ANALISIS MIKROBIOLOGI

Deteksi Mikrobia Pada PanganTotal mikrobia (bakteri, yeast, jamur/mold)Bakteri indikator sanitasiColiform ;fecal (E. coli) ; non fecal Enterobacter aerogenesBakteri pathogenSalmonella, Shigella, EPEC E. coliVibrio, Listeria monocytogenes, Yersinia, Campylobacter jejuni, dll

METODE ENUMERASI (PERHITUNGAN) MIKROBAMETODE HITUNGAN CAWANMOST PROBABLE NUMBER (MPN)METODE HITUNGAN MIKROSKOPIK LANGSUNGTURBIDIMETRI

PENYIMPANAN CONTOH UJIMenekan perubahan sampel (fisik, kimia, mikrobiologi)Penyimpanan dilakukan pada :- suhu kamar ; sampel yang kering, makanan kaleng/ tidak mudah rusak- suhu refri ; sampel yang mudah rusak (36 jam)- suhu beku ; pangan beku

Kemasan tidak boleh dibuka sebelum pengujian

PREPARASI CONTOH UJIThawing pangan bekuWadah sterilHancurkan sampel secara aseptisHomogenisasi

TEKNIK PREPARASI SAMPELSwab (ulas)

Rinse (bilas)

Maseration (penghancuran)

HITUNGAN LANGSUNG; MIKROSKOPPetroff-Hauser counting chamberMikroba minimal 106 cells/mlMenghitung seluruh sel, tidak membedakan antara sel hidup dan sel mati

Hitungan Turbidity

Metode Hitungan Cawan

Metode Hitungan Cawan

CARA MENGHITUNG KOLONICawan yang dipilih dan dihitung adalah yang mengandung jumlah koloni antara 30-300Beberapa koloni yang bergabung menjadi satu merupakan suatu kumpulan koloni yang besar dimana jumlah koloninya diragukan, dapat dihitung sebagai satu koloniSuatu deretan (rantai) koloni yang terlihat sebagai suatu garis tebal dihitung sebagai satu koloni

PERATURANHasil yang dilaporkan hanya terdiri dari dua angka, yaitu angka yang pertama dan kedua. Jika angka yang ketiga sama dengan atau lebih besar dari 5 harus dibulatkan satu angka lebih tinggi pada angka yang kedua

Jml koloni per pengenceranJumlah Mikroba10^-210^-310^-42342812,3 x 10^4700125101,3 x 10^5TMTCTMTC1972,0 x 10^6

PERATURAN2. Jika semua pengenceran yang dibuat untuk pemupukan menghasilkan kurang dari 30 koloni pada cawan petri,hanya jumlah koloni pada pengenceran yang terendah yang dihitung. Hasilnya dilaporkan sebagai kurang dari 30 dikalikan dengan besarnya pengenceran, tetapi jumlah yang sebenarnyaharus dicantumkan dalam tanda kurung.

Jml koloni per pengenceranJumlah Mikroba10^-210^-310^-41610< 3,0 x 10^3(1,6 x 10^3)

PERATURAN3. Jika semua pengenceran yang dibuat yntuk pemupukan menghasilkan lebih dari 300 koloni pada cawan petri, hanya jumlah koloni pada pengenceran yang tertinggi yang dihitung. Hasilnya dilaporkan sebagai lebih dari 300 dikalikan dengan besarnya pengenceran, tetapi jumlah yang sebenarnya harus dicantumkan dalam tanda kurung.

Jml koloni per pengenceranJumlah Mikroba10^-210^-310^-4TNTCTMTC355> 3,0 x 10^6(3,6 x 10^6)TNTC32520> 3,0 x 10^5 (3,3 x 10^5)

PERATURAN4. Jika cawan dari dua tingkat pengenceran menghasilkan koloni dengan jumlah antara 30 dan 300, dan perbandingan antara hasil tertinggi dan terendah dari kedua pengenceran tersebut lebih kecil atau sama dengan 2, tentukan rata-rata dari kedua nilai tersebut dengan memperhitungkan pengencerannya. Jika perbandingan antara hasil tertinggi dan terendah lebih besar dari 2, yang dilaporkan hanya hasil yang terkecil.

Jml koloni per pengenceranJumlah Mikrobaket10^-210^-310^-42934143,5 x 10^42 (pengenceran. terkecil)

PERATURAN5. Jika digunakan dua cawan petri (duplo) per pengenceran, data yang diambil harus dari kedua cawan tersebut, tidak boleh diambil salah satu.

Jml koloni per pengenceranJumlah Mikrobaket10^-210^-310^-41752081617101,9 x 10^4Rata-rata pengenceran 10^-21381624243241,5 x 10^4>2 (pengenceran. terkecil)2902803632413,1 x 10^4

MPN (Most Probable Number)541

MPN 3 SERI TABUNGJml Mikroba = nilai MPN x (1/ pengenceran tengah)

Jml yg ditumbuhkanKombinasiNilai MPNJml mikroba/ml10 ml1 ml0.1 ml0.01ml33213211.51.5 x 10^131013110.757.5 x 10^-102000200.0626.2 x 10^-2

UJI E.coliUji Penduga, LB/BGLBBUji Penguat, EMBUji Jenis Coliform, IMViC

Uji Penduga (BGLBB)GAS

Uji Penguat Eosin Methylen BlueMedia selektif dan diferensial untuk kelompok enterobacteriaceaeSelektif untuk Gram negatif dan dapat digunakan untuk membedakan kelompok yang menfermentasi laktosa (coliform) dan yang tidak menfermentasi laktosaMethylene blue dan eosin menghambat Gram positifAsam yang dihasilkan memberikan warna pink, apabila yang dihasilkan banyak terjadi presipitasi koloni warna kehijauan metalik

UJI IMViCUji Indol- media : SIM- Triptofan indol- Indol + kovacs (amil alkohol) warna merah

Uji Methyl RedMethyl Red digunakan untuk identifikasi bakteri yang menghasilkan produk akhir asam yang stabil (mixed acid fermentation) dari glukosaMedia untuk fermentasi adalah peptone, glukosa, phosphate bufferInkubasi 48 jam, ditambah indikator methyl redApabila pH < 4.4 medium berwarna merah positifApabila pH > 6.0 warna kuning - negatif

Voges-Proskaur (MR/VP)Untuk identifikasi bakteri penghasil acetoin dari degradasi glukosa (ferm. 2,3-butanediol)Setelah fermentasi selesai Reagen A (alpha-napthol) dan Reagen B (potassium hydroxide) ditambahkan warna merah - positifTidak berwarna atau warna cooper reaksi negatif

Uji Penggunaan CitrateSimmons Citrate agar medium dg sodium citrate sebagai sumber karbonBTB sebagai indikatorKontrol - hijauPerubahan warna menjadi biru (pH>7,6) atau kuning (pH asam) reaksi positif

JenisIndolMethyl redVoges-Proskauer SitratE. coli (var.1)++--E. coli(var.2)-+--E. aerogenes(var.1)--++/-E. aerogenes(var.2)+/--++

Tahapan isolasi dan identifikasi Salmonella1. Pre-enrichmentMenyehatkan kembali sel yang injur karena proses pengolahan dan penyimpanan makanan sehingga dapat mencapai kondisi fisik yang stabil2. SelectiveMendukung pertumbuhan bakteri Salmonella enrichment dan menekan pertumbuhan bakteri kompetitif lain3. Uji selektif padatSalmonella dapat tumbuh dan bakteri non Salmonella terhambat 4. Uji pendugaanUji penetapan terhadap koloni Salmonella yang tipikal5. KarakterisasiMenggunakan Kit diagnostik komersial biokimiawi 6. Uji serologiIdentifikasi dan klasifikasi serotype Salmonella