaves: EXERCÍCIO, ÁCIDO LIPÓICO, PRESSÃO ARTERIAL, FREQUÊNCIA CARDÍACA, BIOQUÍMICA SANGUÍNEA

Resumo: 02.065

Ação proliferativa da angiotensina-II é mediada pela enzima conversora de angiotensina I

Autores

1ALVARENGA, E. C.

1, CARVALHO, C. C. D.

2, BATISTA, C.

2, GUIMARÃES, P. B.

2,

CARMONA, A. K. 2, JASIULIONIS, M. G.

2, PESQUERO, J. B.

1, LEITE, M. F.

1 Fisiologia e

Biofisica - UFMG, 2 Departamento de Biofisica - UNIFESP

Apoio Financeiro: INCT em nanomateriasis de carbono, CNPq, Capes, FAPESP e FAPEMIG.

Resumo Introdução Trabalhos recentes mostram que a Enzima Conversora de Angiotensina I (ECA) funciona como um receptor de membrana celular. A própria angiotensina II (AngII) liga-se à ECA com alta afinidade, ativando a via de sinalização celular que gera 1,3,5 –trifosfato de inositol (InsP3), com consequente mobilização intracelular do íon cálcio (Ca2+). No entanto, a função fisiológica resultante desta ativação não está bem definida. Objetivos Estudar a função fisiológica da sinalização celular envolvida na ativação da ECA pela angiotensia II. Código de Experimentação Animal Código de Experimentação Humana Métodos Foram utilizadas células CHO transfectadas com vetor de expressão da ECA (CHO-ECA), vetor de expressão do receptor de AngII (CHO-AT1), vetor de expressão da ECA com deleção da porção citoplasmática (CHO-ECAc-Del) e ancorada por uma molécula de GPI (CHO-ECA-GPI); além de linhagens murinas de melanócitos (células melan-a) e de melanoma metastático com menor e maior agressividade respectivamente, células Tm-1 e células Tm-5. Estudos de Ca2+ intracelular foram feitos utilizando fluo4/AM e uma construção adenoviral capaz de tamponar InsP3 seletivamente em compartimentos intracelulares específicos. Foi realizada medida da atividade da ECA utilizando 10µM o peptídeo Abz-FRK(Dnp)P-OH. Resultados Usando células CHO AT1 e CHO-ECA, verificamos que o perfil da sinalização de Ca2+ citosólico e nuclear difere dependendo da ação da angiotensina II ser via o seu receptor clássico AT1R ou via ECA. Via AT1R a AngII mobiliza Ca2+

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citosólico e nuclear, enquanto via ECA a resposta foi primordialmente dependente da formação de InsP3 citosólico. No entanto, verificamos que mediante ação da AngII (previamente marcada com FITC), a ECA internalizou-se para a região nuclear (ECA= 69,17 ± 9,331, AT1= 22,624 ± 1,372; significância estatística com p Conclusão Estes resultados são os primeiros a demonstrar o envolvimento direto da ECA na proliferação celular induzida pela angiotensina II.

Palavras-chaves: Angiotensina II, Cálcio, Enzima Conversora de Angiotensina I, Proliferação

Resumo: 02.066

SUCCINATE INDUCES CARDIAC HYPERTROPHY

Autores

1SOUSA, P. A.

1, AGUIAR, C. J.

1, OLIVEIRA, A. G.

2, CASTRO, T. S.

3, MENEZES, G. B.

4,

XAVIER, C. L. 5, LADEIRA, L. O.

2, RIBEIRO, R. R.

1, Guatimosim, S. C.

1, LEITE, M.F.

1

Fisiologia e Biofisica - UFMG, 2 Departamento de Bioquímica - UFMG,

3 Departamento de

Morfologia - UFMG, 4 Faculdade de Medicina - UFMG,

5 Departamento de Física - UFMG

Apoio Financeiro: CNPq, FAPEMIG, CAPES, INCT- Carbon Nanomaterials.

Resumo Introdução Succinate is widely known as an intermediate metabolite of the citric acid cycle. Upon the characterization of succinate action through of a G-Protein coupled receptor (GPR91), its role as a new circulating hormone was then demonstrated. GPR91 was identified in several tissues such kidney, liver and heart and during pathological conditions such as ischemia, succinate blood levels are known to increase. Given the importance of the ischemic effects on heart, succinate may play a critical role in cardiomyocytes function. Objetivos The goal of this study is to investigate the signaling pathway involved in cardiomyocyte hypertrophic response induced by succinate. Código de Experimentação Animal Protocolo CETEA n° 224/2007 Código de Experimentação Humana Métodos We used 15 adult male Wistar rats treated with succinate and 15 treated with saline solution, as well as primary culture of neonatal cardiomyocyte treated with 1mmol/L succinate. Cells were analyzed by confocal microscopy, immunofluorescence,

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RT PCR, real-time PCR and small interfering RNA (siRNA). Animals were analyzed by qRT-PCR. Significance of changes in treatment groups relative to controls was determined by Student t test. Data are represented as mean ± standard error. Resultados Cells were analyzed by confocal microscopy, immunofluorescence, RT PCR, real-time PCR and small interfering RNA (siRNA) and found that succinate increased cardiomyocyte surface area by 85 ± 15% (p Conclusão Collectively, these results show that during cardiac hypertrophy, succinate acts as a key molecule in cardiomyocyte through activation of GPR91 and activation of ERK pathway.

Palavras-chaves: CARDIAC HYPERTROPHY, ERK1/2, GPR91, SUCCINATE

Resumo: 02.067

EFEITOS DA TERAPIA HORMONAL COM DROSPIRENONA E ESTRADIOL SOBRE O SISTEMA CARDIOVASCULAR DE RATAS COM HIPERTENSÃO ESPONTÂNEA

Autores

1BORGO, M. V.

1, BORGES, R.

1, MENEZEZ, L. A.

1, GOUVÊA, S. A.

1, SANTOS, R. L.

1,

PODRATZ, P. L. 1, SENA, G. C.

1, GRACELI, J. B.

1, GONÇALVES, E. R. C.

1, ABREU, G. R.

1

Departamento de Ciências Fisiológicas - UFES

Apoio Financeiro: CAPES

Resumo Introdução Introdução: A hipertensão arterial (HA) é o mais importante e prevalente fator de risco modificável para doenças coronarianas e infarto, sendo sua incidência aumentada em mulheres após a menopausa. Dentre os mecanismos da HA após a menopausa estão disfunções endoteliais, que podem estar relacionadas, entre outros, com a redução da expressão e/ou atividade dos receptores de estrogênio presentes no vasos. A terapia hormonal (TH) visa reduzir os sintomas da menopausa, entretanto as associações de estrógenos e progestógenos em baixas doses tem mostrado importante eficácia sobre HA na pós-menopausa. A drospirenona (DRSP) é utilizada como TH em associação com o 17β-estradiol (E2) (2 mg e 1 mg respectivamente), a DRSP um esteróide derivado da 17α-espirolactona com propriedades antialdosterona. A aldosterona, por sua vez apresenta efeitos sobre os vasos e miocárdio incluído fibrose vascular e miocárdica e dano vascular, além de ter efeitos diretos sobre os receptores de estrogênio de membrana (GPER), os quais não são bem conhecidos. Efeitos vasculares da DRSP podem relacionar-se diretamente com a sua ação antialdosterona, ou ainda pode apresentar efeitos indiretos sobre o relaxamento vascular. Objetivos Avaliar os efeitos da TH com DRSP e E2 sobre parâmetros cardiovasculares de ratas hipertensas, castradas ou não, bem como a reatividade vascular coronariana e expressão da enzima óxido nítrico sintetase endotelial (eNOS) e do receptor de estrogênio alfa (RE&alpha) nessas coronárias. Código de Experimentação Animal

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023/2012 Código de Experimentação Humana Métodos Foram utilizadas ratas SHR, com 8 semanas (140g a 160g), com aprovação da CEUA-UFES protocolo nº. 023/2012. Foram divididos nos grupos SHAM, ovariectomizado (OVX), tratados com DRSP 6 ug + E2 3,2 ug/100 g, (OVX DRSP) e tratados com E2 6 ug/100 g (OVX E2) durante 6 semanas (n=9). Após o tratamento realizou-se medida direta de pressão arterial (PA), reatividade coronariana pelo método de Langendorff, western blot de eNOS e RE&alpha em coronária. Os dados foram expressos em média ± EPM e realizada one-way ANOVA e post hoc de Newman-Keuls para múltiplas comparações (p < 0,05). Resultados O tratamento com DRSP reduziu a PAM (140,7 ± 4) comparado aos grupos SHAM(164 ± 2,9), OVX(174 ± 3,8) e OVX E2(156,1 ± 4,2), sendo que a PA sistólica reduzida nos grupos OVX DRSP (173,8 ± 4), e OVX E2 (199,6 ± 13) vs. SHAM (202 ± 4) e OVX (206 ± 4), mas não houve alteração na PA diastólica. A pressão de perfusão coronariana basal (PPC) foi reduzida no grupo OVX (110,5 ± 3) comparada ao SHAM (121 ± 4,5) e aumentou nos grupos com TH, OVX DRSP (129,6 ± 5.5), OVX E2(136 ± 3,3). Não houve diferença na expressão de eNOS nas coronárias, mas como esperado a expressão de REα foi reduzida no grupo OVX (076 ± 0,03) vs. SHAM(1) e se igualam ao SHAM no grupos OVX DRSP (0,98 ± 0,04), OVX E2(1,2 ±0,06). Conclusão Nossos resultados sugerem que os possíveis benefícios cardiovasculares da terapia hormonal com DSPR+E2, sobretudo na HA se devem as ações do E2 sobre a expressão dos seus receptores, entretanto mais estudos são necessários para elucidar os mecanismos pelos quais esses benefícios ocorrem.

Palavras-chaves: Hipertensão, menopausa, Reatividade Vascular, Terapia hormonal

Resumo: 02.068

The expression of MyomiRs in physiological cardiac hypertrophy induced by aerobic swimming training

Autores

1,2SOCI, U. P. R.

1, FERNANDES, T.

3, BARAÚNA, V. G.

1, OLIVEIRA, E. M.

1 Biodinâmica do

Movimento humano - EEFE - USP, 2 Fisiopatologia Experimental - FM - USP,

3 Laboratório de

Genética e Cardiologia Molecular - INCOR

Apoio Financeiro:

Resumo Introdução

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Aim: The microRNAs-208a and 208b and 499 (MiRNAs) compose a family of microRNA encoded by a myosin genes (MYH-6, MYH-7 and MYH-7b respectively) that are known as MyomiRs. It has been demonstrated that these miRNAs finely regulate several transcriptional repressors of slow myofiber genes by their target genes modulation that that respectively play redundant roles in the specification of muscle fiber identity by activating slow and repressing fast myofiber gene programs (1). The expression of these myomiRs is aberrant in cardiac disease as heart failure, hypertension and myocardial infarct. Objetivos We investigated the expression of these three miRNAs in physiological cardiac hypertrophy induced by aerobic swimming training (AST) . Código de Experimentação Animal COBEA - 044/10 Código de Experimentação Humana Métodos Methods: Female Wistar Rats (n=21) were randomized into three groups: sedentary (S), Trained 1 (T1): swimming sessions of 60min, 5 days/week, during 10 weeks, with caudal dumbbells weighing 5% of body weight. Trained 2 (T2): similar to T1 until 8th week, on the 9th week the rats swan twice/day and on the 10th week 3 times/day. Measurements assessed: heart rate (HR), blood pressure (BP) by direct measurement, VO2max by ergoespirometry, soleus citrate synthase (CS) activity by spectrophotometer, CH by LV/BW ratio (mg/g) and cardiomyocyte diameter, gene expression of atrial natriuretic factor (ANF), skeletal α-actin;, α-MHC;, and β-MHC and miRNAs-208a, 208b and 499 by Real-time PCR and protein content of α and β-MHC by western blott. P < 0.05 was accepted as statistically significant. Resultados Results: AST decreased HR and increased VO2max (11% in T1 and 15% in T2) and CS (47% in T1 and 105% in T2). LV/BW ratio increased 13% in T1 and 28% in T2 and cardiomyocyte diameter increased 20% in T1 and 30% in T2. Gene expression of skeletal α-actin decreased 53% to T2, while ANF was not modified. MiRNA-208a expression decreased 62% in T2, miRNA-208b decreased 61% to T1 and T2 group, related S and 499 did not change. Concomitantly there were a decrease of β-MHC and an increase of α-MHC gene expression (β/-71% α/+37%) and protein content (β/-45 % α/+72%) in T2. This was inverse to that observed in pathological CH. Conclusão Conclusions: AST induced physiological CH. MiRNA-208a, 208b and β-MHC expression were decreased. The inhibition of myomiRs exercise-induced was opposite to hypertrophic disease and can be a viable therapeutic strategy to repress the β-MHC gene expression in pathological CH. These results open perspectives to research therapeutic approaches involving modulation of miRNAs.

Palavras-chaves: MicroRNAs, Cardiac Hypertrophy, Aerobic Swimming Training, Cardiac Disease, Myosin Heavy Chain

Resumo: 02.069

CONTRATILIDADE MIOCÁRDICA DA CASCAVEL SUL AMERICANA, CROTALUS DURISSUS

TERRIFICUS, NOS PERÍODOS PÓS-PRANDIAL E PÓS-ABSORTIVO À 25 ºC.

Autores 1FERRO, L. A.

1, GUELLI, A.

1, BEZERRA, S.

1, PAULA, G. D.

1, CIPRIANO, R. C.

1, KALININ, A.

L. 1 Ciências Fisiológicas - UFSCar,

2 Ciências Fisiológicas - UFSCar

Apoio Financeiro: CNPQ, INCT, CAPES

Resumo Introdução Os vertebrados basais exibem uma ampla diversidade de tamanhos, adaptações ecológicas, estilos de vida, além de suas peculiaridades metabólicas. Tais características fazem com que a demanda imposta ao coração destes animais varie consideravelmente, resultando em uma ampla gama de modificações de seus sistemas cardiovasculares, impondo implicações particulares sobre a regulação da contratilidade. Ainda restam lacunas no conhecimento da fisiologia dos cardiomiócitos, desta forma o estudo da fisiologia de grupos pouco estudados como os répteis é fundamental. Objetivos Esse trabalho teve como objetivo investigar os mecanismos envolvidos na contratilidade miocárdica in vitro de cascavel sul americana, Crotalus durissus terrificus, sob as condições de alimentação/digestão e no período pós-absortivo. Código de Experimentação Animal 081/2010 Código de Experimentação Humana Métodos Foram utilizadas oito cascavéis, submetidas a dois diferentes regimes alimentares, constituindo dois grupos experimentais: grupo pós-prandial (36 horas após a alimentação) e grupo pós-absortivo (28 dias após a alimentação). Após o sacrifício dos animais, o coração foi extraído e tiras ventriculares foram feitas. Foram executados os protocolos de efeito do tempo, efeito de incrementos na freqüência de estimulação e tensão pós-pausa. Posteriormente, foram analisados os seguintes parâmetros da contratilidade: força de contração isométrica (FC-mN.mm-2.ms-1); tempo para atingir o pico de força (TPT - ms); tempo para 50% de relaxamento (THR - ms); taxa de contração (TPT/Fc - ms.mN-1.mm-2) e taxa de relaxamento (THR/Fc - ms.mN-1.mm-2). Resultados O grupo pós-prandial apresentou aumento na massa ventricular relativa (MVR) em relação ao grupo pós-absortivo. No protocolo de efeito do tempo, o TPT e a taxa de contração (TPT/Fc) do grupo pós-prandial foi significativamente menor que do grupo pós-absortivo, indicando uma cinética de contração mais eficiente. Na análise do efeito de incrementos na freqüência, o grupo pós-prandial conseguiu manter sua contratilidade mais estável mesmo sob freqüências de estimulação mais elevadas em comparação com o grupo pós-absortivo, provavelmente como resultado da hipertrofia ventricular. A capacidade de bombeamento cardíaco (CBC) apresentou tendência de valores mais altos para o grupo pós-prandial em resposta às alterações fisiológicas no coração, para atender a elevada demanda energética durante a digestão. O retículo sarcoplasmático (RS) não apresentou funcionalidade significativa em baixas freqüências de estimulação (0,2 Hz) à temperatura de 25ºC, conforme demonstrado pela ausência de potenciação pós-pausa na Fc. Conclusão Esses resultados indicam que o período pós-prandial, caracterizado pelo aumento da taxa metabólica, é acompanhado por uma melhor performance cardíaca. Os parâmetros tempo-dependentes indicam que os mecanismos contráteis se adaptam a demanda exigida pela condição de alimentação. A concentração e ciclagem de cálcio batimento-a-batimento dependem

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diretamente dos transportadores deste íon que, de acordo com os resultados, mostram-se eficientes durante a digestão. Quanto aos efeitos da pausa diastólica e não-fisiológica, esta causou uma resposta inotrópica negativa no miocárdio ventricular das cascavéis.

Palavras-chaves: Serpente, Crotalus durissus terrificus, contratilidade miocárdica, digestão

Resumo: 02.070

DIFERENÇA NA EXCITABILIDADE MIOCÁRDICA EM RATOS NEONATOS E ADULTOS

Autores

1OSHIYAMA, N. F.

2, BASSANI, R. A.

1,2, BASSANI, J. W. M.

1 Departamento de Engenharia

Biomédica/Faculdade de Engenharia Elétrica e de Computação - UNICAMP, 2 Centro de Engenharia

Biomédica - UNICAMP

Apoio Financeiro: FAPESP (Proc. 2011/19805-3), CAPES, CNPq (Proc. 302996-2011-7)

Resumo Introdução O potencial de ação (PA) é o sinal elétrico (variação do potencial transmembrana, E m ) que dispara a contração miocárdica. A fase de despolarização do PA ventricular em mamíferos resulta de uma corrente de influxo de Na + (I Na ) através de canais dependentes de tensão presentes no sarcolema. Estudos mostram diferenças entre células ventriculares de neonatos e de adultos, como a redução na densidade de correntes de K + e maior participação do trocador Na + /Ca 2+ na remoção de Ca 2+ do citosol durante o relaxamento celular. No entanto, ainda há poucos estudos sobre I Na e a excitabilidade de miócitos cardíacos de mamíferos imaturos. Objetivos Determinar a dependência de tensão dos canais de Na + e seu impacto sobre o limiar de excitação em miócitos ventriculares isolados de ratos Wistar ( Rattus norvegicus ) neonatos (5 dias, ~10 g) e adultos (5 meses, ~300 g). Código de Experimentação Animal 2012-2587-1C, 2012-2588-1C Código de Experimentação Humana Métodos Os protocolos experimentais foram aprovados pelo comitê de ética (CEUA/IB/UNICAMP, prot. 2587-1C e 2588-1C). Em configuração whole-cell , foi determinada a capacitância de membrana por meio de aplicação de pulsos despolarizantes (5 mV). O E m foi medido no modo current-clamp , e I Na em voltage-clamp durante bloqueio das correntes de Ca 2+ e K + (N

neonato = 16, N adulto = 10). Para estimulação, foram utilizados, respectivamente, pulsos retangulares de corrente (duração 4 ms), e de tensão (200 ms) para valores de E m de -70 a +70 mV a partir de -80 mV. Calculou-se a razão entre a condutância estimada ao Na + em cada valor de E m teste e a máxima condutância, para determinação da curva de ativação em steady state em função de E m . Os dados foram comparados por teste t de Student .

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Resultados As células de ratos neonatos apresentaram menor capacitância do que as de adultos (16,4 ± 1,2 (N= 33) vs. 158,9 ± 9,6 pF (N= 30); P Na apresentou um desvio de ~15 mV para a direita e inclinação ~2 vezes menor (P m limiar para evocar um PA foi menos negativo em neonatos (-47,5 ± 4,2 (N=8) vs. -63,1 ± 3,6 (N=12) mV, P m necessária para atingir o limiar foi maior (29,9 ± 4,4 vs. 17,0 ± 2,8 mV, P m diastólico não ter sido significativamente diferente (-77,5 ± 4,2 vs. -79,8 ± 1,3 mV, P=0,5). Isto poderia explicar a maior densidade de corrente estimulatória requerida para que o PA fosse disparado nestas células (15,6 ± 4,2 vs. 5,8 ± 0,4 pA/nF, P <0,01). Conclusão Os resultados indicam que miócitos ventriculares de ratos neonatos apresentam menor excitabilidade do que células de adultos, com base na elevação encontrada do E m limiar e da despolarização requerida para atingi-lo. Isto, bem como a despolarização mais lenta da membrana durante o PA, poderia ser explicado pelas alterações observadas na dependência de tensão para ativação dos canais de Na + , possivelmente devido à expressão de diferentes isoformas, em neonatos e adultos, da proteína que forma este canal.

Palavras-chaves: corrente de sódio, excitabilidade de miócitos ventriculares, potencial de ação, ratos neonatos e adultos

Resumo: 02.071

AUMENTO DA BIODISPONIBILIDADE DE ÓXIDO NÍTRICO EM ARTÉRIA FEMORAL DE RATOS SAUDÁVEIS SUBMETIDOS AO TREINAMENTO FÍSICO: PAPEL DA VIA PI3K/ Akt/ eNOS/ CAVÉOLA E DA DEFESA ANTIOXIDANTE.

Autores 2PAULA, S. M.

1, COUTO, G. K.

1, MICHELINI, L. C.

1, ROSSONI, L. V.

1 Fisiologia e Biofisica -

USP, 2 Instituto Superior de Ciências Biomédicas - UECE

Apoio Financeiro: FUNCAP, FAPESP, CNPq.

Resumo Introdução O treinamento físico (TF) aeróbico vem sendo utilizado como uma terapêutica não-medicamentosa para o tratamento e prevenção de doenças cardiovasculares. Já demonstramos com a utilização de estudo de reatividade vascular e de fluorescência que, em aa. femorais de ratos Wistar Kyoto (WKY), o TF aumenta a biodisponibilidade de óxido nítrico (NO) e, consequentemente, a função endotelial em aa. femorais devido a ativação da sintase de NO (NOS) localizada nas cavéolas, por meio de uma via dependente de PI3K, e a um aumento da defesa antioxidante mediada pela superóxido dismutase (SOD). Objetivos Buscou-se avaliar se o TF modifica a expressão proteica das vias acima citadas com a finalidade de comprovar os resultados funcionais e de fluorescência obtidos no presente estudo. Código de Experimentação Animal

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CEUA do ICB/USP nº 89, folha 106, livro 2 em 2011. Código de Experimentação Humana Métodos O presente projeto foi aprovado pelo comitê de ética em experimentação animal do ICB/USP sob o nº 89, folha 106, livro 2 em 2011. Ratos WKY, com 8 semanas, mesma habilidade para correr em esteira após o teste de esforço escalonado foram divididos nos grupos: sedentário (S, N=6 - 8) e treinado (T, N=6 - 8). O TF de baixa intensidade em esteira foi realizado por 1h, 5x/semana, durante 13 semanas. Ao final do TF, os ratos foram anestesiados com uma mistura de ketamina, xilazina e acepromazina (90, 10 e 2,5 mg/kg respectivamente i.p.) e mortos por exsanguinação. As aa. femorais foram dissecadas e congeladas para avaliação da expressão proteica pela técnica de Western blot, onde foi avaliada a expressão das seguintes proteínas: óxido nítrico sintase endotelial (eNOS); caveolina-1 (Cav-1), caveolina-3 (Cav-3); Akt; fosfatidil-3-inositol quinase (PI3K) e SOD (isoformas Cu/ Zn-SOD, EC-SOD e Mn-SOD). Os resultados de expressão proteica estão descritos como a razão entre o sinal obtido para as proteínas estudadas pela banda correspondente de &alpha-actina da mesma amostra, e os mesmos estão expressos como média±EPM, análise estatística: Teste-t (*P Resultados A distância percorrida no teste de esforço escalonado foi maior no grupo T, ao final das 13 semanas, quando comparado ao S (S: 76±7 vs. T: 330±26m*). O TF aumentou significativamente a expressão proteica da eNOS (S: 0,37 ± 0,03 vs.T: 0,66 ± 0,08*U.A.), da Akt (S: 0,75 ± 0,03 vs. T: 0,91 ± 0,02* U.A.), e da PI3K (S: 0,50 ± 0,08 vs. T: 0,71 ± 0,07* U.A.). Contudo as isoformas da Cav-1 (S: 1,02 ± 0,04 vs. T: 0,84 ± 0,08 U.A.) e Cav-3 (S: 0,94 ± 0,07 vs. T: 0,91 ± 0,05 U.A.) não mostraram alteração significativa quando comparado os grupos. Já nas isoformas da SOD, observou-se aumento da expressão proteica da Cu/ Zn-SOD (S: 0,58 ± 0,10 vs. T: 0,83 ± 0,03* U.A.) e EC-SOD (S: 0,76 ±0,09 vs. T: 0,99 ± 0,04* U.A.), sem contudo apresentar alteração na isoforma Mn-SOD (S: 0,83 ± 0,07 vs. T: 0,81 ± 0,03 U.A.). Conclusão Esses resultados, associados com os dados previamente apresentados, comprovam que via PI3K/Akt/eNOS está relacionada com a melhora da biodisponibilidade do NO nas células endoteliais em aa. femorais de ratos WKY em resposta ao TF e que o efeito protetor da SOD, mais pronunciado após o TF, pode estar associado ao aumento da expressão proteica das isoformas Cu/ Zn-SOD e EC-SOD.

Palavras-chaves: Óxido nítrico sintase, Exercício físico, Superóxido dismutase

Resumo: 02.072

Effects of a new compound, 1,3,4-oxadiazole, on potassium channels and on in vivo cardiovascular parameters

Autores

1RAMOS-REIS, M.

2, FRANÇA-SILVA, M. S.

2, MONTEIRO, M. M. O.

3, OLIVEIRA, C. S.

2,

BRAGA, V. A. 1, SILVA, D. F.

3, ATHAYDE-FILHO, P. F.

2, ARAÚJO, D. A. M.

1 Biorregulação -

UFBA, 2 Biotecnologia - UFPB,

3 Química - UFPB

Apoio Financeiro: CAPES; CNPq; INCT-Toxinas

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Resumo Introdução The compound derived from 1,3,4-oxadiazole nucleus has demonstrated several biological activities, including vasorelaxant and hypotensive effects. A derivative of this nucleus called OXDINH was obtained from organic synthesis and showed a potential cardiovascular. Objetivos Our objective was to investigate the pharmacologic effects of OXDINH on K+ channels and on cardiovascular system, performing in vitro and in vivo experiments from normotensive rats. Código de Experimentação Animal CEUA/UFPB 0105/11 Código de Experimentação Humana Métodos Wistar rats (250-300 g) were killed according to Ethics Committee on Animal Research of UFPB (CEPA n° 0105/11). In vitro protocols: Isolated rat superior mesenteric artery rings (1-2 mm) were suspended by cotton threads for isometric tension recordings in a Tyrode’s solution at 37 ºC, gassed with a 95% O2 and 5% CO2, under a resting tension of 0.75g. In vivo experiments: the rats underwent femoral artery and vein catheterization for conscious pressure arterial mean (PAM) and heart rate (HR) recording and doses of OXDINH (1, 5 and 10 mg/kg, randomly) were administrated. Resultados In mesenteric artery ring pre-contracted with phenylephrine (Phe, 1 μM), OXDINH (10-10 – 10-4 M) induced concentration-dependent relaxation [pD2 = 5.3 ± 0.2; maximum response (MR) = 117.0 ± 6.5 %; n = 7] and this effect was not changed after removal from vascular endothelium (pD2= 5.2 ± 0.1; MR = 108.6 ± 6.0 %; n = 6), suggesting that OXDINH induces vasorelaxant response probably independent of vasoactive factors released by the functional endothelium. That way, subsequent experiments were performed in the absence of endothelium. In preparations pre-incubated with KCl (20 mM) or tetraethylammonium (TEA, 3 mM), concentration-response curve to OXDINH were attenuated (MR= 57.7 ± 1.7% n = 5 and MR= 44.3 ± 2.4%; respectively, p Conclusão The biological effects induced OXDINH probably involves the participation of K+ channels, which might be prevented the Ca2+ influx from voltage-gated calcium channels.

Palavras-chaves: cardiovascular, vasorelaxant, 1,3,4-oxadiazole, potassium channels, Hypotension

Resumo: 02.073

Tratamento por 15 dias com óleo de linhaça aumenta a reatividade vascular em anéis de aorta

em ratos sem alterar a pressão arterial sistólica

Autores

1NUNES, D. O.

1, SILVA, M. A. S. C.

1, ALMENARA, C. C. P.

1, FILHO, G. B. B.

1, SIMAN, F. D.

M. 1, STEFANON, I.

1,2, VASSALLO, D. V.

1, PADILHA, A. S.

1 Departamento de Ciências

Fisiológicas e Programa de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas - UFES, 2 Departamento de

Ciências Fisiológicas - EMESCAM

Apoio Financeiro: FAPES/CAPES/CNPq

Resumo Introdução Os ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) linoleico (18:2 n-6) e alfa-linolênico (18:3 n-3) são essenciais, devendo ser obtidos a partir da dieta. As principais origens dietéticas de n-6 são os óleos de origem vegetal e, os n-3, são encontrados, principalmente, em peixes como o salmão, atum e a anchova. Em relação aos óleos vegetais, as principais origens dietéticas de ácido alfa-linolênico, são os óleos de linhaça (533 mg/g), de canola (93 mg/g), soja (68 mg/g), milho (11.6 mg/g) e azeite de oliva (7.6 mg/g) (Martin et al, 2006). Estudos clínicos e epidemiológicos têm demonstrado que o maior consumo dietético de PUFAs n-3 reduzem o risco de desenvolvimento de doenças cardiovasculares (de Lorgeril et al, 1999; Wang et al, 2006). Entretanto, outros autores observaram que o uso, a longo prazo, dos n-3 aumentam o estresse oxidativo pela formação de peróxidos lipídicos em células endotelial (Lynett et al 1994; Grundt et al, 2003). Diante disso, fica evidente uma contradição dos efeitos dos óleos ricos em n-3 sobre a função vascular. Objetivos Investigar o efeito do tratamento por 15 dias com óleo de linhaça sobre a reatividade vascular e pressão arterial sistólica. Código de Experimentação Animal 038/2012 Código de Experimentação Humana Métodos Ratos Wistar machos, de 300g, foram classificados em dois grupos: Grupo Linhaça (Lç), cujos animais receberam via intramuscular de 0,1mL/dia de óleo de linhaça durante 15 dias e, grupo Ct, cujos animais receberam injeções diárias de óleo mineral na mesma quantidade e período de tempo que o grupo Lç. A pressão arterial sistólica dos animais foi aferida através da pletismografia de cauda semanalmente. Ao final dos 15 dias os animais foram eutanasiados, e a aorta torácica foi utilizada para a realização dos protocolos de reatividade vascular em anéis isolados de aorta. Os protocolos de reatividade vascular realizados nesse estudo foram curvas de relaxamento à acetilcolina e ao NPS (10-11 a 10-5M) em anéis pré-contraídos com fenilefrina e curvas de concentração-resposta à fenilefrina (10-10 a 10-4M) na presença de L-NAME, Indometacina e na ausência de Endotélio. Os resultados foram expressos em média ± EPM e análise estatística foi realizada por meio de teste T-Student e ANOVA 2 vias seguida de pós-teste de Bonferroni (significância p <0.05). Resultados Não houve diferença nos valores de pressão arterial sistólica das medidas avaliadas durante todo o período de tratamento em ambos os grupos. As reatividades à acetilcolina e ao NPS não foram alteradas pelo tratamento com os óleos. Já a reatividade à fenilefrina foi maior no grupo Lç (Rmax: Ct= 104.1 ± 3.018 vs Lç= 128.4 ± 8.289; p <0.05). Conclusão Os dados do presente estudo sugerem que o tratamento durante 15 dias com o óleo de linhaça na dose utilizada não altera a pressão arterial sistólica e o relaxamento dependente e independente do endotélio em anéis isolados de aorta. Porém, a

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exposição ao óleo de linhaça aumenta a reatividade à fenilefrina possivelmente por aumentar a liberação de prostanóides vasoconstritores, sugerindo dano endotelial.

Palavras-chaves: ácidos graxos poliinsaturados, ômega 3, óleo de linhaça, reatividade vascular, aorta

Resumo: 02.074

Intravenous or intraperitoneal osmotic stimulus in different doses modulates cardiovascular responses in unanesthetized rats.

Autores 1FORTALEZA, E.

1, BUSNARDO, C.

1, CORRÊA, F.

1 Farmacologia - FMRP-USP

Apoio Financeiro: CNPq and FAPESP

Resumo Introdução Introduction: Osmotic stimulus evoked cardiovascular changes and increases in vasopressin and oxytocin releases. Objetivos Aim:The present study was investigate the effects of different doses of osmotic stimulus (0.15, 0.3 and 0.6M NaCl in a volume 20mL/Kg) intravenous (i.v.) or intraperitoneal (i.p.) on cardiovascular responses and vasopressin release in unanesthetized rats. Código de Experimentação Animal 057/2009 Código de Experimentação Humana Métodos Methods: Wistar rats (250-280g) were anesthetized with tribromoethanol and a polyethylene catheter was implanted into the femoral artery for blood pressure recording. A second catheter was implanted into the femoral vein for infusion of the hypertonic or isotonic saline. Also we made the intraperitoneal injection. Resultados . Results: Cardiovascular effect after i.p injection –isotonic saline (0.15 M, n=4) or hypertonic (0.3 M, n=4) i.p. did not affect blood pressor (BP) (P>0.05) or heart rate (HR) (P>0.05) basal of normotensive animals. However, hypertonic saline i.p. (0.6 M n=4) caused increases in the mean arterial pressor (MAP) (MAP: F1,198=93.7, P 0.05) or heart rate (HR) (P>0.05) basal of normotensive animals. However, hypertonic saline i.v. (0.3 M n=4) caused decreases in the mean arterial pressure (MAP: F1,198=13.5, P <0.05). Conclusão

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Conclusion: Our results suggest that the osmotic stimulation caused by injection i.p. of hypertonic saline 0.6M promotes a better performance for our next experiments to evaluate pressor and tachycardiac responses.

Palavras-chaves: osmotic stimulus, cardiovascular, intravenous, intraperitoneal

Resumo: 02.075

PREJUÍZO NA VASODILATAÇÃO DEPENDENTE DO ENDOTÉLIO EM ARTÉRIA PULMONAR DE RATOS SUBMETIDOS À ISQUEMIA E REPERFUSÃO INTESTINAL: MECANISMOS ENVOLVIDOS E PAPEL PROTETOR DA SINVASTATINA.

Autores

1PERES, E. C.

2, BREITHAUPT-FALOPPA, A. C.

3, SILVA JUNIOR, C. A.

3, RABÊLO, L. A.

2,

TAVARES-DE-LIMA, W. 1, ROSSONI, L. V.

1 Fisiologia e Biofísica - ICB - USP,

2 Farmacologia -

ICB - USP, 3 Setor de Fisiologia & Farmacologia - UFAL

Apoio Financeiro: CNPq e FAPESP

Resumo Introdução Demonstramos que a isquemia e reperfusão (IR) intestinal induz hiporreatividade à fenilefrina e prejuízo na vasodilatação dependente do endotélio em artéria pulmonar (AP). Sabe-se, que as estatinas apresentam resultados favoráveis nas lesões ocasionadas pela IR. Entretanto, é desconhecido: 1. os mecanismos envolvidos na disfunção endotelial na AP pós-IR e 2. se os efeitos benéficos das estatinas na IR estão correlacionados à esses ajustes. Objetivos Elucidar os mecanismos envolvidos no prejuízo do relaxamento à acetilcolina (ACh) em AP de animais submetidos a IR e verificar o papel protetor da sinvastatina (SINV) nessas alterações. Código de Experimentação Animal n°018 fls.83, livro 02 Código de Experimentação Humana Métodos Os protocolos foram aprovados pela Comissão de Ética do ICB/USP (n°018 fls.83, livro 02). Ratos Wistar, com 2,5 meses, foram anestesiados e submetidos à oclusão da artéria mesentérica superior (OAMS) por 45 min e reperfusão por 2 h (IR, N=26). No grupo controle foi realizado o mesmo protocolo; porém, sem OAMS (SHAM, N=23). Em um sub-grupo: IR (N=16) e SHAM (N=16) foi feito o pré-tratamento com SINV (20mg/kg, p.o.), 1 h antes da IR ou com veículo (CT). Em seguida, anéis de AP foram montados em um sistema de órgãos isolados para medida da tensão isométrica. Realizou-se curva concentração efeito à ACh (100pM-10µM) em preparações com (E+) e sem (E-) endotélio e na presença ou ausência

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do L-NAME (LN, 100 µM, 30 min) ou 1400W (1µM, 40 min). Em explantes pulmonares, cultivados em meio DMEM por 24h, avaliou-se os níveis de citocinas (IL-1β e IL-6). Em anéis de AP foram avaliadas a atividade da superóxido dismutase (SOD) e a produção de espécies reativas derivadas do oxigênio, por meio do uso da sonda fluorescente dihidroetidina (DHE). Os resultados foram expressos como média±EPM, análise estatística utilizada ANOVA duas vias e/ou Teste-t (P Resultados O relaxamento à ACh foi reduzido no grupo IR quando comparado ao SHAM (Resposta máxima (Rmax); SHAM: 88±1,43 vs. IR: 78±2,35%*). Em anéis E- ou pré-incubados com LN, de ambos os grupos, houve inibição do relaxamento à ACh e a diferença entre os grupos foi abolida nestas condições. A pré-incubação dos anéis com o inibidor da isoforma induzível da sintase de óxido nítrico (iNOS) (1400W) aumentou o relaxamento à ACh somente nos IR (Rmax:IR/ 1400W: 90±2,30%+), e aboliu as diferenças observadas entre anéis de SHAM e IR. A SINV não alterou a resposta à ACh no grupo SHAM (Rmax: SHAM/CT: 89±1,19 vs. SHAM/SINV: 85±1,25%). Porém, preveniu a redução da Rmax à ACh nos IR (Rmax: IR/CT: 79±2,23 vs. IR/SINV: 88±1,21%#). Os níveis de IL-1β (92%) e IL-6 (85%) nos explantes pulmonares aumentaram após a IR quando comparado ao SHAM, a SINV preveniu esse aumento. A IR não modificou a atividade da SOD, porém a mesma foi aumentada pelo pré-tratamento com SINV nas AP dos IR (SHAM/CT: 0,8±0,17 vs. IR/CT: 1,3±0,15 vs. IR/SINV: 2,2±0,16 [Proteína].mg.mL-1#). A porcentagem de núcleos corados pelo DHE foi maior no grupo IR quando comparado ao SHAM e a SINV reduziu significativamente esse valor (IR/CT: 99±31%* e IR/SINV: 21±30% respectivo SHAM). Conclusão A IR promove prejuízo no relaxamento à ACh na AP, esse prejuízo é dependente da diminuição da biodisponibilidade de óxido nítrico, provavelmente via indução do processo inflamatório pulmonar, ativação da iNOS e estresse oxidativo. Uma única dose de SINV previne essa condição inflamatória e oxidativa induzida pela IR e aumenta a defesa anti-oxidante, assim; prevenindo o prejuízo no relaxamento dependente do endotélio.

Palavras-chaves: Reatividade vascular, Isquemia e Reperfusão intestinal, Sinvastatina, Artéria pulmonar

Resumo: 02.076

Avaliação do desempenho cardíaco em ratos infartados tratados por 15 dias com óleo de soja

Autores

1,2Freire JR D.D

1, LISBOA Jr S.

1,2, CAUCHO, A.P.

1, ROSSI, E. M.

1, MARQUES, V. B.

1,

SANTOS, L. D. 1, Ribeiro, JR. F. R.

1,2, VASSALLO, D. V.

1, STEFANON, I.

1 Programa de pós em

ciencias Fisiologicas - UFES, 2 Ciencias Fisiologicas - EMESCAM

Apoio Financeiro: FAPES; CNPq

Resumo Introdução A incidência de insuficiência cardíaca pós-infarto do miocárdio vem aumentando, repercutindo em altos custos hospitalares. Após infarto do miocárdio ocorre remodelamento compensatório das câmaras cardíacas secundário a sobrecarga de volume do ventrículo esquerdo com redução da contratilidade miocárdica (Stefanon et al. 1994; Mill et al 2011). Estudo em nosso laboratório demonstrou que o tratamento com óleo de soja (100 µL, intramuscular por 15 dias) aumenta a performance ventricular de ratos saudáveis, sem modificar a pressão arterial, mas associada a aumento da atividade da ATPasemiosínica e da expressão da SERCA2a (Ribeiro Junior et a., 2010). Por outro lado, a queda da contratilidade miocárdica após infarto está associada a modificações na expressão destas enzimas.

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Objetivos Avaliar se o tratamento com óleo de soja, por via intramuscular durante 15 dias, pode modificar o desempenho cardíacode ratos que sofreram infarto do miocárdio. Código de Experimentação Animal CEUA-UFES:097-1 Código de Experimentação Humana Métodos O protocolo foi aprovado pelo CEUA-UFES:097-1, foram utilizados ratos machos Wistar, pesando entre 230 a 250 g. Os animais foram distribuídos entre quatro grupos experimentais com cinco indivíduos cada um: 1 - Grupo SHAM tratado: submetidos à cirurgia fictícia e tratados com 0,1 ml de óleo de soja intramuscular por quinze dias. 2 - Grupo SHAM não tratado: submetidos à cirurgia fictícia e tratados com 0,1 ml de solução de NaCl a 0,9% intramuscular por quinze dias. 3 - Grupo Infarto tratado: submetidos à ligadura do ramo descendente anterior da artéria coronária esquerda e tratados com 0,1 ml de óleo de soja intramuscular por quinze dias. 4 - Grupo Infarto não tratado: submetidos à ligadura do ramo descendente anterior da artéria coronária esquerda e tratados com 0,1 ml de solução de NaCl a 0,9% intramuscular por quinze dias. Após 15 dias de tratamento com óleo de soja (i.m.) os animais foram anestesiados e sacrificados para avaliação do desempenho cardíacousando a preparação de coração isolado (método de Langendorff) e nutridos com solução de Krebs modificada a 35ºC.Os dados foram analisados por meio do teste t de Student não pareado e análise de variância (ANOVA 1 ou 2 vias) seguida pelo teste post-hoc de Tukey. Os valores foram considerados significantes para um mínimo de p <0,05. Resultados Não houve diferença estatística em relação a área de infarto entre os grupos infarto (34,7 ± 1,9 % N=8) e infarto tratado (34,1 ± 1,7% N=8). Não houve diferença do peso de VE (corrigido pelo peso corporal, mg/g) no grupo infartado (2,30 ± 0,07 N=5) em relação ao grupo Sham (2,10 ± 0,11 N=5) e ao grupo infarto tratado com soja (2,250 ± 0,12 N=6). A pressão sistólica isovolumétrica do ventrículo esquerdo (PSIVE) aumentou nos grupos tratadoscom óleo de soja. Assim,na pressão diastólica do ventrículo esquerdo de 5 mmHg a PSIVE do grupo SHAM tratado e não tratado foram respectivamente: 103,0vs60,0 mmHg, p Conclusão Nosso estudo demonstrou que o tratamento com óleo de soja intra muscular por 15 dias em ratos submetidos ao infarto do miocárdio melhora a performance do ventrículo esquerdo em coração isolado sem interferir com a área de infarto e com os parâmetros ponderais ventriculares

Palavras-chaves: Desempenho cardiaco, infarto do miocardio, oleo de soja

Biologia Cardiovascular

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