Application of PCR Prof. Dr. Baron 1 Aplicaciones de la PCR P C R Análisis de alimentos...

Application of PCRProf. Dr. Baron

1

Aplicaciones de la PCR

P C R

Análisis de alimentos Diagnóstico

médico

Análisis medioambiental

Medicina forense

ArqueologíaPaleontología


2

Application of PCR for Diagnosis

Diagnóstico de infecciones.


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Diagnostico de Infecciones por PCR (selección)

* ST = Shiga-like-Toxin

Protocolo de la prueba• Obtener muestra (sangre, suero, licor, frotis, pelo...)• Aislar ADN• Amplificar por PCR secuencias relevantes de ADN

P ató gen o En fe r m edad

Borrelia burgdorferi Lyme borreliosis Chlamydia trachomatis Artritis, neumonia Mycobacterium tuberculosis Tuberculosis E. coli (ST producing)* Enterocolitis hemorrágica Herpes simplex virus meningitis, encefalitis Varicela zoster virus meningitis, encefalitis Hepatitis B virus (HBV) hepatitis B Hepatitis C virus (HCV) hepatitis C HIV-1 SIDA


4

Diagnosis of Infections by PCR

Ventajas del diagnóstico por PCR

• Rápido diagnóstico en caso de largo periódo de cultivo de microorganismos (MOs), ejem. 3 semanas para mycobacteria, 4 hrs con PCR

• Diagnóstico de MOs que son dificiles de cultivar (cytomelalovirus, chlamydia)

• La cuantificación de los patógenos por PCR cuantitativa, importante para organizar una terapia apropiada y evaluar el éxito de la terapia.

• Para evitar terapias innecesarias o altas dosis. • Para reducir efectos secundarios.• Para recortar costes.• Para evitar el desarrollo de MOs resistentes.----------------------------------------------------------------------------


5

Application of PCR in Forensic Medicine

PCR para huella genética


6

Huella genética con VNTR/STR

Gen de mioglobina

4 repeticiones en tándem

33- repetición de par de bases

Cromosomas homólogos


7

VNTR / STR para huella genética

VNTR (Unidades de repetición de Tándem Diferentes)• Cada repetición es 10 – 40 pares de bases (bp) de largo. • Un locus VNTR contiene de 2 - 50 repeticiones.• Hay varios cientos de loci VNTR en el genoma humano.• El número de repeticiones varía de una persona a otra e incluso en una

persona de cromosomas homólogos.


8

Huella genética con VNTR/STR

Cromosomashomólogos

Separación de repeticiones aplificadas por el gel de electroforesis


9

VNTR / STR for DNA Fingerprinting

VNTR (Unidades de repetición de Tándem Diferentes)• Cada repetición es 10 – 40 pares de bases (bp) de largo. • Un locus VNTR contiene de 2 - 50 repeticiones.• Hay varios cientos de loci VNTR en el genoma humano.• El número de repeticiones varía de una persona a otra e incluso en una

persona de cromosomas homólogos.STR (Repeticiones cortas en Tándem)• Cada repetición es de 2 - 10 bp de largo.• Un locus STR contiene: 10 - 50 repeticiones• Varios cientos de loci STR en el genoma humano• Identificación de 1:6 billones con 8 STR loci , 1:1017 con 16 STR loci Protocolo del test• Aislar ADN del material biológico (sangre, saliva, tejidos, pelos...)

multiplex PCR (capilaridad) gel electroforesis leerApplicación• Medicina Forense, test de paternidad, alimentación animal, control de

carnes,identificación celular ej. Células cancerígenas...

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