ACCESO ABIERTO virus

Los virus 2012, 4, 1372-1389; doi: 10.3390 / v4091372Los virus 2012, 4, 1372-1389; doi: 10.3390 / v4091372Los virus 2012, 4, 1372-1389; doi: 10.3390 / v4091372Los virus 2012, 4, 1372-1389; doi: 10.3390 / v4091372

virus

ISSN 1999-4915

www.mdpi.com/journal/viruses

Artículo

Las alteraciones renales en el virus de inmunodeficiencia felina (VIF) infectados con

gatos: un modelo natural de lentivirus Inducidos Renal Disease Cambios

Alessandro Poli 1, Natasa Tozon 2, Grazia Guidi 3 y Mauro Pistello 4, *Alessandro Poli 1, Natasa Tozon 2, Grazia Guidi 3 y Mauro Pistello 4, *Alessandro Poli 1, Natasa Tozon 2, Grazia Guidi 3 y Mauro Pistello 4, *Alessandro Poli 1, Natasa Tozon 2, Grazia Guidi 3 y Mauro Pistello 4, *Alessandro Poli 1, Natasa Tozon 2, Grazia Guidi 3 y Mauro Pistello 4, *Alessandro Poli 1, Natasa Tozon 2, Grazia Guidi 3 y Mauro Pistello 4, *Alessandro Poli 1, Natasa Tozon 2, Grazia Guidi 3 y Mauro Pistello 4, *Alessandro Poli 1, Natasa Tozon 2, Grazia Guidi 3 y Mauro Pistello 4, *

1 Departamento de Patología Animal, Profilaxis y Higiene de los Alimentos, Facultad de Veterinaria, 1 Departamento de Patología Animal, Profilaxis y Higiene de los Alimentos, Facultad de Veterinaria,

Universidad de Pisa, Viale delle Piagge 2, 56124 Pisa, Italia; E-Mail: [email protected]

2 Clínica de Medicina y Cirugía de Animales Pequeños, Facultad de Veterinaria, Universidad de Ljubljana, 2 Clínica de Medicina y Cirugía de Animales Pequeños, Facultad de Veterinaria, Universidad de Ljubljana,

Gerbičeva 60, Ljubljana 1000, Eslovenia; E-Mail: [email protected]

3 Departamento de Clínica Veterinaria, Facultad de Veterinaria, Universidad de Pisa, Via Livornese, 3 Departamento de Clínica Veterinaria, Facultad de Veterinaria, Universidad de Pisa, Via Livornese,

San Piero a Grado, 56122 Pisa, Italia; E-Mail: [email protected]

4 Departamento de Patología Experimental de la Universidad de Pisa, Via S. Zeno, 35/39, 4 Departamento de Patología Experimental de la Universidad de Pisa, Via S. Zeno, 35/39,

Pisa 56127, Italia

* Autor a quien debe dirigirse la correspondencia; E-Mail: [email protected] ; Tel .: + 39-050-221-3781;

Fax: + 39-050-221-3524.

Recibido: 18 Julio 2012; en forma revisada: 15 Agosto 2012 / Aceptado: 16 Agosto 2012 / Publicado: 27 Agosto

2012

Abstracto: virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) se asocia con varios síndromes renales, Abstracto: virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) se asocia con varios síndromes renales,

incluyendo aguda y fallas renales crónicas, pero los mecanismos patogénicos subyacentes no están

claros. VIH y el virus de la inmunodeficiencia felina (FIV) Compartir numerosas características biológicos

y patológicos, incluyendo alteraciones renales. Hemos investigado y se compararon los cambios

morfológicos del tejido renal de forma experimental 51 y 21 gatos infectados de forma natural. En

comparación con estos últimos, los gatos infectados experimentalmente exhiben algunos

ensanchamiento mesangial y la glomerulonefritis, la proteinuria más leves, y tubular inferior y

alteraciones intersticiales. El número de cilindros tubulares proteína gigantes y microquistes tubulares

también fueron más bajos. Por el contrario, infiltrados intersticiales difusas y glomerular e intersticial

amiloidosis se detectaron gatos infectados de forma natural.

ACCESO ABIERTO

Los virus 2012, 4Los virus 2012, 4Los virus 2012, 4 1373

palabras clave: gato; virus de inmunodeficiencia felina; VIF; enfermedades renales; la patología renalpalabras clave: gato; virus de inmunodeficiencia felina; VIF; enfermedades renales; la patología renal

1. Introducción

Nefropatías con frecuencia complican el curso de la infección debida al virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), la

mayoría de ellos como resultado de una enfermedad renal crónica subyacente [1]. Los mecanismos patogénicos implicados

en estos trastornos son todavía oscuros: factores genéticos y la respuesta celular renal, provocada por las proteínas del VIH y

un microambiente inmune activadas, se cree que desempeñan un papel importante. Los animales transgénicos y modelos

infecciosos naturales de VIH que recapitular las enfermedades humanas son herramientas importantes para la obtención de

conocimientos sobre patogénesis de la enfermedad, la susceptibilidad genética y la intervención terapéutica [2]. El principal de

los modelos naturales son el virus de la inmunodeficiencia simia (VIS) y el virus de la inmunodeficiencia felina (VIF), junto con

sus respectivos ejércitos. Tanto SIV y FIV son lentivirus estrechamente relacionados con el VIH.

A lo largo del curso de la infección, FIV induce anormalidades inmunológicas que se caracterizan por una disminución profunda en el número absoluto

de las células T CD4 +, la consiguiente inversión de la relación de + / células T CD4 CD8 +, y, posiblemente, un aumento de la susceptibilidad a infecciones

oportunistas, y diversas condiciones clínicas-patológicas [3]. Como el VIH, VIF es endémica y genéticamente heterogéneo. Las cepas circulantes se han

agrupado en cinco subtipos, de A a E, que están distribuidas de manera desigual geográficamente y tienen una diversidad inter-subtipo> 20% a una amino

nivel de ácido [4]. Una vez transmitida por morder o, en menor medida, en vertical o sexualmente, VIF establece una infección persistente de por vida frente

a la fuerte respuesta inmune humoral y mediada por células que aparecen poco después de la fase de viremia inicial [4]. La fase aguda de la infección dura

unos pocos días a unas pocas semanas, y es asintomática en una gran proporción de los gatos. síntomas de replicación y clínicos virales, si está presente,

con el tiempo desaparecen y el animal entra en un periodo asintomático que típicamente dura de 4 a 6 años o restos clínicamente silenciosos durante toda la

vida del animal. En 30% de los gatos, y en su mayoría influenciado por cofactores y estilo de vida [4], la infección pasa a la última etapa, el SIDA felino

(F-SIDA), caracterizado por una profunda inmunodeficiencia, infecciones secundarias sostenida por varios patógenos oportunistas, y enfermedades de

acogida. disminuir el tiempo y el animal entra en un periodo asintomático que típicamente dura de 4 a 6 años o restos clínicamente silenciosos durante toda

la vida del animal. En 30% de los gatos, y en su mayoría influenciado por cofactores y estilo de vida [4], la infección pasa a la última etapa, el SIDA felino

(F-SIDA), caracterizado por una profunda inmunodeficiencia, infecciones secundarias sostenida por varios patógenos oportunistas, y enfermedades de

acogida. disminuir el tiempo y el animal entra en un periodo asintomático que típicamente dura de 4 a 6 años o restos clínicamente silenciosos durante toda

la vida del animal. En 30% de los gatos, y en su mayoría influenciado por cofactores y estilo de vida [4], la infección pasa a la última etapa, el SIDA felino (F-SIDA), caracterizado por una profunda inmunodeficiencia, infecciones secundarias sostenida por varios patógenos oportunistas, y enfermedades de acogida.

manifestación clínica y resultado de la enfermedad dependen de una combinación de infecciones concomitantes o posteriores, que

pueden interactuar con FIV o exacerbar su potencial patógeno. Algunos, en su mayoría sin definir, factores genéticos del huésped, y las

respuestas inmunes específicas también contribuyen a la aparición clínica. Inmunodeficiencia combinada con la inmunoestimulación local o

sistémica más frecuentemente da como resultado la aparición de las formas graves de la gingivoestomatitis, rinitis crónica, linfadenopatía,

pérdida de peso y enfermedades renales [4].

A pesar del creciente conocimiento de la mayoría de las características clínicas y patológicas, por lo que somos conscientes de que no

hay descripción detallada de las lesiones renales hallados en los gatos natural y experimental VIF-infectados. El objetivo de nuestro estudio

era así para investigar las alteraciones renales histológicos en 51 gatos inoculados experimentalmente con el subtipo A FIV-Pet y el subtipo

B cepas de VIF-M2, y se sacrificaron a diferentes tiempos después de la infección (pi). Los resultados se compararon con los observados


en 21 gatos infectados naturalmente por el FIV. Dadas las similitudes con los pacientes infectados por el VIH, creemos que el modelo animal felino es un

excelente medio para avanzar en el conocimiento de las enfermedades renales asociadas al VIH.

2. Resultados y Discusión

condiciones características clínicas y de ánimas del estudio se muestran en la Tabla 1. Los 21 gatos infectados naturalmente con VIF eran

mayores en comparación con los sujetos y los controles infectados experimentalmente (mediana de edad de diferencia estadísticamente en p < 0,01). mayores en comparación con los sujetos y los controles infectados experimentalmente (mediana de edad de diferencia estadísticamente en p < 0,01). mayores en comparación con los sujetos y los controles infectados experimentalmente (mediana de edad de diferencia estadísticamente en p < 0,01).

Quince de los gatos infectados de forma natural eran varones y 6 mujeres. De éstos, tres mujeres y un hombre fueron castrados, 17 restantes

estaban intactos. Finalmente, diez de ellos estaban en la fase asintomática (estadificación clínica 3), mientras que las otras once eran sintomáticas

(estadificación clínica 4). los gatos y los controles infectados por FIV Experimentalmente eran todas las hembras intactas y de entre 2 y 6 años en el

momento de análisis. En el momento del sacrificio, estos sujetos estaban todos sanos, excepto uno infectado con una cepa de VIF-M2.

Tabla 1. Características y las concentraciones de creatinina y proteína en la orina de los gatos del estudio. Tabla 1. Características y las concentraciones de creatinina y proteína en la orina de los gatos del estudio.

Característica

infectados naturalmente

(N = 21)

infectados experimentalmente

Controles (n

= 4)

FIV-Pet (n

= 17)

FIV-M2 (n

= 28)

VIF-Pet + FIV-M2

(N = 6)

La mediana

(rango)

La mediana

(rango)

La mediana

(rango)

La mediana

(rango)

La mediana

(rango)

Años de edad) 8,0 (4,0-13,0) 3,0 (2,0-6,0) 4,0 (2,0-6,0) 4,5 (4,0-5,0) 4,5 (4,0-6,0)

Sexo

masculino 15

Hembra 6 17 28 6

estado neutro

Intacto 17 17 28 6

alterado 4

Enfermo estado

clínico 11 1

Saludable 10 17 27 6

concentración de creatinina 120 (73-709) 123 (100 a 131) 118 (93-144) 121 (103-139) 107 (95-125)

UPC 1,17 (0,18-14.00) 0,69 (0.31-7.00) 0,52 (0.25-18.00) 0,92 (0.55-13.00) 0,25 (0.17-0.31)1,17 (0,18-14.00) 0,69 (0.31-7.00) 0,52 (0.25-18.00) 0,92 (0.55-13.00) 0,25 (0.17-0.31)

La Figura 1 muestra los CD4 + / CD8 recuentos de células T + y la carga viral en el momento de sacrificio en los sujetos

infectados experimentalmente. En estos animales se observaron una disminución progresiva de las células T CD4 + y una

relación de + / de células T CD8 + CD4 reducida. Esto fue particularmente evidente en los sujetos sacrificado > 36 meses pi. relación de + / de células T CD8 + CD4 reducida. Esto fue particularmente evidente en los sujetos sacrificado > 36 meses pi. relación de + / de células T CD8 + CD4 reducida. Esto fue particularmente evidente en los sujetos sacrificado > 36 meses pi.

Por el contrario, la carga proviral en las células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) aumentó constantemente con

el tiempo. Aunque ensayos competitivos y PCR en tiempo real para cuantificar el ARN del genoma de VIF produjeron

diferente y difícil comparar los resultados, el aumento de los niveles de plasma viremia con respecto al tiempo de la

infección, también se observaron en los grupos de FIV-M2 FIV-Pet y (datos no mostrados). Estos resultados indican que, a

pesar de la ausencia de síntomas clínicos manifiestos, la infección por FIV progresó y erosiona la eficiencia del sistema

inmunológico en todos los animales infectados con independencia de las cepas que infectan. De hecho, no se observaron

diferencias significativas en los cambios de subconjuntos de linfocitos y carga proviral entre los grupos FIV-M2 FIV-Pet y.

Curiosamente, es decir, VIF-Pet además VIF-M2 genomas Curiosamente, es decir, VIF-Pet además VIF-M2 genomas Curiosamente, es decir, VIF-Pet además VIF-M2 genomas


primero determinado por PCR competitivo, entonces reexaminado por PCR en tiempo real, fue menor en comparación con los grupos de FIV-M2

FIV-Pet y.

Figura 1. Análisis de CD4 + y CD8 niveles de células T + y carga proviral en la sangre periférica de los gatos examinados Figura 1. Análisis de CD4 + y CD8 niveles de células T + y carga proviral en la sangre periférica de los gatos examinados

en diferentes momentos de la infección. círculos negros sólidos y vacíos indican por ciento de CD4 + y células T CD8 +,

respectivamente. círculos azules de luz indican la CD4 + y la proporción de células T CD8 + que se calculó dividiendo el

valor de CD4 + por el valor CD8 +. Los círculos rojos indican la carga proviral expresa como número de provirus por g de

ADN de PBMC y determinada por PCRs competitivos o en tiempo real. Los valores de carga proviral para los gatos

FIV-Pet + FIV-M2 son el número total de FIV-Pet y FIV-M2 proviral genomas. Whiskers indican la desviación estándar.

Como se describe en un artículo anterior [5], estos animales fueron preinfected con dosis escaladas de una FIV-Pet que habían sido

cultivadas in vitro y había perdido la mayoría de su potencial patógeno, y que de este modo establece una infección de bajo grado en todos los cultivadas in vitro y había perdido la mayoría de su potencial patógeno, y que de este modo establece una infección de bajo grado en todos los cultivadas in vitro y había perdido la mayoría de su potencial patógeno, y que de este modo establece una infección de bajo grado en todos los

animales inoculados. Siete meses después, los animales fueron


desafiado con una cepa completamente virulenta de FIV-M2 y monitoreado por más de tres años. Los resultados revelaron que preinfección con

VIF subtipo A-Pet no impidió que la superinfección y ni tampoco la fase aguda de la infección dan lugar al subtipo B del FIV-M2. Sin embargo,

dos años después de la FIV-M2 inoculación, preinfección VIF-Pet previno de manera significativa el aumento de la carga viral en comparación

con los gatos infectados de control en paralelo con VIF-M2 [5]. La carga viral reducida observó un año más tarde, cuando los animales fueron

sacrificados para analizar la distribución viral y la histopatología en los tejidos, por lo tanto son de acuerdo con nuestros resultados de

seguimiento.

Los exámenes histopatológicos de los tejidos renales mostraron cambios glomerulares en 18/21 (85,7%) de la forma natural y en 26/51

(51,0%) de los gatos experimentalmente FIV-infectadas. No se detectaron alteraciones en los controles (Tabla 2).

ensanchamiento mesangial, caracterizado por un aumento de la matriz mesangial y con o sin glomeruloesclerosis

segmentaria (Figura 2A), se observó en 6/17 FIV-Pet gatos (dos 12 meses pi, uno de 24 meses pi, y tres 36 meses pi) infectados.

Un gato infectado por 12 meses y dos gatos infectados por 24 meses con FIV-Pet también mostró focal y segmentaria

mesangioproliferativa glomerulonefritis (GN) (Figura 2B). En estas áreas, IgG (Figura 2C) y C3 depósitos se detectaron mediante

inmunohistoquímica (IHC). En los gatos infectados con FIV-M2, se detectaron los cambios renales en 12/28 sujetos: 6 de ellos

tenían ensanchamiento mesangial (dos infectados por 12 meses, uno por 24 meses, y tres por > 36 meses), cinco se vieron tenían ensanchamiento mesangial (dos infectados por 12 meses, uno por 24 meses, y tres por > 36 meses), cinco se vieron tenían ensanchamiento mesangial (dos infectados por 12 meses, uno por 24 meses, y tres por > 36 meses), cinco se vieron

afectados por GN mesangioproliferativa focal y segmentaria (un gato infectado por cada 12 y 24 meses, y el 3 por > 36 meses). afectados por GN mesangioproliferativa focal y segmentaria (un gato infectado por cada 12 y 24 meses, y el 3 por > 36 meses). afectados por GN mesangioproliferativa focal y segmentaria (un gato infectado por cada 12 y 24 meses, y el 3 por > 36 meses).

Por último, un gato infectado por > 36 meses mostraron GN membranoproliferativa. En este caso, la celularidad mesangial había Por último, un gato infectado por > 36 meses mostraron GN membranoproliferativa. En este caso, la celularidad mesangial había Por último, un gato infectado por > 36 meses mostraron GN membranoproliferativa. En este caso, la celularidad mesangial había

aumentado y presentado ampliada y espesado paredes capilares que causaron “división” de la membrana basal glomerular

(Figura 2D). Cinco de los seis gatos infectados con ambas cepas y se sacrificaron a > 36 meses pi mostró ensanchamiento (Figura 2D). Cinco de los seis gatos infectados con ambas cepas y se sacrificaron a > 36 meses pi mostró ensanchamiento (Figura 2D). Cinco de los seis gatos infectados con ambas cepas y se sacrificaron a > 36 meses pi mostró ensanchamiento

mesangial (dos gatos) y GN mesangioproliferativa focal y segmentaria (tres gatos).

Seis VIF-Pet, once VIF-M2, y tres VIF-Pet + FIV-M2 infectan los gatos mostraron cambios degenerativos en las células epiteliales

tubulares. microquistes tubulares, así como moldes de proteínas gigantes se observaron ocasionalmente. En particular, se detectó la

mycocyst tubular en cuatro gatos, dos infectados con FIV-M2 y en dos con ambos virus y moldes de proteínas gigantes en dos gatos

infectados con ambos virus y se sacrificaron 36 meses pi. cambios intersticiales también fueron poco frecuentes. Se detectaron

infiltrados periglomerulares dispersos en un gato VIF-Pet sacrificado a los 24 meses del pi, tres infectados con VIF-M2 (una sacrificaron

a los 24 meses y dos sacrificados > 36 meses pi) y dos gatos infectados con ambos virus. a los 24 meses y dos sacrificados > 36 meses pi) y dos gatos infectados con ambos virus. a los 24 meses y dos sacrificados > 36 meses pi) y dos gatos infectados con ambos virus.

Viruses 2012, 4Viruses 2012, 4Viruses 2012, 4

1377

Table 2. Renal Table 2. Renal

alterations detected in experimentally feline immunodeficiency virus (FIV)-infected cats sacrificed at the indicated times post-infection (pi).

Renal Alterations

Naturally

Infected

n = 21 (%)

Controls

12 Months pi

24 Months pi

≥36

Months

pi FIV-Pet n = 6 (%)

FIV-M2

n = 10 (%)

FIV-Pet

n = 7 (%)

FIV-M2

n = 6 (%)

FIV-Pet

n = 4 (%)

FIV-M2

n = 12 (%)

FIV-Pet

+ FIV-M2 n = 6 (%)

Mesangial widening

9 (42.9)

0

2 (33.3)

2 (20.0)

1 (14.3)

1 (16.6)

3 (75.0)

3 (25.0)

2

(33.3) Glomerulo-nephritis

3 (14.3)

0

1 (16.6)

1 (10.0)

2 (28.6)

1 (16.6)

0

4 (33.3)

3

(50.0) Glomerular amyloidosis

8 (30.1)

0

0

0

0

0

0

0

0

Tubular changes

10 (47.6)

0

2 (33.3)

2 (20.0)

1 (14.3)

2 (33.3)

3 (75.0)

7 (58.3)

3

(50.0) Interstitial lesions

17 (81–0)

0

0

0

1 (14.3)

1 (16.6)

0

2 (16.7)

2

(33.3) Interstitial amyloidosis

7 (33.3)

0

0

0

0

0

0

0

0

No alterations

3 (14.3)

4 (100)

3 (50.0)

7 (70.0)

4 (57.1)

4 (66.6)

1 (25.0)

5 (41.6)

1 (16.6)


Figura 2. Los resultados representativos de las lesiones renales observadas en los gatos infectados por FIV M2. ( UNA) ensanchamiento Figura 2. Los resultados representativos de las lesiones renales observadas en los gatos infectados por FIV M2. ( UNA) ensanchamiento Figura 2. Los resultados representativos de las lesiones renales observadas en los gatos infectados por FIV M2. ( UNA) ensanchamiento Figura 2. Los resultados representativos de las lesiones renales observadas en los gatos infectados por FIV M2. ( UNA) ensanchamiento

mesangial. aumento leve en la matriz mesangial con un aumento mínimo en la celularidad intraglomerula. mancha

metenamina ácido-plata periódica de Jones. (Bar = 80 micras); ( SI) glomerulonefritis mesangioproliferativa segmentaria. metenamina ácido-plata periódica de Jones. (Bar = 80 micras); ( SI) glomerulonefritis mesangioproliferativa segmentaria. metenamina ácido-plata periódica de Jones. (Bar = 80 micras); ( SI) glomerulonefritis mesangioproliferativa segmentaria.

áreas dispersas de proliferación leve de las células mesangiales con infiltrados inflamatorios escasa. tinción de

hematoxilina-eosina. (Bar = 80 micras); ( C) glomerulonefritis mesangioproliferativa. deposición segmentaria de IgG. hematoxilina-eosina. (Bar = 80 micras); ( C) glomerulonefritis mesangioproliferativa. deposición segmentaria de IgG. hematoxilina-eosina. (Bar = 80 micras); ( C) glomerulonefritis mesangioproliferativa. deposición segmentaria de IgG.

Estreptavidina biotina peroxidasa método complejo, contratinción de hematoxilina de Mayer. (Bar = 80 micras); ( RE) glomerulonefritis Estreptavidina biotina peroxidasa método complejo, contratinción de hematoxilina de Mayer. (Bar = 80 micras); ( RE) glomerulonefritis Estreptavidina biotina peroxidasa método complejo, contratinción de hematoxilina de Mayer. (Bar = 80 micras); ( RE) glomerulonefritis

membranoproliferativa. la ampliación mesangial y el engrosamiento de las paredes capilares con apariencia pista de

tranvía. tricrómico Azan. (Barra = 80 m).

No se detectaron cambios glomerulares en 18/21 sujetos infectados de forma natural. matriz mesangial con glomeruloesclerosis

segmentaria ocasional se observó en 9/21 gatos (figura 3A), en este caso las gotitas de proteínas se detectaron con frecuencia dentro de

los podocitos. Inmune mediada GN de tipo mesangioproliferativa en 3/21 gatos, y la deposición amiloide estaba presente en 8/21 gatos

(Figura 3B). Los depósitos de amiloide fueron segmentaria y focal en seis casos y difusa en dos. En todos los casos los depósitos de

amiloide eran sensibles KMnO4. alteraciones tubulointersticiales también fueron un hallazgo común en los gatos infectados de forma

natural: se observó degeneración de las células epiteliales tubulares en los gatos diez, microquistes tubulares en ocho (Figura 3C), y

cilindros gigantes tubulares proteína (Figura 3D) en cuatro sujetos. alteraciones intersticiales también eran frecuentes y consistieron en la

infiltración intersticial por linfocitos y células plasmáticas. La infiltración era escasa periglomerular (ocho sujetos), difusa sin fibrosis (seis), y

difusa con fibrosis intersticial (tres). amiloidosis intersticial se detectó en siete sujetos, mientras que no hay alteraciones intersticiales fueron

detectados en cuatro gatos. Al igual que anteriormente, el depósito de amiloide era KMnO4 sensible. La Tabla 3 resume los resultados de

los análisis de IHC en los gatos infectados experimentalmente y naturalmente.


Figura 3. Los resultados representativos de las lesiones renales observadas en los gatos naturalmente infectados con VIF. ( UNA)Figura 3. Los resultados representativos de las lesiones renales observadas en los gatos naturalmente infectados con VIF. ( UNA)Figura 3. Los resultados representativos de las lesiones renales observadas en los gatos naturalmente infectados con VIF. ( UNA)

Mesangial ampliando con glomeruloesclerosis segmentaria. Aumento de la matriz mesangial con un aumento mínimo en la

celularidad intraglomerular. gotitas de proteína fueron detectables dentro de cytoplasmas podocitos. tricrómico Azan. (Bar = 80

micras); ( SI) amiloidosis glomerular. aumento difuso de las paredes capilares debido a depostion amiloidosis. Rojo Congo micras); ( SI) amiloidosis glomerular. aumento difuso de las paredes capilares debido a depostion amiloidosis. Rojo Congo micras); ( SI) amiloidosis glomerular. aumento difuso de las paredes capilares debido a depostion amiloidosis. Rojo Congo

mancha. (Bar = 80 micras); ( C) mycrocysts tubular. Presencia de infiltración intersticial y túbulos dilatados que forman mancha. (Bar = 80 micras); ( C) mycrocysts tubular. Presencia de infiltración intersticial y túbulos dilatados que forman mancha. (Bar = 80 micras); ( C) mycrocysts tubular. Presencia de infiltración intersticial y túbulos dilatados que forman

mycrocysts tubulares. tinción de hematoxilina-eosina. (Bar = 80 micras); ( RE) gatos proteínas gigantes. PAS-positivos gatos mycrocysts tubulares. tinción de hematoxilina-eosina. (Bar = 80 micras); ( RE) gatos proteínas gigantes. PAS-positivos gatos mycrocysts tubulares. tinción de hematoxilina-eosina. (Bar = 80 micras); ( RE) gatos proteínas gigantes. PAS-positivos gatos

proteinacous dentro de microquistes tubular. tinción de PAS. (Barra = 80 m).

Tabla 3. inmunohistoquímico principal Tabla 3. inmunohistoquímico principal hallazgos en forma natural y experimentalmente

los gatos y los controles de VIF-infectada.

Inmunohistoquímica Los gatos de control

n = 4 (%)

gatos infectados

naturalmente n = 21

(%)

Infectados experimentalmente gatos

FIV-Pet n = 17 (%) FIV M2

n = 28 (%) FIV-Pet + FIV M2n = 6 (%)

depósitos de IgG en

mesangio

0 3 (14.3) 3 (17.6) 5 (17.9) 3 (50.0)

depósitos de IgG en asas capilares

0 1 (04,8) 1 (05,9) 2 (07,1) 2 (33.3)

depósitos de IgM 0 14 (66.7) 6 (35.3) 6 (21.3) 3 (50.0)

los depósitos de IgA 0 0 0 0 0

depósitos de C3 0 14 (66.7) 6 (35.3) 6 (21.3) 3 (50.0)

Ratón monoclonal amiloide AA

anti-humana

0 8 (38.1) 0 0 0

Policlonal de conejo anti-felino

amiloide AA

0 8 (38.1) 0 0 0

Policlonal de conejo anti-felino

AL amiloide

0 0 0 0 0


No hay inmunoglobulinas o depósitos de C3 se detectaron en los gatos de control no infectadas. Tanto en los gatos infectados

experimentalmente con VIF y, naturalmente, los glomérulos afectados por GN segmentarias mostraron depósitos granulares y

predominantemente mesangiales de IgG, IgM y C3, mientras que se detectaron depósitos raramente dispersos a lo largo de las asas capilares,

no se observó tinción de IgA. Grandes elencos proteicos fueron positivos para IgG e IgA débil. Los depósitos de amiloide fueron siempre positivo

para el monoclonal AA anti-humano de ratón y el anticuerpo policlonal de conejo contra el amiloide AA felino, mientras que siempre fueron

negativos para el anticuerpo policlonal de conejo anti-amiloide AL.

ensanchamiento mesangial, GN y alteraciones tubulares se detectaron tanto en gatos infectados experimentalmente y naturalmente.

cilindros tubulares proteínas gigantes y microquistes tubulares se detectaron con mayor frecuencia en forma natural que los sujetos infectados

experimentalmente ( p < 0,05). alteraciones intersticiales también fueron más frecuentes en forma natural en comparación con gatos infectados experimentalmente ( p < 0,05). alteraciones intersticiales también fueron más frecuentes en forma natural en comparación con gatos infectados experimentalmente ( p < 0,05). alteraciones intersticiales también fueron más frecuentes en forma natural en comparación con gatos infectados

experimentalmente ( p < 0,001). Además, el primer grupo presentó depósitos de amiloide glomerular e intersticial que no fueron detectados en experimentalmente ( p < 0,001). Además, el primer grupo presentó depósitos de amiloide glomerular e intersticial que no fueron detectados en experimentalmente ( p < 0,001). Además, el primer grupo presentó depósitos de amiloide glomerular e intersticial que no fueron detectados en

los infectados experimentalmente ( p < 0,001). Cabe mencionar, sin embargo, que algunos temas, naturalmente infectados con VIF eran viejos los infectados experimentalmente ( p < 0,001). Cabe mencionar, sin embargo, que algunos temas, naturalmente infectados con VIF eran viejos los infectados experimentalmente ( p < 0,001). Cabe mencionar, sin embargo, que algunos temas, naturalmente infectados con VIF eran viejos

y parte de estos cambios renales, en particular, los intersticiales, podría estar relacionado edad.

De manera similar a los estudios previos [6,7], estos resultados demuestran que los experimentalmente FIV gatos infectados tenían

cambios renales similares, en cierta medida, a los detectados en la infección natural, y que los animales infectados exhiben tasas

significativamente mayores de la disfunción renal y los cambios histológicos en VIF-infectada en comparación con la misma edad, los

animales seronegativos VIF. Exámenes de 326 gatos enfermos de Australia demostraron una asociación significativa entre la infección por

FIV y azotemia y palpablemente riñones pequeños [8]. riñones pequeños también fueron reportados por Brown et al [9]. anomalías renales

no específicas también se han encontrado en otros estudios [10,11]. alteraciones renales en VIF infectan los gatos se observaron 5,5% en

los gatos de Nueva Zelanda [12], 9,3% en Japón (a partir de una encuesta realizada a 700 gatos) [13], y el 9% en 76 gatos de tres regiones

italianas (Piamonte,

En los gatos experimentalmente FIV-infectadas, que eran, mantenidos en unidades de aislamiento, y regularmente comprobado para

varias condiciones clínicas y patológicas, así como diversos agentes patógenos, las principales alteraciones observadas fueron

ensanchamiento mesangial específico libre de patógenos, con o sin la glomeruloesclerosis segmentaria y inmune mediada BN. Estos

cambios renales también se observaron en los sujetos naturalmente FIV-infectados aunque amiloidosis renal y la presencia de infiltrados

intersticiales parecían ocurrir sólo en este último grupo. Se observaron GN mediada inmune en 12/51 experimental y en 3/21 gatos

naturalmente infectados con VIF. Aunque la incidencia de estas alteraciones inmunes mediadas parece ser mayor en los animales infectados

por partida doble, los números son demasiado pequeño para extraer ninguna conclusión cierta. La incidencia sin embargo no parece estar

relacionada con la cepa infectante.

Aunque los gatos infectados con FIV a menudo presentes Hipergamaglobulinemia, que se cree que está provocada por la activación

crónica policlonal de células B [15] y la consiguiente producción de complejos inmunes [15,16], GNs inmune mediada no se reportan con

frecuencia en la infección por FIV. En un estudio previo sobre 15 gatos infectados naturalmente con VIF sólo un sujeto mostró depósitos de

IgG en áreas mesangiales [6].

ensanchamiento mesangial con o sin glomeruloesclerosis segmentaria también se detectó en forma experimental y, naturalmente,

gatos VIF-infectada. Estas alteraciones [6], así como nefroesclerosis [11] y se engrosa la membrana de Bowman [9] han sido ya

reportado en infecciones por FIV naturales. Tal daño es causado por reacciones glomerulares, que también se han observado en

muchas otras entidades, aparentemente no relacionados, clínicos. Estas alteraciones son por lo tanto cree que resulta de hemodinámica

intraglomerular


alteraciones [17]. alteraciones hemodinámicas en la infección por FIV pueden ser provocados por una producción sostenida de linfoquinas y / u otro

huésped y / o factores virales que estimulan la proliferación mesangial, y la permeabilidad capilar glomerular alter. Aunque controvertido, existe una

creciente evidencia de un papel viral directa sobre las células renales, ya sea como resultado de la exposición a las proteínas virales o infección

directa parénquima renal [7]. Por otra parte, las lesiones tubulares e intersticiales debido a los linfocitos y la infiltración intersticial de células

plasmáticas, fibrosis y cambios degenerativos tubulares se han detectado principalmente en los gatos naturalmente FIV-infectados [6,9,11,18] y

animales sólo ocasionalmente en infectados experimentalmente. Nuestro estudio también confirma observaciones anteriores que muestran

glomerular y la amiloidosis intersticial en los riñones de los animales infectados de forma natural [7,18, 19]. Por el contrario, ninguno de los 51 gatos

infectados experimentalmente examinados tenían depósitos de amiloide en los riñones. Los estudios histoquímicos e inmunohistoquímicos

demostraron que los depósitos de amiloide estaban relacionadas con la amiloidosis secundaria, que normalmente se asocia con infecciones

crónicas. Como una contribución más a los mecanismos patogénicos de la enfermedad renal en virtud de la infección por FIV y viendo que los gatos

infectados experimentalmente con VIF no tenían el depósito de amiloide, el presente estudio parece demostrar que la infección por FIV por sí sola

no es suficiente.

Los estudios clínicos y patológicos evidenciaron que leve a la proteinuria renal grave sin signos clínicos de uremia es más probable

durante la infección por VIF [6]. En un estudio reciente, realizado entre los gatos de propiedad del cliente, no se detectó ninguna asociación

entre la infección por FIV y azotemia renal fue encontrado pero el 25% (16/64) de los gatos naturalmente infectados con VIF se proteinuris en

comparación con VIF-no infectada gatos (10,3%, 20/195) [20]. También en nuestro estudio, sólo 1/51 animales experimentalmente infectados

por FIV-M2, sacrificados una año pi, azotemia mostró (creatinina sérica 144? Mol / L y leve proteinuria 3,9 g / L con la concentración de

proteína en la orina (UPC) 0.43) (Chronic Renal la fase de insuficiencia 2) [21]. proteinuria renal, diagnosticada por la UPC, estuvo presente en

10/17 (56,5%), 9/28 (32,1%) y 2/6 (33,3%) gatos infectados con FIV-Pet, FIV-M2, y FIV-Pet + VIF-M2, respectivamente, y con independencia

del momento de la infección. Sin embargo, se observó la proteinuria renal más severa en el grupo de FIV-M2 (media 3,27 ± 6,34; varió desde

0,53 hasta 17,63), fue más leve en la FIV-Pet + FIV-M2 (media 3,0 ± 4,39; varió desde 0,55 hasta 13,01) , y fue la menos grave en el grupo de

FIV-Pet (media 2,56 ± 3,03; osciló desde 0,31 hasta 7,02). Un total de 14/29 gatos sin alteraciones renales histológicas tenía el valor de hasta

media más baja (3,95 ± 1,37 g / L (02/05 a 07/05)) y el valor UPC media más baja (0,45 ± 0,12 (0,25 a 0,67)). Los valores medios ARRIBA y

UPC en 10 gatos proteinúricos con ensanchamiento mesangial fueron ligeramente superiores 3,54 ± 1,52 g / L (2,0 a 5,4) y 0,81 ± 0,44 (0,53 a

1,94), respectivamente. Cinco gatos con alteración mesangial similares eran aproteinuric (> 2,0 g / L). Significativamente mayor significar hasta

(21,53 ± 29,39 g / L (2,8 a 100,0)) y los valores de la UPC (4,8 ± 5,77 (0.90-17. 63)) fueron encontrados en 12 gatos con alteraciones

glomerulares. Los 20 gatos con alteraciones tubulares tenían ya sea GN (9/20) o ensanchamiento mensangial (11/20). Tres de ellos eran

aproteinuric. Finalmente, 4/6 gatos con infiltrados intersticiales fueron proteinúrica,

dos fueron infectados a los 24 meses y de dos en > 36 meses. dos fueron infectados a los 24 meses y de dos en > 36 meses. dos fueron infectados a los 24 meses y de dos en > 36 meses.

La electroforesis de proteínas de la orina confirmado la correlación entre las proteínas excretadas en la orina y las alteraciones

histológicas encontradas en los gatos observados: 3/21 (14,3%) gatos tenían glomerulo selectiva proteinuria, 15/21 (71,5%) tenía

glomerulo no selectivo, y 3/21 (14,3%) manifestada glomerulo no selectiva y proteinuria tubular.

La mayoría de los gatos infectados experimentalmente (71,4 a 100%) habían invertido + / proporción de células T CD8 + CD4 que dependía del aislado

viral que infecta y, aunque con baja o ninguna significación estadística, momento de la infección. No se encontró correlación entre + relación CD4 + / CD8 de

células T y alteración renal. Del mismo modo, CD4 + / CD8 +


proporción de células T y recuentos de células T CD4 + no parecen estar relacionados con la uremia y la proteinuria. Esto parece estar de

acuerdo con lo que se ha observado en pacientes VIH positivos [9].

Nuestros hallazgos indican que la infección por VIF puede conducir a nefropatía. A nivel glomerular hiperplasia de las células

mesangiales, focal / segmental glomeruloscerosis, glomerulosclerosis global, reactiva visceral epitelio, los capilares “colapso” y el

espacio de Bowman dilatado se han descrito como asociadas con las infecciones por FIV y VIH, así como borramiento de pie,

arrugamiento de la membrana basal glomerular , inclusiones tubulareticular endoteliales,

cuerpos y la cromatina nuclear tubulares e intersticiales

degeneración por microscopía electrónica [6,22]. Esto sugeriría que FIV y su huésped natural podría ser un modelo animal útil para

investigar enfermedades renales-lentivirales inducida.

series de autopsia y biopsia demostró que GNs están presentes en 10-80% infectados por el VIH pacientes con

enfermedad renal [22-26]. Estos GNs toman manifiesta en diversas formas histológicos incluyendo proliferativa,

lupus, y proliferativa mixto o formas escleróticas [23]. Otros tipos de BN, incluyendo el membranoproliferativa,

también se han reportado en la infección por el VIH [23]. Estas alteraciones renales, sin embargo, no han sido

firmemente vinculado a la infección por VIH: de hecho, pueden ser consecuencia de infecciones coexistentes [27-29],

trastornado respuesta respuesta inmune a las infecciones coexistentes [30], o simplemente coincidencia [24]. Se ha

demostrado que la respuesta inmune a la infección por el VIH podría culminar en GN mediada por VIH-inmune

específica [31]. Nuestro estudio,

Otro trastorno renal cree que está asociada con la infección por VIH es la nefropatía asociada al VIH (HIVAN). pacientes HIVAN

pueden desarrollar un espectro de patologías renales que normalmente se manifiestan con una aguda y pérdida rápida de la función

renal, junto con una presencia de proteinuria, síndrome nefrótico, y azotemia [32]. Los hallazgos patológicos patognomónicos se

caracterizan por glomeruloesclerosis segmentaria focal, incluyendo glomerulopatía colapso [33,34].

Aunque los mecanismos patogénicos de HIVAN son en su mayoría desconocidos, hay evidencia para apoyar un papel causal de la

infección lentiviral. De hecho, HIVAN puede ser reproducido en el VIH-1 positivo ratones transgénicos y ratas, y primates no humanos [35-38].

De hecho, bajo terapia antirretroviral altamente activa algunos pacientes experimentaron reversión renal histológicos y de laboratorio

anomalías como se ha demostrado en estudios clínicos pequeños de pacientes con biopsia probada HIVAN [39,40]. Curiosamente,

glomeruloesclerosis, enfermedad tubulointersticial y / o ensanchamiento mesangial con IgM y C3 y la deposición de IgG leve también se han

observado en los gatos naturalmente FIV-infectados [6] y, como se demuestra en el presente estudio, también en experimentalmente

condiciones aunque en una proporción menor de los sujetos infectados que en los gatos infectados de forma natural.

Los estudios llevados a cabo sobre los tejidos renales de pacientes infectados por el VIH han demostrado la presencia de ADN del VIH

[23]. La reciente identificación de VIH-1 ARN mensajeros en los tejidos renales y en particular en las células epiteliales glomerulares y

tubulares apoya la idea de que el VIH pueda replicarse en este compartimento corporal [41-43]. La hipótesis de que VIF puede jugar un papel

en la patogénesis de alteraciones renales es apoyado por la presencia de p24 células virales antígeno en tubular epitelial, por la detección de

VIF mordaza VIF mordaza

secuencias de ADN y ARN en los ácidos nucleicos extraídos por biopsias renales, y por la presencia de células inflamatorias y glomerulares

intersticiales dispersos [7,14,31]. Los estudios en modelos transgénicos sugieren que el VIH-1 proteínas reguladoras Vpr y Nef juegan un

papel importante en HIVAN etiopatogenia [2]. Desde FIV no ha conocido Vpr funcional y Nef homólogos el mecanismo subyacente a

alteraciones renales en la infección por FIV


podría ser diferente. Una posible explicación es que FIV Vif y / o genes ORF-A pueden reemplazar algunas funciones del VIH-1 Vpr [2,44].

Estudios recientes de VIH han demostrado que se requieren deleciones tanto de Vpr y Vif de prevenir completamente G2 “estancamiento”, un

proceso en el entre la detención G2 completa y normal progresión del ciclo celular [45,46]. Resultados similares se observaron también

mediante la supresión de FIV ORF-A [44]. Estos resultados sugieren que el VIF Vif y ORF-A pueden solaparse algunas funciones de Vpr y Nef

del VIH y contribuir así, con un mecanismo desconocido, a la inducción de alteraciones renales.

3. Sección Experimental

3.1. Los sujetos estudiados y Diseño Experimental

Cincuenta y un reinas libres de patógenos específicos, infectadas con VIF-Pet y / o FIV-M2 aislamientos a un año de edad y cuatro

controles de la misma edad, fueron incluidos en el estudio; 17 gatos se inocularon con FIV-Pet aislar solo (grupo FIV-Pet), 28 con FIV-M2

aislar solo (grupo FIV-M2), y seis con FIV-Pet y FIV-M2 (grupo FIV-Pet + FIV-M2 ). Todos los sujetos tenían edades comprendidas entre los

2 y 6 años en el momento del análisis (mediana de edad de 8 años, rango de 2-6 años). Los gatos infectados y de control se encuentran en

peligro de bioseguridad de nivel 3 condiciones en el centro de retrovirus de la Universidad de Pisa, y se controlaron diariamente para las

condiciones clínicas de todo el período de observación. El examen físico se realizó semanalmente durante el primer mes dos pi y luego

mensualmente. aislado de VIF-Pet se obtuvo a partir del sobrenadante de las células FL4 persistentemente infectados [47] pero preparó de

forma diferente para los dos grupos. Los gatos del grupo de FIV-mascota infectada con un virus obtenido por pases seriados en los gatos

SPF para aumentar la patogenicidad viral. Los animales se inocularon por vía intravenosa a 10 CID 50. El FIV-Pet utilizó para infectar el grupo SPF para aumentar la patogenicidad viral. Los animales se inocularon por vía intravenosa a 10 CID 50. El FIV-Pet utilizó para infectar el grupo SPF para aumentar la patogenicidad viral. Los animales se inocularon por vía intravenosa a 10 CID 50. El FIV-Pet utilizó para infectar el grupo

grupo FIV-Pet + FIV-M2 deriva de FL-4 sobrenadante y se inoculó por vía intraperitoneal en dosis escaladas, como se describe en [5].

VIF-M2 es un aislado local utilizado para estudios de vacunas y no se cultivó

in vitro [ 21]. Gatos de los grupos de FIV-M2 y FIV-Pet + FIV-M2 se inocularon por vía intravenosa con dosis FIV-M2 que in vitro [ 21]. Gatos de los grupos de FIV-M2 y FIV-Pet + FIV-M2 se inocularon por vía intravenosa con dosis FIV-M2 que

van de 10 a 30 CID 50. De los 17 animales en el grupo de FIV-Pet, seis fueron sacrificados a los 12 meses pi, siete a 24, y van de 10 a 30 CID 50. De los 17 animales en el grupo de FIV-Pet, seis fueron sacrificados a los 12 meses pi, siete a 24, y van de 10 a 30 CID 50. De los 17 animales en el grupo de FIV-Pet, seis fueron sacrificados a los 12 meses pi, siete a 24, y

cuatro en > 36 meses pi. Los 28 animales del grupo FIV-M2 se sacrificaron a los 12 meses pi (10 sujetos), 24 meses pi (6 cuatro en > 36 meses pi. Los 28 animales del grupo FIV-M2 se sacrificaron a los 12 meses pi (10 sujetos), 24 meses pi (6 cuatro en > 36 meses pi. Los 28 animales del grupo FIV-M2 se sacrificaron a los 12 meses pi (10 sujetos), 24 meses pi (6

sujetos) y > 36 meses pi (12 sujetos). Por último, los seis animales en el grupo + FIV-M2 FIV-Pet se inocularon primero con sujetos) y > 36 meses pi (12 sujetos). Por último, los seis animales en el grupo + FIV-M2 FIV-Pet se inocularon primero con sujetos) y > 36 meses pi (12 sujetos). Por último, los seis animales en el grupo + FIV-M2 FIV-Pet se inocularon primero con

el

en vitro- crecido VIF-Pet y, un año después, superinfected con VIF-M2. Los animales se sacrificaron dos años después de FIV-M2 en vitro- crecido VIF-Pet y, un año después, superinfected con VIF-M2. Los animales se sacrificaron dos años después de FIV-M2

superinfección. Todos los gatos se examinaron de manera rutinaria para subconjuntos de linfocitos CD4 + y T CD8 + por citometría de flujo,

varios parámetros químicos y físicos, las respuestas inmunológicas y la viremia y la carga proviral como se describe en [5,48]. Todos los

animales fueron seropositivos en 4-6 semanas. Cuatro gatos SPF no infectadas se utilizaron como controles negativos (grupo C). Histología se

realizó en el momento pi indicada en todos los animales que fueron fuertemente anestesiados y luego sacrificados para la necropsia.

Los gatos infectados naturalmente por el FIV vinieron de diferentes partes de la Toscana, Italia. La edad media de estos sujetos fue de 8 años

(rango 4-13 años). Incluso si no era posible determinar con precisión la duración de la infección en estos animales, los once gatos sintomáticos

fueron muy probablemente infectados por más de 36 meses. estado infeccioso FIV se estableció mediante la detección de anticuerpos frente a

VIF por una enzima comercial ensayo inmunoabsorbente ligado (ELISA; Idexx, Portland, ME, EE.UU.), confirmado por análisis de transferencia

Western y por análisis de PCR en PBMC como se describe anteriormente [5,15]. Todos los sujetos infectados por el VIF seleccionados fueron

negativos para el antígeno p27 del virus de la leucemia felina por un ELISA comercial (Idexx),


y la peritonitis infecciosa felina anticuerpos (Diasystems Celisa FIP, Tech America, Omaha, NE, EE.UU.). Los once animales indicado-soplado

completo F-SIDA fueron sacrificados con el consenso propietario. Los gatos diez en la fase asintomática murieron por causas no relacionadas y se

sometieron a necropsia. En el momento del sacrificio, todos los animales tenían una marcada reducción de los niveles de células T CD4 + y una

inversión de la relación de células T CD4 + / CD8 +.

3.2. Análisis bioquímica y orina

Las muestras de orina se obtuvieron por cistocentesis. Después de la centrifugación, se utilizaron los sobrenadantes para

determinar las proteínas y de creatinina en concentraciones utilizando dos ensayos comerciales (BioRad, Richmond, CA, USA, y el

método de creatinina-Jaffe, Verbena, Milano, Italia, respectivamente). En los gatos con proteinuria marcados (> 2 g / L), UPC se calculó

usando la siguiente fórmula: P (g / L) x 100 / (Cr mmol / L / 0,0885) Protein análisis cualitativo se realizó con dodecil en gel de

poliacrilamida de sodio (SDS-PAGE) de acuerdo con Laemlli [49]. Las proteínas se dividen en las proteínas de bajo peso molecular

(LMW <66 kDa) y de alto peso molecular (HMW> 76 kDa). proteínas LMW se consideraron tubular, HMW junto con un mayor valor

UPC> 0,4 fueron considerados proteinuria glomerular.

Las muestras de sangre para obtener un perfil bioquímico se recogieron en tubos separadores de suero (Vacuette, Greiner Bio-One,

Kremsmunster, Austria) y se dejó durante 30 min a 4 ° C para coagular. Las muestras se centrifugaron después (1300 g durante 10 min) para

separar y recoger el suero. Las muestras de suero se analizaron para varios parámetros bioquímicos incluyendo urea, creatinina, proteínas

totales y albúmina. Los análisis se realizaron con un espectrofotómetro (LKB Biochrom Ltd, Cambridge, Reino Unido).

3.3. Análisis molecular

capa de muestras de 2 ml de sangre entera Buffy se utilizó para detectar y cuantificar FIV provirus. extracción de ADN FIV y la amplificación se realizó

mediante PCR en tiempo real [48] para el grupo 1 y 2 gatos, y PCR competitiva [50] para el grupo 3 gatos. Ambos ensayos están diseñados en las

secuencias de gag de FIV y cuando se prueba en paralelo a la tecnología de actualización desde mayores competitiva a ensayo más reciente PCR en

tiempo real, dieron resultados similares [48]. Se tomaron todas las precauciones para evitar la contaminación y las muestras se examinaron al menos dos

veces en experimentos separados. ADN de las PBMC de los gatos no infectados y FIV-Pet infectadas se utilizan FL-4 células como controles negativos y

positivos, respectivamente.

3.4. Citometría de flujo

subconjuntos de células T se examinaron por análisis de citometría de flujo como se describe [51]. análisis de citometría de flujo se realizó

usando fluoresceína conjugado monoclonal murino anticuerpos para felino CD4 y CD8 T-células superficie marcadores (Southern Biotech,

Birmingham, AL, EE.UU.) y un analizador de células Epopeyas Elite (Coulter Electronics, Hialeah, FL, EE.UU.).

3.5. Las investigaciones histológicas

muestras de tejido renal se fijaron en 10% formalina tamponada solución y embebidos en parafina. El examen

histopatológico se llevó a cabo por AP en el Departamento de Patología Animal, Profilaxis y Higiene de los Alimentos, y sin

conocer el estado de infección de los animales examinados.


secciones gruesas de tres micras de cada espécimen se tiñeron con hematoxilina y eosina, periódico-Schiff ácida, Jones metenamina

ácido-plata periódica y tricrómico Azan. Secciones con lesiones inflamatorias se tiñeron con la tinción de Ziehl-Neelsen ácido-rápido y

Gram para prevenir las infecciones bacterianas. Los depósitos de amiloide fueron detectados por Congo alcalino rojo tinción con

polarización en 8 secciones micras [52]. La diferenciación entre la amiloidosis primaria y secundaria se basa en la tinción mediante un

método Romhányi modificado con pre-tratamiento con permanganato de potasio [53] y IHC usando anticuerpos contra la proteína

amiloide A.

3.6. Las investigaciones inmunohistoquímicas

La localización de los depósitos de IgG, IgA, IgM y C3 fue investigado por IF indirecta y IHC. IF se realizó utilizando como

anticuerpos primarios anticuerpos de oveja monoespecíficos primarios a gato IgG, IgM, IgA y C3 (Binding Site, Birmingham, Reino

Unido) y un conejo fluoresceína anti-IgG de oveja (Vector Laboratories, Burlingame, CA, EE.UU.), como se describe [ 6]. Las secciones

de control se incubaron con suero normal de oveja (Dako, Golstrup, Dinamarca) antes del tratamiento con el antisuero secundario. Para

IHC, las secciones se de-encerado en xileno, pasaron a través de una serie graduada de alcoholes, y rehidratada en agua desionizada.

Para Ig y C3 localización, los tejidos fueron digeridos con 0,5% de proteasa (proteasa XXIV; Sigma, Saint Louis, Mo, EE.UU.) en 0,05 M

Tris-HCl, pH 7,6. peroxidasas endógenas se agotaron con peróxido de hidrógeno al 0,5% durante 30 minutos seguido de tres lavados

en 0. solución de 05% de Tween Tris Buffered Saline (TBST) a pH 7,6. El suero normal de las respectivas especies secundaria

anfitrionas anticuerpo y se diluyó 1/10 en TBST se añadió a las secciones de tejido y se incubaron a temperatura ambiente durante 30

minutos. Después de tres lavados, TBST diluyó anticuerpos primarios fueron aplicados a las secciones y se incubaron a temperatura

ambiente durante una hora. El antisuero usado en IHC se produjeron en ovejas (policlonal gato contra IgG, IgA, IgM y C3), los ratones

(monoclonal contra la proteína humana AA y de reacción cruzada contra la proteína gato homóloga), y el conejo (policlonal contra AA

anti-cat y AL; una especie de regalo de RP Link, Universidad de Munich, Munich, Alemania). Después de tres lavados, se añadió el

anticuerpo secundario biotinilado (Vectastain, Vector Labs Inc., Burlingame, CA, EE.UU.) y se incubó a temperatura ambiente durante

30 minutos. reacción de la peroxidasa se desarrolló durante 10 minutos usando diaminobencidina (DAB Impacto, Vector Labs Inc.,

Burlingame, CA, EE.UU.) y se bloqueó con agua desionizada. Se realizaron controles negativos mediante la sustitución del anticuerpo

primario con ovejas normal o suero de conejo, o utilizando una subclase murina irrelevante emparejado (IgG 1) anticuerpo monoclonal. primario con ovejas normal o suero de conejo, o utilizando una subclase murina irrelevante emparejado (IgG 1) anticuerpo monoclonal. primario con ovejas normal o suero de conejo, o utilizando una subclase murina irrelevante emparejado (IgG 1) anticuerpo monoclonal.

3.7. Estadísticas

El análisis estadístico se realizó usando el paquete estadístico SPSS avanzada Estadísticas 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, EE.UU.). las

concentraciones de creatinina en suero, UPC y los recuentos de linfocitos de subconjuntos no se distribuyeron normalmente, por lo tanto, se

realizó la comparación de valores de la mediana utilizando la prueba de Mann-Whitney. Se utilizó una prueba de Chi-cuadrado para investigar

la importancia de la relación entre la expresión de la proteína y las variables individuales. La significación estadística se basa en un nivel de

significación del 5% (0,05).


4. Conclusiones

Nuestros confirma estudio que la afectación renal se produce en una alta proporción de gatos naturalmente

infectados con VIF y que estas alteraciones son, aunque en menor medida, también se ha encontrado en los sujetos

infectados experimentalmente. Desde los últimos animales se mantuvieron en unidades aisladas y por lo tanto se

protegieron de factores externos conocidos para exacerbar la infección por FIV, estos resultados sugieren una relación

causal entre la infección por FIV y anomalías renales. Este daño parece estar relacionado con un aumento mesangial, a

veces acompañada por proliferación mesangial celular y glomerulosclerosis, un menor porcentaje de mediata

inmunológica GN y, en sujetos infectados de forma natural, glomerular y amiloidosis intersticial. Estas alteraciones son

el abeto en su mayor parte similares a las detectadas en los pacientes infectados por el VIH. FIV y su huésped natural,

el gato doméstico,

Expresiones de gratitud

Este trabajo fue apoyado por Ministero della Salute-Istituto Superiore di Sanità, “IV ° Programma Nazionale di Ricerca

sull'AIDS” “Progetto Nazionale SIDA-italiano concertada para el SIDA vacunación”.

Conflicto de intereses

Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.

referencias y notas

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