“APOPTOSIS”

“Apoptosis vs Necrosis”

• Reducción del volumen celular

• Compactación de las organelas

• Condensación de la cromatina

• Degradación internucleosomal del ADN

•Exposición de fosfatidil-serinas en el lado externo de la membrana plasmática

• Formación de “cuerpos apoptóticos”

Características de las células apoptóticas

Extrusión de la célula apoptótica

Apoptosis en células derivadas de epitelio uterino

Línea celular RENTROP

tratadas en medio con 1% de

libre de esteroides durante 24 h

A: Control

B: RU486 10-6 M

C: R5020 10-8 M

Pecci et al,J.B.C. 1997,272:11791

Tinción con DAPI

TUNEL

Ensayo de Anexina V

C. elegans.... el principio....

ApoReview: Introduction to Apoptosis. Andreas Gewies (2003)

Vías principales de apoptosis en mamíferos

Hengartner et al, Nature, 2000, 407: 770

Caspasas

cysteine-dependent aspartate-specific proteases

Tabla de caspasas

Vías principales de apoptosis en mamíferos

Hengartner et al, Nature, 2000, 407: 770

Activación por receptores de muerte

ApoReview: Introduction to Apoptosis. Andreas Gewies (2003)

Eventos mitocondriales

Efecto de la dexametasona sobre la liberación del citocromo C

Marcador

Mitocondrial

Citocromo C

Superposición de

imágenes

Control

Dexa 10-8 M

ApoReview: Introduction to Apoptosis. Andreas Gewies (2003)

Proteínas de la familia de Bcl-2

Gross et al,Genes Dev. 1999,13:1899

Miembros de la familia de Bcl-2

• Los niveles relativos de los miembros anti/pro-apoptóticos determinan el destino celular.

• Los miembros antiapoptóticos se localizan en membranas. Los proapoptóticos principalmente en citoplasma y se translocan a la mitocondria ante un estímulo de muerte.

• Regulan la liberación desde la mitocondria de proteínas que inducen la apoptosis.

Vías principales de apoptosis en mamíferos

Hengartner et al, Nature, 2000, 407: 770

ApoReview: Introduction to Apoptosis. Andreas Gewies (2003)

Translocación de GFP-Bax

Biochem. J. (2002) 367 (169–178)

(A) GFP–Bax-transfected cells, stimulated with staurosporine. (B) GFP–Bax and GFP were immunoprecipitated and analysed for GFP–Bax, VDAC and ANT. The non-immunoprecipitated

VDAC and actin in the supernatant (SN) were also measured. (C) Shows the selectivity of the anti-ANT polyclonal and anti-VDAC monoclantibodies used on mitochondrial extracts.

Biochem. J. (2002) 367 (169–178)

Posibles mecanismos de acción de los miembros de la familia de

Bcl-2

La dexametasona aumenta los niveles de Bax y disminuye los de

Bcl-XL en timocitos

Bcl-2

1 0,9

Bax

Control Dexa

1 2,35

1 1,02

Bcl-XL

Bcl-XC

in vitro

Control Dexa

1 1,6

Bax

Bcl-2

1 1,1

Bcl-XL

1 ---

in vivo

Regulación por IAPs

ApoReview: Introduction to Apoptosis. Andreas Gewies (2003)

Vías principales de apoptosis en mamíferos