Post on 07-Feb-2019
Prof. Doutor José Cabeda Técnicas de Imunologia
Doenças Autoimunes
Ehrlich – “horror autotoxicus”Ehrlich – “horror autotoxicus” Owens (1945) – Apesar da partilha sanguinea os Owens (1945) – Apesar da partilha sanguinea os
gémeos bi-vitelinos não se rejeitam: tolerância gémeos bi-vitelinos não se rejeitam: tolerância imunológica ao gémeoimunológica ao gémeo
Billingham (1953) Billingham (1953) transplantes em ratinhos adultos de estirpes diferentes são transplantes em ratinhos adultos de estirpes diferentes são
rejeitadosrejeitados transplantes em ratinhos neonatais de estirpes diferentes são transplantes em ratinhos neonatais de estirpes diferentes são
aceites mesmo depois de atingirem a vida adultaaceites mesmo depois de atingirem a vida adulta Burnet (1956) Teoria da selecção clonal ou dos clones proibidosBurnet (1956) Teoria da selecção clonal ou dos clones proibidos
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Mecanismos de tolerância Imunológica
Eliminação clonalEliminação clonal Anergia ClonalAnergia Clonal Supressão da resposta imunitária (células T Supressão da resposta imunitária (células T
supressoras)supressoras) Falha na apresentação antigénicaFalha na apresentação antigénica
Baixa expressão de HLA-IIBaixa expressão de HLA-II Tecidos imunológicamente privilegiados Tecidos imunológicamente privilegiados
SNC (barreira hemato-encefálica)SNC (barreira hemato-encefálica) Testiculo (baixa temperatura)Testiculo (baixa temperatura) câmara anterior do olho (elevada [TGFcâmara anterior do olho (elevada [TGF])])
Rede idiotipo-antiidiotipoRede idiotipo-antiidiotipo
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Mecanismos de Indução de auto-imunidade (I)
Falha de eliminação clonalFalha de eliminação clonal Linfócitos B1(CD5+)Linfócitos B1(CD5+)
Alterações na apresentação Alterações na apresentação antigénicaantigénica
Modificações dos autoantigéniosModificações dos autoantigénios Mimetismo molecularMimetismo molecular Expressão ectópica de HLA-IIExpressão ectópica de HLA-II
Rotura de anergia clonalRotura de anergia clonal IL-2IL-2 Expressão defeituosa de fazExpressão defeituosa de faz Activação policlonalActivação policlonal
LPSLPS SuperantigéniosSuperantigénios
Rotura de anergia clonalRotura de anergia clonal Falha da regulação da resposta Falha da regulação da resposta
imunológicaimunológica Falha das células supressoras Falha das células supressoras
mantém uma resposta em mantém uma resposta em actividadeactividade
Regulação antiidiotipica Regulação antiidiotipica • reacção cruzada com reacção cruzada com
anticorpo anti bacterianoanticorpo anti bacteriano• Anticorpos mimetizando Anticorpos mimetizando
ligandos celulares, ligandos celulares, induzem respostas via induzem respostas via receptores celularesreceptores celulares
Equilibrio Th1/Th2Equilibrio Th1/Th2 Regulação neuro-hormonal da Regulação neuro-hormonal da
resposta imunológicaresposta imunológica
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Patologias autoimunes sistémicas e de órgão
LESLES Lúpus discóideLúpus discóide EsclerodermiaEsclerodermia Citopenias autoimunesCitopenias autoimunes Síndrome de GoodpastureSíndrome de Goodpasture
Cirrose Biliar PrimáriaCirrose Biliar Primária Hepatite crónica activaHepatite crónica activa Síndrome Guillain-BarréSíndrome Guillain-Barré UveiteUveite Fibrose Pulmonar Idiopát.Fibrose Pulmonar Idiopát.
Artrite reumatóideArtrite reumatóide Artrite reumatóide juvenilArtrite reumatóide juvenil Sindrome de SjögrenSindrome de Sjögren DMID (Diabetes )DMID (Diabetes ) PsoriasePsoriase Doença de GravesDoença de Graves Doença de HashimotoDoença de Hashimoto Esclerose MúltiplaEsclerose Múltipla Colite ulcerosaColite ulcerosa Doença de ChronDoença de Chron Miastenia GravisMiastenia Gravis
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Rheumatoid Arthritis An autoimmune disorder affecting connective tissue.An autoimmune disorder affecting connective tissue. 3 million afflicted in US3 million afflicted in US Afflicts women during menopauseAfflicts women during menopause
48-52 years of age48-52 years of age shorten life expectancy by 3-7 yearsshorten life expectancy by 3-7 years
Afflicts men = women after 65 years of ageAfflicts men = women after 65 years of age shorten life expectancy by 7-10 years for men.shorten life expectancy by 7-10 years for men.
EtiologyEtiology Combination of factors including a genetic predisposition Combination of factors including a genetic predisposition
and triggered by unknown infectious agent (possibly EBV).and triggered by unknown infectious agent (possibly EBV).
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Clinical Manifestations
Joint problems over timeJoint problems over time Occur symmetricallyOccur symmetrically Alteration in the wristAlteration in the wrist
Ulnar driftUlnar driftBoutonniere deformityBoutonniere deformitySwan-neck deformitySwan-neck deformity
Rheumatoid nodulesRheumatoid nodules
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Systemic Lupus Erythmatosus
Chronic, inflammatory, autoimmune Chronic, inflammatory, autoimmune disorderdisorder 2 types: discoid and systemic2 types: discoid and systemic
Etiology - unclearEtiology - unclear May be several risk factors - infection, May be several risk factors - infection,
exposure to UVB, environmental irritantsexposure to UVB, environmental irritants
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Systemic Lupus Erythmatosus PathophysiologyPathophysiology
Produce autoantibodies due to defect in T-Produce autoantibodies due to defect in T-suppressor cells; NK cells are also suppressedsuppressor cells; NK cells are also suppressed
Autoantibodies - antinuclear antibodies (ANA) Autoantibodies - antinuclear antibodies (ANA) when cell dies, nuclei bind with ANA, forms when cell dies, nuclei bind with ANA, forms
immune complex that stimulates immune complex that stimulates inflammatory responseinflammatory response
Immune complex also stimulates activation Immune complex also stimulates activation of complementof complement
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Discoid Lesions: a thick, disk-like rash that scars, usually on sun-exposed areas
Malar Rash (Butterfly Rash)
Arthritis: inflammation of peripheral joints with tenderness, swelling or effusion with skin changes
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Diagnóstico de D. Autoimune (I)
Provas directasProvas directas
Reprodução num recipiente Reprodução num recipiente normal por transferência de normal por transferência de anticorposanticorpos Não aplicável ao HomemNão aplicável ao Homem
Provas indirectasProvas indirectas
Reprodução em animais Reprodução em animais por imunização com auto-por imunização com auto-
antigéniosantigénios Requer conhecimento do Requer conhecimento do
auto-antigénioauto-antigénio Requer a administração de Requer a administração de
potentes adjuvantespotentes adjuvantes Por transferência de Por transferência de
Linfócitos para ratinhos SCIDLinfócitos para ratinhos SCID Identificação de auto-anticorpos Identificação de auto-anticorpos
ou células T auto-reactivas nos ou células T auto-reactivas nos órgãos alvoórgãos alvo
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Diagnóstico de D. Autoimune (II)
Provas circunstanciaisProvas circunstanciais Associação com outras doenças auto-imunesAssociação com outras doenças auto-imunes Infiltração linfocitica nos órgãos afectadosInfiltração linfocitica nos órgãos afectados Associação com determinados haplotipos HLAAssociação com determinados haplotipos HLA Detecção sérica de autoanticorposDetecção sérica de autoanticorpos Resposta favorável a imuno-supressoresResposta favorável a imuno-supressores
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Clinical Criteria Lab CriteriaPregnancy Loss-Recurrent spontaneousabortion-Unexplained fetal death
Thrombosis-Venous thrombosis-Arterial Thrombosis,stroke
AutoimmuneThrombocytopenia
Other Disorders-Autoimmune hemolyticanemia-Transient ischemicattacks-Amaurosis fugax-Chorea gravidarum-Livedo reticularis
LupusAnticoagulant
AnticardiolipinAntibodies>15-20 IgG bindingunits
Suggested Clinical and Laboratory Criteria For The Diagnosis of Antiphospholipid Syndrome
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How is Lupus diagnosed?
When a doctor thinks a patient may have When a doctor thinks a patient may have Lupus, an ANA blood test is ordered. Lupus, an ANA blood test is ordered.
Other tests such as an anti-dsDNA, anti-Sm, Other tests such as an anti-dsDNA, anti-Sm, anti-Ro/SS-A, and anti-RNP also may be anti-Ro/SS-A, and anti-RNP also may be ordered to determine if a patient has Lupus.ordered to determine if a patient has Lupus.
Complement tests are performed to measure Complement tests are performed to measure the amount of complement proteins the amount of complement proteins circulating in the blood.circulating in the blood.
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Diagnostic Studies
ANAs are the best screening testANAs are the best screening test Antibodies to double-stranded DNA (dsDNA) and Antibodies to double-stranded DNA (dsDNA) and
to Sm are relatively specific for SLEto Sm are relatively specific for SLE Determining the complete autoantibody profile of Determining the complete autoantibody profile of
each patient helps predict clinical subsets. High each patient helps predict clinical subsets. High serum levels of ANAs and anti-dsDNA and low serum levels of ANAs and anti-dsDNA and low levels of complement usually reflect disease levels of complement usually reflect disease activity, especially in patients with nephritisactivity, especially in patients with nephritis
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Algorithm for the diagnosis of SLE. ANA, antinuclear antibody; ACR, American College of Rheumatology; CTD, connective tissue disease; WBC, white blood cell count; RBC, red blood cell count, *, recommended in initial evaluation.
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Diagnóstico de D. Autoimune (II)
Provas circunstanciaisProvas circunstanciais Associação com outras doenças auto-imunesAssociação com outras doenças auto-imunes Infiltração linfocitica nos órgãos afectadosInfiltração linfocitica nos órgãos afectados Associação com determinados haplotipos HLAAssociação com determinados haplotipos HLA Detecção sérica de autoanticorposDetecção sérica de autoanticorpos Resposta favorável a imuno-supressoresResposta favorável a imuno-supressores
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Protocolo para detecção de ANA com células Hep-2 (II)
Soro colhido fresco ou a 4ºC (1-2 semanas) Soro colhido fresco ou a 4ºC (1-2 semanas) ou a –20ºC (periodos + longos) ou a –20ºC (periodos + longos)
Evitar ciclos congelar/descongelarEvitar ciclos congelar/descongelar Congelação pode concentrar o soro Congelação pode concentrar o soro (liofilização)(liofilização)
Testar diluições seriadas do soro em PBS Testar diluições seriadas do soro em PBS (1:40, 1:80, 1:160,...) (1:40, 1:80, 1:160,...) (semi-quantificação do título, (semi-quantificação do título, melhores padrões, evitar falsos positivos )melhores padrões, evitar falsos positivos )
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Protocolo para detecção de ANA com células Hep-2 (II)
Láminas com as células Hep-2 em monocamada (vários poços/lâmina). Láminas com as células Hep-2 em monocamada (vários poços/lâmina). Deixar as lâminas chegar a RT antes de abrir o pacote selado.Deixar as lâminas chegar a RT antes de abrir o pacote selado.
Adicionar o soro diluído a testar, e incubar 30 min em incubadora Adicionar o soro diluído a testar, e incubar 30 min em incubadora húmida a RThúmida a RT
Lavar com PBSLavar com PBS Adicionar o secundário (cabra, ovelha ou coelho) marcado com FITC, e Adicionar o secundário (cabra, ovelha ou coelho) marcado com FITC, e
incubar como acimaincubar como acima Universal (anti IgH de IgG,IgM,IgA não purificado)Universal (anti IgH de IgG,IgM,IgA não purificado) Anti-IgG (as mais importantes p/ diagnóstico)Anti-IgG (as mais importantes p/ diagnóstico) Anti-IgM (SLE pediátrico)Anti-IgM (SLE pediátrico)
Lavar com PBSLavar com PBS Contrastar com 1 a 2 gotas de Azul de Evan’s a 1% por 100 mL PBSContrastar com 1 a 2 gotas de Azul de Evan’s a 1% por 100 mL PBS Lavar com PBSLavar com PBS Montar em glicerolMontar em glicerol