TALLER DE TALLER DE DIAGNOSTICO MICOLOGICO Y DIAGNOSTICO MICOLOGICO Y APLICACIÓN CLÍNICAAPLICACIÓN CLÍNICA

Dr. Gustavo E. Giusiano

Facultad de MedicinaInstituto de Medicina Regional Universidad Nacional del NordesteArgentinagustavogiusiano@yahoo.com.ar

Guayaquil Guayaquil -- 20112011

Módulo II

Rhinosporidium seeberi

Scientific classification

Kingdom: ProtistaPhylum: Choanozoa

Class: Ichthyosporea

Order: Dermocystida

Genus: Rhinosporidium

Species: R. seeberiSpecies: R. seeberi

Rhinosporidium

Micosis SubcutáneasMicosis Subcutáneas

EsporotricosisEsporotricosis

Agente etiológico: Agente etiológico: Sporothrix schenckiiSporothrix schenckii

DiagnósticoDiagnóstico

�� Examen directo en frescoExamen directo en fresco

Cuerpos asteroides

�� ElEl agenteagente raramenteraramente eses observadoobservado enen elel examenexamen microscópicomicroscópico directodirecto..

Coloraciones

Giemsa, Gram, Grocott, PASPAS

Giemsa

ESPOROTRICOSISESPOROTRICOSISPAS

MICOLOGIAMICOLOGIA::

�� BIOPSIABIOPSIA:: HiperplasiaHiperplasia seudoepiteliomatosa,seudoepiteliomatosa, microabscesosmicroabscesos intradérmicos,intradérmicos, infiltracióninfiltración porpor

leucocitosleucocitos yy célulascélulas plasmáticas,plasmáticas, eosinófilos,eosinófilos, granuloma,granuloma, cuerposcuerpos asteroidalesasteroidales..

CultivoCultivo

Sabouraud con ATB

Cultivo a 28ºC

�Hongo dimórfico

Cultivo a 37ºC

�Hongo dimórfico

�CULTIVO: 37ºC: Colonia levaduriforme

� Células brotantes ovales, fusiformes.

�Forma parasítica o cultivo a 37ºC de Sporothrix schenckii

�CULTIVO: 25-28ºC: Hifas finas (1 a 2 micras de diam.), septadas, conidios ovales a piriformes (2-3 a 6µ) producidos en bouquet en el extremo del conidióforo. La acumulación de estas microconidias da aspecto de flor o “margarita”.

MicrocultivoMicrocultivo

Micetomas

Grano con hifas hialinas o dematiaceas

�Sospechar grano micótico

Eumicetoma

GRANOS NEGROS

Corte histológico

MO 10X

MO 100X

Principales Agentes Etiológicos de Principales Agentes Etiológicos de

EumicetomasEumicetomas

GRANOS NEGROS GRANOS BLANCOS

�� Madurella griseaMadurella grisea

�� Madurella mycetomatisMadurella mycetomatis

�� Pyrenochaeta romeroiPyrenochaeta romeroi

�� Leptosphaeria senegalensisLeptosphaeria senegalensis

�� Exophiala jeanselmeiExophiala jeanselmei

�� Exophiala Exophiala wernekii wernekii

�� Scedosporium apiospermumScedosporium apiospermum

�� Acremonium kilienseAcremonium kiliense

�� Acremonium recifeiAcremonium recifei

�� Acremonium falciformeAcremonium falciforme

�� Fusarium moniliforme Fusarium moniliforme

�� Fusarium solaniFusarium solani

por Madurella mycetomatis

GRANOS NEGROS

Conidióforos cilíndricos pigmentados con anélide en la porción apical dando aspecto de espinaPuede estar ramificado

Exophiala spinifera

Scedosporium apiospermumScedosporium apiospermum

Acremonium sp.Acremonium sp.

Fusarium sp.Fusarium sp.

CromomicosisCromomicosisCromomicosisCromomicosis

Examen directo en fresco

Cuerpos escleróticos (células fumagoides)Esclerotes de Medlar

elementos esféricos, dematiáceos, tabicadosy agrupadosde 2, 4, 6 o más. tabicadosy agrupadosde 2, 4, 6 o más.

Examen en fresco

Cuerpos escleróticos (células fumagoides)Esclerotes de Medlar

Principales Agentes Etiógicos de Principales Agentes Etiógicos de CromomicosisCromomicosis

►► Phialopora verrucosaPhialopora verrucosa

►►Cladosporium carrioniiCladosporium carrionii

►► Fonsecaea pedrosoiFonsecaea pedrosoi

►► Fonsecaea compactaFonsecaea compacta

►►Rhinocladiella aquaspersaRhinocladiella aquaspersa

Phialophora verrucosaPhialophora verrucosa

Fialides con forma de botella con collarete conico

Cladosporium sp.Cladosporium sp.

Conidios ovoidales dispuestos en largas cadenasuni o bicelulares

Cladosporium carrioni

RhinocladiellaRhinocladiella

Conidios ovoidales - fusiformes, laterales, unicelulares

que se forman en la extremidad de

largos conidióforoserectos cilíndricos

((AcrothecaAcrotheca))

erectos cilíndricos

Fonsecaea pedrosoiFonsecaea pedrosoiTres tipos de fructificaciónTres tipos de fructificación

Fonsecaea pedrosoiFonsecaea pedrosoiTres tipos de fructificaciónTres tipos de fructificación

Micosis Sistémicas EndémicasMicosis Sistémicas Endémicas

Agente: Agente: Paracoccidioides brasiliensisParacoccidioides brasiliensis

ParacoccidioidomicosisParacoccidioidomicosis

Examen directo

FRESCO

400X

TODAS LAS MUESTRAS

Examen directo

GiemsaCOLORACIONES

GroccotPass

Z-N (TBC)Kinyoun (Nocardia)Gram Weigert (P. jiroveci)Azul de toluidina (P. jiroveci)

Coloración de Giemsa

Grocott

Z -N * importante por la dificultad en algunos casos de diferenciar con TBC por radiología o clínica

* Asociaciones

Tº : 25-28ºC y 35-37ºC

Forma saprofítica Forma parasitaria

TERMODIMORFOTERMODIMORFO

35-37ºC – Forma parasitaria

Cultivo

25-28ºC – Forma saprofítica

microconidias

Cultivo

Histoplasmosis

Agente: Histoplasma capsulatumvar capsulatum (Argentina)

Histoplasmosis

Diagnóstico

Fase parasitaria

Examen directo

intracelular1-5 micras

Coloración de Giemsa(100X)

Citoplasma en casquete Citoplasma en casquete (forma semilunar, desplazado hacia hacia uno de los polos)(forma semilunar, desplazado hacia hacia uno de los polos)

Grocott – metenamina plata

Histoplasmosis

HEMOcultivo

Método de elección – Lisis centrifugación

Tº : 25-28ºC y 35-37ºC

Forma saprofítica Forma parasitaria

TERMODIMORFOTERMODIMORFO

Forma parasitaria

Fase Levaduriforme Fase Levaduriforme

unicelular, unicelular, in vitroin vitro 3434--3737°°CC

HHistoplasma capsulatum istoplasma capsulatum

varvar. capsulatum. capsulatum

Elementos levaduriformes(unicelulares) ovoidescon un solo brote -Tamaño 1-5 micras

Micelio hialino tabicadoMicroconidiasMicroconidias pequeñas, piriformes ( < 5 pequeñas, piriformes ( < 5 µµµµµµµµm)m)

Fase MicelialFase Micelial

multicelular en la naturaleza e multicelular en la naturaleza e in vitroin vitro 2525--28 28 °°CC

MacroconidiasGlobosas (8-15micras)Pared gruesa tuberculada

HHistoplasma capsulatum istoplasma capsulatum

varvar. capsulatum. capsulatum

HHistoplasma capsulatum istoplasma capsulatum

varvar. capsulatum. capsulatum

Fase Fase saprofíticasaprofítica

CoccidioidomicosisCoccidioidomicosis

Agente: Coccidioides immitis (Valle de San Joaquín – California)

Coccidioides posadasiiCoccidioides posadasii

TODAS LAS MUESTRAS

Examen directo

FRESCO

Fase parasitaria

esférulas de 20 a 80 µ de diámetro con endosporos

Examen directo

Examen directo

Coccidioides immitis Coccidioides posadasii

Examen directo

Coccidioides immitis Coccidioides posadasii

Calcofluor

Coccidioides immitis Coccidioides posadasii

Coloraciones• Giemsa• Gram• Grocott• PAS

Z-N (TBC)Kinyoun (Nocardia)Kinyoun (Nocardia)Gram Weigert (Pneumocistis)Azul de toluidina (Pneumocistis)

CultivoTº : 25-28ºC y 35-37ºC

Forma saprofítica

113Forma saprofítica

micelio hialino tabicado fragmentado en clamido-artroconidias Coccidioides immitis

Coccidioides posadasii

112

Micosis oportunistas IIMicosis oportunistas IIMicosis oportunistas IIMicosis oportunistas II

Examen microscópico de colonias levaduriformes

Cryptococcus sp Cryptococcus sp

Saccharomyces cerevisiaeSaccharomyces cerevisiae

Pichia membranifaciensPichia membranifaciens Candida globosaCandida globosa

Examen microscópico de colonias levaduriformes

Saccharomyces cerevisiaeSaccharomyces cerevisiae

Candida kruseiCandida krusei

Examen microscópico de colonias levaduriformes

Trichosporon sppTrichosporon cutaneum

Blasto-artroconidios

25ºC por 25ºC por 2 a 7 días2 a 7 días

� en agar harina de maíz - Tween 80

� agar arroz -Tween 80

MicrocultivoMicrocultivo ( Dalmau, 1929 ) Estudio micromorfológico de levaduras

Candida albicans – Candida dubliniensis

CryptococcusCryptococcus

Cryptococcus en LCR Test de tinta china

Pneumocystis sp.

Trofozoitos (formas troficas): formas libres de pneumocystis, pequeñas, aparece frecuentemente en acúmulos

Formas quísticas : redondos o en media luna, de 5-8 micras de diametro. En su interior se encuentran los esporozoitos(cada quiste puede tener hasta 8 esporozoitos).

Giemsa

5-8 µm

Formas quísticas

Lavado broncoalveolar (BAL)

4-7 µm

Contienen 1 o más núcleos

Formas tróficas(pre-quiste)